Search

Los miomas son los tumores benignos más frecuentes en las mujeres en edad reproductiva y pueden asociar numerosos síntomas como dolor, sangrado y problemas reproductivos. Sin embargo, actualmente no existe una terapia totalmente satisfactoria por lo que es de suma importancia la evaluación de nuevos tratamientos. En la búsqueda de opciones terapéuticas alternativas, hemos seleccionado el ácido poliinosina-policitidílico (pIC) conjugado con polietilenimina (PEI) [pICPEI], cuyo nombre comercial es BO-100. El compuesto pIC es un ARN sintético de doble cadena sin toxicidad asociada, que induce de manera selectiva la autofagia y apoptosis en un gran espectro de células tumorales. Presenta una amplia eficacia en diversas enfermedades neoplásicas, aunque su efecto en células tumorales benignas como los miomas es desconocido. Por lo que el objetivo de este estudio es evaluar el efecto de [pICPEI] sobre el tamaño de los miomas, la proliferación celular, la apoptosis y la angiogénesis. Para la consecución de nuestro objetivo pusimos a punto un modelo animal de leiomioma para poder testar in vivo el funcionamiento del fármaco. Previamente, realizamos un estudio in vitro donde evidenciamos un efecto selectivo de [pICPEI] sobre las células de mioma sin afectar a las de miometrio sano. Para el modelo in vivo, empleamos ratonas nude, inmunodeprimidas, atímicas, de cinco semanas de edad (n=48) a las que se les practicó una ooforectomía y recibieron reemplazo hormonal mediante una cápsula de liberación lenta de 0,05 mg de 17 β-estradiol y 50 mg de progesterona. Tras esto, se procedió a la implantación de cuatro fragmentos de 3-5mm3 de mioma en el peritoneo de los animales y estos fueron divididos en dos grupos (control y tratamiento) recibiendo vehículo o 0,6 mg/kg de [pICPEI] durante cuatro semanas. Al finalizar el tratamiento, los animales fueron sacrificados, se recuperaron los implantes y se calculó el tamaño de las lesiones. Posteriormente se evaluó la vascularización (con el anticuerpo PECAM, marcador de células endoteliales), la proliferación celular (con el anticuerpo Ki67) y la apoptosis (con el kit Apoptag®) mediante análisis inmunohistoquímico e inmunofluorescente cuantitativo. Las imágenes obtenidas mediante un microscopio óptico y de fluorescencia con una cámara digital acoplada fueron cuantificadas utilizando un software de análisis de imagen. Demostramos un efecto antiangiogénico, proapoptótico y una disminución de la proliferación celular en las ratonas tratadas con el fármaco. Sin embargo, estos efectos no condujeron a una disminución del tamaño del implante, que era el objetivo principal de nuestro trabajo. Posiblemente esto sucedió porque se requiera un mayor tiempo de exposición al fármaco del que empleamos para obtener una reducción significativa de los implantes. Por ello creemos que debido a los efectos ejercidos por [pICPEI] sobre la angiogénesis, proliferación celular y apoptosis, si se administrase durante períodos de tiempo más prolongados podría conducir a una disminución del tamaño de las lesiones.

A Odontologia está cada dia mais avançada no uso de biomateriais em várias áreas de atuação. A fibrina rica em plaquetas (PRF) é um exemplo desse avanço, mas apesar disso ainda existem muitas lacunas acerca de todo o potencial biológico desse material. A questão crucial para a qualidade, aplicabilidade e função do PRF está ligada à forma de obtenção desse material. Alterações no processo de centrifugação podem alterar a composição desse biomaterial e também a sua forma de ativação dos tecidos. Objetivo desse estudo foi avaliar a influência da velocidade e força centrífuga na cinética de liberação de fatores de crescimento pela PRF humana. Materiais e métodos: Para o desenvolvimento do estudo, utilizou-se amostras de sangue periférico de pacientes saudáveis e submeteu esse material a três protocolos com forças de centrifugação diferentes: 400g, 800g e 200g. Os PRFs obtidos foram cultivados em meio estéril de cultura de células e avaliados nos tempos: 15 minutos, 1 dia, 3 dias e 7 dias. Os fatores de crescimento foram detectados pela método ELISA e quantificados em todos os protocolos. Dos resultados obtidos foi visto que apenas o fator de crescimento EGF apresentou diferenças significativas (p=0,044) nas alterações da força centrifuga nos tempos avaliados. Os outros fatores apresentaram mudanças na detecção ao longo dos dias. Conclusão: Essas variações no protocolo não interferem na detecção da maioria dos fatores de crescimento, o que traz segurança ao profissional na obtenção do potencial do material, mesmo com pequenas variações em sua forma de processamento. Dentistry is increasingly advanced in the use of biomaterials in various areas of activity. Platelet-rich fibrin (PRF) is an example of this advance, but despite this, there are still many gaps regarding the full biological potential of this material. The crucial issue for the quality, applicability and function of PRF is linked to the way in which this material is obtained. Changes in the centrifugation process can change the composition of this biomaterial and also its form of tissue activation. The aim of this study was to evaluate the influence of velocity and centrifugal force on the kinetics of growth factor release by human PRF. Materials and methods: For the development of the study, peripheral blood samples from healthy patients were used and this material was subjected to three protocols with different centrifugation forces: 400g, 800g and 200g. The PRFs obtained were grown in sterile cell culture medium and evaluated at times: 15 minutes, 1 day, 3 days and 7 days. Growth factors were detected by the ELISA method and quantified in all protocols. From the results obtained, it was seen that only the growth factor EGF showed significant differences (p=0.044) in changes in centrifugal force at the times evaluated. The other factors showed changes in detection over the days. Conclusion: These variations in the protocol do not interfere in the detection of most growth factors, which gives the professional confidence in obtaining the potential of the material, even with small variations in its processing form. La odontología está cada vez más avanzada en el uso de biomateriales en diversas áreas de actividad. La fibrina rica en plaquetas (PRF) es un ejemplo de este avance, pero a pesar de ello, todavía existen muchas lagunas en cuanto al potencial biológico completo de este material. El tema crucial para la calidad, aplicabilidad y función de PRF está relacionado con la forma en que se obtiene este material. Los cambios en el proceso de centrifugación pueden modificar la composición de este biomaterial y también su forma de activación tisular. El objetivo de este estudio fue evaluar la influencia de la velocidad y la fuerza centrífuga en la cinética de liberación del factor de crecimiento por PRF humana. Materiales y métodos: Para el desarrollo del estudio se utilizaron muestras de sangre periférica de pacientes sanos y este material fue sometido a tres protocolos con diferentes fuerzas de centrifugación: 400g, 800g y 200g. Las PRF obtenidas se cultivaron en medio de cultivo celular estéril y se evaluaron en tiempos: 15 minutos, 1 día, 3 días y 7 días. Los factores de crecimiento fueron detectados por el método ELISA y cuantificados en todos los protocolos. De los resultados obtenidos se observó que solo el factor de crecimiento EGF mostró diferencias significativas (p=0.044) en los cambios de fuerza centrífuga en los tiempos evaluados. Los otros factores mostraron cambios en la detección a lo largo de los días. Conclusión: Estas variaciones en el protocolo no interfieren en la detección de la mayoría de los factores de crecimiento, lo que da confianza a los profesionales en la obtención del potencial del material, incluso con pequeñas variaciones en la forma de procesamiento.

