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Submitted by Natália Alves de Freitas null (36903826882) on 2017-04-19T02:21:52Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas .xps: 1038194 bytes, checksum: 9b9ffa985a298e87c4597326e35d35d2 (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-19T13:51:40Z (GMT) Submitted by Natália Alves de Freitas (36903826882) on 2017-04-24T14:00:45Z No. of bitstreams: 1 23 01 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas.pdf: 939757 bytes, checksum: 0f0aee5e382d6ac7dbe20e516c55609c (MD5) Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-04-25T14:48:08Z (GMT) Submitted by Natália Alves de Freitas (36903826882) on 2017-05-17T18:33:31Z No. of bitstreams: 2 23 01 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas.pdf: 939757 bytes, checksum: 0f0aee5e382d6ac7dbe20e516c55609c (MD5) 17 05 17 - Dissertação Mestrado - Natália Alves de Freitas - agardecimento fapesp.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-19T13:08:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freitas_na_me_bot.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Made available in DSpace on 2017-05-19T13:08:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freitas_na_me_bot.pdf: 837369 bytes, checksum: 72f718b50f1e46e6daf15c4d33947b54 (MD5) Previous issue date: 2017-01-21 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Introdução: Na fisiopatologia da pré-eclâmpsia (PE) há importante participação de mediadores inflamatórios, cujas concentrações encontram-se alteradas tanto na placenta como no sangue materno. Entretanto, o efeito da pré-eclâmpsia nos imunocomponentes do leite materno ainda é pouco conhecido. Objetivo: Investigar se a PE altera os níveis de citocinas no leite materno. Método: Estudo prospectivo longitudinal de corte transversal, envolvendo puérperas cujo parto foi realizado na Maternidade da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP, em 2014-2016. Critério de inclusão: diagnóstico de PE, gestação única, sorologias negativas, ausência de diabetes e de corioamnionite, sem uso de drogas ilícitas e/ou álcool, recém-nascido sem malformação congênita múltipla. Critério de exclusão: não obtenção da quantidade necessária de colostro, diagnóstico de mastite, uso contínuo de medicamento pela puérpera. Foram estudadas 228 puérperas, divididas em 2 grupos: PE (n=114) e Normotensas (controle, n=114), pareados pela idade gestacional, o grupo PE foi subdividido em PE de início precoce e tardia. O colostro foi coletado entre 24-72 horas pós-nascimento e o leite maduro no final do primeiro mês. Foram dosadas as citocinas (IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 e TNF-α) por citometria de fluxo. Teste Qui-quadrado ou Exato de Fisher, teste t Student ou Mann-Whitney, bem como um modelo linear generalizado com distribuição gama foram utilizados para analisar as diferenças entre grupos e as alterações dependentes do tempo. Resultados: A maioria das puérperas teve PE tardia (≥ 34 semanas) e a idade gestacional média foi de 36 semanas. No colostro de mães com PE foram detectados níveis aumentados de IL-1 e IL-6, e menores níveis de IL-12 em comparação ao grupo controle. Alterações ocorreram durante a lactação e menores níveis e IL-6 e IL-8 foram encontrados no leite maduro de mães com PE. A PE de início precoce associou-se a valores aumentados de IL-6 no colostro e no leite maduro. Conclusão: A pré-eclâmpsia está associada com aumento dos níveis de citocinas inflamatórias no colostro e menores níveis de IL-6 e IL-8 no leite maduro. Os níveis de IL-6 no leite materno são maiores na pré-eclâmpsia precoce em comparação à tardia. Introduction: IInflammatory mediators have an important role In the pathophysiology of preeclampsia (PE), and increased levels of these mediators have been found in the placenta and maternal circulation. However, the effect of preeclampsia on immune-components of breast milk is still unknown. Objective: To investigate whether PE affects breast milk cytokines levels. Method: Prospective longitudinal cross-sectional study involving nursing mothers whith childbirth at Maternity of the Botucatu Medical School - UNESP, during 2014-2016. Inclusion criteria: diagnosis of PE, single gestation, negative serologies, no history of diabetes, chorioamnionitis, drug use or alcohol consumption, and newborn without multiple congenital anomalies. Exclusion criteria: Insufficient volume of colostrum, mastitis, continuous use of medication by the mother. A total of 228 mothers were included and divided into 2 groups: PE (n = 114) and Normotensive (control, n = 114). Groups were matched by gestational age and PE was further divided into early and late PE. Colostrum was collected between 24-72 hours postpartum and mature milk at the end of the first month. IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12 and TNF-α were measured by flow cytometry. Chi-square or Fisher's Exact test, Student t-test or Mann-Whitney, and a general linear model with Gama distribution were used to analyse diffrences between groups and changes dependet on time. Results: Most preeclamptic women had late onset PE (≥ 34 weeks) and the mean gestational age was 36 weeks. In colostrum of PE mothers the levels of IL-1 and IL-6 were significantly increased, whereas IL-12 was decreased, compared to control group. Changes occured during lactation and lower concentrations of IL-6 and IL-8 were found in mature milk of PE mothers. Early-onset PE was associated with increased IL-6 values in colostrum and mature milk. Conclusion: Preeclampsia was associated with higher levels of pro-nflammatory cytokines in colostrum and lower levels of IL-6 and IL-8 in mature milk. The levels of IL-6 in breast milk are increased in early onset PE. FAPESP: 2014/12784-9

Submitted by FERNANDO CHRISTIANO GABRIEL MORELLI null (fcgmorelli@yahoo.com.br) on 2016-02-12T17:49:35Z No. of bitstreams: 1 Fernando - Tese versão final Repositório UNESP.pdf: 1900802 bytes, checksum: a8c9044a1f5a46e203d3432398fc0a07 (MD5) Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-02-15T11:32:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 morelli_fcg_dr_araca.pdf: 1900802 bytes, checksum: a8c9044a1f5a46e203d3432398fc0a07 (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-15T11:32:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 morelli_fcg_dr_araca.pdf: 1900802 bytes, checksum: a8c9044a1f5a46e203d3432398fc0a07 (MD5) Previous issue date: 2016-02-01 Erosões e úlceras são achados comuns no abomaso e causam preocupação econômica nos mais variados sistemas de produção de gado. Muitos fatores podem predispor ao aparecimento de úlceras e acúmulo de gases no abomaso, incluindo alimentos grosseiros, estresse ambiental, deficiências de vitaminas e minerais e infecções bacterianas. Essas úlceras podem ser subclínicas, sendo descobertas nas necropsias ou após o abate do animal, ou levarem à redução da motilidade do órgão, prejudicando o fluxo do seu conteúdo e causando transtornos digestivos graves e até ao aparecimento de síndromes semelhantes à indigestão vagal. Existem informações a respeito da resposta do sistema imune na maior parte das mucosas do trato gastrintestinal de não-ruminantes e ruminantes, porém são raras a respeito do abomaso. Os objetivos desse estudo foram detectar os níveis de citocinas (IL-17A, IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4, IL-2) no conteúdo abomasal em bovinos de corte, determinar o perfil Th1 ou Th2 dessas citocinas em animais com úlceras de grau 1 e 2 na região cárdica abomasal e comparar esses valores com os níveis de citocinas de animais sem úlceras (controle), em amostras colhidas em abatedouro, para auxiliar na compreensão da fisiopatologia do processo inflamatório local. A avaliação macroscópica e a classificação das úlceras foi realizada por meio de exames visual e histológico em amostras de tecidos da parede da região cárdica abomasal ulcerada. Os níveis de citocinas produzidas do líquido abomasal dos animais com ou sem úlceras foram avaliados por citometria de fluxo (método Cytometric Bead Array). As citocinas citadas foram detectadas no líquido do abomaso dos bovinos. Não houve diferença na liberação das citocinas entre os grupos com úlceras e o grupo sem úlcera, indicando um equilíbrio entre perfis Th1 e Th2 da resposta inflamatória. Erosions and ulcers are common findings in the abomasum and cause economic concern in several livestock production systems. Many factors may predispose to ulcers and bloat in the abomasum, including roughage, environmental stress, deficiencies of vitamins and minerals and bacterial infections. These ulcers may be subclinical and are found during necropsy or after slaughter, or lead to reduction of abomasal motility, hindering the flow of your content and causing serious digestive disorders and even the appearance of syndromes similar to vagal indigestion. There are some studies evaluating the immune system response in most of the mucous membranes of the gastrointestinal tract of non-ruminants and ruminants, but rarely related to the abomasum. The aims of this study were to investigate the levels of cytokines (IL-17A, IFN-γ, TNF-α, IL-10, IL-6, IL-4, IL-2) in the abomasal fluid of beef cattle, to determine the Th1 or Th2 profile of these cytokines in animals with types 1 or 2 ulcers located in the abomasal cardic region and to compare these levels with those of animals without ulcers (controls), in samples collected in an abbatoir, to help to the understand the pathophysiology of the local inflammatory process. Ulcers from the abomasal cardic region were macroscopicaly evaluated, then classified by histology. Cytokine levels in the abomasal fluid from animals with or without ulcers were evaluated by flow cytometry (Cytometric Bead Array). Cytokines were detected in the abomasum fluid of cattle. There was no difference in the release of cytokines between groups, indicating a balance between Th1 and Th2 profiles of the inflammatory response.

JUSTIFICATIVA E OBJETIVOS: A Síndrome da Resposta Inflamatória Sistêmica é uma ocorrência habitual em cirurgias cardíacas com circulação extracorpórea (CEC). O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis sistêmicos e pulmonares de citocinas e a correlação com a função pulmonar em pacientes submetidos à revascularização miocárdica (RM) com CEC. MÉTODOS: O estudo foi aprovado pela Comissão de Ética institucional, com a avaliação de 13 pacientes submetidos à RM com CEC. Após a indução anestésica, ao término da CEC, realizaram-se dosagens plasmáticas e no lavado broncoalveolar de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Foram avaliados o tempo de CEC e de cirurgia, a relação PaO2/FiO2, o gradiente alvéolo-arterial de oxigênio (GA-aO2), o shunt e a complacência pulmonares. Os resultados foram submetidos à análise de variância para medidas repetidas (*p < 0,05) e coeficiente de correlação de Spearman. RESULTADOS: Observaram-se aumento dos níveis de citocinas no plasma e no lavado broncoalveolar após a CEC e relação direta entre o aumento da IL-1β e a diminuição da complacência pulmonar (p = 0,0439), assim como relação inversa entre o aumento da IL-10 e a redução da complacência (p = 0,0325). O aumento da IL-6 teve relação direta com o tempo de CEC (p = 0,012), enquanto o aumento da IL-8 teve relação direta com o tempo de cirurgia (p < 0,0001). Os níveis de IL-1β, IL-8 e TNF-α foram maiores no LBA em relação ao plasma. CONCLUSÕES: Ocorre aumento dos níveis de citocinas no plasma e lavado broncoalveolar após a CEC e há correlação entre o aumento dos níveis de citocinas e o tempo de CEC e de cirurgia e as alterações na complacência pulmonar. BACKGROUND AND OBJECTIVES: Systemic inflammatory response syndrome is commonly observed in coronary artery bypass grafts (CABG) with cardiopulmonary bypass (CB). The objective of this study was to evaluate the systemic and pulmonary levels of cytokines and their correlation with lung function in patients undergoing myocardial revascularization (MR) with CB. METHODS: This study was approved by the Institutional Ethics Committee, and 13 patients undergoing MR with CB were evaluated. After anesthetic induction and at the end of CB, plasma and bronchoalveolar lavage levels of IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, and TNF-α were determined. The dur ation of CB and surgery, PaO2/FiO2 ratio, alveolar-arterial oxygen gradient (A-a gradient), shunt, and lung compliance were evaluated. Results were submitted to analysis of variance for repeated measurements (*p < 0.05) and Spearman's correlation coefficient. RESULTS: We observed increased levels of cytokines in plasma and bronchoalveolar lavage after CB and a direct relationship between the increase in IL-1β and decrease in lung compliance (p = 0.0439), as well as the inverse relationship between the increase in IL-10 and a decrease in compliance (p = 0.0325). The increase in IL-6 was directly related to the duration of CB (p = 0.012), while the increase in IL-8 was directly related to the duration of surgery (p < 0.0001). Levels of interleukin-1β, IL-8, and TNF-α in bronchoalveolar lavage were higher than in plasma. CONCLUSIONS: There is an increase in cytokine levels in plasma and bronchoalveolar lavage after CB, as well as a correlation between increased cytokine levels and CB duration and surgery and changes in lung compliance. JUSTIFICATIVA Y OBJETIVOS: El Síndrome de la Respuesta Inflamatoria Sistémica es algo habitual en las cirugías cardíacas con circulación extracorpórea (CEC). El objetivo de este estudio fue evaluar los niveles sistémicos y pulmonares de citocinas y la correlación con la función pulmonar en los pacientes sometidos a la revascularización miocárdica (RM) con CEC. MÉTODOS: El estudio fue aprobado por la Comisión de Ética Institucional, con la evaluación de 13 pacientes sometidos a la RM con CEC. Después de la inducción anestésica al término de la CEC, se realizaron dosificaciones plasmáticas y también en el lavado broncoalveolar de IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 y TNF-α. Se evaluaron el tiempo de CEC y de cirugía, la relación PaO2/FiO2, el gradiente alvéolo-arterial de oxígeno (GA-aO2), el shunt y la complacencia pulmonares. Los resultados fueron sometidos al análisis de variancia para medidas repetidas (*p < 0,05) y al coeficiente de correlación de Spearman. RESULTADOS: Se observó un aumento en los niveles de citocinas en el plasma y en el lavado broncoalveolar después de la CEC y una relación directa entre el aumento de la IL-1β y la disminución de la complacencia pulmonar (p = 0,0439), como también una relación inversa entre el aumento de la IL-10 y la reducción de la complacencia (p = 0,0325). El aumento de la IL-6 tuvo una relación directa con el tiempo de CEC (p = 0,012), mientras que el aumento de la IL-8 tuvo una relación directa con el tiempo de cirugía (p < 0,0001). Los niveles de IL-1β, IL-8 y TNF-α fueron mayores en el LBA con relación al plasma. CONCLUSIONES: Ocurre un aumento de los niveles de citocinas en el plasma y en el lavado broncoalveolar después de la CEC, con una correlación entre el aumento de los niveles de citocinas y el tiempo de CEC y de cirugía, y las alteraciones en la complacencia pulmonar.

