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SUMMARY AIM The aim of this study was to examine the roles of nitric oxide (NOx), endothelial nitric oxide synthetase (eNOS), and asymmetric dimethylarginine (ADMA), which is the major endogenous inhibitor of nitric oxide synthases (NOS), in the pathophysiology of hemorrhoidal disease. METHODS This study included 54 patients with grades 3 and 4 internal hemorrhoidal disease and 54 patients without the disease who attended the General Surgery Clinic. NOx, eNOS, and ADMA levels were measured with the Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA) method. RESULTS The patients had higher NO and eNOS levels and lower ADMA levels than the control subjects (p

O óxido nítrico (NO) é um radical livre, gasoso e incolor, que durante muitos anos foi conhecido apenas pela sua capacidade de contaminação ambiental e pelo potencial caráter carcinogênico. Após a descoberta de sua síntese pelo próprio organismo nas células endoteliais, as concepções a seu respeito mudaram radicalmente e atualmente, sabe-se que o NO é protagonista em diversos processos essenciais para o corpo humano, tais como vasodilatação, neurotransmissão e processos inflamatórios. Sua possível capacidade de promover a morte de células cancerígenas também tem sido bastante investigada. Com relação à sua estrutura química, a presença de um elétron desemparelhado confere alta reatividade, sobretudo com alguns metais de transição, possibilitando a formação de compostos de coordenação altamente estáveis quimicamente e que podem ser utilizados para controlar os níveis de NO no organismo humano. Nesse contexto, o objetivo desse trabalho é fazer uma revisão de literatura sobre os principais aspectos históricos envolvendo o óxido nítrico, bem como discutir um pouco da estrutura química e das aplicações biológicas dessa importante molécula. Fica evidenciado que em função da versatilidade química, o NO e os compostos liberadores ou sequestradores de NO apresentam promissoras aplicações no meio biológico, justificando os diversos estudos que têm sido realizados nos últimos 40 anos.

BACKGROUND AND OBJECTIVES The literature suggests that the enzyme nitric oxide synthase (NOS) plays an important role in both periodontal disease (PD) and orofacial pain (OP), although few studies associate these two conditions simultaneously. The objective of this study was to evaluate the expression of the NOS enzyme in PD and OP, in comparison to those patients who did not present PD and/or OP. CONTENTS Seven electronic databases (Pubmed, Web of science, Scopus, Cochrane Library, BBO, LILACS, Clinical trial) were used to identify the potentially relevant studies published until April 2021. The research resulted in 1,960 studies, of which 11 were selected to be critically evaluated. Two independent reviewers selected titles and abstracts using the criteria defined in the PECO question (Population, Exposure, Comparison, Outcome). The methodological evaluation of the selected studies was carried out according to the Effective Public Health Practice Project (EPHPP). CONCLUSION: Scientific evidence demonstrated that NOS may play a key role in the pathogenesis of PD and OP, since its expression is increased in patients with these conditions. However, genetic studies on endothelial nitric oxide synthase (eNOS) gene mutations in patients with migraine and cluster headache did not indicate the expected susceptibility to pain. In addition, studies on the association of NOS expression in PD and OP, occurring simultaneously, are scarce. This review may support future research on NOS in two very common correlated diseases such as PD and OP. RESUMO JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS A literatura sugere que a enzima óxido nítrico sintase (NOS) desempenha um papel importante tanto na doença periodontal (DP) quanto na dor orofacial (DOF), embora poucos estudos associem estas duas condições simultaneamente. O objetivo deste estudo foi analisar a expressão da NOS em pacientes com DP e DOF em comparação a controles sem estas condições. CONTEÚDO Foram consultadas as bases de dados eletrônicas (Pubmed, Web of Science, Scopus, Cochrane Library, BBO, Lilacs e Clinical Trial) para identificar os estudos potencialmente relevantes publicados até abril de 2021. As pesquisas resultaram em 1.960 estudos, dos quais 11 foram selecionados para serem avaliados criticamente. Os critérios definidos na questão PECO (População, Exposição, Comparação e Desfecho) foram usados para selecionar títulos e resumos por dois revisores independentes. A avaliação metodológica dos estudos selecionados foi realizada de acordo com a ferramenta Effective Public Health Practice Project (EPHPP). CONCLUSÃO As evidências científicas demonstraram que a NOS desempenha um importante papel na patogênese da DP e da DOF, já que sua expressão está aumentada em pacientes com estas condições. Porém, estudos genéticos sobre mutações dos genes do óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) em pacientes com migrânea e cefaleia em salvas não evidenciaram a esperada suscetibilidade a dor. Além disso, estudos sobre a associação da expressão da NOS na DP e na DOF, ocorrendo simultaneamente, são escassos. Este estudo pode subsidiar futuras pesquisas sobre NOS na correlação de duas doenças muito frequentes como a DP e a DOF.

Nitric oxide (NO) is an important mediator molecule in inflammatory processes, but its role in the pathophysiology of malaria is still uncertain. To investigate the NO synthesis inhibition on the oxidative changes induced by Plasmodium berghei infection in mice, malaria was induced in 150 animals, of which 75 animals were treated with the NO inhibitor L-NAME; the remaining animals were sham controls. All animals underwent euthanasia 1, 5, 10, 15, or 20 days after infection for the collection of lungs, brain, and blood. Parasitemia was determined, and the survival of the animals was evaluated. Tissue samples were assayed for nitrites and nitrates (NN), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), and total Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC). A histopathological study was performed. Mortality rates in the L-NAME group were always higher than those in the controls. In the brain, NN was lower in the L-NAME group. Parasitemia and its progression rate were greater in the control group. By the 5th day of infection, mice treated with L-NAME showed cerebral edema and interstitial pneumonia of greater intensity than controls. In conclusion, the anti-inflammatory and hemodynamic effects of NO surpass its pro-oxidant role in murine malaria. El óxido nítrico (NO) es una molécula mediadora importante en los procesos inflamatorios, pero su papel en la fisiopatología de la malaria sigue siendo incierto. Para investigar la inhibición de la síntesis de NO en los cambios oxidativos inducidos por la infección por Plasmodium berghei en ratones, la malaria se indujo en 150 animales, de los cuales 75 animales fueron tratados con el inhibidor de NO L-NAME; los animales restantes eran controles sham. Todos los animales se sometieron a eutanasia 1, 5, 10, 15 o 20 días después de la infección para la recolección de pulmones, cerebro y sangre. Se determinó la parasitemia, y se evaluó la supervivencia de los animales. Se ensayaron muestras de tejido para nitritos y nitratos (NN), sustancias reactivas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) y capacidad antioxidante total equivalente a Trolox (TEAC). Se realizó un estudio histopatológico. Las tasas de mortalidad en el grupo L-NAME siempre fueron más altas que las de los controles. En el cerebro, NN era más baja en el grupo L-NAME. Parasitemia y su tasa de progresión fueron mayores en el grupo de control. Para el 5o día de infección, los ratones tratados con L-NAME mostraron edema cerebral y neumonía intersticial de mayor intensidad que los controles. En conclusión, los efectos antiinflamatorios y hemodinámicos de NO superan su papel pro-oxidante en la malaria murina. O óxido nítrico (NO) é uma importante molécula mediadora em processos inflamatórios, mas seu papel na fisiopatologia da malária ainda é incerto. Para investigar a inibição da síntese NO sobre as alterações oxidativas induzidas pela infecção por Plasmodium berghei em camundongos, a malária foi induzida em 150 animais, dos quais 75 animais foram tratados com o inibidor de NO L-NAME; os demais animais eram controles sham. Todos os animais foram submetidos à eutanásia 1, 5, 10, 15 ou 20 dias após a infecção para coleta de pulmões, cérebro e sangue. A parasitemia foi determinada, e a sobrevivência dos animais foi avaliada. As amostras de tecido foram avaliadas para nitritos e nitratos (NN), substâncias reativas de ácido tiobarbitúrico (TBARS) e capacidade antioxidante equivalente trolox total (TEAC). Foi realizado um estudo histopatológico. As taxas de mortalidade no grupo L-NAME sempre foram maiores do que as dos controles. No cérebro, NN era menor no grupo L-NAME. A parasitemia e sua taxa de progressão foram maiores no grupo controle. No 5th dia de infecção, os camundongos tratados com L-NAME apresentaram edema cerebral e pneumonia intersticial de maior intensidade do que os controles. Em conclusão, os efeitos anti-inflamatórios e hemodinâmicos de NO superam seu papel pró-oxidante na malária murina.

Introduction: Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease characterized by hyperglycemia that leads to diabetic nephropathy (DN). We showed that P2X7, a purinergic receptor, was highly expressed in DM; however, when oxidative stress was controlled, renal NO recovered, and the activation of this receptor remained significantly reduced. The aim of this study was to assess the influence of NO on the P2X7 and apoptosis in mouse immortalized mesangial cells (MiMC) cultured in high glucose (HG) medium. Methods: MiMCs were cultured with DMEM and exposed to normal glucose (NG), mannitol (MA), or HG. Cell viability was assessed by an automated counter. Supernatants were collected for NO quantification, and proteins were extracted for analysis of NO synthases (iNOS and eNOS), caspase-3, and P2X7. Results: Cell viability remained above 90% in all groups. There was a significant increase in the proliferation of cells in HG compared to MA and NG. NO, iNOS, caspase-3, and P2X7 were significantly increased in HG compared to NG and MA, with no changes in eNOS. We observed that there was a strong and significant correlation between P2X7 and NO. Discussion: The main finding was that the production of NO by iNOS was positively correlated with the increase of P2X7 in MCs under HG conditions, showing that there is a common stimulus between them and that NO interacts with the P2X7 pathway, contributing to apoptosis in experimental DM. These findings could be relevant to studies of therapeutic targets for the prevention and/or treatment of hyperglycemia-induced kidney damage to delay DN progression. Resumo Introdução: Diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica caracterizada por hiperglicemia levando à nefropatia diabética (ND). Mostramos que P2X7, um receptor purinérgico, foi altamente expresso na DM; entretanto, quando o estresse oxidativo foi controlado, o NO renal recuperou-se, e a ativação deste receptor permaneceu significativamente reduzida. Este estudo objetivou avaliar a influência do NO no P2X7 e a apoptose em células mesangiais imortalizadas de camundongos (CMiC) cultivadas em meio de glicose elevada (GE). Métodos: CMiCs foram cultivadas em meio DMEM e expostas à glicose normal (GN), manitol (MA), ou GE. A viabilidade celular foi avaliada por contador automático. Sobrenadantes foram coletados para quantificação de NO, e foram extraídas proteínas para análise de NO sintases (iNOS e eNOS), caspase-3, e P2X7. Resultados: A viabilidade celular permaneceu acima de 90% em todos os grupos. Houve aumento significativo na proliferação de células na GE comparado com MA e GN. NO, iNOS, caspase-3 e P2X7 foram significativamente aumentados na GE comparados com GN e MA, sem alterações na eNOS. Observamos que houve correlação forte e significativa entre P2X7 e NO. Discussão: O principal achado foi que a produção de NO pela iNOS foi positivamente correlacionada com aumento de P2X7 em CMs sob condições de GE, mostrando que existe um estímulo comum entre eles e que o NO interage com a via do P2X7, contribuindo para apoptose na DM experimental. Estes achados podem ser relevantes para estudos de alvos terapêuticos para a prevenção e/ou tratamento de danos renais induzidos por hiperglicemia para retardar a progressão da ND.

O hipotálamo é uma região do diencéfalo responsável por diversos processos homeostáticos essenciais a vida. Na região mamilar do hipotálamo, a área pré-mamilar é caracterizada pela presença de dois núcleos, o pré-mamilar ventral (PMV) e o pré-mamilar dorsal (PMD). O PMV é muito importante para o circuito de controle de aspectos reprodutivos e agressivos, enquanto o PMD é muito importante para o circuito de controle de comportamentos defensivo e agonístico. Em roedores como rato e camundongo o PMV é um grupo compacto de neurônio, ele tem formato em gota na porção rostral e torna-se mais arredondado em direção caudal. Já o PMD está posicionado caudal e dorsalmente ao PMV e tem um formato retangular na sua porção rostral, enquanto tornar-se mais ovalado em sua porção caudal, quando o mesmo é sobreposto ao núcleo mamilar medial. Estudos funcionais apontam pra uma subdivisão do PMD em porção ventrolateral (PMDvl) tendo papel no comportamento de defesa contra predadores e a porção dorsomedial (PMDdm) tendo papel no comportamento de defesa contra coespecíficos (agonístico). Nosso estudo buscou avaliar a presença e a citoarquitetura desses núcleos no hipotálamo de mocó (Kerodon rupestris), um roedor endêmico do Nordeste do Brasil. Para isto, lançamos mão de coloração de Nissl e de imunoistoquímica para óxido nítrico sintase (NOS). Ambos os métodos mostraram que o PMV e o PMD de mocó têm morfologia e localização muito semelhantes as de rato. No entanto, o limite rostral do PMV de mocó aparece um pouco mais rostral que o descrito em outros roedores, onde o PMV aparece após a divisão do terceiro ventrículo. Além disso, a marcação para NOS mostrou o PMD subdividido em PMDdm e PMDvl, o que só foi relatado em ratos em estudos funcionais. Sendo assim, os núcleos pré-mamilares de mocó possuem características que os apontam como possíveis participantes de circuitos que controlam comportamentos reprodutivos, agressivos e defensivos, como definido em outros roedores. The hypothalamus is a part of the diencephalon responsible for many homeostatic proccess essential to life. Inside the mammillary area, the premammillary area is characterized by the presence of two nuclei, the ventral premammillary nucleus (PMV) and the dorsal premammillary nucleus (PMD). The PMV is very important to the circuits that control many reproductive and aggressive aspects, while the PMD is very important to the circuit that control defensive and agonistic behavior. In rodents, as rat and mouse, the PMV is a dropshaped compact group of neurons in a rostral level, but is rounded in a caudal level. The PMD is caudal and dorsal to the PMV and has a rectangular shape in a rostral level, being more rounded in a caudal level when the medial mammillary nucleus appears. Functional studies showed a subdivision in the PMD, with a ventrolateral part (PMDvl) involved with defensive behavior against predator, and the dorsomedial parte (PMDdm) involved with social agonistic behavior. The present work aimed to study the premammillary nuclei in the hypothalamus of the rock cavy (Kerodon rupestris), an endemic rodent of the Brazil’s Northeast. To do so, we used Nissl staining and immunohistochemistry against the nitric oxide synthase (NOS). Both methods of staining showed the presence of the PMV and PMD in the rock cavy’s hypothalamus with location and morphology very similar to the rat. However, the rostral level of the rock cavy’s PMV seems to be more rostral than what is seen in other rodents where the the PMV appears only after the division of the third ventricle. Besides that, the NOS staining showed the PMDdm and the PMDvl, what was reported before rat only by functional studies. We concluded that the premammillary nuclei in rock cavy have features that point them as participant in circuits that control behaviors as reproduction, aggression and defense.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O sistema nervoso entérico (SNE) é constituído por uma rede de milhões de neurônios interconectados que são responsáveis pela inervação autônoma de todo trato gastrintestinal. O advento de novas técnicas laboratoriais, como a imuno-histoquímica com microscopia confocal possibilitou a identificação e caracterização de vários componentes do SNE que antes eram desconhecidos. Dentre esses componentes os IPANs (intrinsic primary afferent neurons) ou neurônios aferentes primários intrínsecos são a representação dos neurônios sensitivos de todo o trato gastrintestinal. Os IPANs são transdutores de estímulos fisiológicos, incluindo movimento das vilosidades ou distorção da mucosa, contração do músculo intestinal e alterações na química do conteúdo do lúmen intestinal. No intestino os IPANs apresentam morfologia Dogiel tipo II, ou seja, são grandes neurônios redondos ou ovais com múltiplos dendrítos, alguns dos quais terminam perto da superfície luminal do intestino e outros que formam sinapses com interneurônios entéricos, neurônios motores e mesmo entre IPANs. O objetivo deste trabalho foi identificar a melhor combinação de neuromarcadores capaz de caracterizar os IPANs por imuno-histoquímica, e assim contribuir para diagnósticos mais precisos, rápidos e eficazes em diversas patologias. Para isso utilizamos os marcadores de canais de cálcio calretinina e calbindina em associação com óxido nítrico sintase (NOS), colina acetiltransferase (cChAT) e peptídeo intestinal vasoativo (VIP). As diferenças estatísticas foram determinadas através do teste ANOVA one-way do programa estatístico Minitab v.13 e considerado p

