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Agradecimentos: This study was supported by Sao Paulo Research Foundation (FAPESP - grants 2017/19674-2, 2017/21801-2), National Council for Scientific and Technological Development (CNPq) and Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Brasil (CAPES) - Finance Code 001 Abstract: Culturing bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs) is a key point in different fields of research, including tissue engineering and regenerative medicine and studies of the bone marrow microenvironment. However, isolating and expanding murine BM-MSCs in vitro has challenged researchers due to the low purity and yield of obtained cells. In this study, we aimed to evaluate five different protocols to culture murine BMMSCs in vitro. Methods: All protocols were based on the adhesion capacity of BM-MSCs to the tissue culture plastic surface and varied in the types of plate, culture media, serum, additional supplementation and initial cell density. Flow cytometry analysis was used to investigate lineage purity after expansion. Results: The expression of CD45 and CD11b was detected in the cultures generated according to all protocols, indicating low purity with the presence of hematopoietic cells and macrophages. The cellular growth rate and morphology varied between the cultures performed according to each protocol. Cells cultured according to protocol 5 (8 £ 107 cells/plate, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) culture medium during first passage and then Iscove's Modified Delbecco's Medium (IMDM) culture medium, both supplemented with 9% fetal bovine serum, 9% horse serum, 12mM L-glutamine) presented the best performance, with a satisfactory growth rate and spindle-shape morphology. Conclusion: Our results point out that the purity and satisfactory growth rate of murine BMMSC cultures are not easily achieved and additional approaches must be tested for a proper cell expansion FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO (FAPESP) CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO (CNPQ) COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR (CAPES) Fechado

Introduction: The use of plants with various ethnomedicinal purposes is an ancestral practice and currently common in a vast part of the population of Bolivia.General objective: To identify if the extracts of both plants present in our environment have antimicrobial activity against pathogenic bacteria and to determine their toxicity through the bioassay of biological tests.Materials and Methods: Descriptive study; Universe, Wira Wira collected from Valle Alto in Cochabamba and Cerraja collected from Cercado; Sample, we obtained one kilogram of each, Wira Wira and Cerraja randomly; Methods, different techniques were used to extract the active ingredients, biological tests were performed to determine their toxicity and antimicrobial activity was determined by the agar diffusion method.Results: Wira Wira demonstrated antimicrobial activity with 4 extracts; stem alcoholic, flower and alcoholic depleted of leaves against E. faecalis and S. aureus, and aqueous of leaves against P. aeruginosa and S. aureus. On the other hand, there was no evidence of antibacterial activity with the cerraja extracts.Conclusions: Wira Wira is a candidate for further studies aimed at the identification of the pure active compound (s) with antibacterial activity, all this backed up by the positive results in the agar diffusion tests grown with pathogenic bacteria.Unlike the results that demonstrate the antibacterial activity of the Cerraja in research carried out in other parts of the world, it is not the case of the one in our territory, whose extracts did not present any antimicrobial activity, demonstrating the possibility and linking the variation in plant compounds with the ecosystems in which it develops.

espanolLa aparatologia fija usada en ortodoncia dificulta una adecuada higiene bucal, en estas condiciones el desarrollo de lesiones cariosas puede ser una complicacion, uno de los principales agentes etiologicos involucrados es Streptococcus mutans. La nanotecnologia con plata tiene una aplicacion preventiva importante en biomateriales dentales. Objetivo: Se determino la actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans de nanoparticulas de plata (AgNPs) incluidas en adhesivos ortodonticos a diferentes concentraciones. Materiales y metodos: En 20 cajas Petri con Streptococcus mutans inoculada en agar Muller-Hinton suplementado con 5% de sangre, se colocaron 6 discos de papel, 4 embe-bidos con AgNPs incluidas en un adhesivo ortodontico a concentraciones de 25, 75, 125 y 175 ppm, y 2 discos controles con clorhexidina al 0.12% y agua destilada. Se determino la capacidad antimicrobiana en funcion de promedios de halos de inhibicion a las 48 horas de incubacion, en comparacion con la escala de Duraffourd y la clorhexidina 0.12%. Resultados: A 25 ppm no existio capacidad antibacteriana, a 75 ppm el 50% alcanzo sensibilidad limite, pero el 100% de las muestras a 125 y 175 ppm consiguieron sensibilidad limite, sin embargo, la clorhexidina al 0,12% presento mayor sensibilidad entre media 60% y sumamente sensible 40%. Conclusion: Las nanoparticulas de plata con tamano inferior a 100 nm, incluidas a 125 y 175 ppm en adhesivos de ortodoncia poseen actividad antimicrobiana sobre Streptococcus mutans, sin embargo, en el tiempo de estudio no alcanzan la sensibilidad de la clorhexidina al 0.12%. EnglishThe fixed appliances used in orthodontics make proper oral hygiene difficult, in these conditions the development of carious lesions can be a complication, one of the main etiologic agents involved is Mutans streptococci. It was determined that silver nanotechnology has an important preventive application in dental biomaterials. Objective: Antimicrobial activity on Mutans streptococci of silver nanoparticles (AgNPs) included in orthodontic adhesives at different concentrations. Materials and methods: In 20 Petri dishes with Mutans streptococci inoculated in Muller-Hinton agar supplemented with 5% blood, 6 paper discs were placed, 4 soaked up with AgNPs included in an orthodontic adhesive at concentrations of 25, 75, 125 and 175 ppm, and 2 control discs with 0.12% chlorhexidine and distilled water. Antimicrobial capacity was determined based on averages of inhibition halos at 48 hours of incubation, compared to the Duraffourd scale and 0.12% chlorhexidine. Results: At 25 ppm there was no antibacterial capacity, at 75 ppm 50% reached limit sensitivity, but 100% of the samples at 125 and 175 ppm achieved limit sensitivity, however, chlorhexidine 0.12% showed higher sensitivity between average 60% and highly sensitive 40%. Conclusion: Silver nanoparticles smaller than 100 nm, included at 125 and 175 ppm in orthodontic adhessives, have antimicrobial activity on Strptococcus mutans, however, when studying, they don’t reach the sensitivity of chlorhexidine at 0.12%.

Orientador: José Luiz da Costa Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aparecimento de Novas Substâncias Psicoativas (NSP) no mercado ilícito mundial cresceu significativamente desde os anos 2000. Apesar da queda no número de novas identificações anualmente, elas ainda causam severos casos de intoxicações, diversos deles fatais. O presente trabalho desenvolveu e validou um método para a análise de mais de 100 NSP e drogas de abuso convencionais em amostras de fluido oral (OF) e analisado por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). Foram coletadas 462 amostras em festas e festivais de música eletrônica em 3 estados brasileiros e analisadas com a metodologia desenvolvida. O 3,4-metilenodioximetanfetamina (MDMA, 88%) ainda foi a substância mais identificada nas amostras, mas 39% das amostras continham alguma NSP. Cetamina (75%) foi a mais prevalente, seguido da metilona (15%) e N-etilpentilona (10%). Ainda assim, apenas 5% dos voluntários haviam reportado o consumo de alguma NSP. A ingestão de múltiplas substâncias foi muito prevalente, com 80% das amostras contendo duas ou mais substâncias. Este foi o primeiro dado publicado no Brasil contendo dados epidemiológicos do consumo de NSP através da análise de amostras biológicas em contexto recreacional. As amostras contendo catinonas sintéticas foram quantificadas usando microextração por sorvente empacotado (MEPS). Entre as 41 amostras, metilona, N-etilpentilona, eutilona, mefedrona e 4-CEC foram quantificadas. As amostras contendo LSD foram quantificadas, assim como seu principal produto de biotransformação, 2-oxo-3-hidroxi-LSD, com limite de detecção de 0,01 ng/mL. Este foi o primeiro dado publicado na literatura contendo quantificação de ambos analitos em amostras autênticas de fluido oral. Ainda, como forma de suprir a necessidade de obter mais informações sobre as NSP, foi realizado o ensaio de metabolismo in vitro do canabinóide sintético ADB-4en-PINACA usando microssomas hepáticos humanos (HLM) e analisado com espectrômetro de massas de alta resolução. Dos 11 metabólitos identificados in vitro, 7 foram confirmados em amostras de sangue e urina post mortem., sendo os metabólitos derivados de hidroxilação e hidroxilação seguida de hidrólise interna os mais intensos Abstract: New Psychoactive Substances (NPS) emergence of in the global illicit market has grown significantly since the 2000s. Despite the drop in the number of new identifications annually, they still cause severe cases of intoxication, many of them fatal. The present work developed and validated a method for the analysis of more than 100 NPS and conventional drugs of abuse in oral fluid (OF) samples and analyzed by liquid chromatography?tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). 462 samples were collected at parties and electronic music festivals in 3 Brazilian states and analyzed using the developed methodology. 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA, 88%) was still the most identified substance in the samples, but 39% of them contained some NPS. Ketamine (75%) was the most prevalent, followed by methylone (15%) and N-ethylpentylone (10%). Even so, only 5% of the volunteers had reported some NPS consumption. Ingestion of multiple substances was very prevalent, with 80% of samples containing two or more substances. This was the first data published in Brazil containing epidemiological data on NPS consumption through the analysis of biological samples in a recreational context. Samples containing synthetic cathinones were quantified using microextraction by packed sorbent (MEPS). Among the 41 samples, methylone, N-ethylpentylone, euthylone, mephedrone and 4-CEC were quantified. Samples containing LSD were quantified, as well as its main biotransformation product, 2-oxo-3-hydroxy-LSD, with limit of detection of 0.1 ng/mL. This was the first published data quantifying both analytes in authentic oral fluid samples. Also, to meet the need for more information regarding NPS, an in vitro metabolism assay of the synthetic cannabinoid ADB-4en-PINACA was performed using human liver microsomes (HLM) and analyzed with a high-resolution mass spectrometer. Of the 11 metabolites identified in vitro, 7 were confirmed in post mortem blood and urine samples, with the metabolites derived from hydroxylation and hydroxylation followed by internal hydrolysis being the most intense Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2018/11849-0 CAPES 88887.571786/2020-00

