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Provas públicas apresentadas à Escola Superior de Saúde Dr. Lopes Dias do Instituto Politécnico de Castelo Branco para o cumprimento dos requisitos necessários à obtenção do título de Especialista. Submitted by Lurdes Grilo (lurdesgrilo@ipcb.pt) on 2020-03-19T12:28:53Z No. of bitstreams: 1 Trabalho final_ Titulo especialista Sílvia Martins.pdf: 702606 bytes, checksum: 29cef04067476dda15b6702e021f5924 (MD5) Approved for entry into archive by Lurdes Grilo (lurdesgrilo@ipcb.pt) on 2020-03-19T14:39:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Trabalho final_ Titulo especialista Sílvia Martins.pdf: 702606 bytes, checksum: 29cef04067476dda15b6702e021f5924 (MD5) Made available in DSpace on 2020-03-19T14:50:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Trabalho final_ Titulo especialista Sílvia Martins.pdf: 702606 bytes, checksum: 29cef04067476dda15b6702e021f5924 (MD5) Previous issue date: 2020 N/A

Introduction Eosinophilic and noneosinophilic Nasal polyps (NPs) are different subtypes of NPs and require different treatment methods. Objective To compare the histologic characteristics, mRNA and protein expression between Nasal Polyps with and without eosinophilia. Methods NPs tissues were obtained from eighty-six NPs patients during surgery. Eosinophilic and noneosinophilic NPs were distinguished according to immunochemical results of the specimen. The histological, mRNA and protein expression features were compared between the two groups. Results In eosinophilic NPs, we observed a significantly higher GATA-3, IL-5, IL-4, IL-13 mRNA and protein expression. In noneosinophilic NPs, IL-17, IL-23 and RORc mRNA and protein expression were increased. Immunohistochemistry tests showed, more mast cells and less neutrophils in eosinophilic NPs compared with noneosinophilic NPs. Eosinophilic NPs patient presented more severe symptom scores when compared to noneosinophilic NPs. Conclusion We demonstrate for the first time that Th2 is the predominant reaction in eosinophilic NPs while Th17 is the predominant reaction in noneosinophilic NPs. Our study may provide new treatment strategy for NPs.

La neurocisticercosis (NCC), hiperendémica en el Perú, es la infección cerebral causada por el estadio larval de Taenia solium. Esta enfermedad es la causa principal de epilepsia adquirida a nivel mundial y una de las parasitosis más frecuentes del sistema nervioso central. El tratamiento para NCC exige terapias personalizadas debido a la gran variedad en la sintomatología. Las drogas antihelmínticas, como praziquantel (PZQ), son efectivas para matar al parásito; sin embargo también exacerban la respuesta inflamatoria, por lo que su administración podría ser innecesaria o contraindicada en algunos casos. Pautas para el manejo de NCC sugieren el pre tratamiento con agentes antiinflamatorios, como dexametasona (DEX), para controlar las complicaciones. Reportes clínicos humanos y modelos animales han demostrado la importancia de citoquinas proinflamatorias, como el factor de necrosis tumoral (TNFα), en la progresión de la patología en NCC. Recientemente, nuestro grupo reportó la disminución en la expresión de genes proinflamatorios en cerdos naturalmente infectados con NCC en respuesta al pre tratamiento antiinflamatorio con DEX o Etanercept (ETN), un inhibidor de TNFα, en la inflamación causada por administración de PZQ. Durante la última década, estudios in vitro e in vivo para enfermedades inflamatorias crónicas destacan el papel de los linfocitos T cooperadores 17 (Th17) y T reguladores (Treg) como mediadores importantes de la homeostasis inmune y la tolerancia periférica durante la neuroinflamación, así como en la eliminación de elementos apoptóticos. Sin embargo la participación de estas poblaciones celulares, así como la apoptosis, no se ha explorado en la patología de NCC y se desconoce si se modifican en respuesta el tratamiento antiinflamatorio. En este trabajo se usaron muestras cerebrales de 12 cerdos naturalmente infectados con NCC distribuidos en 3 grupos: tratados con PZQ (n = 3) o pretratados con DEX (n = 3) o ETN (n = 3) antes de PZQ. Un grupo de animales permaneció sin tratar (n = 3), como control. Se observó que el pre tratamiento con DEX redujo la expresión de las citoquinas IL-17 e IL-23 de la respuesta Th17, como también del factor de transcripción FoxP3 de la población Treg; en comparación a la reducción obtenida por ETN. Asimismo, el conteo de células apoptóticas, así como la expresión de caspasa-3, mostró una leve disminución en respuesta a ambos antiinflamatorios en comparación con lo observado en PZQ solo. Los resultados sugieren la participación de Treg y Th17 en la patología de la NCC y que el tratamiento antinflamatorio previo con DEX o ETN podría afectar estas poblaciones celulares por diferentes mecanismos. Estas observaciones contribuirán a una mejor comprensión de la naturaleza de la inflamación aguda y los objetivos de los agentes antiinflamatorios propuestos, que son fundamentales para formular nuevas medidas más simples, seguras y efectivas para el control de NCC.

Introducción: La neurocisticercosis (NCC) es la infestación cerebral por larvas de Taenia solium. Esta enfermedad requiere tratamiento personalizado debido a la variabilidad en los síntomas. Las drogas antihelmínticas, como praziquantel (PZQ), exacerban la respuesta inflamatoria, por lo que su administración se acompaña con antiinflamatorios como dexametasona (DEX). Datos clínicos y modelos animales señalan la importancia de citoquinas proinflamatorias, como el factor de necrosis tumoral (TNFα), en la patología. Recientemente, nuestro grupo reportó la disminución de genes proinflamatorios tras el tratamiento con Etanercept (ETN), un inhibidor específico de TNFα. En enfermedades inflamatorias crónicas, los linfocitos T cooperadores 17 (Th17) y T reguladores (Treg) actúan en la homeostasis inmune y la tolerancia periférica durante la neuroinflamación, así como eliminando elementos apoptóticos. Sin embargo, ni la participación de estas poblaciones celulares, ni la apoptosis, se han explorado en NCC y se desconoce si se modifican en respuesta a antiinflamatorios. Metodología: Se agruparon cerdos naturalmente infectados con NCC que recibieron –o no– tratamiento con PZQ y antiinflamatorios (DEX o ETN). Se colectaron muestras cerebrales para cuantificar los transcritos de mediadores apoptóticos (Casp3), citoquinas Th17 (IL-17, IL-23) y Treg (FoxP3); y además se marcó la apoptosis mediante inmunofluorescencia (TUNEL+). Las comparaciones intergrupales se realizaron con la prueba U de Mann-Whitney. Resultados: Se observó un incremento de los mensajeros IL-17, IL-23 y FoxP3 (p

A pré-eclâmpsia (PE) é uma doença multissistêmica característica da gravidez que contribui significativamente para a morbidade e mortalidade materna e neonatal. Descobertas recentes sugerem que mudanças significativas no sistema imune estão envolvidas em sua etiologia. Tem sido proposto que a redução de células T reguladoras (Tregs) com consequente falha na tolerância imunológica promova o aumento de citocinas pró-inflamatórias, gerando disfunção endotelial e estresse oxidativo. O fator de transcrição FOXP3 é fundamental para induzir a diferenciação das células Tregs e polimorfismos localizados na região promotora deste gene podem alterar a produção e função dessas células. A IL17A é a principal citocina secretada por células Th17 e em excesso induz inflamação tecidual e polimorfismos nesse gene já foram associados à patogênese de muitas doenças autoimunes e inflamatórias. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi investigar os polimorfismos rs3761549C>T, rs3761548A>C e rs2232365A>G no gene FOXP3 e rs4711998 A>G; rs8193036 C>T e rs2275913 A>G no gene IL17A, a expressão dos referidos genes na PE e níveis placentários de IL12, TNF-α, IL10, IL6 e IL8. Participaram desse estudo 263 mulheres, divididas em grupo de estudo (PE=89) e grupo controle (C=174). A genotipagem das amostras foi realizada por PCR em Tempo Real. A expressão relativa dos genes FOXP3 e IL17A foi realizada por qPCR em 17 amostras de placenta do grupo PE e 14 do grupo Controle. A quantificação das citocinas foi realizada por citometria de fluxo. Variáveis contínuas foram descritas por média ± desvio padrão e as variáveis categóricas expressas em porcentagem. As comparações estatísticas entre dois grupos foram realizadas com teste t de Student não pareado, teste de Mann‐Whitney ou teste do qui quadrado (χ2). Regressão logística múltipla e algoritmo EM foram utilizados para avaliar os modelos de herança e inferir haplótipos dos polimorfismos estudados, respectivamente. Valores de p T, rs3761548A>C e rs2232365A>G no gene13 FOXP3 e rs4711998 A>G; rs8193036 C>T e rs2275913 A>G no gene IL17A e PE. Recorrência familiar e primiparidade são consideradas fatores de risco para PE na amostra estudada. Níveis elevados de FOXP3 estão associados ao desenvolvimento de PE precoce. Altos níveis de IL6 e IL8 estão associados à PE tardia. Preeclampsia (PE) is a multisystemic disease specific of pregnancy, which is important for maternal and neonatal morbidity and mortality. Recent findings suggest that significant changes in the immune system are involved in PE pathogenesis. It has been proposed that the reduction of regulatory T cells (Tregs) with consequent failure in immunological tolerance promotes the increase of pro-inflammatory cytokines, generating endothelial dysfunction and oxidative stress. FOXP3 is a critical transcription factor to induce differentiation of Tregs, besides polymorphisms located in the promoter region of this gene can alter the production and function of Tregs cells. IL17A is the major cytokine secreted by Th17 cells and in excess induces tissue inflammation. Polymorphisms in FOXP3 gene have already been associated with the pathogenesis of many autoimmune and inflammatory diseases. Therefore, we investigated rs3761549C> T, rs3761548A> C and rs2232365A> G polymorphisms in FOXP3 gene and rs4711998 A> G, rs8193036 C>T and rs2275913 A>G polymorphisms in IL17A gene. We also quantified these genes and IL12, TNF-α, IL10, IL6 and IL8 levels in PE. Genotyping was performed by Real Time PCR. The relative expression of the FOXP3 and IL17A genes was performed by qPCR in 17 placental samples from the PE group and 14 from the Control group. Cytokine quantification was performed by flow cytometry. Continuous variables were described by mean ± standard deviation and categorical variables were expressed by percentage. Comparisons between both groups were performed using an unpaired Student’s t test, Mann– Whitney U test or Chi square (χ2) test as appropriate. The genetic models and haplotypes were analyzed by SNPStat software. Significance was assumed when the statistical tests returned Pvalues T, rs3761548A>C and rs2232365A> G in the FOXP3 gene and rs4711998 A>G; rs8193036 A>T and rs2275913 A>G polymorphisms in the IL17A gene and PE. Familial recurrence and16 primiparity are considered risk factors for PE in the sample studied. Elevated levels of FOXP3 are associated with the development of early-onset PE. High levels of IL6 and IL8 are associated with late-onset PE. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior

Objetivo: Establecer las variaciones en las subpoblaciones de linfocitos Th17 ( “reguladoras” (CD4 + , CD161 + , CD25 + ) y las “efectoras” (CD4 + , CD161 + , CD25 - ), en sangre periférica de pacientes sistémicamente sanos con y sin enfermedad periodontal agresiva Materiales y métodos: Se tomo una muestra de sangre periférica de 6 pacientes sistémicamente sanos, 3 periodontal mente sanos y 3 con diagnóstico de periodont itis agresiva, se realizaron marcaciones con anticuerpos Anti - CD3, Anti - CD4, Anti - CD161 y Anti CD25, las muestras fueron pasadas por citometría de flujo y los resultados s e analizaron con el Test de Mann Whitney . Resultados: Se encontraron niveles aumentados, de células Th17 ( CD4 + , CD161 + ), así como porcentajes mayores de subpoblaciones Th17 reguladoras ( CD4 + , CD161 + , CD25 + ), En pacientes con periodontitis agresiva en comparación con los controles sanos. Mientras que para la subpoblación efectora ( C D4 + , CD161 + , CD25 ), los niveles fueron estables para los dos grupos. Los resultados no fueron estadísticamente significantes (P= 0.4 , 0.7 y 1.00 respectivamente). Conclusiones: Aunque los resultados no son significativos se halló , que el posible rol de la s células Th17 en la periodontitis agresiva, es regulador y no patológico . Se necesita un tamaño de muestra más grande para confirmar dichos resultados Abstract: Objective: Establishing the variations in lymphocyte subpopulations Th17 ("regulators" (CD4+, CD161+, CD25+) and the "effectors" (CD4+, CD161+, CD25 - ) in peripheral blood, from systematically healthy patients with or without aggre ssive periodontal disease. Materials and methods: A peripheral blood sample was taken from six (6) systematically healthy patients: Three (3) periodontally healthy patients, and three (3) diagnosed with aggressive periodontitis. Later, antibodies Anti - CD 3, Anti - CD4, Anti - CD161, and Anti CD25 were added to the blood samples. Finally, the samples underwent Flow Cytometry, and the results obtained were analyzed using the Mann Whitney Test. Results: The laboratory findings showed increased levels of Th17 (CD 4+, CD161+) cells, and higher percentages of regulator subpopulation Th17 (CD4+, CD161+, CD25+) in patients with aggressive periodontitis than in patients from the control group. On the other hand, the effector subpopulation (CD4+, CD161+, CD25) showed sta ble levels for both groups. However, these results are non - statistically significant (P= 0.4 , 0.7 y 1.00 respectively). Conclusions: Even though the results are non - statistically significant, there is prove that the role of Th17 cells in aggressive perio dontitis is regulatory and not pathological. Also, it is necessary to use a larger sample to confirm those results. Otra

A doenca periapical inflamatoria e uma sequela da infeccao e necrose pulpar. Ela representa a resposta de defesa do hospedeiro a agressao proveniente do canal radicular. Assim, lesoes periapicais cronicas se desenvolvem como resposta a manutencao da inflamacao e a reabsorcao ossea. As celulas T reguladoras (Treg) e celulas T helper (Th) 17 (Th17) tem papel fundamental na regulacao da resposta imunologica. Forkhead box P3 (FoxP3) e o fator de transcricao para as celulas Treg, mas a diferenciacao e maturacao das celulas T naive em Treg ou Th17 depende tambem de citocinas especificas como o fatortransformador de crescimento (TGF-), interleucina 10 (IL-10), interleucina 17 (IL-17), interleucina 6 (IL-6) e interleucina 21 (IL-21). Outras citocinas participam na modulacao da atividade de Treg e Th17 como as quimiocinas CCL4 e CCL20 com funcao de recrutamento destas celulas para atuacao no processo inflamatorio. O papel de Treg e Th17 tem sido muito estudado em doencas autoimunes, mas ainda pouco avaliado na patogenia das lesoes inflamatorias periapicais cronicas. Para este estudo foram utilizadas oitenta e sete amostrasde tecido periapical humano para realizacao de analises morfologicas edosagem de citocinas por meio de ensaio imunoenzimatico (ELISA) (TGF-, IL-10, IL-17, CCL4, CCL20). As amostras de tecido periapical foram coletadas de tres grupos: grupo controle (dentes higidos), grupo de dentes com necrose pulpar e lesao periapical e grupo de dentes com necrose pulpar sem lesao periapical. Observamos alta expressao de CCL4 e TGF- no grupo com lesao periapical quando comparado com os grupos sem lesao e uma correlacao positiva entre CCL20 e IL-17, alem de um aumento na expressao de CCL20 no grupo com lesao periapical quando comparado ao controle. Nossas observacoesimplicam que essas duas caracteristicas, tanto pro-inflamatorias quantoimunossupressoras, estao presentes na lesao periapical cronica, ocorrendo de maneira simultanea e com caracteristicas de co-estimulacao, como resultado do intenso trabalho da resposta imunologica do hospedeiro contra o processo inflamatorio proveniente das bacterias intracanais e seus subprodutos. Inflammatory periapical disease is a sequel of the infection and pulp necrosis. It represents the host defense response to aggression from the root canal. Chronic periapical lesions are developed in response to the maintenance of inflammation and bone resorption. Regulatory T cells (Tregs) and Th17 cells play a key role in regulating the immune response with opposite functions. Forkhead box P3 (FoxP3) is the master transcription factor for Treg cells, but differentiation and maturation of naive T cells in Treg or Th17 also depend on specific cytokines such as transforming growth factor (TGF), interleukin 10 (IL -10), interleukin-17 (IL-17), interleukin-6 (IL-6) and interleukin-21 (IL-21). Other cytokinesparticipate in the modulation of the Treg and Th17 activity, as the chemokines CCL4 and CCL20 with function of recruitment of these cells to act in the inflammatory process. The role of Treg and Th17 has been better studied in autoimmune diseases, but sparsely evaluated in the pathogenesis of chronic periapical inflammatory lesions. Eighty-six human samples were used to perform histologic analysis and the cytokine dosage by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) (TGF-, IL-10, IL-17, CCL4, CCL20) in the periapical tissue of three groups: control group, group of teeth with pulp necrosis and periapicallesion and group of teeth with necrosis without periapical lesion. We observed high expression of CCL4 and TGF- in the group with periapical lesion in comparison with the groups without lesion and demonstrated increased expression of CCL20 in the group with periapical lesion when compared to control. Our findings imply that these two characteristics, pro-inflammatory and immunosuppressive, are present in the chronic periapical lesion, occurring simultaneously and with co-stimulation characteristics, as a result of the intense actionof the host's immune response against the inflammatory process coming from intracanal bacteria and their by-products.