Introduction: Vascular calcification is a common complication of chronic kidney disease. Osteoblast differentiation factor (Cbfa1) is present in histologic sections of arteries from patients with end-stage renal disease. Vascular smooth muscle cells (VSMC) can dedifferentiate to osteoblast-like cells, possibly by up-regulation of Cbfa1. There is evidence that the production of nitric oxide (NO) may have an important role in the regulation of osteoblast metabolism. The aim of this study is to evaluate whether increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC. Methods: VSMC were obtained from renal artery of Wistar male rats, treated for 72 hours with lipopolysaccharide (LPS), ß-glycerophosphate (BGF), a donor of phosphate and aminoguanidine (AG), an inhibitor of iNOS, in the following groups: CTL (control), LPS, BGF, LPS + BGF, and LPS + AG. NO synthesis was determined by chemiluminescence. Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were analyzed by RT-PCR, Cbfa1 protein expression by immunohistochemistry and cellular viability by acridine orange. Results: Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were higher in LPS and LPS+ BGF vs CTL (p < 0.05), and they were lower in LPS+AG vs LPS (p < 0.05). The Cbfa1 in the groups LPS and LPS+BGF also resulted in a higher value compared to CTL (p < 0.05), and in LPS+AG it was lower compared to LPS (p < 0.05). NO was higher in LPS and LPS+BGF compared to CTL group (p < 0.05) and lower in LPS + AG compared to LPS group (p < 0.05). Cellular viability showed no statistical difference among groups. Conclusion: This study showed that increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC. RESUMO Introdução: A calcificação vascular é uma complicação comum da doença renal crônica. O fator de diferenciação osteoblástica (Cbfa1) está presente em cortes histológicos das artérias de pacientes com doença renal em estágio terminal. As células do músculo liso vascular (CMLV) podem desdiferenciar para células do tipo osteoblastos, possivelmente pela regulação positiva da Cbfa1. Há evidências de que a produção de óxido nítrico (NO) pode ter um papel importante na regulação do metabolismo dos osteoblastos. O objetivo deste estudo é avaliar se o aumento da expressão de NO/iNOS causa um aumento na expressão de cbfa1 nas CMLV. Métodos: As CMLV foram obtidas da artéria renal de ratos machos Wistar, tratados por 72 horas com lipopolissacarídeo (LPS), ß-glicerofosfato (BGF), um doador de fosfato e aminoguanidina (AG), um inibidor da iNOS, nos seguintes grupos: CTL (controle), LPS, BGF, LPS + BGF e LPS + AG. A síntese de NO foi determinada por quimioluminescência. As expressões de mRNA de Cbfa1 e iNOS foram analisadas por RT-PCR, a expressão da proteína Cbfa1 por imunohistoquímica e viabilidade celular por laranja de acridina. Resultados: As expressões de mRNA de Cbfa1 e iNOS foram maiores em LPS e LPS + BGF v.s. CTL (p < 0,05) e menores em LPS + AG v.s. LPS (p

Introduction: Vascular calcification is a common complication of chronic kidney disease. Osteoblast differentiation factor (Cbfa1) is present in histologic sections of arteries from patients with end-stage renal disease. Vascular smooth muscle cells (VSMC) can dedifferentiate to osteoblast-like cells, possibly by up-regulation of Cbfa1. There is evidence that the production of nitric oxide (NO) may have an important role in the regulation of osteoblast metabolism. The aim of this study is to evaluate whether increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC. Methods: VSMC were obtained from renal artery of Wistar male rats, treated for 72 hours with lipopolysaccharide (LPS), ß-glycerophosphate (BGF), a donor of phosphate and aminoguanidine (AG), an inhibitor of iNOS, in the following groups: CTL (control), LPS, BGF, LPS + BGF, and LPS + AG. NO synthesis was determined by chemiluminescence. Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were analyzed by RT-PCR, Cbfa1 protein expression by immunohistochemistry and cellular viability by acridine orange. Results: Cbfa1 and iNOS mRNA expressions were higher in LPS and LPS+ BGF vs CTL (p < 0.05), and they were lower in LPS+AG vs LPS (p < 0.05). The Cbfa1 in the groups LPS and LPS+BGF also resulted in a higher value compared to CTL (p < 0.05), and in LPS+AG it was lower compared to LPS (p < 0.05). NO was higher in LPS and LPS+BGF compared to CTL group (p < 0.05) and lower in LPS + AG compared to LPS group (p < 0.05). Cellular viability showed no statistical difference among groups. Conclusion: This study showed that increased NO/iNOS expression causes an increase in cbfa1 expression in VSMC.

Major Depressive Disorder (MDD) is among the leading causes of disability in the world. Research on the pathophysiology of this mental disorder that enables the discovery of new targets for its treatment has been widely conducted. The hypothesis of proinflammatory cytokines in depression, resulting, for example, from the response to psychosocial stressors, is fundamental in mediating the pathophysiological characteristics of MDD. In addition, depressed patients have increased blood LPS as a consequence of intestinal dysbiosis. In this context, administration of bacterial lipopolysaccharide endotoxin (LPS) or proinflammatory cytokines may cause depressive symptoms in rodents and humans. In this context, the aim of this study was to determine the effect of antidepressants on LPS-induced neuroimmune changes (protocol 1), as well as the role of nitric oxide synthase (NOS) isoforms in the inflammatory model of depression induced by systemic administration of LPS (protocol 2). For this purpose, behaviors related to MDD, such as behavioral despair, anhedonia and motivation, 24 hours after endotoxin administration were evaluated for the development of depressive behaviors, besides the evaluation of MPO activity and levels of TNF-α, IFN- γ and IL-1β, IL-4 and IL-6 in the brain, prefrontal cortex (CPF), hippocampus (HC), striatum (CE) and hypothalamus (HT) areas. The results from protocol 1 showed that exposure to LPS caused an increase in proinflammatory cytokines such as IL-1β and IL-6, as well as increasing Th1, TNF-α and IFN-γ response cytokines. These changes were prevented by the administration of tranilcipromin (TCP), amitriptyline (AMI), escitalopram (ESC), and vortioxetine (VORT) antidepressants, with particular attention to VORT which showed the best results in behavioral testing and neuroimmune assessments. In protocol 2, we observed that the NOS blockers, L-NAME, 7-NI and 1400 W, respectively total NOS blockers, neuronal NOS (nNOS) and inducible NOS (iNOS), were able to prevent changes in the despair test. behavioral, but only 7-NI was effective in preventing anhedonia symptoms through the sucrose preference test, as well as showing anxiolytic effect by exploring the open field center. Blockers showed distinct effects in relation to brain neuroimmune alterations, especially 7-NI and 1400 W. In general, this work points to a distinct immunomodulatory effect between antidepressants of different classes, especially vortioxetine, which showed better results. together with tranylcypromin as well as for a central role of nNOS in mediating depressive behaviors and LPS-induced neuroinflammatory changes. O Transtorno Depressivo Maior (TDM) está entre as principais causas de incapacidade no mundo. Pesquisas a respeito da fisiopatologia deste transtorno mental que possibilitem a descoberta de novos alvos para seu tratamento têm sido amplamente realizadas. A hipótese das citocinas pró-inflamatórias, na depressão, resultantes, por exemplo, da resposta a estressores psicossociais, são fundamentais na mediação das características fisiopatológicas do TDM. Ademais, pacientes deprimidos apresentam aumento de LPS sanguíneo, como consequência de uma disbiose intestinal. Neste contexto, a administração da endotoxina bacteriana lipopolissacarídeo (LPS) ou de citocinas pró-inflamatórias podem causar sintomas depressivos em roedores e humanos. Neste contexto, buscou- se determinar no presente trabalho o efeito de antidepressivos nas alterações neuroimunes induzidas por LPS (protocolo 1), bem como o papel das isoformas da Óxido Nítrico Sintase (NOS) no modelo inflamatório de depressão induzido pela administração sistêmica de LPS (protocolo 2). Para tanto foram avaliados comportamentos relacionados ao TDM, como desespero comportamental, anedonia e motivação, 24 h após a administração da endotoxina, para o desenvolvimento de comportamentos tipo depressivo, além da avaliação da atividade da MPO e níveis das citocinasTNF-α, IFN-γ e IL-1β, IL-4 e IL-6 nas áreas cerebrais, córtex pré-frontal (CPF), hipocampo (HC), corpo estriado (CE) e Hipotalamo (HT). Os resultados do protocolo 1 mostraram que a exposição ao LPS causou aumento de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1βe IL-6, além de aumentar as citocinas da resposta Th1, TNF-α e IFN-γ. Estas alterações foram prevenidas pela administração dos antidepressivos tranilcipromina (TCP), amitriptilina (AMI), escitalopram (ESC), e vortioxetina (VORT), com especial atenção para a VORT que apresentou os melhores resultados nos testes comportamentais e avaliações neuroimunes. No protocolo 2, observamos que os bloqueadores da NOS, L-NAME, 7-NI e 1400 W, respectivamente bloqueadores da NOS total, NOS neuronal (nNOS) eNOS induzível (iNOS), foram capazes de prevenir as alterações no teste de desespero comportamental, mas apenas o 7-NI foi eficaz na prevenção dos sintomas de anedonia, através do teste de preferência por Sacarose, bem como apresentar efeito ansiolítico através da exploração do centro do campo aberto. Os bloqueadores apresentaram efeitos distintos com relação às alterações neuroimunes cerebrais com destaque para o 7-NI e 1400 W. De forma geral este trabalho aponta para umefeitoimunomodulador distinto entre antidepressivos de diferentes classes, com destaque para a vortioxetina, a qual apresentou melhores resultados juntamente com a tranilcipromina, bem como para um papel central da nNOS namediação de comportamentos depressivos e alterações neuroinflamatórias induzidas pelo LPS.

La esclerosis múltiple remitente-recurrente (EM-RR) es una enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central. A fin de entender la asociación del estrés oxidativo a nivel periférico con la recaída de la enfermedad se determinaron los niveles de marcadores de estrés oxidativo en plasma de pacientes en la recaída o brote y una semana después de la misma. Se analizaron muestras de 60 personas (20 pacientes con recaída, 20 pacientes sin recaída y 20 controles sanos). Se cuantificaron mediante métodos espectrofotométricos las actividades enzimáticas de óxido nítrico sintasa (ONS), glutatión peroxidasa (GPx), los niveles de lipoperóxidos y nitritos-nitratos y la fluidez de membrana. En el brote de la enfermedad aumentan significativamente los niveles de las actividades enzimáticas de ONS y GPx y los niveles de nitritos-nitratos y lipoperóxidos (p

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A lesão pulmonar aguda (ALI) e a síndrome respiratória aguda associada à malária (MA-ARDS) são complicações que causam sérios danos ao pulmão e frequentemente levam à morte. A MA-ALI/ARDS, objeto deste estudo, está relacionada a uma resposta imunológica do tipo Th1 mediada por linfócitos T produtores de IFN-γ. A fim de estudarmos estas doenças, utilizamos o modelo de camundongos C57BL/6 infectados com a cepa Plasmodium berghei NK65 (PbN) capaz de induzir patologia semelhante a encontrada em humanos. Confirmamos a presença predominante de células T CD4+ e CD8+ que expressam Tbet e produzem IFN-γ. Inesperadamente, verificamos que o dano tecidual no pulmão associado à malária depende de CCR4, receptor de quimiocina principalmente relacionado com o recrutamento de linfócitos Th2 e células T reguladoras. No entanto, em nosso modelo caracterizado pelo perfil inflamatório Th1, CCR4 não está envolvida com a migração de células Th2, mas é requerido para o recrutamento de células dendríticas produtoras de TNF- α e iNOS, denominadas TipDCs, para os pulmões. Todavia, o recrutamento de Tip-DCs e o desenvolvimento da MA-ALI/ARDS não foram afetados em camundongos deficientes em CCR2, normalmente associada com a migração dessas células em outros modelos. Além disso, camundongos deficientes para a produção de óxido nítrico sintase (NOS2) se mostraram resistentes ao desenvolvimento da síndrome pulmonar causada pelo Plasmodium spp.. Sendo assim, NOS2 produzido por Tip-DCs parece ser um fator essencial para o desenvolvimento da MA-ALI/ARDS. Além disso, nossos experimentos demonstram que a produção de IFN-γ, por células T CD8+ nos pulmões é responsável pela indução de células dendríticas provenientes de monócitos produtoras de NOS2 e TNF-α, e o resultado dessa resposta inflamatória que culmina no desenvolvimento da MA-ALI/ARDS é dependente de CCR4. Malaria-associated acute respiratory distress syndrome (MA-ARDS) and acute lung injury (ALI) are complications that cause lung damage and often leads to death. The MA-ALI/ARDS is associated with a Type 1 inflammatory response mediated by T lymphocytes and IFN-γ. Here, we used the Plasmodium berghei NK65 (PbN)-induced MA-ARDS model that resemble human disease and confirmed that lung CD4+ and CD8+ T cells predominantly expressed T-bet and IFN-γ. Surprisingly, we found that development of MA-ARDS was dependent on functional CCR4, which normally mediates recruitment of Th2 lymphocytes and regulatory T cells. In this Type 1 inflammation-ARDS model, we found that CCR4 was not involved in recruitment of T lymphocytes, but required for the emergence of TNF-α/iNOS producing dendritic cells (TipDCs) in the lungs. In contrast, recruitment of Tip-DCs and development of MA-ARDS was unaffected significantly in CCR2-/- mice infected with PbNK65. Importantly, we showed that NOS2-/- mice are resistant to PbNK65-induced lung damage, indicating that nitric oxide produced by TipDCs is an essential component of MA-ARDS pathology. Lastly, our experiments demonstrate that local production of IFN-γ by CD8+ cells in the lungs is responsible for inducing iNOS and TNF-α producing DCs activity in this MA-ARDS model.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A nNOS tem sido apontada como um fator atero-protetor e sua atividade encontra-se comprometida na hiperlipidemia. No entanto, não é conhecida alguma relação entre os receptores que reconhecem a LDL modificada nos macrófagos com a atividade da nNOS. Assim, neste trabalho avaliamos o papel do NO derivado da nNOS na captação de LDLox e sua relação com a ativação e via de sinalização dos receptores TLR4. Para tal, macrófagos peritoneais de camundongos C57BL/6J e TLR4−/− foram estimulados com LDLox conjugada com FITC por 1h, na presença ou ausência de inibidor da nNOS e/ou amitriptilina (AM; antagonista dos receptores TLR2/4), SNAP(doador de NO) ou H2O2. A LDLox-FITC foi visualizada por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo. A produção de NO e superóxido e o influxo de cálcio foi avaliada com as sondas DAF–FM, DHE, Fluo-4 e Fluo-5N. A ativação da nNOS no endotélio foi avaliada em células endoteliais e anéis de aorta estimulados com acetilcolina(Ach). Observou-se que a inibição da nNOS aumentou a captação de LDLox em macrófagos e o doador de NO a diminuiu. Estes efeitos não foram observados quando inibida a polimerização de actina. Além disso, o aumento na captação pela inibição da nNOS foi abolido em animais TLR4−/− e nas células tratadas com AM. Este tratamento, assim como a inibição da nNOS, diminuiu a produção de NO. Os níveis de fosforilação da nNOS (Ser852- inativação) diminuíram ao longo da exposição à LDLox e aumentaram em células TLR4−/− e tratadas com AM. Por outro lado, o estímulo com LDLox levou a liberação de cálcio do retículo de forma dependente do TLR4 pela via da PLC e PKA. A inibição da PKA aumentou a captação de LDLox e diminuiu a produção de NO. Adicionalmente, a inibição da PKA aumentou a fosforilação da nNOS-Ser852 e impediu a translocação de PP1 para o citoplasma. Em células endoteliais e anéis de aorta foi observado desfosforilação do resíduo ser852 pela Acetilcolina. Anéis de aorta silenciados para eNOS mostraram inibição da resposta à acetilcolina quando inibida a PP1. Adicionalmente, evidenciou-se desligamento da PP1 do inibidor endógeno NIPP1 e subsequente translocação ao citoplasma. A estimulação com o análogo do cAMP mimetizou a ativação pela Acetilcolina, e a inibição da PKA impediu a desfosforilação da nNOS-Ser852 e impediu a translocação da PP1. Consequentemente, concluímos que a ativação da nNOS ocorre por um mecanismo dependente da PKA e PP1. Em macrófagos , esta via é induzida pelo estímulo do TLR4 em resposta à LDLox resultando em liberação de NO que possivelmente regula a macropinocitose impedindo ainda maior captação de LDLox. nNOS has been described as atheroprotective and its activity is compromised in hyperlipidemia. However, there is no known relationship of receptors recognizing modified LDL in macrophages and nNOS activity. in this work we evaluated the role of nNOS-derived NO in the uptake of oxLDL and its relation to the activation of TLR4 receptors. Therefore, peritoneal macrophages of C57BL/6J and TLR4−/− mice were stimulated for 1h with FITC-conjugated oxLDL in the presence or absence of nNOS inhibitor, amitriptyline (AM, TLR2/4 receptor antagonist), SNAP (NO donor) or H2O2. FITC-oxLDL was visualized by fluorescence microscopy and cytometry. production of NO and superoxide and calcium influx were evaluated by DAF-FM, DHE, Fluo-4 and Fluo-5N probes. Activation of endothelial nNOS was evaluated in acetylcholine-stimulated endothelial cells and aortic rings. it was observed that inhibition of nNOS increased the uptake of oxLDL in macrophages and that NO donor decreased it. these effects were not observed when polymerization of actin was inhibited. In addition, increased uptake by nNOS inhibition was abolished in TLR4−/− animals and AM-treated cells. this treatment, as well as inhibition of nNOS, decreased NO production. The phosphorylation levels of nNOS (Ser852-inactivation) decreased throughout oxLDL exposure and increased in TLR4−/− cells and AM-treated cells. On the other hand, oxLDL stimulation led to the release of calcium from the reticulum and calcium influx dependent on TLR4, PLC and PKA. inhibition of PKA increased LDLox uptake and decreased NO production. In addition, it increased the phosphorylation of nNOS-Ser852 and prevented the translocation of PP1 into the cytoplasm. in endothelial cells and aortic rings dephosphorylation of the ser 852 residue by Ach was observed. silenced aorta rings for eNOS showed inhibition of the acetylcholine response when PP1 was inhibited. In addition, PP1 deattachment of the endogenous NIPP1 inhibitor and subsequent cytoplasmic translocation were evidenced. cAMP analogue stimulation mimicked Ach activation, and inhibition of PKA prevented the dephosphorylation of nNOS-Ser852 and prevented PP1 translocation. Consequently, we conclude that the activation of nNOS occurs by a mechanism dependent on PKA and PP1. in macrophages, this pathway is induced by TLR4 stimulation in response to oxLDL resulting in NO release that possibly regulates macropinocytosis, preventing further oxLDL uptake.

