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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, na área científica de Clínica A dermatite atópica canina é uma síndrome multifatorial que, apesar de muito comum nos nossos cães, apresenta uma patogenia bastante complexa e com ainda muito por entender. Sabe-se que a disfunção da barreira cutânea apresenta um papel importante na patogenia desta afeção e que os lípidos do estrato córneo desempenham uma função crucial na manutenção da integridade da barreira. Deste modo, a análise lipidómica da pele tem ganho cada vez mais relevância e os recentes desenvolvimentos nas tecnologias analíticas baseadas na espectrometria de massa podem proporcionar uma investigação aprofundada dos lípidos cutâneos, fornecendo uma visão do seu papel e mecanismo de ação no desenvolvimento de dermatite atópica canina. Este estudo pretende avaliar a utilidade e praticidade desta técnica em contexto de clínica e de investigação, bem como as diferenças nos perfis lipídicos do estrato córneo da pele de cães saudáveis não atópicos e de cães atópicos e entre regiões corporais (espaço interdigital coxa e virilha). Foram incluídos neste estudo dezasseis cães da raça Labrador Retriever, oito sem histórico de doenças de pele e oito com diagnóstico de dermatite atópica canina. De cada cão foram colhidas três amostras, uma do espaço interdigital, uma da coxa e uma da virilha. As amostras de estrato córneo foram colhidas com recurso a fitas-cola D- Squame e a análise lipídica foi realizada com recurso a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa de alta resolução (LC-MS). Foi possível identificar positivamente 114 lípidos e distinguir 10 classes de lípidos, tendo sido o grupo das ceramidas o mais prevalente (66%) e o grupo dos diglicéridos o segundo mais abundante (31%) nas amostras do estrato córneo. Não se verificaram diferenças significativas na concentração de lípidos do estrato córneo entre cães atópicos e não atópicos. No entanto, verificaram-se diferenças na concentração de classes lipídicas entre locais de recolha da amostra. Este estudo piloto destaca o potencial da cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa como meio para melhor compreender o comportamento lipídico do estrato córneo na dermatite atópica canina e encoraja a investigação futura desta área. ABSTRACT - COMPARISON OF STRATUM CORNEUM LIPIDS IN LABRADOR RETRIEVER DOGS WITH AND WITHOUT ATOPIC DERMATITIS : LIPIDOMIC ANALYSIS - Canine atopic dermatitis is a multifactorial syndrome that, although very common in dogs, has a very complex pathogenesis with a lot yet to be understood. It is known that the skin barrier dysfunction plays an important role in the pathogenesis of this condition and that stratum corneum lipids play a crucial role in maintaining the integrity of the barrier. Thus, skin lipidomics analysis has gained increasing relevance and recent developments in mass spectrometry-based analytical technologies can provide an in-depth investigation of skin lipids, providing insight into their role and mechanism of action in development of canine atopic dermatitis. This study aimed to evaluate the practicality of this technique in clinical and research settings, as well as the differences in the lipid profiles of the stratum corneum of the skin of healthy non-atopic and atopic dogs and between body sites (paw, thigh and groin). Sixteen dogs of the Labrador Retriever breed were included in this study, eight with no history of skin diseases and eight with a diagnosis of canine atopic dermatitis. Three samples were collected from each dog, one from the paw, one from the thigh, and one from the groin. The stratum corneum samples were collected using D-Squame tape and lipid analysis was performed using liquid chromatography coupled to high performance mass spectrometry (LC-MS). It was possible to positively identify 114 lipids and distinguish 10 lipid classes, with the ceramide group being the most prevalent (66%) and the diglyceride group being the second most abundant (31%) in the stratum corneum samples. There were no significant differences in the concentration of stratum corneum lipids between atopic and non-atopic dogs. However, there were differences in the concentration of lipid classes between sample collection sites. This pilot study highlights the potential of liquid chromatography coupled with mass spectrometry to better understand stratum corneum lipid behavior in canine atopic dermatitis and encourages future research in this area. N/A

Canine Atopic Dermatitis is a chronic, inflammatory and pruritic skin condition, which is affected by several factors, which may be associated with genetic predisposition and changes in the epidermal barrier and which have a prevalence between 10% of the canine population, being the second most frequent allergic disease. The therapeutic approach takes into account several factors, such as seasonality, distribution and amount of affected skin, in addition to the severity of the lesion and stage of the disease, the patient's conditions, which can be topical or systemic, with a multimodal focus that includes the use of antipruritic drugs, allergen-specific immunotherapy and drugs that cause restructure the skin barrier and its microbiota. To highlight the current therapeutic alternatives for CAD. This is a literature review study, carried out in Pubmed, Scielo, Lilacs and Bireme databases with the keywords: Dermatology; Allergy; Canine Atopic Dermatitis. Therapeutic management of CAD is multifaceted and interventions should preferably be combined. The veterinarian must also remember that after evaluating, he must inform and discuss with the animal's owner about the possibilities and therapeutic choice so that he understands the benefit of each recommended intervention and whether the modality will be single or combined. Polytherapy and the use of drugs with fewer harmful side effects to the animal are recommended. Use protocols that help to restore the skin barrier and avoid allergens, as well as consider the cost of drugs and the financial conditions of the owner. La Dermatitis Atópica Canina es una afección cutánea crónica, inflamatoria y pruriginosa, que se ve afectada por diversos factores, que pueden estar asociados a la predisposición genética y cambios en la barrera epidérmica y que tiene una prevalencia entre el 10% de la población canina, siendo la segunda enfermedad alérgica más frecuente. El abordaje terapéutico tiene en cuenta varios factores, como la estacionalidad, distribución y cantidad de piel afectada, además de la gravedad de la lesión y estadio de la enfermedad, las condiciones del paciente, que puede ser tópica o sistémica, con un enfoque multimodal que incluye el uso de fármacos antipruriginosos, inmunoterapia específica de alérgenos y fármacos que provocan la reestructuración de la barrera cutánea y su microbiota. Destacar las alternativas terapéuticas actuales para la EAC. Se trata de un estudio de revisión bibliográfica, realizado en las bases de datos Pubmed, Scielo, Lilacs y Bireme con las palabras clave: Dermatología; Alergia; Dermatitis atópica canina. El manejo terapéutico de la EAC es multifacético y es preferible combinar las intervenciones. El veterinario también debe recordar que luego de evaluar, debe informar y discutir con el dueño del animal sobre las posibilidades y elección terapéutica para que entienda el beneficio de cada intervención recomendada y si la modalidad será única o combinada. Se recomienda la politerapia y el uso de fármacos con menores efectos secundarios nocivos para el animal. Utilice protocolos que ayuden a restaurar la barrera de la piel y evite los alérgenos, además de considerar el costo de los medicamentos y las condiciones financieras del propietario. A Dermatite Atópica Canina é uma afecção cutânea crônica, inflamatória e pruriginosa, que é acometida por diversos fatores, podendo estar associado à predisposição genética e modificações na barreira epidérmica e que têm uma prevalência entre 10% da população canina, sendo a segunda doença alérgica mais frequente. A abordagem terapêutica leva em consideração diversos fatores, como a sazonalidade, a distribuição e quantidade de pele acometida, além da gravidade da lesão e estágio da doença, as condições do paciente, podendo ser tópico ou sistêmico, com foco multimodal que inclui o uso de medicações antiprurigionsas, imunoterapia alérgeno-específica e fármacos que causam reestruturam a barreira cutânea e de sua microbiota. Destacar as atuais alternativas terapêuticas para a DAC. Trata-se de um estudo de revisão de literatura, realizado nas bases de dados Pubmed, Scielo, Lilacs e Bireme com as palavras chaves: Dermatologia; Alergia; Dermatite Atópica Canina. O manejo terapêutico da DAC é multifacetado e as intervenções preferencialmente devem ser combinadas. O médico veterinário também deve se lembrar que depois que avaliar deve informar e discutir com o dono do animal sobre as possibilidades e escolha terapêutica para que o mesmo compreenda o benefício de cada intervenção recomendada e se a modalidade será única ou combinada. É recomendado a politerapia e a utilização de medicamentos com menos efeitos secundários prejudiciais ao animal. Utilizar protocolos que auxiliem a restabelecer a barreira cutânea e evitar alérgenos, bem como considerar o custo dos fármacos e as condições financeiras do proprietário.

