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Agradecimentos: This study was supported by Sao Paulo Research Foundation (FAPESP - grants 2017/19674-2, 2017/21801-2), National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) and Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Brasil (CAPES) - Finance Code 001 Abstract: Culturing bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) is a key point in different fields of research, including tissue engineering and regenerative medicine and studies of the bone marrow microenvironment. However, isolating and expanding murine BM-MSCs in vitro has challenged researchers due to the low purity and yield of obtained cells. In this study, we aimed to evaluate five different protocols to culture murine BMMSCs in vitro. Methods: All protocols were based on the adhesion capacity of BM-MSCs to the tissue culture plastic surface and varied in the types of plate, culture media, serum, additional supplementation and initial cell density. Flow cytometry analysis was used to investigate lineage purity after expansion. Results: The expression of CD45 and CD11b was detected in the cultures generated according to all protocols, indicating low purity with the presence of hematopoietic cells and macrophages. The cellular growth rate and morphology varied between the cultures performed according to each protocol. Cells cultured according to protocol 5 (8 £ 107 cells/plate, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) culture medium during first passage and then Iscove's Modified Delbecco's Medium (IMDM) culture medium, both supplemented with 9% fetal bovine serum, 9% horse serum, 12mM L-glutamine) presented the best performance, with a satisfactory growth rate and spindle-shape morphology. Conclusion: Our results point out that the purity and satisfactory growth rate of murine BMMSC cultures are not easily achieved and additional approaches must be tested for a proper cell expansion FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO (FAPESP) CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO (CNPQ) COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR (CAPES) Fechado

ilstraciones, fotografías, graficas En el presente trabajo se evaluó la supervivencia de la línea celular SiHa al ser irradiada con una fuente radiactiva de Iridio 192 (Ir-192), para esto se planteó y desarrolló la siguiente metodología. En la primera fase se realizaron los controles de calidad asociados a la actividad de la fuente, los tiempos de tránsito y la verificación de la dosis a entregar. Se verificó la actividad de la fuente obteniendo un error del 0.9104% y el tiempo de tránsito con un error de 3.15%, además de verificar y corregir una subdosificación del 15% de la dosis al momento de irradiar los cultivos celulares. En la segunda fase de la metodología se obtuvo una curva de supervivencia celular a partir del ensayo por MTT, para diferentes dosis irradiadas, obteniendo un comportamiento exponencial decreciente acorde a lo mostrado en la literatura; se realizaron también ensayos clonogénicos para determinar la fracción de supervivencia de las células, pero los resultados no fueron concluyentes. En la tercera y última fase se irradiaron cultivos celulares con dos de los esquemas de irradiación más usados en los procedimientos de braquiterapia del Instituto Nacional de Cancerología. El Esquema 1 con dosis de 5.5 Gy en 5 fracciones y el Esquema 2 con dosis de 7 Gy en 4 fracciones, obteniendo una menor supervivencia celular con el Esquema 2. (Texto tomado de la fuente) In the present work, the survival of the SiHa cell line when irradiated with a radioactive source of Iridium 192 (Ir-192) was evaluated, for which the following methodology was proposed and developed. In the first phase, quality controls associated with the activity of the source, transit times and verification of the dose to be delivered were carried out. The activity of the source was verified, obtaining an error of 0.9104% and the transit time with an error of 3.15%, in addition to verifying and correcting an underdosage of 15% of the dose at the time of irradiating the Cell cultures. In the second phase of the methodology, a cell survival curve was obtained from the MTT assay, for different irradiated doses, obtaining a decreasing exponential behavior according to what is shown in the literature; clonogenic assays were also performed to determine the survival fraction of the cells, but the results were inconclusive. In the third and final phase, cell cultures were irradiated with two of the most widely used irradiation schemes in brachytherapy procedures at the National Institute of Cancerology. Scheme 1 with a dose of 5.5 Gy in 5 fractions and Scheme 2 with a dose of 7 Gy in 4 fractions, obtaining a lower cell survival with Scheme 2. Maestría Magíster en Física Médica Radiobiología

Resumen Objetivos . Describir la actividad antimicrobiana in vitro del extracto metanólico de las hojas de Bixa orellana L. contra las bacterias anaerobias asociadas a la vaginosis bacteriana y Lactobacillus spp. Materiales y métodos . Se incluyeron en el estudio ocho cepas de referencia ATCC; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula y Lactobacillus crispatus, y 22 aislamientos clínicos; once aislados de Gardnerella vaginalis y once aislados de Lactobacillus. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó mediante el método de difusión en agar. La concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración bactericida mínima (CBM) fueron determinadas utilizando el método de dilución en agar y un método de dilución modificado, respectivamente. Resultados . Todas las cepas de referencia ATCC tuvieron un alto nivel de susceptibilidad al extracto, con excepción de P. vibia, V. parvula y L. crispatus. Interesantemente, los aislamientos clínicos de G. vaginalis y la cepa ATCC de G. vaginalis fueron los más susceptibles al extracto dados los bajos valores de CMI (1,0 - 2,0 mg/mL) y CBM (1,0 - 4,0 mg/mL), mientras que, los aislamientos clínicos de Lactobacillus spp. y la cepa ATCC de L. crispatus fueron los menos susceptibles debido a los altos valores de CMI (32,0 mg/mL) y CBM (≥ 32,0 mg/mL). Conclusiones . Los experimentos in vitro sugieren que el extracto posee propiedades antibacterianas selectivas dada su alta actividad contra bacterias anaerobias asociadas a vaginosis bacteriana y baja actividad contra especies de Lactobacillus. ABSTRACT Objective. To describe the in vitro antimicrobial activity of the methanolic extract of Bixa orellana L. leaves against anaerobic bacteria associated to bacterial vaginosis and Lactobacillus spp. Materials and methods. Eight ATCC reference strains; Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Peptococcus niger, Peptostreptococcus anaerobius, Mobiluncus curtisii, Atopobium vaginae, Veillonella parvula, and Lactobacillus crispatus, and twenty-two clinical isolates; eleven Gardnerella vaginalis and eleven Lactobacillus strains, were included in the study. The antimicrobial susceptibility was determined by the agar diffusion method. The minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) were determined by using agar dilution and a modified dilution plating method, respectively. Results. All ATCC reference strains showed high levels of susceptibility to the extract, except P. vibia, V. parvula and L. crispatus. Interestingly, all G. vaginalis clinical isolates and the G. vaginalis ATTC strain were the most susceptible to the extract, given their low MIC (1.0 - 2.0 mg/mL) and MBC (1.0 - 4.0 mg/mL) values, whereas, the Lactobacillus spp. clinical isolates and the L. crispatus ATCC strain were the least susceptible bacteria given their high MIC (32.0 mg/mL) and MBC (≥ 32.0 mg/mL) values. Conclusions. In vitro experiments suggest that the extract possesses selective antimicrobial properties given its high activity against bacterial vaginosis-associated anaerobic bacteria and low activity against Lactobacillus species.

