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Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-05-28T22:59:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marcielli.pdf: 1731339 bytes, checksum: 974251573b5432a77b0f181ed45fb57a (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-05-29T01:00:17Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marcielli.pdf: 1731339 bytes, checksum: 974251573b5432a77b0f181ed45fb57a (MD5) Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2021-05-29T01:00:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marcielli.pdf: 1731339 bytes, checksum: 974251573b5432a77b0f181ed45fb57a (MD5) Made available in DSpace on 2021-05-29T01:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_Marcielli.pdf: 1731339 bytes, checksum: 974251573b5432a77b0f181ed45fb57a (MD5) Previous issue date: 2020-10-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES As restrições alimentares são conhecidas por atingirem indivíduos mundialmente, no Brasil tem- se que cerca de 2 % da população na idade adulta e 8% do público infantil sejam portadores de alergia ou intolerância alimentar. As patologias decorrentes de restrições alimentares como alergia, intolerância e sensibilidade a determinados alimentos, interferem na qualidade de vida dos indivíduos. Considerou-se importante verificar a presença de glúten em alimentos que se apresentam como isentos deste constituinte, em função da melhora na qualidade de vida das pessoas com alergia ou intolerância relacionadas a ele. Avaliou-se a presença de glúten em alimentos contendo chocolate/cacau em sua composição, como chocolates em barra, chocolates em pó, cacau em pó, bebidas lácteas (achocolatados) e em cervejas, considerados sem glúten na apresentação do rótulo, através de análises imunoenzimáticas e imunocromatográficas. Foram consultadas informações acerca de glúten na alimentação, diante da utilização de um questionário aberto (Anexo A), com auxílio da plataforma online de produtividade educacional G Suite (Google Forms). A seleção e análise dos produtos, embasou-se naqueles que fazem parte da ingestão alimentar alternativa, podendo estes estar presentes em diversas preparações alimentares, e eventos como festas infantis, roda de amigos, ambientes de socialização e happy-hour. Dessa forma os alimentos avaliados isentos de glúten, demonstraram em sua maioria ausência ou baixo teor de glúten dentro do padrão de 20 ppm (partes por milhão), estabelecido pelo Codex alimentarius quanto ao teor de glúten permitido em alimentos isentos de glúten, para dietas com restrição alimentar. A percepção dos consumidores revelou que além da alimentação padrão como pães, bolachas e massas, o chocolate e cerveja sem glúten são alimentos que fazem parte ou podem vir a fazer parte da ingestão alimentar diante dos respondentes ao questionário aplicado. Dietary restrictions are known to affect individuals worldwide. In Brazil, around 2% of the population in adulthood and 8% of the child population have food allergies or intolerance. Pathologies resulting from dietary restrictions, such as allergy, intolerance and sensitivity to certain foods, interfere in the quality of life of individuals. It was considered important to verify the presence of gluten in foods that are exempt from this constituent, due to the improvement in the quality of life of people with allergies or intolerance related to it. The presence of gluten in foods containing chocolate / cocoa in its composition was evaluated, such as bar chocolates, powdered chocolates, powdered cocoa, milk drinks (chocolate) and in beers, considered gluten free in the presentation of the label, through analysis immunoenzymatic and immunochromatographic. Information about gluten in the diet was consulted, using an open questionnaire (Annex A), with the help of the online educational productivity platform G Suite (Google Forms). The selection and analysis of the products was based on those that are part of the alternative food intake, which can be present in various food preparations, and events such as children's parties, a circle of friends, socializing and happy-hour environments. Thus, the foods evaluated as gluten-free, mostly demonstrated absence or low gluten content within the standard of 20 ppm (parts per million), established by Codex alimentarius regarding the gluten content allowed in gluten-free foods, for diets with food restriction. The perception of consumers revealed that in addition to standard food such as breads, biscuits and pasta, chocolate and gluten-free beer are foods that are part of or may become part of food intake in the face of respondents to the applied questionnaire.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Citrus production is one of the world’s main agricultural activities, and Brazil is its largest producer. Considering the importance of this culture and its constant growth, some diseases may significantly affect world productivity. The Tristeza disease and the citrus canker, caused by the Citrus tristeza virus (CTV) and Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc), respectively, are intensively monitored, since plant eradication is the main form of control. Thus, it is of the extreme interest to develop simple, fast, specific and low-cost analytical procedures for detecting these phytopathogens in the early stages. In this sense, this work proposed the development of electrochemical immunoassays for the determination of CTV capsid protein (CP-CTV) and trehalase (TREA) for the diagnosis of Tristeza disease and citrus canker, respectively. These sandwich-type immunoassays used screen-printed carbon electrodes and magnetic particles with biorecognition elements immobilized on their surface, which allowed the capture, separation, and pre-concentration of the analyte. The first approach was the development of a disposable microfluidic device to detect the CP-CTV protein, based on the redox reaction of hydroquinone/H2O2, that was enzymatically generated from the HRP label. The procedure presented a good linearity (r2 = 0.98), with a linear working range of 2.0 fg mL‒1 to 10.0 pg mL‒1, and a detection limit of 0.3 fg mL‒1. In the second approach, trehalase (TREA) was explored as a potential biomarker for the detection of citrus canker, employing an enzymatic and another non-enzymatic immunoassay. Thus, the enzymatic system used HRP as an electrochemical label, while the non-enzymatic immunoassay used gold nanoparticles for this same function. Comparatively, the two procedures presented good results, in which excellent linearities were obtained for the concentration ranges of 25.0 fg mL‒1 to 10.0 pg mL‒1 and 1.0 ‒ 62.5 pg mL‒1 for the enzymatic and non-enzymatic immunoassay, respectively. Besides, the detection limits for the two systems developed were similar, with values of 19.0 and 16.0 fg mL‒1. The third approach involved an immunosensor for multiplexed determination of CP-CTV and TREA proteins using a microfluidic device. In this multiplexed detection strategy, the use of the alkaline phosphatase enzyme as a label promoted good versatility and selectivity to the procedure when compared to the usual immunoassays. The linear intervals of the calibration curves for CP-CTV and TREA were 0.3 to 5.1 pg mL‒1 and 0.8 to 12.5 pg mL‒1, with detection limits of 0.1 and 0.6 pg mL‒1, respectively. Finally, the first and second approaches were applied to samples of healthy and infected plants, followed by comparison with the ELISA-based procedure, with no significant difference between the methods at the 95% confidence level, which demonstrated the applicability of the strategies. Besides, all devices developed showed good accuracy, high sensitivity, and low cost, hence being viable alternatives for the early detection of these diseases. A citricultura é uma das principais atividades agrícolas, sendo o Brasil o maior produtor de citros do mundo. Considerando a relevância desta cultura e seu constante crescimento, algumas doenças podem afetar significativamente a produtividade mundial. As doenças Tristeza dos citros e o cancro cítrico, causadas pelo Citrus tristeza virus (CTV) e Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc), respectivamente, são intensivamente monitoradas, uma vez que a erradicação das plantas é a principal forma de controle. Deste modo, é de extremo interesse o desenvolvimento de procedimentos analíticos simples, rápidos, específicos e de baixo custo para detecção desses fitopatógenos em estágios iniciais. Nesse sentido, esse trabalho propôs o desenvolvimento de imunoensaios eletroquímicos para determinação da proteína do capsídeo do CTV (CP-CTV) e trealase (TREA) para o diagnóstico da Tristeza dos citros e cancro cítrico, respectivamente. Esses imunoensaios do tipo sanduíche utilizaram eletrodos serigrafados e partículas magnéticas com elementos de biorreconhecimento imobilizados em sua superfície, que auxiliaram na captura, separação e pré-concentração do analito. A primeira abordagem foi o desenvolvimento de um dispositivo descartável microfluídico para detectar a proteína CP-CTV, baseado na reação redox da hidroquinona/H2O2, devido à presença da enzima peroxidase (HRP). O procedimento apresentou boa linearidade (r2 = 0.98), com faixa linear de trabalho de 2,0 fg mL‒1 a 10,0 pg mL‒1 e limite de detecção de 0,3 fg mL‒1. Na segunda abordagem, foi explorada a TREA como um potencial biomarcador proteico para detecção do cancro cítrico, por meio de um imunoensaio enzimático e outro não-enzimático. Assim, o sistema enzimático utilizou a HRP como marcador eletroquímico, enquanto o imunoensaio não-enzimático usou nanopartículas de ouro para essa mesma função. Comparativamente, os dois procedimentos apresentaram bons resultados, nos quais foram obtidas ótimas linearidades para as faixas de concentração de 25,0 fg mL‒1 a 10,0 pg mL‒1 e 1,0 - 62,5 pg mL‒1 para o imunoensaio enzimático e não-enzimático, respectivamente. Além disso, os limites de detecção para os dois sistemas desenvolvidos foram similares, com valores de 19,0 e 16,0 fg mL‒1. A terceira abordagem envolveu um imunossensor para determinação multiplexada das proteínas CP-CTV e TREA usando um dispositivo microfluídico. Nesta estratégia de detecção multiplexada, o uso da enzima fosfatase alcalina como marcador eletroquímico promoveu boa versatilidade ao procedimento em relação aos imunoensaios usuais. Os intervalos lineares das curvas de calibração para CP-CTV e TREA foram de 0,3 a 5,1 pg mL‒1 e 0,8 a 12,5 pg mL‒1, com limites de detecção de 0,1 pg mL‒1 e 0,6 pg mL‒1, respectivamente. Finalmente, a primeira e a segunda abordagem foram aplicadas em amostras de plantas sadias e infectadas, seguida pela comparação com o procedimento ELISA, não havendo diferença significativa entre os métodos ao nível de 95% de confiança, o que demonstrou a aplicabilidade das estratégias. Além disso, todos os dispositivos desenvolvidos apresentaram boa precisão, alta sensibilidade e baixo custo, sendo alternativas viáveis para detecção precoce dessas doenças. CAPES: Código de Financiamento 001

