Search

Agradecimentos: This study was supported by Sao Paulo Research Foundation (FAPESP - grants 2017/19674-2, 2017/21801-2), National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) and Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Brasil (CAPES) - Finance Code 001 Abstract: Culturing bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) is a key point in different fields of research, including tissue engineering and regenerative medicine and studies of the bone marrow microenvironment. However, isolating and expanding murine BM-MSCs in vitro has challenged researchers due to the low purity and yield of obtained cells. In this study, we aimed to evaluate five different protocols to culture murine BMMSCs in vitro. Methods: All protocols were based on the adhesion capacity of BM-MSCs to the tissue culture plastic surface and varied in the types of plate, culture media, serum, additional supplementation and initial cell density. Flow cytometry analysis was used to investigate lineage purity after expansion. Results: The expression of CD45 and CD11b was detected in the cultures generated according to all protocols, indicating low purity with the presence of hematopoietic cells and macrophages. The cellular growth rate and morphology varied between the cultures performed according to each protocol. Cells cultured according to protocol 5 (8 £ 107 cells/plate, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) culture medium during first passage and then Iscove's Modified Delbecco's Medium (IMDM) culture medium, both supplemented with 9% fetal bovine serum, 9% horse serum, 12mM L-glutamine) presented the best performance, with a satisfactory growth rate and spindle-shape morphology. Conclusion: Our results point out that the purity and satisfactory growth rate of murine BMMSC cultures are not easily achieved and additional approaches must be tested for a proper cell expansion FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO (FAPESP) CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO (CNPQ) COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR (CAPES) Fechado

ilstraciones, fotografías, graficas En el presente trabajo se evaluó la supervivencia de la línea celular SiHa al ser irradiada con una fuente radiactiva de Iridio 192 (Ir-192), para esto se planteó y desarrolló la siguiente metodología. En la primera fase se realizaron los controles de calidad asociados a la actividad de la fuente, los tiempos de tránsito y la verificación de la dosis a entregar. Se verificó la actividad de la fuente obteniendo un error del 0.9104% y el tiempo de tránsito con un error de 3.15%, además de verificar y corregir una subdosificación del 15% de la dosis al momento de irradiar los cultivos celulares. En la segunda fase de la metodología se obtuvo una curva de supervivencia celular a partir del ensayo por MTT, para diferentes dosis irradiadas, obteniendo un comportamiento exponencial decreciente acorde a lo mostrado en la literatura; se realizaron también ensayos clonogénicos para determinar la fracción de supervivencia de las células, pero los resultados no fueron concluyentes. En la tercera y última fase se irradiaron cultivos celulares con dos de los esquemas de irradiación más usados en los procedimientos de braquiterapia del Instituto Nacional de Cancerología. El Esquema 1 con dosis de 5.5 Gy en 5 fracciones y el Esquema 2 con dosis de 7 Gy en 4 fracciones, obteniendo una menor supervivencia celular con el Esquema 2. (Texto tomado de la fuente) In the present work, the survival of the SiHa cell line when irradiated with a radioactive source of Iridium 192 (Ir-192) was evaluated, for which the following methodology was proposed and developed. In the first phase, quality controls associated with the activity of the source, transit times and verification of the dose to be delivered were carried out. The activity of the source was verified, obtaining an error of 0.9104% and the transit time with an error of 3.15%, in addition to verifying and correcting an underdosage of 15% of the dose at the time of irradiating the Cell cultures. In the second phase of the methodology, a cell survival curve was obtained from the MTT assay, for different irradiated doses, obtaining a decreasing exponential behavior according to what is shown in the literature; clonogenic assays were also performed to determine the survival fraction of the cells, but the results were inconclusive. In the third and final phase, cell cultures were irradiated with two of the most widely used irradiation schemes in brachytherapy procedures at the National Institute of Cancerology. Scheme 1 with a dose of 5.5 Gy in 5 fractions and Scheme 2 with a dose of 7 Gy in 4 fractions, obtaining a lower cell survival with Scheme 2. Maestría Magíster en Física Médica Radiobiología

Resumen Objetivos . Describir la actividad antimicrobiana in vitro del extracto metanólico de las hojas de Bixa orellana L. contra las bacterias anaerobias asociadas a la vaginosis bacteriana y Lactobacillus spp. Materiales y métodos . Se incluyeron en el estudio ocho cepas de referencia ATCC; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula y Lactobacillus crispatus, y 22 aislamientos clínicos; once aislados de Gardnerella vaginalis y once aislados de Lactobacillus. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó mediante el método de difusión en agar. La concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración bactericida mínima (CBM) fueron determinadas utilizando el método de dilución en agar y un método de dilución modificado, respectivamente. Resultados . Todas las cepas de referencia ATCC tuvieron un alto nivel de susceptibilidad al extracto, con excepción de P. vibia, V. parvula y L. crispatus. Interesantemente, los aislamientos clínicos de G. vaginalis y la cepa ATCC de G. vaginalis fueron los más susceptibles al extracto dados los bajos valores de CMI (1,0 - 2,0 mg/mL) y CBM (1,0 - 4,0 mg/mL), mientras que, los aislamientos clínicos de Lactobacillus spp. y la cepa ATCC de L. crispatus fueron los menos susceptibles debido a los altos valores de CMI (32,0 mg/mL) y CBM (≥ 32,0 mg/mL). Conclusiones . Los experimentos in vitro sugieren que el extracto posee propiedades antibacterianas selectivas dada su alta actividad contra bacterias anaerobias asociadas a vaginosis bacteriana y baja actividad contra especies de Lactobacillus. ABSTRACT Objective. To describe the in vitro antimicrobial activity of the methanolic extract of Bixa orellana L. leaves against anaerobic bacteria associated to bacterial vaginosis and Lactobacillus spp. Materials and methods. Eight ATCC reference strains; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula, and Lactobacillus crispatus, and twenty-two clinical isolates; eleven Gardnerella vaginalis and eleven Lactobacillus strains, were included in the study. The antimicrobial susceptibility was determined by the agar diffusion method. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined by using agar dilution and a modified dilution plating method, respectively. Results. All ATCC reference strains showed high levels of susceptibility to the extract, except P. vibia, V. parvula and L. crispatus. Interestingly, all G. vaginalis clinical isolates and the G. vaginalis ATTC strain were the most susceptible to the extract, given their low MIC (1.0 - 2.0 mg/mL) and MBC (1.0 - 4.0 mg/mL) values, whereas, the Lactobacillus spp. clinical isolates and the L. crispatus ATCC strain were the least susceptible bacteria given their high MIC (32.0 mg/mL) and MBC (≥ 32.0 mg/mL) values. Conclusions. In vitro experiments suggest that the extract possesses selective antimicrobial properties given its high activity against bacterial vaginosis-associated anaerobic bacteria and low activity against Lactobacillus species.

Resumo Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 µg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Background: Vegetable oils have antimicrobial activity and promote cell proliferation. Sunflower oil is used as an alternative for treating skin wounds, particularly in underdeveloped or developing countries. Objective: To characterize sunflower oil and evaluate the in vitro effects on cell proliferation and antimicrobial activity. Methodology: The study was carried out using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis and cell proliferation and antimicrobial activity tests. Results: The chromatographic analysis identified the main components of sunflower oil, namely: unsaturated fatty acids (82.2%) with linoleic (47.8%), oleic (28.7%), and linolenic (3.9%) acids as the main lipids, followed by saturated (12.70%), palmitic (8.8%) and stearic (3.6%) acids. A difference (p < 0.001) in cell proliferation was found between treatments with sunflower oil (100 and 10 μg/ ml) and the negative controls. It failed in antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, and Klebsiella pneumoniae. Conclusion: Sunflower oil contains a high concentration of essential fatty acids and promotes cell proliferation but fails to inhibit bacterial activity., Marco contextual: Los aceites vegetales tienen acción antimicrobiana y promueven la proliferación celular. El aceite de girasol se utiliza como alternativa para tratar las heridas cutáneas, especialmente en los países subdesarrollados o en vías de desarrollo. Objetivo: Caracterizar el aceite de girasol y evaluar los efectos in vitro sobre la proliferación celular y la actividad antimicrobiana. Metodología: Análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas, pruebas de proliferación celular y actividad antimicrobiana. Resultados: En el análisis cromatográfico del aceite de girasol, se identificaron los compuestos mayoritarios - ácidos grasos insaturados (82,2%), los principales lípidos son el ácido linoleico (47,8%), oleico (28,7%) y linolénico (3,9%), seguidos del ácido saturado (12,70%), palmítico (8,8%) y esteárico (3,6%). Hubo una diferencia (p < 0,001) entre los tratamientos con aceite de girasol (100 y 10 μg/ml) y los controles negativos en la proliferación celular. Actividad antimicrobiana ineficaz contra las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusión: La composición del aceite de girasol mostró una alta concentración de ácidos grasos esenciales, promovió la proliferación celular, pero no inhibió la actividad bacteriana., Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 μg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

ilustraciones, graficas La terapia adoptiva de células tiene el potencial de aumentar la inmunidad antitumoral, al modificar las células in-vitro para expandir linfocitos que reconozcan y ataquen el tumor. La capacidad funcional y sobrevida de las células transferidas al paciente dependerá de las subpoblaciones de memoria que sean expandidas en el laboratorio, por lo que la obtención de células de memoria poco diferenciadas es deseable. El objetivo principal de este trabajo fue determinar una estrategia de expansión in-vitro de linfocitos T CD4 stem de memoria humanos. Partiendo de células vírgenes estimuladas con un agente policlonal y adicionando diferentes combinaciones de citoquinas de la familia gamma común, se encontró que la combinación de IL-7, IL-15 e IL-21 o IL-7 e IL-21 fueron los cócteles que produjeron una mayor cantidad de células con fenotipo stem de memoria, medido por citometría de flujo. Adicionalmente, a través de la medición de proteínas de membrana y análisis in-sillico, se estableció una estrecha relación de los linfocitos T stem de memoria con el programa de diferenciación de linfocitos T foliculares, lo que consideramos contribuye a un mejor entendimiento de los procesos que subyacen la generación y mantenimiento de la memoria y, por ende, puede mejorar las estrategias actuales de expansión de linfocitos T con fines de inmunoterapia. (Texto tomado de la fuente) Adoptive cell therapy has the potential to increase antitumor immunity by modifying cells in-vitro to expand lymphocytes that recognize and attack the tumor. The functional capacity and survival of the cells transferred to the patient heavily depends on the memory subpopulations that are being expanded in the laboratory, hence, obtaining early memory cells is desirable. The main objective of our work was to determine a strategy for in-vitro expansion of human stem cell-like memory T CD4 lymphocytes. Starting from naive cells, stimulated with a polyclonal agent supplemented with different combinations of cytokines from the common gamma family, we found that the combination of IL-7, IL-15 and IL-21 or IL-7 and IL-21 were the cocktails that produced a greater number of cells with a stem memory phenotype, measured by flow cytometry. Additionally, through the measurement of membrane proteins and in-silico analysis, a close relationship between stem cell-like memory and the follicular helper T cells differentiation program was established, which we believe contributes to a better understanding of the processes that underlie the generation and maintenance of memory and, therefore, may improve current strategies of expansion of T cells for immunotherapy purposes. Maestría Magíster en Inmunología Medicina Traslacional

Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T17:27:44Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1533190 bytes, checksum: 3f13f33cb0dc6d069372f6054204cad7 (MD5) Rejected by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br), reason: on 2022-07-29T21:57:48Z (GMT) Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T23:43:28Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Approved for entry into archive by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br) on 2022-07-30T00:03:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Made available in DSpace on 2022-08-01T13:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Previous issue date: 2022-07-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Objective: To analyze the biomechanical performance of four direct resin solutions in non-carious cervical lesions (NCCL), when submitted or not to the biocorrosive process. Method: Two in vitro studies were carried out, based on 4 resinous groups: Tetric N-Ceram® - RN Group; Tetric N-Ceram® Bulk Fill-RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®-RFN; and Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®-RBN, and a non-ST-restorative treatment group was added for the 2nd study. Eighty circular specimens were made for the test of roughness (ER) and weight (EP), and forty rectangular specimens for the test of flexural strength (RF), divided into 4 resinous groups. In the 2nd study, NCCLs were made in 80 bovine teeth distributed in the 4 restorative groups, and the ST. All were subdivided, and half of them submerged in a biocorrosive challenge (c). ER and EP analyzes were performed for the circular specimens and RF for the rectangular specimens. All bovine specimens were subjected to mechanical (300,000 cycles, 50 N, 2 Hz) and thermal (5ºC, 37ºC and 55ºC, 4,000 cycles) simulated aging and a constant compressive load applied to the palatal surface at 1mm/min until failure. /break (RFR). The results of the RE, EP and RF were submitted to statistical analysis by one-way ANOVA and Tukey post hoc, to analyze the group effect and the paired t test to analyze the initial and final means (ER and EP). The RFR (material and medium effect) was evaluated by the two-way ANOVA test, with Tukey's post hoc, and the failure mode by the Fisher's exact test. All at a 5% statistical significance level. Result: There was an increase in roughness in the RB group when in acidified medium (p=0.008). There were no differences in weight change between the studied groups. The RFN group in the salivary medium showed the highest flexural strength (p=0.037), however it showed a significant reduction when submitted to the acid challenge. The RBN group presented the best fracture resistance regardless of the medium, while the ST group had the worst. Conclusion: Low pH beverage negatively affects biomechanical properties of restorative materials in non-carious cervical lesions. Objetivo: Analisar o desempenho biomecânico de quatro soluções resinosas diretas em lesões cervicais não cariosas (LCNC), quando submetidos ou não ao processo biocorrosivo. Método: Foram realizados dois estudos in vitro, baseado em 4 grupos resinosos: Tetric N-Ceram® - Grupo RN; Tetric N-Ceram® Bulk Fill- RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®- RFN; e Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®- RBN, e um grupo sem tratamento restaurador-ST, foi adicionado para o 2º estudo. Foram confeccionados oitenta corpos de prova circulares para o ensaio de rugosidade (ER) e peso (EP), e quarenta retangulares para o ensaio de resistência flexural (RF), divididos nos 4 grupos resinosos. No 2º estudo foram confeccionadas LCNC em 80 dentes bovinos distribuídos nos 4 grupos restauradores, e o ST. Todos foram subdivididos, e metade deles submersos em um desafio biocorrosivo (c). Foram realizadas análises ER, EP para os corpos de prova circulares e da RF para os retangulares. Todos os espécimes bovinos foram submetidos ao envelhecimento simulado mecânico (300.000 ciclos, 50 N, 2 Hz) e térmico (5ºC, 37ºC e 55ºC, 4.000 ciclos), e a uma carga compressiva constante aplicada na superfície palatina a 1mm/min até a falha/ruptura (RFR). Os resultados dos ER, EP e RF foram submetidos a análise estatística por anova oneway e post hoc Tukey, para análise do efeito do grupo e o teste t pareado para análise das médias iniciais e finais (ER e EP). A RFR (efeito do material e do meio) foi avaliada pelo teste anova two way, com post hoc de Tukey, e o modo de falha pelo teste exato de Fisher. Todos a um nível de significância estatística de 5%. Resultado: Houve um aumento da rugosidade no grupo RB quando em meio acidificado (p=0,008). Não houve diferenças na alteração de peso entre os grupos estudados. O grupo RFN no meio salivar apresentou a maior resistência flexural (p=0,037), contudo apresentou significativa redução quando submetido ao desafio ácido. O grupo RBN apresentou a melhor resistência a fratura independente do meio, enquanto que o ST a pior. Conclusão: Bebida de baixo pH afeta negativamente propriedades biomecânicas de materiais restauradores em lesões cervicais não cariosas.

Isolated substances and those organically synthesized have stood out over the years for their therapeutic properties, including their antibacterial activity. In this context, the aim of this research was to investigate the pharmacological properties of 2-(2 hydroxyethylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-1,4-dihydro-1,4-naphthalenedione, 2-(2- hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4] naphthoquinone and 2-(3-hydroxypropylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-[1,4]naphthoquinone using computational prediction models, to evaluating the in vitro antibacterial and modulatory activity of these compounds against bacterial ATCC strains and clinical isolates, in addition to analyzing the inhibitory effect on the efflux pump functioning of these substances in strains of multiresistant Staphylococcus aureus. The substances were synthesized from 2-hydroxyquinones, lapachol and nor-lapachol obtaining the corresponding 2-methoxylated derivatives via dimethyl sulfate alkylation in a basic medium, these then reacted chemoselectively with 2-ethanolamine and 3-propanolamine to form the corresponding amino alcohols. The antibacterial activity and modulatory activity of the substances were assayed by broth microdilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). To verify the effect of reducing the MIC of the ethidium bromide and the antibiotic, inoculums obtained from plates incubated in a bacteriological oven for 24 hours at 37ºC with the stock peaking were used. After this period inoculums were used in saline solution according to Mcfarland 0.5 corresponding to 105UFC. The results of the tests were done in triplicates and as geometric mean. In the statistical analysis, oneway ANOVA was used, followed by the Tukey hoc post test using GraphPad Prism 5.0.The molecular structures were analyzed using the ChEMBL database to predict possible pharmacological targets and soon after underwent a virtual structure-based analysis (docking)., which pointed to the molecule 2- (2-hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4]naphthoquinone as a probable antibacterial agent for the proteins Replicative DNA helicase and RecA. The MICs of the substances were not clinically significant, however, the association with gentamicin and amikacin reduced the MICs of these antibiotics with significance of p < 0.0001. against Staphylococcus aureus strains carrying the NorA efflux pump mechanism, a significant reduction (p < 0,0001) of their MICs was observed when the substances were associated with norfloxacin and ethidium bromide, with this effect being attributed to efflux pump inhibition. Following a virtual analysis based on its structure (docking), information regarding the affinity of new ligands for the ABC efflux pump. The tested substances also demonstrated effectiveness at decreasing the MIC of erythromycin, tetracycline and mainly of ethidium bromide with MIC reduction up to 16x. In conclusion, the combination of these substances with antibiotics may be a therapeutic alternative to bacterial resistance and the reduction of side effects. Substâncias isoladas e sintetizadas organicamente têm se destacado ao longo dos anos por suas propriedades terapêuticas, incluindo sua atividade antibacteriana. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi investigar as propriedades farmacológicas de 2-(2-hidroxietilamina)-3-(3-metil-2-butenil)-1,4-di-hidro-1,4-naftalenodiona, 2-(2-hidroxietilamina)-3-(2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona e 2-(3-hidroxi-propilamina)-3-(3- metil-2-butenil)-[1,4]naftoquinona por meio de modelos computacionais de predição, avaliar a atividade antibacteriana e moduladora in vitro dessas compostos contra cepas bacterianas ATCC e isolados clínicos, além de análisar o efeito inibidor sobre o funcionamento de bomba de efluxo dessas substâncias em cepas de Staphylococcus aureus multirresistentes. As substâncias foram sintetizadas a partir de 2-hidroxiquinonas, lapachol e nor-lapacol obtendo os correspondentes derivados 2-metoxilados via alquilação de sulfato de dimetila em meio básico, estes então reagiram quimiosseletivamente com 2-etanolamina e 3-propanolamina para formar os correspondentes aminoálcoois . A atividade antibacteriana e a atividade moduladora das substâncias foram avaliadas pelo método de microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Para verificar o efeito de redução do CIM do brometo de etídeo e do antibiótico, foi utilizado inóculos obtidos de placas incubadas em estufa bacteriológica por 24h a 37ºC com o repique do estoque. Após esse período foi utilizado inóculos em solução salina de acordo com Mcfarland 0,5 que corresponde a 105UFC. Os resultados dos testes foram feitos em triplicatas e como média geométrica. Na análise estatística foi utilizada ANOVA de uma via, seguida do pos teste hoc Tukey usando GraphPad Prism 5.0. As estruturas moleculares foram analisadas usando o banco de dados ChEMBL para prever possíveis alvos e logo após passaram por uma análise virtual de estrutura (docking), que apontaram para a molécula 2-(2-hidroxi-etilamina)-3- (2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona como um provável agente antibacteriano para as proteínas Replicative DNA helicase e RecA. As CIMs das substâncias não foram clinicamente significativas, porém, a associação com gentamicina e amicacina reduziu as CIMs desses antibióticos com significância de p < 0,0001. Frente a cepas de Staphylococcus aureus que carregam o mecanismo de bomba de efluxo NorA, foi observada redução significativa (p < 0,0001) de suas CIMs quando as substâncias foram associadas à norfloxacina e ao brometo de etídio, sendo esse efeito atribuído à inibição da bomba de efluxo. Após uma análise virtual baseada em sua estrutura (docking), foram observadas informações sobre a afinidade de novos ligantes para a bomba de efluxo ABC. As substâncias testadas também demonstraram eficácia em diminuir a CIM de eritromicina, tetraciclina e principalmente do brometo de etídio com redução da CIM em até 16x. Em conclusão, a combinação dessas substâncias com antibióticos pode ser uma alternativa terapêutica para a resistência bacteriana e a redução dos efeitos colaterais.