RESUMEN Introducción. Se han realizado con el fin de evaluar la estabilidad dimensional, cada grupo de estudio confecciona su propio aditamento con el fin de determinar si existe o no una variación dimensional de los diferentes materiales de impresión utilizados en la rehabilitación oral. Esta variación va a depender de distintos factores como el tiempo, el material, la temperatura, la humedad entre otros. Objetivo. En este sentido, el objetivo del estudio fue evaluar la estabilidad dimensional de la silicona de adición / polivinilsiloxano (VPS) y para ello se tendrá en cuenta el tiempo. Métodos. Se trata de un estudio experimental. La muestra estuvo conformada por un total de 50 modelos, 25 para VPS Y 25 para el grupo control cuyo material fue la silicona por condensación. Para realizar el estudio se confecciono un modelo maestro teniendo en cuenta 6 localizaciones y 5 periodos de tiempo donde elprimer grupo a los 0 minutos, el segundo grupo a los 20 minutos, el tercer grupo a la 1 hora, cuarto grupo a las 6 horas y el quinto grupo a las 24 horas, después de tomada la impresión. Resultados. Después de la toma de impresión cuando se contabiliza a los 0 minutos, a los 60 minutos, a las 6 horas y a las 24 horas se obtiene el estadístico t ≥ 2,1318 y p≤ 0,05 confirmando que se encuentran diferencias significativas entre las dos siliconas respecto a la variación dimensional. Conclusiones. Se concluye que existe una variación de la estabilidad dimensional al ser comparada con el grupo control como lo es la silicona por condensación.

Resumen Objetivo: Comparar la microfiltración apical de dientes obturados con tres diferentes técnicas: condensación lateral, condensación vertical y sistema obtura II in vitro. Métodos: Se utilizaron 75 dientes uniradiculares, divididos en 5 grupos, Grupo 1: condensación lateral, Grupo 2: condensación vertical, Grupo 3: sistema obtura II, Grupo 4: control positivo, Grupo 5: control negativo. Las raíces fueron sometidas a filtración apical por difusión indirecta con tinta china, diafanizadas y observadas con un microscopio Vasconcellos. Se realizaron pruebas estadístico descriptivo con el programa GraphPad prism 8. Resultados: El grupo 1 presentó mayor filtración (0,6603±0,5063) con una diferencia estadísticamente significativa en comparación al grupo 3 (p