Resumo Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 µg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

Background: Vegetable oils have antimicrobial activity and promote cell proliferation. Sunflower oil is used as an alternative for treating skin wounds, particularly in underdeveloped or developing countries. Objective: To characterize sunflower oil and evaluate the in vitro effects on cell proliferation and antimicrobial activity. Methodology: The study was carried out using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) analysis and cell proliferation and antimicrobial activity tests. Results: The chromatographic analysis identified the main components of sunflower oil, namely: unsaturated fatty acids (82.2%) with linoleic (47.8%), oleic (28.7%), and linolenic (3.9%) acids as the main lipids, followed by saturated (12.70%), palmitic (8.8%) and stearic (3.6%) acids. A difference (p < 0.001) in cell proliferation was found between treatments with sunflower oil (100 and 10 μg/ ml) and the negative controls. It failed in antimicrobial activity against Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, and Klebsiella pneumoniae. Conclusion: Sunflower oil contains a high concentration of essential fatty acids and promotes cell proliferation but fails to inhibit bacterial activity., Marco contextual: Los aceites vegetales tienen acción antimicrobiana y promueven la proliferación celular. El aceite de girasol se utiliza como alternativa para tratar las heridas cutáneas, especialmente en los países subdesarrollados o en vías de desarrollo. Objetivo: Caracterizar el aceite de girasol y evaluar los efectos in vitro sobre la proliferación celular y la actividad antimicrobiana. Metodología: Análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas, pruebas de proliferación celular y actividad antimicrobiana. Resultados: En el análisis cromatográfico del aceite de girasol, se identificaron los compuestos mayoritarios - ácidos grasos insaturados (82,2%), los principales lípidos son el ácido linoleico (47,8%), oleico (28,7%) y linolénico (3,9%), seguidos del ácido saturado (12,70%), palmítico (8,8%) y esteárico (3,6%). Hubo una diferencia (p < 0,001) entre los tratamientos con aceite de girasol (100 y 10 μg/ml) y los controles negativos en la proliferación celular. Actividad antimicrobiana ineficaz contra las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusión: La composición del aceite de girasol mostró una alta concentración de ácidos grasos esenciales, promovió la proliferación celular, pero no inhibió la actividad bacteriana., Enquadramento: Óleos vegetais apresentam ação antimicrobiana e promovem a proliferação celular. O óleo de girassol é usado como alternativa para o tratamento de feridas cutâneas, especialmente nos países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Objetivo: Caracterizar o óleo de girassol e avaliar os efeitos in vitro na proliferação celular e na atividade antimicrobiana. Metodologia: Análises por cromatografia a gás acoplada à espectrometria de massas, testes de proliferação celular e atividade antimicrobiana. Resultados: Na análise cromatográfica do óleo de girassol identificaram-se os compostos maioritários - ácidos gordos insaturados (82,2%) tendo como principais lípidos os ácidos linoleico (47,8%), oleico (28,7%) e linolênico (3,9%), seguidos pelos ácidos saturados (12,70%), palmítico (8,8%) e esteárico (3,6%). Houve diferença (p < 0,001) entre os tratamentos com óleo de girassol (100 e 10 μg/ml) e controlos negativos na proliferação celular. Ineficácia na atividade antimicrobiana frente às bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis e Klebsiella pneumoniae. Conclusão: A composição do óleo de girassol mostrou elevada concentração de ácidos gordos essenciais, promoveu proliferação celular, mas não inibiu atividade bacteriana.