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) This work describes the development of electrochemical immunoassays using electrode disposable devices made from low cost materials as an alternative for detection of the biomarkers p16, GSTP1, PSA and CYFRA-21-1 for prostate cancer diagnosis. In the immunoassays developed, magnetic micro/nanoparticles were used in order to provide the capture and separation of the biomarker and the amplification of the analytical signal allowing to reach high selectivity and low limits of detection. For this propose, disposable microfluidic cell was developed and constructed containing 8 carbon-based working electrodes, an Ag|AgCl electrode as a pseudo reference electrode and a carbon electrode as an auxiliary electrode. Three different immunoassays were developed. The first work consisted in the development of an electrochemical immunoassay for the detection of the p16 biomarker. Immunoassays were performed after optimization of the parameters, such as incubation time and flow rate used in the microfluidic system. The calibration curve was prepared in calf serum with p16 concentration in the range of 1.38 to 27.7 fg mL-1. The device presented detection limit (LoD) of 0.04 fgmL-1 and sensitivity of 11.6 nA (fg/mL)-1. The second method consisted of the simultaneous detection of PSA and GSTP1 biomarkers. Peak currents obtained showed a linear response between 0.7 - 27.8 fg mL-1 for GSTP1 and 0.28-277 fg mL-1 for PSA. The sensitivities reached for GSTP1 and PSA were 22.4 nA (fg/mL)-1 for both biomarkers and the LoDs were of 0.15 fg mL-1 for GSTP1 and 0.16 fg mL-1 for the PSA. Finally, the third immunoassay consisted of the application of synthetic nanoparticles (MNPs) of Co0.25Zn0.75Fe2O4 (CoZnFeONPs) and Fe3O4 (FeONPs) used to mimic the enzyme peroxidase. The use of modified carbon work with graphene oxide (GO) and MNPs allowed the electrochemical detection of CYFRA-21-1 with LoDs of 0.30 fg mL-1 and 0.19 fg mL-1 for FeONPs and CoZnFeONPs, respectively. Finally, it was possible to test the immunosensor in serum of patients provided by the Hospital de Amor from Barretos city obtaining concordant results with ELISA method, which showed that the device is a promising choice for diagnosis of prostate cancer in relation to traditional methods as ECL and ELISA. Este trabalho descreve o desenvolvimento de imunoensaios eletroquímicos utilizando dispositivos descartáveis à base de eletrodos fabricados com materiais de baixo custo como alternativa para detecção dos biomarcadores p16, GSTP1, PSA e CYFRA-21-1 voltados para o diagnóstico de câncer de próstata. Nos imunoensaios desenvolvidos foram utilizados micro/nanopartículas magnéticas as quais proporcionaram a captura e separação dos biomarcadores e amplificação do sinal analítico, permitindo atingir alta seletividade e baixos limites de detecção. Para isso, uma célula microfluídica descartável foi desenvolvida contendo 8 eletrodos de trabalho à base de carbono, um eletrodo de Ag|AgCl como pseudo eletrodo de referência e um eletrodo de carbono como eletrodo auxiliar. Três diferentes imunoensaios foram desenvolvidos. O primeiro trabalho consistiu no desenvolvimento de um imunoensaio eletroquímico para a detecção do biomarcador p16. As imunoanálises foram realizadas após a otimização dos parâmetros, como tempo de incubação e vazão do fluxo utilizada no sistema microfluídico. A curva de calibração foi construída com solução padrão dos biomarcadores preparadas em soro de bezerro com concentração de p16 no intervalo de 1,38 a 27,7 fg mL-1. O dispositivo apresentou limite de detecção (LoD) de 0,04 fgmL-1, sensibilidade de 11,6 nA(fg/mL)-1 e coeficiente de correlação de 0,995. O segundo método consistiu na detecção simultânea dos biomarcadores PSA e GSTP1. As correntes de pico obtidas apresentaram resposta linear entre 0,7 - 27,8 fg mL-1 para GSTP1 e 0,28 - 277 fg mL-1 para o PSA. As sensibilidades alcançadas para GSTP1 e PSA foram de 22,4 nA(fg/mL)-1 para ambos biomarcadores e os LoDs foram de 0,15 fg mL-1 para o GSTP1 e 0,16 fg mL-1 para o PSA. Por fim, o terceiro imunoensaio consistiu na aplicação de nanopartículas magnéticas sintetizadas (MNPs) de Co0.25Zn0.75Fe2O4 (CoZnFeONPs) e de Fe3O4 (FeONPs) que foram utilizadas para mimetizar a enzima peroxidase. O uso de eletrodos de trabalho de carbono modificado com óxido de grafeno (GO) e MNPs permitiram a detecção eletroquímica de CYFRA-21-1 com LoDs de 0,30 fg mL-1 e 0,19 fg mL-1, para FeONPs e CoZnFeONPs, respectivamente. Por fim, foi possível testar os imunossensores frente a soro de pacientes fornecidos pelo Hospital de Amor de Barretos/SP obtendo respostas concordantes com o método ELISA, evidenciando que o dispositivo é uma escolha promissora para uso no diagnóstico de câncer de próstata frente aos métodos tradicionais ECL e ELISA. CAPES: Código de Financiamento 001

Submitted by Vanessa Lanes Ribeiro (vlanesvet@gmail.com) on 2019-03-28T18:59:07Z No. of bitstreams: 1 Dosagem de hormônios esteroides sexuais em camada de gordura subcutânea de toninha, Pontoporia blainvillei (Cetartiodactyla; Pontoporiidae).docx: 2927624 bytes, checksum: 158a77d6180bf20c00646ccf62e4be0e (MD5) Submitted by Vanessa Lanes Ribeiro (vlanesvet@gmail.com) on 2019-03-29T12:59:39Z No. of bitstreams: 1 Dosagem de hormônios esteroides sexuais em camada de gordura subcutânea de toninha, Pontoporia blainvillei (Cetartiodactyla; Pontoporiidae).pdf: 1990107 bytes, checksum: 407b5de807257c3098a3d4c40c416a49 (MD5) Submitted by Vanessa Lanes Ribeiro (vlanesvet@gmail.com) on 2019-03-29T14:05:21Z No. of bitstreams: 1 Dosagem de hormônios esteroides sexuais em camada de gordura subcutânea de toninha, Pontoporia blainvillei (Cetartiodactyla; Pontoporiidae).pdf: 2089167 bytes, checksum: adb722b905b3221dd6c3fa90dd59b038 (MD5) Submitted by Vanessa Lanes Ribeiro (vlanesvet@gmail.com) on 2019-03-29T14:28:20Z No. of bitstreams: 1 Dosagem de hormônios esteroides sexuais em camada de gordura subcutânea de toninha, Pontoporia blainvillei (Cetartiodactyla; Pontoporiidae).pdf: 2089167 bytes, checksum: adb722b905b3221dd6c3fa90dd59b038 (MD5) Approved for entry into archive by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br) on 2019-04-01T17:37:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ribeiro_vl_me_svic_par.pdf: 969509 bytes, checksum: 00050d44d84f27cf2b4071cf705dcaef (MD5) Made available in DSpace on 2019-04-01T17:37:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ribeiro_vl_me_svic_par.pdf: 969509 bytes, checksum: 00050d44d84f27cf2b4071cf705dcaef (MD5) Previous issue date: 2019-03-13 Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Bom dia. Por favor, enviar o arquivo da dissertação em PDF. abraços Disleide Silvia Valerio Gounella Bibliotecária CLP - São Vicente Fone: (13)3569-7154 Mailto: disleide@clp.unesp.br skype: disleidesilviavaleriogounella on 2019-03-29T12:34:30Z (GMT) Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Bom dia, novamente. Por favor, fazer as alterações e inclusões solicitadas: Na Dissertação: Se possível mudar a as Referências bibliográfica gerais para o final do trabalho; No resumo e no abstracts devem constar as mesmas palavras em português e em inglês. No Repositório As palavras chaves em português devem ser na mesma quantidade em inglês; A folha de aprovação solicitada é a que a Banca assinou no dia da Defesa; Faltou colocar o resumo em inglês; Qualquer dúvida, por favor, entre em contato. Abs. Disleide Silvia Valerio Gounella Bibliotecária UNESP Campus de São Vicente e-mail: disleide.valerio@unesp.br skype: disleidesilviavaleriogounella telefone: 13-3569-7154 on 2019-03-29T13:36:00Z (GMT) Rejected by Disleide Silvia Valerio Gounella null (disleide@clp.unesp.br), reason: Oi, por favor, coloque: Resumo em português; Nome do co-Orientador. abs. Disleide on 2019-03-29T14:24:28Z (GMT) A toninha (Pontoporia blanvillei) é um pequeno odontoceto impactado pelas atividades antrópicas (capturas acidentais, degradação de habitat). A dosagem hormonal em diferentes matrizes (fezes, urina, tecido adiposo, leite, saliva, borrifo) tem sido cada vez mais utilizada em mamíferos aquáticos para determinar parâmetros reprodutivos. O objetivo deste estudo foi validar o método de extração e mensuração de testosterona e progesterona em camada de gordura subcutânea de carcaças de toninha armazenadas em duas temperaturas (-20°C e -196ºC), além de correlacionar as dosagens com parâmetros de sexo, maturidade gonadal, idade, estágio de desenvolvimento, comprimento total e ocorrência de prenhez. As amostras foram colhidas de carcaças provenientes de encalhe e captura acidental do litoral de São Paulo. Foram colhidos fragmentos de gordura, armazenados em freezer a -20°C (n=101) e em nitrogênio líquido (-196ºC) (n=28). A extração hormonal foi realizada com modificações a partir do método descrito em literatura e a dosagem foi feita por enzimaimunoensaio para os dois hormônios. Os resultados das análises estatísticas foram expressos em duas unidades de concentração de hormônio (ng/g e ng/mg). O coeficiente de variação inter-ensaio foi de 6,89% para progesterona e 1,67% para testosterona, o coeficiente de variação intra-ensaio foi de 7,82% para progesterona e 3,29% para testosterona. Os resultados do paralelismo para o ensaio de progesterona foi F1,5 =0,87 e p=0,45 e para testosterona F1,5=3,79 e p=0,11. A eficiência média de extração foi de 66% para progesterona e 70% para testosterona. O método de extração e análise hormonal apresentou-se viável para Pontoporia blainvillei, não foram observadas diferenças significativas entre as concentrações dos hormônios nas duas temperaturas e nas duas unidades. Os níveis de hormônios encontrados foram de acordo com o esperado, onde fêmeas apresentaram níveis de progesterona mais elevados que machos, maduras e adultas tiveram níveis mais altos que imaturas, juvenis e filhotes, não houve correlação com a idade e as mesmas conclusões foram obtidas para machos em relação a testosterona. As prenhes também apresentaram níveis de progesterona mais elevados que o restante dos espécimes. Os filhotes e fetos apresentaram níveis hormonais elevados, que pode ser um reflexo da circulação hormonal materna, além da alta taxa de incorporação de hormônios na gordura ou extração mais efetiva. The Franciscana dolphin (Pontoporia blanvillei) is a small odontocete impacted by anthropic activities (bycatch, habitat degradation). The hormonal measurement in biological matrices (feces, urine, blubber, milk, saliva, blow) has been increasingly used in aquatic mammals for certain reproductive parameters. The present study validated the method of extraction and measurement of testosterone and progesterone in blubber kept in two different temperatures (-20°C and -196°C), besides correlating the hormone concentration with gender, sexual maturity, age, stage of development, body length and occurrence of pregnancy. The carcasses were collected from stranded and bycatch dolphins of the coast of São Paulo. Blubber samples were collected and frozen at -20°C (n=101) and -196°C (liquid nitrogen) (n=28). The extraction was performed with a method described in literature and the hormonal analyses were done by enzyme immunoassay for the two hormones. An analysis was performed on two units of hormone concentration (ng/g and ng/mg). The inter-assay coefficient of variation was 6.89% for progesterone and 1.67% for testosterone, the intra-assay coefficient of variation was 7.82% for progesterone and 3.29% for testosterone. The progesterone assay presented parallelism F1.5= 0.87, p= 0.45 and testosterone presented F1.5= 3.79, p= 0.11. The mean extraction efficiency was 66% for progesterone and 70% for testosterone. The method of extraction and hormonal analysis was feasible for Pontoporia blainvillei. No difference was found between the progesterone and testosterone levels of samples kept at the two storage temperatures in both measurement units. The levels of hormones found were in agreement with the expectation that progesterone levels higher than males, mature and adults were higher than immature, juvenile and calf, were not abandoned with age and the same conclusions were obtained for males in relation to a testosterone. As pregnant also the levels of progesterone are higher than the rest of the specimens. High calf and fetuses hormones, which may be a reflection of the maternal hormonal circulation, besides the rate of incorporation of hormones or the more effective extraction.

