Search

This article aims to analyze the novel "O homem duplicado", by José Saramago, and its film adaptation, entitled "Enemy", by Denis Villeneuve, and the different conceptions of love present in both novel and film. The article follows a line of reasoning that understands novel and film with isonomy, without creating a hierarchical relationship between the original work and the adaptation. Thus, the film director is understood with the same authorial power as a literary author, with the freedom to alter the source material as he finds it necessary so his worldview is present in the final product. O presente artigo tem o intuito de analisar a obra “O homem duplicado”, de José Saramago, e sua adaptação para o cinema, intitulada “Enemy”, de Denis Villeneuve, e as diferentes concepções de amor presentes nas obras. O trabalho segue uma linha de raciocínio que entende a obra romanesca e fílmica com isonomia sem que se construa uma relação hierárquica entre obra de origem e adaptação. Desse modo, entende-se o diretor de cinema no mesmo patamar autoral de um autor literário, com a liberdade de alterar o material de origem conforme julgar necessário para que sua visão de mundo esteja presente na obra.

Objective: To analyze the mortality rates due to congenital malformations in the circulatory system in children younger than 1 year in the Southeast region of Brazil between 2014 and 2019. Methods: This is an ecological time series study carried out through the quantitative and qualitative analysis of the sample composed of deaths of children under 1 year old, as a result of congenital malformations in the circulatory system, in the Southeast region of Brazil in the period between 2014 and 2019. Data were collected from the Mortality Information System (SIM), made available through the Informatics Department of the Unified Health System (DATASUS). All notifications made during the six-year period studied were included and information not computed by the SIM was excluded. The analysis of epidemiological aspects was based on the following variables: year of death, Federation Unit (UF), place of occurrence, color/race and sex. Results: A total of 9,884 deaths were computed, distributed with little variation between the years observed. Of these, 51.82% occurred in the state of São Paulo; 94.55% in a hospital environment; 62.09% in children of color/white race and 53.3% in male children. Conclusion: The present study elucidated and related the epidemiological aspects of deaths from congenital malformations in the circulatory system in children under 1 year of age between 2014 and 2019, thus contributing to the recognition of the impact of these conditions on the child's life and the importance of early diagnostic measures in reducing mortality. Objetivo: Analizar las tasas de mortalidad por malformaciones congénitas del sistema circulatorio en niños menores de 1 año en la región Sudeste de Brasil entre 2014 y 2019. Métodos: Se trata de un estudio de serie temporal ecológica realizado mediante análisis cuantitativo y cualitativo de la muestra. compuesto por muertes de niños menores de 1 año, por malformaciones congénitas en el sistema circulatorio, en la región Sudeste de Brasil en el período comprendido entre 2014 y 2019. Los datos fueron recopilados del Sistema de Información de Mortalidad (SIM), puesto a disposición por medio de el Departamento de Tecnologías de la Información del Sistema Único de Salud (DATASUS). Se incluyeron todas las notificaciones realizadas durante el sexenio estudiado y se excluyó la información no computada por el SIM. El análisis de los aspectos epidemiológicos se basó en las siguientes variables: año de muerte, Unidad de la Federación (FU), lugar de ocurrencia, color/raza y sexo. Resultados: Se computaron un total de 9.884 defunciones, distribuidas con poca variación entre los años observados. De estos, 51,82% ocurrieron en el estado de São Paulo; 94,55% en ambiente hospitalario; 62,09% en niños de color/raza blanca y 53,3% en niños varones. Conclusión: El presente estudio esclareció y relacionó los aspectos epidemiológicos de las muertes por malformaciones congénitas del sistema circulatorio en niños menores de 1 año entre 2014 y 2019, contribuyendo así al reconocimiento del impacto de estas condiciones en la vida del niño y la importancia de las medidas de diagnóstico precoz para reducir la mortalidad. Objetivo: Analisar os índices de mortalidade por malformações congênitas em aparelho circulatório em crianças menores de 1 ano na região Sudeste do Brasil entre os anos de 2014 e 2019. Métodos: Trata-se de um estudo ecológico de série temporal realizado através da análise quantitativa e qualitativa da amostra composta pelos óbitos de crianças menores de 1 ano, em decorrência de malformações congênitas em aparelho circulatório, na região Sudeste brasileira no período decorrido entre 2014 e 2019. Os dados foram coletados do Sistema de Informações sobre Mortalidade (SIM), disponibilizados por meio do Departamento de Informática do Sistema Único de Saúde (DATASUS). Foram incluídas todas as notificações realizadas durante o intervalo de seis anos estudado e excluídas as informações não computadas pelo SIM. A análise dos aspectos epidemiológicos partiu das seguintes variáveis: ano de óbito, Unidade da Federação (UF), local de ocorrência, cor/raça e sexo. Resultados: Foi computado o total de 9.884 óbitos, distribuídos de maneira pouco variável entre os anos observados. Destes, 51,82% ocorreu no estado de São Paulo; 94,55% em ambiente hospitalar; 62,09% em crianças de cor/raça branca e 53,3% em crianças do sexo masculino. Conclusão: O presente estudo elucidou e relacionou os aspectos epidemiológicos dos óbitos por malformações congênitas em aparelho circulatório em crianças menores de 1 ano entre 2014 e 2019, contribuindo, assim, para o reconhecimento do impacto destas condições sobre a vida da criança e da importância de medidas diagnósticas precoces na redução da mortalidade.

The present study aimed to collect and analyze statistical data regarding cases of syphilis in pregnant women, as well as changes in clinical classifications in the previous period and during the pandemic in Brazil. For the construction of the article, an ecological time series study was carried out, using data on the incidence and clinical changes of syphilis in pregnant women, aligned with the regional geographic unit to which they belonged, in the period from 2018 to 2021. According to the data obtained, we see a large drop between the years 2020 and 2021 in cases of syphilis in pregnant women, a drop of 51.42%, possibly due to the prioritization of emergencies and the reduction in the risk of transmission of SARS-CoV-2 in health services, social isolation, underreporting and exacerbation of social inequities during the pandemic, reduction in the birth rate, reduction of socialization due to isolation during the pandemic. This discovery causes several future complications for both patients and health service providers, which will eventually bring more costs to the system, because if there was an early discovery of this disease, a less invasive, painful treatment could be performed, with a greater chance of cure. It is necessary to intensify the alert for citizens not to neglect their health amid the fear implanted in the pandemic, so that it is possible to identify, treat and consequently prevent new lives from being taken in the Brazilian population. El presente estudio tuvo como objetivo recopilar y analizar datos estadísticos sobre casos de sífilis en mujeres embarazadas, así como cambios en las clasificaciones clínicas en el período anterior y durante la pandemia en Brasil. Para la construcción del artículo se realizó un estudio de serie temporal ecológica, utilizando datos de incidencia y cambios clínicos de la sífilis en gestantes, alineados con la unidad geográfica regional a la que pertenecían, en el período de 2018 a 2021. Según Con los datos obtenidos, observamos una gran caída entre 2020 y 2021 en los casos de sífilis en mujeres embarazadas, una caída del 51,42%, posiblemente por la priorización de las emergencias y la reducción del riesgo de transmisión del SARS-CoV-2 en salud servicios, aislamiento social, subregistro y empeoramiento de las desigualdades sociales durante la pandemia, tasas de natalidad reducidas, socialización reducida debido al aislamiento durante la pandemia. Este descubrimiento genera varias complicaciones futuras tanto para los pacientes como para los proveedores de servicios de salud, lo que eventualmente traerá más costos al sistema, ya que si hubiera un descubrimiento temprano de esta enfermedad, se podría realizar un tratamiento menos invasivo, doloroso y con mayor probabilidad de curación. Es necesario intensificar la alerta para que los ciudadanos no descuiden su salud en medio del miedo implantado en la pandemia, para que sea posible identificar, tratar y consecuentemente prevenir que se arrebaten nuevas vidas a la población brasileña. O presente estudo teve como objetivo o levantamento e análise de dados estatísticos referente aos casos de Sífilis em gestantes, assim como as mudanças de classificações clínicas no período anterior e durante a pandemia no Brasil. Para a construção do artigo, realizou-se um estudo ecológico de série temporal, utilizando dados sobre a incidência e mudanças clínicas da sífilis em gestantes, alinhadas à unidade geográfica regional a que pertenciam, no período de 2018 a 2021. Segundo os dados obtidos, vemos uma grande queda entre os anos de 2020 a 2021 nos casos de sífilis em gestantes, queda de 51.42%, sendo possivelmente devido à priorização das emergências e à redução do risco de transmissão do SARS-CoV-2 nos serviços de saúde, isolamento social, subnotificações e agudização de iniquidades sociais durante a pandemia, redução na taxa de natalidade, redução da socialização por isolamento durante pandemia. Essa descoberta acarreta diversas complicações futuras tanto para as pacientes quanto aos prestadores de serviços de saúde, que eventualmente trará mais custos para o sistema, pois se houvesse uma descoberta precoce dessa doença, poderia realizar-se um tratamento menos invasivo, doloroso e com maior chance de cura. É necessário a intensificação de alerta para os cidadãos para não negligenciar sua saúde em meio ao medo implantado na pandemia, para assim ser possível identificar, tratar e consequentemente impedir que novas vidas sejam ceifadas na população brasileira.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica de Minas Gerais, Programa de Pós-Graduação em Letras Bibliografia: f. 121-126 Esse trabalho tem o intuito de analisar O cheiro do ralo, de Lourenço Mutarelli, e sua adaptação cinematográfica homônima, de Heitor Dhalia, levando em consideração questões da linguagem literária e como é feita a transposição para a linguagem cinematográfica. Para tanto, serão discutidos aspectos teóricos da adaptação e dos estudos das mídias fazendo uso de conceitos como transmidiliadade, intermidialidade e remediação. Esses conceitos serão importantes para entender como se dá a relação entre as mídias no que diz respeito à constituição genealógica e como elementos de uma mídia podem se materializar em outra e, assim, expandir o leque de possibilidades narrativas. Além disso, será analisado o modo como acontece a adaptação transmidiática do romance para o filme, observando-se as alterações que ocorrem no processo. Para que isso seja possível, é necessário refletir acerca do contexto sociocultural em que essas obras foram concebidas e como esse contexto influencia em sua criação estética. Por isso, uma incursão aos estudos que pensam o marginal na Literatura e no Cinema será realizada a fim de desvendar as origens e as motivações estéticas que constituem ambos livro e filme. PALAVRAS-CHAVE: Adaptação, intermidialidade, transmidialidade, Literatura, Cinema. This work intends to analyze O cheiro do ralo, by Lourenço Mutarelli, and its homonymous cinematographic adaptation by Heitor Dhalia, taking into account the issues of literary language and how it is transposed to the cinematographic language. Therefore, theoretical aspects of adaptation and media studies were discussed, using concepts such as transmediality, intermediality and remediation. These concepts are important to understand the relationship between medias in terms of their genealogical constitution and how elements of one media can materialize into another, thus, expanding the range of narrative possibilities. In addition, the techniques used in the transmedia adaption from novel to film will be analyzed, observing how changes happen in the process. To make this possible, it is necessary to think about the socio-cultural context in which these works were conceived and how this context influences their aesthetic creation. Therefore, an incursion into the studies about the marginal movement in Literature and Cinema will be carried out in order to unravel the origins and the aesthetic motivations of both book and film. KEYWORDS: Adaptation, intermediality, transmediality, Literature, Cinema.