Background: Vegetable oils have antimicrobial activity and promote cell proliferation. Sunflower oil is used as an alternative for treating skin wounds, particularly in underdeveloped or developing countries. Objective: To characterize sunflower oil and evaluate the in vitro effects on cell proliferation and antimicrobial activity. Methodology: The study was carried out using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis and cell proliferation and antimicrobial activity tests. Results: The chromatographic analysis identified the main components of sunflower oil, namely: unsaturated fatty acids (82.2%) with linoleic (47.8%), oleic (28.7%), and linolenic (3.9%) acids as the main lipids, followed by saturated (12.70%), palmitic (8.8%) and stearic (3.6%) acids. A difference (p < 0.001) in cell proliferation was found between treatments with sunflower oil (100 and 10 μg/ ml) and the negative controls. It failed in antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, and Klebsiella pneumoniae. Conclusion: Sunflower oil contains a high concentration of essential fatty acids and promotes cell proliferation but fails to inhibit bacterial activity., Marco contextual: Los aceites vegetales tienen acción antimicrobiana y promueven la proliferación celular. El aceite de girasol se utiliza como alternativa para tratar las heridas cutáneas, especialmente en los países subdesarrollados o en vías de desarrollo. Objetivo: Caracterizar el aceite de girasol y evaluar los efectos in vitro sobre la proliferación celular y la actividad antimicrobiana. Metodología: Análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas, pruebas de proliferación celular y actividad antimicrobiana. Resultados: En el análisis cromatográfico del aceite de girasol, se identificaron los compuestos mayoritarios - ácidos grasos insaturados (82,2%), los principales lípidos son el ácido linoleico (47,8%), oleico (28,7%) y linolénico (3,9%), seguidos del ácido saturado (12,70%), palmítico (8,8%) y esteárico (3,6%). Hubo una diferencia (p < 0,001) entre los tratamientos con aceite de girasol (100 y 10 μg/ml) y los controles negativos en la proliferación celular. Actividad antimicrobiana ineficaz contra las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusión: La composición del aceite de girasol mostró una alta concentración de ácidos grasos esenciales, promovió la proliferación celular, pero no inhibió la actividad bacteriana., Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 μg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2022 El desarrollo de un embarazo saludable depende en gran medida de la funcionalidad de las células trofoblásticas que constituyen la placenta. Durante su desarrollo, los trofoblastos extravellosos adquieren un fenotipo invasivo y migratorio para anclar la placenta al útero y remodelar las arterias espirales uterinas. Una diferenciación anómala o pérdida de la homeostasis de los trofoblastos producen un deterioro de la función placentaria impactando en la salud de la madre y del feto. Si bien las células tumorales son muy diversas en sus fenotipos y en muchas de las respuestas a señales externas e internas, la mayoría comparte con las células trofoblásticas su gran actividad biosintética, escasa inhibición por contacto, elevado índice de proliferación, capacidad para escapar a efectores del sistema inmune y propiedades migratorias e invasivas. Ambos tipos celulares se enfrentan a variaciones en la tensión de oxígeno y el aporte de nutrientes, y una demanda incrementada en la síntesis proteica por lo que requieren de una adecuada función del retículo endoplásmico (RE) y de un sistema que mantenga el balance redox evitando el daño oxidativo o reductivo. Históricamente el aumento en las especies reactivas del oxígeno (ROS) ha sido asociado a daño y muerte celular, pero actualmente se sabe que bajos niveles de ROS y/o la exposición pasajera a éstos son necesarios para la regulación de numerosos procesos celulares. El microambiente oxidante del RE es necesario para la correcta maduración proteica. Diversas situaciones pueden alterar su homeostasis, conducir a una acumulación de proteínas mal plegadas y activar la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) a través de tres vías principales dependientes de tres proteínas transmembrana: Ire1α, PERK y ATF6. En células en reposo, los tres sensores se mantienen en un estado inactivo a través de su asociación con BiP, que es considerado el regulador maestro de la UPR. La UPR normalmente tiene funciones de supervivencia y protege a las células restableciendo el procesamiento proteico y la homeostasis celular, mientras que una disfunción de la UPR o el estrés prolongado y severo puede conducir a la muerte celular. Numerosos antecedentes dan cuenta de la importancia tanto de las ROS como de efectores de alguna o varias vías de la UPR en la fisiopatología de la placenta y de diversos tumores. El factor de transcripción tipo Krüppel-6 (KLF6) es un factor de transcripción ubicuo altamente expresado en la placenta y necesario para su correcto desarrollo. Participa en múltiples procesos como la progresión del ciclo celular, apoptosis, angiogénesis, remodelado vascular, migración y diferenciación, pudiendo desempeñar funciones antagónicas dependiendo del contexto celular. Además, se lo ha descrito como un gen de respuesta al estrés ya que su expresión se incrementa bajo condiciones asociadas a un aumento de ROS. En la placenta su expresión es inducida tempranamente por hipoxia y por la presencia del organofosforado clorpirifos, que además de incrementar el estrés oxidativo genera estrés del RE. Sin embargo, se desconocía si KLF6 participa en la homeostasis celular modulando los niveles de ROS y de los componentes de la UPR en el contexto de células trofoblásticas y tumorales. Este fue el objetivo abordado en esta tesis. Los estudios realizados revelaron que la disminución en la expresión de KLF6 mediante siRNA en células trofoblásticas HTR-8/SVneo indujo un aumento en las ROS. Este incremento en las ROS no fue de origen mitocondrial, si no que podría deberse a un rol de KLF6 como regulador transcripcional de NOX4. Considerando que el aumento de ROS puede conducir a un estado de estrés oxidativo, se estudiaron el potencial de membrana mitocondrial, el índice de apoptosis y la viabilidad celular frente al silenciamiento de KLF6, como así también la respuesta antioxidante a través de la medición de moléculas clave como catalasa, 2-cys-peroxiredoxinas y la vía de Nrf2. No se observaron modificaciones en ninguno de estos parámetros debido al silenciamiento de KLF6. En cambio, el silenciamiento de KLF6 disminuyó la proliferación celular e incrementó los niveles de p21 de manera independiente de p53. Además, se observó un cambio morfológico en las células silenciadas volviéndose más fibroblastoides y aumentando su capacidad migratoria de manera ROS - dependiente. Estos resultados indican que las ROS generadas no incrementan la muerte celular ni la respuesta antioxidante de las células HTR-8/SVneo, y sugieren que los niveles de ROS inducidos no serían dañinos y podrían actuar como una señal reguladora de la función o diferenciación celular del trofoblasto extravelloso. El silenciamiento de KLF6 en las líneas celulares tumorales HepG2, T98G y MDA-MB 231 también condujo a un aumento de ROS total de origen no mitocondrial. Similar a lo observado en la línea trofoblástica, no se modificó la viabilidad celular ni hubo cambios en los niveles de catalasa o 2-cys-peroxiredoxinas. Sin embargo, en contraste con las HTR-8/SVneo, en HepG2 y MDA-MB 231 no se observó un cambio morfológico ni tampoco un incremento en los niveles de p21. Si bien, no se pudo determinar la consecuencia del aumento de ROS en estas líneas, los resultados indican que KLF6 también modula los niveles de ROS en ellas y sugieren que este podría ser uno de los mecanismos por los cuales KLF6 ejerce efectos diferenciales en contextos tumorales. En cuanto a la modulación de componentes de la UPR los estudios realizados revelaron que la disminución en la expresión de KLF6 disminuyó los niveles de factores claves en la UPR tales como BiP, Ire1α, calnexina y el procesamiento del ARNm de Xbp1 (Xbp1s). Al someter las células a un tratamiento con tapsigargina, conocido inductor de la UPR, las células silenciadas para KLF6 no aumentaron los niveles de BiP, sugiriendo que KLF6 es requerido para activar la expresión de BiP. Además, en presencia de tapsigargina se observó una activación en la vía de PERK evidenciada por el incremento en la fosforilación de eIF2α en las células con expresión disminuida de KLF6. Por otra parte, se demostró mediante diferentes estrategias experimentales que el silenciamiento de KLF6 no indujo la autofagia ni tampoco impidió el tráfico intracelular de proteínas en condiciones basales. El silenciamiento de KLF6 en las líneas celulares tumorales no se acompañó de los mismos cambios en la expresión de los componentes de la UPR. De hecho, los cambios fueron dependientes de la línea celular. Mientras que en las células MDA-MB231 se observó un aumento basal de BiP y una disminución de Xbp1s, en la línea HepG2 no se detectaron cambios. En cambio, en la línea T98G se observó un incremento significativo en la expresión de BiP en células silenciadas para KLF6 sólo cuando fueron tratadas con tapsigargina; mientras que basalmente sólo se observó una disminución en la fosforilación de eIF2α al silenciar KLF6. Estos resultados están en concordancia con el rol multifacético que presenta KLF6 dependiendo del contexto celular, como se ha reportado previamente. Los resultados de esta tesis son la primera evidencia de una función de KLF6 como modulador de los niveles de ROS y de componentes de la UPR en células trofoblásticas y tumorales, de manera dependiente del contexto celular. Además, demostraron que en células trofoblásticas el aumento de ROS, posiblemente como consecuencia de un aumento en la expresión de NOX4, incrementa su fenotipo migratorio 2024-09-30 Fil: Kourdova, Lucille Tihomirova. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.

