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Los mastocitos (MC) pueden participar en la respuesta a microorganismos mediante diversos receptores de reconocimiento de patrones (PRRs). Luego de su activación a través de estos receptores, los MC pueden orquestar una respuesta mediante la secreción de mediadores inmunológicos como las citocinas. Entre éstas, la interleucina 10 (IL-10) es una citocina importante por sus características inmunomoduladoras, así como también, por su capacidad de regular la expresión de proteasas en MC. Adicionalmente, gracias a la existencia de modelos murinos modificados genéticamente, como los ratones IL-10 deficientes (IL-10-/-), que desarrollan colitis de forma espontánea, es posible investigar el rol potencial de la IL-10 en la respuesta de MC frente a la activación con antígenos de diversos microorganismos. Por otra parte, el uso de este modelo animal permite investigar la influencia de esta citocina sobre la composición de la microbiota intestinal. Este trabajo ha explorado el rol funcional de la IL-10 en mastocitos diferenciados in vitro, así como los efectos de la deficiencia de IL-10 sobre la composición de la microbiota y la expresión de factores relacionados con la respuesta inmune, antes (6 semanas) y al inicio (20 semanas) de la colitis. Para este propósito, se ha caracterizado el efecto de la deficiencia de IL-10 sobre el fenotipo mastocitario y tras su activación vía PRRs. Adicionalmente, se evaluó el efecto que produce la carencia de IL-10 sobre la composición de la microbiota, la expresión de TLRs y citocinas proinflamatorias, así como la producción de IgA luminal, en las mismas etapas y tras el tratamiento con antibióticos. Los resultados obtenidos indicaron que la deficiencia de IL-10 produjo distintos efectos dependiendo del fenotipo mastocitario, de la edad y del tipo de ligando PRR. Así, en ausencia de IL-10, MC de tipo mucosa (MLMC) mostraron una menor expresión de TLR4 y NOD2 a las 6 semanas y TLR7 a las 20 semanas. Además, ambos fenotipos de MC (mucosa y cone, Mast cells (MC) can participate in the response to microorganisms by various pattern recognition receptors (PRRs). After their activation through these receptors, MC can orchestrate a response by secreting immunological mediators such as cytokines. Among these, interleukin 10 (IL-10) is an important cytokine due to its immunomodulatory characteristics, as well as its ability to regulate the expression of MC proteases. Additionally, thanks to the existence of genetically modified murine models, such as IL-10 deficient (IL-10-/-) mice that develop colitis spontaneously, it is possible to investigate the potential role of IL-10 in MC response to activation with antigens of different microorganisms. On the other hand, the use of this animal model allows investigating the influence of this cytokine on the composition of the intestinal microbiota. This work has explored the functional role of IL-10 in differentiated MC in vitro, as well as the effects of IL-10 deficiency on the composition of the microbiota and the expression of factors related to the immune response, before (6 weeks) and at the onset (20 weeks) of colitis. For this purpose, the effect of IL-10 deficiency has been characterized on MC of different phenotype and after its activation via PRRs. Additionally, the effect produced by the lack of IL-10 on the microbiota composition, the expression of TLRs and proinflammatory cytokines, as well as the production of luminal IgA, in the same stages and after antibiotics treatment was evaluated. The results obtained indicated that the IL-10 deficiency produced different effects depending on the MC phenotype, age and type of PRR ligand. Thus, in the absence of IL-10, mucosal-like MC (MLMC) showed lower expression of TLR4 and NOD2 at week 6 and TLR7 at week 20. In addition, both MC phenotypes (mucosa and connective), showed a lower secretion of IL-6 and TNFα after TLR2 activation. The TLR4 and TLR7 activation in MLMC generated a lower secretion of IL-6 at week 6, while