RESUMO Introdução: O oclacitinib é um inibidor seletivo da enzima cinase de Janus, que tem como alvo a interleucina-31, sendo utilizado no tratamento da dermatite atópica canina. Apesar de os tutores apresentarem um elevado grau de satisfação com este fármaco, o seu custo representa um foco de preocupação para 75%, sendo que 42,5% dos tutores referiram ter de limitar outras despesas para poderem pagar o tratamento do seu cão. Objetivos: Avaliar a possibilidade de adotar um protocolo alternativo com oclacitinib em dias alternados. Secundariamente, avaliar se existe vantagem em adicionar glucocorticoides orais no início deste protocolo. Métodos: Estudo prospetivo, aleatório, duplamente cego e controlado com placebo, incluindo 16 cães com diagnóstico de dermatite atópica, alocados nos grupos P (n=7; Placebo) e G (n=9; Glucocorticoides). Os animais foram avaliados quanto à gravidade lesional (CADESI-04) e grau de prurido (PVAS) no Dia -30, Dia 0 e end‑point (recidiva ou Dia 30). O estudo comportou duas fases distintas e sucessivas. Na primeira fase foi administrado oclacitinib (0,4-0,6 mg/kg, 14 dias, duas vezes por dia [BID], depois 16 dias, uma vez por dia [SID]) por via oral a ambos os grupos. No entanto, nos primeiros 7 dias, ao grupo G foi administrada prednisolona (1mg/kg SID) por via oral e ao grupo P um placebo no mesmo regime. Na segunda fase, todos os animais realizaram o mesmo tratamento, mantendo o oclacitinib, mas apenas em dias alternados, até à recidiva do seu quadro clínico. Resultados: Foi possível adotar o protocolo em dias alternados durante pelo menos 30 dias em 71,43% dos animais. As diferenças encontradas não foram estatisticamente significativas entre as médias de CADESI-04 e grau de prurido dos dois grupos no Dia 0 e no end-point. Também não foram encontradas diferenças entre os períodos de tempo médios sob o tratamento em dias alternados. Conclusões: Existe potencial neste protocolo em dias alternados que permite reduzir os custos mensais para metade, possibilitando um maior acesso a esta ferramenta terapêutica inovadora, segura e muito eficaz, mas também dispendiosa. Não parece existir benefício, em termos de redução da dose de oclacitinib, na introdução de prednisolona no início do tratamento.

Canine atopic dermatitis (CAD) is a chronic inflammatory skin disease and has a high frequency among dermatological diseases. The interaction of genetic factors, skin and environmental conditions affect the expression of the disease, developing a complex pathology. Current multimodal treatment has numerous adverse effects and variations in its efficacy and safety, demonstrating the need to develop safe and effective therapeutic resources for patients with CAD. Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent cells, with special characteristics, such as self-renewal, immunomodulatory properties, and de-differentiation, making them useful for several clinical problems. The discovery of the immunosuppressive effect of MSCs on T cells has opened the potential for new perspectives with its use as a therapeutic agent for immune diseases, such as CAD. The scarce number of research using the MSC as a treatment for CAD result in the lack of knowledge about the benefits and possible protocols to be followed for the use of this cell therapy. In this review, we highlighted the clinical studies and potential biological mechanisms of MSC-based cell therapy effects attenuating canine atopic dermatitis compared to conventional treatment, which might lead to a safe improvement of the animal’s clinical condition in a short period without causing adverse effects. RESUMO A dermatite atópica canina (DAC) é uma doença inflamatória crônica da pele e tem alta frequência entre as doenças dermatológicas. A interação de fatores genéticos, pele e condições ambientais afetam a expressão da doença, desenvolvendo uma patologia complexa. O tratamento multimodal atual apresenta inúmeros efeitos adversos e variações em sua eficácia e segurança, demonstrando a necessidade de desenvolver recursos terapêuticos seguros e eficazes para pacientes com DAC. As células-tronco mesenquimais (CTM) são células multipotentes, com características especiais, como auto renovação, propriedades imunomoduladoras e desdiferenciação, tornando-se úteis para diversos problemas clínicos. A descoberta do efeito imunossupressor das CTMs sobre as células T abriu o potencial para novas perspectivas com sua utilização como agente terapêutico para doenças imunológicas, como a DAC. O escasso número de pesquisas utilizando o MSC como tratamento para DAC resulta no desconhecimento dos benefícios e dos possíveis protocolos a serem seguidos para a utilização dessa terapia celular. Nesta revisão, destacamos os estudos clínicos e os potenciais mecanismos biológicos dos efeitos da terapia celular baseada em MSC que atenuam a dermatite atópica canina em comparação com o tratamento convencional, podendo levar a uma melhora segura da condição clínica do animal em um curto período, sem causar efeitos adversos.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária ABSTRACT - The use of medical cannabis in veterinary species is an area of growing interest, largely due to the therapeutic benefits observed in human medicine and the ever-closer bond between humans and their pets. Yet, there is very little research on the effects of cannabis in animals and the legal status for veterinary drugs containing cannabis is unclear. Veterinarians play a pivotal role in advising tutors, making it important to characterize the panorama of the Portuguese veterinary profession in the face of these new therapies. This study used three anonymous online surveys to evaluate the attitudes, beliefs and knowledge about medical cannabis among veterinary physicians, veterinary students and owners of dogs with canine atopic dermatitis (CAD). A secondary goal was to recruit patients for a future clinical trial on the use of cannabis as an adjunctive therapy to CAD. There were 138 responses on the veterinarians’ survey, 331 on the students’ survey and 358 on the atopic dog owners’ survey. Veterinarians didn’t feel very knowledgeable concerning the differences between marijuana and hemp or the toxic effects of both marijuana and hemp, but most felt confident about the therapeutic uses of hemp. Most vets and students believed cannabis could be useful in veterinary medicine, while owners were unsure. Over 60% of veterinarians claimed to have experience with medical cannabis in dogs, and the conditions for which they prescribed it the most were chronic pain, anxiety and inflammation. Only 6% of the owners had already purchased a cannabis product for their pet, most frequently for a dermatological condition, anxiety or chronic pain. Of those, most said they had acquired the product on the internet and the top reason for purchase was that it was prescribed by a vet. Both owners and vets perceived the products as moderately or highly effective and only 10% reported mild side effects. Over half of the veterinarians had a low level of concern regarding the safety and side effects of cannabis, while most owners were moderate or highly concerned. Both veterinarians and students were highly supportive of veterinary training and research on medical cannabis. 