As citocinas vem sendo estudadas como biomarcadores inflamatórios e podem estar envolvidas desde a patogênese até a neurotoxicidade no Acidente Vascular Cerebral (AVC). Portanto diversos estudos vêm sendo conduzidos para inibir ou estimular a produção destes biomarcadores após AVC, com o objetivo de melhorar a progressão das consequências da doença. Os exercícios físicos alteram as citocinas circulantes, e podem auxiliar neste processo de recuperação no período pós-AVC. Nosso objetivo foi realizar uma revisão sistemática e metanálise sobre os efeitos do exercício físico nas citocinas após AVC, e, em seguida, analisar os níveis de citocinas circulantes e verificar a correlação com a gravidade da doença e força muscular. Para a revisão sistemática foram utilizadas sete bases de dados em busca de artigos com estratégia Patient-Intervention-Comparison- Outcomes-Study (PICOS). Para avaliação do risco de viés utilizamos os critérios descritos no Cochrane Handbook for Systematic Review of Interventions e a escala Physiotherapy Evidence Database e posteriomente foi realizada metanálise dos estudos com desfechos homogêneos. Nos pacientes na fase aguda de AVC os níveis de citocinas foram avaliados por meio dos métodos Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Cytometric bead array (CBA). Estes níveis foram comparados entre pacientes e controles e correlacionados com força muscular manual e gravidade da doença avaliada pelo NIHSS. Na revisão obtivemos 14489 artigos nas bases de dados, sendo incluídos apenas 5 de acordo com critérios. Dos cinco artigos selecionados todos analisaram o marcador IL-6. Dois ensaios randomizados analisaram os níveis séricos de TNF-α. A análise qualitativa destes estudos mostrou divergências nas metodologias e dos resultados. Três estudos foram classificados para metanálise. Nenhum dos três ensaios randomizados correlacionaram os níveis das citocinas a nenhum desfecho clínico ou funcional, porém pode haver redução dos níveis de IL-6 e TNF- quando analisados de forma associada. No estudo experimental, foram avaliados 17 pacientes com AVC na fase aguda. Foi observado redução dos níveis séricos de TNF- e aumento de IL-6 e IL-10 no grupo AVC comparado ao controle. Observamos maior tendência na resposta anti-inflamatória dos pacientes. Além disso, os pacientes apresentaram uma baixa correlação positiva entre os níveis séricos de IL-6 e IL-10. Uma associação foi constatada entre IL12p70 com NIHSS e força de preensão palmar do lado afetado; IL-1β com força de preensão palmar do lado afetado; IL-6 com força de preensão palmar do lado nãoafetado. Portanto concluímos que a revisão e metanálise mostrou que apesar dos indícios de redução de IL-6 e TNF- associado ao exercício, a quantidade de estudos relacionados ao tema ainda é reduzida. A comparação entre pacientes e controles apontou correlação entre algumas citocinas e escala de gravidade e força de preensão palmar. Cytokines has studied as inflammatory biomarkers and can be involved from pathogenesis to neurotoxicity in stroke. Therefore, several studies have been conducted to inhibit or stimulate the production of these biomarkers after a stroke, with the objective of improving the progression of the consequences of the disease. The physical exercises alter circulating cytokines, and can assist in this recovery process in the post-stroke period. Our objective was perform a systematic review and meta-analysis of the physical exercise effects on cytokines after stroke, and then analyze the levels of circulating cytokines and to verify the correlation with the severity of the disease and muscle strength. For the systematic review, seven databases were used in search of articles with the Patient-Intervention-Comparison- Outcomes-Study (PICOS) strategy. To assess the risk of bias, we used the criteria described in the Cochrane Handbook for Systematic Review of Interventions and the Physiotherapy Evidence Database scale and subsequently a meta-analysis of the studies with homogeneous outcomes was performed. In patients with acute stroke, cytokine levels were assessed using the Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and Cytometric bead array (CBA) method. These levels were compared between patients and controls and correlated with manual muscle strength and disease severity assessed by NIHSS. In the review, we obtained 14489 articles in the databases, of which only 5 were included according to criteria. Five selected articles, all analyzed the IL6. Two randomized trials analyzed serum levels of TNF-α. The qualitative analysis of these studies showed differences in methodologies and results. Three studies were classified for metaanalysis. None of the three randomized trials correlated cytokine levels with any clinical or functional outcome, but there may be a reduction in IL-6 and TNF- levels when analyzed in an associated way. In the experimental study, 17 patients with stroke in the acute phase were evaluated. A reduction in serum TNF- levels and an increase in IL-6 and IL-10 were observed in the stroke group compared to the control group. We observed a greater tendency in the patients' anti-inflammatory response. In addition, patients had a low positive correlation between serum IL-6 and IL-10 levels. An association was found between IL12p70 with NIHSS and hand grip strength on the affected side; IL-1β with handgrip strength on the affected side; IL-6 with handgrip strength on the unaffected side. Therefore, we conclude that the review and meta-analysis showed that despite the signs of reduced IL-6 and TNF- associated with exercise, the number of studies related to the topic is still reduced. The comparison between patients and controls showed a correlation between some cytokines and the severity scale and handgrip strength.

A serotonina ou 5-hidroxitriptamina (5-HT) desempenha um papel importante na regulação de vários mecanismos fisiológicos, como temperatura corporal, imunidade, apetite, respiração, sono e humor. Além disso, a 5-HT é importante para o tratamento de doenças, sendo extensivamente estudada e utilizada terapeuticamente em transtornos psiquiátricos. O presente estudo investigou: (Estudo 1) os efeitos da 5-HT sistêmica e no sistema nervoso central (SNC) sobre respostas termorregulatórias, (Estudo 2) os efeitos terapêuticos da administração intracerebroventricular (icv) de 5-HT durante a inflamação sistêmica leve e (Estudo 3) grave, bem como a relação entre esses efeitos e o reflexo anti-inflamatório esplênico, incluindo esse neurotransmissor como um importante elo de comunicação entre o sistema nervoso e o sistema imune. Esses estudos empregaram registros eletrofisiológicos e de parâmetros fisiológicos, injeções intravenosas (iv), injeções intracerebrais em regiões de interesse ou icv em ratos anestesiados ou não anestesiados, além de realizar a quantificação de prostaglandinas (PG) e neurotransmissores na região anteroventral da área pré-óptica do hipotálamo (AVPO), de óxido nítrico (NO) e corticosterona plasmáticos, bem como de citocinas plasmáticas e esplênicas. Os resultados do Estudo 1 demonstram que a atividade nervosa simpática (ANS) para o tecido adiposo marrom (TAM) e a termogênese pelo TAM durante o frio são inibidas pela administração sistêmica ou local de 8-OH-DPAT via ativação de receptores (R) 5-HT1A no núcleo rostral pálido da rafe (rRPa). Por outro lado, a administração sistêmica de 5-HT ativa uma circuitaria neural que resulta na ativação de GABAAR na região dorsomedial do hipotálamo (DMH), a qual inibe a termogênese pelo TAM induzida pelo frio. Adicionalmente, o presente estudo demonstra que há um tônus serotonérgico para o rRPa, que 5-HT1AR e contribui para a inibição da ANS TAM e da termogênese pelo TAM em animais com corpo aquecido. Em conjunto, os resultados dos Estudos 2 e 3 demonstram que uma injeção icv de 5-HT apresenta efeitos anti-inflamatórios sistemicamente, devido à redução dos níveis de PGE2 na AVPO e de citocinas pró-inflamatórias no plasma e no baço. Além de reduzir a febre causada pela inflamação sistêmica leve, a 5-HT icv foi capaz de prevenir a hipotermia e a hipotensão causadas pela inflamação sistêmica grave, além de reduzir os níveis de NO plasmático. A esplenectomia preveniu parte do efeito anti-inflamatório sistêmico da 5-HT icv durante a inflamação sistêmica leve. Em conjunto, esses resultados indicam que a 5-HT apresenta efeitos criogênicos, em animais expostos a uma situação que mimetiza o frio, e durante a inflamação sistêmica leve, além de ativar tonicamente 5-HT1AR em neurônios no rRPa que contribuem para a inibição da ANS TAM e da a termogênese pelo TAM. Ademais, a 5-HT apresenta efeitos anti-inflamatórios importantes em dois diferentes modelos de inflamação sistêmica: leve, que mimetiza, por exemplo, uma resposta a uma infecção bacteriana leve, e severa, que mimetiza o choque endotoxêmico, possivelmente via ativação do reflexo anti-inflamatório esplênico. Serotonin or 5-hydroxytryptamine (5-HT) plays an important role in regulating various physiological mechanisms such as body temperature, immunity, appetite, breathing, sleep, and mood. In addition, 5-HT is important for the treatment of diseases, being extensively studied and used therapeutically in psychiatric disorders. The present study investigated: (Study 1) the effects of 5-HT administered systemically and within the central nervous system (CNS) on thermoregulatory responses, (Study 2) the therapeutic effects of intracerebroventricular (icv) administration of 5-HT during mild systemic inflammation and (Study 3) severe systemic inflammation, as well as the relationship between these effects and the splenic antiinflammatory reflex, including this neurotransmitter as an important communication link between the nervous system and the immune system. The present studies used electrophysiological recording and physiological parameters, intravenous (iv) injections, intracerebral injections within regions of interest or icv in anesthetized or non-anesthetized rats, as well as the quantification of prostaglandins (PG) and neurotransmitters in the anteroventral region of the preoptic area of the hypothalamus (AVPO), plasma nitric oxide (NO), corticosterone, as well as splenic and plasma cytokine levels. The results of Study 1 demonstrate that brown adipose tissue (BAT) sympathetic nerve activity (SNA) and BAT thermogenesis are inhibited by systemic or local administration of 8-OH-DPAT via 5-HT1AR activation in the rostral raphé pallidus (rRPa) during skin cooling. On the other hand, systemic administration of 5-HT activates a neural circuitry that results in GABAAR activation in the dorsomedial hypothalamus (DMH), which inhibits skin cooling-evoked increases in BAT thermogenesis. Additionally, the present study demonstrates that there is a serotonergic tone to sympathetic neurons in the rRPa, activating 5-HT1AR and contributing to the inhibition of BAT SNA and BAT thermogenesis in rats under a warm condition. Taken together, the results of the Studies 2 and 3 demonstrate that icv injection of 5-HT presents systemic antiinflammatory effects, i.e., reduced AVPO PGE2 levels and reduced plasma and spleen cytokine levels. In addition to reducing fever caused by mild systemic inflammation, 5-HT icv prevented severe systemic inflammation-induced hypothermia and hypotension and reduced plasma NO levels. Splenectomy prevented part of the systemic anti-inflammatory effect of 5- HT icv during mild systemic inflammation. Altogether, these results indicate that 5-HT presents cryogenic effects in animals exposed to skin cooling and during mild systemic inflammation, besides tonically activating 5-HT1AR in rRPa neurons contributing to the inhibition of BAT SNA and BAT thermogenesis under a warm condition. Additionally, 5-HT presents important anti-inflammatory effects in two different models of systemic inflammation: mild, which mimics, for example, a response to mild bacterial infection and severe, which mimics endotoxemic shock, possibly via activation of the splenic antiinflammatory reflex.