Background: Hypertension is one of the most prevalent diseases in the world, accounting for millions of deaths each year. The reduction in the concentration of nitric oxide (NO) produced by the catalysis of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is associated with higher blood pressure (BP) levels. This reduction might be because of genetic polymorphisms. This study investigated the prevalence of the eNOS gene G894T polymorphism in women from northeast Brazil and its association with hypertension. Methods: This cross-sectional study included 810 women (aged 20-49 years). Sociodemographic, health, anthropometric, and BP data were collected. Hypertension was defined according to the following criteria: systolic BP≥140 mmHg, diastolic BP≥90 mmHg, the regular use of antihypertensive medication, or some combination therein. Epithelial cells from the cheek mucosa were obtained for DNA extraction. Genotyping was performed via real-time PCR. The measure of association was the prevalence ratio (PR) and its 95% CI as calculated via Poisson regression. Results: The frequencies of the GG, GT, and TT genotypes were 57.1%, 35.7%, and 7.2%, respectively. For each of these genotypes, the prevalence of hypertension in women was 17.9%, 23.6%, and 34.4%, respectively. Relative to the GG genotype, the PRs after adjusting for confounds were 1.24 (95%CI=0.95-1.61, p=0.11) for GT and 1.76 (95%CI=1.16-2.67, p

O óxido nítrico (NO) é uma molécula gasosa que exerce papel de neurotransmissor, regulando eventos sinápticos e participando de funções neurais como memória e aprendizado. No sistema nervoso, o NO é catalisado pela óxido nítrico sintase neuronal (nNOS). Por ser uma molécula gasosa, o NO pode se difundir livremente atravessando a membrana das células, desta forma agindo como um neurotransmissor retrógrado, geralmente considerado um moderador de ação local. NO e nNOS são moléculas altamente conservadas entre as espécies e estão presentes no sistema nervoso de diversos vertebrados. Nós realizamos imunoistoquímicas anti-nNOS e histoquímicas para revelação de NADPH-diaforase com o objetivo de investigar a distribuição de células nitrérgicas no compartimento subcortical do telencéfalo de mocó (Kerodon rupestris). Os dados mostram uma distribuição heterogênea de neurônios imunorreativos a nNOS ou com atividade NADPH-diaforase ao longo de todo o compartimento subcortical. Observou-se neurônios imunorreativos a nNOS no núcleo accumbens, associando o NO a mecanismos de vício e recompensa; nos núcleos da amígdala e no hipocampo, podendo estar associados a aprendizado e memória; no núcleo intersticial da estria terminal, associado a comportamentos de defesa, analgesia e funções cardiovasculares; e nos núcleos da base, sugerindo papel neuroprotetor e de regulação neural do movimento, associando-se ainda a doenças neurodegenerativas nessas regiões. A distribuição de NO no telencéfalo subcortical de mocó é ampla, heterogênea e complexa, mas guarda muitas semelhanças com a distribuição em outros roedores, o que pode significar um amplo papel do NO nas funções cerebrais desta espécie. Além disso, o mapeamento da distribuição de nNOS está sendo importante para a definição morfológica de certas áreas encefálicas de mocó, em comparação com outras espécies de roedores e outros mamíferos. Nitric oxide (NO) is a gaseous molecule that acts as a neurotransmitter, regulating synaptic events and participating in neural functions such as memory and learning. In the nervous system, NO is catalysed by neuronal nitric oxide synthase (nNOS). As a gaseous molecule, NO can diffuse freely trespassing the cells membrane. Because of this NO can act as a retrograde neurotransmitter and is usually treated as a local moderator. NO and nNOS are highly conserved among species and are present in the nervous system of many vertebrates. We performed immunohistochemical anti-nNOS and histochemical for NADPH-diaphorase in order to investigate the distribution of nitrergic cells in the subcortical compartment of the rock cavy (Kerodon rupestris) telencephalon. The data show a heterogeneous distribution of neurons immunoreactive to nNOS or with NADPH-diaphorase activity throughout the subcortical compartment. Neurons immunoreactive to nNOS were observed in the nucleus accumbens, associating NO with mechanisms of addiction and reward; in the nuclei of the amygdala and in the hippocampus, that are associated with learning and memory; in the bed nucleus of the stria terminalis, associated to defense behaviors, analgesia and cardiovascular functions; and in the basal nuclei, suggesting a putative neuroprotector role and neural regulation of the movement, being still associated with neurodegenerative diseases in these regions. The distribution of NO in the subcortical telencephalon of the rock cavy is broad, heterogeneous and complex, suggesting a broad role of NO in the cerebral functions of this species. In addition, the mapping of nNOS distribution is being important for the morphological definition of the rock cavy's brain areas in comparison with other species of rodents and other mammals.

Background: Although many researches have been conducted on either a certain antioxidant or mPTP individually, little attention has been drawn to the effects of co-administration of an antioxidant and mPTP inhibitor together on cardiac dysfunction after I/R injury. Objectives: This study aims at determining the effects of gallic acid (as Antioxidant) combined with cyclosporine A (CsA) (as mPTP inhibitor) on I/R induced cardiac and endothelial (role of NO) dysfunction. Methods: Male Wistar rats were pretreated with gallic acid (7.5, 15, or 30 mg.kg-1 body weight, daily) for a period of 10 days. Then, the heart was isolated and exposed to 30-minute ischemia and perfused by CsA (0.2 µM) 20 min during reperfusion period. Results: The data have shown that infarct size was decreased significantly by CsA and gallic acid alone (p < 0.05, one way ANOVA followed by LSD test), however the combination of both drugs had more significant improving effects (p < 0.001). The combination of these two drugs improved more significantly maximum rate of rise and fall of ventricular pressure (±dp.dt-1 max), rate pressure product (RPP), left ventricular developed pressure (LVDP), heart rate and coronary flow rather than applying each one alone (p < 0.05, repeated measurement ANOVA followed by LSD test). Conclusions: In conclusion, benefiting from an antioxidant concomitant with an mPTP inhibitor could have more improving effects on the cardiac dysfunction induced by I/R injury. Resumo Fundamento: Embora muitas pesquisas tenham sido conduzidas com um determinado antioxidante ou mPTP individualmente, pouca atenção tem sido dada para os efeitos da co-administração de um antioxidante e um inibidor de mPTP sobre a disfunção cardíaca após a lesão de I/R. Objetivos: Este estudo objetiva determinar os efeitos do ácido gálico (como antioxidante) combinado com a ciclosporina A (CsA) (como inibidor de mPTP) na função cardíaca e endotelial na disfunção induzida por I/R (função de NO). Métodos: Ratos Wistar machos foram pré-tratados com ácido gálico (7,5, 15 ou 30 mg.kg-1 de peso corporal, diariamente) por um período de 10 dias. Em seguida, o coração foi isolado e exposto a isquemia de 30 minutos e perfundido por CsA (0,2 µM) 20 min durante o período de reperfusão. Resultados: Os dados mostraram que o tamanho do infarto foi significativamente diminuído por CsA e ácido gálico sozinho (p < 0,05, ANOVA unidirecional seguido de teste LSD). A combinação de ambos os fármacos, entretanto, apresentou efeitos de melhora mais significativos (p < 0,001). A combinação destes dois fármacos melhorou mais significativamente a taxa máxima de aumento e de queda da pressão ventricular (± dp.dt-1 máx), o duplo produto (DP), a pressão ventricular esquerda desenvolvida (PVED), a frequência cardíaca e o fluxo coronário quando comparada à aplicação de apenas um deles (p < 0,05, medidas repetidas ANOVA seguidas de teste de LSD). Conclusões: Em conclusão, o benefício de um antioxidante concomitante com um inibidor da mPTP poderia ter efeitos mais benéficos sobre a disfunção cardíaca induzida pela lesão I/R.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:58:42Z No. of bitstreams: 1 Luiza Spiegel de Almeida Dissertacao completa.pdf: 3054923 bytes, checksum: 70d6a37fb7681891fe4f8eb93767fc3c (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:58:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luiza Spiegel de Almeida Dissertacao completa.pdf: 3054923 bytes, checksum: 70d6a37fb7681891fe4f8eb93767fc3c (MD5) Previous issue date: 2017-05-17 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Hypoxia-ischemia (HI) is characterized by transient or permanent interruption of the blood flow and oxygen supply. Children affected by HI present hypomyelination, astrogliosis and deficiency in cortical and motor development and increased sensitivity to pain. Juvenile and adults with cerebral palsy have frequent complaints of chronic pain. Astrocytes among their multiple neural functions are involved in the modulation of pain signalling and are altered after HI events. The enzyme neuronal Nitric Oxide Synthase (nNOS) is linked to brain damage, cell death, cognitive deficits and changes in nociception. The periaquedutal gray matter (PAG) exerts functions in the descending inhibitory pain pathway. Animal models of HI which the uterine arteries of pregnant rats are clamped have astrogliosis, oligodendroglial death, axonal rupture, and decreased expression of nNOS in the hippocampus. In this work, we verified the sensitivity to touch and the response to acute and chronic pain, besides verifying nNOS and Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) immunostaining in the PAG of young and adult male rats submitted to a prenatal systemic HI model. At 18 days of gestation, female rats had their uterine horns exposed and the uterine arteries clamped for 45 minutes. In SHAM operated rats, the same procedure was done, except for obstruction of the arteries. After the procedure, gestation continued normally and the pups were born at term. 30 or 90 days after birth, male rats were submitted to the behavioural tests of von Frey and formalin 2.5% or histological processing to perform immunohistochemistry for nNOS and GFAP. We did not observed differences in the touch sensitivity between the groups in both ages. We did not observe differences between the groups in the number of contractions observed in young animals, but the HI group showed an increase in time licking the injected paw, being significant in the 30-35min and 35-40min periods. Adult animals showed an increase in the number of contractions throughout the test period, being significant in the time of 15 and 45 minutes after the injection, we also observed the increase in time licking the paw, being significant in the period of 5-10min. We did not observe quantitative differences in nNOS and GFAP distribution in young animals. However, the number of nNOS+ cells was reduced in HI animals in the dlPAG and vlPAG subregions at the approximate distance of -7.80 mm from bregma. The immunostaining of GFAP is increased in those animals in the dlPAG and dmPAG subregions at the approximate distance of -5.80 mm from bregma. Our results demonstrate for the first time that the animals submitted to prenatal HI presents hyperalgesia throughout the formalin test period, but without alterations in the touch sensitivity. We have also shown that there are morphofunctional changes in PAG of these animals, which may be related to hyperalgesia also observed in our study. A hipóxia-isquemia (HI) é caracterizada pela interrupção momentânea ou permanente do fluxo sanguíneo e do aporte de oxigênio, sendo a principal causa de lesão cerebral em crianças. Crianças afetadas por HI apresentam hipomielinização, astrogliose e deficiência no desenvolvimento cortical e motor e maior sensibilidade à dor. Jovens e adultos que apresentam paralisia cerebral possuem como queixa frequente a dor crônica. Astrócitos, dentre suas múltiplas funções neurais, estão envolvidos na modulação da sinalização da dor e apresentam-se alterados após eventos hipóxico-isquemicos. A enzima óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), produtora de óxido nítrico (NO), está ligada a danos cerebrais, morte celular, déficits cognitivos e alterações na nocicepção. A substância cinzenta periaquedutal (PAG) participa da modulação nas vias descendentes inibitórias da dor, promovendo a analgesia. Modelos animais de HI, onde as artérias uterinas de ratas grávidas são clampeadas, apresentam astrogliose, morte da oligodendroglia, ruptura axonal e diminuição da distribuição de nNOS no hipocampo. Neste trabalho buscamos verificar a sensibilidade ao toque e a resposta à dor aguda e crônica, além de avaliar a distribuição da enzima nNOS e da proteína gliar fibrilar ácida (GFAP) na PAG de ratos adultos e jovens submetidos a um modelo de HI sistêmica pré-natal. Ao completarem 18 dias de gestação, ratas fêmeas tiveram seus cornos uterinos expostos e as artérias uterinas obstruídas durante 45 minutos. Nas ratas controle SHAM, o mesmo foi feito, com exceção da obstrução das artérias. Após o procedimento, a gestação continuou normalmente e os filhotes nasceram a termo. 30 ou 90 dias após o nascimento, ratos machos foram submetidos aos testes comportamentais de von Frey e formalina a 2,5% ou ao processamento histológico para realização de imunohistoquímica para nNOS e GFAP. Não observamos diferenças na sensibilidade ao toque entre os grupos em ambas as idades. Não observamos diferenças entre os grupos no número de contrações observadas nos animais jovens, porém o grupo HI apresentou aumento no tempo lambendo a pata injetada, sendo significativo nos períodos de 30-35min e 35-40min. Os animais adultos apresentaram aumento no número de contrações por todo o período do teste, sendo significativo nos tempos de 15 e 45min após a injeção. Também observamos o aumento do tempo lambendo a pata, sendo significativo no período de 5-10min. Não observamos diferenças quantitativas na expressão de nNOS e GFAP nos animais jovens, porém o número de células nNOS+ foi reduzido nos animais HI adultos nas sub-regiões dlPAG e vlPAG nas distâncias aproximadas de -7,80mm do bregma e a distribuição de GFAP está aumentada nesses mesmos animais nas sub-regiões dlPAG e dmPAG nas distâncias aproximadas de -5,80mm do bregma. Nossos resultados demonstram pela primeira vez que os animais submetidos a HI pré-natal apresentam hiperalgesia por todo o período de teste da formalina, mas sem alterações na sensibilidade ao toque. Também demonstramos que existem alterações morfofuncionais da PAG destes animais, as quais podem estar relacionadas a hiperalgesia também observada em nosso trabalho.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:59:05Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Bastos Barbosa Dissertacao completa.pdf: 2795316 bytes, checksum: c1c2b996433ff1505c969528bb1f1c59 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina Bastos Barbosa Dissertacao completa.pdf: 2795316 bytes, checksum: c1c2b996433ff1505c969528bb1f1c59 (MD5) Previous issue date: 2017-05-16 Physiological and metabolic changes that occur in intrauterine or early postnatal life, elicited by an external factor and that have repercussions in adult life can be defined as metabolic programming. Protein malnutrition in early stages of life can cause effects during development and in adult life, such as changes in glucose homeostasis, imbalance in insulin and glucocorticoid secretion, increased insulin sensitivity, and increased leptin response. In a model of malnutrition in rats, with administration of 0% protein to damns during the first 10 lactation days, we have demonstrated a delay in neuropeptide Y (NPY) distribution in the hypothalamus and in the hippocampus, alterations in the pattern of nitric oxide synthase (ONS) distribution in adult life, as also changes in learning and memory. The objective of this study was to investigate whether Wistar rats submitted to this model of protein malnutrition present alterations in insulin receptor substrate 1 (IRS1) levels and in the distribution of the phosphorylated glutamate receptor subunit 1 (Glur-1) at serine 845 in the hippocampus. From the first day of lactation, nursing rats had their litters adjusted to six males and were separated into three groups: control (GC), malnutrition (GM) and pair-fed (GPF). Malnutrition occurred through administration to the damns of a 0% protein diet and a caloric restriction group was performed by administering 12 grams of commercial chow per day to the GPF mother. The GC received commercial chow (22% protein). Food intake and body mass of offspring were measured during development. IRS1 levels were quantified in the hippocampus of offspring at P10 and P60. The distributions of pGlur-1 (Ser 845) and NeuN positive cells were also evaluated in the hippocampus in P10 and P60. The GM offspring had lower body mass in relation to the GC from P4 to P60, except for P30. GPF also has a reduction in body mass compared to controls. No quantitative differences were found for IRS-1, NeuN and pGlur-1 at P10. In P60, GM presented higher levels of IRS1 in the hippocampus and greater distribution of pGlur-1 in CA3, in relation to the control group. No change was observed in the total number of neurons. It was concluded that protein restriction during lactation affected the body mass development of the offspring, but did not cause immediate impacts on the IRS1 and pGlur-1 molecules in the hippocampus. The results observed at P60, with increased IRS1 and pGlur-1 levels suggest that these animals undergo metabolic programming, impairing insulin signaling and increasing insulin receptor substrate in the hippocampus, followed by an increase in the number of Glur-1 phosphorylated at serine 845. We can also suggest that these results corroborate previous studies of our group that observed an improvement in spatial memory and exploratory activity in this model. Alterações fisiológicas e metabólicas que ocorrem na vida intra-uterina ou pós-natal precoce, promovidas por um fator externo e que repercutem na vida adulta, podem ser definidas como programação metabólica. A malnutrição proteica nos estágios iniciais da vida pode causar efeitos durante o desenvolvimento e na vida adulta, como por exemplo, alterações na homeostasia da glicose, desbalanço na secreção de insulina e glicocorticoides, aumento na sensibilidade a insulina e aumento na resposta da leptina. Em um modelo de malnutrição em ratos, com administração de ração com 0% de proteína à nutriz durante os dez primeiros dias de lactação, foi demonstrado atraso na distribuição de neuropeptídeo Y (NPY) no hipotálamo e, no hipocampo, alterações no padrão de distribuição de óxido nítrico sintase (ONS) na vida adulta, além de alterações no aprendizado e memória. O objetivo desse estudo foi investigar se ratos Wistar submetidos a esse modelo de malnutrição proteica apresentam alterações nos níveis de de substrato 1 do receptor de insulina (IRS1) e na distribuição da subunidade 1 do receptor de glutamato (Glur-1) fosforilado na serina 845, no hipocampo. A partir do primeiro dia de lactação, ratas nutrizes tiveram suas ninhadas ajustadas para seis machos e foram separadas em três grupos: controle (GC), malnutrido (GM) e pair-fed (GPF). A malnutrição se deu através da administração, para a mãe, de uma ração com 0% de proteína e o controle calórico foi realizado administrando 12g de ração comercial diária para a nutriz do GPF. O GC recebeu ração comercial (22% de proteína). A ingestão alimentar da nutriz e a massa corporal da prole foram aferidas. Foram quantificados os níveis IRS1 no hipocampo da prole em P10 e P60. As distribuições de pGlur-1 (Ser 845) e células NeuN positivas também foram avaliadas no hipocampo em P10 e P60. A prole GM possuía menor massa corporal em relação ao GC a partir de P4 até P60, com exceção de P30. O GPF também possui redução na massa corporal comparado com o GC. Não foram encontradas diferenças quantitativas para IRS-1, NeuN e pGlur-1 em P10. Em P60, o GM apresentou maiores níveis de IRS1 no hipocampo e maior distribuição de pGlur-1 no CA3, em relação ao grupo controle. Não foi observada alteração no número total de neurônios. Foi possível concluir que a restrição de proteínas durante a lactação afetou o desenvolvimento da massa corporal da prole, mas não causou impactos imediatos nas moléculas IRS1 e pGlur-1 no hipocampo. Os resultados observados nos níveis de IRS1 e pGlur-1 em P60 sugerem que esses animais sofreram programação metabólica, com consequências na sinalização de insulina e no aumento de seu substrato, no hipocampo, acompanhado do aumento da fosforilação do Glur-1 na serina 845. Podemos sugerir também que esses resultados corroboram estudos anteriores de nosso grupo, que observaram melhora na memória espacial e atividade exploratória nesse modelo.