ilustraciones, graficas La terapia adoptiva de células tiene el potencial de aumentar la inmunidad antitumoral, al modificar las células in-vitro para expandir linfocitos que reconozcan y ataquen el tumor. La capacidad funcional y sobrevida de las células transferidas al paciente dependerá de las subpoblaciones de memoria que sean expandidas en el laboratorio, por lo que la obtención de células de memoria poco diferenciadas es deseable. El objetivo principal de este trabajo fue determinar una estrategia de expansión in-vitro de linfocitos T CD4 stem de memoria humanos. Partiendo de células vírgenes estimuladas con un agente policlonal y adicionando diferentes combinaciones de citoquinas de la familia gamma común, se encontró que la combinación de IL-7, IL-15 e IL-21 o IL-7 e IL-21 fueron los cócteles que produjeron una mayor cantidad de células con fenotipo stem de memoria, medido por citometría de flujo. Adicionalmente, a través de la medición de proteínas de membrana y análisis in-sillico, se estableció una estrecha relación de los linfocitos T stem de memoria con el programa de diferenciación de linfocitos T foliculares, lo que consideramos contribuye a un mejor entendimiento de los procesos que subyacen la generación y mantenimiento de la memoria y, por ende, puede mejorar las estrategias actuales de expansión de linfocitos T con fines de inmunoterapia. (Texto tomado de la fuente) Adoptive cell therapy has the potential to increase antitumor immunity by modifying cells in-vitro to expand lymphocytes that recognize and attack the tumor. The functional capacity and survival of the cells transferred to the patient heavily depends on the memory subpopulations that are being expanded in the laboratory, hence, obtaining early memory cells is desirable. The main objective of our work was to determine a strategy for in-vitro expansion of human stem cell-like memory T CD4 lymphocytes. Starting from naive cells, stimulated with a polyclonal agent supplemented with different combinations of cytokines from the common gamma family, we found that the combination of IL-7, IL-15 and IL-21 or IL-7 and IL-21 were the cocktails that produced a greater number of cells with a stem memory phenotype, measured by flow cytometry. Additionally, through the measurement of membrane proteins and in-silico analysis, a close relationship between stem cell-like memory and the follicular helper T cells differentiation program was established, which we believe contributes to a better understanding of the processes that underlie the generation and maintenance of memory and, therefore, may improve current strategies of expansion of T cells for immunotherapy purposes. Maestría Magíster en Inmunología Medicina Traslacional

Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T17:27:44Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1533190 bytes, checksum: 3f13f33cb0dc6d069372f6054204cad7 (MD5) Rejected by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br), reason: on 2022-07-29T21:57:48Z (GMT) Submitted by Nathalie Abreu (abreu.nathalie@yahoo.com.br) on 2022-07-29T23:43:28Z No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Approved for entry into archive by Rosalvo Andrade (rosalvo_andrade@servidor.uepb.edu.br) on 2022-07-30T00:03:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Made available in DSpace on 2022-08-01T13:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Termo de Depósito BDTD.pdf: 204564 bytes, checksum: e033ca68c8b8b4d9110281e4a860d81e (MD5) DS - Nathalie Murielly Rolim de Abreu.pdf: 1540982 bytes, checksum: 59d6185499d20d039a3c3f8e55e02cfb (MD5) Previous issue date: 2022-07-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Objective: To analyze the biomechanical performance of four direct resin solutions in non-carious cervical lesions (NCCL), when submitted or not to the biocorrosive process. Method: Two in vitro studies were carried out, based on 4 resinous groups: Tetric N-Ceram® - RN Group; Tetric N-Ceram® Bulk Fill-RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®-RFN; and Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®-RBN, and a non-ST-restorative treatment group was added for the 2nd study. Eighty circular specimens were made for the test of roughness (ER) and weight (EP), and forty rectangular specimens for the test of flexural strength (RF), divided into 4 resinous groups. In the 2nd study, NCCLs were made in 80 bovine teeth distributed in the 4 restorative groups, and the ST. All were subdivided, and half of them submerged in a biocorrosive challenge (c). ER and EP analyzes were performed for the circular specimens and RF for the rectangular specimens. All bovine specimens were subjected to mechanical (300,000 cycles, 50 N, 2 Hz) and thermal (5ºC, 37ºC and 55ºC, 4,000 cycles) simulated aging and a constant compressive load applied to the palatal surface at 1mm/min until failure. /break (RFR). The results of the RE, EP and RF were submitted to statistical analysis by one-way ANOVA and Tukey post hoc, to analyze the group effect and the paired t test to analyze the initial and final means (ER and EP). The RFR (material and medium effect) was evaluated by the two-way ANOVA test, with Tukey's post hoc, and the failure mode by the Fisher's exact test. All at a 5% statistical significance level. Result: There was an increase in roughness in the RB group when in acidified medium (p=0.008). There were no differences in weight change between the studied groups. The RFN group in the salivary medium showed the highest flexural strength (p=0.037), however it showed a significant reduction when submitted to the acid challenge. The RBN group presented the best fracture resistance regardless of the medium, while the ST group had the worst. Conclusion: Low pH beverage negatively affects biomechanical properties of restorative materials in non-carious cervical lesions. Objetivo: Analisar o desempenho biomecânico de quatro soluções resinosas diretas em lesões cervicais não cariosas (LCNC), quando submetidos ou não ao processo biocorrosivo. Método: Foram realizados dois estudos