204 emails were collected from owners potentially interested in participating on the clinical trial on the use of cannabis in CAD. Most participants agreed that medical cannabis may offer benefits in veterinary medicine and were supportive of further clinical research. Still, clinical trials evaluating the efficacy and safety of cannabis in veterinary species are urgently needed. It is imperative that veterinarians and students receive formal training on medical cannabis to properly advise their clients. RESUMO - O uso de cannabis medicinal em medicina veterinária é uma área de crescente interesse, principalmente devido aos benefícios observados em medicina humana e ao estreito laço afetivo entre tutor e animal de companhia. No entanto, escasseiam estudos sobre os efeitos da cannabis medicinal em animais, para além de que o seu enquadramento legal é ainda pouco claro. O médico veterinário desempenha um papel fulcral no aconselhamento dos detentores, tornando-se importante caracterizar o panorama da classe médico-veterinária portuguesa face a estas novas terapêuticas. Assim, foram desenvolvidos três questionários, online e anónimos, direcionados a médicos veterinários, estudantes de medicina veterinária e detentores de cães com dermatite atópica canina (CAD), de forma a avaliar as suas atitudes, crenças e conhecimentos acerca da cannabis medicinal. O último grupo foi escolhido com o objetivo secundário de recrutar pacientes para um futuro ensaio clínico em CAD. Obtiveram-se 138 respostas de veterinários, 331 de estudantes e 358 de detentores. Os veterinários revelaram falta de conhecimento quanto às diferenças entre marijuana e cânhamo e aos seus efeitos tóxicos. A maioria, no entanto, considerou saber bastante sobre as aplicações terapêuticas do cânhamo. A maior parte dos veterinários e estudantes considerou que a cannabis pode ser útil em medicina veterinária, ao passo que os detentores se mostraram mais reticentes. Mais de 60% dos veterinários disse ter experiência no uso de cannabis no cão, principalmente para dor crónica, ansiedade e inflamação. Apenas 6% dos detentores disse já ter adquirido um produto à base de cannabis para o seu cão e as condições mais citadas foram problemas dermatológicos, ansiedade e dor crónica. Destes, a maioria disse ter comprado o produto na Internet e o principal motivo foi ter sido prescrito pelo veterinário. Tanto veterinários como detentores consideraram os produtos moderada ou altamente eficazes, e apenas 10% relatou efeitos secundários leves. A generalidade dos veterinários mostrou-se pouco preocupada acerca da segurança e efeitos secundários da cannabis, contrariamente aos detentores. Tanto veterinários como estudantes apoiaram fortemente a formação médico-veterinária e investigação clínica em cannabis medicinal. Foram recolhidos 204 emails de detentores potencialmente interessados em integrar o ensaio clínico em CAD. A generalidade dos participantes considerou que a cannabis pode oferecer benefícios em medicina veterinária. Ainda assim, são urgentes ensaios clínicos que avaliem a eficácia e segurança da cannabis em espécies veterinárias. É imperativo que veterinários e estudantes recebam formação em cannabis medicinal, de forma a aconselhar adequadamente os detentores. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O oclacitinib é um inibidor seletivo da enzima Janus cinase que tem como alvo a interleucina-31, principal mediadora do prurido, sendo considerado um fármaco de espectro de ação moderado, de grande eficácia em termos do alívio sintomático da dermatite atópica (DA) canina, aquando da sua utilização diária. No entanto, apesar de 92,5% dos tutores de cães com DA estarem satisfeitos ou muito satisfeitos com o tratamento com oclacitinib, o seu custo constituí um foco de preocupação para 75% deles, sendo que 42,5% referiram ter de limitar outras despesas para poderem pagar o tratamento do seu cão. No presente estudo pretendeu-se avaliar a possibilidade de adotar um protocolo terapêutico alternativo administrando oclacitinib em dias alternados, o que reduziria para metade os custos da terapêutica. Secundariamente, pretendeu-se ainda avaliar se existe vantagem em associar glucocorticóides por via oral (G), fármacos pouco dispendiosos e de uma maior abrangência de ação, no início deste novo protocolo com oclacitinib. Foi realizado um estudo prospetivo, aleatório, emparelhado, duplamente cego e controlado com placebo, onde foram incluídos 16 cães com diagnóstico de DA, alocados nos grupos P (n=7; placebo) e G (n=9). Os animais foram periodicamente avaliados quanto à gravidade lesional (CADESI-04) e grau de prurido (VAS) no D-30, no D0 e no end-point. O estudo comportou duas fases distintas e sucessivas. Na primeira fase, foi administrado oclacitinib (0,4-0,6 mg/kg, 14 dias BID, depois 16 dias SID) por via oral em ambos os grupos de acordo com o protocolo padrão. No entanto, nos primeiros 7 dias, foi administrada prednisolona (1 mg/kg SID) por via oral ao grupo G e um placebo ao grupo P no mesmo regime. Na segunda fase, todos os animais que responderam satisfatoriamente ao tratamento anterior realizaram o mesmo tratamento, mantendo o oclacitinib, administrado apenas em dias alternados. Os animais mantiveram o protocolo descrito até à recidiva do seu quadro clínico (end-point). Foi possível adotar o protocolo em dias alternados num período de tempo de pelo menos 30 dias em 71,43% dos animais. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas quer entre as médias de CADESI-04 dos 2 grupos no D0 (p=0,874) e no end-point (p=0,332), quer nos valores de prurido no D0 (p=0,714) e no end-point (p=0,267). Também não foram encontradas diferenças significativas entre os períodos de tempo médios de tratamento em dias alternados dos animais dos 2 grupos (p=0,467). Este protocolo em dias alternados apresenta um potencial que permite reduzir custos mensais a metade, possibilitando um maior acesso a esta ferramenta terapêutica inovadora, segura e muito eficaz, mas também dispendiosa. Não parece existir benefício, para a redução da dose de oclacitinib, pela administração de prednisolona no início do tratamento. ABSTRACT - Oclacitinib is a Janus kinase inhibitor with activity against IL-31, one of the main pruritus mediators. This drug is considered to have a semi-broad targeting capacity, but with great efficacy in terms of resolution of clinical symptoms of canine atopic dermatitis (AD), when used daily. However, despite 92,5% of the owners of dogs with AD being satisfied or very satisfied with the treatment with oclacitinib, the cost of the drug is a concern for 75%, with 42,5% mentioning that they had to limit other expenses to afford the treatment of their dog. Therefore, its cost may limit its use. This study’s goal is to evaluate the possibility of adopting an alternative therapeutic protocol with oclacitinib on alternate days, which would reduce maintenance costs to half, and to evaluate whether there is an advantage in administering oral glucocorticoids (G), inexpensive drugs with a broader spectrum, at the beginning of this protocol with oclacitinib. This prospective study was conducted as a paired, randomised, placebo-controlled, double-blinded clinical trial. For this study, private-owned dogs diagnosed with AD were randomly allocated in two groups, group P (n=7; placebo) and group G (n=9). Dogs were periodically evaluated for skin lesions CADESI-04 and pruritus (VAS) at D-30, D0 and end-point. This study comprised two distinct and successive phases. In the first phase of the study, oclacitinib was given orally to both groups according to the standard protocol (0,4 mg/kg, BID for 14 days and SID thereafter 16 days). However, in the first 7 days, group G was given oral prednisolone (1 mg/kg SID) and group P was given a placebo following the same regimen. In the second phase of the study, all the animals that had succeeded on the first phase underwent the same protocol with oclacitinib, now given every other day until complete relapse of the disease (end-point) It was possible to adopt the protocol in which oclacitinib was given every other day over a period of time of at least 30 days in 71,43% of the animals. There were no significant differences either between