BMP´s are signaling proteins that belong to the Transforming Growth Factor-β (TGF-β) superfamily. These proteins promote the recruitment and differentiation of mesenchymal progenitor cells into bone forming cells, the osteoblasts and increase the rate of bone formation. The carrier systems to release rhBMP-2 to the action site are based on the use of free and soluble BMP incorporated into biopolymers such as collagen, gelatin, chitosan, hyaluronic acid and silk. The fused rhBMP-2-thioredoxin could be an interesting approach for new advances in the field of carrying systems of these growth factors. The fused protein thioredoxin can be useful as a coupling agent of BMP-2 to the carrier system, binding it to the surface of the matrix and it is one of the main aims of this work. The recombinant protein rhBMP-2 was produced by IPTG induction obtaining a soluble protein without the need for refolding process. The immobilization of rhBMP-2 at the surface of the TEMPO modified cellulose nanofibrils was indicated by FTIR spectroscopy. The cellular viability tests indicated increased proliferative behavior of both, C2C12 and stem cells from rats, when seeded in presence of rhBMP2 when compared to the free rhBMP2 substrate. The calcified extracellular matrix confirmed the increased activity of the rhBMP2-cellulose substrate, indicating the success of the proposed method. The cell proliferation assays indicated the method used to immobilize rhBMP2 onto the surface of the TEMPO modified cellulose was successful. The cells growth increased when compared to the reference sample free of rhBMP2. Las BMP son proteínas de señalización que pertenecen a la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta (TGF-β). Estas proteínas promueven el reclutamiento y la diferenciación de células progenitoras mesenquimales en células formadoras de hueso, osteoblastos, y aumentan la tasa de formación de hueso. Los sistemas portadores para la liberación de rhBMP-2 en el sitio de acción se basan en el uso de BMP libre y soluble incorporado en biopolímeros como colágeno, gelatina, quitosano, ácido hialurónico y seda. La rhBMP-2-tioredoxina fusionada podría ser un enfoque interesante para futuros avances en el campo de los sistemas de transporte de estos factores de crecimiento. La proteína fusionada con tiorredoxina puede ser útil como agente de acoplamiento de BMP-2 al sistema transportador, uniéndola a la superficie de la matriz y es uno de los principales objetivos de este trabajo. La proteína recombinante rhBMP-2 se produjo por inducción de IPTG obteniendo una proteína soluble sin necesidad de un proceso de replegamiento. La inmovilización de rhBMP-2 en la superficie de las nanofibrillas de celulosa modificadas con TEMPO se indicó mediante espectroscopia FTIR. Las pruebas de viabilidad celular indicaron un aumento en el comportamiento proliferativo de las células madre C2C12 y de rata, cuando se sembraron en presencia de rhBMP2 en comparación con el sustrato rhBMP2 libre. La matriz extracelular calcificada confirmó el aumento de la actividad del sustrato de celulosa rhBMP2, lo que indica el éxito del método propuesto. Los ensayos de proliferación celular indicaron que el método utilizado para inmovilizar rhBMP2 en la superficie de celulosa modificada con TEMPO fue exitoso. El crecimiento celular aumentó en comparación con la muestra de referencia sin rhBMP2. As BMP's são proteínas sinalizadoras que pertencem à superfamília Fator de Crescimento Transformador Beta (TGF-β). Essas proteínas promovem o recrutamento e a diferenciação de células progenitoras mesenquimais em células formadoras de osso, os osteoblastos e aumentam a taxa de formação óssea. Os sistemas carreadores para liberação de rhBMP-2 no local de ação são baseados no uso de BMP livre e solúvel incorporada em biopolímeros como colágeno, gelatina, quitosana, ácido hialurônico e seda. A rhBMP-2-tioredoxina fundida pode ser uma abordagem interessante para novos avanços no campo de sistemas de transporte desses fatores de crescimento. A proteína fundida tiorredoxina pode ser útil como agente de acoplamento da BMP-2 ao sistema carreador, ligando-a à superfície da matriz e é um dos principais objetivos deste trabalho. A proteína recombinante rhBMP-2 foi produzida por indução de IPTG obtendo-se uma proteína solúvel sem a necessidade de processo de redobragem. A imobilização de rhBMP-2 na superfície das nanofibrilas de celulose modificadas por TEMPO foi indicada por espectroscopia FTIR. Os testes de viabilidade celular indicaram aumento do comportamento proliferativo tanto de C2C12 quanto de células-tronco de ratos, quando semeadas na presença de rhBMP2 quando comparadas ao substrato rhBMP2 livre. A matriz extracelular calcificada confirmou o aumento da atividade do substrato rhBMP2-celulose, indicando o sucesso do método proposto. Os ensaios de proliferação celular indicaram que o método usado para imobilizar rhBMP2 na superfície da celulose modificada por TEMPO foi bem-sucedido. O crescimento das células aumentou quando comparado com a amostra de referência isenta de rhBMP2.

Background: Breast cancer cells enter into the cell cycle following progestin exposure by the activation of signalling cascades involving a plethora of enzymes, transcription factors and co-factors that transmit the external signal from the cell membrane to chromatin, ultimately leading to a change of the gene expression program. Although many of the events within the signalling network have been described in isolation, how they globally team up to generate the final cell response is unclear. Methods: In this study we used antibody microarrays and phosphoproteomics to reveal a dynamic global signalling map that reveals new key regulated proteins and phosphor-sites and links between previously known and novel pathways. T47D breast cancer cells were used, and phospho-sites and pathways highlighted were validated using specific antibodies and phenotypic assays. Bioinformatic analysis revealed an enrichment in novel signalling pathways, a coordinated response between cellular compartments and protein complexes. Results: Detailed analysis of the data revealed intriguing changes in protein complexes involved in nuclear structure, epithelial to mesenchyme transition (EMT), cell adhesion, as well as transcription factors previously not associated with breast cancer cell proliferation. Pathway analysis confirmed the key role of the MAPK signalling cascade following progesterone and additional hormone regulated phospho-sites were identified. Full network analysis shows the activation of new signalling pathways previously not associated with progesterone signalling in T47D breast cancer cells such as ERBB and TRK. As different post-translational modifications can mediate complex crosstalk mechanisms and massive PARylation is also rapidly induced by progestins, we provide details of important chromatin regulatory complexes containing both phosphorylated and PARylated proteins. Conclusions: This study contributes an important resource for the scientific community, as it identifies novel players and connections meaningful for breast cancer cell biology and potentially relevant for cancer management. This research was supported by European Research Council (Project “4D Genome” 609989), the Ministerio de Economía y Competitividad (Project G62426937) and the Generalitat de Catalunya (Project AGAUR SGR 575 and AGAUR 2019PROD00115/IU68-016733), European Research Council -Proof Of Concept (Project “Impacct” 825176).