Leprosy is a chronic infectious disease caused by Mycobacterium leprae. It is estimated that less than 1% of the individuals infected with M. leprae develop the disease. Several authors suggest that the genetic pattern and variations in the mechanisms of the patient's immune response influence the susceptibility or resistance to disease. The most recent studies have established the role of Th1, Th2 and Treg cell responses in immunopathogenesis of leprosy. However, several mechanisms of the immune response that act in clinical evolution still lack clarification, such as the role of Th17 cells, and the innate immune response. The objective of this study was to evaluate the role of the immune response in the clinical presentation of leprosy and the use of M. leprae recombinant antigens as a perspective for the development of prognostic and immunoprophylaxis tools. To investigate the involvement of immune response in the pathogenesis of leprosy, we analyzed the cytokine profile in lesions, in serum, and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated with M. leprae antigens in leprosy patients and household contactants (HHC). CD4+IL-17+ T cells expressing IL-17A, IFN-γ and IL-10 were evaluated by confocal microscopy in lesions from patients with tuberculoid (TT, n = 09) and lepromatous leprosy (LL, n = 08). Inflammatory cytokines were measured in serum samples from 23 paucibacillary (PB) patients, 28 multibacillary (MB) and 23 HHC, using the Luminex technique. The phenotype of lymphocytes producing IL-17A and IFN-γ was determined by flow cytometry. In addition, PBMC from leprosy patients and HHC were stimulated with crude M. leprae (MLCS) and M. tuberculosis (PPD) and a recombinant antigen of M. leprae (ML2028), and the cytokine profile and the CD4+ and CD8+ multifunctional T cells (producing IFN-γ, IL-2 or TNF-α) of effector and central memory were analyzed. We observed that TT lesions expressed more CD4+IL-17A+ cells than LL. Higher levels of IFN-γ were detected in PB patients, but also in MB patients who presented leprosy reactions (LR) at the time of evaluation (MB LR+). Significantly, higher concentrations of IL-17A and IL-1β were observed in serum from PB than in from MB patients. Ex vivo cell analysis by flow cytometry revealed higher frequency of Th17 cells in TT than LL patients, and it is not high in LL patients with LR. These results indicate that the Th17 cells are associated with an effective inflammatory response that occurs in PB presentation of leprosy but were not associated with the inflammatory response in LR. Th1 response was also associated with PB presentation. However, high levels of IFN-γ were also associated with LR. Multiparameter analyzes by flow cytometry revealed a higher frequency of multifunctional T cells specific for M. leprae antigens in HHC than in leprosy patients, and it might explain the absence of disease in these individuals. These data indicate that these antigens are capable of inducing a more effective immune response and multifunctional T cell memory against M. leprae infection, and open perspectives for the future development of immunoprophylaxis with M. leprae antigens. Additionally, this study suport the attempt to induce a Th1 and Th17 response in individuals at risk of acquiring the disease, even considering this could induce only a partial protection, because it would protect against the most severe MB forms of leprosy, and reduce the disease transmission. This Thesis includes one paper accepted for publication, about the role of Th1 and Th17 cells in subjects with different clinical forms of leprosy, and another paper submitted about the immune response to M. leprae crude and recombinant antigens. A Hanseníase é uma doença infecciosa crônica e de evolução lenta causada pelo Mycobacterium leprae. A literatura sugere que menos de 1% dos indivíduos infectados pelo bacilo evolui com a doença. O padrão genético dos indivíduos e diferenças nos mecanismos da resposta imune do paciente influenciam na susceptibilidade ou resistência à infecção e apresentação clínica da doença. Os estudos mais recentes estabeleceram o papel das respostas de células Th1, Th2 e Treg na imunopatogênese da hanseníase. No entanto, diversos mecanismos das células Th17 e o papel da resposta imune inata na doença ainda não estão bem estabelecidos. Diante disso, este estudo teve como objetivo avaliar o papel da resposta imune na apresentação clínica da hanseníase e o uso de antígenos brutos e recombinante de M. leprae como perspectiva para o desenvolvimento de ferramentas de prognóstico e imunoprofilaxia. Para investigar o envolvimento das células da resposta imune na patogênese da hanseníase, analisamos o perfil de citocinas em lesões, nos soros, e em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas com antígenos de M. leprae em pacientes com hanseníase e controles contactantes sadios (CCS). As células T CD4+IL-17+ e que expressam IL-17A, IFN- e IL-10 foram avaliadas por microscopia confocal em biópsias de lesões de pacientes com hanseníase tuberculóide (HT, n = 9) e virchowiana (HV, n = 8). As citocinas inflamatórias foram dosadas em amostras de soro de 23 paucibacilares (PB), 28 multibacilares (MB) e em 23 CCS, pela técnica de Luminex. O fenótipo de linfócitos produtores de IL-17A e IFN-γ foi determinado por citometria de fluxo. Além disso, PBMC de pacientes com hanseníase e de CCS foram estimuladas com os antígenos brutos de M. leprae (MLCS), M. tuberculosis (PPD) e recombinante de M. leprae, (ML2028), e o perfil de citocinas e o fenótipo das células T CD4+ e CD8+ multifuncionais (produtoras de IFN-γ, IL-2 ou TNF-α) de memória efetora e central foram analisados. Observamos que as lesões de HT expressaram mais células CD4+IL-17A+ do que as de HV. Níveis mais elevados de IFN-γ sérico foram detectados em pacientes com as formas HT e em MB que apresentavam reações hansênicas (MB RH+). Concentrações mais elevadas de IL-17A e IL-1β foram observadas nos soros de pacientes PB do que em MB. As análises das células ex vivo por citometria de fluxo revelaram maior frequência de células Th17 nos pacientes com hanseníase tuberculóide (HT) em comparação com aqueles com hanseníase virchowiana (HV). Estes resultados indicam que a resposta Th17 está associada a uma resposta inflamatória efetiva que se apresenta nas formas PB, mas não estão associadas à resposta inflamatória durante as reações hansênicas. A resposta Th1 também está associada às formas PB, entretanto altos níveis de IFN-γ foram associados também aos episódios de reação hansênica. As análises multiparamétricas por citometria de fluxo revelaram maior frequência de células T multifuncionais antígeno-específicas em CCS, do que em pacientes com hanseníase. Nossos dados indicam que controles contactantes, quando estimulados com antígenos brutos e com o ML2028 recombinante, produziram mais células T multifuncionais e isto sugere que estas células proporcionam uma resposta imunológica mais eficaz contra a infecção por M. leprae, podendo explicar a ausência de doença nesses indivíduos. Estes dados sugerem que esses antígenos são capazes de induzir uma resposta protetora e indutora de células T multifuncionais de memória e abrem perspectivas para o desenvolvimento futuro de imunoprofilaxia com estes antígenos de M. leprae. Além disso, o estudo dá suporte à busca de induzir uma resposta Th1 e Th17 em indivíduos em risco de adquirir a doença, mesmo que haja uma proteção parcial, pois neste caso haveria uma proteção contra formas mais graves MB, e reduziria também a transmissão da doença. Esta tese é composta por um artigo aceito para publicação sobre a resposta de células Th17 e Th1 nas formas clínicas da hanseníase e outro submetido sobre a resposta a antígenos recombinantes de M. leprae na indução de células T multifuncionais.

Introduction Eosinophilic and noneosinophilic Nasal polyps (NPs) are different subtypes of NPs and require different treatment methods. Objective To compare the histologic characteristics, mRNA and protein expression between Nasal Polyps with and without eosinophilia. Methods NPs tissues were obtained from eighty-six NPs patients during surgery. Eosinophilic and noneosinophilic NPs were distinguished according to immunochemical results of the specimen. The histological, mRNA and protein expression features were compared between the two groups. Results In eosinophilic NPs, we observed a significantly higher GATA-3, IL-5, IL-4, IL-13 mRNA and protein expression. In noneosinophilic NPs, IL-17, IL-23 and RORc mRNA and protein expression were increased. Immunohistochemistry tests showed, more mast cells and less neutrophils in eosinophilic NPs compared with noneosinophilic NPs. Eosinophilic NPs patient presented more severe symptom scores when compared to noneosinophilic NPs. Conclusion We demonstrate for the first time that Th2 is the predominant reaction in eosinophilic NPs while Th17 is the predominant reaction in noneosinophilic NPs. Our study may provide new treatment strategy for NPs. Resumo Introdução Pólipos nasais (PNs) eosinofílicos e não eosinofílicos são diferentes subtipos de PNs e requerem diferentes métodos de tratamento. Objetivo Comparar as características histológicas e a expressão de mRNAs e proteínas entre PNs com e sem eosinofilia. Método Amostras de PNs foram obtidos de 86 pacientes durante a cirurgia. PNs eosinofílicos e não eosinofílicos foram diferenciados segundo os resultados imunoistoquímicos de cada amostra. As características histológicas e de expressão de mRNAs e de proteínas foram comparadas entre os dois grupos. Resultados Em PNs eosinofílicos, observamos uma expressão significativamente maior dos mRNAs e proteínas GATA-3, IL-5, IL-4 e IL-13. Nos PNs não eosinofílicos, aumentou a expressão dos mRNAs e das proteínas IL-17, IL-23 e RORc. Nos testes imunoistoquímicos, observamos maior número de mastócitos e menor número de neutrófilos nos PNs eosinofílicos, em comparação com PNs não eosinofílicos. Os pacientes com PNs eosinofílicos obtiveram escores de sintomas mais graves vs. PNs não eosinofílicos. Conclusão Demonstramos, pela primeira vez, uma reação Th2 predominante em PNs eosinofílicos e uma reação Th17 predominante em PNs não eosinofílicos. Nosso estudo pode proporcionar novas estratégias terapêuticas para a rinossinusite crônica.