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No. of bitstreams: 4 Tese Final _ George 2019_vers??o_corrigida_p??s_defesa.pdf: 913705 bytes, checksum: bc43266c705d448235dbe7829843b617 (MD5) Carta_encaminhamento_autodeposito.pdf: 1705060 bytes, checksum: 361f95865bdb43b1d22362b2c53c471a (MD5) Ata_Defesa_Doutorado_George.pdf: 307778 bytes, checksum: aaa77d51de41fd99c547ec658192784a (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2019-09-10 CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient??fico e Tecnol??gico FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas Cutaneous Leishmaniasis caused by Leishmania species, present an important health problem, as significant morbidity and also lethality of the most severe cases of the disease. Different clinical studies and experimental have related the involvement from inflammatory cytokines in the development of CL. Feactures of CL pathogenicity to be associated with as host immunogenetics components to determine for the outcome of the disease. We investigated whether single nucleotide polymorphisms in IL1B, IL1RN and IFNG may be associated with elevated or decreased risk in the development of the CL. Nucleotide sequencing and PCR-RFLP were performed in 881 patients with CL and 837 controls. Circulating plasma cytokines were also assayed between CL patients and control subjects. The cytokine levels of IL-1??, IL-6, IL-8, MCP-1 and IFN-?? were significantly higher in patients compared to controls (p < 0.0001), levels elevated of IL-1ra were observed among the controls. IL1B and IFNG polymorphisms are associated with CL and cytokine levels. The IL1B rs16944 C/C genotype is related with lower levels of IL-1ra and associated with susceptibility to CL (OR=1.5 [95%CI 1.1???2.0]; p=0.004). Different SNPs and microsatellite of the IFNG gene were associated with protection and susceptibility to CL, those rs2069705 T and rs2430561 T were associated for the risk to CL (OR=1.5 [95%CI 1.2-2.0]; p=0.0004 / OR=1.4 [95%CI 1.2-1.6]; p=0.0002). IFNG alleles related with risk to CL are combined into haplotype (H1), this associated with susceptibility to CL (OR=1.7 [95%CI 1.2-2.2]; p=5x10-5) and related with lower levels of IFN-??. Although, SNPs present in IL1B and IFNG may mark to the development of CL caused by Leishamania guyanensis, genetic variants are associated with the production of the IL-1??, IL-1Ra and IFN-??. A Leishmaniose Cut??nea (LC) ?? causada por diferentes esp??cies de protozo??rios Leishmania, apresenta importante impacto na sa??de p??blica, com significante morbidade e tamb??m letalidade dos casos mais graves da doen??a. Diferentes estudos cl??nicos e experimentais t??m relatado o envolvimento de citocinas inflamat??rias no desenvolvimento da LC. Aspectos da patogenicidade da LC t??m sido relacionados a caracter??sticas imunogen??ticas do hospedeiro como determinantes para o resultado da doen??a. Neste estudo investigamos se polimorfismos gen??ticos em IL1B, IL1RN e IFNG est??o associados com a suscetibilidade ou a prote????o a LC. A genotipagem dos SNPs foi realizada atrav??s do sequenciamento nucleot??dico e pela PCR-RFLP em 881 pacientes com LC e 837 indiv??duos controles. As concentra????es de citocinas foram tamb??m avaliadas entre pacientes e indiv??duos controles atrav??s do Luminex. Os n??veis das citocinas IL-1??, IL-6, CXCL-8, MCP-1 e IFN-?? foram significativamente superiores em pacientes com LC (p < 0,0001), enquanto elevados n??veis de IL-1Ra foram observados em controles. Polimorfismos gen??ticos de IL1B e IFNG est??o associados com o desenvolvimento da LC e com os n??veis de citocinas. O gen??tipo rs16944 C/C IL1B est?? relacionado a baixos n??veis de IL-1Ra e associado com a suscetibilidade a LC (OR=1.5 [95%CI 1.1???2.0]; p=0.004). Microssat??lite e diferentes SNPs do gene IFNG foram associados com a resist??ncia e a suscetibilidade a LC, como rs2069705 T e rs2430561 T est??o associados ao risco a LC (OR=1.5 [95%CI 1.2-2.0]; p=0.0004 / OR=1.4 [95%CI 1.2-1.6]; p=0.0002). Alelos de IFNG associados ao risco a LC est??o combinados em hapl??tipo (H1), este associado com a suscetibilidade a LC (OR=1.7 [95%CI 1.2-2.2]; p=5x10-5) e relacionado aos baixos n??veis de IFN-??. Polimorfismos gen??ticos em IL1B e IFNG s??o determinantes para o resultado da LC causada por Leishmania guyanensis, portanto varia????es gen??ticas est??o relacionadas com a produ????o de citocinas, como IL-1??, IL-1Ra e IFN-??.

RESUMO Objetivo: Examinar a associação entre os níveis de citocinas no plasma do doador e o desenvolvimento de disfunção primária do enxerto de órgãos transplantados a partir de doadores falecidos. Métodos: Foram incluídos no estudo de forma prospectiva 17 doadores falecidos e os respectivos 47 pacientes receptores de transplante. Os receptores foram divididos em dois grupos: grupo 1, de pacientes que desenvolveram disfunção primária do enxerto, e grupo 2, de pacientes que não desenvolveram disfunção primária do enxerto. Os níveis de TNF, IL-6, IL-1β, e IFN-γ, avaliados por meio de ELISA, foram comparados entre os grupos. Resultados: Obtiveram-se 69 órgãos, sendo realizados 48 transplantes. Os níveis plasmáticos de citocinas nos doadores não diferiram entre os grupos (em pg/mL): TNF no grupo 1, com 10,8 (4,3 - 30,8) versus no grupo 2, com 8,7 (4,1 - 33,1), com valor de p = 0,63; IL-6 no grupo 1: 1.617,8 (106,7 - 5.361,7) versus no grupo 2: 922,9 (161,7 - 5.361,7), com p = 0,56; IL-1β, no grupo 1: 0,1 (0,1 - 126,1) versus no grupo 2: 0,1 (0,1 - 243,6), com p = 0,60; e IFN-γ, no grupo 1: 0,03 (0,02 - 0,2) versus no grupo 2: 0,03 (0,02 - 0,1), p = 0,93). Obtivemos resultados similares ao examinar separadamente os casos de transplante renal. Conclusão: Nesta amostra de receptores de transplante, os níveis plasmáticos das citocinas TNF, IL-6, IL-1β e IFN-γ nos doadores não se associaram com o desenvolvimento de disfunção primária do enxerto. ABSTRACT Objective: To examine the association between donor plasma cytokine levels and the development of primary graft dysfunction of organs transplanted from deceased donors. Methods: Seventeen deceased donors and the respective 47 transplant recipients were prospectively included in the study. Recipients were divided into two groups: group 1, patients who developed primary graft dysfunction; and group 2, patients who did not develop primary graft dysfunction. Donor plasma levels of TNF, IL-6, IL-1β, and IFN-γ assessed by ELISA were compared between groups. Results: Sixty-nine organs were retrieved, and 48 transplants were performed. Donor plasma cytokine levels did not differ between groups (in pg/mL): TNF, group 1: 10.8 (4.3 - 30.8) versus group 2: 8.7 (4.1 - 33.1), p = 0.63; IL-6, group 1: 1617.8 (106.7 - 5361.7) versus group 2: 922.9 (161.7 - 5361.7), p = 0.56; IL-1β, group 1: 0.1 (0.1 - 126.1) versus group 2: 0.1 (0.1 - 243.6), p = 0.60; and IFN-γ, group 1: 0.03 (0.02 - 0.2) versus group 2: 0.03 (0.02 - 0.1), p = 0.93). Similar findings were obtained when kidney transplants were analyzed separately. Conclusion: In this sample of transplant recipients, deceased donor plasma cytokines TNF, IL-6, IL-1β, and IFN-γ were not associated with the development of primary graft dysfunction.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Hancornia speciosa Gomes (mangabeira) is used in folk medicine to treat different diseases, including inflammatory conditions. Leaves and fruits have been extensively studied but there is no investigation on the biological effects of the fixed oil extracted from its seeds. The aim this study was evaluated the anti-inflammatory activity of the oil from “mangaba” seeds (OMS) in mice. Adult male Swiss mice (25-30 g) were used and the protocols were approved by the Ethics Committee for Animal Research (n°28/2018). Cytotoxicity was evaluated in fibroblasts of the L929 cell line through MTT assay. The topical anti-inflammatory activity was evaluated in the ear edema induced by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA). Treatment with OMS (0.3, 1.0 or 3.0 mg/ear) or dexamethasone (0.05 mg/ear, control) was concomitantly administrated with TPA (1 µg/ear) in the ipsilateral ear, topically. After 6 hours, edema, myeloperoxidase (MPO) activity, cytokine levels (TNF-α, IL-6 and IL-1β), histological alterations, vascular permeability and oxidative parameters were measured. The topical effect has also evaluated in the capsaicin-induced ear edema (0.2 mg/ear). In this model, animals were pre-treated with OMS (3 mg/ear) or ruthenium red (7.8 ng/ear, control) administrated in the ipsilateral ear 15 minutes before induction. After 30 minutes was measured ear edema. For evaluation of the systemic anti-inflammatory activity, mice were treated with vehicle (Tween 0.5% in saline, 10 mL/kg), OMS (100, 200 or 400 mg/kg, p.o. or i.p.) or dexamethasone (5 mg/kg, p.o. or s.c.) administered 1 hour or 30 min, respectively (for each route of administration), before intrapleural injection of carrageenan (1 mg/cavity). The fluid leakage from the pleural cavity was collected 4 h after induction for assessment of total leukocyte counts, MPO activity, protein extravasation and cytokine levels (TNFα, IL-6, IL-1β and IL-10). Results were expressed as mean ± S.E.M. and were evaluated by one-way ANOVA followed by Tukey's test, with p

Este estudo clínico avaliou a quantidade de bactérias e endotoxinas, antes e após o tratamento endodôntico utilizando ativação ultrassônica de solução de hidróxido de cálcio e sua correlação com a indução de citocinas pró-inflamatórias por fibroblastos humanos. Vinte e três pacientes com dentes com periodontite apical primária foram submetidos ao tratamento endodôntico. O preparo químico-cirúrgico (PQC) foi realizado com instrumentos reciprocantes, utilizando NaOCl 2,5% durante o preparo e EDTA 17% para remoção do magma dentinário; complementado com a ativação ultrassônica de uma solução de hidróxido de cálcio. Os canais radiculares foram preenchidos com pasta de hidróxido de cálcio por 14 dias e obturados. Foram realizadas coletas microbiológicas dos canais antes (S1) e após o PQC (S2), após o protocolo de ativação ultrassônica (S3) e após a medicação intracanal (S4). As amostras foram analisadas por: PCR quantitativo (qPCR) utilizando iniciadores universais para quantificação de bactérias após extração de DNA; teste turbidimétrico de LAL para quantificação de endotoxinas; e ELISA para quantificação de citocinas (IL-1?, IL-6, CCL2) em cultura de fibroblastos humanos após indução com o conteúdo do canal radicular. Os dados foram analisados pelos seguintes testes estatísticos: teste de Wilcoxon e Q de Cochran para análise quantitativa de bactérias e endotoxinas; ANOVA e teste de Tukey, para quantificação dos níveis de citocinas; e teste de Pearson para correlação entre os níveis de endotoxinas e citocinas (todos com nível de significância de 5%). Bactérias e endotoxinas foram observadas em todas as amostras iniciais com uma mediana de 3,61 x 104 e 109 EU/ml, respectivamente. Após o preparo químico-cirúrgico, houve uma redução significativa (p 0,05). Houve diminuição significativa de IL-6 e CCL-2 entre S1 e S2 (p 0,05). Conclui-se que o PQC foi eficaz na redução de bactérias e endotoxinas dos canais radiculares; enquanto a medicação intracanal influenciou apenas na redução de endotoxina. As amostras após o PQC induziram menores níveis de IL-6 e CCL-2 em fibroblastos humanos do que as amostras antes do tratamento endodôntico. Por outro lado, as demais etapas do tratamento não foram capazes de promover uma redução adicional dessas citocinas. This clinical study analyzed bacteria and endotoxins levels before and after endodontic treatment using ultrasonic activation of a calcium hydroxide solution and an intracanal medication and its correlation with pro-inflammatory cytokines induction by human fibroblasts. Twenty-three patients with teeth with primary apical periodontitis were submitted to endodontic treatment. The root canal preparation of all the teeth was carried out with reciprocating files and 2.5% NaOCl during preparation; and 17% EDTA for smear layer removal, supplemented with the ultrasonic activation of a solution of calcium hydroxide. The root canals were medicated with calcium hydroxide for 14 days and then obturated. Microbiological sampling were performed before (S1) and after the root canal preparation (S2), after ultrasonic activation protocol (S3) and after intracanal medication (S4). The samples were analyzed by quantitative PCR (qPCR) using universal primers quantification of bacteria after DNA extraction; LAL turbidimetric test for detection and determination of endotoxin and ELISA for evaluate the cytokine production (IL-1?, IL-6, CCL2) by humam fibroblasts culture. Data was analyzed by Wilcoxon and Q cochran tests for the quantitative analysis of bacteria and endotoxins. ANOVA and tukey test, with significance level of 5%, were used for quantification of cytokine levels and Pearson\'s test for correlation between endotoxins and cytokine levels. Bacteria and endotoxins were observed in all initial samples with a median of 3.61 x 104 and 109 EU/ml respectively. After root canal preparation, there was a significant reduction (p0.05). There was a significant decrease in the presence of the proinflammatory cytokine IL-6 and CCL-2 between the initial stage of endodontic treatment (S1) and the next step (S2) (p 0.05). It was concluded that the root canal preparation was effective in reducing bacteria and endotoxins, and intracanal medication only influenced in endotoxin reduction. Samples after the root canal preparation induced lower levels of IL-6 and CCL-2 in human fibroblasts than samples before endodontic treatment, whereas other stages of the endodontic treatment were not able to promote an additional reduction.