Submitted by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2019-09-17T14:31:13Z No. of bitstreams: 1 DM_CatarinaVarela_2019_MEQ.pdf: 5255003 bytes, checksum: 5bc44432e69970fde0bd31bd00245a3e (MD5) Approved for entry into archive by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2019-09-17T14:31:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DM_CatarinaVarela_2019_MEQ.pdf: 5255003 bytes, checksum: 5bc44432e69970fde0bd31bd00245a3e (MD5) Made available in DSpace on 2019-09-17T14:31:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DM_CatarinaVarela_2019_MEQ.pdf: 5255003 bytes, checksum: 5bc44432e69970fde0bd31bd00245a3e (MD5) Previous issue date: 2019

RESUMO: Este trabalho teve por objetivo avaliar o proteinograma e concentrações séricas de IgG (após a padronização de teste ELISA) em potros do nascimento aos trinta dias de idade, antes e depois de mamarem colostro e serem tratados com plasma por via intravenosa. Foram utilizados 20 potros e suas respectivas mães, além de quatro animais doadores de plasma. Foram colhidas amostras de sangue dos potros em cinco momentos, logo após o nascimento e antes de mamar colostro (M1), dez horas após nascimento (M2), 24 horas após nascimento e previamente administração do plasma sanguíneo (M3), 48 horas de vida e 24 horas após administração do plasma sanguíneo (M4), e 30 dias após nascimento (M5). Foram colhidos sangue e colostro das éguas progenitoras no momento do parto. A concentração de proteína total (PT) e albumina foram determinadas em analisador bioquímico, a concentração de PT também foi avaliada em refratômetro manual. O fracionamento proteico foi realizado utilizando eletroforese em gel de agarose. A densidade do colostro foi avaliada com colostrômetros de refração BRIX e de densidade específica. A concentração de IgG total de todas as amostras foi determinada por teste ELISA. Com o sistema de ELISA aqui proposto foi possível determinar concentrações de IgG em amostras de soro, plasma e colostro equino com adequada repetibilidade. A média ± desvio padrão da concentração sérica de IgG dos potros ao nascer, foi de 15±8mg/dL, com dez horas de vida foi de 2.408±608mg/dL, se manteve em níveis semelhantes até 48 horas (2.364±784mg/dL) e diminuíram significativamente aos 30 dias de vida (1.414±586mg/dL). A concentração sérica e colostral de IgG nas éguas foi de 1.746±505mg/dL e 7.714±2.619mg/dL, respectivamente. A concentração plasmática de IgG dos doadores de plasma foi de 2.026±148mg/dL. Houve correlação positiva entre as concentrações séricas de IgG e PT (r=0,69 para refratômetro e r=0,76 para bioquímico), GT (r=0,81) e gamaglobulina (r=0,85). Dez horas após o nascimento foi possível verificar a transferência de imunidade passiva, possibilitando adotar medidas profiláticas e/ou terapêuticas em haras de criação de cavalos. Considerando que a proteína total, globulinas totais e fração γ-globulina apresentam correlação com IgG, estas determinações são úteis para monitorar os potros após mamarem o colostro. Um litro de plasma administrado às 24 horas de vida não foi suficiente para aumentar as concentrações séricas de IgG, 24 horas após transfusão, em potros com adequada transferência de imunidade passiva. ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate serum protein and serum IgG concentrations (after a direct enzyme immunoassay test ELISA optimization) in newborns foals from birth to thirty days of life before and after colostrum consumption and intravenous treatment with plasma. Twenty foals and their respective progenitors as well as four plasma donor’s horses were used. Blood samples were obtained from newborn foals at five time points, immediately after birth and before colostrum intake (M1), ten hours after birth (M2), 24 hours after birth and prior administration of blood plasma (M3), 48 hours after birth and 24 hours after plasma administration (M4), and 30 days after birth (M5). Blood and colostrum samples were collected from the progenitor mares immediately postpartum. Concentration of total protein (TP) and albumin were determined using a biochemical analyzer. The TP concentration was also measured by refractometer. Fractions of total serum protein were separated using agarose gel electrophoresis. Colostrum density was evaluated using BRIX refractometer and specific density colostrometer. Total IgG concentration was determined by an enzyme-linked immunosorbent assay. With the ELISA system proposed here it was possible to determine IgG concentrations in serum, plasma, and equine colostrum samples with adequate repeatability. Serum IgG concentration in foals at birth was 15±8mg/dL (mean ± standard deviation) raising at ten hours (2,408±608mg/dL) and remaining at similar levels up to 48 hours of life (2,364±784mg/dL), and decreasing significantly at 30 days of age (1,414±586mg/dL). Serum and colostrum IgG concentrations of mares were 1,746±505mg/dL and 7,714±2,619mg/dL, respectively. The plasma IgG concentrations from donor mares were 2,026±148mg/dL. Total protein, total globulins, and γ-globulin fraction showed correlation with IgG. Ten hours post birth was an adequate time to verify the transfer of passive immunity, allowing to adoption prophylactic and/or therapeutic measures in a horse farms. One liter of plasma administered at 24 hours of life was not sufficient to raise serum IgG concentrations in foals without passive immunity transfer failure.

Orientadores: Lauro Tatsuo Kubota, Scott T. Phillips Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: A crescente demanda por dispositivos de diagnóstico rápidos, altamente sensíveis e de baixo custo tem estimulado esforços para a geração de sistemas analíticos simplificados, capazes de serem aplicados em campo. Este trabalho científico envolveu o estudo de diferentes abordagens para possibilitar a detecção qualitativa e quantitativa de biomarcadores para diagnóstico clínico em plataformas à base de papel. A primeira estratégia consistiu no entendimento dos princípios de funcionamento do dispositivo de imunoensaio em fluxo lateral, permitindo avaliar as etapas críticas e consequentemente proporcionar as condições experimentais mais adequadas para o diagnóstico precoce da malária causada por Plasmodium falciparum, pela identificação do biomarcador HRP2. O melhor desempenho do dispositivo foi atingido por meio da utilização de 0,05 µg (1 µL / 50 µg mL-1) do anticorpo de captura e incubação por 5 minutos para sua adsorção; bloqueio da nitrocelulose com BSA 1,5% (m/v) contendo 0,1% do surfactante Tween-20 (v/v) por imersão e incubação por 10 minutos; 0,04 µg (20 µL/ 2 µg mL-1) de anticorpo de detecção conjugado com a enzima peroxidase; lavagem com solução tampão Tris-HCl 0,01 mol L-1 pH 7,4 contendo 0,15 mol L-1 de NaCl e 0,1% de Tween 20 (v/v); adição de 5 µL do substrato cromogênico TMB e realização da leitura no intervalo de 5-20 minutos após esta adição. O sistema com detecção colorimétrica apresentou um limite de detecção visual de 5 ng mL-1 (135 pmol L-1), cujo valor deve ser suficiente para identificar a contaminação pela malária no primeiro dia do aparecimento dos sintomas. A plataforma desenvolvida foi então aplicada para amostras de sangue de pacientes infectados pela doença, demonstrando eficiência na discriminação qualitativa de um resultado positivo e negativo e a geração de resultados confiáveis. Em outro estudo, com o intuito de proporcionar uma segunda geração do dispositivo, foi construído um sistema de detecção em 3D à base de papel capaz de ser acoplado a uma plataforma de imunoensaio em fluxo lateral. Este sistema possibilita o diagnóstico de maneira quantitativa, automatizada e com amplificação de sinal por meio da incorporação de um novo material polimérico da classe dos poli(benzil éteres) que responde seletivamente a peróxido de hidrogênio, além de necessitar apenas da visualização de cor e de um cronômetro para a obtenção dos dados e posterior análise dos resultados. A delimitação das barreiras hidrofóbicas no papel foi realizada por meio de impressão à cera e foram avaliados os processos de orientação e tipo de papel a ser empregado na camada contendo o polímero. O processo de deposição do material na superfície do papel demonstrou uma maior repetibilidade quando realizada de forma automática por meio de um robô de manuseamento de líquidos. A condição de maior sensibilidade para o sistema de detecção em 3D foi atingida empregando uma concentração de polímero de 4,0 mg mL-1 com a obtenção de um limite de detecção de 0,02 mmol L-1 de peróxido de hidrogênio. Este sistema foi então acoplado a uma plataforma de imunoensaio em fluxo lateral e utilizado em estudos iniciais na detecção da isoenzima MB da creatina quinase, um dos biomarcadores indicado para o diagnóstico do infarto agudo do miocárdio Abstract: The growing demand for rapid, highly sensitive and cost effective diagnostic devices has stimulated considerable efforts towards the generation of simplified analytical systems capable of being applied in the field. This scientific work involved different approaches for the qualitative and quantitative detection of biomarkers for clinical diagnosis on paper-based analytical platforms. The first strategy consisted of understanding the principles behind the lateral flow immunoassay, in order to evaluate the critical steps and consequently to provide the most adequate experimental conditions for the early diagnosis of Plasmodium falciparum malaria by the identification of the HRP2 biomarker. The best performance of the device was achieved by using 0.05 µg (1 µL / 50 µg mL-1) of capture antibody and incubating for 5 minutes in order for it to adsorb; blocking the nitrocellulose with 1.5% (w/v) BSA containing 0.1% (v/v) surfactant Tween 20 by immersion and incubation for 10 minutes; 0.04 µg (20 µL/ 2 µg mL-1) of detection antibody labeled with the peroxidase enzyme; washing with 0.01 mol L-1 Tris-HCl buffer solution pH 7.4 containing 0.15 mol L-1 NaCl and 0.1% (v/v) Tween 20; addition of 5 µL of the chromogenic substrate TMB followed by reading in the range of 5-20 minutes after this addition. The colorimetric detection system presented a visual limit of detection of 5 ng mL-1 (135 pmol L-1), a value that should be enough for identifying the contamination by malaria in the first day of the appearance of the symptoms. The developed platform was then applied to blood samples from patients infected by the disease, demonstrating efficient performance at qualitatively discriminating a positive and a negative result, thus producing reliable results. In another study, aiming to provide a second generation of the device, a 3D paper-based detection system capable of being coupled to a lateral flow immunoassay platform was constructed. This system enables the obtainment of a quantitative and automated diagnostic assay with signal amplification by employing a new polymeric material from the class of poly(benzyl ethers) that selectively responds to hydrogen peroxide, besides requiring only the color visualization and a timer to obtain the data for subsequent analysis of the results. The delimitation of the hydrophobic barriers on the paper was carried out by wax printing and the orientation and type of paper to be employed in the layer containing the polymer were evaluated. The process of depositing the material on the surface of the paper demonstrated great repeatability when performed automatically by using a liquid handling robot. The highest sensitivity condition for the 3D detection system was achieved by employing 4.0 mg mL-1 of polymer, which allowed obtaining a limit of detection of 0.02 mmol L-1 of hydrogen peroxide. This system was then coupled to a lateral flow platform and employed in initial studies for the detection of creatine kinase MB isoenzyme, one of the biomarkers indicated for the diagnosis of acute myocardial infarction Doutorado Química Analítica Doutor em Ciências FAPESP 2013/09171-2, 2014/18190-3 CNPQ 140736/2013-1