Ao longo dos últimos anos, os Novos Media têm sido plataformas de partilha, produção e transmissão de conteúdos têm assumido um papel fundamental na vida dos indivíduos e da sociedade atual, sendo esse o reflexo que se pretende transmitir ao longo desta dissertação com a transmissão de conteúdo desportivo. Nesta pesquisa, pretende-se analisar a utilização que os canais desportivos fazem dos Novos Media, em particular a SportTV Portugal e a Eleven Sports Portugal. Para tal, ao longo da presente dissertação, foi efetuada uma pesquisa bibliográfica tendo em conta os autores e os modelos conhecidos na área de conhecimento da Comunicação, Novos Media e transmissão de conteúdo desportivo, bem como, uma metodologia assente em entrevistas semiestruturadas aos respetivos diretores de Redes Sociais de ambos os canais, bem como, uma análise de conteúdo às páginas de Instagram e YouTube de ambas as empresas. O presente estudo permitiu concluir que as práticas exercidas por ambas as organizações são bastante semelhantes, mas não idênticas, sendo que tal acontecimento se verifica por possuírem diferentes modelos de negócio e diferentes naturezas e identidades organizativas no que toca aos mercados em que ambas atuam. Assim, concluise por um lado, que ambas se terem adaptado relativamente bem aos tempos modernos e à forma como as TIC têm evoluído ao longo do tempo, por intermédio das Redes Sociais, mas, por outro lado que apesar de ambas querem atingir o mesmo consumidor final, estas apresentam linguagens diferentes na sua transmissão e partilha de conteúdos desportivos. Over the past few years, New Media have been platforms for sharing, producing and transmitting content and have assumed a fundamental role in the lives of individuals and today's society, which is the reflex that is intended to be transmitted throughout this dissertation with the transmission of sports content. In this research, we intend to analyze the use that sports channels make of New Media, in particular SportTV Portugal and Eleven Sports Portugal. To this end, throughout this dissertation, a bibliographic search was carried out taking into account the authors and models known in the area of knowledge of Communication, New Media and transmission of sports content, as well as a methodology based on semi-structured interviews with the respective directors. of Social Networks of both channels, as well as a content analysis to the Instagram and YouTube pages of both companies. The present study allowed us to conclude that the practices exercised by both organizations are quite similar, but not identical, and this event is verified by having different business models and different natures and organizational identities with respect to the markets in which both operate. Thus, it is concluded on the one hand, that both have adapted relatively well to modern times and to the way that ICT has evolved over time, through Social Networks, but, on the other hand, despite both wanting to reach the same final consumer, they present different languages in their transmission and sharing of sports content.

Submitted by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2021-02-01T11:09:31Z No. of bitstreams: 1 DM_FredericoTeixeira_2020_MEEC.pdf: 51733694 bytes, checksum: 00d200a97646a25f93b849ed3dd4d8a5 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2021-02-01T11:10:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DM_FredericoTeixeira_2020_MEEC.pdf: 51733694 bytes, checksum: 00d200a97646a25f93b849ed3dd4d8a5 (MD5) Made available in DSpace on 2021-02-01T11:10:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DM_FredericoTeixeira_2020_MEEC.pdf: 51733694 bytes, checksum: 00d200a97646a25f93b849ed3dd4d8a5 (MD5) Previous issue date: 2020

Com o objectivo de clarificar o mecanismo de resistência à terapêutica com eritropoietina humana recombinante (EPOhr) em doentes hemodializados, estudamos alterações a ela associada, com particular interesse na inflamação, activação leucocitária, ciclo do ferro, stress oxidativo e lesão eritrocitária. Foram estudados 63 doentes renais crónicos (DRC) em hemodiálise e terapêutica com EPOhr (32 respondedores e 31 não respondedores à terapêutica com EPOhr) e 26 indivíduos controlo. Em 20 dos DRC (10 respondedores e 10 não respondedores à terapêutica com EPOhr), foram também colhidas amostras de sangue imediatamente após a hemodiálise para estudar os efeitos deste procedimento. Quando comparados com os controlos, os DRC em hemodiálise apresentaram linfocitopenia, resultante de uma diminuição da contagem dos linfócitos CD3+ e em que ambos os subtipos de linfócitos T CD4+ e CD8+ se encontravam diminuídos. Estes linfócitos apresentavam marcadores celulares de estimulação continuada aumentados e capacidade aumentada de produzir citoquinas associadas com a resposta imune do tipo Th1. Adicionalmente, estes doentes apresentavam marcadores inflamatórios, e aumento na activação dos neutrófilos. No que se refere ao estudo do ciclo do ferro, os DRC apresentavam aumento dos níveis séricos de ferritina e prohepcidina, e uma diminuição na transferrina. Adicionalmente, foram também encontradas alterações na composição proteica da membrana dos eritrócitos e no perfil da banda 3, sendo a diminuição da espectrina a alteração mais significativa. Aumento na capacidade antioxidante total (TAS), na peroxidação lipídica (TBA) e da razão TBA/TAS foram também demonstrados. Quando comparamos os dois grupos de DRC, verificamos que os não respondedores à terapêutica com EPOhr apresentavam diminuição no número total de linfócitos e nos linfócitos T CD4+, e aumento nos marcadores inflamatórios e na activação dos neutrófilos. Não encontramos diferenças significativas nos parâmetros relacionados com o ciclo do ferro, com excepção do receptor solúvel da transferrina, que se encontrava aumentado nos não respondedores. Os níveis séricos de prohepcidina encontravam-se diminuídos nos não respondedores; no entanto, encontravam-se mais elevados que no grupo controlo. Diminuição acentuada no conteúdo em espectrina, alterações no perfil de banda 3 [diminuição fragmentos proteolíticos da banda 3 (Pfrag) e na razão Pfrag/monómero de banda 3], e uma tendência para valores aumentados de hemoglobina ligada à membrana foram também encontrados nos DRC não respondedores à terapêutica com EPOhr. Em conclusão, apesar da etiologia à resistência à terapêutica com EPOhr não estar ainda completamente esclarecidaos nossos resultados confirmam que a inflamação parece ter um papel muito importante. Encontramos também relação entre resistência è terapêutica com EPOhr com défice funcional em ferro, linfocitopenia e linfocitopenia T CD4+, níveis plasmáticos aumentados de elastase, níveis séricos aumentados de interleucina-7, e alterações na estrutura das proteínas de membrana do eritrócito e no perfil de banda 3. Mais estudos serão necessários para se entender a associação entre a inflamação, e resistência à terapêutica com EPOhr e diminuição na disponibilidade em ferro., To better clarify the mechanism of resistance to recombinant human erythropoietin (rhEPO) therapy in haemodialysis patients, we studied systemic changes associated with this resistence in haemodialysis patients under rhEPO therapies, with particular interest on inflammation, leukocyte activation, ironstatus, oxidative stress and erythrocyte damage. We studied 63 chronic kidney disease (CKD) patients under haemodialysis and rhEPO therapies (32 responders and 31 non-responders to rhEPO therapy) and 26 healthy volunteers. In 20 of the CKD patients (10 responders and 10 non-responders to rhEPO therapy), blood samples were also collected immediately after dialysis to study the effect of the haemodialysis procedure. When compared to controls, haemodialysis patients presented lymphopenia, which results, at least in part, from a decrease in total circulating CD3+ T-lymphocytes and affect both the CD4+ and the CD8+ T-cell subsets. These lymphocytes presented markers of enhanced continuous activation state and enhanced ability to produce Th1 related cytokines. Furthermore, haemodialysis patients presented raised markers of an inflammatory process, and of an enhanced neutrophil activation, as showed by the high serum levels of elastase. Concerning to iron status, patients showed increased ferritin and prohepcidin serum levels, and a decrease in transferrin. Furthermore, some changes were observed in erythrocyte membrane protein composition and in band 3 profile, being the decrease in spectrin the most significant change. Higher plasma levels of total antioxidant status (TAS), lipidic peroxidation (TBA) and TBA/TAS ratio were also found. When comparing the two groups of patients, we found that non-responders presented a significant decrease in total lymphocyte and CD4+ T-cell counts, a more accentuated inflammatory process and indicators of enhanced neutrophil activation. No significant differences were found in serum iron status markers between the two groups of patients, except for the soluble transferrin receptor, which was higher among non-responders. Prohepcidin serum levels were significantly lower in non-responders, but were higher than those in the control group. An accentuated decrease in erythrocyte membrane spectrin, alterations in band 3 profile [decrease in band 3 proteolytic fragments (Pfrag) and in Pfrag/band 3 monomer ratio], and a trend to higher values of membrane bound haemoglobin were also found in non-responders patients. In conclusion, although the etiology of resistance to rhEPO therapy is still unknown, our work confirms that inflammation seems to have an important role in its pathophysiology. We also showed that resistance to rhEPO therapy is associated with “functional” iron deficiency, lymphopenia and CD4+ lymphopenia, higher elastase plasma levels, increased interleukin-7 serum levels, and alterations in erythrocyte membrane protein structure and in band 3 profile. Further studies are needed tounderstand the rise in inflammation with the associated need inhigher doses of rhEPO and the reduced iron availability.