Objective: Evaluate the cytotoxicity in human osteoblastic cells and antimicrobial activity in different root canal sealers in vitro. Methods: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer, and Bio-C Sealer were used in experimental groups, and AH Plus was used as a control. Human osteoblast-like cells and MTT quantitative colorimetric assay were used to evaluate cytotoxicity. Saos-2 cells were exposed to undiluted sealer extracts for 24 h. The supernatant was then collected and the formazan crystals resulting from MTT reduction were dissolved in pure dimethyl sulfoxide. Absorbance was measured in an automated spectrophotometer at a wavelength of 540 nm. Antimicrobial activity was analyzed by the direct contact test using a polymicrobial biofilm composed of Enterococcus faecalis, Candida albicans, and Streptococcus mutans. At 24, 48, and 72 h, colony-forming units were counted on agar plates. A nonparametric Kruskal-Wallis test was used for the statistical analysis. The level of significance was set at 5%. Results: AH Plus showed the lowest cytotoxicity after 24 h, with a significant difference in relation to BioRoot RCS and Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). There was no significant difference in cytotoxicity between TotalFill BC Sealer and Bio-C Sealer (p > 0.05). At 24 h, TotalFill BC Sealer and AH Plus showed the least microbial growth compared to Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusions: AH Plus had the lowest cytotoxicity. TotalFill BC Sealer and AH Plus yielded greater reductions in microbial counts in the first 24 h compared to Bio-C Sealer. Clinical Relevance: 2c. Objetivo: Evaluar in vitro la citotoxicidad en células osteoblásticas humanas y la actividad antimicrobiana de diferentes cementos obturadores de conductos radiculares. Materiales y métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer se utilizaron como grupos experimentales y AH Plus se utilizó como control. Se usaron células similares a osteoblastos humanos y ensayo colorimétrico cuantitativo MTT para evaluar la citotoxicidad. Las células Saos-2 se expusieron a extractos de cementos sin diluir durante 24 h. A continuación, se recogió el sobrenadante y los cristales de formazán resultantes de la reducción de MTT se disolvieron en sulfóxido de dimetilo puro. La absorbancia se midió en un espectrofotómetro automático con una longitud de onda de 540 nm. La actividad antimicrobiana se analizó mediante la prueba de contacto directo, utilizando una biopelícula polimicrobiana compuesta por Enterococcus faecalis, Candida albicans y Streptococcus mutans. A las 24, 48 y 72 h, se contabilizaron las unidades formadoras de colonias en placas de agar. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. El nivel de significación se fijó en el 5%. Resultados: AH Plus mostró la menor citotoxicidad después de 24 h, con una diferencia significativa en relación con BioRoot RCS y Bio-C Sealer (p ≤ 0.01). No hubo diferencias significativas en la citotoxicidad entre TotalFill BC Sealer y Bio-C Sealer (p > 0.05). A las 24 h, TotalFill BC Sealer y AH Plus mostraron el menor crecimiento microbiano en comparación con Bio-C Sealer (p 0.05). Conclusiones: AH Plus presentó la menor citotoxicidad. TotalFill BC Sealer y AH Plus produjeron mayores reducciones en los recuentos microbianos en las primeras 24 h en comparación con Bio-C Sealer. Relevancia Clínica: 2c. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade em células osteoblásticas humanas e a atividade antimicrobiana em diferentes cimentos endodônticos in vitro. Métodos: BioRoot RCS, TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer foram usados nos grupos experimentais e o AH Plus foi usado como controle. Células semelhantes a osteoblastos humanos e ensaio colorimétrico quantitativo de MTT foram usados para avaliar a citotoxicidade. As células Saos-2 foram expostas a extratos de cimento não diluídos por 24 h. O sobrenadante foi então recolhido e os cristais de formazan resultantes da redução do MTT foram dissolvidos em dimetilsulfóxido puro. A absorbância foi medida em um espectrofotômetro automatizado em um comprimento de onda de 540 nm. A atividade antimicrobiana foi analisada pelo teste de contato direto utilizando um biofilme polimicrobiano composto por Enterococcus faecalis, Candida albicans e Streptococcus mutans. Em 24, 48 e 72 h, as unidades formadoras de colônias foram contadas em placas de ágar. O teste não paramétrico de Kruskal-Wallis foi utilizado para a análise estatística. O nível de significância foi estabelecido em 5%. Resultados: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade após 24 h, com diferença significativa em relação ao BioRoot RCS e Bio-C Sealer (p ≤ 0,01). Não houve diferença significativa na citotoxicidade entre TotalFill BC Sealer e Bio-C Sealer (p > 0,05). Às 24 h, TotalFill BC Sealer e AH Plus apresentaram o menor crescimento microbiano em comparação com Bio-C Sealer (p 0,05). Conclusões: AH Plus apresentou a menor citotoxicidade. TotalFill BC Sealer e AH Plus produziram maiores reduções na contagem microbiana nas primeiras 24 h em comparação com o Bio-C Sealer. Relevância Clínica: 2c.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O aumento das reações adversas causadas por conservantes somado a poucas substâncias disponíveis no mercado têm despertado o interesse das indústrias cosméticas no desenvolvimento de novos compostos com ação antimicrobiana. Moléculas derivadas de xilitol, Ésteres de Fosfato de Xilitol e Monoéster de C-8 Xilitol, já tiveram sua atividade contra microrganismos comprovada. Entretanto, além de eficazes, estes compostos devem ser seguros para uso em produtos. Neste trabalho, avaliou-se o perfil toxicológico destas moléculas visando sua aplicação cosmética. Inicialmente, foi realizada avaliação preditiva in silico dos derivados de xilitol para comparação da toxicidade a partir de substâncias conhecidas e utilizadas em produtos. Testes in vitro para avaliação de segurança também foram realizados. Citotoxicidade, fototoxicidade, mutagenicidade e irritação foram os parâmetros estudados para a saúde humana enquanto que se avaliou a biodegradabilidade imediata para saúde ambiental. Adicionalmente, ensaios clínicos de segurança foram realizados para confirmação da tolerância cutânea, da ausência de potencial de sensibilização e da aceitabilidade em condições de uso. Estudos clínicos complementares de eficácia foram feitos para verificar a aplicabilidade dos compostos em formulações cosméticas em relação à melhora de oleosidade, de hidratação, de caspa e ao efeito desodorante. Os resultados obtidos sugerem que as moléculas derivadas de xilitol possuem perfil toxicológico aceitável para formulações cosméticas. Na predição in silico, os compostos apresentaram resultados negativos para mutagenicidade, sensibilização e irritação, baixo potencial de permeação e resultados positivos para biodegradabilidade imediata. Nos estudos in vitro, nossos resultados demonstraram que as moléculas derivadas de xilitol não são fototóxicas ou mutagênicas e são prontamente biodegradáveis. Porém, apresentaram-se irritantes, provavelmente à atividade conservante por serem moléculas biologicamente ativas. Na avaliação clínica de segurança, os compostos derivados de xilitol demonstraram boa tolerância e aceitabilidade com a pele e não são alergênicos. Além disso, estas substâncias também parecem ter a capacidade de auxiliar nos atributos funcionais dos cosméticos. Formulações contendo Monoéster de C-8 Xilitol melhoram a barreira cutânea e mantêm quantidade de água na epiderme e formulações contendo Ésteres de Fosfato de Xilitol apresentaram atividade desodorante e melhoraram a oleosidade da pele. Estes resultados contribuem para o desenvolvimento de compostos conservantes seguros para utilização em produtos para o cuidado da pele Abstract: The increase of adverse effects caused by preservatives together with the lack of available options in the market have arisen cosmetic industries interest in the development of new compounds with antimicrobial action. The effectiveness against microorganisms of Xylitol-derived molecules, Phosphate Xylitol Esters and C-8 Xylitol Monoester, have already been proved. However, these compounds should be safe as well as effective. In this study, the toxicological profile of these molecules was assessed regarding their use in cosmetics. First, in silico analysis was performed in order to compare the toxicity prediction of the xylitol-derivatives chemical structures with known substances that are currently used in products. The safety was also tested in vitro. Cytotoxicity, phototoxicity, mutagenicity and irritation were the chosen parameters to evaluate the substances hazard for human health. Ready biodegradability was performed to assess the impact on the environment. Moreover, safety clinical trials were performed for the confirmation of skin tolerance, absence of sensitization potential and acceptability under conditions of use. Additional clinical studies for efficacy enabled the assessment of the application of the compounds in cosmetic formulations to improve oiliness, moisturization, dandruff condition and deodorant effect. Our results suggested that xylitol-derived molecules have an acceptable toxicological profile considering their use in cosmetics. Regarding the in silico prediction, the compounds presented negative results for mutagenicity, sensitization and irritantion, low permeation potention and positive results for ready biodegradability. In vitro studies results showed that xylitol-derived molecules were not phototoxic or mutagenic and were readily biodegradable. However, they were irritants, probably due to the preservative effect as they are biologically active molecules. In the clinical safety assessment, the compounds presented good skin tolerance and acceptability and they were not allergenic. In addition, these substances also seem to have the capacity of aiding in improving the cosmetic attributes of a formulation. Formulations containing C-8 Xylitol Monoester improved the skin barrier and mantained water amount in the epidermis while formulations containing Phosphate Xylitol Esters presented deodorant activity and improved skin oiliness. These results contribute for the development of safe preservatives for skin care products Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: Maria Beatriz Puzzi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Nos últimos anos, tem-se observado o aumento no número de estudos relacionados ao processo de envelhecimento da pele, devido principalmente ao interesse da população em prevenir ou retardar o aparecimento dos sinais do tempo. O envelhecimento da pele é decorrente de um processo natural do corpo humano e sofre influência direta do background genético do indivíduo. Também pode sofrer com ação do ambiente externo, intensificando as dermatoses comuns do envelhecimento. Objetivo: Neste presente trabalho analisamos a expressão gênica de fibroblastos humanos originários de indivíduos jovens e idosos, mantidos em cultura celular de monocamada, a fim de se determinar um padrão gênico de envelhecimento da pele. Metodologias e métodos: Utilizando fibroblastos humanos primários, comparamos três modelos in vitro de envelhecimento, através da técnica de proliferação celular acelerada, radiação UVB e células provenientes de doadores idosos, com relação ao seu comportamento celular e gênico considerando 29 genes: CASP3, SIRT1, LMNA, COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL4A1, COL7A1, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP12, MMP13, MMP14, TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4, IL1B, IL1A, IL6, IL8, IL10, TP53, PTGS2 relacionados ao processo de envelhecimento da pele. Resultados e discussão: Foi possível observar redução na velocidade de proliferação celular nos modelos de envelhecimento quando comparados ao controle jovem sem tratamento. Os resultados de expressão gênica foram analisados através da plataforma Ingenuity Pathway Analysis e 12 genes foram identificados como potenciais biomarcadores para o processo de envelhecimento da pele. Os genes COL1A1 e COL1A2, relacionados à síntese de colágeno tipo I, demonstraram inibição de expressão enquanto os genes MMP1 e MMP3, relacionados à degradação de matriz extracelular, apresentaram aumento, corroborando sua importância no processo de envelhecimento da pele. Os genes responsáveis pela síntese de citocinas pró- inflamatórias IL6, IL1A, IL1B e PTGS2 apresentaram inibição da expressão ao mesmo tempo em que o IL10, gene que codifica uma citocina anti-inflamatória, apresentou aumento, sugerindo que estas citocinas atuam no dano e recuperação da pele envelhecida. Além disso, os genes CXCL8, TP53 e LMNA também foram positivamente modulados, sugerindo possuir papel importante no processo de envelhecimento celular. Conclusão: Os modelos in vitro de envelhecimento de pele, quando analisados isoladamente, não apresentaram marcadores gênicos exclusivos porém, quando analisados conjuntamente, foi possível identificar 12 genes como biomarcadores comuns entre os modelos de envelhecimento, sendo eles COL1A1, COL1A2, CXCL8, IL6, IL10, IL1A, IL1B, LMNA, MMP1, MMP3, PTGS2, TP53. Deste modo, podemos concluir que é possível definir um padrão gênico de envelhecimento da pele em modelos de cultura celular in vitro, nas condições testadas Abstract: Introduction: In recent years, it has been observed an increase in the number of works related to skin aging, due mainly to the interest of the population on prevent or delay the signs of elderly on skin. Skin aging is the result of a natural process of human body and it is influenced by genetic background. It also can be influenced by external environment, intensifying regular dermatoses of elderly. Objective: In this present work, we analyzed the gene expression of human fibroblasts from young and elderly donors, maintained in monolayer cell culture, in order to determine genetic pattern of skin aging. Materials and Methodology: Using human primary fibroblasts, we compared three in vitro skin aging models - cell proliferation technique, UVB radiation and cells from elderly donors - regarding cellular and genetic behavior, using 29 genes: CASP3, SIRT1, LMNA, COL1A1, COL1A2, COL3A1, COL4A1, COL7A1, MMP1, MMP2, MMP3, MMP7, MMP8, MMP9, MMP10, MMP12, MMP13, MMP14, TIMP1, TIMP2, TIMP3, TIMP4, IL1B, IL1A, IL6, IL8, IL10, TP53, PTGS2 related to skin aging process. Results and discussion: It was possible to observe a decrease of cellular proliferation rate on aging models when compared with young cell control, without treatment. The results of gene expression were analyzed through Ingenuity Pathway Analysis platform and 12 genes were identified as common biomarkers of skin aging. The genes COL1A1 and COL1A2, related to collagen type 1 synthesis, demonstrated inhibition of expression while MMP1 and MMP3, related to extracellular matrix degradation, demonstrated increase, corroborating their importance in the skin aging. The genes responsible for pro inflammatory cytokines synthesis IL6, IL1A, IL1B and PTGS2 showed inhibition of expression at the same time that IL10 gene, which encode an anti-inflammatory cytokine, demonstrated increase suggesting that these cytokines can act on damage and recovery of aged skin. Furthermore, the genes CXCL8, TP53 and LMNA were also positively modulated, suggesting an important role on skin aging process. Conclusion: In vitro skin aging models, when individually analyzed, did not identify unique biomarkers however, when analyzed together, it was possible to identify 12 genes as common biomarkers for skin aging, COL1A1, COL1A2, CXCL8, IL6, IL10, IL1A, IL1B, LMNA, MMP1, MMP3, PTGS2, TP53. Thus, we can conclude that is possible to determine a genetic pattern of skin aging in cell culture in vitro models, regarding established conditions Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências

Orientadores: Fabio Trindade Maranhão Costa, Gustavo Capatti Cassiano Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A malária é uma doença infecciosa que causa milhares de mortes todos os anos ao redor do mundo. O uso de antimaláricos é fundamental para a contenção da doença e tratamento dos infectados. A recorrente resistência parasitária aos antimaláricos vigentes torna necessário o constante estudo para o desenvolvimento de novos compostos químicos, capazes de atuar na morte do parasita por modos de ação inéditos. Com o sucesso de inibidores de quinases para o tratamento do câncer, o quinoma (conjunto de quinases presente no proteoma do parasita) do Plasmodium spp. passou a ser investigado, com o intuito de encontrar potenciais alvos terapêuticos para o tratamento da malária. Através de filtros de bioinformática, escolhemos as proteínas Caseína quinase 1 (CK1) e 2 (CK2) de Plasmodium spp. como alvo para a seleção de compostos químicos para testes. A CK1 é conservada entre as espécies de Plasmodium, altamente expressa em todo o ciclo sanguíneo do parasita e tem interação física com a proteína Rab-5B evidenciando assim fazer parte do controle metabólico. Além disso, estudos de genética reversa demonstraram que esta proteína é essencial para o desenvolvimento do estágio sanguíneo do parasito. Apesar de pertencerem a mesma família, a CK1 e a Caseína quinase 2 (CK2) são divergentes em estrutura, função e resposta a moléculas efetoras. Experimentos de genética reversa mostraram que a CK2? de P. falciparum é essencial para a sobrevivência do patógeno durante seu ciclo de replicação dentro dos eritrócitos do hospedeiro, tornando, assim como a CK1, a CK2? um alvo promissor para o tratamento e contenção da malária. Com o crescente aumento da capacidade computacional e aprimoramento das triagens in silico, realizamos técnicas de triagens virtuais com o intuito de reduzirmos os testes experimentais e aumentar a capacidade assertiva. Primeiramente, construímos por homologia a estrutura 3D da proteína alvo PvCK1, e para a PfCK2 utilizamos o cristal, e utilizamos dois métodos de triagens complementares, o primeiro baseado na proteína do parasita, Structure-Based Virtual Screening (SBVS) visando identificar inibidores das CKs, e o segundo baseado em QSAR (do inglês Quantitative Structure-Activity Relationship) utilizando a vasta informação na literatura e bancos de dados de moléculas ativas já avaliadas em Plasmodium spp., com o intuito de assegurar que os compostos selecionados tenham atividade in vitro contra as formas assexuadas sanguíneas do parasito. Após a triagem virtual, 183 compostos foram selecionados e testados in vitro contra P. falciparum, sendo que 11 compostos foram capazes de inibir mais que 50% do crescimento parasitário a 1 ?M. Estes compostos foram então avaliados em relação a citotoxicidade em células HepG-2, e MCF-7. Finalmente, foram escolhidos de acordo com estrutura, citotoxicidade e atividade antiplasmodial, 3 compostos para realizar curvas dose resposta contra cepas sensíveis e resistentes de P. falciparum e obtivemos 1 composto apresentando alto índice de seletividade (>100) Abstract: Malaria is an infectious disease that causes thousands of deaths each year worldwide. The use of antimalarials is essential to contain the disease and treat those infected. The recurrent parasitic resistance to current antimalarials, makes it necessary to constantly study for the development of new chemical compounds capable of acting in the death of the parasite through unprecedented modes of action. With the success of kinase inhibitors for the treatment of cancer, the kinome (set of kinases present in the parasite proteome) of Plasmodium spp. started to be investigated in order to find potential therapeutic targets for the treatment of malaria. Through bioinformatics filters, we chose the protein Casein kinase 1 (CK1) and 2 (CK2) from Plasmodium spp. as targets for the selection of chemical compounds for testing.CK1 is conserved among Plasmodium species, highly expressed throughout asexual blood stage development, and has physical interaction with the Rab-5B protein, evidencing being part of the metabolic control. In addition, reverse genetic studies have shown that this protein is essential for the development of the parasite's blood stage. Despite belonging to the same family, CK1 and CK2 are divergent in structure, function, and response to effector molecules. Reverse genetic experiments have shown that P. falciparum CK2? is essential for the survival of the pathogen during its replication cycle within the host's erythrocytes, making, like CK1, CK2? a promising target for the treatment of malaria. With the increasing computational capacity and the improvement of in silico screening, we have performed virtual screening techniques in order to reduce experimental tests and increase assertive capacity. First, we build the 3D structures of the target proteins PvCK1 by homology, and for PfCK2 we use the crystal, and we use two complementary screening methods, the first based on the parasite protein, Structure-Based Virtual Screening (SBVS) to identify CK inhibitors, and the second based on QSAR (Quantitative Structure-Activity Relationship) using the vast information in the literature and databases of active molecules already evaluated in Plasmodium spp., in order to ensure that the selected compounds have activity in vitro against the asexual blood forms of the parasite. After virtual screening, 183 compounds were selected and tested in vitro against P. falciparum, with 11 compounds capable of inhibiting more than 50% of parasitic growth at 1 ?M. These compounds were then evaluated for cytotoxicity in HepG-2 cells, and MCF-7. Finally, 3 compounds were chosen according to structure, cytotoxicity and antiplasmodial activity to produce dose response curves against sensitive and resistant strains of P. falciparum and we obtained 1 compound with a high selectivity index (> 100) Mestrado Imunologia Mestra em Genética e Biologia Molecular FAPESP 2018/05926-2; 2019/17062-5

La infección causada por el virus del dengue (DENV) se ha relacionado con el desarrollo de alteraciones neurológicas y comportamentales en humanos. Dicha asociacione se ha confirmado por el desarrollo de signos claros de alteración neurológica durante y después de la infección y por la presencia de proteínas y/o RNA viral en líquido cefaloraquídeo o en muestras de tejido nervioso obtenidas post morten. Esto sugiere que el virus puede invadir el Sistema Nervioso Central (SNC). Por la dificultad de reproducir los signos y síntomas del dengue en animales, nuestro grupo desarrolló un modelo in vivo de neuroinfección en el cual ratones neonatos se inocularon a nivel periférico con una cepa de virus adaptada a tejido nervioso (D4MB-6). Como resultado, se observó que la variante viral logró invadir el SNC e infectó algunas poblaciones celulares como neuronas, oligodendrocitos y células de la microglía. Estas últimas presentaron evidentes cambios morfológicos que sugerían activación. Adicionalmente se observó que en el tejido nervioso de animales infectados la infección indujo una exacerbada respuesta inmune y la excitotoxicidad por glutamato, espectos que en conjunto causaron la muerte neuronal y el daño en la arquitectura tisular. Sin embargo, la población celular del tejido nervioso que secreta estas moléculas no ha sido identificada aún. Experimentalmente se ha demostrado que en diferentes patologías -incluso virales- la principal fuente de citoquinas pro-inflamatorias, glutamato y otros agentes provienen de las células de la microglía infectadas y/o activadas. Todos los agentes producidos y liberados por estas células, pueden de manera conjunta o independiente ocasionar el daño y la muerte neuronal. Por lo tanto, en este trabajo se evaluó en un cultivo primario de células de la microglía de ratón lactante, su susceptibilidad a la infección con la variante adaptada -D4MB-6- o no a tejido nervioso y algunos aspectos relacionados con su activación. Como resultado se observó que las células microgliales presentaron una alta susceptibilidad a la infección y en los tiempos post-infección evaluados presentaron altas tasas de proliferación y supervivencia. Adicionalmente se observó que las células presentaron cambios morfológicos y produjeron algunas moléculas pro-inflamatorias y glutamato, que indujeron a las células a sostener en los tiempos evaluados un estado de activación que fue modulado y regulado por los fármacos VPA o MK-801. En conjunto estos resultados permitieron describir que la infección por DENV indujo la activación y producción de agentes pro-inflamatorios y glutamato por parte de las células de la microglía, por lo tanto, sugerimos que estas células son centrales en el desarrollo de la nueuroinfección y neuropatogenia causada por el DENV. Magíster en Ciencias Básicas Biomédicas Maestría