Ha sido ampliamente reconocido que la enfermedad periodontal (EP) es una entidad inflamatoria de origen infeccioso, en la cual, la activación inmunológica del hospedero lleva a la destrucción de los tejidos de soporte de los dientes. En la inmunopatogénesis participan tanto los mecanismos de la respuesta inmune innata como de la respuesta inmune adaptativa, específicamente la activación de linfocitos T CD4+ y sus subpoblaciones, lo que ha generado controversias en cuanto al perfil de citoquinas presentes en relación con la severidad de la enfermedad. En esta revisión, se recoge la evidencia disponible acerca de la participación de las células Th17 y sus citoquinas, especialmente IL-17, en la progresión de la enfermedad tomando en cuenta el tipo de muestra biológica y el método utilizado para su detección. Tomada en conjunto, ésta señala una participación importante de la IL-17 en la EP, pero no está claro su papel dominante como una citoquina protectora o destructora. Además, se ha demostrado una enorme plasticidad en la activación de las células Th17 adquiriendo funciones inmunomoduladoras dependiendo del entorno inmunológico en el cual se lleve a cabo su activación. Por ahora es claro que IL-17 hace parte del conjunto de moléculas que se activan en respuesta a la colonización por periodontopatógenos, pero no es todavía posible restringir la inmunopatogénesis de la EP a un perfil de moléculas determinado cuando confluyen múltiples factores en la presentación clínica de la enfermedad. It is widely recognized that periodontal disease (PD) is an inflammatory condition of infectious origin, in which the host immune activation leads to destruction of the teeth-supporting tissues. In the immunopathogenesis of PD are involved both the innate and the adaptive mechanisms of the immune response, specifically the activation of CD4+ Tlymphocytes and their subpopulations, which has generated controversy regarding the profile of cytokines present in relation to the severity of the disease. This review will address the available evidence for the involvement of Th17 cells and their cytokines, especially IL-17, in the progression of the disease taking into account the type of biological sample and the method used for its detection. Taken together, the evidence indicates an important role of IL-17 in PD, but it is unclear its dominant role as a protective or destructive cytokine. Furthermore, it has been demonstrated a great functional plasticity in Th17 cells activation depending of the environmental conditions in which takes place its activation. By now it is clear that IL-17 belongs to an assembly of molecules that are activated in response to colonization by periodontopathogens, but it is not yet possible to restrict the immunopathogenesis of PD to a particular molecules profile when multiple factors converge in the clinical presentation of the disease.

Background: Asthma and rhinitis have a complex etiology, depending on multiple genetic and environmental risk factors. An increasing number of susceptibility genes are currently being identified, but the majority of reported associations have not been consistently replicated across populations of different genetic backgrounds. Purpose: To evaluate whether polymorphisms of IL4R (rs1805015), IL13 (rs20541), IL17A (rs2275913) and GSTP1 (rs1695) genes are associated with rhinitis and/or asthma in adults of Portuguese ancestry. Methods: 192 unrelated healthy individuals and 232 patients, 83 with rhinitis and 149 with asthma, were studied. All polymorphisms were detected by real time polymerase chain reaction (PCR) using TaqMan assays. Results: Comparing to controls, significant association with asthma was observed for GSTP1 rs1695 AA genotype (odds ratio (OR) â 1.96; 95% CI â 1.18 to 3.25; p = 0.010). The association sustains for allergic asthma (OR â 2.17; 95% CI â 1.23 to 3.80; p = 0.007). IL13 rs20541 GG genotype was associated with less susceptibility to asthma (OR â 0.55, 95% CI â 0.33 to 0.94, p = 0.028). Among patients, IL17A rs2275913 AA genotype was less associated with asthma than with rhinitis (OR â 0.20; 95% CI of 0.07 to 0.56; p = 0.002). A similar association was found for IL13 rs20541 GG genotype (OR â 0.48; 95% CI of 0.25 to 0.93; p = 0.031). There were no significant differences in the distribution of allelic and genotypic frequencies between patients and controls for the IL4R polymorphismâ analyzed. Conclusion: These results support the existence of a significant association between GSTP1 rs1695 and IL13 rs20541 SNPs, with susceptibility to asthma, in the population studied. Different genotype profiles of IL17A and IL13 genes seem to influence the clinical pattern of disease expression mainly confined to the upper airways, as rhinitis, or including the lower airways, as asthma. Keywords: Asthma, Rhinitis, Allergy, IL4R, IL13, IL17A, GSTP1, Genetic polymorphism, Genetic profile

Submitted by MARIANA MIZIARA DE ABREU TEODORO null (marimiziara@gmail.com) on 2016-03-21T18:48:38Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mariana Miziara de Abreu Teodoro.pdf: 1597455 bytes, checksum: f121a89794f14989756c7e7c5208127a (MD5) Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-22T20:37:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 teodoro_mma_me_bot.pdf: 1597455 bytes, checksum: f121a89794f14989756c7e7c5208127a (MD5) Made available in DSpace on 2016-03-22T20:37:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 teodoro_mma_me_bot.pdf: 1597455 bytes, checksum: f121a89794f14989756c7e7c5208127a (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A Doença de Chagas (DC), cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi), tornou-se nos últimos anos um grave problema de saúde pública, mesmo em países não-endêmicos. Um importante desafio para os pesquisadores da doença de Chagas é estabelecer os eventos que levam alguns pacientes a desenvolver a doença crônica assintomática, ou forma indeterminada, enquanto outros evoluem para uma doença severa, com lesões em tecidos cardíacos ou gastrointestinais. Alguns estudos têm sugerido que a ausência de sintomas clínicos em indivíduos com a forma crônica indeterminada está associada a um controle eficaz da resposta imune efetora contra o parasita, que evita uma resposta inflamatória excessiva, o que resultaria em lesão tecidual. Não existem estudos com o objetivo de confirmar este mecanismo em pacientes com a forma digestiva da DC, especialmente em relação ao controle modulador de mecanismos efetores envolvendo células Th17, por células Treg. No presente estudo, nós avaliamos em pacientes com a forma digestiva da DC e em pacientes com a forma indeterminada ou assintomática a taxa de ativação Th17/Treg, através da avaliação da freqüência de células Th17 e Treg por citometria de fluxo; da expressão do mRNA para Rorγt e Foxp3, fatores de transcrição envolvidos na diferenciação dessas células, respectivamente; bem como os níveis de IL-17a e IL-10 em sobrenadantes de cultura de células mononucleares de sangue periférico (PBMC’s). Foi demonstrado no presente estudo, que em pacientes com a forma digestiva da DC há um desequilíbrio na taxa de ativação de células Th17/Treg, favorecendo o perfil Th17, enquanto que em pacientes com a forma indeterminada, este desequilíbrio favorece o perfil Treg. Os nossos resultados apoiam a hipótese de que o desequilíbrio na taxa de ativação Th17/Treg observado no grupo de pacientes digestivos, favorecendo Th17 em detrimento de Treg, geraria um ambiente não regulador, que resulta em uma resposta inflamatória exacerbada, responsável pelas lesões dos tecidos gastrointestinais apresentadas por estes pacientes. Chagas disease (CD) whose etiological agent is the protozoan Trypanosoma cruzi (T. cruzi) in recent years became a serious problem of public health even in nonendemic countries. One important challenge for the researchers of Chagas disease is to establish the events that lead some patients to develop asymptomatic or indeterminate chronic disease, while others undergo severe disease with lesions in cardiac or gastrointestinal tissues. Some studies have suggested that absence of clinical symptoms in individuals with the indeterminate chronic form is associated to a fine control of effector immune responses against the parasite that avoid a perpetuated inflammatory process which results in tissue injury. There are no studies aiming to confirm this mechanism in patients with digestive form of the disease, particularly in relation to the modulatory control by Treg cells of effector mechanisms involving Th17. Here, we studied in patients with the digestive form of CD and in those with the indeterminate or asymptomatic form of the disease, the ratio Th17/Treg activation by evaluating the frequency of Th17 and Tregs cells by flow cytometry, mRNA expression for Rorγt and Foxp3, the transcription factors involved in the differentiation of these cells respectively as well as the levels of IL-17a and IL-10 in peripheral blood mononuclear cells culture supernatants. We showed that in patients with digestive form of the disease there is an imbalance in the ratio Th17/Treg cells activation in favor of Th17, while in patients with the indeterminate form, this imbalance favour Treg activation. Our findings support the hypothesis that in contrast with indeterminate patients a non regulatory environment observed in patients with digestive CD, which results in an exacerbated inflammatory response exerted by Th17, due to lower Treg activation, may be responsible for tissue lesions in these patients. FAPESP: 2013/02223-7

Ha sido ampliamente reconocido que la enfermedad periodontal (EP) es una entidad inflamatoria de origen infeccioso, en la cual, la activación inmunológica del hospedero lleva a la destrucción de los tejidos de soporte de los dientes. En la inmunopatogénesis participan tanto los mecanismos de la respuesta inmune innata como de la respuesta inmune adaptativa, específicamente la activación de linfocitos T CD4+ y sus subpoblaciones, lo que ha generado controversias en cuanto al perfil de citoquinas presentes en relación con la severidad de la enfermedad. En esta revisión, se recoge la evidencia disponible acerca de la participación de las células Th17 y sus citoquinas, especialmente IL-17, en la progresión de la enfermedad tomando en cuenta el tipo de muestra biológica y el método utilizado para su detección. Tomada en conjunto, ésta señala una participación importante de la IL-17 en la EP, pero no está claro su papel dominante como una citoquina protectora o destructora. Además, se ha demostrado una enorme plasticidad en la activación de las células Th17 adquiriendo funciones inmunomoduladoras dependiendo del entorno inmunológico en el cual se lleve a cabo su activación. Por ahora es claro que IL-17 hace parte del conjunto de moléculas que se activan en respuesta a la colonización por periodontopatógenos, pero no es todavía posible restringir la inmunopatogénesis de la EP a un perfil de moléculas determinado cuando confluyen múltiples factores en la presentación clínica de la enfermedad.