The collection of packaging Design Department is broad and lacks of classifi cation to enable their use in class. This study deals with classifi cation systems for packaging, and the development of niche labels of signalling. The methodology was literature and exploratory. As a result it was developed a classifi cation system that met the needs of didactic acquis, as well as a system of labels for easy identifi cation of the types of packaging Este trabalho buscou estabelecer paralelos entre o contexto histórico de uma era e sua influência sobre o design de produtos. Verificou-se que a disponibilidade de tecnologia impacta diretamente nos padrões estéticos do produto e que a visão é principal sentido utilizado na percepção pois, através dela, o usuário estabelece conjecturas acerca do objeto. Partindo destes princípios, foi elaborada uma pesquisa exploratória para verificar se as características formais e simbólicas de um produto são condizentes com as mesmas do contexto histórico de sua concepção. Utilizou-se como recorte histórico o Brasil entre os anos 1950 e 2000. Para cada década, foram selecionadas duas características-chaves e uma cadeira representativa do contexto. O procedimento consistiu de entrevistas com 30 usuários, que compararam as características das décadas com as imagens das cadeiras. Os resultados apontam que, apesar de haver influência da capacidade técnico-produtiva sobre a estética da cadeira, a percepção visual traz interpretações que não são necessariamente relativas à época de concepção. As associações semânticas estabelecidas pelo usuário são fruto do contexto dos mesmos, e não do contexto do objeto.

Este trabalho tem como objectivo avaliar se os valores de dose recebida pelos doentes que realizam exames de Tomografia Computorizada (TC) Abdómen-pélvicos em dois hospitais da grande Lisboa estão de acordo com os Níveis de Referência de Diagnóstico Europeus (NRD). Foram comparadas também as unidades dosimétricas de exames realizados com corrente modelada e de exames realizados com corrente contínua em ambos os hospitais. O estudo consistiu na recolha de dados de 200 exames de TC Abdómen-pélvicos, 100 em cada hospital. No Hospital A, a média dos valores de DLPfoi 562,34 mGy.cm e a média dos valores de CTDIvol foi 12,06 mGy. No Hospital B, a média dos valores DLPe CTDIvol foi 767,14 mGy.cm e 15,02 mGy, respectivamente. No total da nossa amostra, concluiu-se que em nenhum exame os valores de unidades dosimétricas ultrapassam os valores dos NRD. Verificou-se também que os exames realizados no Hospital B implicam em média uma maior dose de radiação ionizante para o doente., This work aims to evaluate whether the dose values received by patients submitted to Abdominal-pelvic Computed Tomography (CT) in two hospitals in the Lisbon area do agree with the Diagnostic Reference Levels. The dosimetric units of examinations performed with modulated and continuous current in both hospitals were also compared.The study consisted in collecting data from 200 abdominal - pelvic CT's, obtained in two hospitals (100 per hospital) . In Hospital A, the mean DLP was 562.34 mGy.cm and the average values CTDIvol was 12.06 mGy. In Hospital B, the mean DLPand CTDIvol was 767.14 mGy.cm and 15.02 mGy, respectively.We have concluded that, from this sample, none of the dosimetric units values exceeded the Diagnostic Reference Levels values. It was also noted that tests performed in B involved higher doses of patient exposure to ionizing radiation.

This article is a review of sampling methods commonly used for the Hymenoptera census. Considerations on which method is applicable in certain situations are made. Instructions for analysis and computational programs are suggested. The study addresses the issue of difficulty in the identification of species collected, as well as ways to reduce this problem, such as the use of computer systems for online identification of species by means of high-quality digital photos compared to molecular analysis of genetic sequence in reference databases. Este artigo é uma revisão de métodos deamostragem comumente usado para o censo Hymenoptera. Considerações sobre qual método é aplicável em determinadas situações são feitas. Indicação de análise e programas computacionais são sugeridos. Aborda o problema da dificuldade de identificação de espécies coletadas, e formas de reduzir essa dificuldade, como a utilização de sistemas computacionais on-line para a identificação das espécies tanto por meio de fotos de alta qualidade digital como por meio de análises moleculares com comparação de sequência genética em banco de dados de referência.

The aim of this work was to study the effect of recombinant human erythropoietin (rhEPO) the rapy on haemorheological parameters, by using a rat model of chronic renal failure (CRF) induced by partial (3/4) nephrectomy. The study used adult male Wistar rats and was performed in three groups: a control one (n=6) and in two groups with induced chronic renal failure (n=9), being one of them submitted to rhEPO the rapy (n=4). Blood samples from the control group were collected at the beginning and at the end of the experimental procedure and from CRF rats at 3, 5, 8, 12 and 15 weeks after surgical partial nephrectomy. Haemorheology and renal function were evaluated. Three weeks after the 3/4 nephrectomy, a statistically significant increase in serum urea and creatinine concentrations were found. This increase in renal function markers remained high along the 12 weeks of experimental procedure. Comparing with controls, rhEPO treated rat have showed a statistically significant progressive increase in haemoglobin (Hb), haematocrit (Ht), red blood cells (RBC) count, mean cell volume (MCV), mean cell Hb (MCH) and red cell distribution width (RDW), showing at 12 weeks an inverse change, though still presenting significant higher values; a decrease in platelet counts, during the first 9 weeks of rhEPO therapy. When comparing haemorheological data from non-treated CRF and controls, we found only a trend to increased MCV and MCH values and a decrease in reticulocyte count. Comparing the two groups of CRF rats, we found that rhEPO treated rats presented significantly higher values in RBC, Hb, Ht and RDW. In both groups of CRF rats, at five weeks, there was a decrease in their values, showing at the end a significantly lower value when compared to controls. No consistent alterations were found in white blood cells in CRF rats, with or without rhEPO therapy. Partial nephrectomy seems to be a suitable methodology to induce CRF in rats and to study erythropoiesis biology. The rhEPO therapy is associated with an increased erythropoietic stimulation and a decrease in platelet count.

Este trabalho teve como objetivo investigar o efeito do tamanho das ilhas de floresta, de suas distâncias para a floresta contínua (isolamento) e para as estradas adjacentes sobre a comunidade de Scarabaeidae coprófagos. Amostras foram coletadas em 24 ilhas de floresta semidecídua, entre 0,5 e 360 ha, em uma matriz de savana amazônica e em oito locais em mata contínua predominantemente secundária, semidecídua, na região de Alter do Chão, Santarém, Pará. Os Scarabaeidae foram coletados com armadilhas do tipo pitfall com isca (fezes humanas) em dois períodos sazonais (seca e chuva). Para cada ponto de coleta foram instaladas 10 armadilhas distribuídas em dois transectos de 250 m, distantes 100 m entre si. Em cada transecto foram colocadas 5 armadilhas distantes 50 m entre si. Para cada local de coleta, foi registrado o DAP de todos os caules com diâmetro igual ou superior a 5 cm, em quatro transectos de 250 x 2 m, sendo estes dados utilizados para derivar os índices da estrutura da vegetação (diâmetro médio e número de indivíduos). A área, perímetro e as distâncias das ilhas para a floresta contínua foram calculadas utilizando-se respectivamente as extensões “X-Tools” e “Nearest Features v3.6d” para ArcView, sobre o mapa da área digitalizado a partir de uma imagem de Landsat TM de 1996. Os exemplares coletados foram identificados com a ajuda de bibliografia especializada e de especialistas. Para a caracterização da fauna, as espécies encontradas foram comparadas com uma lista de espécies gerada a partir de publicações para o Cerrado, Amazônia e ecótonos de transição (floresta–cerrado) brasileiros. Para avaliar a robustez da amostragem, foram empregadas curvas de rarefação e obtidas estimativas de riqueza empregando-se diversos estimadores. Para a análise dos padrões das comunidades, foi utilizada uma análise HNMDS (Semi-strong Hibrid Multidimensional Scaling) utilizandose a distância de Bray-Curtis. Foram encontrados 18 gêneros e 36 espécies pertencentes aos biomas do Cerrado e da Amazônia, mas não foi possível ter uma noção completa da parcela de cada bioma representada neste ecótono de transição savana-floresta, uma vez que as amostras não foram suficientes para o levantamento exaustivo da riqueza de Scarabaeidae. A ordenação mostrou uma tendência de agrupamento das florestas contínuas e de separação destas das ilhas de floresta. Apesar de o levantamento ter registrado um maior número de espécies nas ilhas de floresta que nas áreas de floresta contínua, as comunidades apresentaram um forte padrão hierárquico [P (T< 14,87°) 5 cm) (F=6,103, P=0,012, corrigido por Bonferroni). O número de árvores de cada local de amostragem foi relacionado com a proximidade de estradas (0,658), o que reforça a idéia de que as estradas estão contribuindo para mudanças na estrutura da vegetação, que por sua vez tem um efeito sobre a fauna de Scarabaeidae. This work had as objective to investigate the effect of the size of the forest islands, of its distances for the continuous forest (isolation) and for the adjacent roads on the coprófagos community of Scarabaeidae. Samples had been collected in 24 islands of semideciduous forest, between 0,5 and 360 ha, in an Amazonian savanna matrix and eight places in predominantly secondary, semideciduous continuous forest, in the region of Alter do Chão, Santarém, Pará. The Scarabaeidae had been collected with pitfall traps with bait (human dung) in two seasonal periods (dries and rain). For each point of collection 10 traps had been installed in two 250 m transects, distant 100 m between itself. 5 traps in each transect that had been placed 50 m apart. For each place of collect was registered the DAP (Height Brest Tree Diameter), of all trees with equal or superior diameter of the 5 cm, in four 250 transectos of 2 x m, being these used data to derive the indices from the structure of the vegetation (average diameter and number of individuals). The area, perimeter and the distances of the islands for the continue forest had been calculated using respectively the extensions "X-Tools" and "Nearest Features v3.6d" for ArcView, on the map of the area digitalized from an image of Landsat TM of 1996. The collected units had been identified with the aid of specialized bibliography and specialists. For the characterization of the fauna, the joined species had been compared with a list of species generated from publications for the Cerado, Amazonia and Brazilian ecotone (cerrado-floresta). To evaluate the robustness of the sampling, curves of rarefação had been used and gotten estimates of wealth using itself diverse estimators. For the analysis of the standards of the communities, an analysis HNMDS (Semi-strong Hibrid Multidimensional Scaling) using itself in the distance of Bray-Curtis was used. 18 pertaining sorts and 36 species to biomas of the Cerrado and Amazonia had been found, but was not possible to have a complete notion of the parcel of each biome represented in this ecotone of transition savanna-forest, once that the samples had not been enough for the exhausting survey of the wealth of Scarabaeidae. The ordinance showed a trend of grouping of the continuous forests and separation of these of the forest islands. Although the survey to have registered a bigger number of species in the forest islands that in the areas of continuous forest, the communities had presented a strong hierarchic standard [ P (T< 14,87°) 5 cm) (F=6,103, P=0,012, corrected for Bonferroni). The number of trees of each place of sampling was related with the proximity of roads (0,658), what it strengthens the idea of that the roads are contributing for changes in the structure of the vegetation, that in turn has a effect on the fauna of Scarabaeidae.