Introduction: Although self-ligating brackets presumably provide better hygiene conditions, no consensus has been reached so far. Objective: Therefore, the objective of this study was to evaluate, in an in vitro experimental design, the adherence of Streptococcus mutans (SM) in self-ligating and conventional brackets of different manufacturers and ligature types. Methods: Four commercial brands of maxillary premolar metal brackets were tested (Abzil®; Morelli®; 3M Unitek®; and GAC®). Each one was subdivided into three groups, which varied according to the type of ligature and bracket model (metallic, elastic, and self-ligating), totalizing twelve groups, composed of six brackets each. Previously sterilized brackets were initially immersed in saliva for one hour, and subsequently washed and added in a bacterial suspension, maintained in aerobiosis for 72 hours. The adhered bacteria were then separated and quantified by colony forming units (CFU/mL) counting after 48 hours of growth. The groups were compared by Kruskal-Wallis and Dunn post-hoc tests (p< 0.05). Results: Regardless of the commercial brand, self-ligating brackets had significantly less CFU/mL. However, according to comparisons performed within each commercial brand, only Abzil® self-ligating brackets had significantly lower biofilm adhesion. Among all of the self-ligating models, GAC® brackets presented the highest bacterial adhesion rate. Conclusions: Self-ligating brackets are likely to present lower rates of biofilm adhesion. Particularly, Abzil® and GAC® self-ligating brackets are less likely to accumulate biofilm. Although such results are derived from an in vitro study, practitioners might acknowledge findings concerning bacterial adhesion as one of the relevant features to be considered during bracket selection. RESUMO Introdução: Embora os braquetes autoligados presumivelmente proporcionem melhores condições de higiene, nenhum consenso foi alcançado até o momento. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar, em um delineamento experimental in vitro, a aderência de Streptococcus mutans em braquetes autoligados e convencionais de diferentes fabricantes e tipos de ligaduras. Métodos: Quatro marcas comerciais de braquetes metálicos de pré-molares superiores foram testadas (Abzil®; Morelli®; 3M Unitek®; e GAC®). Cada marca foi subdividida em três grupos, que variaram de acordo com o tipo de ligadura e o modelo do braquete (metálico, elástico e autoligado), totalizando doze grupos, compostos por seis braquetes cada. Os braquetes previamente esterilizados foram, inicialmente, imersos em saliva por uma hora, sendo posteriormente lavados e adicionados em uma suspensão bacteriana, mantida em aerobiose por 72 horas. As bactérias aderidas foram, então, separadas e quantificadas por contagem de unidades formadoras de colônias (UFC/mL) após 48 horas de crescimento. Os grupos foram comparados pelos testes post-hoc de Kruskal-Wallis e Dunn (p< 0,05). Resultados: Independentemente da marca comercial, os braquetes autoligados apresentaram significativamente menos UFC/mL. Porém, de acordo com as comparações realizadas dentro de cada marca comercial, apenas os modelos autoligados Abzil® apresentaram adesão de biofilme significativamente menor. Entre todos os modelos autoligados, os braquetes GAC® apresentaram a maior taxa de adesão bacteriana. Conclusões: Os braquetes autoligados provavelmente apresentam menores taxas de adesão do biofilme. Particularmente, os braquetes autoligados Abzil® e GAC® têm menor probabilidade de acumular biofilme. Embora tais resultados sejam derivados de um estudo in vitro, os clínicos podem reconhecer os achados relativos à adesão bacteriana como uma das características relevantes a serem consideradas durante a seleção dos braquetes.

Orientador: Rodney Alexandre Ferreira Rodrigues Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O Brasil é um país com grande variedade de espécies vegetais, o que permite a promoção de novos medicamentos à base de plantas medicinais (fito medicamentos), as quais podem conter múltiplas substâncias de interesse terapêutico. Dentre estas substâncias existem os óleos essenciais: compostos voláteis e de ampla aplicação farmacêutica, alimentícia e cosmética, porém que apresentam instabilidade. No meio farmacêutico, entretanto, existem estratégias para contornar estes fatores como a viabilização destes óleos em micropartículas ou em granulados. Para a produção de micropartículas pode-se utilizar a técnica de spray-drying, a qual atomiza e seca uma emulsão a temperaturas entre 110 e 300ºC, e para a granulação, o processo de adição de um agente aglutinante para gerar uma aglomeração dos componentes da formulação, seguido de secagem, propicia partículas com funcionalidade de proteção. Neste trabalho dois excipientes muito comuns na indústria farmacêutica (Lactose e Celulose microcristalina) foram utilizados para a produção de partículas contendo o óleo essencial de duas espécies brasileiras, a Erva-baleeira (Cordia verbenacea sinonímia Varronia verbenacea) e a Macela (Achyrocline satureioides) ¿ ambas com atividade anti-inflamatória e antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi produzir micropartículas e grânulos que auxiliassem na estabilidade de tais óleos, avaliando assim o óleo interno retido, a consistência dos grânulos produzidos, a umidade relativa e liberação in vitro destas formulações, assim como a análise dos principais compostos químicos por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de Massas no decorrer de sua estocagem por 30 e 60 dias. Os granulados apresentaram retenção de 45% dos óleos empregados e maior liberação in vitro quando comparados às micropartículas, que retiveram 12%, porém as micropartículas demonstraram um perfil de liberação mais constante e umidade relativa menor (3% quando comparado a dos grânulos, que foi de 4 a 20%), tornando-as mais adequadas para sua veiculação em cápsulas duras. Ao final do teste, devido à baixa recuperação do óleo essencial, concluiu-se que, ainda que tenha existido uma retenção parcial dos óleos, ambas as partículas necessitam de otimização para que possam ser empregadas para manutenção da estabilidade dos óleos essenciais com o tempo Abstract: Brazil possess a large amount of plant species, of which can hold on a great variety of therapeutic compounds, including essential oils. These substances are volatile complexes with wide application in pharmaceutical, food and cosmetics industry, but present instability problems. However, there are some strategies on the pharmaceutical mean such as the granulation and the microparticulation that can be useful in the protection of these compounds. Spray-drying is a well-known technique that dries an atomized emulsion with temperatures ranging from 110-300 ° C generating microparticles or microspheres. Granulation can be considered an easy and low-cost technique, which consist of additioning an agglutinating agent to a powder mixture, followed by its drying, resulting in granules that provide protection. In this work two common pharmaceutical excipients will be tested (Lactose and Microcrystalline cellulose) in order to create particles containing essential oils from two Brazilian plants: Erva-baleeira (Cordia verbenacea synonymic Varronia verbenacea) and Macela (Achyrocline satureioides) ¿ both presenting antimicrobial and anti-inflammatory effects. The objective was to produce microparticles and granules that enhanced essential oil¿s stability by evaluating formulation¿s retention rate, granules integrity, relative humidity, in vitro release profile and chromatographic analysis during its storage for 30 and 60 days. The granules presented a higher retention rate (45%) and a higher amount of released oil when compared to the microparticles, which retained 12% of essential oil, however the microparticles showed a constant release of the oils and lower humidity values (3% compared to the granules, which varied from 4 to 20%), allowing its use on hard gelatine capsules. At the end of the test due to low essential oil concentrations it was concluded that, although the retention of oils was visible, both particles need optimization to enhance essential oil¿s stability Mestrado Clínica Médica Mestre em Ciências CAPES 3370/2017