Procesos oncogénicos como proliferación incontrolable, resistencia apoptótica, aumento de mecanismos angiogénicos y evasión inmune son regulados generalmente por factores de transcripción, como HIF-1. Por tanto, se ha señalado a esta molécula como un blanco terapéutico prometedor. Para explorar esta posibilidad, un oligonucleótido tipo “señuelo” dirigido a HIF-1α (ODN) fue diseñado para evaluar su eficiencia en esquema tanto monoterapéutico, como en combinación con dos agentes quimioterapéuticos en un modelo in vitro de cáncer de seno. Después de comprobar, mediante citometría de flujo e inmunofluorescencia, la localización del blanco, el señuelo fue transfectado en la línea celular MDA-MB-231. Se estableció la IC-50 de HIF-1α ODN, Cisplatino y Taxol con el método de Resazurina. Mecanismos de muerte celular fueron evaluados con el método de TUNEL. Por último, se estableció el índice de combinación (IC) de cada uno de los quimio-agentes en combinación con el ODN. Se evidencio que HIF-1α ODN causa un efecto citotóxico en MDA-MB-231 de hasta un 90% hacia las 72h pos-tratamiento. Este efecto no se observa tanto en los controles del ensayo, como en el cultivo primario de células no tumorales (FIBRO), siendo este agente altamente selectivo hacia células tumorales, al activar mecanismos pro-apoptóticos. A su vez, HIF-1α ODN potencializa la actividad tumorogénica de Cisplatino y Taxol en la línea celular tumoral. Por tanto, HIF-1α ODN demostró tener actividad selectiva potencialmente antitumoral, al disminuir la proliferación celular e inducir apoptosis; optimizando de forma sinérgica, la eficacia de fármacos quimioterapéuticos de alto espectro, en tratamientos combinados.

Oral squamous cell carcinoma is a common malignant lesion. ROCKs proteins are associated with pathogenesis and progression of human tumours. This study aimed to evaluate the functional role of ROCKs in the regulation of cell proliferation of oral squamous cell carcinoma in vitro. BrdU incorporation assays and KI-67 immunoexpression were performed by using SCC-4 cell line from oral squamous cell carcinoma. Control and treated cells: HA-1077 (25, 50 and 100 μmol/l), 50 μmol HA-1077 and Y-27632 30 μmol/l, Y-27632 30 μmol/l were cutured for 6 h. The number of SCC-4 cells treated with: HA-1077 (25, 50 and 100 μmol/l), HA-1077 50 μmol/l and/or Y-27632 30 μmol/l was significantly lower than control cells in BrdU assay [F (5.17) = 443.818, p

Resumen Introducción. Los fibroblastos gingivales (FGs) son células del tejido conjuntivo gingival que han tomado en los últimos años una relevancia promisoria por su probable utilización en la terapia celular, dadas sus capacidades de multipotencialidad y de autorrenovación. Objetivo. Conocer y describir el impacto de la ausencia en la suplementación de Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia de fibroblastos gingivales en cultivos. Materiales y métodos. Fibroblastos gingivales fueron aislados de tejido gingival de pacientes sanos y cultivados en medios de cultivos DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) en ausencia y suplementados con 0.2% de SFB a 37°C en una atmósfera húmeda con 5% de CO2. Se llevó a cabo una evaluación morfológica, de supervivencia y proliferación de los FGs, así como la identificación mediante la técnica de inmunofluorescencia de marcadores del citoesqueleto celular como la actina y mitocondrias. Resultados. Los FGs cultivados en ausencia y con suplementación de 0.2% de SFB evidenciaron una forma fusiforme, con núcleos ovalados y numerosas prolongaciones citoplasmáticas durante el tiempo de cultivo. Un leve aumento en la proliferación de FGs fue observado en aquellas células en contacto con el medio DMEM+0.2% de SFB comparadas con el medio donde estuvo ausente la suplementación. El inmunomarcaje de la actina y las mitocondrias dejó en evidencia que la ausencia y suplementación a 0.2% de SFB no afectó su localización en los FGs evaluados. Conclusión. Los fibroblastos gingivales sobreviven y proliferan en ausencia de SFB, conservando sus características morfológicas celulares. Abstract Introduction. Gingival fibroblasts (GF) are cells of gingival connective tissue that have taken promising relevance in recent years due to their probable use in cell therapy, given their multipotencial and self-renewal capabilities. Objective. To know and to describe the impact of the absence of Fetal Bovine Serum (FBS supplementation on the survival of gingival fibroblasts in cultures. Materials and methods. Gingival fibroblasts were isolated from gingival tissue of healthy patients and cultured in DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) culture media in absence and supplemented with 0.2% FBS at 37 ° C in a humid atmosphere with 5% CO2. A morphological evaluation, survival and proliferation of GF were carried out, as well as the identification by the immunofluorescence technique of cellular cytoskeleton markers such as actin and mitochondria. Results. The GF grown in the absence and with supplementation of 0.2% FBS showed a fusiform shape, with oval nuclei and numerous cytoplasmic extensions during the culture time. A slight increase in the proliferation of GF was observed in those cells in contact with the DMEM medium +0.2% FBS compared to the medium where the supplementation was absent. Immunostaining of actin and mitochondria showed that the absence and supplementation to 0.2% of FBS did not affect its location in the evaluated. Conclusion. Gingival fibroblasts survive and proliferate in the absence of FBS, preserving their cellular morphological characteristics.

The synthetic compound fasentin has been described as a modulator of GLUT-1 and GLUT-4 transporters, thus inhibiting glucose uptake in some cancer cells. Endothelial glucose metabolism has been recently connected to angiogenesis and it is now an emerging topic in scientific research. Indeed, certain compounds with a known effect on glucose metabolism have also been shown to inhibit angiogenesis. In this work we tested the capability of fasentin to modulate angiogenesis in vitro and in vivo. We show that fasentin inhibited tube formation in endothelial cells by a mechanism that involves a negative effect on endothelial cell proliferation and invasion, without affecting other steps related to the angiogenic process. However, fasentin barely decreased glucose uptake in human dermal microvascular endothelial cells and the GLUT-1 inhibitor STF-31 failed to inhibit tube formation in these cells. Therefore, this modulatory capacity on endothelial cells function exerted by fasentin is most likely independent of a modulation of glucose metabolism. Taken together, our results show a novel biological activity of fasentin, which could be evaluated for its utility in cancer and other angiogenesis-dependent diseases.