Os protocolos de Avaliação de Risco Ambiental (ERA) de Fármacos e Produtos de Cuidados Pessoais (FPCP) recomendam o uso de ensaios ecotoxicológicos tradicionais (por exemplo algas, bactérias, invertebrados, peixes) e a avaliação de efeitos em um único nível de organização biológica para a determinação dos efeitos potenciais dos FPCP à biota. Considerando que efeitos em nível de sub-indivíduo pode afetar igualmente a aptidão ecológica de organismos marinhos, e que os mesmos estão cronicamente expostos aos FPCP, o objetivo do presente estudo foi avaliar o risco ambiental de triclosan (TCS), ibuprofeno (IBU) e 17α-etinilestradiol (EE2) em sedimentos marinhos utilizando respostas de efeitos sub-individuais e populacionais. Por meio do HPLC-ESI-MS/MS, as concentrações ambientais de TCS e IBU foram quantificadas em sedimentos marinhos coletados no entorno do emissário submarino de esgoto de Santos (Baía de Santos, São Paulo - Brasil) com 15,14 e 49,0 ng.g-1, respectivamente, enquanto o EE2 não foi detectado (

Os radiofármacos são fármacos que possuem em sua composição um radionuclídeo e são utilizados para diagnóstico e tratamento de diversas doenças na medicina nuclear. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da temperatura e umidade na estabilidade de alguns reagentes liofilizados ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC, e TIN-TEC. Foi utilizada uma câmara climática para expor amostras destes produtos a uma temperatura de 40 °C e 75% de umidade relativa por 48 horas, para simular uma condição de transporte. Foram avaliadas duas situações: após um determinado tempo de armazenamento em temperatura de 2 - 8 °C, amostras de RL foram expostas por 48 horas em 40 °C e 75% UR e em seguida foram analisadas enquanto outras amostras foram colocadas por 48 horas em 40 °C e 75% UR, mantidas em temperatura de 2 - 8 °C até a validade do radiofármaco e analisadas quanto à pureza radioquímica e biodistribuição. Os radiofármacos ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC e MDP-TEC apresentaram resultados de % PRq e biodistribuição que atenderam às especificações, enquanto que CIS-TEC, PUL-TEC e TIN-TEC apresentaram alguns valores de % PRq menor que o especificado. TIN-TEC apresentou % PRq de 84% em um de três lotes, enquanto PUL-TEC apresentou % PRq de 88% em um de quatro lotes analisados; CIS-TEC é um RL que ainda precisa melhor analisado pois os resultados fora do especificado no controle radioquímico e biológico foram obtidos com um produto fora da validade especificada. Estes resultados indicaram que a pureza radioquímica pode ser afetada pela condição de estudo, o que não foi confirmado pelo controle biológico. Radiopharmaceuticals are pharmaceuticals that have in their composition a radionuclide and are used for diagnosis and treatment of various diseases in nuclear medicine. The main objective of this study was to evaluate the effect of temperature and humidity on the stability of some lyophilized reagents: ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC and TIN-TEC. A climatic chamber was used for exposing some samples of these products to a temperature of 40 °C and 75% RH for 48 hours to simulate a transport condition. Two situations were evaluated: after a certain storage time at 2 - 8 °C, LR samples were exposed for 48 hours at 40 °C and 75% RH and analyzed while other samples were placed for 48 hours at 40 °C and 75% RH, kept at 2 - 8 °C until the expiration time of each radiopharmaceutical and analyzed for radiochemical purity and biodistribution. ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC and MDP-TEC presented results of % RCP and biodistribution that met the specifications while CIS-TEC PUL-TEC and TIN-TEC presented some % RCP lower than specified. TIN-TEC presented % RCP of 84% in one of three lots while PUL-TEC presented % RCP of 88% in a one of four batches analyzed; CIS-TEC is a LR that further need to be analyzed because probable the out of specification results of radiochemical and biological controls were obtained with a product outside of the validity date. These results indicated that radiochemical purity, can be affected by study condition, which has not been confirmed by biological control.

Submitted by MARCOS ANTONIO MAIOLI null (maioli_marcos@hotmail.com) on 2016-02-17T13:03:36Z No. of bitstreams: 1 Tese Maioli, M.A..pdf: 2279252 bytes, checksum: 484c7c928f7a1a221c494bcff9e436b0 (MD5) Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-02-17T16:54:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maioli_ma_dr_araca.pdf: 2279252 bytes, checksum: 484c7c928f7a1a221c494bcff9e436b0 (MD5) Made available in DSpace on 2016-02-17T16:54:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maioli_ma_dr_araca.pdf: 2279252 bytes, checksum: 484c7c928f7a1a221c494bcff9e436b0 (MD5) Previous issue date: 2016-02-01 Outra Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático (ELISA) para a determinação das concentrações plasmáticas de IGF-I total, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo. O IGF-I foi extraído da IGFBP, utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método sem competição (incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I) e outro com competição (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método competitivo, com a sensibilização da placa com 0,25 μg/poço de IgG anti-coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06 ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou, um limite inferior de detecção de 50 ng/mL, uma correlação de 0.945 entre doses quando comparado à uma metodologia comercial. Além disso, após 33 ensaios (1114 amostras) a metodologia apresentou uma boa precisão, com coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8 ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6 ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I. This study aimed to standardize an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to determine plasma concentrations of total IGF-I using the amplification biotin-streptavidin peroxidase system in a competitive assay. The IGF-I was extracted from IGFBPs using the acidified glycine buffer followed by the pH neutralization with sodium hydroxide. The microplates were coated with anti-rabbit IgG, thereafter the measurements were carried out using two approaches, one without competition (prior incubation of samples with the anti-hIGF-I antibody) and another with competition (simultaneous addition of IGF-I and biotinylated sample). The best results were obtained using the competitive method, with the following combination of reagents: microplates were coated with 0.25 µg/well of anti-rabbit IgG, the specific antibody at a dilution of 1:250.000 and 0.06 ng/well of biotinylated IGF-I. The in house methodology showed sensitivity of detection limit of 50 ng/ml, a correlation between doses of 0.945 when compared to a commercial method. In addition, after 33 assays (quantification of 1114 samples) the proposed methodology presented a good precision, with interassay variation coefficients of 12.94% and 20.71% for the high and low controls, respectively. Finally, we concluded that ELISA method for the quantification of total IGF-I using the system biotin-streptavidin-peroxidase amplification in a competitive assay is established and is presented as a useful tool for studies aimed at monitoring the IGF-I concentrations. FAPESP: 2014/09135-9 BEPE: 2015/08021-2