Submitted by Caroline de Freitas Zanon (carolfzanon@yahoo.com.br) on 2018-07-19T18:02:39Z No. of bitstreams: 1 TESE VERSAO FINAL.pdf: 2398136 bytes, checksum: a2ce0aa2c7a816d48d27d6f13d6a0fec (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) As páginas pré-textuais não estão na ordem correta, a ordem correta das páginas pré-textuais (capa, folha de rosto, ficha catalográfica, folha de aprovação, dedicatória, agradecimentos, epígrafe, resumo na língua vernácula, resumo em língua estrangeira, listas de ilustrações, de tabelas, de abreviaturas, de siglas e de símbolos e sumário). Problema 02) Nos agradecimentos consta também a FAPESP, então deve constar o nome dela também na folha de rosto e de aprovação com o número de processo e nos agradecimentos precisa constar o número do processo também, é norma do convênio, coloque também os números do processo da CNPQ. Problema 03) No repositório você colocou o nome de Caroline de Freitas Zanon e na tese está Caroline de Freitas Zanon de Carvalho, se esse é o seu nome atual por favor coloque também este nome no repositório. Sua submissão será rejeitada para que você possa fazer as correções Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2018-07-19T19:04:58Z (GMT) Submitted by Caroline de Freitas Zanon de Carvalho (carolfzanon@yahoo.com.br) on 2018-07-21T14:52:58Z No. of bitstreams: 1 TESE VERSAO FINAL.pdf: 2394414 bytes, checksum: 6f54895bda93635e996f95a66bf389be (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-07-23T13:58:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_cfz_dr_sjrp.pdf: 2370535 bytes, checksum: d8d49b7c960d1ac32653f9d268eda5df (MD5) Made available in DSpace on 2018-07-23T13:58:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_cfz_dr_sjrp.pdf: 2370535 bytes, checksum: d8d49b7c960d1ac32653f9d268eda5df (MD5) Previous issue date: 2018-06-21 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Os avanços recentes nos mecanismos de inflamação e a descoberta de vários mediadores endógenos anti-inflamatórios levaram a novas investigações sobre as possibilidades terapêuticas. A demonstração, em estudos científicos, da ação anti-inflamatória da proteína anexina A1 (ANXA1) e do seu peptídeo mimético Ac2-26, têm sido fonte de sucesso para o desenvolvimento de novos fármacos. A descoberta da interação biofísica da piplartina (PL) com a região N-terminal da ANXA1 abriu um novo e instigante campo de investigação para o nosso grupo de pesquisa. Diante destas considerações, o objetivo do presente trabalho foi investigar a atuação da PL nas células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC), ativadas pelo lipopolissacarídeo (LPS). Ainda, se a interação Ac2-26/PL influência nas ações anti-inflamatórias da PL, favorecendo ou atenuando os seus efeitos nos processos inflamatórios. Inicialmente foi utilizada a Espectroscopia de Absorbância UV-Vis e de Fluorescência para investigar as interações entre o ligante PL e Ac2-26. In vitro, as células HUVEC foram ativadas pelo LPS (10 μg/mL), nos tempos de 8, 24, 48 e 72 horas, seguido pelos tratamentos com Ac2-26 (1µM) e/ou PL (10µM), demonstrando resultados expressivos em 24 e 72 horas. Os efeitos foram avaliados nos seguintes aspectos: proliferação celular, viabilidade celular, dosagens da quimiocina MCP-1 e das citocinas IL-8 e IL-1β e expressão da proteína α-tubulina. A presença de um anel trimetoxiaromático na estrutura da PL, o que pode favorecer uma interação com a tubulina, motivou as análises de Western blotting, as quais demonstraram que a PL inibiu a síntese da proteína endógena α-tubulina, em todas as condições experimentais. Nossos resultados mostraram efeitos pró-proliferativos do peptídeo Ac2-26 e, por outro lado, antiproliferativos e pró-apoptóticos da PL. Os níveis das citocinas pró-inflamatórias confirmaram o papel anti-inflamatório do Ac2-26 nas células ativadas pelo LPS, com redução dos níveis de MCP-1 e IL-8, em 24 horas. O tratamento PL reduziu os níveis de MCP-1 nas células ativadas pelo LPS, e aumentou IL-8, inclusive no tratamento associado Ac2-26/PL. Em conjunto, os resultados com as células HUVEC indicam que a PL inibe a proliferação por meio da ativação da apoptose celular, regulada pela inibição da polimerização da α-tubulina e dos níveis elevados da citocina IL-8. A PL e o Ac2-26 mostraram ações anti-inflamatórias, e a interação Ac2-26/PL parece ser neutra em relação às propriedades anti-inflamatórias da PL. Recent advances in inflammation mechanisms and the discovery of several endogenous anti-inflammatory mediators have led to further investigations into the therapeutic possibilities. The demonstration, in scientific studies, of the annexin A1 protein (ANXA1) anti-inflammatory action and its peptide mimetic Ac2-26, have been a source of success for the development of new drugs. The discovery of the biophysical interaction of piplartin (PL) with the N-terminal region of ANXA1 opened a new and exciting field of investigation for our research group. In view of these considerations, the objective of the present study was to investigate the role of PL in lipopolysaccharide (LPS) activated human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Also, if the interaction Ac2-26/PL influences the anti-inflammatory actions of PL, favoring or attenuating its effects on inflammatory processes. Initially, UV-Vis Absorbance Spectroscopy and Fluorescence were used to investigate the interactions between the PL ligand and Ac2-26. In vitro, HUVEC cells were activated by LPS (10 μg/mL) at 8, 24, 48 and 72 hours, followed by treatments with Ac2-26 (1μM) and/or PL (10μM), demonstrating expressive results in 24 and 72 hours. The effects were evaluated in the following aspects: cell proliferation, cell viability, MCP-1 chemokine and IL-8 and IL-1β cytokines and α-tubulin protein expression. The presence of a trimethoxyaromatic ring in the PL structure, which may favor an interaction with tubulin, motivated Western blotting analyzes, which demonstrated that PL inhibited endogenous α-tubulin protein synthesis in all experimental conditions. Our results showed pro-proliferative effects of the peptide Ac2-26 and, on the other hand, antiproliferative and pro-apoptotic of PL. Proinflammatory cytokine levels confirmed the anti-inflammatory role of Ac2-26 in LPS-activated cells, reducing MCP-1 and IL-8 levels within 24 hours. PL treatment reduced MCP-1 levels in LPSactivated cells, and increased IL-8, including in the treatment associated with Ac226/PL.Taken together, the results with HUVEC cells indicate that PL inhibits proliferation through the activation of cellular apoptosis, regulated by the inhibition of α-tubulin polymerization and elevated IL-8 cytokine levels. PL and Ac2-26 showed anti-inflammatory actions, and the Ac2-26/PL interaction appears to be neutral in relation to the anti-inflammatory properties of PL. CNPq: 142274/2014 CNPq UNIVERSAL: 474596/2013-3

Introdução: A monitorização das alterações de biomarcadores desencadeadas por terapia baseada em citocinas pode fornecer informações relevantes capazes de subsidiar o desenvolvimento e a identificação de preditores de resposta terapêutica. Nesse estudo, investigou-se a associação entre níveis séricos de quimiocinas e citocinas com a resposta ao tratamento da hepatite C crônica com interferon peguilado-alfa (PEG-IFN) associado a ribavirina (RBV), que são drogas antivirais e imunomoduladoras. Métodos: Níveis séricos de quimiocinas/citocinas foram quantificados em medidas longitudinais por citometria de fluxo em pacientes com hepatite C crônica e relacionados com a resposta ao tratamento com PEG-IFN e RBV, categorizada como falha terapêutica (nãoresposta/NR ou recidiva/REC) e resposta virológica sustentada (RVS). Resultados: Pacientes com RVS apresentaram menor estado pró-inflamatório no prétratamento, com níveis reduzidos de CXCL8/IL-8, IL-12 e IL-17, enquanto falha terapêutica foi associada a um padrão predominantemente inflamatório no pré-tratamento, com elevação dos níveis de CCL5/RANTES, IFN-á, IFN-ã, redução de IL-10 em NR e elevação de IL-6 e TNF. A inabilidade de sustentar níveis elevados de IFN-á durante o tratamento foi notada em pacientes com NR. O ambiente pró-inflamatório exacerbado no período pré-tratamento observado em pacientes com NR e REC foi acompanhado de uma rede restrita de conexões entre biomarcadores, enquanto pacientes com RVS apresentaram uma rede com conectividade integrada de citocinas. Também foi notável que, ao longo do tratamento, pacientes com RVS apresentaram tendência ao desenvolvimento de um padrão de citocinas/quimiocinas semelhante ao observado em pacientes NR e REC no pré-tratamento. O perfil de citocinas de pacientes com REC no per- e pós-tratamento foi semelhante ao de pacientes com RVS no período pré-tratamento. A análise das alterações do índex 12 semanas de tratamento/pré-tratamento (baseline-fold ou índice T12/T0) distinguiu o IFN-á e o TNF como biomarcadores de elevado desempenho na avaliação do resultado do tratamento com PEG-IFN e RBV. Conclusão: Um perfil de resposta imune pró-inflamatório no pré-tratamento parece ser preditor de falha terapêutica em pacientes infectados pelo HCV, genótipo 1, tratados com PEG-IFN e RBV. Por outro lado, a habilidade de desenvolver um perfil de resposta imune pró-inflamatória ao longo do tratamento parece ser preditora de resposta virológica sustentada. Os resultados distinguem o IFN-á e o TNF séricos no pré-tratamento como biomarcadores de RVS de alta performance em pacientes infectados pelo GT1 tratados com Peg-IFN e RBV. Este modelo de análise poderá contribuir para o desenvolvimento de estratégias imunoterapêuticas para infecções virais emergentes. Background: The follow-up of biomarker changes triggered by cytokine-based therapy may provide relevant insights to subsidize the development and identification of predictors of therapeutic response. This study related serum chemokine/cytokine levels to the response to chronic hepatitis C treatment with the antiviral and imunomodulator drugs PEG-IFN and RBV. Methods: Longitudinal measurements of serum chemokine/cytokine levels were performed by cytometric-bead-array in patients with chronic hepatitis C, categorized according to virological response as non-responder/NR, relapser/REL and sustained-virologic-responder/SVR. Results: Data demonstrated an overall increase of serum chemokine/cytokine levels in HCV patients. In general, therapeutic failure was associated with a predominant baseline proinflammatory pattern with enhanced CCL5/RANTES, IFN-á, IFN-ã, along with decreased IL-10 levels in NR and increased levels of IL-6 and TNF in REL. SVR patients displayed lower baseline proinflammatory status with decreased CXCL8/IL-8, IL-12 and IL-17 levels. The inability to uphold IFN-á levels during treatment was characteristic of NR. The prominent baseline proinflammatory milieu observed in NR and REL patients yielded a restricted biomarker network, whereas SVR displayed a network with integrated cytokine connectivity. Noteworthy was that SVR presented a shift towards a proinflammatory pattern upon immunotherapy, assuming a pattern similar to that observed in NR and REL at baseline. Moreover, REC patients presented cytokines levels after or along treatment towards a profile similar to SVR at baseline. Analysis of baseline-fold changes during treatment pointed out IFN á and TNF as high-performance biomarkers to monitor immunotherapy outcome. Conclusion: The baseline proinflammatory status seems to predict non-response to PEG-IFN e RBV therapy in patients with chronic hepatitis C infected with HCV GT1. The ability to develop a proinflammatory profile during the treatment seems to predict SVR. The results highlight baseline IFNá and TNF as high performance biomarkers of SVR in GT1 infected patients treated by Peg-IFN and RBV. This knowledge may contribute for novel insights into the treatment and control of the continuous public health threat posed by the spreading/emerging viral infections.