in vitro, baseado em 4 grupos resinosos: Tetric N-Ceram® - Grupo RN; Tetric N-Ceram® Bulk Fill- RB; Tetric N-Flow® + Tetric N-Ceram®- RFN; e Tetric N-Ceram® Bulk Fill + Tetric N-Ceram®- RBN, e um grupo sem tratamento restaurador-ST, foi adicionado para o 2º estudo. Foram confeccionados oitenta corpos de prova circulares para o ensaio de rugosidade (ER) e peso (EP), e quarenta retangulares para o ensaio de resistência flexural (RF), divididos nos 4 grupos resinosos. No 2º estudo foram confeccionadas LCNC em 80 dentes bovinos distribuídos nos 4 grupos restauradores, e o ST. Todos foram subdivididos, e metade deles submersos em um desafio biocorrosivo (c). Foram realizadas análises ER, EP para os corpos de prova circulares e da RF para os retangulares. Todos os espécimes bovinos foram submetidos ao envelhecimento simulado mecânico (300.000 ciclos, 50 N, 2 Hz) e térmico (5ºC, 37ºC e 55ºC, 4.000 ciclos), e a uma carga compressiva constante aplicada na superfície palatina a 1mm/min até a falha/ruptura (RFR). Os resultados dos ER, EP e RF foram submetidos a análise estatística por anova oneway e post hoc Tukey, para análise do efeito do grupo e o teste t pareado para análise das médias iniciais e finais (ER e EP). A RFR (efeito do material e do meio) foi avaliada pelo teste anova two way, com post hoc de Tukey, e o modo de falha pelo teste exato de Fisher. Todos a um nível de significância estatística de 5%. Resultado: Houve um aumento da rugosidade no grupo RB quando em meio acidificado (p=0,008). Não houve diferenças na alteração de peso entre os grupos estudados. O grupo RFN no meio salivar apresentou a maior resistência flexural (p=0,037), contudo apresentou significativa redução quando submetido ao desafio ácido. O grupo RBN apresentou a melhor resistência a fratura independente do meio, enquanto que o ST a pior. Conclusão: Bebida de baixo pH afeta negativamente propriedades biomecânicas de materiais restauradores em lesões cervicais não cariosas.

Isolated substances and those organically synthesized have stood out over the years for their therapeutic properties, including their antibacterial activity. In this context, the aim of this research was to investigate the pharmacological properties of 2-(2 hydroxyethylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-1,4-dihydro-1,4-naphthalenedione, 2-(2- hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4] naphthoquinone and 2-(3-hydroxypropylamine)-3-(3-methyl-2-butenyl)-[1,4]naphthoquinone using computational prediction models, to evaluating the in vitro antibacterial and modulatory activity of these compounds against bacterial ATCC strains and clinical isolates, in addition to analyzing the inhibitory effect on the efflux pump functioning of these substances in strains of multiresistant Staphylococcus aureus. The substances were synthesized from 2-hydroxyquinones, lapachol and nor-lapachol obtaining the corresponding 2-methoxylated derivatives via dimethyl sulfate alkylation in a basic medium, these then reacted chemoselectively with 2-ethanolamine and 3-propanolamine to form the corresponding amino alcohols. The antibacterial activity and modulatory activity of the substances were assayed by broth microdilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). To verify the effect of reducing the MIC of the ethidium bromide and the antibiotic, inoculums obtained from plates incubated in a bacteriological oven for 24 hours at 37ºC with the stock peaking were used. After this period inoculums were used in saline solution according to Mcfarland 0.5 corresponding to 105UFC. The results of the tests were done in triplicates and as geometric mean. In the statistical analysis, oneway ANOVA was used, followed by the Tukey hoc post test using GraphPad Prism 5.0.The molecular structures were analyzed using the ChEMBL database to predict possible pharmacological targets and soon after underwent a virtual structure-based analysis (docking)., which pointed to the molecule 2- (2-hydroxy-ethylamine)-3-(2-methyl-propenyl)-[1,4]naphthoquinone as a probable antibacterial agent for the proteins Replicative DNA helicase and RecA. The MICs of the substances were not clinically significant, however, the association with gentamicin and amikacin reduced the MICs of these antibiotics with significance of p < 0.0001. against Staphylococcus aureus strains carrying the NorA efflux pump mechanism, a significant reduction (p < 0,0001) of their MICs was observed when the substances were associated with norfloxacin and ethidium bromide, with this effect being attributed to efflux pump inhibition. Following a virtual analysis based on its structure (docking), information regarding the affinity of new ligands for the ABC efflux pump. The tested substances also demonstrated effectiveness at decreasing the MIC of erythromycin, tetracycline and mainly of ethidium bromide with MIC reduction up to 16x. In conclusion, the combination of these substances with antibiotics may be a therapeutic alternative to bacterial resistance and the reduction of side effects. Substâncias isoladas e sintetizadas organicamente têm se destacado ao longo dos anos por suas propriedades terapêuticas, incluindo sua atividade antibacteriana. Neste contexto, o objetivo desta pesquisa foi investigar as propriedades farmacológicas de 2-(2-hidroxietilamina)-3-(3-metil-2-butenil)-1,4-di-hidro-1,4-naftalenodiona, 2-(2-hidroxietilamina)-3-(2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona e 2-(3-hidroxi-propilamina)-3-(3- metil-2-butenil)-[1,4]naftoquinona por meio de modelos computacionais de predição, avaliar a atividade antibacteriana e moduladora in vitro dessas compostos contra cepas bacterianas ATCC e isolados clínicos, além de análisar o efeito inibidor sobre o funcionamento de bomba de efluxo dessas substâncias em cepas de Staphylococcus aureus multirresistentes. As substâncias foram sintetizadas a partir de 2-hidroxiquinonas, lapachol e nor-lapacol obtendo os correspondentes derivados 2-metoxilados via alquilação de sulfato de dimetila em meio básico, estes então reagiram quimiosseletivamente