O soro anti-elapidico brasileiro é produzido com uma mistura de veneno de Micrurus frontalis e de M. corallinus. Estudos indicam que o soro resultante não neutraliza o veneno de algumas espécies de Micrurus. Além disso, o baixo rendimento de veneno e as dificuldades de manutenção destas serpentes em cativeiro dificultam a produção de soro. Assim, um método alternativo para a produção deste soro seria de grande valor. Estudos têm mostrado que os venenos de elapideos brasileiros contêm toxinas com um elevado grau de homologia com as de suas congêneres australianas. O presente trabalho teve como objetivo comparar inicialmente o soro brasileiro e o australiano frente ao veneno de Micrurus frontalis e M. lemniscatus. A reatividade cruzada foi testada por Western-blot e ELISA com veneno de Micrurus frontalis e a capacidade neutralizante por soroneutralização com venenos de M. frontalis, M. lemniscatus, e em parceiria com venenos de M. corallinus, M. altirostris, M. spixii, M. ibiboboca, M. fulvius, M. pyrrhocryptus , M. nigrocinctus, em camundongos. Os dados obtidos indicam nível elevado de reatividade e neutralização cruzada entre os soros. Também comparamos a imunogenicidade do veneno nativo ou irradiado, não observando diferenças nos níveis de anticorpos obtidos. As serpentes australianas utilizadas para a produção de soro são mais fáceis de manusear e produzem maiores quantidades de venenos do que as corais brasileiras. Concluímos que um soro produzido com o veneno de serpentes australianas neutraliza a atividade tóxica das Micrurus estudadas, incluindo espécies que o soro nacional não neutraliza. Assim, o uso de venenos da Austrália como imunógeno constitui alternativa viável para sanar a carência do soro nacional. The Brazilian coral snake antivenom is produced using a mixture of Micrurus corallinus and M. frontalis venom. Several studies have shown that this serum does not neutralize the venom of some species. Furthermore, the low venom yields and the difficulties of keeping coral snakes in captivity impair antivenom production. Althought belonging to different species, coral snakes and Australian elapids share many homologous toxins in their venom. The present work aimed to compare the Brazilian and Australian antivenoms against Micrurus venom. Cross- reactivity was assayed by Western blot and ELISA, while cross-neutralization was tested in mice. Both tipes of assays indicate high levels of cross-reactivity and neutralization. We also tested the immunogenicity of native or radiation-attenuated venom and no significant difference in antibody levels was observed. The Australian snakes used for antivenom production are much easier to breed and produce higher amounts of venom that their Brazilian relatives. From this study, we conclude that a serum produced using Australian venoms neutralizes the toxicity of coral snakes venoms, including several venoms which are not neutralized by the Brazilian antivenom. Thus, the use of Australian venoms as an immunogen might solve the bottleneck of coral snake antivenom production.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GABRIELA SORIANO.pdf: 327520 bytes, checksum: ad8287a2a1dbd4d04e67e925087f4285 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 The hypothesis tested in this study was that the time of permanence of progesterone implant (short vs. long) in FTAI protocol change the characteristics of the LH surge. Thus, the aim of this study was to determine the timing, duration and amplitude of the LH peak in sheep (Santa Inês x Texel) using short FTAI protocols (6 days) or long (12 days) in cyclic sheep out of the breeding season. We used 43 sheep (Texel-Te x Santa Inês-SI), sorted into two groups according to the time of progesterone release s vaginal device 1st use (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brazil). In group 12 days (G-12, n = 19) in stage random of the estrous cycle received the insertion of CIDR (D0). On the day of implant removal (D12) was administered intramuscularly, 0.075 mg cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brazil) and 300 IU equine chorionic gonadotropin (eCG, Novormon®, MSD Animal Health, Brazil). The group 6 (G-6, n= 24) received the same protocol of G-12, however the permanence of CIDR was 6 days. Approximately 50 hours after CIDR removal, both groups were inseminated at fixed time by artificial insemination by laparoscopy with frozen semen containing 200x106 sperm of a single player of Dorper. Approximately 40 days after the artificial insemination pregnancy diagnosis was performed using ultrasound device. Blood samples were taken every 4 hours from 10 animals per group, to measure LH and progesterone plasma concentrations by radioimmunoassay (RIA). From the 20 animals used for progesterone plasma concentration, the percentage of animals showing LH surge in G-6 was 70% (7/10) and the G-12 was 90% (9/10). The maximum amplitude of the LH peak did not differ between the G-6 and G-12 groups (P> 0.05) and the lengh of LH peak was 16,60±2,76 h in the G-6 and 16,40±2,40 h in G-12 (P>0,05). The interval between the implant removal and the LH surge was (P >0.05) in the G-6 27,42±2,76 h and 28,88±5,20 h in G-12. The overall pregnancy rate per group was not different (G-6 58,33% e G-12 52,63%). It was concluded that the permanence of progesterone (6 vs 12 days) did not alter the characteristics of the LH peak in sheep (St. Agnes x Texel) in the tropics, out of the breeding season. A hipótese testada pelo presente trabalho foi que o tempo de permanência do implante de progesterona (curto vs longo), em protocolo de IATF, altera as características do pico de LH. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi determinar o momento, duração e amplitude do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) utilizando protocolos de IATF de curta (6 dias) ou longa duração (12 dias) em ovelhas ciclando na contra estação reprodutiva. Foram utilizadas 43 ovelhas (Texel-Te x Santa Inês-SI), divididas em dois grupos de acordo com o tempo de permanência do dispositivo vaginal de liberação de progesterona de 1° uso (Easy-Breed CIDR®, Pfizer, Brasil). No grupo 12 dias (G-12, n=19), em estádio aleatório do ciclo estral receberam a inserção do CIDR (D0). No dia da retirada do implante (D12) foram administrados, por via intramuscular, 0,075 mg de cloprostenol (Veteglan®, Hertape Calier, Brasil) e 300 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG, Novormon®, MSD Saúde Animal, Brasil). O grupo 6 (G-6, n=24) recebeu o mesmo protocolo do G-12, porém a permanência do CIDR foi de 6 dias. Aproximadamente 50 horas após a retirada do CIDR as ovelhas, de ambos os grupos, foram inseminadas em tempo fixo por laparoscopia com sêmen congelado contendo 200x106 espermatozóides, de um único reprodutor, da raça Dorper. Aproximadamente 40 dias após as inseminações artificiais foi realizado o diagnóstico de prenhez utilizando aparelho de ultra-som. Foram realizadas colheitas de sangue, de 4 em 4 horas em 10 animais por grupo, para mensuração das concentrações plasmáticas de LH e progesterona por radioimunoensaio (RIA). Dos 20 animais utilizados para mensuração das concentrações plasmáticas, a porcentagem de animais que apresentaram pico de LH no G-6 foi de 70% (7/10) e no G-12 foi 90% (9/10). A amplitude máxima do pico de LH não diferiu entre os grupos G-6 e G-12 (P>0,05) e a duração do pico de LH foi 16,60±2,76 h no grupo G-6 e 16,40±2,40 h no grupo G-12 (P>0,05). O intervalo entre a retirada do implante e o pico de LH foi (P>0,05) ocorreu 27,42±2,76 h no grupo G-6 e 28,88±5,20 h no G-12. A percentagem de prenhez total por grupo não diferiu (G-6 58,33% e G-12 52,63%). Conclui-se que o tempo de permanência da progesterona (6 vs 12 dias) não alterou as características do pico de LH em ovelhas (Texel x Santa Inês) nos trópicos, na contra estação reprodutiva.

The HLA systems (Human Leukocyte Antigen) have a prominent role among the biological systems involved in the rejection process. In this study, we evaluated the HLA class I (HLAA,-B and-C) and class II (HLA-DRB1, -DQA1 and -DQB1) allele frequencies and humoral immune response to HLA antigens in chronic renal patients, renal transplant candidates, from Northern/Northwestern of Parana State. HLA typing was performed by the method of polymerase chain reaction-sequence specific primers (PCR-SSO) associated with Luminex technology, using genomic DNA extracted from peripheral blood leukocytes. The evaluation of the presence of anti-HLA antibodies against a panel of HLA antigens (Panel-Reactive Antibodies - PRA) was performed by complement dependent cytotoxicity (CDC), CDC with the addition of anti-human globulin (CDC-AHG), CDC with the addition of dithiothreitol (CDC-DTT) and solid-phase immunoassay associated with Luminex technology (SPI; LS1PRA kit, One Lambda, Inc.), using serum samples. Determination the specificities of anti-HLA antibodies were performed by kits LS1PRA and LS2PRA (SPI; One Lambda, Inc.). The performance of CDC, CDC-AHG, CDC-DTT and SPI methods for detection of anti-HLA antibodies class I was analyzed in 70 serum samples from chronic renal patients. Mean PRA detected by SPI (37.5 ± 34.2%) was higher than the values detected by the other methods. Comparative analyses revealed significant difference between CDC and CDC-AHG (P

A papaína é uma enzima proteolítica empregada no debridamento e cicatrização de feridas. Contudo, problemas de estabilidade na forma farmacêutica, bem como reações alérgicas reportadas por pacientes submetidos à tratamentos com a enzima, culminaram na restrição aos produtos contendo papaína para uso tópico por órgãos regulatórios internacionais. Este trabalho objetivou desenvolver hidrogel nanoestruturado contendo complexo de papaína e ciclodextrina visando obter forma farmacêutica estável e eficaz como curativo dérmico, com redução da resposta imunológica. A síntese do hidrogel foi realizada combinando fenômenos de cristalização e/ou reticulação e esterilização simultânea induzida por radiação gama, de modo a promover nanoestruturação adequada da membrana para veiculação da papaína nativa e do complexo. O complexo e o produto final tiveram suas propriedades biológicas e físico-químicas avaliadas. O hidrogel a base de PVA contendo complexo de papaína-ciclodextrina apresentou características adequadas para aplicação como curativo, além de apresentar indícios de redução na resposta imunológica e melhora na citocompatibilidade quando comparado à papaína nativa, isso devido ao encapsulamento molecular com a ciclodextrina e à alta retenção do complexo por parte da matriz. Por outro lado, a irradiação, não alterou o perfil citotóxico da enzima, mas acarretou leve diminuição em seu potencial imunogênico. O hidrogel se mostrou promissor para uso como curativo e demonstrou potencial redução nas reações adversas desencadeadas pelo uso da papaína. Papain is a proteolytic enzyme applied for wound healing and debridement. However, stability issues as well as allergenic reactions reported by patients submitted to papain pharmaceutics led to restriction of papain containing products for topical use by international regulatory agencies. This work aimed the development of nanostructured hydrogel containing papain and cyclodextrin complex or papain in order to obtain stable and suitable pharmaceutical form as a wound dressing with reduced allergenic properties. The hydrogel synthesis was performed by combining freezing cycles and the simultaneous crosslinking and sterilization process promoted by gamma irradiation to achieve a nanostructured hydrogel for the loading of the papain and cyclodextrin complex. The biological and physical-chemical properties of the complex and the final product were assayed. The PVA based hydrogel containing cyclodextrin-papain complex presented desirable characteristics for wound dressing purposes. In addition, an in vitro shift in the immunological response and an increase in the cytocompatibility if compared to native papain were observed as a function of the molecular encapsulation with cyclodextrin. The process of irradiation was not capable of altering papain cytotoxicity, but conferred a slight decrease in the immunogenic properties. In conclusion, the developed hydrogel was promising as a novel papain containing dressing with potential reduced adverse reactions.

A determinação dos níveis séricos de 17±-hidroxiprogesterona (17OHP) é essencial no diagnóstico laboratorial da hiperplasia adrenal congênita (CAH) por deficiência de 21-hidroxilase. Essa condição é responsável por pseudo-hermafroditismo em meninas e precocidade sexual em ambos os sexos. A 17OHP foi quantificada diretamente empregando-se cromatografia líquida de alta eficiência no modo fase reversa (RP-HPLC) em amostras de soro previamente extraídas com éter. Utilizou-se coluna ODS-Hypersil® e fase móvel composta de água-metanol (4:6 v/v) com vazão de 1,0 mL/min. A determinação deu-se em 246 nm. A 17OHP apresentou tempo de retenção de 5,6 min. O método mostrou-se eficaz e eficiente com sensibilidade e linearidade (r² = 0,9993) na faixa de concentração estudada de 500 a 100.000 ng/dL. As precisões intra e interensaios foram respectivamente 4,4 e 8,1%. O método pode ser empregado na rotina laboratorial da avaliação desse esteróide para diagnóstico de CAH, sendo necessário o emprego do radioimunoensaio(RIA) apenas para quantificar amostras com valores abaixo de 500 ng/dL.Determination of serum levels of 17±-hydroxyprogeterone (17OHP) is essential for hormonal characterization of the 21-hydroxylase deficiency form of congenital adrenal hyperplasia (CAH). This condition results in female pseudo-hermaphroditism and sexual precocity in both sexes. 17OHP was directly quantified by liquid chromatography and reverse-phase separation (RP-HPLC) in previously ether extracted serum samples. A ODS-Hypersil® column and a water-methanol (4:6; v/v) mobile phase at 1.0 mL/min were employed in the procedure. The 17OHP peak was measured at 246 nm, with a retention time of 5.6 min. The method was effective and efficient with good sensitivity and linearity (r²= 0.9993) in the concentration range of 500 to 100,000 ng/dL. Intra and inter-assay precisions were 4.4 and 8.1%, respectively. This method can be employed in the laboratory routine for 17OHP in the diagnostic evaluation of CAH; RIA must only be employed to quantify values below the 500 ng/dL.