Submitted by Viviana Loureiro Rocha (viviana.l.rocha@unesp.br) on 2022-06-14T23:19:09Z No. of bitstreams: 1 20220526 - MS Viviana Dissertação.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Approved for entry into archive by Elida Daniele de Antonio null (elida_daniele@btu.unesp.br) on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Made available in DSpace on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Previous issue date: 2022-05-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) está associada a alguns tipos de cânceres, como o linfoma de Burkitt (BL) e o carcinoma de nasofaringe (NPC). O EBV é ubíquo e infecta, de forma latente, a maioria da população adulta. A latência biológica do EBV é caracterizada por elevada restrição na expressão de produtos virais, sendo limitada a poucas proteínas e RNAs não codificantes, como os miR-BARTs. A superexpressão de miR-BART 7 no NPC regula a expressão do produto do gene supressor tumoral PTEN. O miR-BART 9, por sua vez, regula a expressão da oncoproteína viral LMP1 e de caderina E celular. A regulação da expressão destas proteínas sugere papel dos miR-BARTs 7 e 9 no fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT), importante para progressão de cânceres de origem epitelial. Dessa forma, este estudo tem como objetivo a criação de um modelo experimental para verificar o papel exercido por miR-BART 7 e miR-BART 9 na aquisição de características favoráveis a carcinogênese. O modelo estabelecido baseia-se em células de epitélio de nasofaringe infectadas com partículas virais selvagens ou mutadas para estes miRNAs. A construção deste modelo emprega a tecnologia CRISPR/Cas9 para edição do genoma do EBV em células Akata-EBV+. As células Akata-EBV+ com genoma selvagem ou mutado foram quimicamente tratadas para ativação de ciclo lítico, e produção de partículas virais. A validação foi realizada a partir da expressão de marcadores de ciclo lítico, BZLF1 e gp350, enquanto a quantificação das partículas produzidas foi realizada a partir de curva-padrão com o genoma B95-8. A infecção de células epiteliais de nasofaringe foi avaliada a partir da estimativa do número de cópias do genoma viral. As células Akata-EBV+ contendo os genomas com comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 apresentaram deficiência na produção de partículas virais quando comparadas as células contendo o genoma selvagem, enquanto na infecção de células epiteliais de nasofaringe, o comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 influenciou positivamente, aumentando o número de cópias virais nas células infectadas com as versões editadas. Os dados apresentados demonstram estabelecimento de modelo experimental de estudo dos miR-BARTs do EBV, e indicam uma possível relação com eventos relacionados ao ciclo lítico do vírus. Epstein-Barr virus infection is associated with some types of cancers, such as Burkitt lymphoma (BL), and nasopharyngeal carcinoma (NPC). EBV is a ubiquitous virus, and infects, latently, the majority of adult population. The EBV latency is characterized by limited viral expression, expressing a few proteins and non-coding RNAs, such as miR-BARTs. The overexpression of EBV miR-BART 7 in NPC was associated with regulation of protein levels of PTEN suppressor gene. EBV miR-BART 9, on the other hand, regulates the expression of the LMP1 viral oncoprotein and the cellular E-cadherin. The regulation of these proteins suggests a role of miR-BARTs 7 and 9 in epithelial-mesenchymal transition (EMT), which is important for progression of epithelial cancers. This study aims to create an experimental model to verify the role played by miR-BART7 and miR-BART9 in acquisition of features favorable to carcinogenesis. The model established is based on immortalized nasopharynx epithelial cells infected with wild type or edited viral particles for these miRNAs. The construction of this model employs the CRISPR/Cas9 technology for the EBV genome editing in Akata-EBV+ cells. The EBV+ Akata cells with wild type or mutated genome were chemically treated to activate lytic cycle and viral particles production. The validation was performed evaluating the expression of lytic cycle markers, BZLF1 and gp350, while the quantification of the produced particles was performed using a B95-8 genome standard curve. The nasopharynx epithelial cells infection was evaluated from the estimate of the viral genome copy number. The Akata-EBV+ cells containing genomes with impaired expression of miR-BARTs 7 or 9 showed deficiency in the production of viral particles when compared to cells containing the wild type genome, while in nasopharynx epithelial cells infection, the impairment of expression of miR-BARTs 7 or 9 positively influenced, increasing the viral copy number in cells infected with the edited versions. The data presented demonstrate the establishment of an experimental model for the study of EBV miR-BARTs, and indicate a possible relationship with events related to the lytic cycle of the virus. CAPES: 88887.466765/2019-00 FAPESP: 17/23393-9

Introduction: The use of plants with various ethnomedicinal purposes is an ancestral practice and currently common in a vast part of the population of Bolivia.General objective: To identify if the extracts of both plants present in our environment have antimicrobial activity against pathogenic bacteria and to determine their toxicity through the bioassay of biological tests.Materials and Methods: Descriptive study; Universe, Wira Wira collected from Valle Alto in Cochabamba and Cerraja collected from Cercado; Sample, we obtained one kilogram of each, Wira Wira and Cerraja randomly; Methods, different techniques were used to extract the active ingredients, biological tests were performed to determine their toxicity and antimicrobial activity was determined by the agar diffusion method.Results: Wira Wira demonstrated antimicrobial activity with 4 extracts; stem alcoholic, flower and alcoholic depleted of leaves against E. faecalis and S. aureus, and aqueous of leaves against P. aeruginosa and S. aureus. On the other hand, there was no evidence of antibacterial activity with the cerraja extracts.Conclusions: Wira Wira is a candidate for further studies aimed at the identification of the pure active compound (s) with antibacterial activity, all this backed up by the positive results in the agar diffusion tests grown with pathogenic bacteria.Unlike the results that demonstrate the antibacterial activity of the Cerraja in research carried out in other parts of the world, it is not the case of the one in our territory, whose extracts did not present any antimicrobial activity, demonstrating the possibility and linking the variation in plant compounds with the ecosystems in which it develops.

espanolLa aparatologia fija usada en ortodoncia dificulta una adecuada higiene bucal, en estas condiciones el desarrollo de lesiones cariosas puede ser una complicacion, uno de los principales agentes etiologicos involucrados es Streptococcus mutans. La nanotecnologia con plata tiene una aplicacion preventiva importante en biomateriales dentales. Objetivo: Se determino la actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans de nanoparticulas de plata (AgNPs) incluidas en adhesivos ortodonticos a diferentes concentraciones. Materiales y metodos: En 20 cajas Petri con Streptococcus mutans inoculada en agar Muller-Hinton suplementado con 5% de sangre, se colocaron 6 discos de papel, 4 embe-bidos con AgNPs incluidas en un adhesivo ortodontico a concentraciones de 25, 75, 125 y 175 ppm, y 2 discos controles con clorhexidina al 0.12% y agua destilada. Se determino la capacidad antimicrobiana en funcion de promedios de halos de inhibicion a las 48 horas de incubacion, en comparacion con la escala de Duraffourd y la clorhexidina 0.12%. Resultados: A 25 ppm no existio capacidad antibacteriana, a 75 ppm el 50% alcanzo sensibilidad limite, pero el 100% de las muestras a 125 y 175 ppm consiguieron sensibilidad limite, sin embargo, la clorhexidina al 0,12% presento mayor sensibilidad entre media 60% y sumamente sensible 40%. Conclusion: Las nanoparticulas de plata con tamano inferior a 100 nm, incluidas a 125 y 175 ppm en adhesivos de ortodoncia poseen actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans, sin embargo, en el tiempo de estudio no alcanzan la sensibilidad de la clorhexidina al 0.12%. EnglishThe fixed appliances used in orthodontics make proper oral hygiene difficult, in these conditions the development of carious lesions can be a complication, one of the main etiologic agents involved is Mutans streptococci. It was determined that silver nanotechnology has an important preventive application in dental biomaterials. Objective: Antimicrobial activity on Mutans streptococci of silver nanoparticles (AgNPs) included in orthodontic adhesives at different concentrations. Materials and methods: In 20 Petri dishes with Mutans streptococci inoculated in Muller-Hinton agar supplemented with 5% blood, 6 paper discs were placed, 4 soaked up with AgNPs included in an orthodontic adhesive at concentrations of 25, 75, 125 and 175 ppm, and 2 control discs with 0.12% chlorhexidine and distilled water. Antimicrobial capacity was determined based on averages of inhibition halos at 48 hours of incubation, compared to the Duraffourd scale and 0.12% chlorhexidine. Results: At 25 ppm there was no antibacterial capacity, at 75 ppm 50% reached limit sensitivity, but 100% of the samples at 125 and 175 ppm achieved limit sensitivity, however, chlorhexidine 0.12% showed higher sensitivity between average 60% and highly sensitive 40%. Conclusion: Silver nanoparticles smaller than 100 nm, included at 125 and 175 ppm in orthodontic adhessives, have antimicrobial activity on Strptococcus mutans, however, when studying, they don’t reach the sensitivity of chlorhexidine at 0.12%.

The aim of the present study was to evaluate the in vitro cytotoxicity, cytoprotection and morphological changes by SEM technique of MTA, MTA-HP and Biodentine, on fibroblast 3T3 cell line. MTA, MTA-HP, and Biodentine were disposed into teflon sterile discs and incubated in culture media for 24 hours to obtain elutes. Fibroblast 3T3 cells were cultured with the respective elutes and control group with culture medium. Cytotoxicity and cytoprotection assays were determined by MTT method. The results were statistically processed by Mann-Whitney (α=0.05) and Kruskal-Wallis analysis. Cells cultured in coverslips and treated with the elutes were submitted to fixation and dehydration process to evaluate morphological alterations by SEM technique. In cytotoxicity assay, cells treated with MTA, MTA HP and Biodentine showed viability above 95%, like control cells. In cytoprotection to the 3T3 cells, materials promoted at the same magnitude (p>0.05), with improved cell growth and were considered statistically different from the obtained for cells only treated with peroxide solution (positive control) (p=0.046). Also, viability results of the tested root canal materials were close to that of the negative control (cells treated only with culture medium) (p=0.05). No morphologic cell changes of 3T3 cells in contact with the endodontic materials were revealed by SEM technique. The bioceramic materials has demonstrated high bioactivity and biocompatibility, as presented in cytoprotection and morphological trials. El objetivo del presente estudio fue evaluar la citotoxicidad, citoprotección y cambios morfológicos in vitro por técnica SEM de MTA, MTA-HP y Biodentine, en la líneo celular de fibroblastos 3T3. MTA, MTA-HP y Biodentine se colocaron en discos estériles de teflón y se incubaron en medios de cultivo durante 24 horas para obtener eluidos. Las células de fibroblastos 3T3 se cultivaron con los eluidos respectivos y el grupo de control con medio de cultivo. Los ensayos de citotoxicidad y citoprotección se determinaron mediante el método MTT. Los resultados fueron procesados estadísticamente por Mann-Whitney (α=0,05) y análisis de Kruskal-Wallis. Las células cultivadas en cubreobjetos y tratadas con los eluidos fueron sometidas a proceso de fijación y deshidratación para evaluar alteraciones morfológicas por técnica SEM. En el ensayo de citotoxicidad, las células tratadas con MTA, MTA HP y Biodentine mostraron una viabilidad superior al 95 %, al igual que las células de control. En la citoprotección a las células 3T3, los materiales promovieron en la misma magnitud (p>0.05), con crecimiento celular mejorado y se consideraron estadísticamente diferentes a los obtenidos para las células tratadas únicamente con solución de peróxido (control positivo) (p=0.046). Además, los resultados de viabilidad de los materiales del conducto radicular probados fueron similares a los del control negativo (células tratadas solo con medio de cultivo) (p = 0,05). La técnica SEM no reveló cambios celulares morfológicos de las células 3T3 en contacto con los materiales endodónticos. Los materiales biocerámicos han demostrado una alta bioactividad y biocompatibilidad, tal como se presenta en los ensayos de citoprotección y morfológicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade in vitro, citoproteção e alterações morfológicas pela técnica de MEV do MTA, MTA-HP e Biodentine, na linhagem celular de fibroblastos 3T3. MTA, MTA-HP e Biodentine foram dispostos em discos estéreis de teflon e incubados em meio de cultura por 24 horas para obtenção dos eluatos. Células de fibroblastos 3T3 foram cultivadas com os respectivos eluatos e o grupo controle com meio de cultura. Os ensaios de citotoxicidade e citoproteção foram determinados pelo método MTT. Os resultados foram processados ​​estatisticamente pela análise de Mann-Whitney (α=0,05) e Kruskal-Wallis. As células cultivadas em lamínulas e tratadas com os eluatos foram submetidas ao processo de fixação e desidratação para avaliação das alterações morfológicas pela técnica de MEV. No ensaio de citotoxicidade, as células tratadas com MTA, MTA HP e Biodentine apresentaram viabilidade acima de 95%, assim como as células controle. Na citoproteção das células 3T3, os materiais promoveram na mesma magnitude (p>0,05), com melhor crescimento celular e foram considerados estatisticamente diferentes do obtido para células tratadas apenas com solução de peróxido (controle positivo) (p=0,046). Além disso, os resultados de viabilidade dos materiais endodônticos testados foram próximos aos do controle negativo (células tratadas apenas com meio de cultura) (p=0,05). Nenhuma alteração morfológica das células 3T3 em contato com os materiais endodônticos foi revelada pela técnica de MEV. Os materiais biocerâmicos demonstraram alta bioatividade e biocompatibilidade, conforme apresentado em ensaios de citoproteção e morfológicos.