Submitted by MARCELA PETROLINI CAPOBIANCO (mpcapobianco@yahoo.com.br) on 2017-04-24T11:43:11Z No. of bitstreams: 1 TESE MARCELA PETROLINI CAPOBIANCO.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-04-25T20:25:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 capobianco_mp_dr_sjrp.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) Made available in DSpace on 2017-04-25T20:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 capobianco_mp_dr_sjrp.pdf: 3177156 bytes, checksum: 6b6af4a4ea15e5048723eabdb0659191 (MD5) Previous issue date: 2017-04-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) No Brasil o Plasmodium vivax é a espécie mais prevalente, responsável por aproximadamente 85% dos casos de malária. Ademais as variantes da proteína circumesporozoíta (CSP - VK210, VK247 e P. vivax-like) já foram identificadas em várias áreas endêmicas no país. Diversos estudos analisando a influência da variabilidade genética de receptores celulares e moléculas envolvidas na resposta imune, com diferentes peptídeos do Plasmodium, têm obtido resultados variáveis de acordo com o antígeno utilizado e a população analisada. Este trabalho apresenta resultados sobre o estudo de polimorfismos genéticos no TCR (T cell Receptor) e nas Interleucinas 1 e 2 em pacientes infectados por P. vivax provenientes do município de Goianésia do Pará, no Estado do Pará. Avaliou-se estes polimorfismos com a parasitemia do indivíduo, com os genótipos da CSP e com a resposta sorológica contra os peptídeos da CSP. Foram relacionados também estes polimorfismos com os níveis de citocinas. Os polimorfismos foram analisados por técnicas de PCR-RFLP e PCR alelo específico. As análises sorológicas da CSP foram realizadas por ELISA. Foram comparadas as frequências genotípicas observadas segundo o teorema de Hardy-Weinberg (HW). Os níveis de IL1 e IL2 foram avaliados por citometria de fluxo, seguindo protocolo descrito pelo fabricante. Associação dos polimorfismos com os níveis de interleucinas foi avaliada por Análise de variância. As frequências genotípicas e alélicas foram obtidas no programa R v 2.11.1. A parasitemia variou de 15 a 70.000, com mediana de 1.500 parasitos/mm3. Os SNPS investigados mostraram frequências variadas na amostra estudada. Todo o polimorfismo avaliado encontra-se em Equilíbrio de Hard Wenberg. Não houve diferença significativa da parasitemia em relação aos SNPs investigados. Infecções contendo apenas a variante VK247 foram as mais comuns e também não foi observado diferença significativa na resposta de anticorpos de acordo com a variante da CSP presente no momento da infecção. Correlações significativas entre os níveis destas interleucinas com a parasitemia e os níveis de anticorpos contra as variantes da CSP não foram observadas. Além disso, as variantes da CSP não influenciaram os níveis plasmáticos das citocinas e não houve associações positivas entre os SNPs das IL1 e IL2 e seus níveis plasmáticos. Os resultados poderão contribuir na identificação e participação efetiva de genes humanos na modulação da resposta imune, essenciais no estabelecimento de estratégias de imunização contra a doença, em área de transmissão ativa no Estado do Pará. In Brazil, Plasmodium vivax is the most prevalent species responsible for approximately 85% of malaria cases. In addition, variants of the circosporozoite protein (CSP - VK210, VK247 and P. vivax - like) have already been identified in several endemic areas in the country. Several studies analyzing the influence of the genetic variability of cellular receptors and molecules involved in the immune response with different Plasmodium peptides have obtained variable results according to the antigen used and the analyzed population. This work presents results on the study of genetic polymorphisms in TCR (T cell Receptor) and in Interleukins 1 and 2 in patients infected by P. vivax from the city of Goianésia do Pará, in the State of Pará. These polymorphisms were evaluated with Parasitemia, CSP genotypes and serological response to CSP peptides. These polymorphisms were also related to cytokine levels. Polymorphisms were analyzed by PCR-RFLP and allele-specific PCR techniques. Serological tests of CSP were performed by ELISA. The genotypic frequencies observed according to the Hardy-Weinberg (HW) theorem were compared. Levels of IL1 and IL2 were evaluated by flow cytometry following the protocol described by the manufacturer. Association of polymorphisms with interleukin levels was evaluated by analysis of variance. The genotypic and allelic frequencies were obtained in program R v 2.11.1. The parasitemia ranged from 15 to 70,000, with a median of 1,500 parasites / mm3. The SNPS investigated showed varied frequencies in the sample studied. All polymorphism evaluated is in Hard Wenberg Equilibrium. There was no significant difference in parasitemia in relation to the investigated SNPs. Infections containing only the VK247 variant were the most common and also no significant difference in antibody response was observed according to the CSP variant present at the time of infection. Significant correlations between the levels of these interleukins with parasitemia and levels of antibodies against variants of CSP were not observed. In addition, the CSP variants did not influence plasma cytokine levels and there were no positive associations between IL1 and IL2 SNPs and their plasma levels. The results may contribute to the identification and effective participation of human genes in the modulation of the immune response, essential in the establishment of immunization strategies against the disease, in an active transmission area in the State of Pará.

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é definida pelo acúmulo excessivo de gordura nos hepatócitos sem ingestão significativa de álcool. Essa condição é associada à obesidade e a síndrome metabólica (SM) e é considerada um grave problema de saúde pública global. A DHGNA engloba a esteatose pura e a esteatohepatite, esta última caracterizada pela presença de inflamação e balonização dos hepatócitos, com ou sem formação de fibrose com potencial para evolução para formas mais graves como cirrose e carcinoma hepatocelular. Estudos atuais divergem sobre a relação entre a deficiência da vitamina D e a gravidade da DHGNA. O objetivo foi verificar se há associação entre níveis séricos de vitamina D, citocinas relacionadas ao processo inflamatório (IL-6, IL-10 e TNF-?), presença de componentes da SM e a prevalência e a gravidade da DHGNA. Metodologia Estudo transversal que incluiu 40 pacientes do sexo feminino, obesas (IMC>30kg/m²) e com idade superior a 18 anos submetidas e biópsia hepática e obtiveram diagnostico de DHGNA. Foram coletados dados referentes a características clínicas, parâmetros antropométricos e de gordura corporal. Adicionalmente, foram avaliados parâmetros clínicos de SM e dados bioquímicos relacionados à lesão hepática além de dosagem de 25(OH)D e níveis séricos de citocinas. Um grupo controle com 37 indivíduos saudáveis do sexo feminino, não obesas (IMC 30kg/m²) female patients above 18 years who underwent hepatic biopsy during bariatric surgery to diagnose NAFLD and assess the degree of liver damage. Clinical data, anthropometric parameters and body fat were collected. In addition, clinical parameters of metabolic syndrome were evaluated and biochemical data relating to liver injury beyond 25(OH)D and serum cytokines. A control group with 37 healthy non obese females, mean age 41 was used as a controls for serum vitamin D. Results Among 40 NAFLD patients 25 had pure steatosis and 15 steatohepatitis. Prevalence of vitamin D insufficiency was 70%. No difference was observed in vitamin D levels comparing healthy control group and NAFLD or comparing steatosis and steatohepatitis. No relationship was observed between vitamin D or cytokine levels with histopathology parameters of liver injury. Higher levels of vitamin D were associated with cellular ballooning .Vitamin D levels negatively correlated with BMI. Serum cytokine levels were not associated with the severity of NAFLD. The NAS score and the ballooning degree were higher in patients with metabolic syndrome. Conclusions Despite high prevalence of vitamin D insufficiency, serum vitamin D and cytokines were not associated with the presence or severity of NAFLD in obese female patients undergoing bariatric surgery. Ballooning was the only histological parameter of liver damage associated with higher serum levels of vitamin D. Metabolic syndrome was associated with parameters of higher severity of NAFLD.

Em recém-nascidos prematuros, os procedimentos realizados nas primeiras horas de vida podem desencadear resposta inflamatória sistêmica e potencializar o desenvolvimento de desfechos desfavoráveis bem como complicações imediatas e tardias. Objetivo: Avaliar os níveis das Interleucinas (IL) 2, 4, 6, 8, 10, Interferon gama (IFN- ), Fator de Necrose Tumoral alfa (TNF-) e Fator estimulador de colônias degranulócitos e mastócitos (GM-CSF) nas primeiras três horas de vida de recémnascidos prematuros e a sua relação com os principais desfechos desfavoráveis da população estudada. Método: Trata-se de um estudo analítico observacional prospectivo realizado naMaternidade Unimed-BH Unidade Grajaú. Foram incluídos no estudo 34 recémnascidos prematuros com idade gestacional entre 28 e 32 semanas, admitidos no período de julho de 2012 a dezembro de 2014. As citocinas foram dosadas a parti de amostras coletadas em papel filtro com 10 minutos, 1 hora e 3 horas de vida. Resultados: Foi possível dosar as citocinas investigadas a partir de sangue coletado em papel filtro. Foi evidenciada correlação entre os níveis séricos de TNF- naprimeira hora de vida e o desenvolvimento de sepse na população estudada e níveis aumentados de GM-CSF foram identificados nos pacientes que apresentaram hipotermia à admissão na unidade neonatal. Foi detectada a presença de IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF- e GM-CSF nas três primeiras horas de vida, com diferença significativa entre os tempos para as citocinas IL-6, IL-8 e IFN-. IL-2 e IL-4 nãoforam observadas em nenhum dos tempos investigados. Não foi evidenciada correlação entre a expressão das citocinas nos tempos estudados e o desenvolvimento de displasia broncopulmonar, retinopatia da prematuridade, hemorragia peri intraventricular e óbito, mesmo após estratificação da população de acordo com o peso, entre maiores e menores de 1500 gramas. Conclusão: A detecção de citocinas a partir de material coletado em papel de filtro demonstrou ser um método viável tendo como vantagens a facilidade de coleta,armazenamento e transporte, além da utilização de pequenos volumes. A relação da expressão de TNF- e sepse pode sugerir sua utilização como marcador precoce e a correlação de hipotermia com o aumento de GM-CSF sugere o potencial danoso desse quadro clínico nas primeiras horas de vida de recém-nascidos prematuros, apontando a necessidade de adoção de medidas preventivas eficazes de controletérmico. Mais estudos são necessários para confirmar e esclarecer estas correlações e evidenciar o impacto das intervenções precoces no padrão de expressão das citocinas. thProcedures performed on preterm neonates within the first hours of birth may trigge systemic inflammatory responses and boost the development of unfavorable outcomes, in addition to immediate and late complications. Objective: This study aimed to look into the correlations between levels of Interleukin (IL) 2, 4, 6, 8, 10, Interferon gamma (IFN-·), tumor necrosis factor alpha (TNF-·), and granulocytemacrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) in neonates withinree hours of birth and the main unfavorable outcomes observed in this population.Method: This prospective observational study was carried out at the Unimed-B Unidade Grajaú Maternity Hospital. Thirty-four preterm neonates with gestational ages ranging between 28 and 32 weeks seen from July 2012 to December 2014 were enrolled in the study. Cytokine levels were measured from samples collected on filter paper within 10 minutes, one hour, and three hours of birth. Results: Cytokine levels were measured from blood spots collected on filter paper. A correlation was found between TNF- serum levels within one hour of birth and theoccurrence of sepsis in the studied population. Increased levels of GM-CSF were observed in patients with hypothermia upon admission to the neonatal care unit. IL-6, IL-8, IL-10, IFN-, TNF-, and GM-CSF were detected in the blood samples taken within three hours of birth, with statistically significant differences between each of the sample collection times for cytokines IL-6, IL-8, and IFN-. IL-2 and IL-4 were notdetected in any of the tests. No correlation was found between the expression of cytokines at the sample collection times and the occurrence of bronchopulmonary dysplasia, retinopathy of prematurity, periventricular/intraventricular hemorrhage, o death, even after the studied population was divided into groups of individuals weighing less than 1,500 grams or 1,500 grams and more. Conclusion: The detection of cytokine levels from blood spots on filter paper proved to be a viable testing method. Its advantages include easier sample collection,storage, and transportation, in addition to the low volume of blood required to perform the tests. The study findings suggested that TNF- might be used as an early marker for sepsis. The correlation between increased GM-CSF levels and hypothermia indicates the potentially harmful nature of hypothermia in preterm neonates within thefirst hours of birth, and the relevance of providing effective preventive thermal control measures. More studies are needed to confirm and clarify these correlations an underline the impact early intervention may have on cytokine expression patterns.