the mean values of CADESI-04 of the two groups at D0 (p=0,874) and the end-point (p=0,332), and between the mean values of pruritus at D0 (p=0,714) and the end-point (p=0,267). There were also no statistically significant differences between the average alternate days treatment times between the animals in the two groups (p=0,467). The alternate days treatment protocol has potential in allowing monthly costs to be reduced by half, giving greater access to this innovative, safe and very effective, but also expensive, therapeutic tool. There seems to be no benefit, in matters of reducing the oclacitinib dose, in adding prednisolone at the beginning of the treatment. CEVA Saúde Animal (Algés, Portugal) N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A conjuntivite alérgica canina (CAc) é a causa mais comum de conjuntivite em cães, e integra frequentemente a sintomatologia da dermatite atópica canina (DAc). Com este estudo pretende-se contribuir para uma melhor caracterização clínica e imunológica da CAc através da avaliação da expressão da IL-6, TNF-alfa e IL-12 nesta doença. Para este fim recorreu-se a um grupo de animais diagnosticados concomitantemente com CAc e DAc no HEV-FMV (n=20) e a um grupo controlo (n=21). Os pacientes foram caracterizados clinicamente recorrendo a um score de CAc e ao sistema de classificação Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index – fourth version (CADESI-04) e foram realizadas biópsias conjuntivais. A partir destas amostras fez-se a quantificação relativa da expressão génica das três interleucinas por qRT-PCR. Os resultados foram calculados através do método 2-DeltaCt. Para comparar a expressão génica das interleucinas entre o grupo atópico e o grupo controlo utilizou-se o Welch Two Sample t-test. De seguida, aplicou-se a correlação de Spearman para avaliar a correlação entre a expressão das interleucinas e o score de CAc, e procedeu-se da mesma forma para os valores relativos ao CADESI-04. Os resultados obtidos pela técnica de qRT-PCR permitiram verificar uma sobrexpressão génica de IL-6 e IL-12, de 291.48 (p=1.306e-09) e 4.85 (p=0.00033) folds, respetivamente, nos animais com conjuntivite alérgica. Apesar de a expressão média de TNF- Alfa estar aparentemente aumentada no grupo experimental (7.33 folds), não foi possível demonstrar uma diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (p=0.18). Os resultados sugerem que quanto maior o score de CAc maior a expressão génica de TNF-Alfa (Rho=-0.57; p=0.02) e IL-12 (Rho=-0.50; p=0.049). Não se verificou nenhuma correlação entre os níveis de expressão génica das interleucinas e os valores de CADESI-04. Com este estudo verificou-se um aumento das citoquinas pró-inflamatórias na CAc, importantes na resposta imunitária inata, e uma ativação de uma resposta Th1, apontando assim a IL-6 e IL-12 como potenciais alvos de imunoterapia nos animais com esta doença. Os resultados sugerem ainda que a expressão génica destas três interleucinas possa ser uma ferramenta útil no diagnóstico e classificação da CAc, mas não da DAc. ABSTRACT - CONTRIBUTION TO IMMUNOLOGICAL AND CLINICAL CHARACTERIZATION OF CANINE ALLERGIC CONJUNCTIVITIS - Canine allergic conjunctivitis (cAC) is the most common type of conjunctivitis in dogs and is often included in the symptoms of canine atopic dermatitis (cAD). With this study we aimed to contribute to improve the clinical and immunological characterization of cAC through the evaluation of IL-6, TNF-Alfa and IL-12 expression in this disease. For this purpose, conjunctival biopsies were performed on a group of 20 animals diagnosed with both cAC and cAD and a control group (n=21). From those samples, a relative quantification of the interleukin’mRNA expression was performed by qRT-PCR. The results were obtained through the 2-DeltaCt method. To compare interleukin gene expression between the atopic group and the control group Welch Two Sample t-test was used. Then Spearman correlation was applied to evaluate the correlation between interleukin gene expression and cAC clinical score, the same procedure was used for the CADESI-04 values. The results provided by qRT-PCR showed a significant gene overexpression of respectively 291.48 (p=1.306e-09) and 4.85 (p=0.00033) folds on IL-6 and IL-12 in dogs with allergic conjunctivitis. Even though the average expression of TNF-Alfa seems apparently higher in the experimental group (7.33 folds), there were no statistical significant differences between the atopic and the healthy group (p=0.18). The results suggest that the higher the cAC score, the greater the TNF-Alfa (Rho=-0.57; p=0.02) and IL-12 (Rho=-0.50; p=0.049) gene expression. There was no correlation between the interleukin gene expression levels and the CADESI-04 values. The results indicate an increase of pro-inflammatory cytokines in cAC, which are strongly involved on the innate immune response, and a Th1 subset activation, identifying IL-6 and IL-12 as potential targets for immunotherapy. This study suggests that the gene expression of those three interleukins may be an useful tool for cAC diagnose and classification, but not for cAD. N/A

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2019. A dermatite atópica canina (DA) é uma doença inflamatória crônica da pele, pruriginosa de origem genética e com envolvimento de fatores ambientais. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do tratamento com células tronco alógenas derivadas de tecido adiposo de cães (CTMs) em cães com DA. Dezesseis cães foram selecionados e divididos em três grupos, sendo leve, moderado e severo de acordo com o CADESI4. O protocolo preconizado neste experimento foi 2x106/kg de peso corporal de CTMs pela via endovenosa, com intervalos de aplicações de 21 dias. Foram avaliados os parâmetros de grau de prurido pela escala analógica visual (VAS), escore do CADESI 4 (Canine Atopic Dermatitis Extend & Severity Index), histopatológicos da pele, hematológicos, bioquímicos, efeito pirogênico das CTMs e mensuração da espessura da epiderme. Houve diferença significativa na diminuição da espessura da epiderme nos grupos moderado e severo. Os parâmetros hematológicos, bioquímicos e as temperaturas corporais se mantiveram dentro da normalidade para a espécie, sem efeitos colaterais. O grau de prurido diminuiu e houve diminuição da hiperplasia da epiderme e do edema superficial. Canine atopic dermatitis (AD) is a pruritic chronic inflammatory skin disease, of genetic origin, that involves environmental factors. The aim of the present study is to evaluate the efficacy of treatment with allogeneic stem cells derived from adipose tissue of dogs (CTMs) in dogs with AD. Sixteen dogs were selected and divided into three groups, which were classified as mild, moderate and severe according to CADESI4. The protocol recommended in this experiment was 2x106/kg body weight of CTMs endovenous, with intervals of applications of 21 days. The parameters of pruritus were evaluated by visual analogue scale (VAS), CADESI 4 (Canine Atopic Dermatitis Extend & Severity Index), histopathological findings of the skin, hematological, biochemical, pyrogenic effect of CTMs and measurement of epidermal thickness. There was a significant difference in the reduction of epidermal thickness in the groups classified as moderate and severe. Hematological, biochemical and body temperature parameters remained within normal limits for the species, with no side effects. The study observed a decrease on the degree of pruritus and also in epidermal hyperplasia and superficial edema.