Orientador: José Luiz da Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aparecimento de Novas Substâncias Psicoativas (NSP) no mercado ilícito mundial cresceu significativamente desde os anos 2000. Apesar da queda no número de novas identificações anualmente, elas ainda causam severos casos de intoxicações, diversos deles fatais. O presente trabalho desenvolveu e validou um método para a análise de mais de 100 NSP e drogas de abuso convencionais em amostras de fluido oral (OF) e analisado por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). Foram coletadas 462 amostras em festas e festivais de música eletrônica em 3 estados brasileiros e analisadas com a metodologia desenvolvida. O 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA, 88%) ainda foi a substância mais identificada nas amostras, mas 39% das amostras continham alguma NSP. Cetamina (75%) foi a mais prevalente, seguido da metilona (15%) e N-etilpentilona (10%). Ainda assim, apenas 5% dos voluntários haviam reportado o consumo de alguma NSP. A ingestão de múltiplas substâncias foi muito prevalente, com 80% das amostras contendo duas ou mais substâncias. Este foi o primeiro dado publicado no Brasil contendo dados epidemiológicos do consumo de NSP através da análise de amostras biológicas em contexto recreacional. As amostras contendo catinonas sintéticas foram quantificadas usando microextração por sorvente empacotado (MEPS). Entre as 41 amostras, metilona, N-etilpentilona, eutilona, mefedrona e 4-CEC foram quantificadas. As amostras contendo LSD foram quantificadas, assim como seu principal produto de biotransformação, 2-oxo-3-hidroxi-LSD, com limite de detecção de 0,01 ng/mL. Este foi o primeiro dado publicado na literatura contendo quantificação de ambos analitos em amostras autênticas de fluido oral. Ainda, como forma de suprir a necessidade de obter mais informações sobre as NSP, foi realizado o ensaio de metabolismo in vitro do canabinóide sintético ADB-4en-PINACA usando microssomas hepáticos humanos (HLM) e analisado com espectrômetro de massas de alta resolução. Dos 11 metabólitos identificados in vitro, 7 foram confirmados em amostras de sangue e urina post mortem., sendo os metabólitos derivados de hidroxilação e hidroxilação seguida de hidrólise interna os mais intensos Abstract: New Psychoactive Substances (NPS) emergence of in the global illicit market has grown significantly since the 2000s. Despite the drop in the number of new identifications annually, they still cause severe cases of intoxication, many of them fatal. The present work developed and validated a method for the analysis of more than 100 NPS and conventional drugs of abuse in oral fluid (OF) samples and analyzed by liquid chromatography?tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). 462 samples were collected at parties and electronic music festivals in 3 Brazilian states and analyzed using the developed methodology. 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, 88%) was still the most identified substance in the samples, but 39% of them contained some NPS. Ketamine (75%) was the most prevalent, followed by methylone (15%) and N-ethylpentylone (10%). Even so, only 5% of the volunteers had reported some NPS consumption. Ingestion of multiple substances was very prevalent, with 80% of samples containing two or more substances. This was the first data published in Brazil containing epidemiological data on NPS consumption through the analysis of biological samples in a recreational context. Samples containing synthetic cathinones were quantified using microextraction by packed sorbent (MEPS). Among the 41 samples, methylone, N-ethylpentylone, euthylone, mephedrone and 4-CEC were quantified. Samples containing LSD were quantified, as well as its main biotransformation product, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, with limit of detection of 0.1 ng/mL. This was the first published data quantifying both analytes in authentic oral fluid samples. Also, to meet the need for more information regarding NPS, an in vitro metabolism assay of the synthetic cannabinoid ADB-4en-PINACA was performed using human liver microsomes (HLM) and analyzed with a high-resolution mass spectrometer. Of the 11 metabolites identified in vitro, 7 were confirmed in post mortem blood and urine samples, with the metabolites derived from hydroxylation and hydroxylation followed by internal hydrolysis being the most intense Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2018/11849-0 CAPES 88887.571786/2020-00

RESUMEN Introducción. Se han realizado con el fin de evaluar la estabilidad dimensional, cada grupo de estudio confecciona su propio aditamento con el fin de determinar si existe o no una variación dimensional de los diferentes materiales de impresión utilizados en la rehabilitación oral. Esta variación va a depender de distintos factores como el tiempo, el material, la temperatura, la humedad entre otros. Objetivo. En este sentido, el objetivo del estudio fue evaluar la estabilidad dimensional de la silicona de adición / polivinilsiloxano (VPS) y para ello se tendrá en cuenta el tiempo. Métodos. Se trata de un estudio experimental. La muestra estuvo conformada por un total de 50 modelos, 25 para VPS Y 25 para el grupo control cuyo material fue la silicona por condensación. Para realizar el estudio se confecciono un modelo maestro teniendo en cuenta 6 localizaciones y 5 periodos de tiempo donde elprimer grupo a los 0 minutos, el segundo grupo a los 20 minutos, el tercer grupo a la 1 hora, cuarto grupo a las 6 horas y el quinto grupo a las 24 horas, después de tomada la impresión. Resultados. Después de la toma de impresión cuando se contabiliza a los 0 minutos, a los 60 minutos, a las 6 horas y a las 24 horas se obtiene el estadístico t ≥ 2,1318 y p≤ 0,05 confirmando que se encuentran diferencias significativas entre las dos siliconas respecto a la variación dimensional. Conclusiones. Se concluye que existe una variación de la estabilidad dimensional al ser comparada con el grupo control como lo es la silicona por condensación.

Resumen Objetivo: Comparar la microfiltración apical de dientes obturados con tres diferentes técnicas: condensación lateral, condensación vertical y sistema obtura II in vitro. Métodos: Se utilizaron 75 dientes uniradiculares, divididos en 5 grupos, Grupo 1: condensación lateral, Grupo 2: condensación vertical, Grupo 3: sistema obtura II, Grupo 4: control positivo, Grupo 5: control negativo. Las raíces fueron sometidas a filtración apical por difusión indirecta con tinta china, diafanizadas y observadas con un microscopio Vasconcellos. Se realizaron pruebas estadístico descriptivo con el programa GraphPad prism 8. Resultados: El grupo 1 presentó mayor filtración (0,6603±0,5063) con una diferencia estadísticamente significativa en comparación al grupo 3 (p

Objective: Study the in vitro pullout strength of SpineGuard/Zavation Dynamic Surgical Guidance Z-Direct Screw (DSG Screw), a screw pedicle designed to be inserted using a direct insertion technique. Methods: DSG Screws of 5.5 mm and 6.5 mm were introduced into polyurethane blocks with a density of 10 PCF (0,16 g/cm3). According to the experimental group, screws were inserted without pilot hole, with pilot without tapping, undertapping and line-to-line tapping. Screw pullout tests were performed using a universal test machine after screw insertion into polyurethane blocks. Results: Screws inserted directly into the polyurethane blocks without pilot hole and tapping showed a statistically higher pullout strength. Insertion of the screw without tapping or with undertapping increases the pullout screw strength compared to line-to-line tapping. Conclusion: DSG Screw showed the highest pullout strength after its insertion without pilot hole and tapping. Level of Evidence V, Expert Opinion. RESUMO Objetivo: Estudar a resistência ao arrancamento in vitro do parafuso de inserção direta da SpineGuard/Zavation (parafuso DSG), um parafuso pedicular projetado para ser inserido usando a técnica de inserção direta. Métodos: Parafusos DSG de 5,5 mm e 6,5 mm foram introduzidos em blocos de poliuretano com densidade de 10 PCF (0,16 g/cm3). De acordo com o grupo experimental, os parafusos foram inseridos sem orifício piloto, com orifício e sem macheamento e macheamento diâmetro inferior com mesma geometria. Os testes de resistência dos parafusos foram realizados usando uma máquina de teste universal após a inserção dos parafusos nos blocos de poliuretano. Resultados: Os parafusos inseridos diretamente nos blocos de poliuretano sem orifício piloto e sem macheamento apresentaram uma resistência de arrancamento com significância estatística maior. A inserção do parafuso sem macheamento ou com macheamento com diâmetro inferior apresenta maior resistência ao arrancamento em comparação com o macheamento do mesmo diâmetro. Conclusão: O parafuso DSG apresentou a maior resistência ao arrancamento após sua inserção sem orifício piloto e sem macheamento. Nível de Evidência V, Opinião do Especialista.