This work aims to evaluate the effect of Low Power Laser at red wavelength of 660nm on osteogenic proliferation of human umbilical cord mesenchymal stem cells. Processing of the cord was performed, consisting of sectioning the cord into fragments; washing with the solution; separation and discarding of the stromal vessels; sectioning of the remaining jelly and placement in culture bottles with DMEM medium supplemented with 15% SFB, 20% Ham F-12 Gibco® and antibiotics and kept in a CO2 oven at 37º C and 5% CO2; The culture medium was changed in 24h and 7 days, after this period it was changed every 72h, until the spontaneous migration of cells to the surface; when 80% confluence was reached. The cells were used in the third passage, where they were trypsinized, resuspended, and the number of cells was counted for plating in 96 wells. 24 hours after plating, the differentiation inducers were inserted, and the cells belonging to the LBP groups were irradiated. The proliferation curve was performed by the MTT assay. Solution containing 0.5 mg MTT per mL of medium was added, after incubation at 37 °C for 4 h protected from light, DMSO will be added to the cells. The absorbance was read by spectrophotometer at 562 nm at 24, 48 and 72 h to establish cell proliferation curve. The proliferation of MSCs was higher in cells submitted to the regular medium and LBP showed a positive effect on the proliferation of MSCs associated with the osteogenic medium. Este trabajo tiene como objetivo evaluar el efecto del láser de baja potencia en la longitud de onda roja de 660nm en la proliferación osteogénica de las células madre mesenquimales del cordón umbilical humano. Se realizó el procesamiento del cordón, que consistió en la sección del cordón en fragmentos; el lavado con la solución; la separación y el descarte de los vasos estromales; la sección de la gelatina restante y la colocación en frascos de cultivo con medio DMEM suplementado con 15% de SFB, 20% de Ham F-12 Gibco® y antibióticos y mantenido en una estufa de CO2 a 37º C y 5% de CO2; El medio de cultivo se cambió a las 24h y a los 7 días, después de este periodo se cambió cada 72h hasta la migración espontánea de las células a la superficie; cuando se alcanzó el 80% de confluencia. Las células se utilizaron en el tercer pasaje, en el que se tripsinizaron, se resuspendieron y se contó el número de células para su colocación en 96 pocillos. 24 horas después de la colocación, se introdujeron los inductores de diferenciación y se irradiaron las células pertenecientes a los grupos LBP. La curva de proliferación se realizó mediante el ensayo MTT. Se añadió una solución que contenía 0,5 mg de MTT por mL de medio, tras incubar a 37 °C durante 4 h protegido de la luz, se añadirá DMSO a las células. La absorbancia se leyó en el espectrofotómetro a 562 nm a las 24, 48 y 72 h para establecer la curva de proliferación celular. La proliferación de las MSC fue mayor en las células sometidas al medio regular y el LBP mostró un efecto positivo en la proliferación de las MSC asociadas al medio osteogénico. Este trabalho tem como objetivo avaliar o efeito do Laser de Baixa Potência no comprimento de onda vermelho de 660nm na proliferação osteogênica das células-tronco mesenquimais do cordão umbilical humano. Foi realizado o processamento do cordão, que consiste na secção do cordão em fragmentos; lavagem com a solução; separação e descarte dos vasos do estroma; secção da geleia remanescente e colocação em garrafas de cultura com Meio DMEM suplementado com 15% de SFB, 20% de Ham F-12 Gibco® e antibióticos e mantidas em estufa de CO2 a 37º C e 5% de CO2; o meio de cultura foi trocado em 24h e 7 dias, após esse período ficou sendo trocado a cada 72h, até a migração espontânea das células para a superfície; ao atingir a confluência de 80%. As células foram utilizadas na terceira passagem, onde foram tripsinizadas, ressuspendidas e realizado a contagem do número de células para plaqueamento em 96 poços. 24 horas após o plaqueamento foram inseridos os indutores de diferenciação; e as células pertencentes aos grupos de LBP foram irradiadas. A curva de proliferação foi realizada pelo ensaio de MTT. Foi adicionado solução contendo 0,5 mg MTT por mL de meio, após incubação a 37 ° C por 4 h protegido da luz, o DMSO será adicionado às células. A absorbância foi lida através do espectrofotômetro a 562 nm com 24, 48 e 72 horas para estabelecer curva de proliferação das células. A proliferação das CTMs foi maior nas células submetidas ao meio regular e o LBP apresentou efeito positivo na proliferação das CTMs associadas ao meio osteogênico.

El objetivo principal de este estudio fue evaluar la inmunoexpresión de la Fosfohistona H3 (PHH3) en el carcinoma oral de células escamosas, a través de la correlación con la inmunoexpresión de Ki-67, el índice de actividad mitótica (IAM), la graduación histológica de la OMS, parámetros clínico-morfológicos y la tasa de sobrevida. La muestra de estudio estuvo constituida por 62 casos de carcinoma oral de células escamosas diagnosticados en el Laboratorio de Anatomía Patológica de la Facultad de Odontología de la UdelaR. En cada uno de ellos se realizó técnica de inmunohistoquímica para los anticuerpos Ki-67 y PHH3 (serina 10). Se utilizó el software Image J para el índice de actividad mitótica y la cuantificación de los biomarcadores, definiendo el porcentaje de positividad y de figuras mitóticas cada 1000 células tumorales. Con el fin de comparar la expresión de PHH3, Ki-67 y el IAM con los parámetros clínico-morfológicos se utilizó t de Student y ANOVA, mientras que para indagar sobre el grado de relación lineal entre ellos se empleó el coeficiente de correlación lineal de Pearson. El análisis de sobrevida se realizó a través de curvas de sobrevida de Kaplan y Meier y para la comparación de las mismas se utilizó el modelo de Cox. Los resultados mostraron una correlación significativa entre la expresión de la PHH3 (p 0,016) y el IAM (p 0,031) con el tiempo de sobrevida. Sin embargo, no se encontró una relación similar con el Ki-67 (p 0,295). Si bien pudimos constatar una asociación estadística entre el grado histológico y la inmunoexpresión de Ki-67 (p 0,004), la PHH3 no mostró una relación similar (p 0,564). Destacamos que no encontramos estudio previo que haya analizado en carcinoma oral de células escamosas la relación entre PPH3 y tiempo de sobrevida. En base a los resultados obtenidos, consideramos importante continuar investigando este tópico, con un protocolo de inmunohistoquímica estandarizado y en una gran cohorte de casos. También sería interesante correlacionar su expresión con el estadio TNM y parámetros histológicos adicionales como la graduación del frente de invasión tumoral (FIT), la gemación tumoral y la profundidad de invasión Capítulo 1 | Introducción - 1.1. Justificación y planteamiento del problema de investigación - 1.2. Objetivos Objetivo general -Objetivos específicos - 1.3. Metodología - 1.3.1. Análisis estadístico - 1.4. Principales resultados obtenidos - Capítulo 2 | Estado de la cuestión: consideraciones teóricas y antecedentes - 2.1. La pérdida del control de la proliferación celular: un evento clave en el desarrollo de las neoplasias malignas 2.1.1. Ciclo celular - 2.2. Carcinoma oral de células escamosas - 2.2.1. Etiología, epidemiología y características clínico-patológicas del carcinoma oral de células escamosas. - 2.2.2. Graduación histopatológica del carcinoma oral de células escamosas. - 2.2.3. Frente de invasión tumoral - 2.3. Métodos de evaluación del grado de proliferación celular- 2.3.1. Ki-67 - 2 .3.2. Índice de actividad mitótica - Mitosis: figuras mitóticas normales y atípicas - 2.3.3. Fosfohistona H3 - Capítulo 3 | Metodología - 3.1. Consideraciones éticas -3.2. Diseño del estudio -Tabla de contenido - 3.3. Obtención de la muestra - 3.3.1. Criterios de inclusión - 3.3.2. Criterios de exclusión 3.4. Operacionalización de las variables - 3.5. Revisión histológica y calibración -3.6 . Índice de actividad mitótica 3.7. Procesamiento Inmunohistoquímico - 3.8. Evaluación Inmunohistoquímica- 3.8.1. Ki-67 -3.8.2. PHH3 - 3.9. Análisis estadístico -3.9.1. Determinación del tamaño muestral - 3.9.2. Calibración -3.10. Financiación - 3.11. Declaración de conflicto de intereses - Capítulo 4 | Resultados -4.1. Análisis descriptivo de las variables clínico-patológicas del carcinoma oral de células escamosas - 4.2. Asociación entre las características clínico-patológicas y los biomarcadores Ki-67 y PHH3 - 4.3. Patrones de expresión de Ki-67 y PHH3 - 4.4. Análisis de sobrevida - Capítulo 5 | Discusión - 5.1. Limitaciones del estudio - Capítulo 6 | Consideraciones finales -Referencias bibliográficas- Anexos -Anexo 1 | Aprobación del Comité de Ética - Apéndices - Apéndice 1 | Planilla electrónica