com 2-etanolamina e 3-propanolamina para formar os correspondentes aminoálcoois . A atividade antibacteriana e a atividade moduladora das substâncias foram avaliadas pelo método de microdiluição em caldo para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). Para verificar o efeito de redução do CIM do brometo de etídeo e do antibiótico, foi utilizado inóculos obtidos de placas incubadas em estufa bacteriológica por 24h a 37ºC com o repique do estoque. Após esse período foi utilizado inóculos em solução salina de acordo com Mcfarland 0,5 que corresponde a 105UFC. Os resultados dos testes foram feitos em triplicatas e como média geométrica. Na análise estatística foi utilizada ANOVA de uma via, seguida do pos teste hoc Tukey usando GraphPad Prism 5.0. As estruturas moleculares foram analisadas usando o banco de dados ChEMBL para prever possíveis alvos e logo após passaram por uma análise virtual de estrutura (docking), que apontaram para a molécula 2-(2-hidroxi-etilamina)-3- (2-metil-propenil)-[1,4]naftoquinona como um provável agente antibacteriano para as proteínas Replicative DNA helicase e RecA. As CIMs das substâncias não foram clinicamente significativas, porém, a associação com gentamicina e amicacina reduziu as CIMs desses antibióticos com significância de p < 0,0001. Frente a cepas de Staphylococcus aureus que carregam o mecanismo de bomba de efluxo NorA, foi observada redução significativa (p < 0,0001) de suas CIMs quando as substâncias foram associadas à norfloxacina e ao brometo de etídio, sendo esse efeito atribuído à inibição da bomba de efluxo. Após uma análise virtual baseada em sua estrutura (docking), foram observadas informações sobre a afinidade de novos ligantes para a bomba de efluxo ABC. As substâncias testadas também demonstraram eficácia em diminuir a CIM de eritromicina, tetraciclina e principalmente do brometo de etídio com redução da CIM em até 16x. Em conclusão, a combinação dessas substâncias com antibióticos pode ser uma alternativa terapêutica para a resistência bacteriana e a redução dos efeitos colaterais.

Submitted by Viviana Loureiro Rocha (viviana.l.rocha@unesp.br) on 2022-06-14T23:19:09Z No. of bitstreams: 1 20220526 - MS Viviana Dissertação.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Approved for entry into archive by Elida Daniele de Antonio null (elida_daniele@btu.unesp.br) on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Made available in DSpace on 2022-06-15T13:21:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rocha_vl_me_bot.pdf: 1897902 bytes, checksum: 95263f6525579fbc7ecf4f064f2203d0 (MD5) Previous issue date: 2022-05-06 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A infecção pelo vírus de Epstein-Barr (EBV) está associada a alguns tipos de cânceres, como o linfoma de Burkitt (BL) e o carcinoma de nasofaringe (NPC). O EBV é ubíquo e infecta, de forma latente, a maioria da população adulta. A latência biológica do EBV é caracterizada por elevada restrição na expressão de produtos virais, sendo limitada a poucas proteínas e RNAs não codificantes, como os miR-BARTs. A superexpressão de miR-BART 7 no NPC regula a expressão do produto do gene supressor tumoral PTEN. O miR-BART 9, por sua vez, regula a expressão da oncoproteína viral LMP1 e de caderina E celular. A regulação da expressão destas proteínas sugere papel dos miR-BARTs 7 e 9 no fenômeno de transição epitelial-mesenquimal (EMT), importante para progressão de cânceres de origem epitelial. Dessa forma, este estudo tem como objetivo a criação de um modelo experimental para verificar o papel exercido por miR-BART 7 e miR-BART 9 na aquisição de características favoráveis a carcinogênese. O modelo estabelecido baseia-se em células de epitélio de nasofaringe infectadas com partículas virais selvagens ou mutadas para estes miRNAs. A construção deste modelo emprega a tecnologia CRISPR/Cas9 para edição do genoma do EBV em células Akata-EBV+. As células Akata-EBV+ com genoma selvagem ou mutado foram quimicamente tratadas para ativação de ciclo lítico, e produção de partículas virais. A validação foi realizada a partir da expressão de marcadores de ciclo lítico, BZLF1 e gp350, enquanto a quantificação das partículas produzidas foi realizada a partir de curva-padrão com o genoma B95-8. A infecção de células epiteliais de nasofaringe foi avaliada a partir da estimativa do número de cópias do genoma viral. As células Akata-EBV+ contendo os genomas com comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 apresentaram deficiência na produção de partículas virais quando comparadas as células contendo o genoma selvagem, enquanto na infecção de células epiteliais de nasofaringe, o comprometimento da expressão dos miR-BARTs 7 ou 9 influenciou positivamente, aumentando o número de cópias virais nas células infectadas com as versões editadas. Os dados apresentados demonstram estabelecimento de modelo experimental de estudo dos miR-BARTs do EBV, e indicam uma possível relação com eventos relacionados ao ciclo lítico do vírus. Epstein-Barr virus infection is associated with some types of cancers, such as Burkitt lymphoma (BL), and nasopharyngeal carcinoma (NPC). EBV is a ubiquitous virus, and infects, latently, the majority of adult population. The EBV latency is characterized by limited viral expression, expressing a few proteins and non-coding RNAs, such as miR-BARTs. The overexpression of EBV miR-BART 7 in NPC was associated with regulation of protein levels of PTEN suppressor gene. EBV miR-BART 9, on the other hand, regulates the expression of the LMP1 viral oncoprotein and the cellular E-cadherin. The regulation of these proteins suggests a role of miR-BARTs 7 and 9 in epithelial-mesenchymal transition (EMT), which is important for progression of epithelial cancers. This study aims to create an experimental model to verify the role played by miR-BART7 and miR-BART9 in acquisition of features favorable to carcinogenesis. The model established is based on immortalized nasopharynx epithelial cells infected with wild type or edited viral particles for these miRNAs. The