Objective: Evaluate the cytotoxicity in human osteoblastic cells and antimicrobial activity in different root canal sealers in vitro. Methods: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer, and Bio-C Sealer were used in experimental groups, and AH Plus was used as a control. Human osteoblast-like cells and MTT quantitative colorimetric assay were used to evaluate cytotoxicity. Saos-2 cells were exposed to undiluted sealer extracts for 24 h. The supernatant was then collected and the formazan crystals resulting from MTT reduction were dissolved in pure dimethyl sulfoxide. Absorbance was measured in an automated spectrophotometer at a wavelength of 540 nm. Antimicrobial activity was analyzed by the direct contact test using a polymicrobial biofilm composed of Enterococcus faecalis, Candida albicans, and Streptococcus mutans. At 24, 48, and 72 h, colony-forming units were counted on agar plates. A nonparametric Kruskal-Wallis test was used for the statistical analysis. The level of significance was set at 5%. Results: AH Plus showed the lowest cytotoxicity after 24 h, with a significant difference in relation to BioRoot RCS and Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). There was no significant difference in cytotoxicity between TotalFill BC Sealer and Bio-C Sealer (p > 0.05). At 24 h, TotalFill BC Sealer and AH Plus showed the least microbial growth compared to Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusions: AH Plus had the lowest cytotoxicity. TotalFill BC Sealer and AH Plus yielded greater reductions in microbial counts in the first 24 h compared to Bio-C Sealer. Clinical Relevance: 2c. Objetivo: Evaluar in vitro la citotoxicidad en células osteoblásticas humanas y la actividad antimicrobiana de diferentes cementos obturadores de conductos radiculares. Materiales y métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer se utilizaron como grupos experimentales y AH Plus se utilizó como control. Se usaron células similares a osteoblastos humanos y ensayo colorimétrico cuantitativo MTT para evaluar la citotoxicidad. Las células Saos-2 se expusieron a extractos de cementos sin diluir durante 24 h. A continuación, se recogió el sobrenadante y los cristales de formazán resultantes de la reducción de MTT se disolvieron en sulfóxido de dimetilo puro. La absorbancia se midió en un espectrofotómetro automático con una longitud de onda de 540 nm. La actividad antimicrobiana se analizó mediante la prueba de contacto directo, utilizando una biopelícula polimicrobiana compuesta por Enterococcus faecalis, Candida albicans y Streptococcus mutans. A las 24, 48 y 72 h, se contabilizaron las unidades formadoras de colonias en placas de agar. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. El nivel de significación se fijó en el 5%. Resultados: AH Plus mostró la menor citotoxicidad después de 24 h, con una diferencia significativa en relación con BioRoot RCS y Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). No hubo diferencias significativas en la citotoxicidad entre TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer (p > 0.05). A las 24 h, TotalFill BC Sealer y AH Plus mostraron el menor crecimiento microbiano en comparación con Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusiones: AH Plus presentó la menor citotoxicidad. TotalFill BC Sealer y AH Plus produjeron mayores reducciones en los recuentos microbianos en las primeras 24 h en comparación con Bio-C Sealer. Relevancia Clínica: 2c. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade em células osteoblásticas humanas e a atividade antimicrobiana em diferentes cimentos endodônticos in vitro. Métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer foram usados nos grupos experimentais e o AH Plus foi usado como controle. Células semelhantes a osteoblastos humanos e ensaio colorimétrico quantitativo de MTT foram usados para avaliar a citotoxicidade. As células Saos-2 foram expostas a extratos de cimento não diluídos por 24 h. O sobrenadante foi então recolhido e os cristais de formazan resultantes da redução do MTT foram dissolvidos em dimetilsulfóxido puro. A absorbância foi medida em um espectrofotômetro automatizado em um comprimento de onda de 540 nm. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de contato direto utilizando um biofilme polimicrobiano composto por Enterococcus faecalis, Candida albicans e Streptococcus mutans. Em 24, 48 e 72 h, as unidades formadoras de colônias foram contadas em placas de ágar. O teste não paramétrico de Kruskal-Wallis foi utilizado para a análise estatística. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade após 24 h, com diferença significativa em relação ao BioRoot RCS e Bio-C Sealer (p ≤ 0,01). Não houve diferença significativa na citotoxicidade entre TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer (p > 0,05). Às 24 h, TotalFill BC Sealer e AH Plus apresentaram o menor crescimento microbiano em comparação com Bio-C Sealer (p 0,05). Conclusões: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade. TotalFill BC Sealer e AH Plus produziram maiores reduções na contagem microbiana nas primeiras 24 h em comparação com o Bio-C Sealer. Relevância Clínica: 2c.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aumento das reações adversas causadas por conservantes somado a poucas substâncias disponíveis no mercado têm despertado o interesse das indústrias cosméticas no desenvolvimento de novos compostos com ação antimicrobiana. Moléculas derivadas de xilitol, Ésteres de Fosfato de Xilitol e Monoéster de C-8 Xilitol, já tiveram sua atividade contra microrganismos comprovada. Entretanto, além de eficazes, estes compostos devem ser seguros para uso em produtos. Neste trabalho, avaliou-se o perfil toxicológico destas moléculas visando sua aplicação cosmética. Inicialmente, foi realizada avaliação preditiva in silico dos derivados de xilitol para comparação da toxicidade a partir de substâncias conhecidas e utilizadas em produtos. Testes in vitro para avaliação de segurança também foram realizados. Citotoxicidade, fototoxicidade, mutagenicidade e irritação foram os parâmetros estudados para a saúde humana enquanto que se avaliou a biodegradabilidade imediata para saúde ambiental. Adicionalmente, ensaios clínicos de segurança foram realizados para confirmação da tolerância cutânea, da ausência de potencial de sensibilização e da aceitabilidade em condições de uso. Estudos clínicos complementares de eficácia foram feitos para verificar a aplicabilidade dos compostos em formulações cosméticas em relação à melhora de oleosidade, de hidratação, de caspa e ao efeito desodorante. Os resultados obtidos sugerem que as moléculas derivadas de xilitol possuem perfil toxicológico aceitável para formulações cosméticas. Na predição in silico, os compostos apresentaram resultados negativos para mutagenicidade, sensibilização e irritação, baixo potencial de permeação e resultados positivos para biodegradabilidade imediata. Nos estudos in vitro, nossos resultados demonstraram que as moléculas derivadas de xilitol não são fototóxicas ou mutagênicas e são prontamente biodegradáveis. Porém, apresentaram-se irritantes, provavelmente à atividade conservante por serem moléculas biologicamente ativas. Na avaliação clínica de segurança, os compostos derivados de xilitol demonstraram boa tolerância e aceitabilidade com a pele e não são alergênicos. Além disso, estas substâncias também parecem ter a capacidade de auxiliar nos atributos funcionais dos cosméticos. Formulações contendo Monoéster de C-8 Xilitol melhoram a barreira cutânea e mantêm quantidade de água na epiderme e formulações contendo Ésteres de Fosfato de Xilitol apresentaram atividade desodorante e melhoraram a oleosidade da pele. Estes resultados contribuem para o desenvolvimento de compostos conservantes seguros para utilização em produtos para o cuidado da pele Abstract: The increase of adverse effects caused by preservatives together with the lack of available options in the market have arisen cosmetic industries interest in the development of new compounds with antimicrobial action. The effectiveness against microorganisms of Xylitol-derived molecules, Phosphate Xylitol Esters and C-8 Xylitol Monoester, have already been proved. However, these compounds should be safe as well as effective. In this study, the toxicological profile of these molecules was assessed regarding their use in cosmetics. First, in silico analysis was performed in order to compare the toxicity prediction of the xylitol-derivatives chemical structures with known substances that are currently used in products. The safety was also tested in vitro. Cytotoxicity, phototoxicity, mutagenicity and irritation were the chosen parameters to evaluate the substances hazard for human health. Ready biodegradability was performed to assess the impact on the environment. Moreover, safety clinical trials were performed for the confirmation of skin tolerance, absence of sensitization potential and acceptability under conditions of use. Additional clinical studies for efficacy enabled the assessment of the application of the compounds in cosmetic formulations to improve oiliness, moisturization, dandruff condition and deodorant effect. Our results suggested that xylitol-derived molecules have an acceptable toxicological profile considering their use in cosmetics. Regarding the in silico prediction, the compounds presented negative results for mutagenicity, sensitization and irritantion, low permeation potention and positive results for ready biodegradability. In vitro studies results showed that xylitol-derived molecules were not phototoxic or mutagenic and were readily biodegradable. However, they were irritants, probably due to the preservative effect as they are biologically active molecules. In the clinical safety assessment, the compounds presented good skin tolerance and acceptability and they were not allergenic. In addition, these substances also seem to have the capacity of aiding in improving the cosmetic attributes of a formulation. Formulations containing C-8 Xylitol Monoester improved the skin barrier and mantained water amount in the epidermis while formulations containing Phosphate Xylitol Esters presented deodorant activity and improved skin oiliness. These results contribute for the development of safe preservatives for skin care products Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Maria Beatriz Puzzi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Nos últimos anos, tem-se observado o aumento no número de estudos relacionados ao processo de envelhecimento da pele, devido principalmente ao interesse da população em prevenir ou retardar o aparecimento dos sinais do tempo. O envelhecimento da pele é decorrente de um processo natural do corpo humano e sofre influência direta do background genético do indivíduo. Também pode sofrer com ação do ambiente externo, intensificando as dermatoses comuns do envelhecimento. Objetivo: Neste presente trabalho analisamos a expressão gênica de fibroblastos humanos originários de indivíduos jovens e idosos, mantidos em cultura celular de monocamada, a fim de se determinar um padrão gênico de envelhecimento da pele. Metodologias e métodos: Utilizando fibroblastos humanos primários, comparamos três modelos in vitro de envelhecimento, através da técnica de proliferação celular acelerada, radiação UVB e células provenientes de doadores idosos, com relação ao seu comportamento celular e gênico considerando 29 genes: CASP3, SIRT1, LMNA, COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL4A1, COL7A1, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP12, MMP13, MMP14, TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4, IL1B, IL1A, IL6, IL8, IL10, TP53, PTGS2 relacionados ao processo de envelhecimento da pele. Resultados e discussão: Foi possível observar redução na velocidade de proliferação celular nos modelos de envelhecimento quando comparados ao controle jovem sem tratamento. Os resultados de expressão gênica foram analisados através da plataforma Ingenuity Pathway Analysis e 12 genes foram identificados como potenciais biomarcadores para o processo de envelhecimento da pele. Os genes COL1A1 e COL1A2, relacionados à síntese de colágeno tipo I, demonstraram inibição de expressão enquanto os genes MMP1 e MMP3, relacionados à degradação de matriz extracelular, apresentaram aumento, corroborando sua importância no processo de envelhecimento da pele. Os genes responsáveis pela síntese de citocinas pró- inflamatórias IL6, IL1A, IL1B e PTGS2 apresentaram inibição da expressão ao mesmo tempo em que o IL10, gene que codifica uma citocina anti-inflamatória, apresentou aumento, sugerindo que estas citocinas atuam no dano e recuperação da pele envelhecida. Além disso, os genes CXCL8, TP53 e LMNA também foram positivamente modulados, sugerindo possuir papel importante no processo de envelhecimento celular. Conclusão: Os modelos in vitro de envelhecimento de pele, quando analisados isoladamente, não apresentaram marcadores gênicos exclusivos porém, quando analisados conjuntamente, foi possível identificar 12 genes como biomarcadores comuns entre os modelos de envelhecimento, sendo eles COL1A1, COL1A2, CXCL8, IL6, IL10, IL1A, IL1B, LMNA, MMP1, MMP3, PTGS2, TP53. Deste modo, podemos concluir que é possível definir um padrão gênico de envelhecimento da pele em modelos de cultura celular in vitro, nas condições testadas Abstract: Introduction: In recent years, it has been observed an increase in the number of works related to skin aging, due mainly to the interest of the population on prevent or delay the signs of elderly on skin. Skin aging is the result of a natural process of human body and it is influenced by genetic background. It also can be influenced by external environment, intensifying regular dermatoses of elderly. Objective: In this present work, we analyzed the gene expression of human fibroblasts from young and elderly donors, maintained in monolayer cell culture, in order to determine genetic pattern of skin aging. Materials and Methodology: Using human primary fibroblasts, we compared three in vitro skin aging models - cell proliferation technique, UVB radiation and cells from elderly donors - regarding cellular and genetic behavior, using 29 genes: CASP3, SIRT1, LMNA, COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL4A1, COL7A1, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP12, MMP13, MMP14, TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4, IL1B, IL1A, IL6, IL8, IL10, TP53, PTGS2 related to skin aging process. Results and discussion: It was possible to observe a decrease of cellular proliferation rate on aging models when compared with young cell control, without treatment. The results of gene expression were analyzed through Ingenuity Pathway Analysis platform and 12 genes were identified as common biomarkers of skin aging. The genes COL1A1 and COL1A2, related to collagen type 1 synthesis, demonstrated inhibition of expression while MMP1 and MMP3, related to extracellular matrix degradation, demonstrated increase, corroborating their importance in the skin aging. The genes responsible for pro inflammatory cytokines synthesis IL6, IL1A, IL1B and PTGS2 showed inhibition of expression at the same time that IL10 gene, which encode an anti-inflammatory cytokine, demonstrated increase suggesting that these cytokines can act on damage and recovery of aged skin. Furthermore, the genes CXCL8, TP53 and LMNA were also positively modulated, suggesting an important role on skin aging process. Conclusion: In vitro skin aging models, when individually analyzed, did not identify unique biomarkers however, when analyzed together, it was possible to identify 12 genes as common biomarkers for skin aging, COL1A1, COL1A2, CXCL8, IL6, IL10, IL1A, IL1B, LMNA, MMP1, MMP3, PTGS2, TP53. Thus, we can conclude that is possible to determine a genetic pattern of skin aging in cell culture in vitro models, regarding established conditions Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências

A detecção de lesões de cárie na superfície proximal é um desafio para o profissional. Diante disso, métodos baseados em indução de fluorescência têm sido desenvolvidos para auxiliar nesse processo. No entanto, ainda existe uma lacuna no que se refere ao desempenho desses métodos em lesões de cárie incipientes tratadas com infiltrante resinoso e adesivo dentinário. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a influência dos materiais resinosos nos valores de fluorescência do aparelho DIAGNOdent pen (DDpen) no tratamento micro invasivo de lesões de cárie proximais em molares decíduos. Foram selecionados 72 molares decíduos recém-extraídos e congelados a -20°C, com pelo menos uma superfície proximal com lesão de cárie incipiente ativa ICDAS 2 (International Caries Detection & Assessment System) e radiograficamente com translucidez na metade interna do esmalte (E2) ou no terço externo da dentina (D1). Os dentes decíduos foram aleatoriamente divididos em dois grupos: (Grupo I) Scotchbond® - adesivo dentinário (n=36; superfícies proximais) e (Grupo II) Icon® - infiltrante resinoso (n=36; superfícies proximais). Dois examinadores treinados avaliaram independentemente os dentes com o dispositivo DDpen duas vezes, com intervalo de uma semana entre eles, antes do tratamento (baseline) e após o tratamento. Em seguida, os dentes foram preparados para avaliação histológica em microscópio de luz polarizada, e a profundidade do corpo da lesão e sua área foram determinadas por meio do software Image J. 7 Os dados foram submetidos à análise estatística inferencial, com nível de significância de 5%. O Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI) apresentou concordância satisfatória a excelente para reprodutibilidade intra- e inter examinador para o DDpen antes e após o tratamento das lesões de cárie com sistema adesivo e infiltrante resinoso. Verificou-se uma redução significativa dos valores de fluorescência do DDpen após o tratamento com sistema adesivo e infiltrante resinoso em superfícies proximais de molares decíduos (p0,05). Não houve correlação significativa comparando área histológica da lesão de cárie proximal e os valores de fluorescência a laser (antes, após e diferença) pelo DDpen para ambos os grupos (p>0,05). Conclui que os valores de fluorescência obtidos pelo DDpen apresentaram diminuição significativa após tratamentos micro-invasivos de lesões de cárie proximais não-cavitadas em molares decíduos, tanto com sistema adesivo como com infiltrante resinoso. The detection of approximal caries lesions is a challenge for the dental professional. Therefore, fluorescence-based methods have been developed to assist in this process. However, there is still a gap regarding the performance of these methods for incipient caries lesions treated with resin infiltrant and adhesive system. The aim of this study was to evaluate in vitro the influence of resin-based materials on the fluorescence values of the DIAGNOdent pen (LFpen) device in the micro-invasive treatment of approximal caries lesions in primary molars. Seventy-two newly extracted and frozen at -20 °C primary molars were selected, with at least one approximal surface with an active incipient caries lesion ICDAS 2 (International Caries Detection & Assessment System) and radiographically with translucency in the inner half of enamel (E2) or in the inner third of dentin (D1). The primary teeth were randomly divided into two groups: (Group I) Scotchbond® - adhesive system (n=36; approximal surfaces) and (Group II) Icon® - resin infiltrant (n=36; approximal surfaces). Two trained examiners performed independently assessed the teeth with LFpen twice, with a one-week interval between them, before treatment (baseline) and after treatment. Then, the teeth were prepared for histological evaluation under a polarized light microscope, and the depth of the lesion body and its area were determined using Image J software. Data were analysed by inferential statistics, with a significance 9 level of 5%. The Intraclass Correlation Coefficient (ICC) showed satisfactory to excellent agreement for intra- and inter-examiner reproducibility for LFpen before and after treatment of caries lesions with adhesive system and resin infiltrant. There was a significant reduction in the fluorescence values of LFpen after treatment with an adhesive system and resin infiltrant on approximal surfaces of primary molars (p0.05). There was no significant correlation comparing the histological area of the approximal caries lesion and the laser fluorescence values (before, after and difference) by LFpen for both groups (p>0.05). It can be concluded that the fluorescence values obtained by LFpen showed a significant decrease after micro-invasive treatments of non-cavitated approximal caries lesions in primary molars, both with adhesive system and resin infiltrant.

ilustraciones, fotografías, graficas La enfermedad de Chagas causada por el parásito Trypanosoma cruzi, representa un problema de salud pública a nivel mundial. Su tratamiento está restringido a dos fármacos, Benznidazol y Nifurtimox, que poseen efectos adversos, eficacia limitada y su oportunidad de acceso es igualmente limitado. Las pruebas farmacológicas in vitro constituyen la herramienta inicial para el tamizaje de alternativas promisorias, sin embargo, en este caso particular, no existe un consenso en los protocolos utilizados, por lo que es fundamental optimizar una prueba farmacológica in vitro para evaluar sustancias con potencial actividad frente a Trypanosoma cruzi, con el fin de obtener resultados reproducibles y comparables que aporten al avance del desarrollo de nuevo fármacos. En el presente trabajo se optimizó las condiciones más relevantes usadas en las pruebas farmacológicas in vitro a partir de epimastigotes de la cepa Y de Trypanosoma cruzi. Se determinó que el parásito tiene un crecimiento sostenido hasta el día 8 con una estabilización o disminución a partir del día 9 de incubación. El recambio de medio de cultivo debe ser cada 3 días para garantizar un porcentaje de epimastigotes mayor al 90%. Para el cultivo óptimo del parásito se puede usar tanto el medio LIT como el BHI suplementado con 10 % de SFB. En cuanto a la prueba farmacológica se determinó que se puede usar indistintamente placas con fondo en U o fondo plano sin afectar el crecimiento del parásito, los mejores resultados los obtuvimos empleando una concentración de 1x10 6 parásitos/mL como inóculo inicial y una incubación de 72 horas. Se determinó una CI50 de 16,6 µM (4,32 µg/mL) de benznidazole frente a epimastigotes de T. cruzi de la Cepa Y, coincidente con reportes previos bajo las mismas condiciones. (Texto tomado de la fuente) Chagas disease caused by the parasite Trypanosoma cruzi represents a worldwide public health problem. Its treatment is restricted to two drugs, Benznidazole and Nifurtimox, which have adverse effects, limited efficacy, and their opportunity for access is equally limited. In vitro pharmacological tests are the initial tool for screening promising alternatives, however, in this particular case, there is no consensus on the protocols used, so it is essential to optimize an in vitro pharmacological test to evaluate substances with potential activity against Trypanosoma cruzi, in order to obtain reproducible and comparable results that contribute to the advancement of the development of new drugs. In the present work, the most relevant conditions used in vitro pharmacological tests were optimized from epimastigotes of the Y strain of Trypanosoma cruzi. It was determined that the parasite has a sustained growth until day 8 with a stabilization or decrease from day 9 of incubation. The change of culture medium should be every 3 days to guarantee a percentage of epimastigotes greater than 90%. For optimal culture of the parasite, both LIT medium and BHI supplemented with 10% FBS can be used. Regarding the pharmacological test, it was determined that plates with a U-bottom or flat bottom can be used interchangeably without affecting the growth of the parasite; The best results were obtained using a concentration of 1x10 6 parasites / mL as initial inoculum and an incubation of 72 hours. An IC50 of 16.6 µM (4.32 µg/mL) of benznidazole was determined against epimastigotes of T. cruzi of Strain Y, which coincides with previous reports under the same conditions. Maestría Magíster en Ciencias - Microbiología

Orientadores: Fabio Trindade Maranhão Costa, Gustavo Capatti Cassiano Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A malária é uma doença infecciosa que causa milhares de mortes todos os anos ao redor do mundo. O uso de antimaláricos é fundamental para a contenção da doença e tratamento dos infectados. A recorrente resistência parasitária aos antimaláricos vigentes torna necessário o constante estudo para o desenvolvimento de novos compostos químicos, capazes de atuar na morte do parasita por modos de ação inéditos. Com o sucesso de inibidores de quinases para o tratamento do câncer, o quinoma (conjunto de quinases presente no proteoma do parasita) do Plasmodium spp. passou a ser investigado, com o intuito de encontrar potenciais alvos terapêuticos para o tratamento da malária. Através de filtros de bioinformática, escolhemos as proteínas Caseína quinase 1 (CK1) e 2 (CK2) de Plasmodium spp. como alvo para a seleção de compostos químicos para testes. A CK1 é conservada entre as espécies de Plasmodium, altamente expressa em todo o ciclo sanguíneo do parasita e tem interação física com a proteína Rab-5B evidenciando assim fazer parte do controle metabólico. Além disso, estudos de genética reversa demonstraram que esta proteína é essencial para o desenvolvimento do estágio sanguíneo do parasito. Apesar de pertencerem a mesma família, a CK1 e a Caseína quinase 2 (CK2) são divergentes em estrutura, função e resposta a moléculas efetoras. Experimentos de genética reversa mostraram que a CK2? de P. falciparum é essencial para a sobrevivência do patógeno durante seu ciclo de replicação dentro dos eritrócitos do hospedeiro, tornando, assim como a CK1, a CK2? um alvo promissor para o tratamento e contenção da malária. Com o crescente aumento da capacidade computacional e aprimoramento das triagens in silico, realizamos técnicas de triagens virtuais com o intuito de reduzirmos os testes experimentais e aumentar a capacidade assertiva. Primeiramente, construímos por homologia a estrutura 3D da proteína alvo PvCK1, e para a PfCK2 utilizamos o cristal, e utilizamos dois métodos de triagens complementares, o primeiro baseado na proteína do parasita, Structure-Based Virtual Screening (SBVS) visando identificar inibidores das CKs, e o segundo baseado em QSAR (do inglês Quantitative Structure-Activity Relationship) utilizando a vasta informação na literatura e bancos de dados de moléculas ativas já avaliadas em Plasmodium spp., com o intuito de assegurar que os compostos selecionados tenham atividade in vitro contra as formas assexuadas sanguíneas do parasito. Após a triagem virtual, 183 compostos foram selecionados e testados in vitro contra P. falciparum, sendo que 11 compostos foram capazes de inibir mais que 50% do crescimento parasitário a 1 ?M. Estes compostos foram então avaliados em relação a citotoxicidade em células HepG-2, e MCF-7. Finalmente, foram escolhidos de acordo com estrutura, citotoxicidade e atividade antiplasmodial, 3 compostos para realizar curvas dose resposta contra cepas sensíveis e resistentes de P. falciparum e obtivemos 1 composto apresentando alto índice de seletividade (>100) Abstract: Malaria is an infectious disease that causes thousands of deaths each year worldwide. The use of antimalarials is essential to contain the disease and treat those infected. The recurrent parasitic resistance to current antimalarials, makes it necessary to constantly study for the development of new chemical compounds capable of acting in the death of the parasite through unprecedented modes of action. With the success of kinase inhibitors for the treatment of cancer, the kinome (set of kinases present in the parasite proteome) of Plasmodium spp. started to be investigated in order to find potential therapeutic targets for the treatment of malaria. Through bioinformatics filters, we chose the protein Casein kinase 1 (CK1) and 2 (CK2) from Plasmodium spp. as targets for the selection of chemical compounds for testing.CK1 is conserved among Plasmodium species, highly expressed throughout asexual blood stage development, and has physical interaction with the Rab-5B protein, evidencing being part of the metabolic control. In addition, reverse genetic studies have shown that this protein is essential for the development of the parasite's blood stage. Despite belonging to the same family, CK1 and CK2 are divergent in structure, function, and response to effector molecules. Reverse genetic experiments have shown that P. falciparum CK2? is essential for the survival of the pathogen during its replication cycle within the host's erythrocytes, making, like CK1, CK2? a promising target for the treatment of malaria. With the increasing computational capacity and the improvement of in silico screening, we have performed virtual screening techniques in order to reduce experimental tests and increase assertive capacity. First, we build the 3D structures of the target proteins PvCK1 by homology, and for PfCK2 we use the crystal, and we use two complementary screening methods, the first based on the parasite protein, Structure-Based Virtual Screening (SBVS) to identify CK inhibitors, and the second based on QSAR (Quantitative Structure-Activity Relationship) using the vast information in the literature and databases of active molecules already evaluated in Plasmodium spp., in order to ensure that the selected compounds have activity in vitro against the asexual blood forms of the parasite. After virtual screening, 183 compounds were selected and tested in vitro against P. falciparum, with 11 compounds capable of inhibiting more than 50% of parasitic growth at 1 ?M. These compounds were then evaluated for cytotoxicity in HepG-2 cells, and MCF-7. Finally, 3 compounds were chosen according to structure, cytotoxicity and antiplasmodial activity to produce dose response curves against sensitive and resistant strains of P. falciparum and we obtained 1 compound with a high selectivity index (> 100) Mestrado Imunologia Mestra em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2018/05926-2; 2019/17062-5