Submitted by Cristina Afonso (cac@lisboa.ucp.pt) on 2017-03-17T15:44:12Z No. of bitstreams: 1 tese_marlenedomingues_.pdf: 3621446 bytes, checksum: 63ee5ebb9cd5726f4d02f1994c2e94b2 (MD5) Approved for entry into archive by Cristina Afonso (cac@lisboa.ucp.pt) on 2017-03-17T15:44:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 tese_marlenedomingues_.pdf: 3621446 bytes, checksum: 63ee5ebb9cd5726f4d02f1994c2e94b2 (MD5) Made available in DSpace on 2017-03-17T15:44:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_marlenedomingues_.pdf: 3621446 bytes, checksum: 63ee5ebb9cd5726f4d02f1994c2e94b2 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13

Tese de doutoramento em Ciências da Saúde (Pré-Bolonha), Ramo de Ciências Biomédicas apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra A ciclosporina A (CsA) é um agente imunossupressor pertencente ao grupo dos inibidores da calcineurina que revolucionou a transplantação de órgão devido à grande capacidade para prevenir a rejeição do enxerto, continuando a ser fundamental na terapêutica imunossupressora. Porém, a sua utilização clínica está associada ao desenvolvimento de efeitos secundários graves, incluindo a nefrotoxicidade, que parece ser dependente da duração da exposição ao fármaco. As estratégias de minimização de efeitos adversos baseiam-se sobretudo na redução da dose e na conversão para outros fármacos aparentemente menos nefrotóxicos, como o sirolimus (SRL), um inibidor do alvo da rapamicina em mamíferos (mTOR). Neste trabalho pretendeu-se estudar alguns aspectos-chave que permanecem por elucidar: (1) os mecanismos moleculares e os biomarcadores subjacentes à transição de disfunção renal induzida pela CsA para nefrotoxicidade e (2) o impacto renal de dois protocolos de conversão de CsA para SRL, baseando a avaliação em marcadores séricos, urinários e em tecido renal. Para tal, foram desenhados protocolos experimentais (em rato wistar) de 3, 6 e 9 semanas de duração, incluindo grupos tratados com concentrações clinicamente relevantes de CsA e de SRL, comparativamente a ratos controlo (veículo), em esquemas de tratamento que incluíam grupos de CsA e de SRL, e grupos de conversão de CsA para SRL, um deles efectuado após redução inicial da dose de CsA. Foram analisados os seguintes parâmetros: pressão arterial e frequência cardíaca; dados bioquímicos séricos e urinários, incluindo níveis de creatinina e ureia, suas depurações e taxa de filtração glomerular (TFG); peroxidação lipídica no rim e respectiva depuração; marcadores clássicos e emergentes de função/lesão renal em soro, urina e em tecido renal (genes e proteínas, por RT-qPCR e imunohistoquímica, respectivamente). As lesões renais foram avaliadas através de colorações de hematoxilina e eosina, ácido periódico de Schiff e tricrómio de Masson. No tratamento de curto prazo com CsA, os níveis de creatinina e ureia aumentaram e a depuração diminuiu, acompanhados por uma redução da TFG. Apesar de somente causar lesões renais ligeiras ou insignificantes em algumas das estruturas, induziu um aumento da expressão de ARNm de PCNA, TGF-β, NF-κβ e p53 no tecido renal. No tratamento de longo prazo, os dados de disfunção renal foram acompanhados por lesões glomerulares e tubulointersticiais, com notável aumento da expressão génica renal de mTOR e MKi-67 e sobre-expressão da proteína mTOR. Para além disso, os níveis de TGF-β e IL-7 no soro aumentaram, assim como a depuração de MDA, e verificou-se uma expressão proteica aumentada de TGF-β e mTOR no tecido renal. Os ratos tratados com SRL apresentaram proteinúria e aumento de NGAL (no soro e na urina) como os melhores marcadores de impacto (“toxicidade”) renal. No protocolo que testou a redução da dose de CsA seguida de conversão para SRL, após as primeiras 3 semanas de CsA (dose mais elevada, 30 mg/kg peso/dia), os animais apresentaram perda de peso, hipertensão, taquicardia, aumento dos níveis séricos de colesterol não-HDL, glicose, triglicerídeos, creatinina e ureia, acompanhados por redução da TFG e do conteúdo sérico de insulina. Adicionalmente, verificou-se um aumento da expressão renal de CTGF, Kim-1, mTOR, NF-κβ e TGF-β1, acompanhado por amplo dano renal, incluindo arterioesclerose, hiperemia, esclerose nodular, hialinização do pólo vascular e espessamento da cápsula de Bowman, para além de calcificação tubular, formação de cilindros hialinos e desenvolvimento de fibrose intersticial. Três semanas após a redução da dose de CsA para 5mg/kg peso/dia, os resultados indicaram uma melhoria da função renal e das lesões vasculares e glomerulares, mas sem desagravamento significativo das alterações tubulointersticiais. Durante as últimas 3 semanas, com a conversão para SRL (1 mg/kg peso/dia), apesar da hiperglicemia, hipertrigliceridemia e aumento do conteúdo sérico e urinário de NGAL, o dano renal promovido pela CsA foi substancialmente melhorado, como constatado através dos resultados de marcadores em soro e urina, mas em particular devido à redução da expressão proteica renal de CTGF, mTOR, NF-κβ, TGF-β1 e PCNA. Em conclusão, a transição de disfunção renal induzida pela CsA para nefrotoxicidade é acompanhada por uma modificação de mecanismos moleculares e de biomarcadores, sendo o mTOR uma proteína-chave para a evolução da lesão renal. A conversão para SRL impede a evolução do dano renal induzida pela CsA, podendo o impacto renal desta substituição ser acompanhado pelos níveis de NGAL em soro e urina, que parece ser um biomarcador interessante para monitorizar a conversão. Finalmente, a nefrotoxicidade induzida pela CsA é muito dependente da dose e do tempo de exposição, sendo a redução da dose de CsA e subsequente conversão para SRL, se realizada antes de lesões graves, notoriamente importantes na preservação da função e da estrutura renal. Cyclosporin A (CsA) is an immunosuppressive agent that belongs to calcineurin inhibitors (CNIs) group, and revolutionized organ transplant due to the great ability to prevent graft rejection; CNIs remain the cornstone of immunosuppressive therapy. However, the clinical use of CsA is associated with the development of serious side-effects, including nephrotoxicity, which seems to depend on the duration of drug exposure. Strategies to minimize the adverse effects are mainly based on dose reduction and conversion to other seemingly less nephrotoxic drugs, such as sirolimus (SRL), an inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR). In this work we intended to study some key aspects that remain to be elucidated: (1) the molecular mechanisms and biomarkers underlying the transition from renal dysfunction induced by CsA to nephrotoxicity and (2) the renal impact of two protocols of conversion from CsA to SRL, focusing on serum, urinary and renal tissue markers. Experimental protocols were designed (Wistar rats) with 3,6 and 9 weeks duration, including groups treated with clinically relevant concentrations of CsA and SRL, compared with control rats (vehicle), in treatment regimens that included groups of CsA, SRL and conversion from CsA to SRL, one of them made after previous CsA dose reduction. The following parameters were analyzed: blood pressure and heart rate; serum and urinary biochemical data, including creatinine and urea clearances and glomerular filtration rate (GFR); kidney lipid peroxidation and its clearance; classical and emerging biomarkers of kidney function were accessed in serum, urine and renal tissue (genes and proteins by RT-qPCR and immunohistochemistry, respectively). Renal lesions were evaluated by hematoxylin & eosin, periodic acid-Schiff and Masson's trichrome staining. In the short-term treatment with CsA, the levels of urea and creatinine increased and their clearances decreased, accompanied by reduction of GFR. Although only slight (or insignificant) renal lesions in some kidney structures were found in the CsA-treated rats, increased mRNA expression of PCNA, TGF-β, Tp53 and NF-κβ in renal tissue was found. In the long-term CsA treatment, the data of renal dysfunction were accompanied by glomerular and tubulointerstitial lesions, with remarkable increase in renal gene expression of mTOR and MKi-67, together with overexpression of mTOR protein. In addition, serum TGF-β and IL-7 levels increased, as well as MDA clearance, and there was an augmented content of TGF-β and mTOR protein expression in the renal tissue. Rats treated with SRL in the long-term treatment presented proteinuria and increased NGAL (in serum and urine) as the best markers of kidney impact ("toxicity"). In the protocol designed to test CsA dose reduction followed by conversion to SRL, after the first 3 weeks of CsA highest dose (30 mg/kg/day) treatment, the animals presented weight loss, hypertension, tachycardia, increased serum levels of non-HDL cholesterol, glucose, triglycerides, creatinine and urea, as well as reduction of GFR and serum insulin contents. Additionally, there was an increased renal expression of CTGF, Kim-1, mTOR, NF-κβ and TGF-β, accompanied by extensive kidney damage, including arteriosclerosis, hyperemia, nodular sclerosis, vascular pole hyalinization and thickening of the Bowman capsule, in addition to tubular calcification, formation of hyaline cylinders and development of interstitial fibrosis. Three weeks after dose reduction of CsA to 5 mg/kg/day, the results indicated an improvement in renal function and vascular and glomerular lesions, but without significant amelioration of tubulointerstitial damage. During the last 3 weeks, after conversion to SRL (1 mg/kg/day), despite hyperglycemia, hypertriglyceridemia and increased serum and urinary NGAL contents, renal damage promoted by the two CsA doses was substantially improved, as confirmed by the results of serum and urine markers, in particular by the reduction in renal protein expression of CTGF, mTOR, NF-κβ, TGF-β and PCNA. To conclude, the transition from renal dysfunction induced by CsA to nephrotoxicity is accompanied by modification of molecular mechanisms and biomarkers, being mTOR a key protein for development of renal injury. The conversion to SRL prevents the development of renal damage induced by CsA and this effect might be better accompanied by serum and urine NGAL levels, which seems to be an interesting biomarker to monitor the conversion protocol. Finally, CsA-induced nephrotoxicity is notoriously dependent on dose and duration of exposure, being CsA dose reduction and subsequent conversion to SRL, if performed before notoriously damage, important measures to preserve renal function and prevent nephrotoxicity.