OBJETIVO: investigar si existe una relación entre los niveles plasmáticos de nitrato y los valores de temperatura corporal y presión arterial en pacientes con sepsis, sepsis grave y choque séptico. MÉTODO: estudio prospectivo observacional, desarrollado en un hospital brasileño; los datos fueron recolectados entre julio y diciembre de 2009. El número de pacientes incluidos en el estudio fue de 29 y las muestras de sangre fueron 30. Se realizó la recolección de la sangre (10 ml) para posterior análisis, en laboratorio, de los valores de los niveles plasmáticos de nitrato. RESULTADOS: la síntesis de óxido nítrico está aumentada en pacientes con choque séptico y está inversamente relacionada a los valores de la temperatura corporal. CONCLUSIÓN: estos datos muestran que la medición de la temperatura corporal y la observación de cuadros hipotérmicos en pacientes sépticos pueden ser importantes para orientar a la enfermería en lo que se refiere a la evolución de individuos con sepsis para choque séptico. OBJETIVO: pesquisar se há relação entre os níveis plasmáticos de nitrato e os valores da temperatura corporal e os da pressão arterial em pacientes com sepse, sepse grave e choque séptico. MÉTODO: estudo prospectivo observacional, desenvolvido em hospital brasileiro. Os dados foram coletados entre julho e dezembro de 2009. Vinte e nove pacientes foram incluídos na amostra. Foi realizada a coleta do sangue (10mL) para posterior análise dos níveis plasmáticos de nitrato, em laboratório. RESULTADOS: a síntese de óxido nítrico está aumentada em pacientes com choque séptico e está inversamente relacionada aos valores de temperatura corporal. CONCLUSÃO: esses dados mostram que a medição da temperatura corporal e a observação de quadros hipotérmicos em pacientes sépticos podem ser importantes para guiar a enfermagem, no que se refere à evolução de sujeitos com sepse, para o estado de choque séptico. OBJECTIVE: to investigate whether there is a relationship between plasmatic levels of nitrate, body temperature, and blood pressure values in patients with sepsis, severe sepsis and septic shock. METHOD: prospective observational study performed in a Brazilian hospital; data were collected from July to December 2009. Thirty blood samples were obtained from a total of 29 patients. Blood samples (10ml) were collected for subsequent laboratory analysis to determine nitrate levels in the plasma. RESULTS: nitric oxide synthesis is increased in patients with septic shock, and is inversely correlated to the body temperature values. CONCLUSION: these data show that the measurement of body temperature and the observation of hypothermic conditions in septic patients could be important to guide the nursing regarding the evolution of individuals with sepsis to septic shock.

Óxido nítrico (NO) é uma molécula gasosa importante em processos intra e extracelular, está presente em vários tecidos, exercendo um papel importante no sistema imune, na regulação da pressão sanguínea, no relaxamento do músculo liso e na vasodilatação via nervos periféricos. Por ser um gás o NO atravessa livremente as membranas celulares. Portanto, na parte central do sistema nervoso age como um neurotransmissor em circuitos locais, distribuindo-se em curtas distâncias, difundindo-se de célula em célula participando de várias funções, como aprendizado e memória, podendo mediar respostas excitatórias a certos aminoácidos. O NO está presente em vários núcleos distribuídos por todo o sistema nervoso e tem sido descrito em diversas espécies animais através da expressão de sua enzima de síntese, a NOS. Utilizando as técnicas de imunoistoquímica contra NOS e de histoquímica para marcar a atividade enzimática da NADPH diaforase, a NADPHd, nós mapeamos a distribuição de NO no tronco encefálico de um roedor endêmico da caatinga brasileira que habita áreas rochosas e tem hábitos crepusculares, o mocó (Kerodon rupestris). Diversas regiões e núcleos do tronco encefálico apresentaram imunorreatividade ao NOS ou atividade NADPHd. O presente trabalho mostra que em mocó, entre outras regiões, NO está em núcleos do sistema visual primário como os núcleos pré-tectais e colículo superior; núcleos do sistema auditivo como o complexo olivar, colículo inferior e núcleo coclear; em diversas subdivisões da substância cinzenta periaquedutal, estrutura envolvida em comportamentos defensivos, nocicepção e ansiedade, assim como o locus cerúleos onde NO também foi encontrado; substância negra, onde NO está relacionado a encefalopatia hepática e com a doença de Parkinson em outros roedores. O grande número de núcleos nitrérgicos e seu padrão de distribuição no tronco encefálico de mocó foi semelhante ao observado em outras espécies de mamíferos, nos levando a concluir que a proximidade filogenética das espécies é mantida na distribuição de NO no tronco encefálico de mocó. Nitric oxide (NO) is a gas very important in intra and extracellular process. It is present in many tissues, having an important role in the immunological system, regulation of blood pressure, relaxation of the smooth muscle and vasodilatation through peripheral nervous system. As a gas, NO can pass freely through cell membranes. Therefore, it acts as a neurotransmitter of local action in the central nervous system, reaching short distances, diffusing from cell to cell. It has many functions as learning and memory and modulation of excitatory responses to aminoacids. NO is present in many areas throughout the brain and has been described in many animal species by the expression of its enzyme of synthesis, the NOS. Using immunohistochemistry against NOS and NADPH diaphorase histochemistry we described the distribution of NO in the brainstem of a rodent typical from the Brazilian caatinga, that inhabits rocky areas and has crepuscular habits, the rock cavy (Kerodon rupestris). Several brainstem areas and nuclei presented immunorreactivity to NOS or NADPHd activity. Some of them showed a high density of immunostained neurons, for example the periaqueductal gray, the magnocellular nucleus of the posterior commissure and the interpeduncular nucleus. Others nuclei presented a moderated, as the posterior pretectal nucleus, olivary pretectal nucleus, layers of the superior colliculus and cuneate nucleus. Several showed a low density as the posterior commissure nuclei, paranigral nucleus external cortex of the inferior colliculus and the inferior oliva. Finally, there is nuclei with a very low density, for example the reticular part of the substantia nigra, the pararubral nucleus, the dorsal raphe nucleus, the gracile nucleus and interstitial nucleus of the medulla. The great number of nitrergic nuclei and its pattern of distribution in the rock cavy's brainstem is similar to the other mammals, leading us to conclude that the phylogenetic proximity between species is kept in the brainstem. The present work shows that among other regions the NO is in nuclei of the primary visual system as the pretectal nuclei and the superior coliculum; nuclei of the auditory system as the olivar complex, inferior coliculum and the coclear nuclei; it is in several divisions of the periaqueductal grey matter, strutucture involved in defensive behavior, nociception and anxiety, like the locus coeruleus, where NO also was find; the substantia nigra, where the NO has been related to hepatic encephalopatia and Parkinson's disease in other rodents.The great number of nitrergic nuclei and its pattern of distribution in the rock cavy's brainstem looked alike what is seen in other mammals, leading us to conclude that the philogenetic proximity of the species is mantained in the distribution of NO in the rock cavy's brainstem.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O óxido nítrico (NO) é uma molécula muito simples (N=O), gasosa, com propriedades químicas de um radical livre e até meados da década de 1980 era considerado apenas membro de uma família de poluentes ambientais indesejáveis e carcinógenos potenciais. Desde sua descoberta no sistema nervoso, NO tem sido implicado em diversas funções, o que condiz com sua ampla distribuição no encéfalo. NO também tem sido descrito no encéfalo de diversas espécies animais, mas ainda não foi descrito em mocó (Kerodon rupestris), um roedor endêmico da caatinga brasileira que habita áreas rochosas e tem hábitos crepusculares. Devido a estas características interessantes objetivamos descrever a distribuição do NO do diencéfalo do mocó. Através das técnicas de imunoperoxidase padrão contra a óxido nítrico sintase (NOS), enzima de síntese de NO, e histoquímica para NADPH-diaforase pudemos identificar de forma indireta a presença de neurônios nitrérgicos ao longo de todo diencéfalo. O hipotálamo apresentou uma densidade alta de neurônios imunorreativos a NOS (NOS-IR) em vários núcleos, dentre eles alguns como o núcleo supraóptico, decussação supraóptica e a parte lateral da área retroquiasmática. Com densidade moderada temos a área pré-óptica lateral, o núcleo pré-óptico magnocelular, a parte parvocelular anterior e a parte parvocelular medial do núcleo paraventricular do hipotálamo, o núcleo ventrolateral do hipotálamo, a parte peduncular da área hipotalâmica lateral e o núcleo posterior do hipotálamo. A divisão anterior do núcleo ventromedial do hipotálamo e a área hipotalâmica dorsal apresentaram densidade baixa, e a parte lateral do núcleo pré-óptico medial apresentou densidade muito baixa. No tálamo, neurônios NOS-IR estiveram presentes no núcleo geniculado ventral com densidade alta. Na parte lateral do núcleo habenular lateral, o núcleo talâmico posterodorsal ventral e a parte mediocaudal do núcleo talâmico posterior com densidade moderada. O núcleo paraventricular do tálamo, zona incerta e o núcleo talâmico parafascicular, apresentaram densidade baixa. Comparando nossos resultados com o descrito em outros animais podemos dizer que o sistema nitrégico é um sistema de neurotransmissor evolutivamente bem conservado. Nitric oxide (NO) is a simple molecule (N=O), a gas with a free radical property whose until the 80s was considered a member of a family of environmental pollutants and a potential carcinogen. Since its discovery in the nervous system, NO has been implicated in several functions, what suits with its wide distribution in the brain. NO has been described in the brain of many animal species, but it was not described in the brain of the rocky cave (Kerodon rupestris), an endemic rodent of the Brazilian caatinga that inhabits rocky areas and have crepuscular habits. Due to these interesting characteristics we aim to describe the NO distribution of the rocky cavy diencephalon. Using standard immunoperoxidase against nitric oxide synthase (NOS), the NO synthesis enzyme, and histochemistry for NADPH-diaphorase, we were able to indirectly identify the presence of nitrergic neurons throughout the entire diencephalon. The hypothalamus showed a high density of NOS-IR neurons in several nuclei, among them the supraoptic nucleus, supraoptic decussation and the lateral part of the retrochiasmatic area. With moderate density we have the lateral pre-optic area, the preocular magnocellular nucleus, the anterior parvocellular part and the medial parvocellular part of the paraventricular nucleus of the hypothalamus, the ventrolateral nucleus of the hypothalamus, the peduncular part of the lateral hypothalamic area and the posterior nucleus of the hypothalamus. The anterior division of the ventromedial nucleus of the hypothalamus and the dorsal hypothalamic area presented low density, and the lateral part of the medial pre-optic nucleus presented very low density. In the thalamus, NOS-IR neurons were present in the ventral geniculate nucleus with high density. In the lateral part of the lateral habenular nucleus, the ventral posterodorsal thalamic nucleus and the mediocaudal part of the posterior thalamic nucleus with moderate density. The paraventricular nucleus of the thalamus, zona incerta and the parafascicular thalamic nucleus, presented low density. Comparing our results with those described in other animals we can say that the nitric system is an evolutionarily well-conserved neurotransmitter system.

FUNDAMENTO: O programa de biogenese mitocondrial no coracao parece apresentar remodelacao adaptativa apos estresse biomecânico e oxidativo. Os mecanismos adaptativos que protegem o metabolismo do miocardio durante a hipoxia sao coordenados, em parte, pelo oxido nitrico (NO). OBJETIVO: Observar a biogenese mitocondrial e expressao do oxido nitrico sintase (NOS) em coracoes de cardiopatia congenita com cianose; discutir a resposta mitocondrial a hipoxia cronica do miocardio. METODOS: Foram investigados 20 pacientes com defeitos cardiacos cianoticos (n = 10) ou acianoticos (n = 10). Foram estudadas amostras do miocardio na via de saida ventricular direita, tomadas durante a operacao. A analise morfometrica de mitocondrias foi realizada por microscopia eletronica de transmissao. A relacao mtDNA/nDNA foi determinada com PCR em tempo real. Os niveis de transcricao da subunidade I da citocromo c oxidase (COXI), coativador-1α do receptor I³ ativado por proliferador de peroxissoma (PGC-1α), o fator respiratorio nuclear 1 (NRF1), e fator de transcricao mitocondrial A (Tfam) foram detectados por reacao em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) ativado por fluorescencia em tempo real. Os niveis proteicos de COXI e nNOS, iNOS e eNOS foram medidos por tecnica de Western Blot. RESULTADOS: A densidade volumetrica mitocondrial (Vv) e a densidade numerica (Nv) foram significativamente elevadas em pacientes com cianose, em comparacao com a cardiopatia congenita acianotica. MtDNA elevada e suprarregulacao dos niveis de COXI, PGC-1 α, NRF1 e Tfam mRNA foram observadas em pacientes cianoticos. Os niveis de proteina de COXI e eNOS foram significativamente maiores no miocardio de pacientes cianoticos que nos de acianoticos. Os niveis de transcricao do PGC-1α se correlacionam com os niveis de eNOS. CONCLUSAO: A biogenese mitocondrial e ativada no miocardio da via de saida ventricular na cardiopatia congenita com cianose, que poderia ser a resposta adaptativa a hipoxia cronica e possivelmente envolve suprarregulacao da eNOS. (Arq Bras Cardiol. 2012; [online].ahead print, PP.0-0)

