La onicomicosis afecta a entre el 2 y el 30% de la población mundial; la biopsia ungueal facilita el diagnóstico y diferencia invasión de colonización. Evaluar la utilidad diagnóstica de la biopsia ungueal con coloración de PAS en las onicomicosis frente al examen directo con KOH, el cultivo y su combinación en un laboratorio de referencia de Colombia. Se incluyó a 66 pacientes, a quienes se les realizó lectura ciega e independiente de las tres pruebas; la utilidad se definió a partir de los resultados de validez (sensibilidad, especificidad, índice de Youden, cocientes de probabilidad), desempeño (valores predictores), eficiencia (proporción de pacientes correctamente diagnosticados) y reproducibilidad (índice kappa). La edad media de los pacientes fue 55 ± 16 años, el 76% fueron mujeres y el 66,7% (n = 44) de los exámenes directos con KOH resultaron positivos; para el cultivo, el 62,1% (n = 41) de las muestras fueron positivas y con la biopsia lo fueron el 56,1% (n = 37). Los principales agentes causales fueron mohos no dermatofitos en un 36,4% (n = 24) y las especies con la mayor frecuencia fueron Neoscytalidium dimidiatum (n = 11), Trichophyton rubrum (n = 11) y Candida parapsilosis (n = 13). La sensibilidad de la biopsia ungueal frente al KOH o el cultivo fue del 71%, la especificidad del 83%, el índice de Youden 0,54, el cociente de probabilidad positivo de 4,25, el cociente de probabilidad negativo de 0,35, el valor predictivo positivo el 92%, el valor predictivo negativo el 52%, la eficiencia el 74% y el coeficiente kappa 0,45. Al evaluar la biopsia solo en pacientes con onicólisis de la lámina ungueal superior al 50%, aumentaron todos los parámetros de utilidad diagnóstica. La utilidad global de la biopsia fue moderada para pacientes con mayor sintomatología, por lo que se recomienda su uso en presencia de onicólisis extensa y en los casos en los que se requiera discriminar colonización de invasión. Onychomycosis affects between 2% to 30% of the world population. Nail biopsy may help in making a diagnosis and can distinguish between invasion and colonisation. To evaluate the diagnostic usefulness of nail biopsy with Periodic acid–Schiff (PAS) staining for onychomycosis, compared to direct KOH examination, culture and its combination in a reference laboratory in Colombia. The study included 66 patients in whom a blind and independent reading of the three tests was performed. The usefulness was defined based on the validity (sensitivity, specificity, Youden's index, likelihood ratios), performance (predictive values) efficiency (proportion of correctly diagnosed patients), and reproducibility (kappa coefficient). The mean age of the patients was 55 ± 16 years, and included 76% women. The direct tests with KOH were positive in 66.7% (n = 44), 62.1% (n = 41) were positive with culture, and 56.1% (n = 37) with the biopsy. The main causal agents were non-dermatophytes moulds in 36.4% (n = 24). The most frequent species were Neoscytalidium dimidiatum (n = 11), Trichophyton rubrum (n = 11), and Candida parapsilosis (n = 13). The sensitivity of nail biopsy, when compared to the standard (KOH and/or culture), was 71%, specificity 83%, Youden's index 0.54, positive likelihood ratio 4.25, negative likelihood ratio 0.35, positive predictive value 92%, negative predictive value 52%, efficiency 74% and kappa coefficient 0.45. When biopsy was evaluated only in patients with onycholysis of the nail plate greater than 50%, all the parameters of diagnostic usefulness increased. The overall usefulness of the biopsy was moderate for patients with more severe symptomatology, which makes its use advisable in cases of extensive onycholysis, and when discriminating colonisation from invasion is required. [ABSTRACT FROM AUTHOR]