Tese de doutoramento em Ciências da Saúde, no ramo de Medicina, apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra Introdução: O carcinoma da bexiga é um dos tumores mais prevalentes no Mundo Ocidental. A natureza recidivante das suas formas não músculo-invasivas, que constituem 75 a 80% de todos os tumores, associada à frequente progressão a formas invasivas e agressivas, tornam-no num dos cancros com mais elevados custos pessoais, sociais e financeiros. Várias características fazem dele um tumor adequado para a adopção de estratégias de quimioprevenção mas, apesar dos resultados promissores de várias substâncias, nenhum estudo cientificamente sólido permite, de momento, recomendar o seu uso. Objectivos: Os objectivos principais desta dissertação foram: 1. Aprofundar o conhecimento fisiopatológico da carcinogénese vesical; 2. Avaliar a capacidade de quimioprevenção de alguns fármacos de uso corrente em diversas patologias relativamente frequentes através da utilização de um modelo experimental; 3. Caracterizar os putativos mecanismos de acção anticancerígena desses fármacos. Materiais e Métodos: Foram utilizados ratos Wistar machos num modelo experimental de carcinogénese vesical, dividido em duas fases: 1. Administração do carcinogénio BBN 0,05% na água da bebida, entre as semanas um e oito, para indução tumoral; 2. Sem administração de BBN, entre as semanas nove e vinte, para manifestação das lesões tumorais. Os fármacos e doses (mg/kg/dia) em estudo foram os seguintes: Imunomoduladores (Sirolimus 1 e 2; Ciclosporina 5); Inibidores da COX-2 (Celecoxib 1 e 10; AAS 25 e 250); Fármacos com “Acções Pleiotrópicas” (Atorvastatina 3 e 30; Ácidos gordos Ómega-3 600). Formaram-se vários grupos: Controlo (C): sem administração de BBN ou fármacos; Carcinogénio (BBN): BBN entre as semanas um e oito, sem fármacos; Controlo do Fármaco: administração do fármaco na fase 1 ou fase 2, sem BBN; Prevenção Precoce: BBN e fármaco entre as semanas um e oito; Prevenção Tardia: BBN entre as semanas um e oito; fármaco entre as semanas nove e vinte. No final da 20.ª semana os animais foram sacrificados. Foi colhida a bexiga para estudo histopatológico, imunohistoquímico e de expressão génica. Foi colhido sangue para hemograma, alguns parâmetros bioquímicos, marcadores séricos e de equilíbrio oxidativo. Foram avaliados o bem-estar e a segurança animal. Resultados: No grupo Carcinogénio a incidência de neoplasias uroteliais foi de 68%, lesões maioritariamente papilares e exofíticas, de dimensões variáveis. A histopatologia mostrou hiperplasia urotelial em 100% das bexigas, displasia de alto grau em 96% e Cis em 52%. Dos carcinomas, quatro eram TPBPM, 11 de baixo grau e 10 de alto grau histológico. A marcação imunohistoquímica de p53, Ki67 e CD31 nas lesões pré-malignas ou malignas foi mais acentuada e extensa. A expressão génica de p53, Bcl-2, Hras, Cox-2 e VEGF foi superior à do grupo Controlo, ao contrário do gene Rb1. Também se verificou uma elevação de TGF-β, TNF-α e de marcadores inflamatórios. A utilização de Sirolimus na primeira fase do estudo, na dose de 1 e de 2 mg/kg/dia, levou a um aumento da incidência tumoral para 75% e 80%, respectivamente. Ao invés, a administração de Sirolimus 2 mg/kg/dia a partir da 9.ª semana levou a um decréscimo para 37,5%, associada a redução do número e volume tumoral, das lesões pré-neoplásicas, diminuição de TGF-β e um perfil oxidativo mais favorável. Relativamente à Ciclosporina A, a incidência tumoral de 62,5% na sua utilização precoce e de 50% na mais tardia não diferiu de forma significativa da do grupo carcinogénio, apesar da redução do número e volume tumoral e de algumas lesões hiperplásicas, displásicas e papilares. O Celecoxib na primeira fase do estudo, nas doses de 1 e 10 mg/kg/dia, levou a uma menor incidência (12,5%), número e volume tumoral. A utilização do fármaco na segunda fase não trouxe qualquer benefício. Quanto ao AAS, usado apenas na primeira fase, a dose de mais alta teve uma redução mais significativa na incidência de neoplasias (12,5 vs 37,5%) e também no número e volume tumoral. Houve ainda uma redução das lesões uroteliais hiperplásicas, pré-neoplásicas e da agressividade dos carcinomas, de TGF-β e dos marcadores inflamatórios. A Atorvastatina, usada nas primeiras oito semanas, reduziu a incidência de carcinomas para 12,5% na dose de 3 mg/kg/dia e para 25% na dose de 30 mg/kg/dia, bem como do número, do volume e da agressividade histológica. Apesar da diminuição da displasia de alto grau e do Cis com os Ácidos gordos Ómega 3 na primeira fase do modelo carcinogénico, tal não se traduziu numa menor incidência de carcinomas (62,5%) ou do número de tumores, mas apenas numa redução dos volumes. Houve com estes dois fármacos uma diminuição dos marcadores inflamatórios e um perfil oxidativo mais favorável. Nos grupos em que foi conseguida a quimioprevenção tumoral, as investigações complementares mostraram uma marcação imunohistoquímica para p53, Ki67, CD31 e Cox-2 (nos inibidores da Cox) mais localizada e ligeira e nos estudos de expressão génica houve uma menor expressão de proto-oncogenes e de genes anti-apoptose. Conclusões: A incidência de carcinoma urotelial no nosso modelo foi de 68%. A carcinogénese vesical, que reproduz a verificada no humano, incluiu desregulação do ciclo e da proliferação celular, da imunovigilância tumoral, inibição da apoptose, aumento da angiogénese e uma acção pró-inflamatória. Os inibidores selectivos e não selectivos da Cox-2 e a Atorvastatina foram os fármacos que demonstraram maior eficácia. Com excepção do Sirolimus, a prevenção farmacológica do carcinoma da bexiga foi mais eficaz quando instituída precocemente. A prevenção neoplásica deveu-se à conjugação de múltiplos mecanismos de acção farmacológica, que permitiram o reequilíbrio das vias alteradas do processo carcinogénico. Introduction: Bladder cancer is one of the most prevalent tumours in the Western World. The recurrent nature of its non-muscle invasive forms, which are 75 to 80% of all bladder tumours, together with the frequent progression to invasive and more aggressive neoplasms, makes it one of the cancers with the highest personal, social and financial costs. Several characteristics make it suitable for the adoption of chemoprevention strategies but, despite the promising results of several substances, no scientifically relevant study currently recommends their use. Objectives: The main objectives of this work were: 1. To improve the knowledge of the pathophysiology of bladder carcinogenesis; 2. To evaluate the chemopreventive capacity of some agents currently used, in an experimental model; 3. To characterize the putative anticancer mechanisms of action of these drugs. Materials and Methods: Male Wistar rats were used in an experimental model of bladder carcinogenesis divided into two phases: 1. Administration of the carcinogen BBN 0.05% in the drinking water for tumour induction, between weeks one and eight; 2. No administration of BBN, between weeks nine and twenty, for the manifestation of tumour lesions. The drugs and doses (mg/kg/day) in study were immunomodulators (Sirolimus 1 and 2; Cyclosporin 5), COX-2 inhibitors (Celecoxib 1 and 10, ASA 25 and 250), drugs with "pleiotropic actions" (Atorvastatin 3 and 30; Omega-3 fatty acids 600), divided in several groups: Control (C): no BBN or drug administration; Carcinogen (BBN): BBN between weeks one and eight, no drug; Drug Control: administration of drug in the first or second phase without BBN; Early Prevention: BBN and drug between weeks one and eight; Late Prevention: BBN between weeks one and eight and drug between weeks nine and twenty. At the end of week 20 the animals were sacrificed. The bladder was harvested for histopathological, immunohistochemical and gene expression studies. Blood for CBC, some biochemical parameters and serum markers of oxidative balance was collected. Welfare and animal safety were evaluated. Results: In the Carcinogen group the incidence of urothelial cancer was 68%, mostly papillary and exophytic lesions of variable dimensions. Histopathology showed urothelial hyperplasia in 100% of the bladders, high-grade dysplasia in 96% and Cis in 52%. Four of the neoplasms were PNLMP, 11 low grade and 10 high grade carcinomas. The immunohistochemical staining for p53, Ki67 and CD31 in premalignant and malignant lesions was more pronounced and extensive. The gene expression for p53, Bcl-2, HRAS, COX-2 and VEGF was higher than in the control group unlike the Rb1 gene. An increase of TGF-β, TNF-α and inflammatory markers was also seen. The use of Sirolimus in the first phase of the study, at a dose of 1 and 2 mg/kg/day led to an increase in tumour incidence to 75% and 80%, respectively. On the contrary, the administration of Sirolimus 2 mg/kg/day after week nine lowered the incidence to 37.5% together with a reduction in the volume and tumour number, of pre-neoplastic lesions, TGF-β and a more favourable oxidative profile. Regarding Cyclosporin A, tumour incidence of 62.5% in its early use and 50% in the later did not differ significantly from the Carcinogen group, despite a reduction in tumour number and volume and some hyperplastic, dysplastic papillary lesions. The use of Celecoxib in the first phase of the study, 1 and 10 mg/kg/day resulted in a lower incidence (12.5%), tumor volume and number. Its use in the second stage did not bring any benefit. As for ASA, used in the first phase, the highest dose had a greater reduction in the incidence of cancers (12.5 vs 37.5%) and also in tumor volume and number. There was also a reduction in hyperplastic and preneoplastic urothelial lesions, and in the aggressiveness of carcinomas, TGF-β and inflammatory markers. Atorvastatin, used in the first eight weeks, reduced the incidence of carcinomas to 12.5% at a dose of 3 mg/kg/day and to 25% at a dose of 30 mg/kg/day, and also their number, volume and histological aggressiveness. Despite the reduction in high-grade dysplasia and Cis with Omega 3 fatty acids in the first phase of the carcinogenic model, a lower incidence of carcinomas (62.5%) or number of tumours were not achieved, although a reduction in tumoral volumes was obtained. With these two drugs there was a decline of inflammatory markers and a more favorable oxidative profile. In the groups in which chemoprevention was achieved, immunohistochemical staining for p53, Ki67, CD31 and Cox-2 was more localized and less intense. There was less expression of protooncogenes and anti-apoptotic genes. Conclusions: The incidence of urothelial carcinoma in our model was 68%. The bladder carcinogenesis pathway includes an imbalance of the cell cycle and proliferation, inhibition of apoptosis, increased angiogenesis, disruption of tumor immunosurveillance and a proinflammatory state. COX-2 inhibitors (both selective and non-selective) and atorvastatin have shown the greatest efficacy among the studied drugs. With the exception of Sirolimus, pharmacological prevention of bladder carcinoma was more effective when started earlier. Neoplastic prevention was due to the combination of multiple mechanisms of pharmacological action, which allowed the rebalancing of altered pathways in the carcinogenic process.