Objective: The role of diffusion-weighted MRI in differential diagnostics and predicting the survival of patients with spine metastases was studied. Methods: The study included data from MRI and morphological studies of 23 patients with spine metastases. Results: The values obtained for the apparent diffusion coefficient (ADC) of tumors were compared with their histological type, cell density and Ki-67 proliferation index. The effect of ADC values on overall patient survival was also assessed. A reliable inverse correlation was established between ADC values and Ki-67 proliferation index for various types of spine metastases (r=-0.753, p=0.017). The dependence of ADC values and overall survival of patients with metastases in the spine is shown. Conclusion: The technique of diffusion-weighted MRI can be used as part of a comprehensive assessment in the preoperative planning of surgical treatment, and as a prognostic factor of overall survival for this group of patients. Level of Evidence II. Prognostic retrospective study, RESUMO Objetivos: O papel da RM ponderada por difusão nos diagnósticos diferenciais e na previsão da sobrevida dos pacientes com metástases da coluna vertebral foram analisados. Métodos: O estudo incluiu dados da RM e estudos morfológicos de 23 pacientes com metástases da coluna vertebral. Resultados: Os valores obtidos para o coeficiente de difusão aparente (ADC) dos tumores foram comparados com seu tipo histológico, densidade celular e índice de proliferação Ki-67. Além disso, avaliou-se o efeito dos valores de ADC na sobrevida global dos pacientes. Foi estabelecida uma correlação inversa confiável entre os valores de ADC e o índice de proliferação Ki-67 para diversos tipos de metástases da coluna vertebral (r =-0,753, p=0,017). A dependência dos valores de ADC e a sobrevida global dos pacientes com metástases na coluna vertebral é demostrada. Conclusão: A técnica da RM ponderada por difusão pode ser utilizada como parte de uma avaliação abrangente do planejamento pré-operatório do tratamento cirúrgico e como fator prognóstico da sobrevida global para esse grupo de pacientes. Nível de Evidência II. Estudo retrospectivo prognóstico. RESUMEN Objetivos: Fueron analizados el papel de la RM ponderada por difusión en los diagnósticos diferenciales y en la previsión de la sobrevida de los pacientes con metástasis de la columna vertebral. Métodos: El estudio incluyó datos de RM y estudios morfológicos de 23 pacientes con metástasis de la columna vertebral. Resultados: Los valores obtenidos para el coeficiente de difusión aparente (ADC) de los tumores se compararon con su tipo histológico, densidad celular e índice de proliferación Ki-67. Además, se evaluó el efecto de los valores de ADC en la sobrevida global de los pacientes. Se estableció una correlación inversa confiable entre los valores de ADC y el índice de proliferación Ki-67 para diversos tipos de metástasis de la columna vertebral (r =-0,753, p=0,017). Es demostrada la dependencia de los valores de ADC y la sobrevida global de los pacientes con metástasis en la columna vertebral. Conclusión: La técnica de RM ponderada por difusión puede utilizarse como parte de una evaluación integral de la planificación preoperatoria del tratamiento quirúrgico y como un factor pronóstico de la sobrevida global para este grupo de pacientes. Nivel de Evidencia II. Estudio retrospectivo pronóstico.

O desenvolvimento de tecnologias a base de concentrado de plaquetas obtidos por meio de centrifugação e métodos de manipulação a partir de uma amostra de sangue tem a finalidade de otimizar a cicatrização tecidual e promover a regeneração de tecidos. Objetivo: foi abordar considerações a respeito dos concentrados plaquetários autólogos e sua aplicabilidade na Odontologia. Metodologia: realizou-se análise retrospectiva da literatura do período de 2001 a 2022 focando a evolução e uso dos hemoconcentrados autólogos. Foram usados como termos de busca: plasma rico em plaquetas, plasma rico em fibrina, hemoconcentrados autólogos, regeneração e cicatrização tecidual. A busca na literatura se deu por meio de pesquisa nas bases de dados PubMed, Google Scholar, SciELO e banco de dados da BVS. Revisão Bibliográfica: o plasma rico em plaquetas (PRP) foi a primeira geração de derivados de amostras de sangue humano, utilizados com este propósito. Dependendo da técnica para a preparação dos concentrados plaquetários, eles são divididos em quatro categorias, de acordo com seu conteúdo de leucócitos e fibrina. Conclusão: Os agregados plaquetários podem induzir a ativação de fibroblastos e a formação de depósitos de colágeno, além de plaquetas e fatores de crescimento usados na reparação tecidual. Assim otimizam os resultados de tratamentos na odontologia, como preenchimento cutâneo, tratamento de cicatrizes de acne, implantes dentais e cirurgias dento alveolares. The development of technologies based on platelet concentrate obtained through centrifugation and manipulation methods from a blood sample aims to optimize tissue healing and promote tissue regeneration. Objective: to address considerations about autologous platelet concentrates and their applicability in Dentistry. Methodology: a retrospective analysis of the literature from 2001 to 2022 was carried out, focusing on the evolution and use of autologous blood concentrates. The following search terms were used: platelet-rich plasma, fibrin-rich plasma, autologous hemoconcentrates, tissue regeneration and healing. The literature search was carried out through a search in PubMed, Google Scholar, SciELO and BVL databases. Bibliographic Review: Platelet-rich plasma (PRP) was the first generation of derivatives from human blood samples, used for this purpose. Depending on the technique for preparing platelet concentrates, they are divided into four categories according to their leukocyte and fibrin content. Conclusion: Platelet aggregates can induce the activation of fibroblasts and the formation of collagen deposits, in addition to platelets and growth factors used in tissue repair. Thus, they optimize the results of treatments in dentistry, such as skin filling, treatment of acne scars, dental implants and dentoalveolar surgeries. El desarrollo de tecnologías basadas en concentrado de plaquetas obtenido mediante métodos de centrifugación y manipulación a partir de una muestra de sangre tiene como objetivo optimizar la cicatrización de los tejidos y favorecer la regeneración tisular. Objetivo: abordar las consideraciones sobre los concentrados plaquetarios autólogos y su aplicabilidad en Odontología. Metodología: se realizó un análisis retrospectivo de la literatura desde 2001 hasta 2022, centrándose en la evolución y uso de concentrados de sangre autóloga. Se utilizaron los siguientes términos de búsqueda: plasma rico en plaquetas, plasma rico en fibrina, hemoconcentrados autólogos, regeneración tisular y cicatrización. La búsqueda bibliográfica se realizó a través de una búsqueda en las bases de datos PubMed, Google Scholar, SciELO y BVS. Reseña bibliográfica: El plasma rico en plaquetas (PRP) fue la primera generación de derivados de muestras de sangre humana, utilizados para este fin. Según la técnica de preparación de los concentrados de plaquetas, se dividen en cuatro categorías según su contenido en leucocitos y fibrina. Conclusión: Los agregados plaquetarios pueden inducir la activación de fibroblastos y la formación de depósitos de colágeno, además de plaquetas y factores de crecimiento utilizados en la reparación tisular. Así, optimizan los resultados de tratamientos en odontología, como rellenos cutáneos, tratamiento de cicatrices de acné, implantes dentales y cirugías dentoalveolares.