Descripció del recurs: el 23 de novembre de 2010, El Síndrome del Intestino Irritable (IBS) se define como una alteración de la función gastrointestinal caracterizada por dismotilidad e hipersensibilidad visceral. En la mayoría de pacientes con este síndrome el número de mastocitos de mucosa intestinal (IMMC) y su actividad están aumentados. Este hecho podría jugar un papel central en las alteraciones funcionales, sensitivas y motoras del IBS ya que la activación de esta población celular provocaría la liberación de mediadores que podrían afectar a la excitabilidad de las neuronas entéricas y a la de las aferentes primarias, así como a la contractilidad del músculo liso intestinal. No obstante, este síndrome presenta un diagnóstico difícil y un tratamiento poco efectivo ya que los factores que lo causan aún no están claros. Recientemente los procesos alérgicos no diagnosticados hacia componentes de la dieta se han propuesto como posible factor desencadenante del IBS. Se requiere sin embargo disponer de modelos in vivo para estudiar los mecanismos implicados e identificar nuevas dianas terapéuticas. El modelo experimental inducido en rata Sprague Dawley (SD) a la que se expone a ovo-albúmina (OVA) por vía oral reproduce algunos de los hallazgos observados en pacientes con IBS: un aumento de la actividad mastocitaria y una alteración en la motilidad. El objetivo de esta tesis doctoral ha sido contribuir a caracterizar el modelo de exposición oral a OVA en rata SD; determinar el tipo de respuesta inmune inducida por el antígeno, evaluar la actividad mastocitaria y su implicación en la dismotilidad inducida por OVA y valorar la participacion del factor de crecimiento nervioso (NGF) en el proceso. La exposición oral a OVA, a diferencia de otras proteínas como la gelatina, produjo un aumento en la actividad mastocitaria en el intestino delgado y el colon, como reflejan el aumento del número de IMMC y el incremento de la concentración intestinal de RMCPII. Sin embargo, parámetros como la concentración de IgE o IgG específ, Irritable Bowel Syndrome (IBS) is an alteration of the gastrointestinal function characterised by dismotility and visceral hypersensitivity. In most patients with this syndrome the number of intestinal mucosal mast cells (IMMC) and its activity are increased. This could play a central role in any physiological, sensory and motor IBS because activation of this cell population would result in the release of mediators that could affect the excitability of enteric neurons and primary afferents, as well as the intestinal smooth muscle contractility. However, this syndrome presents a difficult diagnosis and ineffective treatment because the factors that cause it are still unclear. Recently undiagnosed allergic processes to dietary components have been proposed as a possible trigger of IBS. However is required to have in vivo models to study the mechanisms involved and identify new therapeutic targets. The rat experimental model induced in Sprague Dawley (SD) which is exposed to ovo-albumin (OVA) orally play some of the findings in patients with IBS: increased mast cell activity and altered motility. The aim of this PhD was to characterize the model of oral exposure to OVA in SD rat; determine the type of immune response induced, the mast cell activity and assess their involvement in the OVA-induced dysmotility and evaluate the participation of Nerve growth factor (NGF) in the process. Oral exposure to OVA, unlike other proteins such as gelatin, induced an increase in mast cell activity in the small intestine and colon, as reflected in the increased number of IMMC and intestinal RMCPII concentration. However, parameters such as concentration of specific IgE or IgG anti-OVA, IL4 or the presence of eosinophils and IgE + cells in intestinal tissue were not affected by exposure to OVA. These findings, coupled with increased histamine release after direct stimulation of mast cells with OVA in vitro, suggested that the effect of this protein could be due to direct interaction be

Descripció del recurs: el 7 d'abril de 2006, Vegeu ystresum1de1.pdf

Bajo el nombre de Enfermedad Inflamatoria Intestinal (EII) se agrupan dos patologías inflamatorias crónicas y recidivantes de etiología desconocida: la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa. La relativamente elevada incidencia de estas patologías hace que estudiar su etiopatogenia sea un objetivo importante, ya que actualmente no existe ningún tratamiento curativo y/o que prevenga la recidiva A pesar de que los pacientes afectados de EII presentan síntomas relacionados con alteraciones de la motilidad digestiva se desconoce la implicación que pueden tener estos desordenes en la patogénesis de la enfermedad. Uno de los principales objetivos de esta tesis doctoral ha sido la obtención y caracterización de un nuevo modelo experimental de Enfermedad Inflamatoria Intestinal crónica en la rata, con el objetivo de valorar los cambios que la inflamación provoca sobre los mecanismos fisiopatológicos que intervienen en la regulación tanto de la actividad motora como de la función de la barrera intestinal, así como la implicación que tienen estas alteraciones en la cronificación del proceso inflamatorio. Este nuevo modelo, que se ha obtenido a partir de la modificación realizada sobre el modelo clásico de enteritis inducida por indometacina en rata, ofrece una gran ventaja respecto al modelo clásico, ya que hemos reproduce las recidivas de inflamación intestinal que se producen de forma espontánea en los pacientes humanos. Así, en este modelo los animales presentan una alternancia de fases de inflamación activa, caracterizadas por leucocitosis, incremento de TNF en suero y aumento de la actividad MPO, con otras de aparente recuperación de la normalidad. Estudios realizados en este modelo demuestran que las diferentes fases van acompañadas de cambios en la flora intestinal y alteraciones de la motilidad. Mientras que durante la fase activa se observa una hipomotilidad generalizada acompañada de sobrecrecimiento de bacterias luminales, la fase de recuperación está asociada a, Inflammatory Bowel Disease (IBD) includes two chronic inflammatory pathologies characterized by alternation of active and quiescent phases of inflammation with yet unknown aetiology: Crohn's disease and ulcerative colitis. The ultimate goal of gaining a better understanding of the pathological mechanisms involved in the development of IBD is to find an effective treatment. Although IBD patients present symptoms that suggest motor alterations, their implication in the pathogenesis of the disease has not been well established. The purpose of this Thesis have been to obtain and to characterize a new experimental model of Inflammatory Bowel Disease in the rat to evaluate the effects of inflammation in the mechanisms involved in the regulation of both intestinal motility and epithelial barrier function, as well as the implication of both disorders in the development of chronic inflammation. This new model has been obtained by the modification of the classic model of indomethacin-induced enteritis. Similarly to human IBD, this model is characterized by spontaneous alternation of active and quiescent phases of inflammation. Active phases are related to leukocytosis, increased TNF and increased tissular MPO. In contrast, quiescent phases are related to a reduction of inflammatory parameters. Studies made in this model have also demonstrated changes in both bacterial load and motor activity. Whereas active phases are characterized by hypomotility and bacterial overgrowth, quiescent phases are related to hypermotility and the reduction of bacterial load. The regulation of the synthesis of NO plays a key role in the motility disturbances associated to the inflammatory process. Whereas hypermotility observed during the quiescent phases seems to be consequence of the reduction of the intestinal inhibitory tone due to nNOS down-regulation, hypomotility and bacterial overgrowth are related to an over-production of NO by up-regulated iNOS. Recently we have demonstrated animals with