construction of this model employs the CRISPR/Cas9 technology for the EBV genome editing in Akata-EBV+ cells. The EBV+ Akata cells with wild type or mutated genome were chemically treated to activate lytic cycle and viral particles production. The validation was performed evaluating the expression of lytic cycle markers, BZLF1 and gp350, while the quantification of the produced particles was performed using a B95-8 genome standard curve. The nasopharynx epithelial cells infection was evaluated from the estimate of the viral genome copy number. The Akata-EBV+ cells containing genomes with impaired expression of miR-BARTs 7 or 9 showed deficiency in the production of viral particles when compared to cells containing the wild type genome, while in nasopharynx epithelial cells infection, the impairment of expression of miR-BARTs 7 or 9 positively influenced, increasing the viral copy number in cells infected with the edited versions. The data presented demonstrate the establishment of an experimental model for the study of EBV miR-BARTs, and indicate a possible relationship with events related to the lytic cycle of the virus. CAPES: 88887.466765/2019-00 FAPESP: 17/23393-9

The aim of the present study was to evaluate the in vitro cytotoxicity, cytoprotection and morphological changes by SEM technique of MTA, MTA-HP and Biodentine, on fibroblast 3T3 cell line. MTA, MTA-HP, and Biodentine were disposed into teflon sterile discs and incubated in culture media for 24 hours to obtain elutes. Fibroblast 3T3 cells were cultured with the respective elutes and control group with culture medium. Cytotoxicity and cytoprotection assays were determined by MTT method. The results were statistically processed by Mann-Whitney (α=0.05) and Kruskal-Wallis analysis. Cells cultured in coverslips and treated with the elutes were submitted to fixation and dehydration process to evaluate morphological alterations by SEM technique. In cytotoxicity assay, cells treated with MTA, MTA HP and Biodentine showed viability above 95%, like control cells. In cytoprotection to the 3T3 cells, materials promoted at the same magnitude (p>0.05), with improved cell growth and were considered statistically different from the obtained for cells only treated with peroxide solution (positive control) (p=0.046). Also, viability results of the tested root canal materials were close to that of the negative control (cells treated only with culture medium) (p=0.05). No morphologic cell changes of 3T3 cells in contact with the endodontic materials were revealed by SEM technique. The bioceramic materials has demonstrated high bioactivity and biocompatibility, as presented in cytoprotection and morphological trials. El objetivo del presente estudio fue evaluar la citotoxicidad, citoprotección y cambios morfológicos in vitro por técnica SEM de MTA, MTA-HP y Biodentine, en la líneo celular de fibroblastos 3T3. MTA, MTA-HP y Biodentine se colocaron en discos estériles de teflón y se incubaron en medios de cultivo durante 24 horas para obtener eluidos. Las células de fibroblastos 3T3 se cultivaron con los eluidos respectivos y el grupo de control con medio de cultivo. Los ensayos de citotoxicidad y citoprotección se determinaron mediante el método MTT. Los resultados fueron procesados estadísticamente por Mann-Whitney (α=0,05) y análisis de Kruskal-Wallis. Las células cultivadas en cubreobjetos y tratadas con los eluidos fueron sometidas a proceso de fijación y deshidratación para evaluar alteraciones morfológicas por técnica SEM. En el ensayo de citotoxicidad, las células tratadas con MTA, MTA HP y Biodentine mostraron una viabilidad superior al 95 %, al igual que las células de control. En la citoprotección a las células 3T3, los materiales promovieron en la misma magnitud (p>0.05), con crecimiento celular mejorado y se consideraron estadísticamente diferentes a los obtenidos para las células tratadas únicamente con solución de peróxido (control positivo) (p=0.046). Además, los resultados de viabilidad de los materiales del conducto radicular probados fueron similares a los del control negativo (células tratadas solo con medio de cultivo) (p = 0,05). La técnica SEM no reveló cambios celulares morfológicos de las células 3T3 en contacto con los materiales endodónticos. Los materiales biocerámicos han demostrado una alta bioactividad y biocompatibilidad, tal como se presenta en los ensayos de citoprotección y morfológicos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade in vitro, citoproteção e alterações morfológicas pela técnica de MEV do MTA, MTA-HP e Biodentine, na linhagem celular de fibroblastos 3T3. MTA, MTA-HP e Biodentine foram dispostos em discos estéreis de teflon e incubados em meio de cultura por 24 horas para obtenção dos eluatos. Células de fibroblastos 3T3 foram cultivadas com os respectivos eluatos e o grupo controle com meio de cultura. Os ensaios de citotoxicidade e citoproteção foram determinados pelo método MTT. Os resultados foram processados ​​estatisticamente pela análise de Mann-Whitney (α=0,05) e Kruskal-Wallis. As células cultivadas em lamínulas e tratadas com os eluatos foram submetidas ao processo de fixação e desidratação para avaliação das alterações morfológicas pela técnica de MEV. No ensaio de citotoxicidade, as células tratadas com MTA, MTA HP e Biodentine apresentaram viabilidade acima de 95%, assim como as células controle. Na citoproteção das células 3T3, os materiais promoveram na mesma magnitude (p>0,05), com melhor crescimento celular e foram considerados estatisticamente diferentes do obtido para células tratadas apenas com solução de peróxido (controle positivo) (p=0,046). Além disso, os resultados de viabilidade dos materiais endodônticos testados foram próximos aos do controle negativo (células tratadas apenas com meio de cultura) (p=0,05). Nenhuma alteração morfológica das células 3T3 em contato com os materiais endodônticos foi revelada pela técnica de MEV. Os materiais biocerâmicos demonstraram alta bioatividade e biocompatibilidade, conforme apresentado em ensaios de citoproteção e morfológicos.