This study aimed to evaluate the use of turbidity test and ELISA in monitoring the protozoa Giardialamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium sp, in water supply of the Guarani villages in Angra dos Reis (Sapukai) and Paraty (Rio Pequeno, Paraty Mirim, Araponga), RJ. It was collected 24 samples of surface water (raw water) and 24 reservoirs with chlorinated water. Turbidity was measured with portable turbidimeter field and laboratory testing was performed the immunosorbent essay for the test of antigens of Giardia lamblia, Entamoeba histolytica and Cryptosporidium sp. Out of the 17 positive samples in ELISA, 14 showed high turbidity, considering that three presented positive samples for Cryptosporidium sp., with low turbidity. The results indicate an association of the measurement of turbidity with the use of laboratory techniques in the study of parasites in water.Abstract Este estudo teve como objetivo avaliar a utilização do teste de turbidez e do ELISA no monitoramento dos protozoários Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium sp. em água de abastecimento de aldeias Guarani em Angra dos Reis (Sapukai) e Paraty (Rio Pequeno, Paraty Mirim, Araponga), RJ. Coletou-se 24 amostras de água dos mananciais superficiais (água bruta) e 24 de reservatórios com água clorada. Mensurou-se a turbidez com turbidimêtro portatil a campo e no laboratório realizou-se o ensaio imunoenzimático para pesquisa dos antígenos de Giardia lamblia, Entamoeba histolytica e Cryptosporidium sp. Das 17 amostras positivas, 14 apresentaram alta turbidez, mas destaca-se três amostras positivas para Cryptosporidium sp. com baixa turbidez. Indica-se associação da mensuração da turbidez junto com o uso de técnicas laboratoriais na pesquisa de parasitos em água.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-12Bitstream added on 2015-04-09T12:47:39Z : No. of bitstreams: 1 000815970.pdf: 611466 bytes, checksum: 271b827fb3d2f7f3486a8357d3947ec5 (MD5) Macacos-da-noite são tidos como excelentes modelos experimentais, que podem contribuir com o desenvolvimento de biotécnicas da reprodução em primatas. O monitoramento do ciclo é um procedimento básico, porém complexo em animais selvagens. Tem-se desenvolvido métodos não invasivos para avaliar o perfil hormonal reprodutivo desses animais expandindo o conhecimento sobre a fisiologia reprodutiva de primatas em cativeiro e vida livre. O presente estudo visa monitorar a atividade folicular e as concentrações fecais de metabólitos de progesterona para ampliar os conhecimentos sobre a fisiologia reprodutiva dessa espécie. Foram utilizadas 12 fêmeas adultas, pertencentes à colônia de reprodução de macacos-da-noite do CENP. O estudo foi realizado a partir do exame ultrassonográfico do ovário e colheita de fezes para monitoramento dos níveis de metabólitos de progesterona dos animais por enzimaimunoensaio. Por meio da dosagem de metabólitos de progesterona foi possível apenas sgerir o ciclo da espécie para o período estudado. Porém, os níveis basais (2,1 ± 0,8 ng/g de fezes secas), a médio do pico (36,6 ± 8,6 ng/g fezes secas), os níveis médios (4,7 ± 1,8 ng/g de fezes secas) e os valores mínimo (0,4 ng/g de fezes secas) e máximo (49,9 ng/g de fezes secas) de metabólitos de progesterona foram determinados para espécie em cativeiro sob estas condições. A determinação do pico e concentrações basais de metabólitos de progesterona, conjuntamente a avaliação ultrassonográfica são ferramentas não invasivas e factíveis na avaliação do ciclo estral de macacos-da-noite Owl Monkeys are considered excellent experimental models and can contribute to the development of biotechnologies of reproduction in primates. Monitoring the reproductive cycle is a basic procedure, however complex in wild animals. Noninvasive methods has been developed to assess the reproductive hormonal profile of these animals expanding knowledge on reproductive physiology of primates in captivity and the wild. This study aims to monitor follicular activity and fecal progesterone levels to increase knowledge about reproductive physiology of this species. 12 adult females belonging to the breeding colony of owl monkeys of CENP were used. The study was performed using the ultrasound examination of the ovaries and feces collection for monitoring the levels of metabolites of progesterone by enzymeimuneassay. By progesterone assay we may suggest the cycle of the species for the period studied. However, the baseline levels (2.1 ± 0.8 ng/g), mean peak (36.6 ± 8.6 ng/g), mean levels (4.7 ± 1.8 ng/g) and the minimum (0.4 ng/g) and maximum (49.9 ng/g) metabolites of progesterone were determined for the specie in captivity. The determination of the peak and basal levels of progesterone together to the sonographic evaluation are noninvasive and feasible in the evaluation of the estrous cycle in owl monkeys

Objetivo : Nosso objetivo foi comparar duas técnicas de dosagem do 11-desoxicortisol: a técnica de radioimunoensaio iodado, a qual foi validada neste trabalho, e a cromatografia líquida de alta performance seguida por espectrometria de massa em tandem (LC-MS/MS), sendo a última considerada o padrão-ouro para dosagem dos hormônios esteroides. Materiais e métodos : Para a comparação entre os resultados de 11-desoxicortisol, foram selecionadas 88 amostras. Resultados : A sensibilidade analítica do radioimunoensaio foi de 0,30 ng/mL, com linearidade e perfil de precisão inadequado (34% das amostras com CV ≥ 20%). Das 88 amostras selecionadas, apenas 54 apresentaram resultados mensuráveis em ambos os métodos. A comparação desses resultados, por meio da regressão de Deming, resultou em um coeficiente de correlação de 0,610, inclinação de 3,751, intercepção de 0,145, evidenciando a pobre correlação entre os resultados e a superestimação dos resultados pelo RIA. Conclusão : Concluímos que o método de dosagem de 11-desoxicortisol por radioimunoensaio iodado apresentou resultados inadequados nos diversos parâmetros avaliados, inviabilizando sua utilização como método de dosagem do 11-desoxicortisol. Arq Bras Endocrinol Metab. 2014;58(3):232-6 Objective : Our aim was to correlate 11-deoxycortisol levels obtained by two currently available techniques for 11-deoxycortisol measurement: radioimmunoassay, and high performance liquid chromatography followed by tandem mass spectrometry (MS/MS). The latter is the gold standard method for steroid hormone measurement. Materials and methods : We selected 88 samples and the results of these two methods were compared by Deming regression. Results : The analytical sensitivity of the RIA was 0.30 ng/mL, with inadequate linearity and inadequate precision profile (34% of the samples had a CV ≥ 20%). From the selected samples, 54 had measurable levels of 11-deoxycortisol in both methods and were used in the comparison. The comparison of RIA with LC-MS/MS showed an overestimation of the results by RIA. The correlation coefficient was 0.610; linear regression slope was 3.751; and the intercept was 0.145, indicating a poor correlation between the two methods. Conclusion : We concluded that 11-deoxycortisol measured by radioimmunoassay, despite a good analytical sensitivity, showed very low specificity, precluding its use as a reliable method for 11-deoxycortisol measurement. Arq Bras Endocrinol Metab. 2014;58(3):232-6