Simple Summary The treatment of oral squamous cell carcinoma (OSCC) represents a significant problem worldwide. Among cancers with the highest incidence, OSCC renders one of the worst prognoses. Therefore, novel prognostic biomarkers and therapeutic tools to tackle OSCC are urgently needed. Somatostatin-analogues (SSA) are an invaluable therapeutic option in the treatment of several cancers. We aimed to determine the expression levels of all somatostatin-receptors (SSTs) in OSCC, compared to adjacent healthy control tissues, to analyze the relationship of SSTs expression with key clinical and histopathological data, and to explore the direct in vitro effect of different SSAs on OSCC cancer cells. Our findings highlight a potential role of SST2 as a good prognostic biomarker for recurrence and metastasis in OSCC and unveil that SSA exerts antitumoral effects on OSCC cells, providing a relevant clinical conclusion, which should be soon tested for their use in humans. Abstract Oral squamous cell carcinoma (OSCC) incidence has increased by 50% over the last decade. Unfortunately, surgery and adjuvant radiotherapy and chemotherapy are still the mainstream modality of treatment, underscoring the need for alternative therapies. Somatostatin-analogues (SSA) are efficacious and safe treatments for a variety of tumors, but the presence of somatostatin-receptors (SSTs) and pharmacological effects of SSA on OSCC are poorly known. In this study, we demonstrated that SST2 and SST3 levels were significantly higher in OSCC, compared to adjacent healthy control tissues. SST2 expression was associated with less regional metastasis and a lower recurrence rate. Moreover, SST2 was elevated in OSCC and associated with histopathological good prognosis factors, such as high peritumoral inflammation, smaller depth of invasion, and expansive vs. infiltrative front of tumor invasion. Importantly, treatment with different SSA (octreotide, lanreotide, and pasireotide) significantly reduced cell-proliferation in OSCC primary cell cultures. Altogether, this study demonstrated that SST2 is overexpressed in OSCC vs. healthy tissues and could represent a novel prognostic biomarker, since its expression is associated with tumors that show better prognostic factors and less recurrent rate. Moreover, our data unveil clear antitumoral effects of SSAs on OSCC, opening new avenues to explore their potential as targeting therapy to OSCC.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2021 RESUMEN La placenta es un órgano temporal clave durante el embarazo ya que ejerce la conexión entre la madre y el feto por lo que su correcta formación y funcionamiento es fundamental para el bienestar fetal y el progreso del embarazo. El desarrollo temprano de la placenta humana se considera, en algunos aspectos, similar a la carcinogénesis. Ambos se desarrollan en un ambiente con bajos niveles de oxígeno, su desarrollo es modulado por el sistema inmunológico, la expresión de protooncogenes, microARNs y genes supresores tumorales. Además, las células placentales y tumorales tienen una alta capacidad para proliferar, fusionarse, migrar e invadir. La principal diferencia entre la progresión del cáncer y el desarrollo de la placenta es que, en esta última, estos procesos están estrictamente regulados. La desregulación de algunos de estos procesos se asocia con complicaciones del embarazo como preeclampsia, retardo del crecimiento intrauterino, placentas cretas, entre otras. Durante el desarrollo placentario las células progenitoras de la placenta, los citotrofoblastos (CTB), proliferan rápidamente y comienzan a diferenciarse, algunas para dar origen por fusión celular al sinciciotrofoblasto (STB) multinucleado y algunas hacia el trofoblasto extravelloso migratorio y altamente invasivo que permite anclar la placenta al útero materno. KLF6 es un factor de transcripción ubicuo con un dominio de transactivación ácido N-terminal y un dominio de unión al ADN tipo dedos de zinc C-terminal. KLF6 es altamente expresado en la placenta. Los ratones Klf6-/- mueren en el día embrionario 12,5 mostrando deterioro del desarrollo de la placenta. Previamente, se demostró que KLF6 es necesario para la fusión célula-célula en cultivos primarios de citotrofoblastos vellosos (CTBv), así como en la línea celular BeWo derivada de trofoblasto y modula la expresión de la proteína inhibidora del ciclo celular p21, de sincitina-1 (Syn-1) y de la subunidad β de la gonadotrofina coriónica humana (β-hCG). Además, la inmunoreactividad de KLF6 es mayor en el lecho placentario de las placentas provenientes de embarazos con preeclampsia que en las de los embarazos sin complicaciones. Sin embargo, se desconoce el mecanismo por el cual KLF6 regula la diferenciación del CTBv y no existen reportes sobre el rol de KLF6 en el proceso de migración e invasión de los citotrofoblastos extravellosos (CTBev). En contextos tumorales, KLF6 actúa como un gen supresor de tumores. De hecho, la disminución en los niveles de KLF6 aumenta la tumorigenicidad y la metástasis en numerosos tipos de cáncer. No obstante, también se ha informado el efecto contrario en células normales y cancerosas. En esta tesis se estudió el mecanismo por el cual KLF6 participa en la diferenciación de los CTBv los cuales fusionan para formar el STB. Se demostró que KLF6 es suficiente para desencadenar la fusión de células BeWo. Además, KLF6 incrementó la expresión de moléculas importantes involucradas en este proceso, entre ellas β-hCG, Syn-1 y p21, y disminuyó la proliferación celular. Mientras que, una mutante de KLF6 que carece del dominio ácido, implicado en la actividad transcripcional (KLF6Δac), disminuyó la sincicialización in vitro de cultivos primarios de CTBv, así como, la expresión de Syn-1 y β-hCG. Además, la fusión celular desencadenada por KLF6 se redujo en células silenciadas para p21. Estos resultados sugieren que KLF6 induce la sincicialización de CTBv a través de un mecanismo que involucra su dominio regulador de la transcripción de una manera dependiente de p21. Por otro lado, se demostró que KLF6 está involucrado en la diferenciación del CTBev. La disminución en la expresión de KLF6 o la sobreexpresión de la mutante carente del dominio acídico (KLF6Δac) incrementó la migración, la actividad de la metaloproteinasa 9 y la expresión de moléculas importantes involucradas en la migración y la transición epitelio-mesenquimal (EMT), como β-catenina, conexina-43, integrinas α5 y β1. Además, provocó cambios morfológicos compatibles con la EMT confirmados por estudios de microscopía de fuerza atómica y Raman. En línea con los datos obtenidos in vitro, se demostró que placentas cretas, caracterizadas por ser anormalmente invasivas, poseen niveles de inmunomarcación para KLF6 más bajos con mayor localización citoplasmática en comparación con placentas normales. Los resultados obtenidos en esta tesis sugieren que KLF6 es un regulador maestro de la diferenciación celular en la vía sincicial y que su dominio de transactivación N-terminal es necesario para esta función. Mientras que, en la diferenciación de los CTBev, KLF6 actúa regulando negativamente la migración a través de la modulación de la expresión de moléculas importantes involucradas en este proceso. En resumen, los resultados actuales permiten proponer a KLF6 como un regulador clave de la diferenciación del trofoblasto a través de la vía vellosa y extravellosa, y sugieren que la desregulación en su nivel de expresión o la pérdida de su actividad transcripcional contribuiría al desarrollo de patologías como preeclampsia y placentas cretas. ABSTRACT The placenta is a key temporary organ during pregnancy. It establishes critical relationships between the mother and the fetus, so its correct formation and functioning is essential for fetal well-being and the outcome of the pregnancy. Early human placental development resembles carcinogenesis in otherwise healthy tissues. The placental and tumor development share numerous features. Both take place in an environment with low levels of oxygen, their development is modulated by the immune system and the expression of protooncogenes, microRNAs and tumor suppressor genes. Furthermore, placental and tumor cells have a high capacity to proliferate, fuse, migrate and invade. The main difference between cancer progression and placenta development is the tight regulation of these processes in the placenta. However, the dysregulation of these processes is associated with pregnancy complications such as preeclampsia, intrauterine growth restriction and placentas cretas, among others. During development, placental progenitor cells, the cytotrophoblasts (CTB), rapidly proliferate and begin to differentiate, some towards the villous pathway to form the multinucleated syncytiotrophoblast (STB) by cell-cell fusion and some towards the highly invasive and migratory extravillous trophoblasts (EVT) that anchor the placenta to the uterus. KLF6 is a ubiquitous transcription factor with an N-terminal acidic transactivation domain and a C‐terminal zinc finger DNA-binding domain. KLF6 is highly expressed in placenta. Klf6-/- mice die at day E12.5 showing impaired placenta development. Previously, it