Orientador: José Luiz da Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aparecimento de Novas Substâncias Psicoativas (NSP) no mercado ilícito mundial cresceu significativamente desde os anos 2000. Apesar da queda no número de novas identificações anualmente, elas ainda causam severos casos de intoxicações, diversos deles fatais. O presente trabalho desenvolveu e validou um método para a análise de mais de 100 NSP e drogas de abuso convencionais em amostras de fluido oral (OF) e analisado por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). Foram coletadas 462 amostras em festas e festivais de música eletrônica em 3 estados brasileiros e analisadas com a metodologia desenvolvida. O 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA, 88%) ainda foi a substância mais identificada nas amostras, mas 39% das amostras continham alguma NSP. Cetamina (75%) foi a mais prevalente, seguido da metilona (15%) e N-etilpentilona (10%). Ainda assim, apenas 5% dos voluntários haviam reportado o consumo de alguma NSP. A ingestão de múltiplas substâncias foi muito prevalente, com 80% das amostras contendo duas ou mais substâncias. Este foi o primeiro dado publicado no Brasil contendo dados epidemiológicos do consumo de NSP através da análise de amostras biológicas em contexto recreacional. As amostras contendo catinonas sintéticas foram quantificadas usando microextração por sorvente empacotado (MEPS). Entre as 41 amostras, metilona, N-etilpentilona, eutilona, mefedrona e 4-CEC foram quantificadas. As amostras contendo LSD foram quantificadas, assim como seu principal produto de biotransformação, 2-oxo-3-hidroxi-LSD, com limite de detecção de 0,01 ng/mL. Este foi o primeiro dado publicado na literatura contendo quantificação de ambos analitos em amostras autênticas de fluido oral. Ainda, como forma de suprir a necessidade de obter mais informações sobre as NSP, foi realizado o ensaio de metabolismo in vitro do canabinóide sintético ADB-4en-PINACA usando microssomas hepáticos humanos (HLM) e analisado com espectrômetro de massas de alta resolução. Dos 11 metabólitos identificados in vitro, 7 foram confirmados em amostras de sangue e urina post mortem., sendo os metabólitos derivados de hidroxilação e hidroxilação seguida de hidrólise interna os mais intensos Abstract: New Psychoactive Substances (NPS) emergence of in the global illicit market has grown significantly since the 2000s. Despite the drop in the number of new identifications annually, they still cause severe cases of intoxication, many of them fatal. The present work developed and validated a method for the analysis of more than 100 NPS and conventional drugs of abuse in oral fluid (OF) samples and analyzed by liquid chromatography?tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). 462 samples were collected at parties and electronic music festivals in 3 Brazilian states and analyzed using the developed methodology. 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, 88%) was still the most identified substance in the samples, but 39% of them contained some NPS. Ketamine (75%) was the most prevalent, followed by methylone (15%) and N-ethylpentylone (10%). Even so, only 5% of the volunteers had reported some NPS consumption. Ingestion of multiple substances was very prevalent, with 80% of samples containing two or more substances. This was the first data published in Brazil containing epidemiological data on NPS consumption through the analysis of biological samples in a recreational context. Samples containing synthetic cathinones were quantified using microextraction by packed sorbent (MEPS). Among the 41 samples, methylone, N-ethylpentylone, euthylone, mephedrone and 4-CEC were quantified. Samples containing LSD were quantified, as well as its main biotransformation product, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, with limit of detection of 0.1 ng/mL. This was the first published data quantifying both analytes in authentic oral fluid samples. Also, to meet the need for more information regarding NPS, an in vitro metabolism assay of the synthetic cannabinoid ADB-4en-PINACA was performed using human liver microsomes (HLM) and analyzed with a high-resolution mass spectrometer. Of the 11 metabolites identified in vitro, 7 were confirmed in post mortem blood and urine samples, with the metabolites derived from hydroxylation and hydroxylation followed by internal hydrolysis being the most intense Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2018/11849-0 CAPES 88887.571786/2020-00

RESUMEN Introducción. Se han realizado con el fin de evaluar la estabilidad dimensional, cada grupo de estudio confecciona su propio aditamento con el fin de determinar si existe o no una variación dimensional de los diferentes materiales de impresión utilizados en la rehabilitación oral. Esta variación va a depender de distintos factores como el tiempo, el material, la temperatura, la humedad entre otros. Objetivo. En este sentido, el objetivo del estudio fue evaluar la estabilidad dimensional de la silicona de adición / polivinilsiloxano (VPS) y para ello se tendrá en cuenta el tiempo. Métodos. Se trata de un estudio experimental. La muestra estuvo conformada por un total de 50 modelos, 25 para VPS Y 25 para el grupo control cuyo material fue la silicona por condensación. Para realizar el estudio se confecciono un modelo maestro teniendo en cuenta 6 localizaciones y 5 periodos de tiempo donde elprimer grupo a los 0 minutos, el segundo grupo a los 20 minutos, el tercer grupo a la 1 hora, cuarto grupo a las 6 horas y el quinto grupo a las 24 horas, después de tomada la impresión. Resultados. Después de la toma de impresión cuando se contabiliza a los 0 minutos, a los 60 minutos, a las 6 horas y a las 24 horas se obtiene el estadístico t ≥ 2,1318 y p≤ 0,05 confirmando que se encuentran diferencias significativas entre las dos siliconas respecto a la variación dimensional. Conclusiones. Se concluye que existe una variación de la estabilidad dimensional al ser comparada con el grupo control como lo es la silicona por condensación.