Orientador: Matheus Lima de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: A tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC) de pequeno campo de visão (do inglês, field-of-view; FOV) tem sido utilizada constantemente devido à resolução espacial relativamente maior e menor dose de raios X. No entanto, a redução do tamanho do FOV aumenta indiretamente a exomassa - zona fora do FOV mas ainda entre a fonte de raios X e o receptor da imagem. Dessa forma, considerando a frequente utilização de FOV pequeno e materiais metálicos na reabilitação oral, associada à necessidade de protocolos de exposição otimizados em diversas tarefas de diagnóstico, os objetivos desta tese foram avaliar (I) a influência do tamanho de voxel nos artefatos oriundos da exomassa, (II) o impacto dos artefatos oriundos da exomassa e/ou endomassa no diagnóstico de fratura radicular vertical (FRV) simulada, e (III) o desempenho de um protocolo de exposição otimizado nesta tarefa de diagnóstico. Para cumprir o primeiro objetivo, imagens de TCFC foram obtidas de um fantoma de imagem centralizado em um FOV de 5 × 5 cm em dois aparelhos utilizando dois tamanhos de voxel: 0,2 e 0,3 mm. Materiais metálicos de diferentes composições e quantidades foram posicionados na exomassa e imagens adicionais foram realizadas. Os valores de voxel foram mensurados de 16 áreas homogêneas do fantoma e a média e o desvio padrão foram calculados. Os dados foram analisados pelos testes ANOVA, Tukey e Dunnett (?=0,05). Para cumprir o segundo e terceiro objetivos, vinte dentes humanos unirradiculares foram instrumentados e, FRV foi induzida em metade deles. Todos os dentes foram posicionados individualmente em um alvéolo vazio de uma mandíbula humana. As imagens de TCFC foram obtidas com um FOV de 5 × 5 cm centralizado no dente de interesse em três aparelhos sob dois protocolos de exposição (padrão e otimizado). Imagens adicionais foram obtidas com materiais metálicos na exomassa e/ou dentro do FOV (endomassa). O dente de interesse foi substituído por um tubo de polipropileno preenchido com uma solução radiopaca homogênea e imagens adicionais foram realizadas. Três radiologistas avaliaram as imagens e indicaram a presença de FRV em uma escala de 5 pontos. A sensibilidade, especificidade e área sob a curva ROC (AUC) foram obtidas. Os valores de voxel e ruído foram mensurados nas imagens referentes a solução radiopaca. Os diferentes grupos foram comparados pelos testes ANOVA e Tukey (?=0,05). Os valores médios de voxel e a variabilidade não diferiram significativamente entre as images com tamanho de voxel 0,2 e 0,3 mm. Sensibilidade, especificidade e AUC para o diagnóstico de FRV não mostraram diferenças significativas entre a composição e localização dos materiais metálicos e protocolos de exposições. Na maioria das condições, os valores de voxel foram significativamente menores e os valores de ruído foram significativamente maiores quando o material metálico estava presente na exomassa ou na exomassa e endomassa. Em conclusão, os artefatos oriundos da exomassa não são influenciados pelo tamanho de voxel e não comprometem o diagnóstico de FRV simulada baseado em imagens de protocolos de exposição padrão e otimizados Abstract: Cone-beam computed tomography (CBCT) of small field-of-view (FOV) has been increasingly indicated for resulting in relatively higher spacial resolution and lower X-ray dose. However, the reduction of the FOV size leads to an indirect increase of the exomass, which is the zone outside of the FOV but between the X-ray source and the image receptor. Thus, considering the frequent use of small FOV sizes and metallic materials in oral rehabilitation, which are well-known source os artefacts, associated with the constant need for optimised exposure protocols in diverse diagnostic tasks, the aims of this thesis were to evaluate (I) the influence of the voxel size on artefacts arising from the exomass (II) the impact of artefacts arising from the exomass and/or endomass on the diagnosis of simulated vertical root fracture (VRF), and (III) the performance of an optimised protocol on this diagnostic task. To accomplish the first aim, CBCT scans were obtained of an imaging phantom centred in a FOV of 5 × 5 cm using two units at two voxel sizes: 0.2 and 0.3 mm. Metal objects of different compositions and numbers were placed in the exomass and additional scans were performed. CBCT voxel values were obtained from 16 homogeneous areas of the phantom and averaged, and the standard deviation was calculated to obtain voxel value variability. The data were analyzed by ANOVA and Tukey’s and Dunnett’s tests (?=0.05). To accomplish the second and thirds aims, twenty single-rooted human teeth were endodontically prepared and VRF was induced in half of them. All teeth were individually placed in an empty socket of a human mandible. CBCT scans were obtained with a FOV of 5 × 5 cm centred on the tooth of interest using three units at two dose protocols (standard and optimised). Additional CBCT scans were obtained with metallic in the exomass and/or inside the FOV (endomass), simulating different clinical conditions. The tooth of interest was replaced with a polyprolilene tube filled with a homogeneous radiopaque solution and additional CBCT scans were made. Three radiologists evaluated the CBCT images and indicated the presence of VRF on a 5-point scale. Sensitivity, specificity and area under the receiver operating characteristic curve (AUC) were obtained. CBCT voxel and noise values were obtained from the radiopaque solution. Differents groups were compared using ANOVA followed by Tukey’s test (?=0.05). Overall CBCT voxel values and voxel value variability did not differ significantly between CBCT scans obtained with voxel sizes of 0.2 and 0.3 mm. Sensitivity, specificity and AUC for the diagnosis of VRF did not show significant differences between the composition and location of the metallic materials and dose protocols. In most of the conditions, the CBCT voxel values were significantly lower and the noise values were significantly higher when metal was present in the exomass or in the exomass and in the endomass. In conclusion, artefacts arising from the exomass are not affected by the voxel size and do not influence the image-based diagnosis of simulated vertical root fracture at standard and optimised exposure protocols Doutorado Radiologia Odontológica Doutora em Radiologia Odontológica CAPES 001

[ES]Introducción: Uno de los problemas más prevalentes asociados a los implantes dentales es el aflojamiento de los tornillos de unión implante-pilar. El torque (Ncm) es una forma de medición indirecta de la precarga (V) que presenta un tornillo. Por ello, el contratorque medido al aflojar el tornillo permite conocer la precarga remanente. La pérdida de torque puede llevar a la aparición de micromovimientos en la interfase que pueden permitir la filtración de bacterias a través de la misma, lo que ocasionará problemas mecánicos y biológicos a nivel interfásico. Objetivo: El objetivo principal de este trabajo es cuantificar el torque de remoción de los tornillos de implantes de conexión externa e interna apretados a diferentes valores de torque y sometidos posteriormente a cargas cíclicas, así como conocer el sellado interfásico mediante test de presión acuática. Material y Método: Se utilizaron 30 implantes Mozo Grau, 10 de conexión interna y 20 de conexión externa, que se unieron a pilares con conexión antirrotatoria mediante dos tipos de tornillo (Estándar y Star) configurando 6 subgrupos de trabajo. Dentro de cada grupo se aplicó un valor de torque recomendado por el fabricante de 20 Ncm para conexión interna (IntEstandarR) y 30 Ncm para conexión externa (ExtEstandarR y ExtStarR) y un torque experimental de 35 Ncm para conexión interna (IntEstandarE) y 30 Ncm para conexión externa (ExtEstandarE y ExtStarE). Posteriormente, se sometió a las muestras a cinco series de 10000 ciclos masticatorios. Tras finalizar cada serie, se midió el torque de remoción del tornillo y se realizaron fotografías de todos los elementos de la implanto-prótesis. Una vez finalizado el test de carga, se sometió a esos mismos tornillos a un test de presión acuática para evidenciar la presencia de filtración interfásica. Resultados: La pérdida de torque de los tornillos Star apretados a torque experimental fue claramente inferior que cuando se les aplicó el torque recomendado (29.56% frente a 47.94%). Por el contrario, los tornillos conexión interna no mejoraron el mantenimiento de su precarga al aplicarles el torque experimental. Todos los tornillos evidenciaron daños macroscópicos tras el ciclado. Los daños en el tercio cervical de los tornillos aumentaron progresivamente con el paso de las series. En el test de filtración, los implantes de conexión externa mostraron mayor riesgo de presentar filtración interfásica que los de conexión interna (OR: 40.0; CI95%:4.8-334.8, p, [EN]Introduction: One of the most prevalent problems associated with dental implants is abutment screw loosening. Torque (Ncm) is an indirect way of measuring the screw preload (V). The reverse torque of a screw allows knowing the remaining preload. Torque loss can lead to micromovements in the interface that can allow bacterial leakage through it, this causes mechanical and biological problems at the implant-abutment interface. Objective: The main objective of this study is to quantify the reverse torque values of abutment screws used in external and internal connection implants, screwed to different torque values and subjected to cyclic load. Also, knowing the interface sealing using an aquatic pressure test. Material and Method: 30 Mozo Grau implants, 10 of internal connection and 20 of external connection were screwed to anti-rotational abutments by two types of screw (Estándar and Star) making 6 working subgroups. Inside each group we applied recommended torque value of 20 Ncm for internal connection (IntEstandarR) and 30 Ncm for external connection (ExtEstandarR and ExtStarR) and experimental torque value of 35 Ncm for internal connection (IntEstandarE) and 45 Ncm for external connection (ExtEstandarE and ExtStarE). Later, we subjected the samples to five series of 10000 chewing cycles. At the end of each series, we measured the screw reverse torque value and we took photographs of each element of the implant system. Once the chewing test was finished, we subjected that same screws to an aquatic pressure test to evidence the presence of interface leakage. Results: Torque loss of Star screws tightened to experimental values was clearly lower than when they were screwed to recommended values (29.56% versus 47.94%). On the other hand, internal connection screws did not improve the preload maintenance when applying experimental torque values. All the screws showed macroscopic damage after loading. Damage in the cervical third of the screws increased as series passed. In the leakage test, external connection implants showed more risk of interface leakage than internal connection implants (OR: 40.0; CI95%:4.8-334.8, p