D-pinitol (3-O-metil-D-quiro-inositol) é um ciclitol presente em diversas espécies vegetais (frutas cítricas e leguminosas). Estudos recentes demonstram a capacidade deste ciclitol em reverter à disfunção endotelial e inibir a liberação de citocinas pró-inflamatórias em modelos animais de diabetes mellitus. Em humanos, o D-pinitol apresenta atividade hipoglicemiante e reduz a pressão arterial sistólica e diastólica em indivíduos com diabetes mellitus tipo II. Considerando a importância das alterações cardiovasculares na morbidade e mortalidade associadas ao diabetes mellitus, os efeitos descritos para o D-pinitol sugerem um efeito protetor deste fármaco no sistema cardiovascular. O presente trabalho teve como objetivo investigar o efeito vasodilatador do D-pinitol e seu respectivo mecanismo de ação em artéria mesentérica de camundongo. Artérias mesentéricas de 2ª ramificação foram isoladas de camundongos machos C57BL/6, com 8-14 semanas, seccionadas em anéis e montadas em um miógrafo com fios de tungstênio (DMT, Aarhus, Denmark). Os protocolos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Experimentação Animal da UFMG (CEUA-UFMG, protocolo nº. 170/2014). O D-pinitol induziu um efeito vasodilatador, concentração-dependente, na presença de endotélio funcional. Este efeito vasodilatador foi abolido na ausência de endotélio funcional e na presença de L-NAME (300 M), um inibidor não seletivo de óxido nítrico sintase (NOS). Este resultado sugere a participação do endotélio e da NOS no efeito vasodilatador do D-pinitol. Em artérias tratadas com ODQ (10 M), um inibidor da guanilato ciclase, a curva concentração-efeito foi deslocada para a direita. O D-pinitol aumentou significativamente a produção de nitrito em artérias mesentéricas com endotélio funcional. Este efeito é inibido por L-NAME e por calmidazolium (10 M), um inibidor de calmodulina. D-pinitol aumentou o nível de fosforilação da NOS no resíduo de Ser1177, sítio de ativação, e reduziu o nível de fosforilação no resíduo de Thr495, sítio de inativação. Os presentes resultados nos permitem concluir que o D-pinitol apresenta um efeito vasodilatador em artéria mesentérica de camundongo, dependente do endotélio vascular e da produção de NO, via ativação da NOS por um mecanismo dependente de cálcio-calmodulina. D-pinitol (3-O-methyl-D-chiro-inositol) is a cyclitol present in several plant species (citrus fruits and vegetables). Recent studies demonstrated the ability of this cyclitol in reversing the endothelial dysfunction and to inhibit the release of pro-inflammatory cytokines in animal models of diabetes mellitus. In humans, D-pinitol shows hypoglycemic activity and reduces systolic and diastolic blood pressure in individuals with type II diabetes mellitus. Considering the importance of cardiovascular diseases in the morbidity and mortality associated with diabetes mellitus, the effects described for the D-pinitol suggest a protective effect of this drug in the cardiovascular system. The present work aimed at investigating the mechanisms involved in the vascular effects of D-pinitol in mouse mesenteric artery. Male mice C57BL/6 with 8-14 weeks were used (Animal Ethics Committees: Protocol 170/2014). Mesenteric arteries 2nd branch were dissected and sectioned in 1.6 to 2.0 mm rings. These segments were mounted in a wire myograph (DMT, Aarhus, Denmark). D-pinitol induced a concentration-dependent vasodilation in the presence of a functional endothelium. This vasodilator effect was abolished in the absence of a functional endothelium and in the presence of L-NAME (300 M), a nonselective inhibitor of nitric oxide synthase (NOS). In arteries treated with ODQ (10 M), an inhibitor of guanylate cyclase, the concentration-effect curve was shifted to the right. D-pinitol significantly increased the nitrite production in mesenteric arteries with a functional endothelium. This effect was inhibited by L-NAME and calmidazolium (10 M), an inhibitor of calmodulin. D-pinitol significantly increased the phosphorylation level of NOS at Ser1177, activation site, and reduced the phosphorylation level at Thr495, inactivation site. The present results led us to conclude that the Dpinitol has an endothelium- and NOS- and NO-dependent vasodilator effect in mouse mesenteric artery activated by a mechanism dependent on calcium-calmodulin.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. O mecanismo pelo qual a disfunção vascular séptica é iniciada, e como baixas concentrações de óxido nítrico (NO) podem estar relacionadas às vias de sinalização dos receptores de glicocorticoides (GR), são pouco entendidas. Os objetivos desse trabalho foram avaliar como a produção inicial de NO, induzida por lipopolissacarídeo (LPS), pode interferir na ativação de células musculares lisas obtidas de aorta de ratos (A7r5) e na distribuição celular dos GR. Células A7r5 estimuladas com LPS e Interferon-? (IFN) apresentaram um rápido (em minutos) aumento na produção de NO e ânion superóxido, formando peroxinitrito, e posterior ativação do NF-kB, expressão da NOS-2 e acúmulo de nitrito no sobrenadante celular. A inibição da NO sintase (NOS) e NADPH oxidase (NOX), ou o sequestro do NO e do ânion superóxido, diminuíram todos estes eventos. O silenciamento das enzimas envolvidas demonstrou que apenas a ativação das isoformas NOS-1 e NOX-1 são importantes para a expressão da NOS-2 nas células A7r5. O pré-tratamento de ratos adrenalectomizados (ADX) com 7-nitroindazol (7-NI), antes do desafio com LPS reduziu os níveis plasmáticos de IL-6 e de NOx, diminuiu a translocação nuclear de GR e reduziu a mortalidade induzida por LPS em 65%. Observou-se que a translocação nuclear de GR mediada pelo pulso de NO e peroxinitrito depende da integridade do domínio de dimerização do GR, pois não foi observada translocação de GR em fibroblastos de camundongos deficientes na dimerização de GR (GRdim/dim), bem como o pré-tratamento com 7-NI não preveniu a mortalidade destes camundongos quando desafiados com LPS. Dessa forma, concluímos que a rápida formação de NO, ânion superóxido e peroxinitrito, derivados da atividade da NOS-1 e da NOX-1, respectivamente, atuam como agentes sinalizadores para a expressão da NOS-2 através da ativação de NF-kB, sendo importantes para o início da disfunção vascular séptica. Além disso, demonstramos de forma inédita que este pulso de espécies reativas participa de uma nova via de translocação nuclear de GR induzida por LPS/IFN, na ausência de corticoides. Esta nova via pode ser importante para ajudar a entender as causas da falha dos glicocorticoides em conter a inflamação em fases avançadas da sepse. Palavras-chave: células musculares lisas vasculares, óxido nítrico, óxido nítrico sintases, peroxinitrito, receptores de glicocorticoides, translocação nuclear. Abstract : The mechanism whereby the vascular dysfunction is initiated, and how low concentrations of nitric oxide (NO) are related to glucocorticoid receptors (GR) signaling pathways are poorly understood. The objectives of this study were to understand how an initial NO release induced by lipopolysaccharide (LPS) could interfere with the activation of smooth muscle cells from rat aorta (A7r5) and cellular distribution of GR. A7r5 cells stimulated with LPS and interferon-? (IFN) showed a rapid (within minutes) increase in NO and superoxide production, forming peroxynitrite with subsequent NF-kB activation, NOS-2 expression and nitrite accumulation in cell supernatant. The inhibition of NO synthase (NOS) and NADPH oxidase (NOX) or the scavenging of NO and superoxide anion, decreased all these events. The silencing of involved enzymes showed that only the activation of NOS-1 and NOX-1 isoforms are important for the expression of NOS-2 in A7r5 cells. Pretreatment of adrenalectomized (ADX) rats with 7-nitroindazole (7-NI) before LPS challenge, reduced the plasma levels of IL-6 and NOx, decreased nuclear translocation of GR and reduced mortality induced by LPS in 65%. It was observed that the nuclear translocation of GR mediated by the NO and peroxynitrite pulse depends on the integrity of the dimerization domain of the receptor, once GR translocation in fibroblasts obtained from GR dimerization deficient mice (GRdim/dim) was not observed. Also, pre-treatment with 7-NI did not prevent the death of these mice when they were challenged with LPS. Thus, we conclude that rapid formation of NO, superoxide and peroxynitrite derived from the activity of NOS-1 and NOX-1, respectively, act as signaling agents for the expression of NOS-2 through the activation of NF-kB, being important for the initiation of septic vascular dysfunction. Furthermore, we demonstrated for the first time that this pulse of reactive species participate in a new route of GR nuclear translocation induced by LPS/IFN, in the absence of steroids. This new pathway may be important to help understand the causes of glucocorticoids failure to contain inflammation in advanced stages of sepsis.

RACIONAL: Há evidências de que o óxido nítrico participa do mecanismo de retardo do esvaziamento gástrico determinado pelo lipopolissacarídio bacteriano. OBJETIVO: Avaliar o efeito do pré-tratamento com Nw-nitro-L-arginine methyl ester, um inibidor competitivo das óxido nítrico-sintetases, sobre o fenômeno. MATERIAL E MÉTODOS: Utilizaram-se ratos, Wistar, machos, SPF ("specific-pathogen free"), adultos, adaptados às condições do laboratório, que após 24 horas de jejum alimentar foram pré-tratados endovenosamente com veículo (salina) ou Nw-nitro-L-arginine methyl ester nas doses de 0,5, 1, 2,5 e 5 mg/kg. No tratamento, administrou-se endovenosamente veículo (salina) ou lipopolissacarídio (50 µg/kg). O intervalo entre o pré-tratamento e o tratamento foi de 10 minutos, e entre este e a avaliação do esvaziamento gástrico foi de 60 minutos. O esvaziamento gástrico foi avaliado indiretamente através da determinação da retenção gástrica da solução salina marcada com fenol vermelho 10 minutos após administração por via orogástrica. RESULTADOS: Entre os animais pré-tratados com veículo, o tratamento com lipopolissacarídio determinou elevação significativa da retenção gástrica (média = 57%) em relação aos tratados com veículo (38,1%). O pré-tratamento com as diferentes doses de Nw-nitro-L-arginine methyl ester não modificou a retenção gástrica nos animais controles do tratamento. O pré-tratamento com Nw-nitro-L-arginine methyl ester com a dose de 1 mg/kg determinou redução discreta, mas significativa, na retenção gástrica (52%) nos animais tratados com lipopolissacarídio, em relação ao observado naqueles com pré-tratamento e tratamento com veículo (35,9%). Nos animais pré-tratados com 2,5 e 5 mg/kg de Nw-nitro-L-arginine methyl ester e tratados com lipopolissacarídio, houve aumento significante da retenção gástrica (74,7% e 80,5%, respectivamente) em relação aos seus controles pré-tratados com as mesmas doses do inibidor das óxido nítrico-sintetases e tratados com veículo (40,5% e 38,7%, respectivamente) e àqueles pré-tratados com veículo e tratados com a mesma toxina. CONCLUSÃO: O pré-tratamento com Nw-nitro-L-arginine methyl ester numa dose baixa (1 mg/kg) determinou redução discreta no efeito de retardo do esvaziamento gástrico determinado pelo lipopolissacarídio in vivo e aumento significativo do retardo com doses mais elevadas (2,5 e 5 mg/kg), doses estas que, per se, não interferem no esvaziamento. BACKGROUND: There is evidence that nitric oxide plays a role in the decrease in gastric emptying induced by bacterial lipopolysaccharide. AIM: To evaluate the effect of pretreatment with Nw-nitro-L-arginine methyl to ester, one competitive inhibitor of the nitric oxide syntases, on the gastric emptying delay induced by lipopolysaccharide. MATERIAL AND METHODS: Male Wistar rats, SPF, were used after 24 h fast and 1 h-water withdrawn. The pretreatment was done intravenously with vehicle (saline) or Nw-nitro-L-arginine methyl to ester in the doses of 0.5, 1, 2.5 e 5 mg/kg. After 10 min, the animals were treated iv with lipopolysaccharide (50 mg/kg) or received vehicle (saline). The gastric emptying was evaluated 1 h after the lipopolysaccharide administration. A saline solution containing phenol red was used as the test meal. The gastric emptying was indirectly assessed by the determination of percent gastric retention of the test meal 10 min after orogastric administration. RESULTS: The animals pretreated with vehicle and treatment with lipopolysaccharide have significant rise of the gastric retention (average = 57%) in comparison with the controls receiving only vehicle (38.1%). The pretreatment with the different doses of Nw-nitro-L-arginine methyl to ester did not modify per se the gastric retention in comparison with the animals pretreated with vehicle. Pretreatment with Nw-nitro-L-arginine methyl to ester with the dose of 1 mg/kg determined a discrete but significant reduction in the gastric retention (52%) of animals treated with lipopolysaccharide in comparison with vehicle-pretreated rats. Paradoxically, animals pretreated with 2.5 or 5 mg of Nw-nitro-L-arginine methyl to ester/kg followed by treatment with lipopolysaccharide displayed a significantly higher gastric retention (74.7% and 80.5%, respectively) as compared to their controls, pretreated with the same doses of the inhibitor and treated with vehicle (40.5% and 38.7%, respectively) and to those pretreated with vehicle and treated with the same toxin. CONCLUSION: The pretreatment with Nw-nitro-L-arginine methyl to ester at low dose (1 mg/kg) resulted in a discrete inhibition of the gastric emptying delay induced by lipopolysaccharide. Nevertheless, Nw-nitro-L-arginine methyl to ester at higher doses (2.5 and 5 mg/kg) induced an enhancement of the lipopolysaccharide effect on gastric emptying, despite not interfering with the gastric emptying per se.

Xantonas são polifenóis de baixo peso molecular comumente encontradas em plantas utilizadas na medicina popular para o tratamento de desordens cardiovasculares. O tipo de efeito farmacológico bem como a sua potência, dependem diretamente dos radicais associados a seu esqueleto básico. Existem alguns trabalhos na literatura que relatam atividades de xantonas sobre o sistema cardiovascular. Entretanto, a maioria não mostra os mecanismos pelos quais as xantonas exercem seus efeitos. Este trabalho tem como objetivo mostrar o mecanismo de ação vasodilatadora de quatro xantonas anéis de aorta de camundongo, bem como mostrar que pequenas diferenças estruturais, são capazes de produzir ativação em vias de transdução de sinais completamente diferentes. A 9- xantenona promoveu uma resposta vasodilatadora que não depende da presença de endotélio funcional com Emáx de 46,3±2,95% e pEC50=5,013±0,01. O mecanismo de ação vasodilatadora da 9-xantenona foi através do bloqueio de canais para Ca+2 dependentes de voltagem. A adição de um OH na posição quatro do esqueleto xantônico (4-OH-xantona) produziu aumento do Emáx 102,5±11,37% sem alterar a potência (pEC50=4,8±0,06). A adição do grupamento OH na posição 4 não alterou o mecanismo de ação da xantona. A substituição da hidroxila por uma metoxila (OMe) na posição quatro (4-OMe-xantona), não alterou o Emáx=95,3±3,29% nem a potência pEC50=5,16±0,06, em relação a 4-OH-xantona, mas modificou o mecanismo de ação vasodilatador desta xantona. A 4-OMe-xantona possui ação vasodilatadora parcialmente dependente do endotélio via aumento da produção de óxido nítrico (NO). Parte do seu efeito vasodilatador foi independente do endotélio via ativação dos canais para K+ presentes na musculatura lisa vascular. A redução do esqueleto xantônico, via substituição de uma cetona por uma hidroxila, que produziu o xantidrol, induziu uma resposta vasodilatadora com mecanismos dependentes e independentes do endotélio vascular. O xantidrol produziu ativação tanto da eNOS como da nNOS, com consequente aumento da produção do NO e do H2O2. A parte da resposta vasodilatadora do xantidrol que independe do endotélio é mediada por bloqueio dos canais para Ca2+ dependentes de voltagem. Em conclusão, nosso trabalho mostra que as xantonas estudadas no presente trabalho, apresentam atividade vasodilatadora. Alterações menores na estrutura das xantonas é capaz de alterar o Emáx, bem como, os mecanismos envolvidos na resposta vasodilatadora. Xanthones are low molecular weight polyphenols commonly found in plants used in folk medicine for the treatment of cardiovascular disorders. Pharmacological effect and potency depends directly of radicals associated its basic skeleton. Previous studies in the literature reported activities of xanthones on the cardiovascular system. However, these studies not showed the mechanisms involved on xanthones effects. The aims of this work were study the mechanism involved on xanthones-inducedvasodilation in mouse aortic rings and correlates small structural differences to activation of different pathways of transduction signals. The 9-xanthenone promoted vasodilator response that does not depend on the presence of functional endothelium (Emax 46.3 ± 2.95 % and pEC50 = 0.01 ± 5.013). The mechanism of vasodilator effect of 9-xanthenone involved the blocking of voltage-dependent Ca2+ channels. The addition of an hydroxyl group in the four position of xanthonic skeleton (4-OHxanthone) produced an increase in Emax (102.5 ± 11.37 %) but not changed pEC50 (4.805 ± 0.06). The addition of OH group in position 4 did not change the mechanism of action of this xanthone. The substitution of the hydroxyl by a methoxyl (OMe) in position 4 (4-OMe-xanthone) did not change the Emax (95.3 ± 3.29 %) and pEC50 (5.159 ± 0.058), in comparation to 4-OH-xanthone but changed the mechanism involved on vasodilator effect of this xanthone. The effect of 4-OMe-xanthone has partly dependent on the endothelium via increased production of nitric oxide (NO). Part of this vasodilator effect was independent of the endothelium by direct activation of smooth muscle cells K+ . The reduction of xanthonic skeleton by a convertion of ketone into hydroxyl produced the xanthydrol. Xanthydrol induced a concentrationdependent vasodilation by two different mechanisms: dependent and independent of vascular endothelium. Xanthydrol produced activation of eNOS and nNOS, with consequent increased production of NO and H2O2. Part of the vasodilator response that is independent of endothelium is mediated by blockade of calcium channels voltage-dependent. In conclusion, our study shows that the xanthones studied in this work, have vasodilator activity. Minor changes in the structure of xanthones are able to change the Emax, as well as the mechanisms involved in the vasodilator response.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:13:31Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Daniel_J_M_Medeiros_Lima.pdf: 1272495 bytes, checksum: 839426bf637b1e6acbd51ec03eb9a633 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:13:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_FINAL_PUBLICADA_Daniel_J_M_Medeiros_Lima.pdf: 1272495 bytes, checksum: 839426bf637b1e6acbd51ec03eb9a633 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Growing evidence has shown that exercise impairs erythrocyte membrane structure as a consequence of increased physical and chemical stress. Erythrocyte-derived nitric oxide (NO) affects membrane fluidity, and its bioavailiability depends on the balance between its synthesis and scavenging by reactive oxygen species. Here, we investigated whether aerobic exercise performed at different intensities would affect erythrocyte NO bioavailability and oxidative stress. Ten men (26 ± 4 years old, VO2peak 44.1 ± 4.3 mL.kg-1.min-1) performed a treadmill maximal cardiopulmonary exercise test, and a submaximal exercise at 70% VO2peak during 30 min. Blood was collected at rest and immediately after exercises for erythrocytes isolation. Maximal exercise increased erythrocytes count, haemoglobin and haematocrit levels, without any change in body mass that could suggest haemoconcentration due to a plasma volume reduction. It was observed a decrease in L-arginine influx after moderate, but not maximal exercise. Yet, nitric oxide synthase activity, and thus, NO production, was increased after maximal exercise. Cyclic GMP levels did not change after both exercise bouts. In relation to biomarkers of oxidative stress, moderate exercise reduced protein oxidation, and increased catalase activity and glutathione peroxidise expression; whereas maximal exercise led to greater lipid peroxidation, and diminished SOD activity. Neither glutathione peroxidase activity nor NADPH expression were affected by exercise. These findings suggest that exercise induced changes in erythrocyte oxidative stress are more associated with intensity than duration. Furthermore, at intensities recommended for health promotion, exercise was shown to be protective, increasing the activity and expression of important antioxidant enzymes and reducing oxidative damage. Evidências crescentes têm demonstrado que o exercício prejudica a estrutura da membrana eritrocitária, como consequência do aumento do estresse físico e químico. O óxido nítrico (NO) derivado dos eritrócitos afeta a fluidez da membrana e a sua biodisponibilidade depende do equilíbrio entre a sua síntese e eliminação por espécies reativas de oxigênio. Nós investigamos se o exercício realizado em diferentes intensidades afetaria biodisponibilidade do NO eritrocitário e se levaria a um quadro de estresse oxidativo. Dez homens (26 ± 4 anos, VO2pico 44,1 ± 4,3 mL.kg-1.min-1) realizaram um teste cardiopulmonar máximo em esteira e um teste de exercício submáximo a 70% VO2pico durante 30 min. O sangue foi coletado em repouso e imediatamente após os exercícios para isolamento dos eritrócitos. O exercício máximo aumentou a contagem de eritrócitos, hemoglobina e hematócrito, sem levar a qualquer alteração na massa corporal que pudesse sugerir hemoconcentração devido a uma redução do volume plasmático. Observou-se uma diminuição do influxo de L-arginina depois do teste submáximo, mas não no teste máximo. No entanto, a atividade da óxido nítrico sintase, ou seja, a produção de NO, foi aumentada após o teste máximo. Os níveis de GMPc não se alteraram após ambos os teste de exercício. Em relação aos biomarcadores de estresse oxidativo, o exercício submáximo reduziu a oxidação proteica e aumentou a atividade da catalase e a expressão da glutationa peroxidase, enquanto que o exercício máximo levou a uma maior peroxidação lipídica e diminuição da atividade da SOD. Nem a atividade glutationa peroxidase ou a expressão NADPH oxidase foram afetadas pelo exercício. Estes resultados sugerem que o exercício induziu alterações no estresse oxidativo de eritrócitos, que parecem estar mais associadas com a intensidade do que a duração do execicio. Além disso, nas intensidades recomendadas para a promoção da saúde, o exercício mostrou ser protetor, aumentando a atividade e a expressão de enzimas antioxidantes importantes e reduzindo os danos oxidativos.