La infección causada por el virus del dengue (DENV) se ha relacionado con el desarrollo de alteraciones neurológicas y comportamentales en humanos. Dicha asociacione se ha confirmado por el desarrollo de signos claros de alteración neurológica durante y después de la infección y por la presencia de proteínas y/o RNA viral en líquido cefaloraquídeo o en muestras de tejido nervioso obtenidas post morten. Esto sugiere que el virus puede invadir el Sistema Nervioso Central (SNC). Por la dificultad de reproducir los signos y síntomas del dengue en animales, nuestro grupo desarrolló un modelo in vivo de neuroinfección en el cual ratones neonatos se inocularon a nivel periférico con una cepa de virus adaptada a tejido nervioso (D4MB-6). Como resultado, se observó que la variante viral logró invadir el SNC e infectó algunas poblaciones celulares como neuronas, oligodendrocitos y células de la microglía. Estas últimas presentaron evidentes cambios morfológicos que sugerían activación. Adicionalmente se observó que en el tejido nervioso de animales infectados la infección indujo una exacerbada respuesta inmune y la excitotoxicidad por glutamato, espectos que en conjunto causaron la muerte neuronal y el daño en la arquitectura tisular. Sin embargo, la población celular del tejido nervioso que secreta estas moléculas no ha sido identificada aún. Experimentalmente se ha demostrado que en diferentes patologías -incluso virales- la principal fuente de citoquinas pro-inflamatorias, glutamato y otros agentes provienen de las células de la microglía infectadas y/o activadas. Todos los agentes producidos y liberados por estas células, pueden de manera conjunta o independiente ocasionar el daño y la muerte neuronal. Por lo tanto, en este trabajo se evaluó en un cultivo primario de células de la microglía de ratón lactante, su susceptibilidad a la infección con la variante adaptada -D4MB-6- o no a tejido nervioso y algunos aspectos relacionados con su activación. Como resultado se observó que las células microgliales presentaron una alta susceptibilidad a la infección y en los tiempos post-infección evaluados presentaron altas tasas de proliferación y supervivencia. Adicionalmente se observó que las células presentaron cambios morfológicos y produjeron algunas moléculas pro-inflamatorias y glutamato, que indujeron a las células a sostener en los tiempos evaluados un estado de activación que fue modulado y regulado por los fármacos VPA o MK-801. En conjunto estos resultados permitieron describir que la infección por DENV indujo la activación y producción de agentes pro-inflamatorios y glutamato por parte de las células de la microglía, por lo tanto, sugerimos que estas células son centrales en el desarrollo de la nueuroinfección y neuropatogenia causada por el DENV. Magíster en Ciencias Básicas Biomédicas Maestría

En las últimas dos décadas se ha reportado la emergencia y rápida diseminación del Staphylococcus aureus resistente a meticilina clon USA300 con una amplia distribución y patogenicidad, causando al ser humano infecciones no solo en el hospital sino en la comunidad. El elemento genético móvil para el catabolismo de la arginina (ACME) fue identificado exclusivamente en este clon y dentro de este elemento se encuentra un operón arc que tiene la misma función catabólica de ACME suministrando ATP en condiciones anaerobias y que en ambientes ácidos aumenta el pH del medio favoreciendo la capacidad para colonizar. Estudios previos en nuestro laboratorio mostraron que una sobreexpresión del operón arcACME en el clon USA300 es dada posiblemente por el gen sausa300_0063 inserto dentro de este operón que codifica para un regulador transcripcional. Determinar la participación de la proteína hipotética SAUSA300_0063 en la activación del operón arc presente en ACME en el clon pandémico USA300. Mediante el sistema de expresión pET303/CT-His en BL21 (DE3) se produjo la proteína recombinante SAUSA300_0063 del operón arcACME la cual se purificó mediante electroelución. Se determinó la unión in vitro de la proteína recombinante SAUSA300_0063 a la secuencia promotora del operón arcACME mediante ensayos de retardamiento en gel y por PCR en tiempo real se analizó la transcripción relativa de los genes sausa300_0063, arcCACME, arcCcons y arcR en condiciones de anaerobiosis en presencia o ausencia de arginina. La evidencia experimental mostró que la proteína SAUSA300_0063 establece su unión en el promotor del operón arcACME sugiriendo una aproximación acerca de su función como regulador transcripcional perteneciente a la familia de proteínas CRP/FNR. Adicionalmente se observó una relación directa en el aumento de la transcripción de los genes sausa300_0063 y arcC del operón arcACME indicando la posible participación de la proteína SAUSA300_0063 en la autoactivación del operón arcACME, dada a esta nueva estructura del operón facilitando su regulación. La proteína SAUSA300_0063 participa en la activación del operón arcACME a través de la unión a su región promotora y esta activación es mayor que la encontrada en el operón arc constitutivo. Estos resultados sugieren que el cambio estructural encontrado en el operón arcACME facilita la participación de la proteína SAUSA300_0063 en la auto-activación de este operón ya que dada a esta nueva estructura se podría regular en modo cis considerándose un sistema altamente ventajoso. Magíster en Ciencias Básicas Biomédicas Maestría In the last two decades has reported the emergence and rapid spread of methicillinresistant Staphylococcus aureus USA300 clone with a wide distribution and pathogenicity, causing human infections not only in the hospital but in the community. The mobile genetic element for catabolism of arginine (ACME) was identified only in this clone and inside this element is one arc operon having the same catabolic function ACME providing ATP under anaerobic conditions and in acidic environments increases pH medium favoring the ability to colonize. Previous studies in our laboratory showed that overexpression arcACME operon in clone USA300 is possibly given by the insert sausa300_0063 within this operon gene encoding a transcriptional regulator. Determine the participation SAUSA300_0063 hypothetical protein in the activation of arcACME operon in the USA300 clone pandemic. Using the system pET303 / CT-His expression in BL21 (DE3) recombinant protein produced SAUSA300_0063 arcACME operon which was purified by electroelution. In vitro binding of recombinant protein SAUSA300_0063 to the promoter sequence of the arcACME operon determined by assays retarding gel and real-time PCR the relative transcription sausa300_0063, arcCACME, arcCcons and arcR genes it was analyzed in anaerobiosis in presence or absence of arginine. Experimental evidence showed that establishes its binding protein SAUSA300_0063 in arcACME operon promoter suggesting an approach about its function as a transcriptional regulator belonging to the family of proteins CRP / FNR. Additionally a direct relationship in the increased transcription of sausa300_0063 genes and arcC operon arcACME indicating the possible participation SAUSA300_0063 protein self-activation arcACME operon given to this new structure operon facilitating regulation. SAUSA300_0063 protein participes in the activation arcACME operon across binding to its promoter region and this activation is greater than that found in the constituent arc operon. These results suggest that the structural change in the arcACME operon found facilitates participation SAUSA300_0063 self-protein in the activation of this operon and given to this new structure could be regulated in cis mode considered a highly advantageous system.

Introduction: Although self-ligating brackets presumably provide better hygiene conditions, no consensus has been reached so far. Objective: Therefore, the objective of this study was to evaluate, in an in vitro experimental design, the adherence of Streptococcus mutans (SM) in self-ligating and conventional brackets of different manufacturers and ligature types. Methods: Four commercial brands of maxillary premolar metal brackets were tested (Abzil®; Morelli®; 3M Unitek®; and GAC®). Each one was subdivided into three groups, which varied according to the type of ligature and bracket model (metallic, elastic, and self-ligating), totalizing twelve groups, composed of six brackets each. Previously sterilized brackets were initially immersed in saliva for one hour, and subsequently washed and added in a bacterial suspension, maintained in aerobiosis for 72 hours. The adhered bacteria were then separated and quantified by colony forming units (CFU/mL) counting after 48 hours of growth. The groups were compared by Kruskal-Wallis and Dunn post-hoc tests (p< 0.05). Results: Regardless of the commercial brand, self-ligating brackets had significantly less CFU/mL. However, according to comparisons performed within each commercial brand, only Abzil® self-ligating brackets had significantly lower biofilm adhesion. Among all of the self-ligating models, GAC® brackets presented the highest bacterial adhesion rate. Conclusions: Self-ligating brackets are likely to present lower rates of biofilm adhesion. Particularly, Abzil® and GAC® self-ligating brackets are less likely to accumulate biofilm. Although such results are derived from an in vitro study, practitioners might acknowledge findings concerning bacterial adhesion as one of the relevant features to be considered during bracket selection. RESUMO Introdução: Embora os braquetes autoligados presumivelmente proporcionem melhores condições de higiene, nenhum consenso foi alcançado até o momento. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, em um delineamento experimental in vitro, a aderência de Streptococcus mutans em braquetes autoligados e convencionais de diferentes fabricantes e tipos de ligaduras. Métodos: Quatro marcas comerciais de braquetes metálicos de pré-molares superiores foram testadas (Abzil®; Morelli®; 3M Unitek®; e GAC®). Cada marca foi subdividida em três grupos, que variaram de acordo com o tipo de ligadura e o modelo do braquete (metálico, elástico e autoligado), totalizando doze grupos, compostos por seis braquetes cada. Os braquetes previamente esterilizados foram, inicialmente, imersos em saliva por uma hora, sendo posteriormente lavados e adicionados em uma suspensão bacteriana, mantida em aerobiose por 72 horas. As bactérias aderidas foram, então, separadas e quantificadas por contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) após 48 horas de crescimento. Os grupos foram comparados pelos testes post-hoc de Kruskal-Wallis e Dunn (p< 0,05). Resultados: Independentemente da marca comercial, os braquetes autoligados apresentaram significativamente menos UFC/mL. Porém, de acordo com as comparações realizadas dentro de cada marca comercial, apenas os modelos autoligados Abzil® apresentaram adesão de biofilme significativamente menor. Entre todos os modelos autoligados, os braquetes GAC® apresentaram a maior taxa de adesão bacteriana. Conclusões: Os braquetes autoligados provavelmente apresentam menores taxas de adesão do biofilme. Particularmente, os braquetes autoligados Abzil® e GAC® têm menor probabilidade de acumular biofilme. Embora tais resultados sejam derivados de um estudo in vitro, os clínicos podem reconhecer os achados relativos à adesão bacteriana como uma das características relevantes a serem consideradas durante a seleção dos braquetes.