Tese de doutoramento em Ciências da Saúde, apresentada à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra A dislipidemia é um dos factores de risco major para a DCV, que está entre as principais causas de morbilidade e mortalidade em muitos países do Mundo, incluindo na Europa. O arsenal terapêutico antidislipidémico actualmente disponível e em utilização clínica, nomeadamente as estatinas, tem permitido grandes avanços no controlo dos valores de c-Total e sobretudo de c-LDL, o que se manifestou numa redução significativa do risco e da mortalidade por DCV. Contudo, essas terapêuticas têm um impacto muito reduzido sobre o c-HDL, existindo um risco CV residual (mas ainda assim muito preocupante e não negligenciável) por controlar e que deve merecer mais atenção e investimento. Dados epidemiológicos suportam a ideia de que a redução do c-HDL é um preditor independente de desenvolvimento de DCV, mas os ensaios clínicos recentes envolvendo novos compostos foram incapazes de demonstrar o impacto esperado a nível da redução da mortalidade CV, não obstante o aumento significativo dos teores de c-HDL. Neste contexto, o conhecimento actual aponta para a necessidade de conhecer melhor as HDL e de encontrar formas de não apenas aumentar os seus conteúdos séricos totais mas, sobretudo, entender o conceito de HDL disfuncional, saber se tem um relacionamento com a DCV e com outros mediadores da aterogénese em populações de risco para que, posteriormente, seja possível modular a sua funcionalidade e assim reduzir de forma mais abrangente a morbilidade e mortalidade por DCV. Este trabalho pretendeu dar um contributo para a melhoria do conhecimento da relevância das HDL e da sua funcionalidade a nível da DCV aterogénica, tendo como principal objectivo avaliar as implicações relativas das subpopulações de HDL na determinação do perfil cardiometabólico e a sua correlação com outros mediadores (marcadores) do fenómeno aterogénico em populações com factores de risco para DCV. O trabalho envolveu 4 estudos separados, em populações distintas: 1 – grupo de voluntários controlo (sem factores de risco ou DCV diagnosticada) para avaliar o efeito do género e menopausa; 2 – grupo de doentes diabéticos do tipo 2; 3 - grupo de doentes jovens adultos com esclerose múltipla; 4 – grupo de doentes dislipidémicos com concentrações séricas reduzidas de c-HDL e/ou elevadas de TGs, mas valores normalizados de c-LDL. Os grupos de doentes foram comparados com indivíduos controlo de idade e género comparáveis o mais possível. Foram analisados dados antropométricos (idade, IMC e perímetro abdominal), pressão arterial, perfil glicídico e lipídico, marcadores “não-tradicionais” de perfil lipídico (incluindo subpopulações de HDL, LDL oxidadas e actividade paraoxonase 1), bem como outros marcadores séricos de inflamação, angionénese, oxidação e disfunção endotelial (PCRhs, TNF-α, adiponectina, VEGF, ácido úrico e ICAM-1). Os principais resultados obtidos são: 1) Numa população sem diagnóstico prévio de DCV, os homens e as mulheres em pós-menopausa apresentam um perfil lipídico indicativo de um maior risco cardiometabólico; estes resultados ficam mais patentes quando se analisam marcadores de risco “não-tradicionais”, incluindo, entre outros, as subpopulações de HDL (maior percentagem de pequenas e menor de grandes) e as LDLox; 2) a diabetes parece anular o efeito CV protector conferido pelo género feminino, traduzindo-se numa degradação da qualidade das HDL, um aumento de TNF-α e de VEGF; para além disso, as mulheres diabéticas quando entram na fase de menopausa apresentam um perfil cardiometabólico mais nefasto, como sugerem a pior qualidade das HDL, o agravamento da obesidade, a hipertrigliceridemia e o aumento do TNF-α; 3) numa população jovem adulta com esclerose múltipla, existem indicações de um risco cardiometabólico precoce, que fica realçado pelo desequilíbrio entre as subpopulações grandes e pequenas de HDL, pelo aumento de VEGF e principalmente de LDL-ox (relacionado de forma significativa e directa com o estadio da doença); 4) em populações consideradas dislipidémicas, com concentrações séricas reduzidas de c-HDL e/ou elevadas de TGs, ainda que sob medicação apropriada e com os níveis de c-LDL normalizados, o risco CV residual parece ser melhor caracterizado com a ajuda de marcadores “nãotradicionais”, incluindo uma vez mais as subpopulações de HDL e as LDL-ox, mas também a adiponectina e o VEGF. Como conclusões finais, o trabalho sugere que a medição das subpopulações das HDL é uma informação mais relevante a nível da caracterização do perfil cardiometabólico do que o “tradicional” doseamento do conteúdo sérico total em c-HDL. Mais ainda, as HDL grandes relacionam-se com uma maior protecção e funcionalidade, ao contrário das HDL pequenas que se podem considerar disfuncionais em termos de efeitos ateroprotectores, existindo diversas correlações com outros marcadores clássicos e não tradicionais. O trabalho realça ainda a importância de dar maior atenção a outros biomarcadores cardiometabólicos “não-tradicionais”; no entanto, contrariamente às subpopulações de HDL em que os resultados foram transversais a todas as populações em estudo, estes parecem ser muito mais específicos e relacionadas com cada condição fisiopatológica particular. A confirmação dos resultados deste trabalho poderá contribuir no futuro para melhorar as estratégias de diagnóstico e as medidas terapêuticas de doentes com risco cardiovascular aumentado de forma a ter implicações positivas e significativas na morbilidade e mortalidade por DCV. Dyslipidemia is one of the major risk factors for CVD, which is among the leading causes of morbidity and mortality in many countries in the World, including in Europe. The antidyslipidemic therapeutic arsenal currently available and in clinical use, particularly statins, have allowed major advances in the control of Total-c values and above in LDL-c, which was manifested in a significant reduction in the risk and of CV mortality. However, these therapies have little impact on HDL-c, and there is a residual CV risk (but still very disturbing and not negligible) for controlling and that deserves more attention and investment. Epidemiological data support the idea that the reduction of HDL-c is an independent predictor of development of CVD, but recent clinical trials involving new compounds were unable to demonstrate the expected impact in the reduction of CV mortality, despite the significant increase the levels of HDL-c. In this context, the present knowledge points the necessity to better understand the HDL and find ways to not only increase their total serum content but, more importantly, understand the concept of dysfunctional HDL, know if it have a relationship with CVD and other mediators of atherogenesis in populations at risk, for, subsequently be possible to modulate its functionality and thus reduce more comprehensively CV morbidity and mortality. This work aims to contribute to improving the knowledge of the relevance of HDL and its functionality for atherogenic CVD, with the primary aim of assessing the implications for HDL subpopulations in determining cardiometabolic profile and its correlation with other mediators (markers) of atherogenic phenomenon in populations with CV risk factors. The work involved four separate studies in distinct populations: 1 - control group of volunteers (no risk factors or diagnosed CVD) to evaluate the effect of gender and menopause; 2 - group of type 2 diabetic patients; 3 - group of young adults patients with multiple sclerosis, 4 - group of dyslipidemic patients with low serum HDL-c and/or high TGs but normalized values of LDL-c. Patient groups were compared with control subjects matched for age and gender as much as possible. Anthropometric data (age, BMI and waist circumference), blood pressure, glucose and lipid profile, "non-traditional" markers of lipid profile (including subpopulations of HDL, oxidized LDL and paraoxonase 1 activity) were analyzed, as well as other serum markers of inflammation, angionenesis, oxidation and endothelial dysfunction (hsCRP, TNF-α, adiponectin, VEGF, uric acid and ICAM-1). The main results are: 1) a population without a previous diagnosis of CVD, men and postmenopausal women have a lipid profile indicative of a greater cardiometabolic risk; these results are more apparent when analyzing "non-traditional" risk markers including, among others, subpopulations of HDL (higher percentage of small and lower of large) and ox-LDL; 2) diabetes seems to abrogate the CV protective effect conferred by female gender, traduced into a degradation of HDL quality, increase of TNF-α and VEGF, and moreover, diabetic women when they enter in menopause phase have a more ominously cardiometabolic profile, as suggested by the poorer HDL quality, the worsening of obesity, hypertriglyceridemia and increased TNF-α; 3) in a young adult population with multiple sclerosis, there are indications of early cardiometabolic risk, which is highlighted by the imbalance between large and small subpopulations of HDL, increased VEGF and especially ox-LDL (significantly and directly related with the disease stage); 4) dyslipidemic populations with reduced HDL-c and/or high TGs serum concentrations, although under appropriate medications and LDL-c standard levels, the CV residual risk seems to be better characterized with the aid of "non-traditional" markers, including again subpopulations of HDL and oxidized LDL, but also adiponectin and VEGF. As final conclusions, the study suggests that measurement of HDL subpopulations is more relevant information of cardiometabolic profile characterization than determination of the "traditional" total HDL-c serum level. Furthermore, large HDL are related to better protection and functionality, as opposed to the small HDL that may be considered dysfunctional in terms of atheroprotective effects, both correlated with other classical and non-traditional markers. The work also highlights the importance of giving more attention to other "non-traditional" cardiometabolic biomarkers; however, contrary to HDL subpopulations in which the results were present in all study populations, these biomarkers seem to be much more specific and related for each particular pathophysiological condition. The confirmation of the results of this work can contribute in future to improve diagnostic strategies and therapeutic measures for patients at increased cardiovascular risk in order to have significant positive implications on CV morbidity and mortality.