Objective: Evaluate the cytotoxicity in human osteoblastic cells and antimicrobial activity in different root canal sealers in vitro. Methods: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer, and Bio-C Sealer were used in experimental groups, and AH Plus was used as a control. Human osteoblast-like cells and MTT quantitative colorimetric assay were used to evaluate cytotoxicity. Saos-2 cells were exposed to undiluted sealer extracts for 24 h. The supernatant was then collected and the formazan crystals resulting from MTT reduction were dissolved in pure dimethyl sulfoxide. Absorbance was measured in an automated spectrophotometer at a wavelength of 540 nm. Antimicrobial activity was analyzed by the direct contact test using a polymicrobial biofilm composed of Enterococcus faecalis, Candida albicans, and Streptococcus mutans. At 24, 48, and 72 h, colony-forming units were counted on agar plates. A nonparametric Kruskal-Wallis test was used for the statistical analysis. The level of significance was set at 5%. Results: AH Plus showed the lowest cytotoxicity after 24 h, with a significant difference in relation to BioRoot RCS and Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). There was no significant difference in cytotoxicity between TotalFill BC Sealer and Bio-C Sealer (p > 0.05). At 24 h, TotalFill BC Sealer and AH Plus showed the least microbial growth compared to Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusions: AH Plus had the lowest cytotoxicity. TotalFill BC Sealer and AH Plus yielded greater reductions in microbial counts in the first 24 h compared to Bio-C Sealer. Clinical Relevance: 2c. Objetivo: Evaluar in vitro la citotoxicidad en células osteoblásticas humanas y la actividad antimicrobiana de diferentes cementos obturadores de conductos radiculares. Materiales y métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer se utilizaron como grupos experimentales y AH Plus se utilizó como control. Se usaron células similares a osteoblastos humanos y ensayo colorimétrico cuantitativo MTT para evaluar la citotoxicidad. Las células Saos-2 se expusieron a extractos de cementos sin diluir durante 24 h. A continuación, se recogió el sobrenadante y los cristales de formazán resultantes de la reducción de MTT se disolvieron en sulfóxido de dimetilo puro. La absorbancia se midió en un espectrofotómetro automático con una longitud de onda de 540 nm. La actividad antimicrobiana se analizó mediante la prueba de contacto directo, utilizando una biopelícula polimicrobiana compuesta por Enterococcus faecalis, Candida albicans y Streptococcus mutans. A las 24, 48 y 72 h, se contabilizaron las unidades formadoras de colonias en placas de agar. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. El nivel de significación se fijó en el 5%. Resultados: AH Plus mostró la menor citotoxicidad después de 24 h, con una diferencia significativa en relación con BioRoot RCS y Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). No hubo diferencias significativas en la citotoxicidad entre TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer (p > 0.05). A las 24 h, TotalFill BC Sealer y AH Plus mostraron el menor crecimiento microbiano en comparación con Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusiones: AH Plus presentó la menor citotoxicidad. TotalFill BC Sealer y AH Plus produjeron mayores reducciones en los recuentos microbianos en las primeras 24 h en comparación con Bio-C Sealer. Relevancia Clínica: 2c. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade em células osteoblásticas humanas e a atividade antimicrobiana em diferentes cimentos endodônticos in vitro. Métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer foram usados nos grupos experimentais e o AH Plus foi usado como controle. Células semelhantes a osteoblastos humanos e ensaio colorimétrico quantitativo de MTT foram usados para avaliar a citotoxicidade. As células Saos-2 foram expostas a extratos de cimento não diluídos por 24 h. O sobrenadante foi então recolhido e os cristais de formazan resultantes da redução do MTT foram dissolvidos em dimetilsulfóxido puro. A absorbância foi medida em um espectrofotômetro automatizado em um comprimento de onda de 540 nm. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de contato direto utilizando um biofilme polimicrobiano composto por Enterococcus faecalis, Candida albicans e Streptococcus mutans. Em 24, 48 e 72 h, as unidades formadoras de colônias foram contadas em placas de ágar. O teste não paramétrico de Kruskal-Wallis foi utilizado para a análise estatística. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade após 24 h, com diferença significativa em relação ao BioRoot RCS e Bio-C Sealer (p ≤ 0,01). Não houve diferença significativa na citotoxicidade entre TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer (p > 0,05). Às 24 h, TotalFill BC Sealer e AH Plus apresentaram o menor crescimento microbiano em comparação com Bio-C Sealer (p 0,05). Conclusões: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade. TotalFill BC Sealer e AH Plus produziram maiores reduções na contagem microbiana nas primeiras 24 h em comparação com o Bio-C Sealer. Relevância Clínica: 2c.