O transplante renal é a melhor forma de tratamento para indivíduos que perderam a função do rim. Pacientes transplantados renais necessitam de rigoroso esquema imunossupressor para evitar rejeição. Nesse processo células T helper do sistema imunológico exercem papel chave na resposta contra o enxerto, sendo as células Th17 recentemente investigadas por produzirem IL-17, uma potente citocina pró-inflamatória cujo papel na rejeição também vem sendo descrito. O aumento da expressão de células Th17 tem importante associação ao desenvolvimento da rejeição no microambiente renal, no entanto o provável mecanismo ainda não está bem compreendido. Esse estudo teve como objetivo avaliar a resposta Th17 a partir da influência exercida pelo eixo quimiotático CCR6/CCL20 e por variantes genéticas na IL- 17 e seu receptor IL-17RA. Para isso, realizou-se um estudo caso controle envolvendo 148 pacientes transplantados do Hospital Universitário Onofre Lopes/UFRN no qual se avaliou por imunohistoquímica a expressão proteica da IL-17 e das quimiocinas CCR6/CCL20 e por PCR-RFLP as variantes genéticas em IL17A e IL17RA. Nossos resultados demonstraram não haver influência dos polimorfismos gênicos sobre o desfecho do enxerto ou sobre a expressão proteica da IL-17. No microambiente do enxerto renal encontramos várias fontes produtoras de IL-17: células epiteliais tubulares, células glomerulares, neutrófilos e células do infiltrado intersticial, por sua vez a expressão do eixo quimiotático CCR6/CCL20 ficou restrita a células do epitélio tubular. Houve uma leve correlação linear positiva entre a presença de IL-17 e a expressão do eixo quimiotático CCR6/CCL20 no microambiente do enxerto renal. Acreditamos que, aliado aos nossos resultados, estudos posteriores com aumento do “n” amostral e um maior controle sobre as variáveis que envolvem a obtenção do espécime renal, podem determinar com maior clareza a influência exercida pelo eixo quimiotático CCR6/CCL20 e a exercida por polimorfismos genéticos em citocinas, sobre o controle da resposta Th17 nos processos de rejeição ao aloenxerto renal. Kidney transplantation is the best treatment for patients who have lost kidney function. Renal transplant patients require accurate immunosuppressive drugs to prevent rejection. In this process T helper cells of the immune system perform key role in the immune response to the graft, and recently the Th17 cells has been investigated by production of IL-17 potent proinflammatory cytokine whose role in the rejection has also been described. Increased of Th17 cell expression has an important association with the development of rejection in renal microenvironment, however the likely mechanism is not well understood. This study aimed to evaluate the Th17 response from the influence of the chemotactic axis CCR6/CCL20 and genetic variants in IL-17 and IL-17RA. We conducted a case-control study involving 148 patients transplanted at the University Hospital Onofre Lopes/UFRN in which assessed by immunohistochemistry protein expression of IL-17 and chemokines CCR6/CCL20 and by PCR-RFLP genetic variants in IL17A and IL17RA. Our results showed no influence of genetic polymorphisms on the outcome of the graft or the protein expression of IL-17. In renal graft microenvironment found several sources producing IL-17: tubular epithelial cells, glomerular cells, neutrophils and cell interstitial infiltration, in turn the expression of chemotactic axis CCR6/CCL20 was restricted to the tubular epithelium cells. There was a slight positive linear correlation between the presence of IL-17 and expression of chemotactic axis CCR6/CCL20 in the microenvironment of renal graft. Therefore, we believe that, combined with our results, further studies with increased "n" sample and greater control over the variables involved in obtaining the renal specimen, can determine more clearly the influence of chemotactic axis CCR6 / CCL20 and polymorphisms in cytokines related to Th17 profile on the control of this cell subtype response in rejection processes to renal allograft.

A doença periodontal é uma condição inflamatória crônica de caráter infeccioso causada primariamente por bactérias presentes em um biofilme dentário que interagem com o hospedeiro, determinando, assim, a natureza da doença resultante. Apesar de já se conhecer muito sobre a patogênese destas patologias, ainda não se sabe a composição exata do perfil de células T durante a fase ativa da doença (Th1, Th2 ou Th17). Este trabalho visou avaliar, através da expressão imuno-histoquímica, a presença dos marcadores (IL-17, IL-23 e RORγt), envolvidos na resposta Th 17 em casos de gengiva clinicamente saudáveis (n=32), gengivite induzida pelo biofilme dental (n=30), periodontite crônica (n=32) e periodontite agressiva (n=25), objetivando analisar se a expressão e/ou distribuição destas moléculas em linfócitos e macrófagos, presentes no infiltrado inflamatório dos tecidos periodontais, influencia na destruição tecidual observada nestas doenças. Foi realizada a análise morfológica dos casos, onde avaliou-se a intensidade do infiltrado inflamatório em leve, moderado e intenso. Para cada caso, nas áreas mais imunomarcadas, 5 campos foram escolhidos e analisados, tanto em relação a intensidade do infiltrado inflamatório quanto a quantidade de células imunomarcadas, baseando-se em escores predeterminados: escore 0 (ausência de infiltrado inflamatório/imunomarcação), escore 1 (o infiltrado/imunomarcação abrangia menos de 25% da área do campo), escore 2 (o infiltrado/imunomarcação ocupava entre 25 e 50%) e escore 3 (infiltrado/imunomarcação presente em mais de 50% da área do campo). A partir disto, gerouse uma mediana que representava cada caso. A intensidade do infiltrado inflamatório foi correlacionada com a progressão da doença, se mostrando crescente da gengiva clinicamente saudável até a periodontite agressiva (p

Introdução: A rinite alérgica (RA) é uma doença não infecciosa da mucosa nasal mediada por IgE após o contato com alérgenos. Objetivo: Investigar as células Th17 periféricas e CD4 + CD25 + Foxp3 + células T reguladoras (Treg) e a expressão sérica de citocinas em pacientes com RA. Métodos: De março a maio de 2012, foi coletado o sangue periférico de 14 pacientes com RA (grupo RA) e seis indivíduos saudáveis (grupo controle). A detecção das células Th17 e células Treg foi realizada através da citometria de fluxo e os níveis séricos de IL -17 e TGF- β1. Foram medidos por ELISA. Resultados: A percentagem de células Th17 no grupo RA foi bem maior do que no grupo controle (p < 0,01). A proporção de células Treg no grupo RA também foi drasticamente menor quando comparada ao grupo controle (p < 0,01). No grupo RA, o nível sérico de IL-17 foi significativamente maior do que no grupo controle (p < 0,01). Conclusão: O desequilíbrio de células Th17/Treg periféricas desempenha um papel importante na patogênese da RA. Introduction: Allergic rhinitis (AR) is an IgE-mediated non-infectious disease of the nasal mucosa following contact with allergens. Objective: To investigate the peripheral Th17 cells and CD4 + CD25 + Foxp3 + regulatory T (Treg) cells and the expression of cytokines in the serum of AR patients. Methods: The peripheral blood of 14 patients with AR (AR group) and six healthy subjects (control group) was collected from March to May of 2012. Flow cytometry was performed to detect the Th17 cells and Treg cells, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to measure the serum levels of IL-17 and TGF-β1. Results: The proportion of Th17 cells in the AR group was markedly higher than that in the control group (p < 0.01). The proportion of Treg cells in the AR group was also dramatically reduced when compared with the control group (p < 0.01). In the AR group, serum IL-17 levels were markedly higher than those in the control group (p < 0.01). In the AR group, serum TGF-β1 levels were significantly lower than those in the control group (p < 0.01). Conclusion: The imbalance of peripheral Th17/Treg cells plays an important role in the pathogenesis of AR.

The present study was conducted to explore whether single nucleotide polymorphisms (SNPs) in Th1 and Th17 cell-mediated immune response genes differentially influence the risk of rheumatoid arthritis (RA) in women and men. In phase one, 27 functional/tagging polymorphisms in C-type lectins and MCP-1/CCR2 axis were genotyped in 458 RA patients and 512 controls. Carriers of Dectin-2(rs4264222T) allele had an increased risk of RA (OR = 1.47, 95% CI 1.10-1.96) whereas patients harboring the DC-SIGN(rs4804803G), MCP-1(rs1024611G), MCP-1(rs13900T) and MCP-1(rs4586C) alleles had a decreased risk of developing the disease (OR = 0.66, 95% CI 0.49-0.88; OR = 0.66, 95% CI 0.50-0.89; OR = 0.73, 95% CI 0.55-0.97 and OR = 0.68, 95% CI 0.51-0.91). Interestingly, significant gender-specific differences were observed for Dectin-2(rs4264222) and Dectin-2(rs7134303): women carrying the Dectin-2(rs4264222T) and Dectin-2(rs7134303G) alleles had an increased risk of RA (OR = 1.93, 95% CI 1.34-2.79 and OR = 1.90, 95% CI 1.29-2.80). Also five other SNPs showed significant associations only with one gender: women carrying the MCP-1(rs1024611G), MCP-1(rs13900T) and MCP-1(rs4586C) alleles had a decreased risk of RA (OR = 0.61, 95% CI 0.43-0.87; OR = 0.67, 95% CI 0.47-0.95 and OR = 0.60, 95% CI 0.42-0.86). In men, carriers of the DC-SIGN(rs2287886A) allele had an increased risk of RA (OR = 1.70, 95% CI 1.03-2.78), whereas carriers of the DC-SIGN(rs4804803G) had a decreased risk of developing the disease (OR = 0.53, 95% CI 0.32-0.89). In phase 2, we genotyped these SNPs in 754 RA patients and 519 controls, leading to consistent gender-specific associations for Dectin-2(rs4264222), MCP-1(rs1024611), MCP-1(rs13900) and DC-SIGN(rs4804803) polymorphisms in the pooled sample (OR = 1.38, 95% CI 1.08-1.77; OR = 0.74, 95% CI 0.58-0.94; OR = 0.76, 95% CI 0.59-0.97 and OR = 0.56, 95% CI 0.34-0.93). SNP-SNP interaction analysis of significant SNPs also showed a significant two-locus interaction model in women that was not seen in men. This model consisted of Dectin-2(rs4264222) and Dectin-2(rs7134303) SNPs and suggested a synergistic effect between the variants. These findings suggest that Dectin-2, MCP-1 and DC-SIGN polymorphisms may, at least in part, account for gender-associated differences in susceptibility to RA.