Orientadores: Jacqueline Mendonça Lópes de Faria, José Butori Lopes de Faria Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A patogênese da retinopatia diabética (RD) está associada ao estresse nitrosativo. Alterações na barreira hemato-retiniana (BHR) externa, formada pelas células do epitélio pigmentar da retina (EPR), estão associadas às fases precoces da RD e podem acarretar no desequilíbrio da manutenção dos fotorreceptores e consequentemente promoverem mudanças nas células neuronais da retina. O estresse nitrosativo como conseqüência do aumento da produção de óxido nítrico (NO¿) produzido pela super expressão da óxido nítrico sintetase induzida (iNOS) esteve presente em todas as camadas da retina, inclusive no EPR em condições de RD experimental in vivo precoce ou na linhagem celular humana do EPR (ARPE-19) expostas à alta concentração de glicose. O tratamento com agentes químicos como a S-nitrosoglutationa (GSNO), ou naturais (cacau enriquecido com polifenol) atuaram em diferentes vias de inibição da iNOS, prevenindo o estresse nitrosativo. Para o estudo in vivo com o colírio de GSNO (artigo I) foram utilizados animais espontaneamente hipertensos (SHR) com 4 semanas de idade. O diabetes (DM) foi induzido por STZ. Após a confirmação do DM (48 horas), os animais foram divididos em 6 grupos: controles (CTs) veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m ou DMs veículo; GSNO 900nm e GSNO 10?m. O efeito do tratamento com colírio de GSNO foi dependente da presença ou ausência da condição do DM. Nos animais CT, o GSNO atuou como um agente nitrosativo e nos animais DM preveniu o aumento da expressão da iNOS, preservando a retina funcional. Os estudos in vitro, demonstraram que o efeito do GSNO foi deletério ou protetor dependente da concentração de glicose. Nas células ARPE-19 expostas a condições normais de glicose, o tratamento promoveu um aumento na produção de NO¿ sem aumentar a expressão de iNOS e nas células sob alta glicose induziu uma modificação pós-translacional de proteína, a S-glutationilação da iNOS prevenindo o estresse nitrosativo. No estudo do cacau (artigo II), foi avaliado in vitro (ARPE-19 exposta a alta concentração de glicose) o seu efeito protetor dependente da concentração de polifenóis. Para isso foram testadas duas formulações de cacau que diferiram somente na concentração de polifenol: 0,5% para o cacau com baixo teor de polifenol e 60,5% para o cacau com alto teor de polifenol. A epicatequina (EC), encontrada na concentração de 12% no cacau com alto teor de polifenol foi tão eficaz quanto o próprio e esteve envolvida no controle da expressão da iNOS através da estimulação do receptor ?-opióide (DOR) diminuindo os níveis de TNF-?. A modulação da iNOS, preveniu a S-nitrosilação da caveolina-1 (CAV-1) e diminuição da expressão das junções intercelulares claudina-1 e ocludina através da prevenção da interação CAV-1?junções. Em ambos os estudos, o alvo terapêutico foi a iNOS em duas diferentes modalidades: modificação pós-translacional de proteína e modulação do TNF-? via DOR no EPR em modelos experimentais de RD. Os tratamentos apresentados neste trabalho demonstraram a iNOS como alvo terapêutico e mostraram-se eficaz em conter danos funcionais e morfológicos promovidas pela situação de mimetismo do DM no EPR demonstrando o importante papel da iNOS no desenvolvimento da RD Abstract: The pathogenesis of diabetic retinopathy (DR) is associated with nitrosative stress. Changes in outer blood-retinal barrier (BRB), formed by retinal pigment epithelium cells (RPE) are associated in the early stages of DR and can cause imbalance in the maintenance of photoreceptors and thereby cause changes on retinal neuronal cells. The nitrosative stress as a result of increased production of nitric oxide (NO) produced by overexpression of nitric oxide synthase (iNOS) was present in all layers of the retina and mainly in RPE cells in early in vivo experimental DR or in human RPE cell line (ARPE-19) exposed to high glucose condition. Therapy with chemical agents such as S-Nitrosoglutathione (GSNO) or natural compounds (enriched cocoa polyphenol) acted in different pathways of iNOS inhibition, preventing nitrosative stress. For the in vivo study with GSNO eye drops (article I), it were used spontaneously hypertensive rats (SHR) rats with 4 week old. Diabetes (DM) was induced by streptozotocin (STZ). After DM confirmation (48 hours), the animals were divided into 6 groups: controls (CTs) vehicle; GSNO 900nm and GSNO 10?m or DMs vehicle; GSNO 900nm e GSNO 10?m. The effects of treatments were dependent on glucose concentration. In CT animals, GSNO acted as a nitrosative agent and in DM rats prevented iNOS overexpression, preserving the retina function. In vitro study showed that GSNO protective or deleterious effects were dependent on the glucose concentration. In ARPE-19 cells exposed to normal glucose, the treatment promoted an increase of NO¿ production without increase iNOS expression and in cells under high glucose (HG) condition induced post-translational protein modification, S-glutationylation of iNOS, preventing nitrosative stress. In the study with cocoa (article II), it was evaluated its protective effect dependent on concentration of polyphenols in ARPE-19 cells under HG condition. For this study, the composition of cocoa was the same in both preparations with the only difference in the amounts of polyphenol, 0.5% for low polyphenol cocoa (LPC) and 60.5% for high polyphenol cocoa (HPC). Epicatechin (EC), found in 12% of HPC was similarly protective compare to HPC and it was involved in controlling iNOS expression by stimulation of the delta opioid receptor decreasing TNF- ? levels. The modulation of iNOS prevented S-nitrosylation of caveolin-1 (CAV-1) and decreased expression of claudin-1 and occluding tight junctions by preventing CAV-1/junctions interactions. The treatments presented here showed iNOS as a therapeutic target containing functional and morphological changes promoted by DM milieu in RPE showing the important role of iNOS in the development of DR Doutorado Clínica Médica Doutora em Clínica Médica

Fundo de Auxílio ao Ensino, Pesquisa e Extensão da Universidade Estadual de Londrina, Brazil, Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo, and CNPq Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Universidade Estadual de Londrina. Departamento de Ciências Fisiológicas. Londrina, PR, Brasil. Universidade Estadual de Londrina. Departamento de Ciências Patológicas. Londrina, PR, Brasil. / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil. Universidade Estadual de Londrina. Departamento de Ciências Patológicas. Londrina, PR, Brasil. Universidade de São Paulo. Escola de Medicina de Ribeirão Preto. Departamento de Farmacologia. Ribeirão Preto, SP, Brasil. Universidade de São Paulo. Escola de Medicina de Ribeirão Preto. Departamento de Farmacologia. Ribeirão Preto, SP, Brasil. Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto. Departamento de Física e Química. Ribeirão Preto, SP, Brasil. Universidade Estadual de Londrina. Departamento de Ciências Patológicas. Londrina, PR, Brasil. Universidade de São Paulo. Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto. Departamento de Física e Química. Ribeirão Preto, SP, Brasil. Universidade Estadual de Londrina. Departamento de Ciências Fisiológicas. Londrina, PR, Brasil. We investigated the involvement of nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) on autonomic cardiovascular parameters, vascular reactivity, and endothelial cells isolated from aorta of monosodium glutamate (MSG) obese rats. Obesity was induced by administration of 4 mg/g body wt of MSG or equimolar saline [control (CTR)] to newborn rats. At the 60th day, the treatment was started with N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 20 mg/kg) or 0.9% saline. At the 90th day, after artery catheterization, mean arterial pressure (MAP) and heart rate were recorded. Plasma was collected to assess lipid peroxidation. Endothelial cells isolated from aorta were evaluated by flow cytometry and fluorescence intensity (FI) emitted by NO-sensitive dye [4,5-diaminofluoresceindiacetate (DAF-2DA)] and by ROS-sensitive dye [dihydroethidium (DHE)]. Vascular reactivity was made by concentration-response curves of acetylcholine. MSG showed hypertension compared with CTR. Treatment with L-NAME increased MAP only in CTR. The MSG induced an increase in the low-frequency (LF) band and a decrease in the high-frequency band of pulse interval. L-NAME treatment increased the LF band of systolic arterial pressure only in CTR without changes in MSG. Lipid peroxidation levels were higher in MSG and were attenuated after L-NAME. In endothelial cells, basal FI to DAF was higher in CTR than in MSG. In both groups, acetylcholine increased FI for DAF from basal. The FI baseline to DHE was higher in MSG than in CTR. Acetylcholine increased FI to DHE in the CTR group, but decreased in MSG animals. We suggest that reduced NO production and increased production of ROS may contribute to hypertension in obese MSG animals.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas Malária é uma das mais incidentes doenças infecciosas do mundo. Na Amazônia existem muitos casos de malária causados principalmente por duas espécies de protozoários, o Plasmodium vivax e o Plasmodium falciparum, sendo este último responsável pela maioria dos casos de malária grave, que geralmente levam a morte devido ao acometimento de múltiplos órgãos, como o cérebro. Um dos mediadores químicos amplamente estudados nessa patogênese é o Óxido Nítrico (NO), o qual apresenta papel controverso. Atualmente duas hipóteses principais são apontadas como potencializadoras na patogênese. Uma, que a MC é causa da superprodução de NO, produzido pela Óxido Nítrico Sintase Neuronal (nNOS), após um quadro de hipóxia. Outra, diz que a MC é a causa da resposta exacerbada do sistema imunológico com produção de NO pela Óxido Nítrico Sintase Induzida (iNOS), presente nos macrófagos quando ativados pro determinantes antigênicos. Devido grande relevância da doença e dificuldade em enteder a patologia, modelos experimentais têm sido estabelecidos com a finalidade de esclarecer vias potenciais da evolução para MC, dentre eles o modelo de malária aviária causada pelo Plasmodium gallinaceum. Pouco se sabe sobre o seu papel do NO em modelos de malária aviária, principalmente devido inexistência de marcadores específicos para avaliar expressão das enzimas de síntese. Diante disso é importante estabelecer protocolos de purificação da iNOS de galinhas para a produção de um possível marcador. Para tanto se faz necessário investigar o papel do NO durante a malária aviária, em modelo experimental in vivo e in vitro, com linhagens de macrófagos de galinha HD11. Animais infectados com P. gallinaceum tratados com aminoguanidina (AG), um inibidor da produção de NO, tiveram maior sobrevida, além de menores níveis de nitrito no plasma e em macrófagos derivados de monócitos do sangue periférico, sugerindo a inibição da iNOS. Nos experimentos in vitro, células HD11 tratadas com LPS mostraram produção aumentada de NO, inferindo aumento na expressão e atividade da iNOS. Na separação proteica, observamos padrões diferentes que podem ser associados a uma elevada expressão da iNOS nos macrófagos ativados com LPS. Esse estudo proporcionará o melhor entendimento do modelo de malária aviária em galinhas, incluindo a cerebral, e envolvimento do sistema nitrérgico em galinhas infectadas com P. gallinaceum. Malaria is a severe infectious disease caused by parasites of the genus Plasmodium that infect different types of vertebrate’s hosts and is responsible for a huge number of deaths. The severe Malaria can lead to death and involves different pathophysiological signs as well as anemia and inflammation. Experimental models are necessary to improve the knowledge about mechanisms involved at the pathogenesis of the disease and the developing new protocols of treatment. Chickens infected with P. gallinaceum are a good model of malaria due to phylogenetic relatedness with human Plasmodium and because both species presents common clinical signs as cerebral malaria. The Nitric Oxide (NO) is an important effector molecule, but little is known about their role in malaria on chickens, meanly due to the lack of specific markers to evidence the NO production in this model. It is known that chickens infected with P. gallinaceum has a high mortality and causes an overproduction of nitrite by macrophages. The animals, when treated with aminoguanidine (AG), an inhibitor of inducible oxide nitric synthase (iNOS), showed a higher level of parasitemia. However, the rate of survivor was superior, beyond the clinical manifestations, as milder anemia. It is necessary to achieve a better comprehension about physiological aspects of avian malaria with the inhibition of NO’s production by the AG. In the context , the present study aims to investigate NOS activity and the role of NO during the avian malaria infection, with in vivo models, using P. gallinaceum as pathological agent , and in vitro with chicken’s macrophage of HD11 strain. This research will give a better understanding of avian malaria in chickens, including cerebral, and the involvement of nitrergic system in infected chickens.