This work was carried out within the frame of FEDER-Infrastructure Project: IE_2019-198 and OBEMIRISK EFSA-Partnering Grant Project GP/EFSA/ENCO/2018/03-GA04. A.T.-S. and a.R.-M. "Colaboracion Investigacion-Master". J.P.-C. "ICARO-Extracurriculares Practicas". A.L.-M. "Incentivacion de la Investigacion". Plan Propio-UGR. K.C. is collaborating with UGR under the EU-FORA Programme (2020/2021)., The variable taxa components of human gut microbiota seem to have an enormous biotechnological potential that is not yet well explored. To investigate the usefulness and applications of its biocompounds and/or bioactive substances would have a dual impact, allowing us to better understand the ecology of these microbiota consortia and to obtain resources for extended uses. Our research team has obtained a catalogue of isolated and typified strains from microbiota showing resistance to dietary contaminants and obesogens. Special attention was paid to cultivable Bacillus species as potential next-generation probiotics (NGP) together with their antimicrobial production and ecological impacts. The objective of the present work focused on bioinformatic genome data mining and phenotypic analyses for antimicrobial production. In silico methods were applied over the phylogenetically closest type strain genomes of the microbiota Bacillus spp. isolates and standardized antimicrobial production procedures were used. The main results showed partial and complete gene identification and presence of polyketide (PK) clusters on the whole genome sequences (WGS) analysed. Moreover, specific antimicrobial effects against B. cereus, B. circulans, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Serratia marcescens, Klebsiella spp., Pseudomonas spp., and Salmonella spp. confirmed their capacity of antimicrobial production. In conclusion, Bacillus strains isolated from human gut microbiota and taxonomic group, resistant to Bisphenols as xenobiotics type endocrine disruptors, showed parallel PKS biosynthesis and a phenotypic antimicrobial effect. This could modulate the composition of human gut microbiota and therefore its functionalities, becoming a predominant group when high contaminant exposure conditions are present., European Commission IE_2019-198, OBEMIRISK EFSA GP/EFSA/ENCO/2018/03-GA04

Orientador: Giselle Maria Marchi Baron Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Objetivos: Desenvolver infiltrantes experimentais contendo sal de difeniliodônio (DFI) e quitosana em diferentes concentrações e avaliar seu desempenho físico-químico in vitro (Cap. 1) e in situ (Cap. 2) em comparação com o infiltrante comercial. Materiais e métodos: Foram desenvolvidos 9 infiltrantes experimentais contendo TEGDMA e BisEMA, variando a concentração do DFI em 0; 0,5; 1 mol% e quitosana em 0; 0,12 e 0,25% - em peso, que foram comparados com o infiltrante comercial Icon® (controle positivo). A formulação foi realizada em ambiente com iluminação e temperatura controlados. Para o estudo in vitro, foram utilizados corpos de prova de infiltrantes polimerizados e realizados testes de Módulo de Elasticidade (n=10), Resistência à Flexão (n=10), Grau de Conversão (n=5), Sorção (n=5) e Solubilidade (n=5); e para o teste de Ângulo de contato (n=6) foram utilizados blocos de esmalte humano dental polido e infiltrantes não polimerizados. Para o estudo in situ, 132 blocos de esmalte humano dental (n=12/grupo) foram confeccionados e submetidos à simulação de lesão inicial de cárie. As amostras foram aleatorizadas com base na microdureza inicial do esmalte e divididas em 11 grupos de tratamento (9 infiltrantes experimentais, infiltrante comercial como controle positivo e grupo sem tratamento como controle negativo) e foram realizados os testes de Rugosidade (n=3), Área (n=3), Morfologia e Projeção Superficial com Microscópio de Força Atômica (n=3), Análise microbiológica por Teste de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL; n=5) e Profundidade de Penetração (n=3) com Microscópio Confocal de Varredura à Laser. Os dados foram analisados por meio de modelos lineares generalizados e ANOVA one-way com post-hoc de Tukey e pelo teste de Dunnet (alfa=0.05). Resultados: In vitro - Grupos de infiltrantes contendo a mistura de DFI 1% e quitosana 0.12% e 0.25% tiveram melhores resultados de módulo de elasticidade, resistência à flexão e grau de conversão em comparação com o produto comercial Icon®. Porém, para sorção, solubilidade e ângulo de contato, o Icon® teve o melhor desempenho. In situ - Não houve diferença significativa entre os onze grupos quanto atividade microbiológica (UFC/mL), rugosidade e área (p

Agradecimentos: The authors acknowledge the use of the analytical instrumentation facility at the Institute of Chemistry, the University of Campinas, which is supported by the State of Paulo. This work was carried out with the support of the São Paulo Research Foundation - FAPESP (Grant: 2010/05394-9, 2010/12376-5, 2010/00863-0, 2011/09240-9, and 2011/17877-7) and the National Council for Scientific and Technological Development (CNPq/PIBITI) for the financial support. The authors would like to thank Brazilian Nanotechnology National Laboratory (LNNano) for technical support during SEM and AFM analyzes especially Dr. Carlos Alberto Rodrigues Costa for his technical assistance with AFM analysis Abstract: In vitro and in vivo experiments were undertaken to evaluate the solubility, apatite-forming ability, cytocompatibility, osteostimulation, and osteoinduction for a series of Nb-containing bioactive glass (BGNb) derived from composition of 45S5 Bioglass. Inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP-OES) revealed that the rate at which Na, Ca, Si, P, and Nb species are leached from the glass decrease with the increasing concentration of the niobium oxide. The formation of apatite as a function of time in simulated body fluid was monitored by 31P Magic Angle Spinning (MAS) Nuclear magnetic resonance spectroscopy. Results showed that the bioactive glasses: Bioglass 45S5 (BG45S5) and 1 mol%-Nb-containing-bioactive glass (BGSN1) were able to grow apatite layer on their surfaces within 3 h, while glasses with higher concentrations of Nb2O5 (2.5 and 5 mol%) took at least 12 h. Nb-substituted glasses were shown to be compatible with bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMMSCs). Moreover, the bioactive glass with 1 mol% Nb2O5 significantly enhanced cell proliferation after 4 days of treatment. Concentrations of 1 and 2.5 mol% Nb2O5 stimulated osteogenic differentiation of BMMSCs after 21 days of treatment. For the in vivo experiments, trial glass rods were implanted into circular defects in rat tibia in order to evaluate their osteoconductivity and osteostimulation. Two morphometric parameters were analyzed: (a) thickness of new-formed bone layer and (b) area of new-formed subperiostal bone. Results showed that BGNb bioactive glass is osteoconductive and osteostimulative. Therefore, these results indicate that Nb-substituted glass is suitable for biomedical applications CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP Fechado

Three-dimensional-porous scaffolds of bone graft substitutes play a critical role in both cell targeting and transplantation strategies. These scaffolds provide surfaces that facilitate the response of stem cells related to attachment, survival, migration, proliferation, and differentiation. Objective The aim of this study was to evaluate the in vitro behavior of human dental pulp mesenchymal stem cells cultured on scaffolds of polylactic/polyglycolic acid with and without hydroxyapatite. Method We performed an in vitro experimental study using dental pulp stem cells obtained from samples of premolars, molars. The cells were cultured on scaffolds with osteogenic differentiation medium. Cell proliferation, adhesion and cell differentiation to an osteoblastic linage in the biomaterial were evaluated at three different time points: 7, 15 and 30 days. Each experiment was performed in triplicate. Analysis of the data was performed with the Split Plot block and MANOVA model. Results The differentiation capability of hDPSCs towards the osteoblast lineage was better in the scaffold of PLGA/HA at 7, 15 and 30 days, as indicated by the high expression of osteogenic markers RUNX2, ALP, OPN and COL-I, compared with differentiation in the PLGA scaffold. No statistically significant differences were found in cell adhesion between the two types of scaffolds. Conclusion The PLGA/HA scaffold provided better physical and chemical signals, as judged by the ability of dental pulp stem cells to adhere, proliferate and differentiate toward the osteogenic lineage.

Made available in DSpace on 2019-09-12T16:26:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015 OBJETIVO: Avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosusna expressão dos fatores de virulência de Candida albicans in vitro.MÉTODOS: Uma suspensão de L. rhamnosusfoi inicialmente cultivada em ágar MRS. No dia seguinte, foi adicionado ágar Sabouraud dextrose sobre o crescimento dos lactobacilos e C. albicansfoi cultivada, por 24, 48 e 72 horas. As cepas de Candidaforam então isoladas para investigação da capacidade de formação de biofilme, por meio do cultivo em placas de 96 poços e leitufra das densidades ópticas e contagem de unidades formadoras de colônia por mL (UFC/mL). Também se investigou a capacidade de formação de tubo germinativo, após incubação em soro de cavalo e contagem em 200 células. Os resultados foram comparados aos observados nas cepas de Candidacultivadas na ausência de L. rhamnosus, utilizando o teste tde Student para análise estatística.RESULTADOS: Observou-se uma redução significativa no crescimento de C. albicans na presença de lactobacilos após 24, 48 ou 72 horas. Também foi observada redução significativa na formação de tubo germinativo após a interação por 48 ou 72 horas. Quanto à formação de biofilme, não foi observada diferença significante entre as cepas de Candidacultivadas na presença ou na ausência de lactobacilos.CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que L. rhamnosusé capaz de influenciar significativamente o crescimento e a expressão de fatores de virulência de C. albicans in vitro, podendo interferir na patogenicidade desses micro-organismos. PURPOSE: To investigate the influence of Lactobacillus rhamnosus in the expression of virulence factors of Candida albicans in vitro.METHODS: A suspension of L. rhamnosus was initially grown in MRS agar. The other day, Sabouraud dextrose agar was added on the growth of lactobacilli and C. albicans was seeded for 24, 48 and 72 hours. Candida strains were then isolated for investigation of the ability of biofilm formation, by means of cultivation into 96 wells plaque, and reading the optical densities and counting colony forming units per mL. Also the ability of germ tube formation was investigated, after incubation in horse serum and counting of 200 cells. The results were compared to Candida strains grown in the absence of L. rhamnosus, using Student's t test for statistical analysis.RESULTS: there was a significant reduction in the growth of C. albicans in the presence of lactobacilli after 24, 48 or 72 hours. Significant reduction was also observed in germ tube formation after interaction for 48 or 72 hours. For biofilm formation, no statistically significant difference was observed between the Candida strains grown in the presence or absence of lactobacilli.CONCLUSION: The results suggest that L. rhamnosus is able to influence significantly the growth and expression of virulence factors of C. albicans in vitro, and may interfere with pathogenicity of these micro-organisms. [Leite, Poliana Gasparin Correa] Universidade de Taubaté, Brazil Leão, Mariella Vieira Pereira; Silva, Célia Regina Gonçalves e; Santos, Silvana Soléo Ferreira dos] Universidade de Taubaté, Brazil