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A dermatite atópica canina é uma doença que afeta um grande número de animais, sendo que se estima que 10 a 15% da população canina esteja afetada. É uma doença de etiologia multifatorial e de apresentações clínicas diversas, embora haja uma distribuição lesional característica. Recentemente foi demonstrado que o stress oxidativo apresenta um papel importante na dermatite atópica no Homem e também que os níveis serológicos de vitamina E (α-tocoferol), importante antioxidante, encontram-se alterados em cães com a doença. É expectável que cães com a doença menos controlada apresentem um maior stress oxidativo e, assim, níveis serológicos de α-tocoferol inferiores. No presente estudo, foram acompanhados cães com dermatite atópica sob terapêutica com ciclosporina, monitorizados quanto ao estadio clínico através da classificação do prurido, do CADESI-04 e do teor de α-tocoferol em intervalos de 3 semanas. Tanto quando sabemos, este foi o primeiro estudo que avaliou o teor de α-tocoferol ao longo do tempo. Os resultados apresentados revelam que cães saudáveis apresentam um teor de α-tocoferol superior a canídeos com dermatite atópica, o que espelha uma resposta adaptativa que leva à distribuição de α-tocoferol no tecido alvo, reduzindo a sua concentração sérica. Foi possível também sugerir uma associação entre o aumento plasmático de α-tocoferol e a diminuição da classificação do prurido. Este é o sinal clínico da doença que mais afeta a qualidade de vida e contribui indiretamente para o agravamento dos defeitos na barreira cutânea consequentemente facilitando a presença de infeções e o aumento do estado inflamatório, aumentando o stress oxidativo. O controlo do prurido com recurso à ciclosporina resulta então também num maior equilíbrio no consumo de antioxidantes. Não foram encontradas diferenças significativas que permitissem concluir a existência de uma relação entre o teor de α-tocoferol e o CADESI-04. Este estudo permite fundamentar a utilização do α-tocoferol como agente objetivo de monitorização da dermatite atópica canina, o que pode ser particularmente importante se aplicado em estudos de monitorização clínica. Levanta-se ainda a possibilidade lógica do controlo do stress oxidativo, com recurso à suplementação com antioxidantes, como a vitamina E. ABSTRACT - Oxidative stress in canine atopic dermatitis: vitamin E as a biomarker during cyclosporine therapeutics - Canine atopic dermatitis is a disease that affects a large number of animals, as 10 to 15% of the canine population is likely to be affected. It’s a disease with multifactorial aetiology and multiple clinical presentations, although there is a characteristic lesion distribution. It has recently been shown that oxidative stress plays a major role in human atopic dermatitis and the important antioxidant vitamin E (α-tocopherol) plasmatic levels are altered in dogs with the disease. Dogs with less controlled disease are expected to exhibit increased oxidative stress and thus lower α-tocopherol serologic levels. In the present study, dogs with atopic dermatitis were monitored during cyclosporine treatment regarding atopic dermatitis severity using accepted criteria namely: pruritus score and CADESI-04 and also α-tocopherol levels at 3-week intervals. As far as we know, this is the first study to assess α-tocopherol levels over time in canine atopic dermatitis. The results show that healthy dogs have a superior α-tocopherol plasmatic level than dogs with atopic dermatitis, which reflects an adaptive response that leads to α-tocopherol distribution in target tissues, reducing its serological concentration. It was possible to suggest a relation between the increase of α-tocopherol and the reduction of the pruritus score. Pruritus is the hallmark of atopic dermatitis and profoundly affects the life quality and indirectly contributes to skin barrier defects deterioration. This will contribute to yeast and bacteria overgrowth and to increase the inflammatory status, therefore increasing oxidative stress. Controlling pruritus with cyclosporine also results in a better balance regarding antioxidants consumption. No significant differences were found between α-tocopherol levels and CADESI-04 for any time point. This study supports the use of α-tocopherol as an objective mean to monitor canine atopic dermatitis in clinical studies. It’s further suggested that supplementation with antioxidants, such as vitamin E, is relevant for the control of oxidative stress. N/A

Mesenchymal Stem Cells (MSCs) are multipotent cells, with capacity for self-renewal and differentiation into tissues of mesodermal origin. These cells are possible therapeutic agents for autoimmune disorders, since they present remarkable immunomodulatory ability. The increase of immune-mediated diseases in veterinary medicine has led to a growing interest in the research of these disorders and their medical treatment. Conventional immunomodulatory drug therapy (such as glucocorticoids or cyclosporine) is associated with numerous side effects that limit its long-term use, leading to the need for developing new therapeutic strategies, which are more effective and safe. The aim of this study is to perform a critical review about the therapeutic potential of these cells in the treatment of some auto-immune disorders (canine atopic dermatitis, feline chronic gingivostomatitis, inflammatory bowel disease and feline asthma) compared with their conventional treatment. MSC-based therapy in autoimmune diseases has been showing that this approach can improve clinical signs or even cause remission in most animals, with the exception of canine atopic dermatitis in which no improvement was observed. Although MSCs present a promising future in the treatment of most of these disorders, the outcome variability in some clinical trials has led to the current controversy among authors regarding their efficacy. MSCs-based therapy is currently requiring a deeper and detailed analysis that allows its standardization and better adaptation to the intended therapeutic results, in order to overcome current limitations in future trials. As células estaminais mesenquimatosas (MSCs) são células multipotentes, com capacidade de auto-renovação e diferenciação em diferentes tecidos de origem mesodérmica. Estas células constituem possíveis agentes terapêuticos para doenças auto-imunes, uma vez que apresentam uma notável capacidade imunomoduladora. As doenças imunomediadas têm alcançado especial interesse em medicina veterinária, devido ao aumento da sua ocorrência na prática clínica. A maioria destas doenças é tratada de forma convencional com terapias imunomodeladoras (como glucocorticóides ou ciclosporina), estando associadas a uma série de efeitos adversos que limitam o seu uso a longo prazo, levando à necessidade de desenvolver novas estratégias terapêuticas mais eficazes e seguras. Este estudo pretende realizar uma revisão crítica acerca do potencial terapêutico destas células no tratamento de algumas doenças auto-imunes (dermatite atópica canina, gengivostomatite crónica felina, doença inflamatória intestinal e asma felina) em comparação com o tratamento convencional estabelecido para as mesmas. De acordo com ensaios clínicos realizados para estas doenças, a terapia baseada em MSCs permitiu a melhoria dos sinais clínicos ou mesmo a sua remissão total na maioria dos animais, com excepção da dermatite atópica canina na qual não se observaram melhorias. Apesar das MSCs apresentarem um futuro promissor no tratamento da maioria destas doenças, a variabilidade nos resultados em alguns ensaios clínicos levaram à actual controvérsia entre autores relativamente à sua eficácia. Atualmente a terapia baseada em MSCs carece de uma análise mais profunda e detalhada, tendo em vista a sua padronização e melhor adequação aos resultados terapêuticos pretendidos, de forma a superar as suas limitações em estudos futuros.