Allergic rhinitis with symptomatology and IgE (S-IgE+) is a classical disease with a pattern of inflammation of the upper airways well characterized by Th2 pathway regulation. However, the rhinitis with symptomatology triggered by house dust exposure and no systemic IgE (S-IgE-) is involved by an unknown IgE- independent mechanism, which is not well understood yet. The aims of this study were to investigate antibody responses to house dust mite (HDM) Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), cytokine levels, relative expression of mRNA cytokines and microRNA (miRNA) in patients and control (CT) subjects. Three groups of subjects divided in S-IgE+ (n = 32), S-IgE- (n = 19), and CT (n = 31) by clinical symptoms, skin prick test (SPT) and levels of specific IgE to Dp were analyzed. Blood samples were collected and sera were used to measure IgG1, IgG3, IgG4, and IgA specific to crude Dp allergen extract by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from subjects (S-IgE+, 15; S-IgE-, 11; CT, 10) were isolated and stimulated with mitogen (phytohemagglutinin-PHA), crude Dp allergens extract, and medium alone for control. Supernatants were collected after 4 days to evaluate the cytokine levels, and cells were harvested for RNA extraction to assess the relative expression of cytokines and miRNA by reverse transcription PCR (RT-qPCR). Specific IgE and IgG4 anti- Dp showed seropositivity rate significantly higher in S-IgE+ than S-IgE- or CT subjects. Specific IgG3 to Dp showed significant higher levels in S-IgE+ than CT group. Levels of Dpspecific IgA and IgG1 showed no significant difference among the groups. The cytokine IL-5 was significantly higher in cell culture supernatants after Dp stimulation from S-IgE+ patients than S-IgE- or CT subjects. However, levels of IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 and IFN-γ were not significantly different among groups, as well as the cytokine levels in sera, including IL-5. Relative expression of IL-5, IFN-γ and TGF-β in PBMCs stimulated with Dp allergens showed significant values, with higher levels of IL-5 in S-IgE+ compared to S-IgEand CT groups; IFN-γ showed higher expression in S-IgE+ when compared to CT; and TGF-β presented higher expression in S-IgE- group. miRNAs relative expression was similar among groups. In the overall, our data suggested that S-IgE- patients showed serum antibodies, cytokines in the supernatant of the cell culture stimulated with Dp allergens and in sera more similar to CT individuals than to S-IgE+, although the symptoms in S-IgE- patients were triggered after house dust exposure like S-IgE+ patients, demonstrating that the mechanism of the antibody and cytokine responses are quite different between S-IgE- and SIgE+ groups. In addition, the relative expression of IL-5, IFN-γ and TGF-β was quite different of seen in cytokine levels measure, explained by the difference between the relative expression of gene and its protein. For miRNA in PBMCs stimulated with Dp allergens were not significantly different among the three groups, and a reason could be the small sample tested. Our findings showed that antibody, cytokine and miRNAs profiles analyzed in this study were not able do discriminate these groups, additional studies will be needed for elucidation of the real immunopathogenic mechanisms of this complex S-IgE- group of patients. A rinite alérgica é uma doença com padrão de resposta clássico que apresenta sintomatologia e IgE (S-IgE+), caracterizada por inflamação das vias aéreas superiores regulada pelo perfil Th2. Contudo, existe outro quadro de rinite que também apresenta sintomatologia desencadeada por exposição a poeira domiciliar, mas sem a presença de IgE (S-IgE-) sistêmica, demonstrando um mecanismo independente de IgE envolvido e ainda não compreendido. Os objetivos do presente trabalho foram investigar a resposta anticórpica ao ácaro da poeira domiciliar Dermatophagoides pteronyssinus (Dp), os níveis de citocinas e a expressão relativa do RNAm para citocinas e microRNAs (miRNAs) nos pacientes e indivíduos controle (CT). Os indivíduos foram divididos em três grupos S-IgE+ (n = 32), SIgE- (n = 19) e CT (n = 31) por meio dos sintomas clínicos, teste cutâneo de puntura (TCP) e níveis séricos de IgE específica a Dp. Amostras de sangue foram coletadas e o soro utilizado para mensurar IgG1, IgG3, IgG4 e IgA específicas ao extrato alergênico bruto de Dp pelo imunoensaio enzimático (ELISA). Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) dos grupos (S-IgE+, 15; S-IgE-, 11; CT, 10) foram isoladas e estimuladas com mitógeno (fitohemaglutinina PHA), extrato bruto de Dp e somente com meio para controle. O sobrenadante foi coletado depois de 4 dias para avaliar os níveis de citocinas, e as células foram utilizadas para extração de RNA para a avaliação da expressão relativa das citocinas e miRNAs por reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR). Os níveis de IgE e IgG4 específicos a Dp apresentaram soropositividade significantemente maiores nos pacientes do grupo S-IgE+ comparados aos grupos S-IgE- e CT. A dosagem de IgG3 específica a Dp mostrou níveis significantemente maiores no grupo S-IgE+ somente quando comparada ao grupo CT. Níveis de IgA e IgG1 não apresentaram diferença significante entre os grupos. Se por um lado os níveis de IL-5 no sobrenadante de cultura foram maiores no grupo S-IgE+ e com diferença estatística quando comparados aos outros grupos, por outro lado não foi observada diferença significante nos níveis de IL-4, IL-10, IL-13, IL-17 e IFN-γ entre os grupos, assim como os níveis das citocinas dosadas no soro incluindo a IL-5. A expressão relativa de IL-5, IFN-γ, TGF-β e miRNA em PBMCs estimuladas com alérgenos de Dp mostrou valores significantes, com valores de IL-5 aumentados no grupo S-IgE+ quando comparados aos valores dos grupos S-IgE- e CT; IFN-γ apresentou valor maior e significante no grupo S-IgE+ apenas quando comparado ao grupo CT e TGF-β foi mais expressivo no grupo S-IgE-. A expressão relativa dos miRNAs (miR-21 e miR-126) não mostrou diferença significante. Nossos dados sugerem que houve maior similaridade nos níveis de anticorpos e citocinas no sobrenadante de cultura de células estimuladas com Dp e no soro entre os pacientes S-IgE- e o grupo CT do que com o grupo S-IgE+, apesar dos sintomas nos pacientes S-IgE- serem desencadeados depois da exposição a poeira domiciliar assim como nos pacientes S-IgE+, demonstrando que o mecanismo da resposta por anticorpos e citocinas é diferente entre os grupos S-IgE- e S-IgE+. Além disso, a expressão relativa das citocinas mostrou diferenças o que foi parcialmente visto na dosagem das citocinas, o que pode ser explicado pela diferença que ocorre entre a tradução e transcrição das proteínas. Não foi observada diferença na expressão relativa dos miRNAs, sendo que uma possível causa seria devido ao reduzido número de amostras testadas. Desta forma, nossos dados mostraram que os perfis de anticorpos, citocinas e miRNAs analisados neste estudo não foram capazes de discriminar estes grupos, assim estudos adicionais serão necessários para elucidar o real mecanismo imunopatogênico deste complexo grupo de pacientes do grupo S-IgE-. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

A pneumonia pneumocócica é uma importante causa de mortalidade no mundo. A resposta inflamatória contra as bactérias é necessária para controlar a infecção, mas a permanência e ativação excessiva dos neutrófilos nos pulmões podem resultar em dano tecidual significativo. Os inibidores de fosfodiesterase 4 (PDE4), tais como o rolipram, reduzem a inflamação de forma eficiente. O presente estudo analisou o impacto do tratamento com rolipram em um modelo murino de pneumonia pneumocócica. Camundongos Balb/C foram infectados por via intranasal com 103-106 CFU de Streptococcus pneumoniae e a cinética da inflamação desencadeada foi avaliada. Camundongos infectados com 104-105 CFU foram então tratados com o rolipram em um esquema profilático ou terapêutico, em combinação ou não com o antibiótico ceftriaxona. Foram realizadas contagens das células inflamatórias e bactérias recuperadas e ensaios ex vivo de fagocitose. O tratamento com rolipram durante a infecção por S. pneumoniae levou à diminuição do recrutamento de neutrófilos nos pulmões e vias respiratórias e reduziu a lesão pulmonar. A administração profilática de ROL também diminuiu os níveis das citocinas nas vias aéreas. Apesar da modulação da inflamação por ROL melhorar a pneumonia, a carga bacteriana nos pulmões não foi reduzida. Por outro lado, a antibióticoterapia reduziu o número de bactérias sem diminuir a infiltração de neutrófilos, os níveis das citocinas e a lesão pulmonar. O tratamento combinado de rolipram e ceftriaxona foi mais eficiente na redução da inflamação, aumentando a expressão da proteína pró-resolutiva anexina A1, e reduzindo o número de bactérias através do aumento da fagocitose. Ainda, camundongos deficientes em anexina A1 são mais susceptíveis à infecção pneumocócica. Estes dados mostram que os efeitos imunomoduladores dos inibidores de PDE4 são úteis durante pneumonia pneumocócica grave e sugerem o seu potencial como terapia adjuvante nesta infecção. Pneumococcal pneumonia is a leading cause of mortality worldwide. The inflammatory response to bacteria is necessary to control infection but the permanence and excessive activation of neutrophils in the lungs may cause tissue damage. Phosphodiesterase-4 (PDE4) inhibitors, such as rolipram (ROL), effectively reduce inflammation. This study examined the impact of rolipram in a model pneumococcal pneumonia in mice. Balb/C mice were infected intranasally with 103-106CFU of Streptococcus pneumoniae and the kinects of inflammation were evaluated. 104-104 CFU mice were then treated with ROL in a prophylactic or therapeutic schedule in combination or not with the antibiotic ceftriaxone. Inflammation and bacteria counts were assessed and ex vivo phagocytosis assays were performed. Rolipram treatment during S. pneumoniae infection decreased neutrophil recruitment into the lungs and airways and reduced lung injury. Prophylactic ROL treatment also decreased cytokine levels in the airways. Although modulation of inflammation by ROL ameliorated pneumonia, bacteria burden was not reduced. On the other hand, antibiotic therapy reduced bacteria without reducing neutrophil infiltration, cytokine levels and lung injury. Combined ROL and ceftriaxone treatment was more efficient in reducing inflammation, by increasing pro-resolving protein Annexin A1 expression, and reducing bacteria burden, by enhancing phagocytosis. Furthermore, annexin A1 deficient mice are more susceptible to pneumococcal pneumonia. These data show that immunomodulatory effects of PDE4 inhibitors are useful during severe pneumococcal pneumonia and suggest their potential benefit as adjunctive therapy during infectious diseases

Introducao: A sepse e uma importante complicacao infecciosa na area da saude, tanto para sua incidencia e severidade, bem como para o seu potencial de progressao a morte. Estrategias futuras de tratamento podem se concentrar no equilibrio entre as acoes imunes e antiinflamatorias em tempo habil. Objetivo: Avaliar a influencia da administracao de lipolissacarideo (LPS) no periodo neonatal sobre a disfuncao cerebral em ratos submetidos a sepse polimicrobiana severa na idade adulta. Metodos: Ratos Wistar machos com idade de 14 dias foram tratados com LPS (100 ¿Êg/kg) ou salina, intraperitoneal. Completando 60 dias de idade, foram submetidos ao modelo de sepse por ligacao e perfuracao cecal (CLP). Os grupos foram divididos em salina+sham, LPS+sham, salina+CLP e LPS+CLP, 24 horas apos CLP, foi avaliado no liquido cefalorraquidiano (LCR), as citocinas (TNF-¿¿, IL-1¿À e IL-6) os niveis de nitrito e nitrato (N/N). No hipocampo e cortex pre-frontal foi avaliado a mieloperoxidase (MPO), dano oxidativo em lipidios (TBARS), proteinas carboniladas,grupamentos sulfidrilas (SH), atividade da catalase (CAT), superoxido dismutase (SOD) e a permeabilidade da barreira hematoencefalica (BHE). Resultados: Demonstrou-se que os niveis de citocinas e de N/N estao aumentados no grupo CLP e o LPS foi eficaz em reduzir somente os niveis de citocinas. Na MPO e grupamentos SH, nao foram observados resultados significativos. No dano em lipidios e proteinas encontrou-se no pre-frontal um aumento dos niveis no grupo CLP, em ratos pre-imunizados com LPS houve uma diminuicao desses niveis. Na atividade das enzimas antioxidantes, houve uma diminuicao dos niveis somente na CAT, no hipocampo, no grupo imunizado. Para a quebra da BHE, houve um aumento nos grupos CLP, o grupo imunizado diminuiu seus niveis, no pre-frontal. Conclusao: O pre-tratamento com LPS preveniu o dano de marcadores ligados a inflamacao e ao estresse oxidativo, e diminuiu a permeabilidade da BHE apos a sepse na idade adulta. Introduction: The sepsis is an important infectious complication in the health area, both for its incidence and severity, and for its potential of progression to death. Future strategies of treatment can concentrate on the balance among the immune and anti-inflammatory actions in time. Aim: Evaluate the influence of the administration of lipopolysaccharide (LPS) in the neonatal period over the brain dysfunction in rats submitted to severe polymicrobial sepsis at adult age. Methods: Male Wistar rats at 14 days of age treated with LPS (100 ìg/kg) or saline, intraperitoneal. At 60 days of age, the rats were submitted to the sepsis model by cecal ligation puncture (CLP). The groups were divided in saline+sham, LPS+sham, saline+CLP and LPS+CLP, 24 hours after CLP, the cerebrospinal fluid (CSF) was evaluated, besides the cytokines (TNF-á, IL-1â e IL-6) and the levels of nitrite and nitrate (N/N). On hippocampus and prefrontal cortex was evaluated the myeloperoxidase (MPO), oxidative damage to lipids (TBARS), carbonyl proteins, sulfhydryl groups (SH), catalase activity (CAT), superoxide dismutase (SOD) and the permeability of the blood-brain barrier (BBB). Results: We have demonstrated that the cytokine levels and N/N are increasing in the group CLP and LPS was effective in reduce only the cytokine levels. In MPO and SH groups, we have not observed significant results. In the damage to lipids and proteins, we have found in the prefrontal an increase of the levels in the group CLP and in rats preimmunized with LPS there was a decrease of these levels. In the activity of the antioxidant enzymes there was a reversal of the levels only in CAT, in the hippocampus, in the immunized group. For the breaking of BHE, there was an increase in the groups CLP, the immunized group decreased its levels, in the prefrontal. Conclusion: The pretreatment with LPS prevented the damage of markers connected to inflammation and oxidative stress, and decreased the permeability of BBB after the sepsis at adult age.