Submitted by Cristina Afonso (cac@lisboa.ucp.pt) on 2015-01-19T10:07:29Z No. of bitstreams: 1 Antibiotico Final 2.pdf: 2706637 bytes, checksum: db9c4337d9f2dcb9e4dc02b8a8b55e24 (MD5) Approved for entry into archive by Cristina Afonso (cac@lisboa.ucp.pt) on 2015-01-19T10:07:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Antibiotico Final 2.pdf: 2706637 bytes, checksum: db9c4337d9f2dcb9e4dc02b8a8b55e24 (MD5) Made available in DSpace on 2015-01-19T10:07:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antibiotico Final 2.pdf: 2706637 bytes, checksum: db9c4337d9f2dcb9e4dc02b8a8b55e24 (MD5) Previous issue date: 2014-09-09

O enfarte agudo do miocárdio é a principal causa de morte nos países industrializados. Em Portugal, apenas durante o ano de 2003, foram diagnosticados cerca de 13500 enfartes do miocárdio em pacientes admitidos nos serviços de urgência hospitalar, com uma taxa de mortalidade que atingiu os 14%. Os efeitos gerais observados com as estatinas aparentam ser superiores ao esperado apenas pela alteração dos níveis lipídicos, sugerindo benefícios para além da redução do colesterol. Estudos recentes indicam que efeitos independentes do colesterol, ou efeitos pleiotrópicos, envolvem a melhoria da função endotelial, o aumento da estabilidade das placas ateróscleróticas, a diminuição do stresse oxidativo e da inflamação, e também a inibição da resposta trombogénica. Recentemente, outros trabalhos parecem demonstrar que o uso de estatinas está associado a uma significativa descida na recorrência de eventos cardiovasculares em pacientes pós síndrome coronário agudo, quando comparados com as terapêuticas standard que não contemplam o uso de estatinas. Os principais objectivos deste trabalho foram, primeiro, abordar as bases fisiopatológicas dos efeitos independentes do colesterol, ou pleiotropicos, das estatinas. Secundariamente, é discutida a utilização terapêutica de doses moderadas e altas dosagens de estatinas no tratamento de um paciente pós enfarte do miocárdio, neste caso, numa perspectiva mais abrangente de um síndrome coronário agudo. Esta revisão baseou-se numa análise rigorosa da temática, à luz dos estudos experimentais, mas sobretudo clínicos, disponíveis na literatura. Pela análise dos estudos mais recentes, a abordagem inicial com estatinas no pós síndrome coronário agudo revela-se benéfica, e apesar de alguns trabalhos não mostrarem diferenças estatisticamente significativas, concluí-se que uma terapêutica inicial com estatinas será desejável. Relativamente ao efeito benéfico de uma terapêutica mais agressiva, esta abordagem continua a mostrar-se promissora dentro de limites, nos quais a redução dos níveis totais de colesterol plasmático não seja excessiva. Considerando que os efeitos pleiotrópicos das estatinas são mais claros numa fase precoce da terapêutica, potenciais benefícios em abordagens agressivas na fase aguda não poderão ser assegurados à luz dos dados actualmente disponíveis na literatura. Objectivamente, um efeito cardioprotector apenas se verificou em fases mais tardias do tratamento e a maioria dos trabalhos analisados falharam em testar a fase aguda pós síndrome coronário agudo não sendo possível retirar conclusões definitivas. The acute Myocardial Infarction is the main cause of death in developed countries. In Portugal, in 2003 only, 13,500 myocardial infarctions were diagnosed in patients admitted in hospital emergency rooms, with a 14% mortality rate. The general effects expected with statins seem to be greater than expected only by changing the lipid levels, suggesting benefits beyond cholesterol lowering. Recent studies show that cholesterol independent or pleiotropic effects include improvements in endothelial function, increased atherosclerotic plaque stability, lowering oxidative stress and inflammation, and also inhibiting thrombogenic response. Recently, other studies show that the use of statins is associated to a significant reduction in recurrence of cardiovascular events in patients after myocardial infarction, as well as, new usage perspectives in a larger context. The main goals of this review were: first, to have a fisiopathological approach of cholesterol independent or pleiotropic effects of statins; second, to discuss the use of moderate or intensive statin therapy in a patient after acute myocardial infarction, in this case, in a wider general acute coronary syndrome perspective. This review wants to be a rigorous analysis of the theme, in lightening of the experimental studies, but mainly clinic, available in literature. By analyzing the most recent studies, the initial approach with statin therapy, after an acute coronary syndrome reveals itself benefic, and although some studies do not show statistically significant results, we can conclude that an initial statin therapy would be useful. In relation to the beneficts of a more agressive therapy, that kind of approach is still promising, in certain limits, in which the total cholesterol level reduction is not excessive. The statin pleiotrophy is expected to have a role in early phases of therapy and, in lightening of the results available in literature, the benefit of an aggressive approach in the acute phase is still uncertain. Actually, an accountable cardioprotective effect has only been described in late phases of therapy and most studies failed to accurately test the acute phase of an acute coronary syndrome, and so, no definitive conclusions can be made.