Orientador: Heitor Moreno Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Objetivo: A falha no controle da pressão arterial (PA), apesar do uso de três ou mais antihipertensivos caracteriza hipertensão arterial resistente (HAR). A disfunção endotelial está intrinsecamente associada a esta condição e inibidores da fosfodiesterase 5 (iPDE5)-inibindo a degradação de GMP cíclico (GMPc)-reduzem a PA em pacientes com HAR. A administração aguda de iPDE5 poderia melhorar parâmetros hemodinâmicos, endoteliais e de função diastólica do ventrículo esquerdo (FDVE) em pacientes com HAR e o polimorfismo T-786C da sintase de óxido nítrico (NO) endotelial (eNOS) modularia essas respostas. Métodos: Os pacientes (n = 26) foram dispostos em três grupos de acordo com o genótipo da eNOS T-786C: CC (n = 8), a CT (n = 9) e TT (n = 9). Doses crescentes de sildenafil oral (37,5, 50 e 100 mg) e placebo (em datas separadas por pelo menos 2 semanas) foram administradas a intervalos de 30 minutos, enquanto parâmetros hemodinâmicos (não invasivos e contínuos) foram obtidos. Também foram determinados: FDVE; vasodilatação mediada por fluxo (VMF); e nitrito e GMPc plasmáticos ao início e término do protocolo. Resultados: PA média (PAM) e resistência periférica total (RPT) diminuíram no grupo total (n=26) após o sildenafil (84,17 ± 21,04-75 ± 17,21 mmHg, 1149 ± 459,7-1,037 dyn.s/cm-5 ± 340, respectivamente; p

CONTEXT: Diabetes mellitus is a disease characterized by hyperglycemia that, when allowed to progress long-term untreated, develops vascular and neurological complications, which are responsible for the development of alterations in the enteric nervous system in diabetic patients. In the gastrointestinal tract, diabetes mellitus promotes motor and sensory changes, and in the reflex function of this system, causing gastroparesis, diarrhea, constipation, megacolon, slow gastrointestinal transit, gastric stasis and dilation with decreased or increased peristaltic contractions. Several studies have shown that oxidative stress is the main responsible for the vascular and neurological complications affecting the enteric nervous system of diabetics. OBJECTIVE: The effects of 0.1% and 2% vitamin E on myosin-V- and nNOS-immunoreactive neurons in the jejunum of diabetic rats were investigated. METHODS: Thirty rats were divided into the groups: normoglycemic, normoglycemic treated with 0.1% vitamin E, normoglycemic treated with 2% vitamin E, diabetic, diabetic treated with 0.1% vitamin E, and diabetic treated with 2% vitamin E. The neuronal density and areas of neuron cell bodies were determined. RESULTS: Diabetes (diabetic group) significantly reduced the number of myosin-V-immunoreactive neurons compared with the normoglycemic group. The diabetic treated with 0.1% vitamin E and diabetic treated with 2% vitamin E groups did not exhibit a greater density than the D group (P>0.05). Nitrergic density did not change with diabetes (P>0.05). The areas of myosin-V- and nNOS-immunoreactive neurons significantly increased in the normoglycemic treated with 2% vitamin E and diabetic groups compared with the normoglycemic group. CONCLUSION: Supplementation with 2% vitamin E had a neurotrophic effect only in the area of myosin-V-immunoreactive neurons compared with the diabetic group. CONTEXTO: O diabetes mellitus (DM) é uma doença caracterizada pela hiperglicemia que a longo prazo, quando não tratada, desenvolve complicações vasculares e neurológicas, responsáveis pelo desenvolvimento das alterações no sistema nervoso entérico de pacientes diabéticos. Em nível gastrointestinal o DM provoca modificações motoras, sensoriais e na função reflexa desse sistema, podendo ocasionar gastroparesia, diarreia, constipação, megacólon, lentidão do trânsito gastrointestinal, estase e dilatação gástrica com diminuição ou aumento de contrações peristálticas. Diversos estudos têm evidenciado que o estresse oxidativo é o principal responsável pelas complicações vasculares e neurológicas que atingem o sistema nervoso entérico de diabéticos. OBJETIVO: O efeito da vitamina E 0,1% e 2 sobre a miosina-V e nNOS imunorreativas em neurônios do jejuno de ratos diabéticos foram investigados. MÉTODOS: Trinta ratos foram divididos em grupos: normoglicêmicos (NU), normoglicêmicos tratados com vitamina E 0,1% (NE1), normoglicêmicos tratados com vitamina E 2% (NE2), diabético (UD), diabéticos tratados com vitamina E 0,1% (DE1), e diabéticos tratados com vitamina E 2% (DE2). A densidade neuronal e áreas de corpos celulares de neurônios foram determinadas. RESULTADOS: Diabetes (UD grupo) reduziu significativamente o número de neurônios miosina-V imunorreativos quando comparado com o grupo UN. Os grupos DE1 e DE2 não exibem uma maior densidade do que o grupo D (P>0,05). Densidade nitrérgicos não se alterou com diabetes (P>0,05). As áreas dos neurônios miosina-V e nNOS imunorreativos aumentaram significativamente nos grupos NE2 e UD comparados com o grupo UN. CONCLUSÃO: A suplementação com vitamina E 2% teve um efeito neurotrófico apenas na área da miosina-V imunorreativos neurônios em comparação com o grupo UD.

FUNDAMENTO: O programa de biogênese mitocondrial no coração parece apresentar remodelação adaptativa após estresse biomecânico e oxidativo. Os mecanismos adaptativos que protegem o metabolismo do miocárdio durante a hipóxia são coordenados, em parte, pelo óxido nítrico (NO). OBJETIVO: Observar a biogênese mitocondrial e expressão do óxido nítrico sintase (NOS) em corações de cardiopatia congênita com cianose; discutir a resposta mitocondrial à hipóxia crônica do miocárdio. MÉTODOS: Foram investigados 20 pacientes com defeitos cardíacos cianóticos (n = 10) ou acianóticos (n = 10). Foram estudadas amostras do miocárdio na via de saída ventricular direita, tomadas durante a operação. A análise morfométrica de mitocôndrias foi realizada por microscopia eletrônica de transmissão. A relação mtDNA/nDNA foi determinada com PCR em tempo real. Os níveis de transcrição da subunidade I da citocromo c oxidase (COXI), coativador-1α do receptor γ ativado por proliferador de peroxissoma (PGC-1α), o fator respiratório nuclear 1 (NRF1), e fator de transcrição mitocondrial A (Tfam) foram detectados por reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) ativado por fluorescência em tempo real. Os níveis proteicos de COXI e nNOS, iNOS e eNOS foram medidos por técnica de Western Blot. RESULTADOS: A densidade volumétrica mitocondrial (Vv) e a densidade numérica (Nv) foram significativamente elevadas em pacientes com cianose, em comparação com a cardiopatia congênita acianótica. MtDNA elevada e suprarregulação dos níveis de COXI, PGC-1 α, NRF1 e Tfam mRNA foram observadas em pacientes cianóticos. Os níveis de proteína de COXI e eNOS foram significativamente maiores no miocárdio de pacientes cianóticos que nos de acianóticos. Os níveis de transcrição do PGC-1α se correlacionam com os níveis de eNOS. CONCLUSÃO: A biogênese mitocondrial é ativada no miocárdio da via de saída ventricular na cardiopatia congênita com cianose, que poderia ser a resposta adaptativa à hipóxia crônica e possivelmente envolve suprarregulação da eNOS. (Arq Bras Cardiol. 2012; [online].ahead print, PP.0-0) BACKGROUND: Mitochondrial biogenesis program in heart appears to exhibit adaptive remodeling following biomechanical and oxidative stress. The adaptive mechanisms that protect myocardium metabolism during hypoxia are coordinated in part by nitric oxide (NO). OBJECTIVE: To observe mitochondrial biogenesis and nitric oxide synthase (NOS) expression in hearts of congenital heart disease with cyanosis, discuss mitochondrial response to chronic hypoxia in myocardium. METHODS: 20 patients with cyanotic (n=10) or acyanotic cardiac defects (n=10) were investigated. Samples from the right ventricular outflow tract myocardium taken during operation were studied. Morphometric analysis of mitochondria was performed with transmission electron microscope. Relative mtDNA/nDNA ratio was determined with real-time PCR. Cytochrome c oxidase subunit I (COXI), peroxisome-proliferator-activated receptor γ coactivator-1α (PGC-1α), nuclear respiratory factor 1 (NRF1), and mitochondrial transcription factor A (Tfam) transcript levels were detected by real-time fluorescent RT-PCR. COXI and nNOS, iNOS and eNOS protein levels were measured with western blot. RESULTS: Mitochondrial volume density (Vv) and numerical density (Nv) were significantly elevated in patients with cyanotic compared to acyanotic congenital heart disease. Elevated mtDNA and up-regulated COXI, PGC-1α, NRF1 and Tfam mRNA levels were observed in cyanotic patients. Protein levels of COXI and eNOS were significantly higher in the myocardium of cyanotic than of acyanotic patients. PGC-1α transcript levels correlated with the levels of eNOS. Conclusion: Mitochondrial biogenesis is activated in right ventricular outflow tract myocardium in congenital heart disease with cyanosis, which could be the adaptive response to chronic hypoxia and possibly involves eNOS up-regulation. (Arq Bras Cardiol. 2012; [online].ahead print, PP.0-0)

Introdução: Estudos indicam que o trauma precoce e o sistema serotoninérgico estão relacionados ao desenvolvimento de ansiedade. Esta relação poderia ser mediada pela enzima óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), que tem papel importante no funcionamento dos receptores de serotonina. Objetivo: Investigar, através da mensuração do óxido nítrico (NO) no hipocampo, o possível envolvimento da nNOS no desenvolvimento de ansiedade em um modelo animal de adversidade no início da vida, baseado na qualidade do cuidado materno. Métodos: Ao segundo dia de vida, genitoras Wistar e suas ninhadas foram divididas em dois grupos: intervenção, com redução do material para a confecção do ninho, ou controle. O comportamento materno foi observado do dia 1 ao dia 9 de vida. Na vida adulta, realizaram-se testes comportamentais e determinaram-se os níveis hipocampais de NO, através da mensuração de seus produtos de degradação. Resultados: Observou-se um maior comportamento do tipo ansioso no grupo intervenção, cujas genitoras apresentaram maior contato de baixa qualidade com seus filhotes. Nos machos, o cuidado materno de baixa qualidade correlacionou-se negativamente com o tempo no braço aberto e a frequência de mergulhos (r=-0,4;p=0,03) avaliados no labirinto em cruz elevado. O comportamento materno de lamber os filhotes correlacionou-se com a frequência de mergulhos em ambos os sexos (r=0,5;p

Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:15:31Z No. of bitstreams: 1 Bruna Messias Lotufo Dissertacao completa.pdf: 3447122 bytes, checksum: 1afacbe819128e4c8817bd64c5e7eaac (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruna Messias Lotufo Dissertacao completa.pdf: 3447122 bytes, checksum: 1afacbe819128e4c8817bd64c5e7eaac (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Undernutrition is one of the main epigenetic factors that affect brain development. The hippocampus is a very vulnerable structure that is selectively affected by alterations of food intake during the developmental period. Nitric oxide synthase is an enzyme highly expressed in this structure and nitric oxide has been postulated to have a role in hippocampal LTP and LTD. Here, we evaluated, in rats, the effects of protein malnutrition during the first 10 days of lactation on the distribution of NADPH-diaphorase and on the following behaviors: anxiety, novelty seeking and memory/learning. This study was approved by our University Ethics Committee (CEA/055/2009). Wistar male rats were divided into two groups: control group (CG) and malnourished group (MG). Dams were fed ad libitum with a normoprotein diet (22% protein) during gestation. During the first 10 days of lactation, MG dams received a protein free (0% protein) diet while CG dams received a normoprotein (22%protein) diet. After P10, all dams were fed with a normoprotein diet. On each age studied, P10 until P90 (n=5 for each group), the animals brains were processed histologically and then NADPH-d histochemistry was carried out. Behavioral tests were performed with one male from each litter. Anxiety-like effects were measured in the elevated plus maze (EPM) during 5 min. The time spent in and entries into the open arms were the measured variables. The hole board (HB) was used to assess novelty-seeking (number of nose pokes) for 5 min. Memory and learning were assessed in the 8-arm radial water maze (8-ARWM). The time needed to find a small platform (4 trials/day for 5 consecutive days) submerged in cloudy water was the measured variable. P10 MG animals showed more stained NADPH-d+ cells on the dentate gyrus. At P20, we observed fewer stained cells in MG and this pattern was also observed at P30 and P45. At P90 the staining pattern in the dentate gyrus was similar for both groups. P10 MG animals showed less stained cell bodies in the stratum pyramidale. At P20, the stratum pyramidale in both groups showed intense staining. P30 MG animals showed more stained NADPH-d cells, but, at P45, we observed few stained cells in both groups. Though P90 MG animals presented more stained cells in stratum pyramidale. No differences between groups were observed regarding the anxiety measures. Regarding novelty-seeking, P90 MG animals presented a significantly (ANOVA: P=0.014 and 0,017) higher number of nose pokes that CG ones. No differences were found between groups at P40. As for memory/learning, P90 MG animals had a significantly (P=0.032) reduced latency to find the platform than CG ones in the 8-ARWM. No differences were found between groups at P40. Our results demonstrate that protein malnutrition restricted to the first 10 days of lactation altered the distribution of NADPH-d on hippocampus. The malnourished animals did not display behavioral alterations at P40. Conversely, P90 malnourished animals displayed higher levels of novelty-seeking behavior and a better memory/learning performance, mainly in the first testing day, suggesting that the effect is highly dependent on the novelty of the testing situation. A nutrição inadequada é um dos principais fatores não-genéticos que afetam o desenvolvimento do encéfalo. O hipocampo é uma estrutura bastante sensível a alterações no aporte nutricional durante o desenvolvimento. No hipocampo a óxido nítrico sintase (ONS) é uma enzima altamente expressa e o óxido nítrico (ON) já foi apontado como tendo papel fundamental na potenciação de longa duração (LTP) e depressão de longa duração (LTD), responsáveis pelo processo de memória e aprendizado. Neste trabalho estudamos o efeito da malnutrição no comportamento associado à memória e aprendizado e na distribuição da ONS, através da técnica da nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato diaforase (NADPH-d). O presente trabalho foi aprovado pelo COMITÊ DE ÉTICA (CEA/055/2009). Foram utilizados ratos Wistar machos, divididos em dois grupos: grupo controle (GC) e grupo malnutrido (GM). A malnutrição se deu através da administração, para a mãe, de uma ração com 0% de proteína durante os 10 primeiros dias de lactação, iniciando-se no dia do nascimento dos filhotes. O GC recebeu ração comercial (22% de proteína). Os encéfalos foram processados histologicamente nas idades de P10, P20, P30, P45 e P90 (n=5 para cada idade e grupo estudado), sendo então realizada a histoquímica da NADPH-d para avaliar a distribuição da ONS. A avaliação dos comportamentos associados à ansiedade foi realizada através do labirinto em cruz elevado (LCE), o comportamento associados à busca por novos estímulos foi medida através do campo vazado (CV) e a memória/aprendizado foi avaliada através do labirinto aquático radial de 8 braços (LAROB) em animais P40 (n=10 para cada grupo) e P90 (n=11 para cada grupo). No GM em P10 observamos maior densidade de células NADPHd+ no giro denteado. Em P20, a marcação para NADPH-d no GM foi menor e esse padrão foi mantido em P30 e P45. No GM em P90 não observamos efeitos da dieta. Em P10, no GM observamos menor número de corpos marcados no stratum pyramidale (SPy). Em P20 o SPy encontrava-se intensamente marcado em ambos os grupos. Em P30 GM observamos maior número de células marcadas no SPy. Entretanto em P45, ambos os grupos apresentaram poucos corpos marcados. Em P90, o GM apresentou mais células marcadas no SPy. Não foram observadas diferenças significativas nas variáveis analisadas para o LCE. O GM em P90 explora maior número de orifícios, tanto na periferia (F=8,1; gl=1; P=0,014) quanto no número total (F=7,5; gl=1; P=0,017). Não foram observadas diferenças significativas para as variáveis analisadas no CV em P40. No teste de memória/aprendizagem foram observadas diferenças significativas entre o GM e o GC na latência de escape no 1º dia de testes em P90 (F=5,2; gl=1; P=0,033), com o GM apresentando melhor desempenho quando comparado ao GC. Esses valores podem ser explicados pela redução da latência para encontrar a plataforma de escape no GM. Não foram observadas diferenças significativas no LAROB em P40. Nossos resultados demonstram que a malnutrição protéica restrita aos 10 primeiros dias da lactação altera a distribuição da NADPH-d no hipocampo. A malnutrição afetou o comportamento dos animais em P40. Por outro lado, em P90 os primeiro dia de teste, sugerindo que o efeito observado está mais associado à novidade do ambiente de teste.