Introdução: A compreensão do envolvimento do sistema imune na Deficiência de Fenilalanina Hidroxilase (PAH) e na Deficiência de Piruvoil Tetraidropterina Sintase (PTPS), doenças genéticas que cursam com hiperfenilalaninemia (HPA) e cujos pacientes podem ser beneficiados pela administração de tetraidrobiopterina (BH4), é de fundamental importância haja vista que o estado inflamatório parece influenciar a síntese e a oxidação do cofator BH4. Ambas são consideradas erros inatos do metabolismo que cursam com déficit mental quando o diagnóstico e tratamento não são estabelecidos precocemente. A Deficiência de PAH, apesar de rara, é muito relevante para o Sistema Único de Saúde visto que pertence ao grupo de doenças incluídas no Programa Nacional de Triagem Neonatal. Objetivo: Avaliar a relação entre BH4, fenilalanina (Phe), citocinas e marcadores de estresse oxidativo em uma amostra de pacientes brasileiros com Deficiência de PAH submetidos ao teste de responsividade ao BH4 e em pacientes com Deficiência de PTPS. Métodos: Estudo transversal, controlado, com amostragem por conveniência. Foram incluídas amostras de plasma de 17 pacientes com Deficiência de PAH coletadas antes e 27 horas após a administração de L-Phe (100mg/kg) e após 27 horas da administração combinada de L-Phe+BH4 (100mg/kg de L-Phe e 20mg/kg de BH4), para medida dos níveis de Phe, citocinas e marcadores de estresse oxidativo. Nos pacientes com Deficiência de PTPS (n= 2), foram realizadas coletas antes e após 4 horas da administração de BH4 para análise dos mesmos parâmetros. Todas as amostras foram pareadas com indivíduos hígidos de acordo com sexo e idade. Para determinação das citocinas foi utilizado o kit Human Cytokine Magnetic 10-Plex Panel - InvitrogenTM (Luminex®), o qual disponibiliza as dosagens de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8, IL6, TNF-α, IFN-γ e GM-CSF) e anti-inflamatórias (IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10). Em relação aos marcadores de estresse oxidativo, foram analisados o conteúdo de Carbonilas e Sulfidrilas, a atividade da Superóxido Dismutase (SOD) e os níveis de Glutationa (GSH). Resultados: Os pacientes com Deficiência de PAH (mediana (IQ) de Phe basal= 236,0 (140-407,10)µmol/L) apresentaram níveis elevados de 4/6 citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α) assim como níveis aumentados de GSH em relação aos controles. Os pacientes responsivos e não responsivos ao BH4 não diferiram no período basal, após sobrecarga isolada de L-Phe e após sobrecarga combinada de L-Phe+BH4 em relação aos parâmetros analisados. Também, não foi observada diferença entre os pacientes com Deficiência de PAH Clássica e Leve na coleta basal. Aproximadamente 30% dos pacientes apresentavam excelente controle metabólico. Os pacientes com Deficiência de PTPS não apresentavam HPA e não diferiram dos controles em relação aos níveis de citocinas. Apesar de moderadas, obtivemos correlações negativas significativas entre os níveis de algumas citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-8 e TNF-α) com os níveis de Phe. Conclusões: Os nossos dados sugerem que as citocinas são marcadores sensíveis do efeito biológico da HPA. A elevação dos níveis destas na Deficiência de PAH sugere um perfil inflamatório, mesmo entre pacientes considerados com bom controle metabólico e sem evidência de estresse oxidativo. Esta característica pode ser decorrente do aumento crônico dos níveis de Phe, talvez associado à deficiência relativa de BH4. Já os níveis de Phe encontrados nos pacientes com Deficiência de PTPS estavam dentro dos valores considerados normais para a população em geral, não sendo observada elevação dos níveis de citocinas pró-inflamatórias e, por consequência, inflamação. Em relação à correlação negativa encontrada, o presente estudo sugere que os níveis de Phe podem exercer algum efeito inibitório que resulte na diminuição da expressão de algumas citocinas. Assim, sugerimos que estudos adicionais sobre o efeito da administração crônica do BH4 em pacientes com Deficiência de PAH, tomando como desfecho os níveis de citocina, sejam realizados. Introduction: It is crucially important to understand the involvement of the immune system in the deficiencies of phenylalanine hydroxylase (PAH) and pyruvoyl tetrahydropterin synthase (PTPS), genetic diseases that present with hyperphenylalaninemia (HPA) and whose patients may benefit from the administration of tetrahydropterin (BH4), since inflammatory status may influence the synthesis and oxidation of the cofactor BH4. Both deficiencies are considered inborn errors of metabolism that cause mental deficits when diagnosis and treatment are not established early. Although being rare, PAH deficiency is extremely relevant for the Brazilian Unified Health System because it belongs to the group of diseases included in the National Neonatal Screening Program. Objective: To evaluate the relationship between BH4, phenylalanine (Phe), cytokines, and markers of oxidative stress in a sample of Brazilian patients with PAH deficiency undergoing a test of responsiveness to BH4 and of patients with PTPS deficiency. Methods: Controlled cross-sectional study with a convenience sampling strategy. We analyzed plasma samples of 17 patients with PAH deficiency collected before and 27 hours after the administration of L-Phe (100mg/kg) and 27 hours after the combined administration of L-Phe+BH4 (100mg/kg of L-Phe and 20mg/kg of BH4) to measure the levels of Phe, cytokines, and markers of oxidative stress. In patients with PTPS deficiency (n=2), samples were collected before and 4 hours after the administration of BH4 for the analysis of the same parameters. All samples were paired with healthy individuals according to sex and age. Cytokine levels were determined using the Human Cytokine Magnetic 10- Plex Panel kit (InvitrogenTM) for the Luminex® platform, which provides the doses of proinflammatory (interleukin 1β [IL-1β], IL-8, IL6, tumor necrosis factor α [TNF]- α, interferon γ [IFN-γ], and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor [GMCSF]) and anti-inflammatory (IL-2, IL-4, IL-5 e IL-10) cytokines. Additionally, the following markers of oxidative stress were analyzed: content of carbonyls and sulfhydryls, activity of superoxide dismutase, and levels of glutathione (GSH). Results: Patients with PAH deficiency (median [interquartile range] for baseline Phe levels=236.0 [140-407.10] µmol/L) showed increased levels for 4/6 proinflammatory cytokines (IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α), as well as increased GSH levels compared to controls. Patients who were responsive and unresponsive to BH4 did not differ at baseline, after isolated L-Phe overload, and after combined overload of L-Phe+BH4 in terms of the parameters analyzed in this study. Similarly, no difference was observed between patients with classical and mild PAH deficiency at baseline. Nearly 30% of patients had excellent metabolic control. Patients with PTPS deficiency did not present with HPA and did not differ from controls in terms of cytokine levels. Although moderate, significant negative correlations were found between the levels of some proinflammatory cytokines (IL1β, IL-8, and TNF-α) and Phe levels. Conclusions: Our data suggest that cytokines are extremely sensitive biomarkers of the biological effect of HPA. The increase in cytokine levels in PAH deficiency suggests an inflammatory profile even among patients considered as having good metabolic control and showing no evidence of oxidative stress. This characteristic may result from the chronic increase in Phe levels, which may be associated with relative BH4 deficiency. On the other hand, Phe levels found in patients with PTPS deficiency were within values considered normal for the general population; additionally, no increase in proinflammatory cytokine levels was observed, and therefore no inflammation was observed as well. With regard to the negative correlation found, the present study suggests that PhE levels may exert some inhibitory effect that results in the decreased expression of some cytokines. Therefore, we suggest that additional studies on the effect of the chronic administration of BH4 in patients with PAH deficiency should be conducted, considering cytokine levels as outcomes.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Despite advances in antibiotic therapy, bacterial meningitis (BM) remains with high mortality and morbidity rates in worldwide. One important mechanism associated to sequels during disease is the intense inflammatory response which promotes an oxidative burst and release of reactive oxygen species, consequently leading to cell death. Activation of DNA repair enzymes during oxidative stress has been demonstrated in several neurological disorders. APE1/Ref-1 is a multifunctional protein involved in DNA repair and plays a redox function on transcription factors such as NFkB and AP-1.The aim of this study was assess the role of APE1/Ref-1 on inflammatory response and the possibility of its modulation to reduce the sequels of the disease. Firstly it was performed an assay to measure cytokine in cerebrospinal fluid of patients with BM due to Streptococcus pneumoniae and Neisseriae meningitides. Further, a cellular model of inflammation was used to observe the effect of the inhibition of the endonuclease and redox activity of APE1/Ref-1 on cytokine levels. Additionally, APE1/Ref-1 expression in cortex and hippocampus of rat with MB after vitamin B6 treatment was evaluated. Altogether, results showed a similar profile of cytokines in the cerebrospinal fluid of patients from both pathogens, although IFNy showed higher expression in patients with BM caused by S. pneumoniae. On the other hand, inhibitors of APE1/Ref-1 reduced cytokine levels, mainly TNF-α. Reduction of oxidative stress markers was also observed after introduction of inhibitors in the LPS-stimulated cell. In the animal model, BM increased the expression of the protein APE1/Ref-1, while vitamin B6 promoted reduction. Thereby, this data rise important factors to be considered in pathogenesis of BM, e.g., IFNy can be used as prognostic factor during corticosteroid therapy, APE1/Ref-1 can be an important target to modulate the level of inflammation and VIII oxidative stress, and vitamin B6 seems modulates several proteins related to cell death. So, this study highlights a new understanding on the role of APE1/Ref-1 on the inflammation and the oxidative stress during inflammation condition A meningite bacteriana (MB) é uma doença infecciosa que permanece com altas taxas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, principalmente em países subdesenvolvidos, apesar dos avanços na antibioticoterapia. Um dos principais mecanismos associados às sequelas durante a MB é a elevada resposta inflamatória, que promove uma exacerbada quantidade de espécies reativas de oxigênio (ERO) levando às células a apoptose ou necrose. A ativação de enzimas de reparo de DNA durante o estresse oxidativo tem sido demonstrada nas mais diversas desordens. Uma importante enzima envolvida neste processo é a endonuclease apurínica/apirimidinica1/fator redox-1 (APE1/Ref-1). Ela é uma proteína multifuncional envolvida no reparo de DNA e na redução de fatores envolvidos com a resposta inflamatória, tais como o fator nuclear kappa B (NFkB) e proteína ativadora 1 (AP-1). Este estudo teve como objetivo identificar o envolvimento de APE1/Ref-1 na resposta inflamatória visando a possibilidade de sua utilização como alvo terapêutico na redução de sequelas durante a MB. Para isto, inicialmente foi realizado uma análise no perfil de expressão de citocinas em líquor de pacientes com meningite causada por Streptococcus pneumoniae e Neisseriae meningitidis visando selecionar moduladores inflamatórios de interesse para ensaios em cultura de célula subsequentes. Em seguida, utilizando um modelo celular de indução com LPS foi avaliado o efeito da inibição da atividade de reparo e redox de APE1 sobre a expressão de citocinas inflamatórias. Por fim, foi observada a expressão de APE1 no córtex (CX) e hipocampo (HC) de ratos com MB frente a uma terapia adjuvante com vitamina B6. Nossos resultados mostraram um perfil de moduladores inflamatórios muito semelhante no líquor dos pacientes com MB causada pelos patógenos estudados, embora interferon gama (IFNy) tenha sido VI significativamente mais expresso em pacientes com S. pneumoniae do que N. meningitidis. Quanto ao uso dos inibidores das funções, redox e de reparo, de APE1/Ref-1 no modelo in vitro, houve redução significativa na expressão de algumas citocinas, principalmente o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α). Além disso, os inibidores demonstraram uma redução nos níveis de ERO nas células estimuladas com LPS. No modelo animal, a expressão protéica de APE1/Ref-1, no CX e HC dos ratos, foi modulada após introdução da vitamina B6. Portanto, esses dados fornecem um novo olhar para a fisiopatologia da MB, em que citocinas como IFNy podem ser usadas em um diagnóstico diferencial entre meningites causadas por S. pneumoniae e N. meningitidis. A proteína de reparo de DNA, APE1/Ref-1, parece ser um alvo potencial na modulação da resposta inflamatória e do estresse oxidativo, bem como a terapia adjuvante com vitamina B6 mostra ter um papel sobre a expressão de APE1/Ref-1. Consequentemente, o conhecimento obtido neste estudo pode ser importante na melhoria do prognóstico da MB, além de contribuir para entender a associação entre o reparo de DNA e inflamação 2020-01-01

OBJETIVO: Avaliar parâmetros clínicos, laboratoriais e citocinas séricas em 55 neonatos que desenvolveram sepse precoce. MÉTODOS: Avaliamos os parâmetros clínicos dos neonatos relacionados com sepse precoce. No dia do diagnóstico de sepse e 48 horas após, foram realizados o leucograma diferencial e a dosagem de proteína C reativa e glicemia. As citocinas IL-1β, IL-10, IL-6 e TNF-α foram determinadas no sangue do cordão, no dia do diagnóstico de sepse, 48 e 96 horas após o início do tratamento. RESULTADOS: O tempo de internação dos neonatos foi inversamente proporcional ao peso no nascimento. Os parâmetros clínicos foram variados, especialmente a temperatura corpórea. Alterações de glicemia foram frequentes, principalmente a hipoglicemia. A alteração de hemograma mais prevalente foi a leucopenia, devido principalmente à neutropenia. Os níveis de proteína C reativa se mostraram correlacionados com o índice neutrofílico. Observamos uma correlação positiva entre os níveis de TNF-α e IL-10 entre o curso da sepse precoce e os níveis observados no cordão umbilical. CONCLUSÕES: As alterações clínicas e laboratoriais entre os neonatos com sepse são variadas. Neonatos que apresentam elevações no padrão de citocinas no momento do parto permanecem com seus níveis elevados durante o processo infeccioso. OBJECTIVE: To assess clinical and laboratory parameters and serum cytokine levels in 55 neonates who developed early-onset sepsis. METHODS: Clinical parameters associated with early-onset neonatal sepsis were assessed. White blood cell differential and serum C-reactive protein and glucose levels were measured upon diagnosis of sepsis and 48 hours later. IL-1β, IL-10, IL-6, and TNF-α levels were measured in cord blood samples obtained on the day of diagnosis and from samples collected 48 and 96 hours after treatment onset. RESULTS: Among newborns with early-onset sepsis, the length of hospital stay was inversely correlated with birth weight. Clinical parameters varied widely, especially body temperature. Blood glucose changes - particularly hypoglycemia - were common. Leukopenia, usually due to neutropenia, was the most prevalent change in blood cell count. C-reactive protein levels correlated with the immature-to-total neutrophil ratio. Serum TNF-α and IL-10 levels measured early in the course of sepsis were positively correlated with those detected in cord blood. CONCLUSIONS: Clinical and laboratory parameters varied widely among neonates with sepsis in this sample. In neonates who presented with increased cytokine levels at birth, this abnormality persisted throughout the infectious process.