Introdução: A detecção de pirogênios é imprescindível no controle da qualidade de produtos injetáveis. O Teste de Pirogênio em coelhos ainda tem larga aplicação, apesar da existência de métodos alternativos como o Teste de Ativação de Monócitos (MAT). Objetivo: Revisar o uso dos métodos alternativos no teste de pirogênio, apontando avanços e perspectivas a partir do reconhecimento do MAT pela Farmacopeia Europeia e sua aceitação para fins regulatórios no Brasil. Método: Uma busca foi realizada nas bases PubMed e BVS, com posterior classificação, categorização por assuntos e análise crítica dos resultados. Resultados: Foram identificados 24 trabalhos, abordando temas como as aplicações do MAT, sua validação e comparação com testes in vivo. O MAT apresentou melhores resultados quando comparado a outros testes, tanto na avaliação de produtos biológicos como na detecção de pirogênios não-endotoxinas. Limitações para sua difusão incluem a dificuldade de obtenção de sangue total humano como fonte de monócitos, para o qual diversas alternativas têm sido propostas. Conclusões: O MAT se mostra um método promissor, com aplicação na avaliação da segurança de novas tecnologias. Sua aplicação no Brasil depende de uma política nacional de implantação, que inclua maior Integração entre BraCVAM, Concea e RENAMA na busca por seu reconhecimento para fins regulatórios.

Orientadores: Michelle Franz Montan Braga Leite, Francisco Carlos Groppo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O uso de formulações tópicas na cavidade oral apresenta baixa eficácia devido à complexidade e variabilidade da mucosa de revestimento e difícil acessibilidade aos tecidos profundos, como a polpa dental. Microagulhas têm sido relatadas como eficiente e indolor sistema transdérmico e transmucosa de fármacos para ação local e/ou sistêmica e poderia melhorar ação de fármacos tópicos em Odontologia. Visando a melhora da biodisponibilidade de formulações tópicas, estudos de permeação in vitro são muito importantes pois podem permitir a previsão do comportamento destas frente à barreira utilizada. No entanto, não existe um modelo de barreira que mimetize as condições reais da cavidade oral. Nesse contexto, este estudo teve como objetivos padronizar barreiras de tecidos espessos da cavidade oral de suínos, adaptar células de difusão e condições experimentais para realização de estudos de permeação in vitro com essas barreiras, visando o desenvolvimento de produtos tópicos em Odontologia. Além disso, avaliar a eficiência e aplicabilidade de microagulhas revestidas ou não como promotores de absorção in vitro, na metodologia desenvolvida. Artigo 1: foram padronizados os tecidos espessos de palato de porco (com e sem osso) como barreiras e condições experimentais para realização de ensaios de permeação in vitro. Em seguida, o sistema de microagulhas Dermaroller® (0,2, 0,5 e 1 mm de comprimento) foi aplicado naqueles tecidos, os quais foram montados em células de difusão vertical (Franz) adaptadas. Foram avaliados o fluxo, quantidade total permeada e o fator de promoção de permeação (EF) para os anestésicos locais lidocaína e prilocaína. Os tecidos foram padronizados com sucesso e a célula de Franz adaptada permitiu manter as condições ao longo das 12h dos experimentos de permeação. A permeação dos fármacos analisados ocorreu eventualmente, demonstrando a resistência das barreiras à difusão de fármacos. A aplicação prévia das microagulhas nos tecidos aumentou a permeação das drogas-teste em relação aos grupos-controle. Artigo 2: microagulhas de 0,7 mm foram revestidas com a droga Sulforrodamina B, aplicadas na superfície de mucosa jugal de suínos, seguida de ensaios de permeação (24h). Dois tipos de fluxo salivar (estático e dinâmico) foram simulados no compartimento doador da célula e comparados com a presença de umidade como controle negativo. Foram avaliados o tempo para início da permeação, fluxo e o EF. Ambos os tipos de fluxos salivares alteraram o perfil de permeação da droga modelo, aumentando a quantidade de droga permeada, em comparação com o controle, demonstrando a importância da saliva na realização de testes de permeação in vitro. Conclusões gerais: os tecidos foram padronizados e permitiram realizar ensaios de permeação nas células de Franz adaptadas. O uso de microagulhas foi eficaz em aumentar a permeação de fármacos nas condições avaliadas. A presença de fluxo salivar demonstrou ser importante para simular as condições reais da cavidade oral em permeação in vitro, pois pode ser fundamental na dinâmica da permeação através do tecido. O presente estudo representa um aprimoramento na realização de experimentos de permeação in vitro visando a melhora de formulações tópicas e promotores de absorção para uso em Odontologia Abstract: The use of topical formulations in the oral cavity presents low efficiency because of the complexity and variability of the mucosal lining and hard accessibility of deep tissues, as dental pulp. Microneedles have been reported as efficient and painless transdermal and transmucosal drug systems for local and/or systemic effect and could improve action of topical drugs in Dentistry. Aiming at improving the bioavailability of topical formulations, in vitro permeation studies are very important because it may allow predicting the behavior of these formulations in front of the barrier used. However, there is no barrier model that mimics the actual conditions of the oral cavity. In this context, this study aimed to standardize thick tissue barriers of the oral cavity from pigs, adapt diffusion cells and experimental conditions for performing in vitro permeation studies with these barriers, in order to develop topical products in Dentistry. Moreover, to evaluate the efficiency and applicability of microneedles coated or not as in vitro absorption enhancers in this methodology. Article 1: pig thick palate tissues (with and without bone) and experimental conditions were standardized to carry out in vitro permeation experiment. The microneedle device Dermaroller® (0.2, 0.5 and 1 mm length) was applied in those tissues, which were mounted in adapted Franz-type vertical diffusion cells. The Flux and the permeation enhancement factor (EF) of the local anesthetics lidocaine and prilocaine were evaluated. Tissues were successfully standardized and the adapted Franz cell allowed to maintain the experimental conditions through the 12h of permeation assay. The permeation of the analyzed drugs has occurred eventually, demonstrating the effectiveness of the barriers. The microneedles pretreatment on tissues increased the permeation flux of the tested drugs, in comparison to control groups. Article 2: microneedles of 0.7 mm were coated with the drug Sulforhodamine B, and applied on the porcine buccal mucosa surface, followed by permeation tests (24h). Two types of salivary flow (static and dynamic) were simulated inside the donor chamber and were compared with a moistened gauze as a negative control. We evaluated the onset time to permeation (Lag Time), flux and EF. Either of the simulated salivary flux affected the permeation profile of the model drug, by means of increasing drug permeation, as compared to the negative control, demonstrating the importance of saliva during in vitro permeation studies. General conclusions: tissues were standardized and allowed to perform permeation assays with adapted Franz cells. The use of microneedles in those barriers was effective to increase the permeation of drugs under the conditions evaluated. The presence of salivary flow has proved to be important to simulate the real conditions of the oral cavity in in vitro permeation, which might have an essential role on permeation dynamics across the tissue. This study represents an advancement to perform in vitro permeation assays, aiming at the improvement of topical formulations and absorption enhancers for use in Dentistry Doutorado Farmacologia, Anestesiologia e Terapêutica Doutor em Odontologia FAPESP 2012/02492-5, 2011/18113-0, 2012/06974-4 CAPES 7353/13-8

The suitability of frozen serum after storage in primary sampling tubes with a gel separator for serological enzyme-linked immunosorbent assay testing (hepatitis B virus surface antigen [HBs Ag], anti-HBs Ag, anti- Toxoplasma gondii immunoglobulin G [IgG], anti-rubella virus IgG, anti-cytomegalovirus IgM, and anti-Epstein-Barr virus IgM) was evaluated for 375 samples. No difference was found among test results using fresh or stored frozen serum