Submitted by Fabiano Malheiro (fabianomalheiro22@hotmail.com) on 2021-09-25T19:57:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-09-27T12:36:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2021-09-27T12:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 tese Isabela Furlaneto.pdf: 506551 bytes, checksum: 22f701f8a4e3e41609054b9c0101e549 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2020-12-21 Sem bolsa Os estudos in vitro são provavelmente os de desenvolvimento mais frequente na Odontologia, pois a maioria dos materiais precisam ser testados in vitro antes do uso em humanos. Embora os estudos in vitro não sejam realizados em humanos ou animais, eles tentam simular condições biológicas para testar novos materiais e métodos preventivos ou terapêuticos, ou comparar materiais disponíveis frente às suas características, seja quando há questões éticas envolvidas, seja quando uma comparação clínica seria impossível por exemplo, quando se necessita avaliar um material e suas características por longos períodos de tempo e condições extremas (de temperatura, fadiga, etc). Como em outros estudos, os estudos in vitro representam uma etapa preliminar importante para o desenvolvimento de pesquisas clínicas futuras. Os resultados dos estudos in vitro são, desta forma, traduzidos para a prática clínica muitas vezes por meio de revisões sistemáticas. Um dos pontos principais quando se realiza uma revisão sistemática é a análise do risco de viés, justamente porque o viés pode super ou subestimar o real efeito de um tratamento ou comparação. Sem esta análise, as conclusões podem estar equivocadas e muitas vezes completamente devido ao viés. Desta forma, avaliar o risco de viés com uma ferramenta adequada é fundamental. Se uma revisão sistemática não apresenta uma análise de risco de viés dos estudos incluídos, pode transformar um achado importante em informação inútil. Assim, este protocolo teve como objetivo realizar um estudo para avaliar revisões sistemáticas de estudos in vitro considerando desfecho odontológicos e avaliar, dentro destas revisões, como foi realizada a análise de risco de viés a fim de criar uma ferramenta de análise de risco de viés para estudos in vitro em Odontologia. Foram avaliadas a quantidade e qualidade das revisões sistemáticas, a proporção daquelas que utilizaram uma ferramenta para análise de risco de viés, e a pertinência da ferramenta e seu impacto nos resultados e conclusões. Ainda, pretende-se desenvolver uma ferramenta a ser utilizada em revisões sistemáticas de estudos in vitro, considerando-se os parâmetros mais comumente utilizados nestes estudos e que possam ser fontes de viés. In vitro studies are probably the most used in Dentistry, as most materials need to betested in vitro before use in humans. Although in vitro studies are not carried out on humans or animals, they try to simulate biological conditions to test new materials and preventive or therapeutic methods, or to compare available materials according to their characteristics, either when there are ethical issues involved or when a clinical comparison would be impossible, for example, when it is necessary to evaluate a material and its characteristics for long periods of time and extreme conditions (temperature, fatigue, etc.). As in other studies, in vitro studies represent an important preliminary step for the development of future clinical research. The results of in vitro studies are thus translated into clinical practice, often through systematic reviews. One of the main points when carrying out a systematic review is the analysis of the risk of bias, precisely because the bias can over or underestimate the real effect of a treatment or comparison. Without this analysis, the conclusions can be wrong and often completely due to the bias. Thus, assessing the risk of bias with an appropriate tool is essential. If a systematic review does not present a risk analysis of bias in the included studies, it can turn an important finding into useless information. Thus, this protocol aims to (ii) carry out a systematic review to evaluate systematic reviews of in vitro studies considering various outcomes and how the risk of bias analysis was carried out and (ii) create a risk analysis tool for studies in vitro in Dentistry. The quantity and quality of systematic reviews, the proportion of those who used a tool for risk of bias analysis, and the relevance of the tool and its impact on results and conclusions will be evaluated. Still, it is intended to develop a tool to be used in systematic reviews of in vitro studies, considering the parameters most commonly used in these studies and that may be sources of bias.

Orientador: Rodney Alexandre Ferreira Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O Brasil é um país com grande variedade de espécies vegetais, o que permite a promoção de novos medicamentos à base de plantas medicinais (fito medicamentos), as quais podem conter múltiplas substâncias de interesse terapêutico. Dentre estas substâncias existem os óleos essenciais: compostos voláteis e de ampla aplicação farmacêutica, alimentícia e cosmética, porém que apresentam instabilidade. No meio farmacêutico, entretanto, existem estratégias para contornar estes fatores como a viabilização destes óleos em micropartículas ou em granulados. Para a produção de micropartículas pode-se utilizar a técnica de spray-drying, a qual atomiza e seca uma emulsão a temperaturas entre 110 e 300ºC, e para a granulação, o processo de adição de um agente aglutinante para gerar uma aglomeração dos componentes da formulação, seguido de secagem, propicia partículas com funcionalidade de proteção. Neste trabalho dois excipientes muito comuns na indústria farmacêutica (Lactose e Celulose microcristalina) foram utilizados para a produção de partículas contendo o óleo essencial de duas espécies brasileiras, a Erva-baleeira (Cordia verbenacea sinonímia Varronia verbenacea) e a Macela (Achyrocline satureioides) ¿ ambas com atividade anti-inflamatória e antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi produzir micropartículas e grânulos que auxiliassem na estabilidade de tais óleos, avaliando assim o óleo interno retido, a consistência dos grânulos produzidos, a umidade relativa e liberação in vitro destas formulações, assim como a análise dos principais compostos químicos por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de Massas no decorrer de sua estocagem por 30 e 60 dias. Os granulados apresentaram retenção de 45% dos óleos empregados e maior liberação in vitro quando comparados às micropartículas, que retiveram 12%, porém as micropartículas demonstraram um perfil de liberação mais constante e umidade relativa menor (3% quando comparado a dos grânulos, que foi de 4 a 20%), tornando-as mais adequadas para sua veiculação em cápsulas duras. Ao final do teste, devido à baixa recuperação do óleo essencial, concluiu-se que, ainda que tenha existido uma retenção parcial dos óleos, ambas as partículas necessitam de otimização para que possam ser empregadas para manutenção da estabilidade dos óleos essenciais com o tempo Abstract: Brazil possess a large amount of plant species, of which can hold on a great variety of therapeutic compounds, including essential oils. These substances are volatile complexes with wide application in pharmaceutical, food and cosmetics industry, but present instability problems. However, there are some strategies on the pharmaceutical mean such as the granulation and the microparticulation that can be useful in the protection of these compounds. Spray-drying is a well-known technique that dries an atomized emulsion with temperatures ranging from 110-300 ° C generating microparticles or microspheres. Granulation can be considered an easy and low-cost technique, which consist of additioning an agglutinating agent to a powder mixture, followed by its drying, resulting in granules that provide protection. In this work two common pharmaceutical excipients will be tested (Lactose and Microcrystalline cellulose) in order to create particles containing essential oils from two Brazilian plants: Erva-baleeira (Cordia verbenacea synonymic Varronia verbenacea) and Macela (Achyrocline satureioides) ¿ both presenting antimicrobial and anti-inflammatory effects. The objective was to produce microparticles and granules that enhanced essential oil¿s stability by evaluating formulation¿s retention rate, granules integrity, relative humidity, in vitro release profile and chromatographic analysis during its storage for 30 and 60 days. The granules presented a higher retention rate (45%) and a higher amount of released oil when compared to the microparticles, which retained 12% of essential oil, however the microparticles showed a constant release of the oils and lower humidity values (3% compared to the granules, which varied from 4 to 20%), allowing its use on hard gelatine capsules. At the end of the test due to low essential oil concentrations it was concluded that, although the retention of oils was visible, both particles need optimization to enhance essential oil¿s stability Mestrado Clínica Médica Mestre em Ciências CAPES 3370/2017

The objective of this study was to evaluate the pH and total soluble solids (TSS) content of whey protein beverages. Nine products of three different flavors (vanilla, strawberry and chocolate) of the following brands Muke®, Best Whey®, and Essencial Nutrition Whey®, had their pH evaluated by potentiometry, and their TSS evaluated by refractometry. The lowest pH recorded was for Muke® Chocolate (5.75), and the highest was for Essencial Nutrition Whey® Cacao (6.91). Regarding TSS, the lowest average was for Essencial Nutrition Whey® Vanilla (10.17), and the highest was for Essencial Nutrition Whey® Red Berry (16.66). There was no statistically significant difference in pH and TSS among the flavors and brands evaluated. It was concluded that the analyzed beverages had a higher pH than the pH that is critical to dental enamel and the TSS content was considered high. El objetivo del estudio fue evaluar el pH y el contenido de sólidos solubles totales (SST) de las bebidas de whey protein. Nueve productos de tres sabores (vainilla, fresa y chocolate) de las marcas Muke®, Best Whey® y Essential Nutrition Whey®, los valores de pH fueron evaluados por potenciometría y los SST por refractometría. El pH más bajo registrado fue para la muestra de Muke® Chocolate (5.75), y el más alto fue para la muestra de Essential Nutrition Whey® Cacao (6.91). En cuanto a la SST, el promedio más bajo fue para la bebida de Essential Nutrition Whey® sabor Vanilla (10.17), y el más alto para el sabor Red Berry (16.66). No hubo diferencias estadísticamente significativas en el pH y los SST entre los sabores y las marcas evaluadas. Se concluyó que las bebidas analizadas tenían un pH más alto que el pH crítico del esmalte dental y un contenido de SST demasiado alto. O objetivo do estudo foi avaliar o pH e o teor de sólidos solúveis totais (SST) de bebidas com whey protein. Nove produtos de três sabores (baunilha, morango e chocolate) das marcas Muke®, Best Whey® e Essencial Nutrition Whey®, tiveram seu pH avaliado por potenciometria e o SST por meio de refratometria. O menor pH registrado foi do Muke® Chocolate (5,75), e o maior foi do Essencial Nutrition Whey® Cacao (6,91). Quanto aos SST, a menor média foi do Essencial Nutrition Whey® Vanilla (10,17), e a maior do Essencial Nutrition Whey® Red Berry (16,66). Não houve diferença estatisticamente significativa do pH e SST entre os sabores e marcas avaliadas. Concluiu-se que as bebidas analisadas apresentaram pH superior ao pH crítico do esmalte dentário e um teor de SST considerado alto.