The objective of the study was to evaluate whether allergenic extracts of five house dust and storage mite species standardized for humans might be used for the diagnosis of canine atopic dermatitis (CAD). Extracts of Dermatophagoides pteronyssinus (Pyroglyphidae), D. farinae (Pyroglyphidae), Blomia tropicalis (Glycyphagidae), Lepidoglyphus destructor (Glycyphagidae) and Tyrophagus putrescentiae (Acaridae) were evaluated by intradermal testing in 20 healthy dogs (control) and 25 dogs with allergic dermatitis. A significant difference in the response was observed between the two groups (p

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A dermatite atópica canina (DAc), doença cutânea com grande expressão no Cão, tem um forte impacto na qualidade de vida dos pacientes. A imunoterapia alergénio-específica (ITAE), que tem uma eficácia entre os 60 e 80% e uma baixa incidência de efeitos secundários, é a única forma de tratamento da DAc capaz de induzir um estado de verdadeira remissão clínica. Os protocolos rápidos permitem abreviar a fase de indução e assim obter uma resposta clínica mais precoce. O estado de tolerância imunitária induzido pela ITAE é alcançado através de um desvio para uma resposta de tipo TH1, produção de outras classes de imunoglobulinas e estimulação de linfócitos T reguladores. Os mediadores inflamatórios produzidos são determinantes para o sucesso terapêutico. A eficácia de um protocolo de ITAE pode ser avaliada através do valor de CADESI-03, grau de prurido e pelos níveis séricos de mediadores inflamatórios. Destes, pode destacar-se a IL-10, citocina muito importante na homeostasia imunitária em indivíduos saudáveis e que desempenha um papel crucial na maioria dos mecanismos de acção da ITAE. Neste trabalho, 14 cães atópicos foram submetidos a um protocolo rápido de ITAE e reavaliados passadas 4 e 12 semanas. Diferenças estatisticamente significativas no grau de prurido (p≤0,05) foram registadas 4 semanas após o início do tratamento e às 12 semanas para o valor de CADESI-03 (p≤0,05). As concentrações séricas de IL-10 revelaram-se inconclusivas. A resposta à ITAE parece ser tão mais precoce quanto mais abreviada for a fase de indução do protocolo. ABSTRACT - EVALUATING THE EFFECTIVNESS OF AN RUSH ALLERGEN-SPECIFIC IMMUNOTHERAPY PROTOCOL IN ATOPIC DOGS - Canine atopic dermatitis (cAD), is a very prevalent skin disease in dogs and has a strong impact on patient quality of life. Allergen-specific immunotherapy (ASIT) is efficacious in about 60 to 80% and presents a low incidence of side effects. Also, is the only treatment for cAD with ability to induce a state of true clinical remission. Rush protocols allow shorter induction phases and thereby earlier clinical responses. The state of immune tolerance induced by ASIT is achieved by a shift to a TH1 like response, production of other immunoglobulin classes and stimulation of regulatory T lymphocytes. The produced inflammatory mediators are crucial to therapeutic success. The effectiveness of an ASIT protocol can be assessed by the CADESI-03 score, pruritus level and serum levels of inflammatory mediators. In particular we can highlight IL-10, important cytokine in the immune homeostasis in healthy individuals, which plays a crucial role in the most ASIT mechanisms of action. In this study, 14 atopic dogs performed a rush ASIT protocol and were re-evaluated after 4 and 12 weeks. Statistically significant differences in pruritus level (p ≤ 0.05) were recorded 4 weeks after treatment initiation and after 12 weeks for the CADESI-03 score (p ≤ 0.05). Serum levels of IL-10 were inconclusive. Response to ASIT seems to be achieved earlier with the shorten induction phase of the rush protocol.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A atopia é uma doença frequente no cão, mas pouco se sabe acerca do envolvimento ocular, desconhecendo-se a prevalência e o impacto da conjuntivite alérgica (CA) na dermatite atópica canina (DAc). O teste de provocação conjuntival (TPC) é um modelo útil ao seu estudo, sendo utilizado na avaliação da eficácia de várias formas de tratamento, incluindo a imunoterapia alergénio-específica (ITAE). Através da realização de TPC em pacientes atópicos com sensibilização a Dermatophagoides farinae (Df) pretendeu-se avaliar a contribuição deste alergénio nas manifestações oculares e a eficácia da imunoterapia alergénio específica rush (ITAEr) na remissão dos sinais oculares e cutâneos. Foram incluídos no estudo 15 pacientes (n=15) com diagnóstico de DAc e sinais compatíveis com CA. Numa primeira fase todos os animais foram submetidos a TPC para Df e avaliados quanto ao prurido e quanto à gravidade das lesões dermatológicas através do Canine Atopic Dermatitis Extend and Severity Index (CADESI-03). O TPC foi realizado com doses crescentes do alergénio (0.08, 0.4 e 2 BU/mL) até ao aparecimento de um score positivo (≥6), dado pelo somatório das classificações de hiperémia conjuntival, quemose, epífora e prurido ocular avaliadas de 0 a 3 consoante a sua gravidade (ausente, suave, moderado ou grave, respectivamente). Ao prurido foi permitido um grau adicional de 4 (muito grave). O alergénio foi instilado no olho direito (olho teste) e o olho esquerdo serviu de controlo. O teste foi considerado inválido sempre que o olho controlo apresentou uma pontuação ≥6. Na segunda fase do estudo, 2 meses após o início da ITAE rush (ITAEr), os pacientes foram sujeitos a novo TPC e os seus CADESI-03 e escala de prurido reavaliados. Os animais não fizeram qualquer tipo de tratamento, que não a ITAEr, durante o período que decorreu entre fases. As classificações finais relativas aos TPC, prurido e CADESI-03 foram posteriormente comparadas pelo teste de Wilcoxon para amostras emparelhadas (p

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária Nos cães com dermatite atópica, as infeções cutâneas recorrentes causadas pelo Staphylococcus pseudintermedius são extremamente comuns. Estudos prévios demonstraram que cães atópicos com piodermite recorrente têm títulos mais elevados de imunoglobulina E anti-Staphylococcus no soro. Os principais objetivos deste estudo foram definir qual a concentração ideal de extrato de alergénios de S. pseudintermedius a utilizar nos testes intradérmicos de cães atópicos e posteriormente determinar a frequência de hipersensibilidade cutânea ao S. pseudintermedius em cães atópicos com história de infeção cutânea recorrente. Para isso, realizaram-se testes intradérmicos, onde se testaram diferentes concentrações de extrato de um S. pseudintermedius resistente à meticilina (MRSP), estirpe 5819/10. Esta estirpe foi isolada de um cão com piodermite profunda e apresentava os seguintes genes de virulência: luk-I, se-int, siet, speta, ebpS e spsL. As concentrações utilizadas foram 2 μg/ml, 20 μg/ml e 200 μg/ml, assim como um controlo positivo (fosfato de histamina 0.001%) e um controlo negativo (PBS 0.9%). Foram incluídos neste estudo, vinte e três cães saudáveis e vinte e quatro cães atópicos com infeção cutânea recorrente por S. pseudintermedius, diagnosticados por citologia cutânea e/ou cultura bacteriana. Dos 23 cães saudáveis presentes neste estudo, 14 (61%) apresentaram reação positiva na concentração de 200 μg/ml. Assim sendo, é bastante provável que a concentração de 200 μg/ml seja irritante e por isso resulte em reações falso-positivas. A concentração de 20 μg/ml foi a concentração mais indicada para ser usada no diagnóstico de hipersensibilidade ao S. pseudintermedius em cães atópicos. Posteriormente, foram realizados testes intradérmicos em 24 canídeos atópicos com piodermite e/ou otite bacteriana recorrente com a concentração de 20 μg/ml; quatro destes animais apresentaram reações positivas nesta concentração, o que parecer indicar a existência de reações de hipersensibilidade imediata a componentes do S. pseudintermedius. No entanto, limitações que envolviam o extrato impediram a obtenção de resultados reprodutíveis e uniformes. Acreditamos que a imunoterapia específica para esta bactéria pode ser benéfica para o tratamento destes pacientes, o que torna fundamental o diagnóstico de hipersensibilidade ao S. pseudintermedius. Nesse sentido, deverão ser realizados mais estudos, de modo a obter um extrato fidedigno que permite alcançar consistência e reprodutibilidade em ambiente clínico e assim melhorar a qualidade dos resultados obtidos nos testes intradérmicos. ABSTRACT - THE USE OF STAPHYLOCOCCUS PSEUDINTERMEDIUS EXTRACT IN SKIN ALLERGY