CNPq A asma é uma doença heterogênea com quadros clínicos e mecanismos patogênicos distintos. Sua fisiopatologia envolvendo a predominância de fenótipo Th2 não tem sido suficiente para explicar a diversidade fenotípica observada nestes pacientes. Com a descoberta das células Th17, produtoras de IL-17A, IL-17F e IL-22, várias evidências têm sido descritas implicando sua participação na patogênese da asma. Com isso, novas perspectivas terapêuticas a uma série de doenças vêm sendo consideradas. Os derivados tiazolidínicos são drogas agonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma gama (PPARγ) e atuam em várias doenças auto-imunes e inflamatórias. Em nosso estudo revisamos o papel das citocinas da via Th17 na asma brônquica. Esta tese tem ainda dois artigos originais: No primeiro avaliamos a produção destas citocinas em uma população de crianças com asma persistente moderada e grave, na tentativa de correlacionar estes níveis com a gravidade da doença, e ainda comparar com controles não asmáticos. Avaliamos ainda, in vitro, se as citocinas pró-inflamatórias presentes em meio de cultura de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) seriam inibidas pela presença de um composto tiazolidínico, o GQ-147, o que motivou o segundo artigo original. Os pacientes foram avaliados e classificados clinicamente quanto à gravidade da asma e submetidos a exames complementares. As citocinas foram dosadas no soro e nos sobrenadantes das PBMCs. Observamos níveis séricos de IL-17 e IL-22 abaixo do limite de detecção da técnica. Nas culturas celulares observamos uma elevação da IL-17 quando comparamos o grupo de asmáticos persistentes graves com os moderados, embora esta diferença não tenha sido estatisticamente significante. Com o GQ-147, verificamos uma diminuição das IL-17, IFNγ e IL-22. Além disto, demonstramos por reação em cadeia da polimerase em tempo real (Real-time PCR) que o GQ-147 teria uma ação imunomoduladora nos PPARγ mais eficiente que a rosiglitazona, tiazolidínico comercialmente disponível. Frente à complexidade que é tratar uma doença de fenótipos inflamatórios tão distintos, outros estudos com um maior número de pacientes, são necessários para a confirmação deste possível predomínio das citocinas Th17 nos casos de asma grave, bem como a ação imunomoduladora do composto estudado, para posterior avaliação em ensaios clínicos.

Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa de Souza Lima Blotta Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb), é a micose sistêmica de maior incidência no Brasil. Estudos anteriores demonstraram que a resistência ou suscetibilidade a essa infecção podem ser associadas, respectivamente, a padrões de resposta Th1 ou Th2. Recentemente, foram descritas novas subpopulações de linfócitos T, dentre elas as células Th17, que tem se mostrado importantes na proteção contra infecções fúngicas, mas cujo papel ainda não foi estudado na PCM humana. A diferenciação de células T CD4+ é modulada após o reconhecimento do patógeno por células dendríticas (DCs) por meio de vários receptores de reconhecimento padrão (PRRs), os quais modulam a diferenciação de células Th1, Th2 e Th17. Neste trabalho investigamos o papel dos receptores TLR2, TLR4 e Dectina-1 no reconhecimento de células leveduriformes de P. brasiliensis (Pb) por DCs derivadas de monócitos, assim como, a capacidade dessas DCs em modular a diferenciação de linfócitos T CD4+. Observamos que DCs expostas a células leveduriformes de Pb apresentam um fenótipo maduro (expressão de CCR7, CD83, CD86 e MHC II) e produzem citocinas (IL- ?, IL-6, IL-23, TNF-? e TFG- ?), levando à diferenciação de linfócitos T CD4+ produtores de IL-17, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 e IL-17/IFN- ?. Também observamos que DCs estimuladas com células leveduriformes de Pb apresentam ativação de moléculas envolvidas na sinalização via TLRs e Dectina-1 (JNK, p38, Akt e ERK para os TLRs e Syk para Dectina-1), e que o bloqueio de Dectina-1 e/ou TLR2 resultou em um número menor de células Th17. Ao analisar a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico, observamos que pacientes com a FJ da PCM apresentam produção aumentada de IL-4 e que pacientes com a FA apresentam produção elevada de IL-17 e IFN- ?. Em conjunto nossos resultados demonstram que a Dectina-1 e TLR2 são os receptores mais importantes para o reconhecimento de leveduras de Pb por células dendríticas e que esse reconhecimento pode levar à diferenciação de linfócitos T efetores produtores de IL-17 e IFN- ?. Além disso, podemos concluir que a FA da PCM apresenta uma resposta imunológica mista, com participação de linfócitos Th17 Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), is the most prevalent systemic mycosis in Brazil. Previous studies showed that resistance or susceptibility to PCM can be associated to a Th1 or Th2 responses respectively. More recently, Th17 response was showed to be protective in fungal infections, but there is no data about Th17 cells in human PCM. T CD4+ differentiation is elicited and shaped after pathogen recognition by dendritic cells (DCs) through several PRRs, which modulate Th1, Th2 and Th17 generation. In this study we evaluated the role of TLR-2, TLR-4 and Dectin-1 in the recognition of Pb yeast cells by monocytes derived DCs, as well as, the capability of these DCs to modulate T CD4+ lymphocytes differentiation. We observed that DCs exposed to Pb presented a mature phenotype (expression of CCR7, CD83, CD80, CD86 and MHC II) and produce cytokines (IL-1, IL-6, IL-23, TNF-? and TGF- ) that promote the differentiation of TCD4+ lymphocytes producing IL- 7, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 and IL-17/IFN-?. We also observed that DCs stimulated by Pb presented activation of molecules involved in the TLRs and dectin-1 signaling (JNK, p38, AKT, ERK - for TLRs and Syk for dectin- The blockage of dectin-1 and/or TLR2 diminished the differentiation of Th17 cells. We also analyzed PBMCs from patients with the acute/juvenile form (JF) or the chronic/adult form (AF) of PCM. Our results showed that patients with JF present elevated production of IL-4 and AF patients present higher production of IL-17. Altogether our results showed that Dectin-1 and TLR-2 are the most important receptors for human DCs to recognize Pb yeast cells and to produce cytokines such as IL- , IL- ? and TNF-?. After DC activation and cytokine production these cells are able to induce Th1 and Th17 differentiation through these receptors. Also we showed that Th17 cells are a major population in AF patients Doutorado Ciências Biomédicas Doutora em Ciências Médicas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Periapical lesions are chronic inflammatory conditions of periradicular tissues considered direct consequences of infectious diseases resulting from pulp necrosis and subsequent progression to periapical region. The participation of the immune response and bone resorption in the formation of these lesions has been investigated, so that different cell types and cytokines have been identified as contributors to this process. In this perspective, this study aimed to evaluate the immunohistochemical expression of IL-17, TGF-β1 and FoxP3 in periapical granulomas (PGs), radicular cysts (RCs) and residual radicular cysts (RRCs), seeking a better understanding of the etiopathogenesis these periapicopatias. To this end, we selected 20 cases of GPs, 20 CRs and 10 RRCs to undergo morphological analysis and immunohistochemistry for biomarkers above, the latter being performed quantitatively using scores and average percentages of immunostaining for the analysis of IL-17 and TGF- β1, while for the FoxP3 were counted only the positive lymphocytes. The results showed statistically significant differences between TGF-β1 and FoxP3 imunoexpressions, in relation to the periapical lesions studied (p = 0.002, p