Introdução: Infecção pelo citomegalovírus (HCMV) e níveis de citocinas têm sido considerados fatores importantes que influenciam o prognóstico do transplante alogênico de células tronco hematopoiéticas (alo-TCTH). A glicoproteína B (gB) do HCMV tem sido relacionada com promoção de infecção viral e indução de resposta imune em pacientes com infecção pelo HCMV. Entretanto, os componentes imunológicos associados com controle de infecção causada pelo HCMV não estão completamente esclarecidos. Objetivo: O objetivo do estudo foi determinar a prevalência dos genótipos da gB em pacientes submetidos ao alo-TCTH e investigar a possível relação entre os genótipos e os níveis das citocinas (IL-1, IL-6, IL-10, IFN- e TNF-) nas amostras de saliva e de sangue destes pacientes. Além de investigar o impacto do nível destas citocinas e da carga viral nas amostras de saliva e de sangue, coletadas sete dias antes e 21 dias após o alo-TCTH, na sobrevida dos pacientes. Materiais e Métodos: Amostras de saliva e de sangue de 63 pacientes submetidos ao alo-TCTH acompanhados semanalmente durante os 100 primeiros dias do transplante foram avaliadas. A genotipagem da gB do HCMV foi realizada através de multiplex-nested-PCR. A quantidade de HCMV nas amostras de saliva e de sangue foideterminada por PCR em tempo real. Os níveis de citocinas foram analisados por ELISA. Resultados: Trinta e seis das 63 amostras de saliva e 52 das 63 amostras de sangue foram negativas para os genótipos da gB do HCMV. O genótipo tipo 2 da gB foi o mais prevalente na saliva (19/36) e no sangue (33/52). Pacientes com gB2 na saliva apresentaram níveis menores de IL-10, em relação aos pacientes sem este genótipo (p=0.023). Níveis menores de IFN- (p=0.040) e de IL-1 (p=0.050) no sangue também foram observados em pacientes que apresentaram o genótipo 4 da gB em comparação com os pacientes que não apresentaram este genótipo. Gênero do paciente, combinação de gênero do paciente com o do doador, fonte de células tronco hematopoiéticas e ocorrência de aDECH influenciaram a sobrevida dos pacientes após o alo-TCTH. Altos níveis de IL-6 na saliva e baixos níveis de IFN- no sangue sete dias antes do alo-TCTH foram associados com aumento do risco de morte. Altos níveis de IL-6 no sangue e alto nível de HCMV na saliva 21 dias após o alo-TCTH foram associados com a redução da sobrevida dos pacientes. Conclusão: O genótipo gB2 foi o mais prevalente na saliva e no sangue de pacientes submetidos ao alo-TCTH. Apesar da associação entre níveis de citocinas no sangue e na saliva em pacientes com diferentes genótipos da gB e também com a sobrevida, os genótipos do HCMV não apresentaram impacto na evolução dos pacientes. O aumento do nível de IL-6 na saliva e a redução do nível de IFN- no sangue estão associados com o pior índice de sobrevida. Esses dados sugerem uma potencial função desses marcadores em determinar a sobrevida de pacientes submetidos ao alo-TCTH. Futuros estudos são necessários para investigar a função da IL-6 salivar como um potencial biomarcador de sobrevida para os pacientes submetidos ao alo-TCTH e sua possível associação com a carga de HCMV na saliva. Introduction: Factors as human cytomegalovirus (HCMV) load, recipient/donor histocompatibility, patient/donor gender, recipient age, graft-versus-host disease (GVHD) and cytokine levels have been considered important prognostic parameters in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT). Glycoprotein B (gB) protein has proved to be important in HCMV infectivity and in eliciting a immune response in patients with HCMV infection. The immunological components associated with HCMV control are not completely understood. Objective: The aims of the present study were to assess the prevalence of the gB genotypes in patients who underwent allo-HSCT and to investigate the possible relationship between these genotypes and IL-1, IL-6, IL-10, IFN- and TNF- levels in saliva and blood samples. In addition, we evaluated the impact of the gB genotype, cytokines levels and other risk factors on patients survival. Thus, to investigate the impact of IL-1, IL-6, IL-10, IFN- and TNF- levels, HCMV load in saliva and blood in recipients survival Methods: Saliva and blood samples were sampled weekly in 63 allo-HSCT patients until 100 days after transplant. HCMV gB genotyping was carried out by multiplex nested PCR. The cytokines levels were assessed by ELISA and HCMV load was determined by real time PCR assay. Results: Thirty six of 63 saliva samples and 52 of 63 blood samples were negative to gB HCMV genotype. gB2 was the most common genotype in saliva (19/36) and blood (33/52). Patients with gB2 in saliva showed lower IL-10 salivary levels in comparison with patients without this genotype (p=0.023). Reduced blood levels of IFN- (p=0.040) and IL-1 (p=0.050) were also found in recipients presenting the HCMV gB4 genotype comparing patients without it. Recipient gender, combination patient/donor gender, stem cell source and aGVHD presented impact in allo-HSCT survival. High levels of IL-6 in saliva and low levels of IFN- in blood seven days before allo-HSCT were associated with increased risk of death. High levels of IL-6 in blood and high HCMV load in saliva 21 days after allo-HSCT decrease the recipient survival. Conclusions: The gB2 genotype is the most prevalent gB HCMV genotype in saliva and blood of patients who underwent allo-HSCT. Despite an association between blood and saliva cytokine levels in patients with different gB genotypes and also with survival, HCMV gB genotypes have no impact on patient outcome. The increased IL-6 level and HCMV load in saliva, the increased IL-6 level and decreased IFN- level in blood are associated with a worst survival rate. These findings suggest a potential function for these markers in determination of allo-HSCT survival. Further studies are necessary to investigate the function of salivary IL-6 as a potential biomarker of allo-HSCT survival and its possible association with salivary HCMV load.

Objetivos: Comparar os níveis séricos de citocinas entre voluntários saudáveis e em pacientes bipolares tipo 1 em mania, depressão e eutimia. Comparar os níveis séricos de quimiocinas entre voluntários saudáveis e pacientes bipolares tipo 1 em eutimia. Metodologia: Sessenta e um pacientes bipolares foram recrutados para a avaliação dos níveis séricos de citocinas. Desses, 24 estavam eutímicos, e 23 e 24 estavam em mania e depressão, respectivamente. Este grupo foi comparado a outro, composto por 25 voluntários saudáveis. As seguintes citocinas foram exainadas através de citometria de fluxo: TNF-alfa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-gama e comparadas entre os grupos. Além dessa análise, 30 pacientes bipolares tipo 1 foram comparados a igual número de voluntários saudáveis para estudar os níveis séricos das seguintes quimiocinas: CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11 e CCL24, dosadas através de ELISA sandwich. Resultados: Duarnte a mania, as citocinas pró-inflamatórias IL-2, IL-4 e IL-6 estavam elevadas nos pacientes com TB em comparação com o grupo de voluntários saudáveis. Já os pacientes em episódio depressivo, apresentavam somente elevação da IL-6. Não houve modificação dos níveis de citocinas nos pacientes eutímicos, exceto pelo aumento da IL-4. Quanto as quimiocinas, enquanto os níveis séricos de CXCL10 estavam elevados nos pacientes bipolares, os níveis de CCL24 estavam diminuídos. Objectives: Compare serum levels of cytokines between healthy volunteers and patients with bipolar disorder type 1 in mania, depression and euthymia. Compare serum levels of chemokines between healthy volunteers and bipolar patients in euthymia. Methods: Sixty-one bipolar patients were recruited for assessment of serum cytokine levels. Of these, 14 were in euthymic state, 23 and 24 were in manic and depressive episodes, respectively. A healthy comparison group included 25 healthy volunteers. Cytokines involved in Th1/Th2 balance, such as TNF- , IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN- , were examined by flow cytometry. In addition, serum chemokine levels of 30 euthymic patients with BD type I and 30 healthy volunteers were investigated and compared. The chemokines assessed were CCL2, CCL3, CCL8, CCL 9, CCL10, CCL11, and CCL24. Results: During mania, proinflammatory cytokines, IL-2, IL-4 and IL-6, were increased in comparison with healthy subjects. Patients in depressive episode showed only increased IL-6 levels. There were no significant differences in cytokine levels between patients in remission and healthy subjects, except for IL-4. Regarding chemokines, patients with BD showed significant differences in chemokine levels when compared with healthy subjects. While serum levels of CXCL10 were increased, CCL24 levels were lower in bipolar patients when compared with controls. There was no statistical difference in the serum levels of CCL2, CCL3, CCL24, CXCL9, and CXCL11 between patients and controls.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T20:51:48Z : No. of bitstreams: 1 gryninger_g_me_botfm.pdf: 272447 bytes, checksum: 5ed6892f68f886811597fca3fd900973 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Universidade Estadual Paulista (UNESP) O vírus da hepatite C é uma das principais causas de doença hepática no mundo inteiro. O estudo histopatológico é de grande importância no prognóstico e indicação de tratamento. A coinfecção com o vírus da hepatite B oculta pode agravar a lesão hepática e diminuir a resposta ao tratamento. As citocinas IL-2, INF, TNF- induzem lesão hepática e fibrose. A IL-10 apresenta atividade antiinflamatória e o TGF- induz o desenvolvimento e depósito de matriz extracelular causando fibrose. Este estudo avaliou, em pacientes com HCC, a presença da hepatite B oculta, a dosagem das citocinas IL-2, INF, TNF , TGF e IL-10, correlacionando com o estágio de fibrose em pacientes tratados e não tratados com interferon, comparando também com indivíduos saudáveis. Foram estudados 55 pacientes com HCC crônica, atendidos na Faculdade de Medicina de Botucatu, excluindo-se pacientes imunossuprimidos e gestantes. O grupo controle foi constituído de 20 indivíduos doadores de sangue. O vírus da hepatite B oculto foi pesquisado por de PCR in house, segundo técnica de Kaneno, com limite de detecção menor que 100 cópias/ml. A dosagem de citocinas foi determinada por método de Elisa. A avaliação da fibrose hepática seguiu aquela proposta pela Sociedade Brasileira de Patologia. Os resultados mostraram predominância do gênero masculino, adulto jovem, 36,4% foram usuários de drogas endovenosas e 41,8% haviam sido hemotransfundidos. Nenhum paciente apresentou coinfecção pelo vírus da hepatite B oculto. Na biópsia hepática predominou fibrose leve ou ausência de fibrose (47,2%). As citocinas analisadas não discriminaram o grau de fibrose nos indivíduos com HCC crônica, mesmo quando separados em pacientes que foram submetidos ao tratamento e pacientes que não receberam o tratamento. Não houve também discriminação das citocinas... The Hepatitis C virus is one of the major causes of hepatic diseases worldwide. Histopathological analyses play a leading role in determining disease outcome and treatment. Co-infection with occult Hepatitis B can aggravate liver injury and diminish treatment response. Cytokines such as IL-2, INF and TNF- induce liver injury and fibrosis. IL-10 has an antiinflamatory action and TGF- induces extracellular matrix development and deposition causing fibrosis. In this study, the presence of occult Hepatitis B and the expression of IL-2, INF, TNF , TGF and IL-10 were assessed in HCC patients and correlated with fibrosis stage in patients treated and non-treated with interferon, as well as healthy individuals. A total of 55 patients with chronic HCC seen at Botucatu Medical School were included. Immunosuppressed or pregnant patients were excluded. The control group consisted of 20 blood donors. The occult Hepatitis B virus was detected by in-house PCR according to the technique of Kaneno with a detection limit < 100 clones/ml. Cytokine levels were determined by the Elisa method. Hepatic fibrosis was assessed as proposed by the Brazilian Society of Pathology. The results showed a predominance of male young adults of whom 36.4% had used endovenous drugs and 41.8% had been hemotransfused. No patient showed occult Hepatitis B co-infection. Hepatic biopsy revealed that fibrosis was either absent or mild in most cases (47.2%). The cytokines under study did not correlate with fibrosis stage in individuals with chronic HCC no matter whether they had or not received treatment. In addition, no correlations with cytokine levels were observed when VHC patients were separated into groups of individuals treated and non-treated with interferon . However, cytokine expressions were significantly increased in all cases in comparison with the control group.