TESTS ON THE DOG – A PRELIMINARY STUDY - In dogs with atopic dermatitis, recurrent skin infections caused by Staphylococcus pseudintermedius are extremely common. Previous studies demonstrated that atopic dogs with recurrent pyoderma have higher titters of anti-Staphylococcus immunoglobulin E. The main objectives of this study were to define which is the optimal concentration of allergen extract of S. pseudintermedius for intradermal tests use in atopic dogs and subsequently determine the frequence of skin hypersensitivity to S. pseudintermedius in atopic dogs with a history of recurrent skin infection. For this purpose, intradermal tests were carried out with different concentrations of the extract from a methicillin-resistant S. pseudintermedius (MRSP), strain 5819/10. This strain was isolated from a dog with deep pyoderma and presented the following virulence genes: luk-I, se-int, siet, speta, ebpS and spsL. The concentrations used were 2 μg/ml, 20 μg/ml and 200 μg/ml, a positive control (0.001 % histamine phosphate) and a negative control (PBS 0.9 %). Twenty-three healthy dogs and twenty-four atopic dogs with recurrent pyoderma by S. pseudintermedius, diagnosed by skin cytology and/or bacterial culture were included in this study. Of the 23 healthy dogs, 14 (61 %) showed a positive reaction in the concentration of 200 μg/ml. Therefore, it is quite likely that the concentration of 200 μg/ml is irritant and so resulted in false-positive reactions. A concentration of 20 μg/ml appeared to be more suitable for use in the diagnosis of S. pseudintermedius hypersensitivity in atopic dogs. Subsequently, intradermal tests in 24 atopic dogs with recurrent pyoderma with the concentration of 20 μg/ml were performed. Four of these animals showed a positive reaction in this concentration, which seems to indicate the existence of an immediate hypersensitivity reaction to components of S. pseudintermedius. However, limitations involving the extract prevented obtaining reproducible and uniform results. We believe that specific immunotherapy for these bacteria can be beneficial for the treatment of atopic patients, which makes the diagnosis of S. pseudintermedius hypersensitivity fundamental. However, more studies should be conducted in order to obtain a reliable extract that can achieve consistency and reproducibility in a clinical environment and thus improve the quality of results obtained in intradermal tests.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária Canine atopic dermatitis (CAD) is a multifactorial disease involving a type I hypersensitivity to allergens, cutaneous barrier defects, microbial infections and other flare factors. It is “an inflammatory and pruritic skin disease, with genetic predisposition and characteristic clinical features associated with IgE antibodies most commonly directed against environmental allergens”. The clinical signs of CAD frequently manifest from 6 months to 3 years of age. Some breeds, such as Bull Terrier, Cocker Spaniel, English Bulldog, German Shepherd Dog, Golden Retriever, Labrador Retriever, Pug, Shar Pei, West Highland White Terrier, Yorkshire Terrier, among others, seem to be at a higher risk of developing the disease. The lesions are typically distributed in the periocular skin, muzzle, ears, interdigital area, flexural joints of the extremities, axillae, abdomen, groin and perineum. The first clinical manifestation is usually pruritus with erythema, followed by secondary lesions, such as excoriations, self-induced alopecia, dry hair, hyperpigmentation, scaling and lichenification, which reflect chronic pruritus and inflammation, concurrent secondary infections and bacterial overgrowth. The diagnosis of the disease is based on the anamnesis, clinical signs, dermatological examination, exclusion of other pruritic skin diseases and allergy testing, with in vivo techniques, such as Intradermal Tests (IDT) or Skin Prick Tests (SPT), and in vitro methods, such as, allergen-specific IgE measurements. CAD has no cure, however it is possible to be controlled with multifactorial treatment, which may include allergen avoidance measures, allergen-specific immunotherapy (ASIT), improvement of the skin barrier function and anti-inflammatory therapy. The objective of this study was to determine if SPT technique was doable in dogs. Also, it was important to determine whether or not the standardized concentrations of the allergens used for human patients would cause irritant false positive skin reactions in healthy non-atopic dogs. Therefore, 22 healthy non-atopic dogs were tested with 15 aqueous allergens commercially available for use in human medicine. The results showed that all dogs had negative skin reactions to the concentrations available for each allergen tested. It was possible to conclude that the SPT were not only doable but they showed many advantages versus IDT, such as simplicity, rapidity, less discomfort, less irritation and safety, and also, that the concentrations used did not cause irritant false positive skin reactions in healthy dogs. Resumo – Testes Cutâneos Prick – Avaliação preliminar desta técnica no diagnóstico de sensibilização na dermatite atópica canina. - A dermatite atópica canina (DAC) é uma doença multifactorial que envolve uma hipersensibilidade de tipo I a alergénios, alterações da barreira cutânea, infecções microbianas entre outros factores ambientais. Constitui uma doença cutânea inflamatória e prurítica, com predisposição genética e sinais clínicos característicos associados a anticorpos IgE mais frequentemente direccionados contra alergénios ambientais. Os sinais clínicos da DAC manifestam-se frequentemente entre os 6 meses e os 3 anos de idade. Algumas raças, como Bull Terrier, Cocker Spaniel, Bulldog Inglês, Pastor Alemão, Golden Retriever, Labrador Retriever, Pug, Shar Pei, West Highland White Terrier, Yorkshire Terrier, entre outros, parecem estar em maior risco de desenvolver a doença. Existe uma distribuição lesional típica em certas regiões do corpo, como região periocular, focinho, pavilhões auriculares, zona interdigital, articulações das extremidades, axilas, abdómen, virilhas e períneo. O primeiro sinal clínico é o prurido com eritema, seguido de lesões secundárias, como escoriações, alopécia auto-induzida, pêlo de má qualidade, hiperpigmentação, seborreia seca e liquenificação, que reflectem prurido e inflamação crónicas, infecções secundárias concomitantes e sobrecrescimento bacteriano. O diagnóstico da doença é baseado na anamnese, sinais clínicos, exame dermatológico, exclusão de outras doenças de pele pruríticas e testes alérgicos, por técnicas in vivo, testes Intradérmicos ou testes Prick (também denominados “por picada”), ou por métodos in vitro, medição de IgE específica. A DAC não tem cura, no entanto, pode ser controlada através de um tratamento multifactorial, que pode incluir medidas de evicção alergénica, imunoterapia alergénio-específica, melhoramento da função da barreira cutânea e terapêutica anti-inflamatória. Este estudo teve como objectivo determinar se a técnica do teste cutâneo prick era exequível em cães. Foi, também, importante determinar se as concentrações padronizadas dos alergénios para os doentes humanos, provocavam reacções cutâneas falso positivas irritantes em cães saudáveis não-atópicos. Para isso, 22 cães saudáveis não-atópicos foram testados para 15 alergénios aquosos disponíveis comercialmente para utilização em medicina humana. Os resultados mostraram que todos os cães tiveram reacções cutâneas negativas para as concentrações disponíveis para cada alergénio testado. Foi possível concluir que os testes Prick não só eram exequíveis em cães, como mostraram muitas vantagens em comparação com os testes Intradérmicos, como simplicidade, rapidez, menor desconforto, menor irritação e maior segurança, e também, que as concentrações utilizadas não causaram reacções cutâneas falso positivas irritantes em cães saudáveis.