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior The taeniasis-cysticercosis complex is a disease of great importance to public and animal health, and human beings play an important role as the only definitive hosts that develop taeniasis. Cysticercosis can affect pigs, which are infected by the larva of Taenia solium, cattle, which are infected by the larva of Taenia saginata and, accidentally, humans, who can act as an intermediate hosts (T. solium), developing cysticercosis in their tissues, with neurocysticercosis being the most severe form of the disease. Despite the importance of taeniasis and cysticercosis to public health, animal health and economy in Brazil, the epidemiological reality of the occurrence of zoonoses is poorly understood. In the state of Minas Gerais, most of the data is obtained from official sanitary inspection agencies in slaughterhouses, and little information is based on field data from live animals. In order to assess the epidemiological situation of the taeniasis-cysticercosis complex in small and medium-sized farms in the municipalities of Iraí de Minas, Romaria, Grupiara and Douradoquara, located in the microregion of Patrocínio, in the Triangulo Mineiro region, this study addressed the occurrence of human taeniasis, bovine and porcine cysticercosis, and the main risk factors associated with transmission of parasitic forms of T. saginata and T. solium in the sampled farms. Thus, a cross-sectional epidemiological study was conducted with 68 farms located in rural areas of the four aforementioned municipalities, and these properties were georeferenced. Data collected consisted of 1002 bovine blood samples, 22 porcine blood samples, and stool samples from 119 members of the households and applied an epidemiological questionnaire. The serological diagnosis of animal cysticercosis was performed by screening using the indirect ELISA test, and the suspected cases underwent Immunoblot testing for confirmation purposes. Stool examination was performed by the simple sedimentation method (HPJ). This study found a prevalence of 4.5% of porcine cysticercosis and 4.69% of bovine cysticercosis in the farms of the rural area of the sampled municipalities between July and August 2013. No case of human taeniasis was disagnosed; however, other enteroparasitoses were diagnosed. This study evaluated the association between some risk factors and the prevalence of cases of bovine cysticercosis, in which the variables that were statistically significant were the profession of the person in charge of such farms, income and the water treatment in the farms. From the georeferencing of farms, which generated maps of the collected points and the points diagnosed with bovine cysticercosis. There was the possibility that the transmission of this parasite may occur from the rivers and tributaries that flow along the sampled municipalities from the hydrography of the region. This study identified the prevalence of taeniasis-cysticercosis complex in the sampled municipalities and the results will aid in the prevention and control of this zoonosis in the areas of occurrence. O complexo teníase-cisticercose é uma doença de grande importância para a saúde pública e animal, no qual o ser humano desempenha importante papel como o único hospedeiro definitivo, desenvolvendo a teníase. A cisticercose pode acometer o suíno, que desenvolve a larva da Taenia solium, o bovino, que desenvolve a larva da Taenia saginata e, acidentalmente, o homem pode atuar como hospedeiro intermediário (T. solium), desenvolvendo a cisticercose em seus tecidos, sendo a neurocisticercose a forma mais grave. Apesar da importância da teníase e da cisticercose para a saúde pública, para a saúde animal e para economia, a realidade epidemiológica da ocorrência dessas zoonoses no Brasil é pouco conhecida. No estado de Minas Gerais a maioria dos dados é obtida dos serviços oficiais de Inspeção Sanitária nos matadouros- frigoríficos, sendo poucas as informações baseadas em dados de campo oriundos de animais vivos. Com o objetivo de avaliar a situação epidemiológica do complexo teníase-cisticercose em pequenas e médias propriedades rurais dos municípios de Iraí de Minas, Romaria, Grupiara e Douradoquara, situados na microrregião de Patrocínio, região do Triângulo Mineiro, se pesquisou a ocorrência da teníase humana, da cisticercose bovina e suína e os principais fatores de risco associados à transmissão das formas parasitárias T. saginata e T. solium nas propriedades amostradas. Dessa forma, foi realizado um estudo epidemiológico de corte transversal envolvendo as 68 propriedades localizadas nas zonas rurais dos quatro municípios, sendo essas propriedades georreferenciadas. Foram coletadas 1002 amostras de sangue bovino e 22 amostras de sangue suíno, 119 amostras de fezes dos integrantes das famílias residentes nas propriedades e aplicado um questionário epidemiológico. O diagnóstico sorológico da cisticercose animal foi realizado por triagem pelo teste ELISA indireto e os casos suspeitos foram submetidos ao Immunoblot para confirmação. O exame de fezes foi realizado pelo método de sedimentação simples. Este estudo revelou prevalência de 4,5% de cisticercose suína e de 4,69% de cisticercose bovina nas propriedades da zona rural dos municípios amostrados, no período de julho a agosto de 2013. Não foi diagnosticado nenhum caso de teníase humana, no entanto, outras enteroparasitoses foram diagnosticadas. Avaliou-se a associação entre alguns fatores de risco e a prevalência dos casos de cisticercose bovina, no qual as variáveis que se mostraram estatisticamente significantes foram profissão do responsável pela propriedade, renda familiar e tratamento da água da propriedade. A partir do georreferenciamento das propriedades, foram produzidos os mapas dos pontos coletados e dos pontos diagnosticados com cisticercose bovina. Observou-se a possibilidade da transmissão dessa parasitose ocorrer a partir dos rios e seus afluentes nos municípios amostrados a partir da hidrografia da região. O estudo permitiu a identificação da prevalência do complexo teníase-cisticercose nos municípios amostrados e os resultados permitirão auxiliar a prevenção e o controle dessa zoonose nas áreas de ocorrência.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:55:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Giuliana Schmidt Franca Fonseca.pdf: 1055751 bytes, checksum: 050d4de10b5fae8001c2b5f264473b60 (MD5) Previous issue date: 2013-08-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O diagnóstico de rotina da leishmaniose visceral (LV) humana é usualmente baseado em parâmetros clínicos e epidemiológicos, associado a exames parasitológicos e/ou imunológicos. Tendo em vista que a doença é fatal se não tratada, a busca por métodos diagnósticos mais efetivos, que sejam de fácil execução, simples, acessíveis, menos invasivos, e rápidos, se faz necessário, diminuindo o tempo de obtenção dos resultados. Portanto, neste estudo foi avaliado o desempenho de diferentes métodos já utilizados na rotina ou propostas como ferramentas alternativas para o diagnóstico da LV, incluindo o exame direto de punção de medula óssea, a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), o teste rápido com rK39 (Kalazar Detect®), a ELISA com antígeno solúvel de L. chagasi e a imunofluorescência baseada em citometria de fluxo (FC-AFPA). Para isso foram avaliadas 77 amostras biológicas (punção de medula óssea e soro) de pacientes com diagnóstico clínico de LV, tratados e curados. A sensibilidade dos testes avaliados foi de 48% para o exame parasitológico direto, 74% para RIFI, 79% para o teste rápido com rK39, 88% para o teste ELISA-ASL e 94% para a FC-AFPA. A análise comparativa dos testes avaliados demonstrou que há maior concordância entre os testes sorológicos entre si, do que entre os testes sorológicos e o exame direto, devido a sua baixa sensibilidade. Foi também realizada a comparação entre os resultados dos testes sorológicos em relação ao resultado do teste parasitológico direto. Entretanto, nossos resultados mostraram que o desempenho dos testes foi semelhante independente do resultado do exame direto. Além disso, nosso estudo avaliou o desempenho de dois algoritmos para diagnóstico da LV baseados apenas em testes sorológicos. O primeiro deles utilizando a RIFI como teste de inicial, uma vez que este teste é disponibilizado pelo Ministério da Saúde (MS) para os laboratórios de referência em diagnóstico de LV e um segundo utilizando o teste rápido rK39, que tem sido recentemente sugerido como teste de triagem pelo MS. A análise dos dados demonstrou que o algoritmo para o diagnóstico da LV humana que apresentou melhor desempenho, ou seja, todos os casos foram detectados, foi aquele que utilizou o teste rápido como teste inicial, seguido de FC-AFPA The routine diagnosis of human visceral leishmaniasis (VL) is usually based on clinical and epidemiologic parameters associated to parasitological and/or immunological tests. Being a fatal disease if not treated, the search for more effective, easy to perform, simple, affordable, and fast diagnostic methods, is necessary, decreasing the time to obtain results. Therefore, in this study the performance of different methods already used in the routine or proposed as alternative tools to the diagnose of VL was evaluated, which included the direct parasite detection (DPD) on bone marrow aspirates, indirect immunofluorescent assay (IFA), rK39 rapid test (Kalazar Detect®), ELISA test using L.chagasi soluble antigen, and immunofluorescence by flow cytometry (FC-AFPA). Seventy-seven biological specimens (bone marrow and serum) from patients with clinical diagnosis of VL, treated, and cured were assessed. The sensitivity of evaluated tests was 48% for DPD, 74% for IFA, 79% for rK39 rapid test, 88% for ELISA-SLA, and 94% for FC-AFPA. The comparative analysis demonstrated higher concordance among serological tests in comparison to serological tests and DPD, due to the low sensitivity of the latter. It was also done the comparison between the results of serological tests and direct examination. However, our results showed that the performance of tests was similar regardless of DPD results. In addition, our study evaluated the performance of two algorithms for the diagnosis of VL based only on serological tests. The first of them using IFA as a initial test, since this is the test provided by the Ministry of Health (MH) for reference laboratories for diagnosis of VL, and a second algorithm using the rK39 rapid test, that has recently been suggested as a screening test by the MH. It was demonstrated that the algorithm presenting the best performance, that is, all the cases were detected, was the one using rapid test as initial test followed by FC-AFPA

Os vírus são importantes agentes patogênicos de várias espécies animais, entre elas bovinos. No Brasil, diversos agentes virais foram descritos causando infecções no rebanho bovino, e produzindo perdas econômicas significativas. A identificação dos animais infectados por um vírus pode ser realizada de diferentes formas; no entanto, a confirmação definitiva requer a demonstração do agente ou da resposta imune. Para isto, vários métodos com capacidade de detectar a partícula viral, atividade biológica, genoma, antígenos virais, ou então a resposta imune específica foram desenvolvidos. Os imunoensaios são testes amplamente utilizados na rotina laboratorial para detecção de antígenos virais em amostras clínicas ou de pesquisa. Estes ensaios apresentam boa sensibilidade, especificidade e facilidade de execução. A metodologia dos imunoensaios tem como base, o emprego de anticorpos monoclonais ou policlonais específicos para os antígenos virais. Assim sendo, o objetivo do presente estudo foi produzir anticorpos policlonais para alguns vírus bovinos, e avaliar a reatividade destes em testes de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Para isto, cepas e/ou isolados do herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), herpesvírus bovino tipo 2 (BoHV-2), herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), herpesvírus bovino tipo 5 gE deletado (BoHV-5 gEΔ), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus da vaccínia (VACV) foram amplificados em cultivo celular e o sobrenadante utilizado para imunizar coelhos. Os animais foram imunizados cinco vezes pela via subcutânea, e cinco dias após o último reforço coletou-se sangue. O soro foi separado do sangue por centrifugação. O soro foi diluído em PBS (1:100 a 1:204.800) e utilizado como anticorpo primário nos ensaios de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. A diluição de trabalho foi selecionada pela diluição que produziu reação específica nas células infectadas, e sinal fraco ou ausente nas células controle. Os antissoros apresentaram maior reatividade na técnica de imunoperoxidase do que na imunofluorescência e slot blot. Ainda, para os antissoros do BoHV-1, BoHV-5, BVDV e BRSV demonstrou-se a reatividade com amostras heterólogas nos ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os anticorpos policlonais produzidos em coelhos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos, o que foi detectado pela reatividade nos ensaios de imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Desta maneira, estes reagentes podem ser considerados uma importante ferramenta para a detecção e caracterização de vários vírus bovinos na rotina de diagnóstico e pesquisa. The viruses are significant important pathogenic agents of several animal species, including cattle. In Brazil, several viral agents causing infections have been described in cattle and they produce significant economic losses. The identification of animals infected by a virus can be performed in different ways; however, definitive confirmation requires demonstration of the agent or immune response. For this purpose, various methods with the capacity to detect the viral particle, biological activity, genome, viral antigens, or specific immune response have been developed. Immunoassays are widely used in laboratory routine for detection of viral antigens in clinical or research. These assays exhibit good sensitivity, specificity and easy for implantation. The immunoassay methodologies are based on the employment of monoclonal or polyclonal antibodies specific to the viral antigens. Therefore, the aim of this study was to produce polyclonal antibodies for some bovine virus, and evaluate their reactivity in immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot tests. For this purpose, strains and/or isolates of bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), bovine herpesvirus type 2 (BoHV-2), bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5), bovine herpesvirus type 5 gE deleted (BoHV-5 gEΔ), bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bluetongue virus (BTV), and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and the supernatant were used to immunize rabbits. The animals were immunized five times by the subcutaneous route, and five days after the last boost the blood was collected. The serum was obtained by centrifugation. The serum was diluted (1:100 a 1:204.800) and used as primary antibodies in the immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot assays. The working dilution was selected among those produced specific reaction with infected cells and absent or weak background in control cells. The antiserum showed higher reactivity in immunoperoxidase technique than the immunofluorescence and slot blot. The antiserum of the BoHV-1, BoHV-5, BVDV and BRSV presented the reactivity when tested with eterologous isolates in immunofluorescence, immunoperoxidase assays. In summary, that the polyclonal antibodies raised in rabbits have high concentrations of specific antibodies, which were demonstrated by the reactivity in immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot assays. Additionally, these reagents can be considered an important tool for the detection and characterization of various bovine viruses in diagnostic and research routine.