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Th17 cells have been strongly associated with the pathogenesis of several autoimmune and inflammatory diseases. IL-17 and IL-23 are important cytokines associated with this lineage. The aim of this study was to analyze, through immunohistochemical methods, the immunoexpression of IL-17 and IL-23 in the inflammatory infiltrate of oral lichen planus (OLP) lesion compared to that of inflammatory fibrous hyperplasia (IFH) and between clinical forms reticular and erosive of OLP. The sample included 41 cases of OLP, of which 23 were reticular and 18 erosive and 10 cases of IFH. The results were subjected to nonparametric statistical tests with a 5% significance level. In OLP lesions histomorphological analysis, the most common findings were: hyperparakeratinization, specimens with atrophic epithelium in erosive clinical form (p = 0.011), epithelial projections in most of reticular type of lesions, in addition Civatte bodies were identified in most samples of both clinical forms. For immunohistochemistry analysis, five fields with strong immunoreactivity for IL-17 and IL-23 were photomicrographed at 400x magnification, images were transferred to a computer where with ImageJ software®, lymphocytes that exhibited cytoplasmic immunostaining for these cytokines were counted. A mean was established after for each case. There was no statistically significant difference in the number of imunopositive lymphocytes for IL-17 and IL-23 among the group of OLP and IFH group, however a larger amount of lymphocytes imunopositive for IL-17 was found in the LPO group (p = 0.079) and significantly higher amounts of those lymphocytes were found in the erosive OLP when compared to the group of reticular OLP and IFH (p = 0.019). Furthermore, a marker epithelial immunopositivity for IL-17 was observed in OLP group. Although the results of this study do not permit the forceful assertion about the participation of Th17 lineage in OLP lesions, the findings of immunopositive lymphocytes counting for IL-17 and IL-23, which are potent proinflammatory cytokines, together with the the marked epithelial immunopositivity found for IL-17 in this study, suggest a possible role of this lineage in the pathogenesis of this disorder As células Th17 têm sido fortemente associadas com a patogenia de diversas doenças autoimunes e inflamatórias. A IL-17 e a IL-23 são importantes citocinas associadas com esta linhagem. O objetivo do presente trabalho foi analisar, através de métodos imunohistoquímicos, a imunoexpressão da IL-17 e da IL-23 no infiltrado inflamatório das lesões de líquen plano oral (LPO) comparando ao da hiperplasia fibrosa inflamatória (HFI) e entre as formas clínicas reticular e erosiva do LPO com o intuito de esclarecer se a linhagem Th17 participa da patogênese do LPO. Na amostra foram incluídos 41 casos de LPO, dos quais 23 eram reticulares e 18 erosivos, além de 10 casos de HFI. Os resultados foram submetidos a testes estatísticos não paramétricos com nível de significância de 5%. Na análise histomorfológica das lesões de LPO, observou-se predomínio de: lesões hiperparaceratinizadas, espécimes com epitélio atrófico na forma clínica erosiva (p=0,011), projeções epiteliais nas lesões do tipo reticular, além de corpos de Civatte identificados na maior parte da amostra de ambas as formas clínicas. Para o estudo imuno-histoquímico, cinco campos com forte imunorreatividade para a IL-17 e para a IL-23 foram fotomicrografados sob o aumento de 400x, as fotos foram transferidas para um computador onde com o auxílio do software ImageJ®, realizou-se a contagem dos linfócitos que exibiram imunomarcação citoplasmática para estas citocinas. Posteriormente, foi estabelecida uma média para cada caso. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na quantidade de linfócitos imunopositivos para a IL-17 e para a IL-23 entre o grupo do LPO e da HFI, no entanto uma maior quantidade desses linfócitos para a IL-17 foi encontrada no grupo do LPO (p=0,079) e uma quantidade significativamente maior de linfócitos imunopositivos para a IL- 23 foi encontrada entre o grupo do LPO erosivo e da HFI (p=0,019). Além disto, foi observada uma marcante imunopositividade epitelial para a IL-17 no grupo do LPO. Ainda que os resultados do presente estudo não permitam a afirmação contundente da participação da linhagem Th17 nas lesões de LPO, os achados da contagem dos linfócitos imunopositivos para a IL-17 e para a IL-23, que são potentes citocinas pró-inflamatórias, somados à marcante imunopositividade epitelial encontrada para a IL-17 neste estudo, sugerem uma possível participação desta linhagem na patogênese desta desordem

La lesión por isquemia y reperfusión (IRI) es uno de los principales problemas en el trasplante. Nuestro objetivo fue evaluar el efecto del pre - acondicionamiento al donante con rapamicina y tacrolimus para prevenir la lesión por IRI. Las ratas Wistar donantes, 12 horas antes de la nefrectomía, recibieron fármacos inmunosupresores. La muestra se dividió en cuatro grupos experimentales: un grupo con intervención simulada (sham), un grupo control sin tratamiento, otro tratado con rapamicina (2 mg/kg) y el restante tratado con tacrolimus (0.3 mg/kg). Se retiró el riñón izquierdo y después de tres horas de isquemia fría, se lo trasplantó. Veinticuatro horas después, el órgano trasplantado se recuperó para el análisis histológico y la evaluación de la expresión de citoquinas. El tratamiento de pre-acondicionamiento con rapamicina o con tacrolimus redujo significativamente el nitrógeno ureico en sangre y los niveles de creatinina en comparación con el control (BUN: p < 0.001; creatinina: p < 0.001). La necrosis tubular aguda fue significativamente menor en las ratas donantes tratadas con inmunosupresores en comparación con el grupo control (p < 0.001). Finalmente, las citoquinas inflamatorias, como TNF-α, IL-6 y rIL-21, mostraron niveles más bajos en el injerto de los animales que recibieron tratamiento. Este estudio experimental exploratorio muestra que el pre-acondicionamiento en donantes con rapamicina y tacrolimus en dos grupos distintos mejora los resultados clínicos y anatomopatológicos en receptores, con una reducción in situ de citoquinas pro-inflamatorias relacionadas con la diferenciación Th17, y de este modo crea un ambiente favorable para la diferenciación de células T regulatorias (Tregs). The ischemia-reperfusion injury (IRI) remains a major problem in transplantation. The objective of this study was to evaluate the effects of preconditioning a donor group with rapamycin and another donor group with tacrolimus to prevent IRI. Twelve hours before nephrectomy, donor Wistar rats received immunosuppressive drugs. The sample was divided into four experimental groups: a sham group, an untreated control group, a group treated with rapamycin (2 mg/kg) and a group treated with tacrolimus (0.3 mg/kg). Left kidneys were removed and, after three hours of cold ischemia, grafts were transplanted. Twenty-four hours later, the transplanted organs were recovered for histological analysis and evaluation of cytokine expression. The pre-conditioning treatment with rapamycin or tacrolimus significantly reduced donor blood urea nitrogen and creatinine levels compared with control group (BUN: p < 0.001 vs. control and creatinine: p < 0.001 vs. control). Acute tubular necrosis was significantly lower in donors treated with immunosuppressant drugs compared with the control group (p < 0.001). Finally, inflammatory cytokines such as TNF-α, IL-6 and rIL-21 showed lower levels in the graft of pre-treated animals. This exploratory experimental study shows that preconditioning donors with rapamycin and tacrolimus in different groups improves clinical outcome and pathology in recipients and reduces in situ pro-inflammatory cytokines associated with Th17 differentiation, creating a favorable environment for the differentiation of regulatory T cells (Tregs).

Introdução: O câncer epitelial de ovário (CEO) representa um desafio a Oncologia Ginecológica devido ao seu caráter insidioso e alta letalidade. O sistema imunológico interage com o tumor em desenvolvimento podendo determinar sua progressão/regressão. Este estudo visa avaliar a resposta imune Th1, Th2 e Th17 em mulheres com CEO. Métodos: Avaliaram-se prospectivamente 44 mulheres com CEO e 32 mulheres sem evidencia de neoplasia maligna (grupo controle). Foram coletadas amostras de tumor/ovário normal, liquido intracistico, ascite e soro. A avaliação da resposta imune foi realizada por meio da dosagem das citosinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17, TNF-¿ e IFN-Á utilizando CBA(Cytometric Bead Array). As diferenças entre os grupos foram avaliadas pelo teste Mann- Whitney ou Kruskal-Walis e recorrência e sobrevida por Cox Regression. As diferenças com valor de p < 0,05 foram consideradas significativas. Resultados: Não houve diferença entre os grupos em relação a idade e paridade. No grupo de mulheres com CEO, 12 (27,2%) apresentavam estágios I/II e 32 (72,7%) estágios III/ IV. As pacientes com CEO apresentaram maiores concentrações de TNF-¿, IL-4, IL-6 e IL-10 (tumor) e IL-10 e TNF-¿ (soro) em comparação ao grupo controle. A ascite e liquido intracistico representaram os sítios com maiores concentrações de citosinas nas pacientes com CEO comparados ao soro e tumor. Houve uma associação de maiores níveis séricos do CA-125 com maior concentração de IL-10 (liquido intracistico) e TNF-¿ (soro). Pacientes com neoplasias pouco diferenciadas apresentaram uma maior concentração de IL-4 (liquido intracistico), IL-6 (liquido intracistico e tumor) e IL-10 (ascite e liquido intracistico). Mulheres com estágios III/IV apresentaram uma maior concentração de IL-10 (tumor e ascite) e TNF-¿ (soro e ascite). Mulheres submetidas a cirurgia de citorredução insatisfatória apresentaram maiores concentrações de IL-4, IL-6, IL-10 e TNF-¿ e menores concentrações de IFN-Á em comparação aquelas submetidas a citorreducao ótima. Mulheres com maiores concentrações de IL-6 e IL-10 (tumor e ascite) e menores concentrações de IFN-Á (liquido intracistico) apresentaram menor sobrevida global. Conclusões: Mulheres com CEO apresentam predominantemente uma resposta imune Th2 e um padrão de imunossupressão. Esse perfil parece exercer um papel importante na progressão tumoral, sendo evidenciada uma associação de IL-6, IL-10 e IFN-Á com o prognostico de pacientes com CEO.