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A dermatite atópica canina (DAc) é uma doença extremamente prevalente, com uma fisiopatologia complexa que pode levar a manifestações clínicas diversas e respostas diferentes às opções terapêuticas disponíveis. O prurido é o sinal clínico mais comum desta doença, promovendo uma diminuição significativa na qualidade de vida tanto dos animais como das famílias onde estão inseridos. A IL-31 é uma citocina com um papel importante na fisiopatologia da DAc, em particular na indução do prurido. O lokivetmab é um anticorpo monoclonal caninizado contra a IL-31, cuja utilização está indicada para o tratamento das manifestações clínicas da DAc. O presente estudo teve como objetivos a avaliação da eficácia do lokivetmab no tratamento da DAc e da segurança associada à sua utilização. Os 18 animais incluídos na amostra foram sujeitos a duas administrações de lokivetmab, com um intervalo de quatro semanas. Realizaram-se avaliações repetidas do grau de prurido (obtidas pelos cuidadores com recurso a uma escala visual) e das lesões cutâneas (classificadas por um médico veterinário com base no CADESI-4) dos animais ao longo de dois meses. A segurança do lokivetmab foi investigada por comparação dos resultados das análises sanguíneas realizadas no início e no fim do tratamento e pela análise dos efeitos adversos. Considerou-se como melhoria clinicamente significativa, tanto no grau de prurido como para o CADESI-4, uma redução dos valores em pelo menos 50%. O tratamento com lokivetmab levou à melhoria do grau de prurido em 76,47% dos cães da amostra. A sua ação na diminuição do grau de prurido pôde ser observada ao fim de 24 horas e manteve-se durante pelo menos quatro semanas na maioria dos animais. A melhoria clinicamente significativa nos valores de CADESI-4 verificou-se em 77,78% dos animais. Ao fim de duas semanas de tratamento, o efeito do lokivetmab já era evidente na redução dos valores do CADESI-4, que se mantiveram baixos até ao final dos dois meses. Tanto para o grau de prurido como para o CADESI-4, apesar de não se ter verificado uma redução de pelo menos 50% nos valores destes parâmetros na totalidade da amostra, observou-se a diminuição dos valores em todos os cães à exceção de um em cada uma das avaliações. Contudo, estes dois animais mantiveram-se controlados com valores baixos durante os dois meses. Não se verificaram alterações com significado clínico nas análises sanguíneas e registaram-se apenas três casos de vómito, sendo que um foi acompanhado de diarreia, que se resolveram sem necessidade de intervenção por parte do médico veterinário. As reduções estatisticamente significativas que se observaram tanto no grau de prurido como no valor do CADESI-4 ao longo de dois meses comprovam a eficácia do lokivetmab nesta doença. Do mesmo modo, a ausência de efeitos secundários com significado clínico dá ênfase à segurança desta opção terapêutica e promovem confiança na sua utilização. O lokivetmab apresenta-se, assim, como uma excelente opção terapêutica dada a sua elevada eficácia e segurança. ABSTRACT - EVALUATION OF THE USE OF LOKIVETMAB (CYTOPOINT) IN CANINE ATOPIC DERMATITIS - Canine atopic dermatitis (cAD) is an extremely prevalent disease, with a complex pathogenesis that can lead to diverse clinical manifestations and different response to the available therapeutic options. Pruritus is the most common clinical sign of this condition, significantly diminishing the animals’ and their owners’ quality of life. IL-31 is a cytokine with an important role in the pathogenesis of cAD, particularly in inducing pruritus. Lokivetmab is a caninized monoclonal antibody against IL-31, with its usage recommended for the treatment of the clinical manifestations of cAD. This study aims to evaluate the efficacy of lokivetmab in the treatment of cAD and the safety of its usage. The 18 animals enrolled were subjected to two injections of lokivetmab, within a four-week interval. The level of pruritus was continuously assessed (by the animals’ owners using a validated visual scale) and skin lesions (classified by veterinary clinicians using CADESI-4) over a period of two months. The safety of lokivetmab was investigated comparing the blood test results performed at the beginning and ending of the treatment and by evaluating adverse effects. A significant clinical improvement was defined as a 50% reduction of both pruritus and the CADESI-4 values. The treatment with lokivetmab lead to the improvement of the level of pruritus by 76.47% of the sample’s dogs. Its role in diminishing the pruritus could be observed after 24 h and continued throughout at least four weeks in most animals. The significant clinical improvement of the CADESI-4 levels was registered in 77.78% of the animals. After two weeks of treatment, the effect of lokivetmab was already evident in the reduction of CADESI-4 values, that were kept low until the end of the two-month period. Even though a reduction of at least 50% in the whole sample was not registered for both the pruritus level and the CADESI-4, a reduction of values was observed in all but one dog in each evaluation. However, these two animals maintained low levels throughout the two months. No significant clinical alterations were noticed in the blood tests, and only three cases of vomiting were registered, one of them followed by diarrhea, which resolved without clinical intervention. The statistically significant reductions that were observed, of both the level of pruritus and the value of the CADESI-4 throughout the two months, prove lokivetmab’s efficacy when treating this condition. At the same time, the absence of side effects with significant clinical importance, highlight the safety of this therapeutic option and promote trust in its use. Therefore, lokivetmab presents itself as an excellent therapeutic option due to its high efficacy and safety. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A Dermatite Atópica Canina (DAC) é uma doença dermatológica frequente, com uma apresentação clínica multifacetada e variável entre indivíduos. Previamente, foi demonstrada a existência de diferenças substanciais entre o fenótipo clínico específico de determinadas raças e uma população genérica de cães atópicos. Com o presente estudo pretende-se estabelecer o fenótipo específico do Cão de Água Português com DAC, caraterizando-se deste modo as suas inúmeras variáveis, nomeadamente: os locais preferenciais de desenvolvimento de lesões, os sinais clínicos mais frequentes e outras particularidades da doença. É igualmente pretendido determinar se a raça autóctone tem predisposição para a dermatite atópica assim como avaliar a influência de variáveis demográficas na expressão clínica da doença. Foi analisada uma amostra total de 99 Cães de Água Portugueses e aos exemplares diagnosticados como atópicos realizou-se uma descrição detalhada de todas as caraterísticas da expressão clínica da DAC. Para esse efeito, recorreu-se à utilização de um questionário baseado nos estudos que caraterizaram os fenótipos clínicos específicos para outras raças. Os resultados obtidos foram comparados com uma amostra genérica de cães atópicos, com o intuito de detetar as diferenças estatisticamente significativas. A prevalência de DAC na amostra estudada foi de 26,3% (IC95%=18,6-35,7%). Relativamente à distribuição das lesões pelas áreas corporais, destaca-se com uma particular relevância a afeção da região dorsolombar (38,5%) (p

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019 Made available in DSpace on 2020-05-04T22:58:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2019-12-30 Farmácia Almofariz, Hospital Garcia de Orta, Hospital Escolar Veterinário da Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária Human medicine research has undoubtedly shown that effective communication and patient education are crucial to providing quality health care. The use of video-based educational interventions is not new in the human medical field, being frequently used on patients education. However, despite its demonstrated potential as an effective patient education tool, especially regarding chronic and complex diseases, there is no research, to the authors’ knowledge, on owners' video-based education in the veterinary medical field. So, the present study aimed to assess the efficacy and perceived satisfaction of an animated video as an owner education tool on canine atopic dermatitis (cAD). After random allocation into either control group (CG) or intervention group (IG), owners received a standard verbal educational intervention by dermatology-specialised veterinarians or the video-based educational intervention, respectively. The following outcomes were measured: owners’ cAD knowledge, video’s utility rating (UR) and appeal rating (AR) along with owners’ adherence, and both dogs’ skin lesions (CADESI-04) and level of pruritus (PVAS10). Owners’ cAD knowledge had a significant improvement from D0 to D56 in both groups (p