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina (Farmacologia), apresentado á Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra A paraoxonase 1 (PON1) é uma enzima associada às liporoteínas HDL (lipoproteínas de alta densidade), que protege as LDL (lipoproteínas de baixa densidade) da oxidação, reverte os efeitos biológicos das LDL oxidadas, e preserva a função das HDL ao inibir a sua oxidação, possuindo assim propriedades antiateroscleróticas. A sua acção protectora resulta da capacidade de hidrólise de fosfolípidos oxidados biologicamente activos e de hidroperóxidos colesteril-éster das lipoproteínas LDL e HDL. Vários estudos, transgénicos, clínicos e epidemiológicos, confirmam a actividade antiaterogénica da PON1. O gene que codifica a proteína PON1 apresenta variações polimórficas, tanto na região codificadora, como na região reguladora. Desenvolveram-se uma série de estudos genéticos para examinar a importância do genótipo na determinação do risco de doença coronária. Duas meta-análises sustentam que os riscos-relativos por-alelo para os polimorfismos principais (Q192R, L55M e C-108T) são pouco significativos, e vários estudos apresentam resultados contraditórios entre si. Em muito menor número, foram realizados estudos que avaliaram a actividade e/ou concentração da PON1. Esses estudos concluíram que a actividade e/ou concentração da PON1 eram mais determinantes do risco cardiovascular do que o genótipo por si só. Através da quantificação das actividades de paraoxonase vs. diazoxonase, é possível resolver o genótipo da PON1 para o polimorfismo Q192R, que pode contudo ser confirmado por PCR. Considera-se que este método enzimático com dois substratos organofosforados da PON1 determina o status funcional da PON1 – genótipo para polimorfismo Q192R e actividade e/ou concentração da PON1. A maior importância do fenótipo da PON1, na determinação do risco de doença 2 coronária isquémica, levou os investigadores a estudar a modulação da enzima por factores ambientais farmacológicos, dietéticos e de estilo de vida. Um exemplo de modulação farmacológica da actividade da PON1 é a que acontece com as estatinas e os fenofibratos mas existem resultados opostos em vários estudos in vitro e também in vivo. Quando alguns autores compararam os resultados do tratamento com estatinas (efeito nos parâmetros lipídicos) em doentes dislipidémicos com actividades e/ou concentrações de PON1 diferentes, verificaram que o fenótipo da PON1 pode ser preditivo do sucesso ou insucesso desses tratamentos, um interesse adicional da PON1. Dadas as suas propriedades antiateroscleróticas, a descoberta de novos fármacos que aumentem com eficácia a actividade da PON1, pode potencialmente ter consequências clínicas, como a diminuição do risco de doença coronária isquémica Paraoxonase 1 (PON1) is a high density lipoprotein (HDL)-associated enzyme that protects LDL (low density lipoproteins) from oxidation, reverts the biological effects of oxidized LDL, and preserves HDL function inhibiting its oxidation, thus having antiatherosclerotic properties. Its protective action results from the ability to hidrolise biologically active oxidized phospholipids and colesteryl-ester hidroperoxides of LDL and HDL lipoproteins. PON1 antiatherogenic activity is confirmed by different transgenic, clinical and epidemiological studies. PON1 gene has polymorphic variations in the coding and promoting regions. Several genetic studies examined the influence of genotype in the determination of coronary heart disease risk. Two meta-analysis conclude that the per-allele relative risks for Q192R, L55M and C-108T polymorphisms are not significant, and there is a number of studies in which the results are contradictory. The studies that evaluated PON1 activity and/or concentration occured in a much lower number. That studies concluded that PON1 activity and/or concentration were more important for coronary heart disease risk than genotype alone. Through measuring of paraoxonase vs. diazoxonase activities, it is possible to know the Q192R polymorphism genotype, which can also be confirmed by PCR. It is considered that this dual-substract enzymatic method, which uses two organophosphate compounds, determines the functional status of PON1 – polymorphism Q192R genotype and activity and/or concentration of PON1. The influence of phenotype in the determination of coronary heart disease risk lead the researchers to begin studying PON1 modulation by environmental factors, pharmacological, nutritional and life-style. Statins and fenofibrates give an exemple 4 of pharmacological modulation of PON1 activity, but there are opposite results among several in vitro and in vivo studies. When some authors compared the results of statin therapy (effect in lipid parameters) in dislipidemic patients with different PON1 activities and/or concentrations, they found that PON1 phenotype could be predictive of the therapy success or failure, an additional interest of PON1. Given PON1 antiatherosclerotic properties, the discovery of new drugs able to efficiently increase PON1 activity, can potentially have clinical consequences, as the decrease of the acute coronary events risk

A CsA foi introduzida como fármaco imunossupressor na década de 70 em trans-plantes renais humanos e ainda hoje é aceite como um dos fármacos de eleição no trans-plante de orgãos e no tratamento de algumas doenças auto-imunes. Esta possui uma potente acção imunossupressora selectiva nos linfócitos e não apresenta actividade citostática relevante. Contudo, o seu uso terapêutico tem estado associado ao aparecimento de efeitos secundários graves, como a nefrotoxicidade, o desenvolvimento de hipertensão e o aumen-to do risco de complicações tromboembólicas. Apesar da intensa investigação que tem ocorrido ao longo dos anos, o mecanismo fisiopatológico subjacente à resposta hipertensora que ocorre tanto em doentes como em modelos animais experimentais tratados com a CsA continua por esclarecer, pelo menos na sua totalidade. Contudo, têm sido desenvolvidos esforços substanciais para tentar com-preender estes efeitos e têm sido propostos variados mecanismos. Mas, a identificação dos mediadores biológicos responsáveis pelo aumento da pressão sanguínea e a precisa impli-cação de alguns destes mediadores continua em aberto. Além disso, continua o debate em relação à relativa contribuição de diferentes tecidos alvo para a patogénese da hipertensão induzida pela CsA. Têm sido implicados mecanismos renais, vasculares e neuroniais e estes não são mutuamente exclusivos. A contribuição relativa de cada um destes deve variar consideravelmente dependendo de variados factores, incluindo a espécie, a dose e a dura-ção do tratamento. Em relação aos mecanismos vasculares, hoje está estabelecido que a CsA pode inibir as vias vasodilatadoras e/ou activar as vias vasoconstrictoras. Um dado consensual é o aumento da vasoconstrição e têm sido propostos variados mecanismos para explicar essa vasoconstrição induzida pela CsA, nomeadamente: um efeito directo sobre a contractilida-de do músculo liso vascular, através do aumento da concentração do cálcio livre intracelu-lar; um efeito indirecto através da potenciação da resposta contráctil a certos agentes vaso-constrictores como a noradrenalina e a angiotensina II; uma interferência com a produção local de substâncias hemodinâmicas vasoactivas, nomeadamente o aumento da vasocons-trictores e/ou a diminuição de vasodilatadores e um aumento da actividade do sistema ner-voso simpático e/ou da libertação de neurotransmissores das terminações nervosas do mús-culo liso vascular. Variados estudos clínicos sugerem que a patologia cardiovascular estará associada, entre outras, a disfunções no sistema L-arginina:NO:GMPc. Assim, as alterações nesta via poderão ser uma das principais causas do aumento da reactividade vascular e plaquetar associada à hipertensão arterial induzida pelo tratamento com a CsA. Assim, com este trabalho pretendeu-se avaliar qual ou quais as alterações que podem ocorrer nos mecanismos vasodilatadores, em especial na via da L-arginina:NO:GMPc, visto ser o monóxido de azoto o principal factor relaxante derivado do endotélio e o GMPc o seu principal sistema efector. Fomos também estudar as alterações que a PGI2 poderia apresentar quer a nível vascular quer a nível plasmático, uma vez que esta é também um importante factor vasodilatador derivado do endotélio e um potente inibidor da activação plaquetar, contribuindo assim igualmente para a fisiologia e fisiopatologia cardiovascular. Uma vez que existe a possibilidade das plaquetas estarem também envolvidas no aumento da pressão arterial induzida pela CsA, com base nos variados mecanismos pro-postos para o aumento da vasoconstrição e visto que as plaquetas também possuem uma via da L-arginina:NO que regula a sua agregabilidade, fomos também estudar se estaria alterada a via da L-arginina:NO:GMPc das plaquetas. Nos estudos realizados em trabalhos anteriores verificou-se que no nosso modelo experimental a lesão morfológica arterial ainda insipiente, já comprometia, sobretudo a camada da íntima (edema endotelial, esporões, ruptura da lâmina elástica), cujas lesões atingiam essencialmente as células endoteliais e não o músculo liso vascular. Apesar disso, nós encontrámos um aumento da síntese de colagénio. Nos estudos morfológicos das pla-quetas identificaram-se alguns sinais, como a formação de pseudópodos, a alteração da forma e a modificação da estrutura membranar, que sugerem uma activação plaquetar nos ratos tratados com CsA (estudos realizados em trabalhos anteriores). Apesar de discretas, tais alterações são relevantes porque são acompanhadas por evidentes distúrbios da pressão arterial e por nítidas alterações bioquímicas. De facto, a administração de CsA, na dose de 5 mg/Kg/dia, induziu hipertensão arterial no nosso modelo animal experimental, reproduzindo o que sucede em doentes sujeitos ao tratamento clínico com a CsA. Tal hipertensão arterial caracteriza-se por um aumento da pressão arterial média, mas também da sistólica e diastólica, sem alteração da frequência cardíaca. Tais factos deixam antever alterações na resistência vascular periférica e, consequentemente, na reactividade vascular. A CsA actua sobre a via da L-Arg:NO:GMPc já que se constatou que a nível arterial o tratamento com a CsA levou a um decréscimo de cerca de 30% no conteúdo de NO acompanhado de uma diminuição mais elevada, de cerca de 66% no conteúdo de GMPc. Tal facto deverá ser devido a um efeito combinado da CsA nos processos de síntese no endotélio e nos processos de formação de GMPc a partir de NO, contribuindo para a eleva-da perda de GMPc a nível arterial. Assim, a CsA actuará quer a nível endotelial quer a nível do músculo liso vascular. A diminuição de NO e de GMPc a nível vascular deverá con-tribuir para o aumento da resistência vascular periférica encontrada no nosso modelo. Estas alterações foram acompanhadas por uma diminuição do teor de PGI2 a nível arterial, o que também deverá contribuir de forma efectiva para o aumento da resistência vascular periférica que caracteriza o nosso modelo experimental. Nos estudos bioquímicos das plaquetas dos ratos tratados com CsA encontramos um aumento do conteúdo de NO e de GMPc plaquetar o que provavelmente lhes induz um estado não reactivo ou “antihiperreactivo”. De facto, nas condições de disfunção endote-lial, como as por nós verificadas, a própria produção de NO pelas plaquetas pode tornar-se importante na regulação da resposta das plaquetas, nomeadamente na modulação e inibição da sua activação. O aumento do NO e consequentemente o do GMPc encontrado irá levar à diminuição dos níveis de Ca2+ intracelular e assim actuar como mecanismo de retrocontro-lo negativo intraplaquetar que previne a activação e agregação excessiva das plaquetas. O aumento da concentração de PGI2 plasmática poderá também actuar na contrare-gulação do estado hiperactivo das plaquetas. A administração conjunta de L-arginina e CsA apesar de prevenir as alterações relacionadas com os níveis de NO e de GMPc não preveniu o desenvolvimento da hiper-tensão arterial, o que sugere o envolvimento de outras alterações a nível da via NO-GMPc, que deverão também ser avaliadas. Além disso, a simples administração de L-arginina não parece constituir a solução para tais alterações e outras estratégias clínicas poderão ser equacionadas, nomeadamente o recurso a dadores de NO com outras propriedades que não apenas o de substrato da NOS, como o é a L-arginina.