This study was designed to investigate the functional heterogeneity of human Th17 and how their plasticity shapes the nature of immune cell responses to inflammation and autoimmune diseases, such as systemic lupus erythematosus (SLE). We evaluated functional Th17 cell subsets based on the profile of cytokine production in peripheral blood (PB), bone marrow aspirates (BM) and lymph node biopsies (LN) from healthy individuals (n = 35) and PB from SLE patients (n = 34). Data were analysed by an automated method for merging and calculation of flow cytometric data, allowing us to identify eight Th17 subpopulations. Normal BM presented lower frequencies of Th17 (p = 0.006 and p = 0.05) and lower amount of IL-17 per cell (p = 0.03 and p = 0.02), compared to normal PB and LN biopsies. In the latter tissues were found increased proportions of Th17 producing TNF-α or TNF-α/IL-2 or IFN-γ/TNF-α/IL-2, while in BM, Th17 producing other cytokines than IL-17 was clearly decreased. In SLE patients, the frequency of Th17 was higher than in control, but the levels of IL-17 per cell were significantly reduced (p

Tese de doutoramento em Biologia (Biologia Celular) apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease that affects the central nervous system (CNS) and is characterized by inflammation, demyelination and axonal destruction, consequently leading to neuronal death. The processes that are involved in triggering the onset and driving inflammation, cellular composition and distribution of autoimmune lesions during the course of MS are not completely understood. Thus far, the animal model representing human MS, experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) has proved a central role for myelin‐autoimmune CD4+ helper T cells playing in the initiation of inflammatory demyelination of the CNS. In the past recent years, the scientific community has witnessed a real revolution regarding the knowledge of CD4+ T cell biology and this had, of course, an important impact in the understanding of many immune‐related diseases. Since the discovery in 2005 of the new Th17 cell subset, a big debate took place concerning the true pathogenic CD4+ T cell subset in EAE and MS. Th1 cells, which produce IFNγ as their signature cytokine, have for many years been considered to be the pathogenic effector T cells in CNS autoimmunity. However, unexpected data obtained together with the discovery of Th17 cells have led the researchers to believe that Th17 cells but not Th1 cells were pathogenic in EAE. Nevertheless, evidence coming from spontaneous EAE models developed in this lab suggested that both CD4+ T cell subsets, Th1 and Th17, may contribute to the pathogenesis, probably with different roles. Therefore, the main aim of this thesis was to address the roles of Th1 and Th17 cell subsets in the context of autoimmune disease of the CNS. Initially, by establishing an adoptive transfer EAE model, the individual pathogenicity of myelin‐specific Th1 and Th17 cells was evaluated in vivo and it was observed that both T cell lineages were able to induce EAE, but with different clinical features. While Th1 cells induced only classical paralytic EAE, many animals receiving Th17 cells developed an ataxic, non‐classical EAE phenotype. Interestingly, when Th1 and Th17 cells were cotransferred induced more severe EAE with earlier onset, indicating that these two CD4+ subsets are both pathogenic and synergize to trigger autoimmune inflammation in the CNS. Finally, it was found that transferred Th17 cells can convert to a Th1 phenotype in the host, suggesting plasticity in the Th17 cell subset and emphasizing a pathogenic role for Th1 cells. Next, taking into account our data and earlier findings previous to the Th17 cell discovery that demonstrated a cytotoxic capacity of auto‐antigenic T cells over astrocytes, important CNS resident glial cells, we asked which of the CD4+ T cell subset was cytotoxic to astrocytes. By establishing an in vitro co‐culture of myelin‐specific Th1 and Th17 cells with GFP positive‐astrocytes, it was possible to pursue cytotoxicity by fluorescent time‐lapse microscopy. It was found that Th1 but not Th17 cells were cytotoxic to astrocytes, further emphasizing the pathogenic role of Th1 cells. Finally, in order to identify molecules that are differently regulated in Th1 and Th17 cells and to understand which different roles these cells might play in EAE, a transcriptome analysis by microarrays of both populations was performed. We found the nuclear receptor Rev‐Erbα to be expressed in Th17 but not in Th1 cells. A pathway analysis revealed a relationship of Rev‐Erbα with RORα, an important transcription factor for Th17 differentiation, but no definite role for this molecule in regulating Th17 differentiation could be established. In conclusion, this thesis demonstrates, contrary to initial evidence, that both myelinspecific Th1 and Th17 CD4+ T cell subsets are able to induce pathogenicity in EAE, though with different capabilities to mediate disease. Also, Th1 cells are true cytotoxic effector cells destroying astrocytes, important neuronal buffer cells. A new gene was also discovered, Rev‐Erbα, which is differently regulated by Th1 and Th17 cells. Though no impact of Rev‐Erbα in Th17 differentiation could be determined, a possible role in Th17 biology will need to be further addressed. A Esclerose Múltipla (EM) é uma doença autoimune que afecta o Sistema Nervoso Central (SNC) e é caracterizada pela presença de inflamação, desmielinização e destruição axonal, levando, consequentemente, à morte neuronal. Os processos que despoletam e conduzem a resposta inflamatória, composição celular no SNC e distribuição das lesões autoimunes no curso da doença não são completamente conhecidos. Até ao momento, o modelo animal que representa a EM, a Encefalomielite Autoimune Experimental (EAE), tem sido essencial na identificação dos linfócitos CD4+ autoimunes, específicos para a mielina, como células centrais na iniciação das desmielinização inflamatória do SNC. Nos últimos anos, a comunidade científica tem assistido a uma revolução no conhecimento acerca da biologia das células T CD4+ ajudantes. Consequentemente, este facto teve um impacto extremamente importante na compreensão de muitas doenças relacionadas com o sistema imunitário. Desde a descoberta em 2005 do novo subtipo de células CD4+ ajudantes, as células Th17, uma grande controvérsia cresceu na discussão sobre o verdadeiro subtipo de células CD4+ patogénico na EAE e EM. As células Th1, que produzem IFNγ como principal citocina, foram durante muitos anos consideradas as células CD4+ patogénicas na EM e EAE. No entanto, evidências científicas paradoxais obtidas em paralelo com a descoberta das células Th17 levaram os investigadores a acreditar que, afinal, as células Th17, e não as Th1, eram as patogénicas na EAE. Em todo o caso, observações feitas nos modelos espontâneos para a EAE desenvolvidos no nosso laboratório sugeriram que, talvez, ambos os subtipos sejam importantes e contribuam para a patogénese, provavelmente com diferentes papéis. Assim, o principal objectivo desta tese consistiu na elucidação dos papéis individuais das células Th1 e Th17 no contexto da autoimunidade do SNC. Inicialmente, ao estabelecer um modelo de EAE por transferência adoptiva, avaliámos in vivo a patogenicidade individual das células Th1 e Th17 específicas para a mielina e descobrimos que ambos os subtipos são capazes de induzir EAE, embora com diferentes características clínicas. Ao passo que as células Th1 induziram apenas EAE clássica, muitos animais transferidos com células Th17 desenvolveram um fenótipo de 14 EAE não‐clássico, atáxico. Curiosamente, quando as células Th1 e Th17 foram transferidas em conjunto induziram EAE mais severa e com início de doença antecipado, indicando que estes dois subtipos de células CD4+ são ambos patogénicos e cooperam sinergicamente para despoletar inflamação autoimune no SNC. Finalmente, observámos que as células Th17 transferidas se converteram para o fenótipo Th1 no animal recipiente, sugerindo plasticidade das células Th17. Em seguida, tendo em conta os nossos resultados e observações anteriores à descoberta das células Th17 que demonstraram uma capacidade citotóxica de células T ajudantes e auto antigénicas, mediadoras de EAE, sobre astrócitos, questionou‐se qual subtipo seria o responsável por tal citotoxicidade. Após desenvolvimento de um sistema de co‐cultura de astrócitos GFP positivos com células Th1 e Th17 específicas para a mielina, foi possível avaliar a citotoxicidade por microscopia de fluorescência em tempo real. Descobrimos que são as células Th1, e não as Th17, citotóxicas para os astrócitos, enfatizando assim um papel patogénico das células Th1. Finalmente, com o objectivo de identificar moléculas reguladas de modo diferente pelas células Th1 e Th17 e que, de certo modo, possam explicar os diferentes papéis que estes subtipos possam ter na EAE, foi realizado uma análise do transcriptoma das duas populações por microarrays. O nosso estudo focou-se no receptor nuclear Rev‐Erbα, expresso nas células Th17 mas não nas Th1. Uma análise das vias celulares e relações moleculares revelou uma associação do Rev‐Erbα com o RORα, um importante factor de transcrição para a diferenciação das células Th17. No entanto, não foi possível definir um papel para este receptor na diferenciação das células Th17. Em suma, nesta tese de doutoramento foi possível demonstrar que, ao contrário das evidências iniciais, no nosso modelo de EAE ambos os subtipos de células T CD4+ específicos para a mielina, Th1 e Th17, são capazes de induzir patogenicidade na EAE. Ainda, mostrou-se que as células Th1, mas não as Th17, são citotóxicas para os astrócitos, importantes células protectoras dos neurónios no SNC. Descobrimos também que o receptor Rev‐Erbα é regulado de modo diferente pelas células Th1 e Th17. Apesar de não termos encontrado um papel relevante do Rev‐Erbα na diferenciação das células Th17, é possivel que exerça uma função importante na biologia das mesmas, que terá de ser explorada no futuro.