Introdução: Hipertensão arterial sistêmica é um dos principais fatores de risco para doença cardiovascular, que hoje constitui a principal causa de morbimortalidade no Brasil. Além das doenças macrovasculares, a hipertensão também está implicada na etiopatogenia de doenças microvasculares, a retinopatia hipertensiva. Alteração no calibre dos vasos da retina ocorre precocemente. Redução do calibre arteriolar e aumento do calibre venular associaram-se diretamente com incidência de doenças cardiovasculares e mortalidade por qualquer causa em grandes estudos de coorte. Estreitamento arteriolar é capaz de predizer incidência de hipertensão. Além do valor prognóstico, a visualização dos vasos da retina permite o estudo de alterações que podem ser atribuíveis, ao menos em parte, ao remodelamento microvascular sistêmico que ocorre em hipertensos, oportunizando estudá-las in vivo em seres humanos. O óxido nítrico é uma das principais substâncias vasoativas na retina, em parte, produzido através da enzima óxido nítrico sintase endotelial, codificada pelo gene NOS3. Polimorfismos nesse gene, especialmente o polimorfismo de único nucleotídeo G894T (Glu298Asp), associaram-se a aumento de risco de hipertensão e doença coronariana em algumas populações. Fatores genéticos têm grande importância na determinação do calibre vascular retiniano, mas o polimorfismo G894T do gene NOS3 nunca foi investigado como candidato Adiponectina é um hormônio que aumenta a sensibilidade insulínica em diversos tecidos, melhorando perfil lipídico e glicídico, sendo associada a menor risco de diabetes mellitus e doença aterosclerótica na população geral. xi Entre indivíduos com doença cardiovascular estabelecida e em idosos, no entanto, aumento de adiponectina plasmática associa-se a maior mortalidade. Estudos em indivíduos hipertensos sugerem que adiponectina é protetora contra arterioesclerose de grandes vasos e contra retinopatia hipertensiva avaliada por oftalmoscopia. A associação entre adiponectina e calibre vascular da retina, no entanto, ainda não foi investigada. Objetivos: O objetivo geral foi analisar a etiopatogenia das alterações microvasculares aferidas por calibre vascular retiniano, compostos por fatores de risco cardiovascular advindos da base epidemiológica e elementos moleculares oriundos de modelos experimentais. Para tal, desenvolveram-se modelos integrados de etiopatogenia das alterações microvasculares retinianas. Os objetivos específicos foram estudar, através dos modelos propostos, a associação entre o polimorfismo G894T do gene NOS3 e calibre vascular retiniano e a relação entre adiponectina plasmática e calibre dos vasos da retina. Métodos: Indivíduos de 18 a 80 anos encaminhados ao Ambulatório de Hipertensão, do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, foram avaliados. Dados de monitorização ambulatorial da pressão arterial de 24 horas e medidas de consultório, informações sociodemográficas, história médica pregressa, medicamentos em uso e amostra de sangue para exames complementares e genótipo foram coletados. O calibre vascular foi aferido em retinografias digitalizadas, por método microdensitométrico. Genotipagem foi realizada com sistema TaqMan, e adiponectina total foi mensurada por ELISA. xii Resultados: Para estudo do polimorfismo G894T, 175 indivíduos foram incluídos. Comparando-se os grupos GG vs. TT/TG, a média do calibre arteriolar foi 107,1 ±10,5 μm (n=85) vs. 106,8 ±9,4 μm (n=84; P=0,98), e a média do calibre venular foi 129,2 ±13,8 (n=89) vs. 129,6 ±14,9 (n=84; P=0,95). Preditores independentes de calibre arteriolar foram HbA1c (β=-0,224; P=0,004), colesterol total (β=-0,195; P=0,014) e fellow vessel. Índice de massa corporal (β=0,181; P=0,02), tabagismo (β=0,170; P=0,03), e fellow vessel foram preditores independentes do calibre venular. Nenhuma associação foi encontrada com o genótipo TT/TG. Para investigação de adiponectina, 172 indivíduos foram incluídos. Indivíduos com adiponectina abaixo da mediana apresentaram maior circunferência da cintura (102,0 ±10,0 vs. 98,6 ±11,8 cm; P=0,04), HbA1c (6,8±1,4 vs. 6,4±0,8%, P=0,008), e prevalência de diabetes (50,0 vs. 33,7%, P=0,03), e menor HDL (45,7±10,9 vs. 50,7±14,0 mg/dl, P=0,01). Calibre arteriolar associou-se diretamente com idade (β=0,183; P=0,03) e inversamente com HbA1c (β=- 0,211; P=0,01). Calibre venular foi maior entre homens do que mulheres (132,3±17,9 vs. 127,2 ±11,4; P=0.04). Na análise multivariada, adiponectina (β =-0,410; P

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 Vários estudos demonstraram que produção excessiva de NO, relacionada com o aumento da expressão da NOS-2, contribui para as alterações hemodinâmicas observadas durante a sepse. No entanto, alguns trabalhos mostram que a inibição desta enzima não reverte a hipotensão, a hiporeatividade a agentes vasoconstritores e não influencia na sobrevivência de animais sépticos. Portanto, resolvemos investigar o papel do NO proveniente da isoforma neuronal da óxido nítrico sintase (NOS-1) sobre a reatividade a agentes vasoconstritores, e sua influência na progressão da sepse bem como o efeito de agonistas opióides sobre parâmetros comumente avaliados nesta doença. Nossos resultados demonstram que animais sépticos são sensíveis a analgesia com drogas opióides em modelo de dor por estímulo térmico e, além disso, os analgésicos opióides reduziram a hipotensão e hiporeatividade vascular induzidas pela sepse. Estes compostos quando administrados em doses baixas não interferiram na sobrevivência de animais sépticos, enquanto que doses maiores aumentam a mortalidade. A inibição da NOS-1 melhorou a reatividade vascular a agonistas e -adrenérgicos, tanto na fase inicial quanto na fase tardia da sepse. Tanto a NOS-1 quanto a guanilato ciclase solúvel tem sua expressão aumentada nas camadas de músculo liso vascular da aorta e do leito vascular mesentérico, e nos momentos mais tardios, ambas as enzimas interagem fisicamente no leito vascular mesentérico. Parte do mecanismo de reversão da hiporeatividade a agonistas -adrenérgicos, após inibição da NOS-1, se deve a redução na formação de GMPc. No entanto, a reversão da hiporeatividade vascular a agentes -adrenérgicos durante a sepse pelo 7-NI parece ser independente do aumento nos níveis de cAMP. As alterações promovidas pelo NO proveniente da NOS-1 no início da sepse estão relacionadas com a instalação da hipotensão, disfunção vascular, alterações na glicemia e nos níveis de leucócitos sanguíneos. A redução do conteúdo enzimático da NOS-1, reduz ou abole as alterações patológicas induzidas pela sepse. Nosso trabalho demonstra que o NO proveniente da NOS-1 participa ativamente na disfunção vascular promovida pela sepse. Several studies have shown that overproduction of NO, associated with the increased expression of NOS-2, contributes to the hemodynamic changes observed in sepsis. However, inhibition of NOS-2 does not reverse hypotension, hyporesponsiveness to vasoconstrictor and does not influence the survival of septic animals. Therefore, we decided to investigate the role of NO derived from the neuronal isoform of nitric oxide synthase (NOS-1) on the reactivity to vasopressor agents and the progression of sepsis as well as the effect of opioid agonists on parameters commonly evaluated in this pathology. Our results demonstrate that septic animals are sensitive to analgesia with opioids in the pain model of thermal stimulation. In addition, opioids reduced the hypotension and vascular hyporesponsiveness induced by sepsis. When administered in low doses these drugs did not affect the survival of septic animals, whereas higher doses increased the mortality. The inhibition of NOS-1 improved the vascular reactivity to and -adrenergic agonists, both in early and late phase of sepsis. The expression of NOS-1 and soluble guanylate cyclase was increased in vascular smooth muscle layers of aorta and mesenteric vascular bed and both enzymes interact physically in the mesenteric vascular bed in late phase of sepsis. At least part of the mechanism of the recovery in the responsiveness to adrenergic agonists, after inhibition of NOS-1, is due to the reduced formation of cGMP. The changes promoted by NOS-1-derived NO in early sepsis are associated with the onset of hypotension, vascular dysfunction and changes in blood glucose levels and blood leukocytes. The reduction in the NOS-1 enzyme content reduces or abolishes the pathological changes induced by sepsis. Our work demonstrates that NOS-1-derived NO plays a role in promoting vascular dysfunction in sepsis.

Introdução: O Diabetes Mellitus é doença que apresenta elevada incidência e prevalência na população em diversas partes do mundo. Estudos experimentais sugerem que o estresse oxidativo esteja envolvido na patogênese e na progressão dela. Objetivo: Investigar os efeitos da utilização exógena do antioxidante orgoteína (SOD Cu/Zn) sobre o estresse oxidativo, ativação do fator de transcrição nuclear kappa B (NFκB) e expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) hepática no modelo experimental de diabetes mellitus (DM). Métodos e Resultados: Foram utilizados 28 ratos machos Wistar, divididos em quatro grupos: controle (CO), controle tratados com orgoteína (CO+ORG), diabéticos (DM) e diabéticos tratados com orgoteína (DM+ORG). A dose utilizada da ORG (orgoteína ®) foi de 13 mg/Kg de peso corporal durante os sete últimos dias de experimento através de injeção subcutânea. O DM foi induzido por injeção de estreptozotocina (i.p.,70 mg/kg) e, após sessenta dias, foi avaliada a lipoperoxidação hepática através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS- nmoles/mg de proteína), a atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT-pmoles/mg de proteína), superóxido dismutase (SOD-U/mg de proteína) e glutationa peroxidase (GPx- nmoles/mg de proteína). Também foi realizada a medida de nitritos e nitratos (mM de NO2 e NO3). As expressões da p65 do NFκB e da iNOS foram avaliadas pela técnica de Western blot e quantificadas por densitometria em relação à percentagem do controle. Resultados: Houve aumento na lipoperoxidação hepática no grupo DM e redução significativa no grupo DM+ORG (0,36±0,15 vs 0,18±0,04; p

Outra Agência As lesões periapicais desenvolvem-se como uma resposta do hospedeiro frente às infecções endodônticas. A óxido nítrico sintase (NOS) e a NADPH oxidase são enzimas responsáveis por gerarem espécies reativas de oxigênio e nitrogênio cuja principal ação, entre muitas, relaciona-se à resistência contra patógenos. Essas enzimas são produzidas por fagócitos e outros tipos celulares. Nesse estudo, avaliaram-se os aspectos imunológicos e histológicos da lesão periapical induzida em camundongos C57BL/6 selvagem, iNOS-/- e PHOX-/-. Os resultados mostraram que os animais deficientes da iNOS expressam elevados níveis IL-1, TNF-, RANK, RANKL e MCP-1 comparado àqueles deficientes da PHOX e o selvagem. A reabsorção óssea apical foi maior nos camundongos iNOS-/- comparados aos outros grupos estudados. Observou-se discreto infiltrado inflamatório nos camundongos selvagens e PHOX-/-, enquanto os camundongos iNOS-/- apresentaram intenso infiltrado mononuclear e polimorfonuclear. Avaliou-se também, a presença de linfócitos T na lesão periapical e na medula óssea adjacente em três tempos operatórios diferentes: 3, 7 e 14 dias após a indução da lesão periapical. Comprovou-se a presença de linfócitos T expressando mRANKL, 3 e 7 dias após o procedimentos operatórios, mas não no 14º dia. Por sua vez, na medula óssea, linfócitos T mRANKL+ foram encontradas em todos os tempos operatórios. Detectaram-se, também, fibroblastos e osteoblastos expressando mRANKL 3 dias após a indução da lesão periapical. Os resultados sugerem que os linfócitos T, fibroblastos e osteoblastos parecem ser as células responsáveis pela expressão de mRANKL e, conseqüentemente, pela diferenciação dos osteoclastos nos primeiros momentos do desenvolvimento da lesão periapical. Ademais, os microrganismos e seus subprodutos presentes nas infecções radiculares dos animais C57BL/6 selvagens e PHOX-/- podem interagir com receptores da resposta imune inata, induzindo a expressão da iNOS e a produção de NO, que podem controlar o processo infeccioso nos tecidos perirradiculares. As espécies reativas de oxigênio não parecem cumprir um papel importante na resistência contra infecções bacterianas nesse modelo de estudo já que as características imunológicas e histológicas da lesão periapical nos animais deficientes da PHOX são semelhantes ao camundongo C57BL/6. The development of periapical lesions is a consequence of host response against an endodontic infection. The nitric oxide synthase and the NADPH oxidase are responsible for generating reactive oxygen and nitrogen intermediates whose main action, amongst many others, is the resistance against pathogens. Phagocytes and other cellular types can produce these enzymes. The aim of this study was to investigate the immunologic and histological aspects of periapical lesion in C57BL/6 wild-type mice, iNOS-/- and PHOX-/-. The results showed that the iNOS-/- mice expressed high levels of IL-1, TNF-, RANK, RANKL and MCP-1 when compared to those with a deficiency in NADPH oxidase and to the wild-type one. The apical thickening of the periodontal ligament was greater in the iNOS-/- mice when compared with the other groups under study, indicating a greater bone resorption. A mild inflammatory infiltrate was noticed in the wild-type mice, as well as in the PHOX-/- ones, whereas the iNOS-/- mice had an intense mononuclear and polymorphonuclear infiltrate. We also evaluated the presence of T cells in the periapical lesion and in the adjacent bone marrow in three different post-operative stages: 3, 7, and 14 days after the induction of periapical lesion. There were T cells expressing mRANKL on day 3 and 7 after the operative procedures, but not on the 14th day. In turn, mRANKL+ T cells were found in the bone marrow in all pos-operative times. Fibroblasts and osteoblast expressing mRANKL were also detected 3 days after the periapical lesion induction. These findings suggest that the T cells, osteoblasts and the fibroblasts seem to be the cells responsible for the expression of mRANKL and, therefore, for the mediation of osteoclast differentiation in the earlier stages of the periapical lesion development. Furthermore, the microorganisms and their products present in the root canal infections of the C57BL/6 wild-type mice as well as in the PHOX-/- animals may interact with receptors of the innate immune response, inducing the expression of iNOS and the production of NO, which may control the infectious process in the periradicular tissues. The reactive oxygen intermediates seem not to play an important role in the resistance against bacterial infections in this model of study since the immunological and histological characteristics of the periapical lesion in PHOX-deficient animals are similar to those found in the C57BL/6 mice.

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: As óxido nítrico sintases (NOS) são divididas em dois grandes grupos de enzimas, NOS induzível (iNOS) e NOS constitutivas (cNOS). Embora o óxido nítrico (NO) seja um importante mediador de defesa do organismo, a produção excessiva de NO está envolvida na patogênese de muitas doenças inflamatórias e metabólicas. Alguns estudos demonstram que o óxido nítrico exógeno e o NO produzido pela iNOS pode induzir resistência à insulina em músculo e desempenha um papel importante na hiperglicemia de jejum. Este estudo teve como objetivo sintetizar e investigar o efeito de um potente e seletivo inibidor de atividade da iNOS, o Iodato de S-Metilisotiouréia (I-SMT) 5 mg/kg por dia, na hiperglicemia de jejum e na resistência à insulina em um modelo de obesidade induzida por dieta hiperlipídica. Foram observados os parâmetros metabólicos e de sinalização celular da Proteína quinase B/Akt (Akt) e os resultados fornecem evidências de que o grupo tratado com I-SMT foi protegido contra o desenvolvimento de resistência à insulina, e intolerância à glicose induzida por dieta hiperlipídica. Portanto, propomos que potentes inibidores farmacológicos, com seletividade significativa pela iNOS podem representar uma nova abordagem terapêutica para o tratamento da resistência à insulina e suas complicações como o diabetes tipo 2. Abstract: Nitric oxide synthase (NOS) has been divided into two major sub-enzymes, inducible NOS (iNOS) and constitutive NOS (cNOS). Although nitric oxide (NO) is an important defense mediator, the excessive production of NO has been involved in the pathology of many inflammatory and metabolic diseases. Some studies demonstrate that exogenous nitric oxide (NO) and the NO produced by iNOS can induce insulin resistance in muscle and plays an important role in fasting hyperglycemia. This study investigates the effect of a potent and selective iNOS activity inhibitor, the S-Methylisothiourea Iodide (SMT-I) 5 mg/kg per day, in fasting hyperglycemia and insulin resistance in diet-induced obesity model. We observed the metabolic parameters and Akt signalization and these findings provide evidence that the SMT-I treated group are protected against the development of insulin resistance, glucose intolerance and diet-induced obesity. Therefore, we propose that highly selective inhibitors of iNOS activity may represent a novel therapeutic approach for the therapy of insulin resistance and its complications as type 2 diabetes. Mestrado Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento Mestre em Fisiopatologia Médica

O nitric oxide (NO, óxido nítrico) é um mediador endógeno vasoativo que contribui para a homeostase vascular pulmonar. O NO é produzido por três isoformas das nitric oxide synthases (NOS, óxido nítrico sintases)-NOS neuronial (nNOS); NOS induzida (iNOS); e NOS endotelial (eNOS)-estando as três presentes no pulmão. Estudos que utilizaram inibidores farmacológicos ou camundongos knockout têm demonstrado que o NO derivado da eNOS desempenha importantes papéis ao modular o tônus vascular pulmonar e atenuar a hipertensão pulmonar. Por outro lado, estudos focados no papel da iNOS têm mostrado que essa isoforma contribui para a fisiopatologia da lesão pulmonar aguda e da síndrome do desconforto respiratório agudo. Esta revisão objetivou delinear o papel desempenhado pelo NO no controle da circulação pulmonar, tanto em condições fisiológicas como fisiopatológicas. Além disso, revisamos as evidências de que a via L-arginina-NO-guanosina monofosfato cíclico seja um importante alvo farmacológico para a terapia de doenças vasculares pulmonares. Nitric oxide (NO) is an endogenous vasoactive compound that contributes to pulmonary vascular homeostasis and is produced by three nitric oxide synthase (NOS) isoforms-neuronal NOS (nNOS); inducible NOS (iNOS); and endothelial NOS (eNOS)-all three of which are present in the lung. Studies using pharmacological inhibitors or knockout mice have shown that eNOS-derived NO plays an important role in modulating pulmonary vascular tone and attenuating pulmonary hypertension. However, studies focusing on the role of iNOS have shown that this isoform contributes to the pathophysiology of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome. This review aimed at outlining the role played by NO in the control of pulmonary circulation, both under physiological and pathophysiological conditions. In addition, we review the evidence that the L-arginine-NO-cyclic guanosine monophosphate pathway is a major pharmacological target in the treatment of pulmonary vascular diseases.