was demonstrated that KLF6 is required for cell–cell fusion in primary culture of human villous cytotrophoblasts (vCTB) isolated from term placenta, as well as in the BeWo trophoblast-derived cell line and it modulates the expression of the cell cycle inhibitory protein p21, syncytin-1 (Syn-1), and the β subunit of the human chorionic gonadotropin (β-hCG). Additionally, KLF6 immunoreactivity is higher in the placental bed of preeclamptic pregnancies than in those of uncomplicated pregnancies. However, the mechanism by which KLF6 regulates CTBv differentiation is unknown and there are no reports about the role of KLF6 in the process of migration and invasion of the EVT. In cancer, KLF6 acts mainly as a tumor suppressor gene. Indeed, KLF6 knockdown increases the tumorigenicity and metastasis in numerous types of cancer. Nevertheless, the opposite effect has been also reported in normal and cancer cells. In this thesis, the mechanism by which KLF6 participates in CTB differentiation through the villous and extravillous pathways was explored. It was demonstrated that KLF6 is sufficient to trigger cell fusion and to increase the expression of important molecules involved in this process, such as β-hCG, Syn-1 and p21, in addition, it downregulates cell proliferation. Furthermore, a KLF6 mutant lacking the acidic domain involved in its transcriptional activity (KLF6Δac) impaired the in vitro syncytialization of villous trophoblast cells isolated from human term placentas and decreased Syn-1 and β-hCG expression. Moreover, cell fusion triggered by KLF6 was reduced in cells silenced for p21. These results suggest that KLF6 induces vCTB syncytialization through a mechanism that involves its regulatory transcriptional domain in a p21-dependent manner. Additionally, the KLF6 involvement in EVT differentiation was established. The decrease in KLF6 expression or the overexpression of the transcriptionally inactive mutant (KLF6Δac) increase cell migration, metalloproteinase 9 activity, and the expression of molecules involved in migration and epithelial mesenchymal transition (EMT) such as β-catenin, connexin-43, integrin α5 and β1. In addition, it causes morphological changes consistent with EMT, confirmed by atomic force microscopy and Raman studies. In line with the data obtained in vitro, it was shown that placentas cretas, characterized by being abnormally invasive, have lower KLF6 immunostaining levels and more cytoplasmic localization compared to normal placentas. The results obtained in this thesis suggest that KLF6 is a master regulator of cell differentiation into the syncytial pathway and that its N-terminal transactivation domain is required for this function. While in EVT differentiation, KLF6 negatively regulates migration by modulating the expression of important molecules involved in this process. In summary, current results allow proposing KLF6 as a key regulator of trophoblast differentiation through the villous and extravillous pathways and suggest that dysregulation in its expression level or the loss of its transcriptional activity may contribute to the development of pregnancy pathologies like preeclampsia and placentas cretas. 2023-07-31 Fil: Panzetta de Dutari, Graciela María Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Panzetta de Dutari, Graciela María del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Miranda, Andrea Lis. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Fil: Caputto, Beatriz Leonor. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Caputto, Beatriz Leonor. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Fil: Vivas, Laura Marta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra; Argentina. Fil: Varone, Cecilia L. Universidad Nacional de Buenos Aires; Argentina. Fil: Varone, Cecilia L. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Introduction: Appendix neoplasms are rare and identified in about 1% of all appendectomies, with the most common etiologies being first of epithelial origin and second, neuroendocrine. Neuroendocrine tumors are derived from enterochromaffin cells, producing the granules Chromogranin A and Synaptophysin and are the second most common histological type of appendix neoplasm, often found incidentally after appendectomy due to their indolent presentation, but are sometimes the causes of acute appendicitis. Objective: To report the experience of a patient diagnosed with neuroendocrine tumor of the appendix after acute perforated appendicitis who had previously presented abdominal vessel thrombosis. Case report: Male patient, 28 years old, with abdominal pain in mesogastrium and epigastrium for 2 months, being initially diagnosed with intra-abdominal thrombosis. Hospitalized presenting a diffuse abdominal pain, more prominent in the right iliac fossa with painful decompression, submitted to exploratory laparoscopy and evidenced grade 4 appendicitis. Histopathological analysis revealed a differentiated neuroendocrine tumor in appendage G1 with a size of 2 mm, mitotic index with less than 2 mitoses, pT1 pNx pathological staging, free margins, lymphovascular and perineural invasion. Immunohistochemistry with cell proliferation index (Ki-67) of 1% and identification of the components Chromogranin A polyclonal clone and Synaptophysin clone DARKSYNAP positive. Conclusion: We report a case of a patient with Neuroendocrine Tumor of the appendix with initial presentation as acute appendicitis and, to the pathology, limited to the appendix without lymphovascular invasion, with total appendectomy as a curative procedure. Las neoplasias del apéndice son raras y se identifican en aproximadamente el 1% de todas las apendicectomías, siendo las etiologías más comunes la primera de origen epitelial y la segunda, la neuroendocrina. Los tumores neuroendocrinos se derivan de células enterocromafines, que producen gránulos de cromogranina A y sinaptofisina y son el segundo tipo histológico más común de neoplasia de apéndice, que a menudo se encuentra de manera incidental después de la apendicectomía debido a su presentación indolente, pero a veces son la causa de apendicitis aguda. Objetivo: Informar la experiencia de un paciente diagnosticado de tumor neuroendocrino de apéndice tras apendicitis aguda perforada que previamente había presentado trombosis de vasos abdominales. Caso clínico: Paciente de sexo masculino, 28 años, de 2 meses con dolor abdominal en mesogastrio y epigastrio, siendo diagnosticado inicialmente de trombosis intraabdominal. En esta internación presentaba dolor abdominal difuso más prominente en fosa ilíaca derecha con descompresión dolorosa, sometido a videolaparoscopia exploradora y evidenciaba apendicitis grado 4. El análisis histopatológico mostró un tumor neuroendocrino en un apéndice G1 bien diferenciado con un tamaño de 2mm en la eje mayor, índice mitótico con menos de 2 mitosis, estadificación patológica pT1 pNx, márgenes libres, invasión linfovascular y perineural. Inmunohistoquímica con índice de proliferación celular (Ki-67) del 1% e identificación de los componentes Clon policlonal Cromogranina A y clon Sinaptofisina DARKSYNAP positivo. Conclusión: Presentamos el caso de un paciente con Tumor neuroendocrino de apéndice con presentación inicial como apendicitis aguda y, en patología, limitado al apéndice sin invasión linfovascular y sometido a apendicectomía total como procedimiento curativo. Introdução: As Neoplasias de apêndice são raras e identificadas em cerca de 1% de todas as apendicectomias, sendo as etiologias mais comuns em primeiro de origem epitelial e em segundo, os neuroendócrinos. Os tumores neuroendócrinos são derivados das células enterocromafins, produzindo os grânulos Cromogranina A e Sinaptofisina e são o segundo tipo histológico mais comum de neoplasia em apêndice, muitas vezes, encontrados incidentalmente após apendicectomia devido sua apresentação indolente, mas, por vezes, são os causadores da apendicite aguda. Objetivo: Relatar a experiência sobre o caso de um paciente diagnosticado com tumor neuroendócrino de apêndice após apendicite aguda perfurada que havia apresentado, anteriormente, tromboses de vasos abdominais. Relato de caso: Paciente do sexo masculino, 28 anos, há 2 meses com dor abdominal em mesogástrio e epigástrio, sendo diagnosticado inicialmente com trombose intra-abdominal. Neste internamento, apresentou dor abdominal difusa mais proeminente em fossa ilíaca direita com descompressão dolorosa, submetido à videolaparoscopia exploradora e evidenciado apendicite grau 4. À análise histopatológica evidenciado tumor neuroendócrino em apêndice bem diferenciado G1 com tamanho de 2mm em maior eixo, índice mitótico com menos de 2 mitoses, estadiamento patológico pT1 pNx, margens livres, invasão linfovascular e perineural. Imuno-histoquímico com índice de proliferação celular (Ki-67) de 1% e identificação dos componentes Cromogranina A clone policlonal e Sinaptofisina clone DARKSYNAP positivo. Conclusão: Relatamos um caso de um paciente com Tumor Neuroendócrino de apêndice com apresentação inicial como apendicite aguda e, à patologia, limitada ao apêndice sem invasão linfovascular e teve a apendicectomia total como procedimento curativo.