A maturação in vitro (MIV) é um dos pontos críticos da produção in vitro de embriões bovinos, sendo que vários fatores podem interferir na MIV, como a tensão de oxigênio e a densidade de oócitos por volume de meio. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da tensão de oxigênio associada a diferentes densidades de oócitos durante a MIV. Para tanto, três experimentos foram conduzidos com oócitos bovinos obtidos de ovários de abatedouro. O experimento I consistiu na avaliação da maturação citoplasmática e nuclear, o experimento II na avaliação da produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e atividade antioxidante, e o experimento III na avaliação das taxas de fecundação in vitro. Após a seleção, os oócitos foram submetidos a MIV distribuídos aleatoriamente em 4 tratamentos: Tratamento 1:10/5%: 1 oócito em 10μl de meio de MIV em 5% de O 2 ; Tratamento 1:10/20%: 1 oócito em 10μl de meio em 20% de O 2 ; Tratamento 1:20/5%: 1 oócito em 20μl em 5% de O 2 e Tratamento 1:20/20%: 1 oócito em 20μl de meio em 20% de O 2 . A MIV foi conduzida em grupos de 15 oócitos em meio TCM 199 modificado, acrescido de FSH, LH, EGF, soro de égua em estro (SEE) e piruvato por 24h. Decorrido o período de MIV foi conduzida a fecundação in vitro em gotas de 300μl de meio Fert-TALP, sendo realizada pelo co-cultivo de oócitos e espermatozóides (2x10 6 sptz/mL) selecionados por gradientes de mini-Percoll por 18h. No experimento I, as taxas de maturação nuclear (69,66%) e maturação citoplasmática (71,55%) foram similares entre os tratamentos (P>0,05). No experimento II, a produção de ROS foi avaliada nos oócitos e no meio de MIV, assim como a atividade antioxidante foi avaliada após 24 h de MIV. A produção de ROS pelos oócitos foi superior nos tratamentos com baixa tensão de oxigênio (5%; 13,3UF) em relação a alta tensão de oxigênio (20%; 7,0UF) independentemente da densidade de oócitos (P0,05). As taxas de fecundação e penetração foram superiores nos tratamentos com 20% de O 2 e com alta densidade de oócitos (1:10; 48,8%) em relação aos tratamentos 1:10/5% (29,5%) e 1:20/20% (29,1%; P0.05). In Experiment II, the ROS production in oocytes, IVM medium and antioxidant activity were evaluated after 24 h of IVM. ROS production in oocytes was higher on treatments with low tension (5%; 13.3 UF) than 20% oxygen tension (7.0 UF) independently of oocyte density (P0.05). The rates of normal fertilization and normal penetration were higher in treatments with 20% of O2 with high oocyte density (1:10;48.8%) than treatments 1:10/5% (29.5%) and 1:20/20% (29.1%; P

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:54:02Z No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Fernanda_Barja_Fidalgo_Silva_de_Andrade.pdf: 4618751 bytes, checksum: f73dba9567f2586a92db02b8a9641ed8 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:54:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE_FINAL_PUBLICADA_Fernanda_Barja_Fidalgo_Silva_de_Andrade.pdf: 4618751 bytes, checksum: f73dba9567f2586a92db02b8a9641ed8 (MD5) Previous issue date: 2013-04-19 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro The aim of this study was to investigate possible different expressions of protein mediators related to metaflammation, in normal and obese prepubertal children`s saliva. For this cross-sectional observational study, 105 prepubertal children, between 5 and 9 years old, without oral or systemic disorders were selected. Weight, height and waist circumference (CC) were measured and body mass index (BMI) and BMI zscore were calculated in order to classify the children into the following groups: EU - lean (-2SD ≤ BMI zscore ≤ 1SD), SP - overweight (1SD < BMI zscore

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-01-24Bitstream added on 2014-06-13T19:00:39Z : No. of bitstreams: 1 reis_acg_dr_jabo.pdf: 749766 bytes, checksum: 91288058e5c8e2a0b2b59a94f7d36cb3 (MD5) Considerando-se a importância da paca, roedor histricomorfo componente da fauna silvestre brasileira, diante de seu potencial zootécnico e ainda da possibilidade de tornar-se uma nova opção de animal experimental e sopesando-se também o valor da aplicação de técnicas não invasivas na para elucidar fatores reprodutivos, visa-se com esta pesquisa, neste roedor, caracterizar as flutuações hormonais de progestinas e estrógenos fecais durante o ciclo estral e período gestacional, validar um método não invasivo para diagnóstico da gestação, bem como avaliar o uso de miçangas como forma de marcar e individualizar as amostras fecais. Nove fêmeas adultas, não nulíparas, diagnosticadas não prenhes mediante exame ultrassonográfico, tiveram suas fezes marcadas, por meio da ingestão de miçangas, e colhidas diariamente durante 43 dias consecutivos; após este período, machos foram adicionados aos grupos das fêmeas que tiveram as fezes colhidas, apenas uma vez por semana, até o parto. Os valores de progestágenos fecais observados durante o ciclo foram de 0,37 a 7,9 ng/g de fezes secas e de estrógenos fecais de 5,08 a 37,72 ng/g de fezes secas e não foi possível observar flutuações de progestágenos que caracterizassem fase lútea e que fosse compatível com picos de estradiol entre elevações de progestágenos. Durante a gestação os valores de progestágenos oscilaram de 1,33 a 6,42 ng/g de fezes secas; os valores de estrógenos fecais variaram de 8,97 a 1964 ng/g de fezes secas com acentuado aumento no segundo terço de gestação. Um diagnóstico de gestação pode ser confirmado com observação de níveis de estrógenos fecais acima de 41,06 ng/g de fezes por duas semanas consecutivas. O marcador plástico é item seguro e sem contraindicações na marcação e individualização das fezes de paca Considering the importance of Cuniculus paca, a hystricomorph rodent component of Brazilian wildlife, its livestock potential besides the possibility that it might become a new option for animal experimentation and also the value of non invasive techniques to elucidation of reproductive parameters, the aim of this study was to characterize, for this rodent, hormonal fluctuations of fecal progestins and estrogens during estrous cycle and pregnancy, validate a non-invasive method for pregnancy diagnosis and evaluate the use of plastic beads as a fecal marker. Nine adult females, non nulliparous, non-pregnancy diagnosed by ultrasound, had their feaces marked, through the ingestion of beads, and collected daily for 43 days, after this period, males were added to female groups and the feaces were collected only once a week until parturition. The values of fecal progestagens observed throughout the cycle were 0.37 to 7.9 ng/g of dry feces and fecal estrogens were 5.08 to 37.72 ng/g dry feces; no progestins fluctuation that characterize luteal phase compatible with estradiol peak was observed. During pregnancy, progesterone values ranged from 1.33 to 6.42 ng/g dry feces, fecal estrogen values vary from 8.97 to 1964 ng/g dry feces with a sharp rise in the second third of gestation. A pregnancy diagnosis can be confirmed by observation of fecal estrogen levels up to 41.06 ng/g of feces for two consecutive weeks. The plastic marker was found to be safe and effective at yielding readily identifiable stools in pacas

de Lima C.C.V., Costa J.N., Souza T.S., Martinez P.M., Costa Neto A.O., Azevedo D.A.A., Pinheiro R.R. & Brito R.L.L. [Immunodiagnostic for caprine artrithis encephalitis in flocks of semi-arid region in the State of Bahia, Brazil]. Imunodiagnóstico para a artrite-encefalite caprina em rebanhos do semiárido baiano, Brasil. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 35(4):358-364, 2013. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal nos Trópicos, Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Av. Adhemar de Barros, 500, Salvador, BA 40170-110, Brasil. E-mail: carlacvlima@gmail.com This work had the purpose of standardizing the technique of indirect immunosorbent assay (i-Elisa) for the diagnosis of caprine arthritis-encephalitis (CAE) in flocks of Microregion of Juazeiro, and to compare the results obtained with other techniques. To attain our goal, we evaluated 693 blood serum samples of goats from 46 farms in this Microregion (Campo Alegre de Lourdes, Casa Nova, Curaçá, Juazeiro, Pilão Arcado, Remanso, Sento Sé and Sobradinho). About the seroprevalence obtained in i-Elisa, 1.59% (11/693) of the animals showed they possess the anticorps against the CAE’s virus and 15.22% (7/46) of the properties had seropositive animal. Results of commercial AGID demonstrated that only 0.29% (2/693) of the samples were positive. Standard Elisa showed 100% sensitivity and 98.7% specificity, with kappa of 0.30 compared to the commercial AGID. Of the 693 samples, 65 were used in techniques of Immunoblotting (IB) and different AGID kits. There was no difference in the results obtained in the AGID kits, and IB demonstrated higher sensitivity than i-Elisa. Therefore, it is recommended to use different techniques such as AGID and Elisa in order to improve the diagnosis of CAE control programs., Este trabalho teve como finalidade padronizar a técnica de ensaio imunoenzimático indireto (Elisa-i) para diagnóstico da artrite-encefalite caprina (CAE) em rebanhos da Microrregião de Juazeiro, bem como comparar os resultados obtidos com outras técnicas imunodiagnósticas. Para talforam avaliadas 693 amostras de soros sanguíneos de caprinos, de 46 propriedades rurais da Microrregião (Campo Alegre de Lourdes, Casa Nova, Curaçá, Juazeiro, Pilão Arcado, Remanso, Sento Sé e Sobradinho). Quanto à soroprevalência obtida no Elisa-i, 1,59% (11/693) dos animais apresentaram anticorpos contra o vírus da CAE e 15,22% (7/46) das propriedades possuíram animal soropositivo. Quando na realização do IDGA comercial, apenas 0,29% (2/693) das amostras foram positivas. O Elisa padronizado demonstrou 100% de sensibilidade e 98,7% de especificidade, com índice kappa igual a 0,30 se comparado ao IDGA comercial. Das 693 amostras, 65 foram testadas pela técnica de Immunoblotting (IB) e por diferentes kits de IDGA. Não houve diferença nos resultados obtidos nos kits de IDGA, e o IB demonstrou maior sensibilidade que o Elisa-i. Portanto, é recomendada a utilização de diferentes técnicas, como IDGA e Elisa, a fim de se complementar o diagnóstico da CAE em programas de controle.

Submitted by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2015-06-02T15:03:04Z No. of bitstreams: 1 DM_NadiaSilva_2013_MECIM.pdf: 1854024 bytes, checksum: 9215247760fc8c1eae1118c94f964218 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Rebelo (amsr@isep.ipp.pt) on 2015-06-03T10:48:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DM_NadiaSilva_2013_MECIM.pdf: 1854024 bytes, checksum: 9215247760fc8c1eae1118c94f964218 (MD5) Made available in DSpace on 2015-06-03T10:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DM_NadiaSilva_2013_MECIM.pdf: 1854024 bytes, checksum: 9215247760fc8c1eae1118c94f964218 (MD5) Previous issue date: 2013

We tested sera from 286 agricultural workers and 322 rodents in the department of Córdoba, northeastern Colombia, for antibodies against two hantaviruses. The sera were analysed by indirect ELISA using the lysate of Vero E6 cells infected with Maciel virus (MACV) or the N protein of Araraquara virus (ARAV) as antigens for the detection of antibodies against hantaviruses. Twenty-four human sera were IgG positive using one or both antigens. We detected anti-MACV IgG antibodies in 10 sera (3.5%) and anti-ARAV antibodies in 21 sera (7.34%). Of the 10 samples that were positive for MACV, seven (70%) were cross-reactive with ARAV; seven of the 21 ARAV-positive samples were cross-reactive with MACV. Using an ARAV IgM ELISA, two of the 24 human sera (8.4%) were positive. We captured 322 rodents, including 210 Cricetidae (181 Zygodontomys brevicauda, 28 Oligoryzomys fulvescens and 1 Oecomys trinitatis), six Heteromys anomalus (Heteromyidae), one Proechimys sp. (Echimyidae) and 105 Muridae (34 Rattus rattus and 71 Mus musculus). All rodent sera were negative for both antigens. The 8.4% detection rate of hantavirus antibodies in humans is much higher than previously found in serosurveys in North America, suggesting that rural agricultural workers in northeastern Colombia are frequently exposed to hantaviruses. Our results also indicate that tests conducted with South American hantavirus antigens could have predictive value and could represent a useful alternative for the diagnosis of hantavirus infection in Colombia.