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Dissertação de Mestrado em Bioquímica Nos doentes submetidos a transplante hematopoiético alogénico, a monitorização do quimerismo é importante na avaliação do sucesso do transplante. A análise de quimerismo nas diferentes sub-populações linfocitárias possibilita a monitorização em linhagens específicas, podendo estar dependente da pureza das células isoladas. A pureza das sub-populações celulares pode ser avaliada por técnicas moleculares ou por citometria de fluxo. Recentemente foram desenvolvidos kits baseados em técnicas de biologia molecular, tal como o Non-T Genomic Detection Kit e o Non-B Genomic Detection Kit da Accumol, que detetam a presença de ácido desoxirribonucleico (ADN) de células contaminantes em amostras de ácido desoxirribonucleico genómico de linfócitos T ou B isolados. Este estudo teve como objetivo avaliar a pureza das sub-populações linfocitárias, T e B, importantes na monitorização do quimerismo. As amostras de linfócitos T e B foram isoladas por meios imunomagnéticos, separação direta e separação sequencial, procedendo-se de seguida à extração de ácido desoxirribonucleico. A amplificação dos Short Tandem Repeats foi realizada através da técnica de reação em cadeia da polimerase multiplex e os fragmentos amplificados foram separados por eletroforese capilar. Na avaliação da pureza por citometria de fluxo os anticorpos utilizados na marcação foram CD45+, CD3+ e CD19+, os resultados foram analisados com o software Navios. A avaliação da pureza com o kit Accumol realizou-se nas amostras extraídas anteriormente para o estudo do quimerismo, de seguida amplificaram-se os fragmentos por reação em cadeia da polimerase e respetiva separação por eletroforese capilar, a análise foi efetuada no software GeneMapper. No presente estudo, foram analisadas 31 amostras provenientes de doentes alo-transplantados. No isolamento de linfócitos T por separação direta, 53% das amostras apresentaram contagem absoluta de células ≥400 células/μL e pureza >90%. Após o isolamento direto de linfócitos B, não foram obtidas amostras com contagens absolutas de células ≥400 células/μL e purezas >90%. No isolamento por separação sequencial, verificou-se contagem absoluta de células ≥400 células/μL e pureza >90% em 77% das amostras de linfócitos T e em 8% amostras de linfócitos B. A maioria das amostras de linfócitos T com quimerismo completo e misto, apresentaram pureza >90%. Nos linfócitos B, com quimerismo completo e quimerismo misto, a percentagem da pureza foi variável. Com este estudo, pode-se concluir que com contagens linfocitárias ≥0,5x103/μL no sangue periférico é possível obter uma contagem absoluta de células ≥400 células/μL, assim como valores de pureza >90%, principalmente no isolamento de sub-populações de linfócitos T. O mesmo não se verificou nas amostras de linfócitos B, pois a maioria não atingiu valores de contagem absoluta de células ≥400 células/μL e de pureza >90%. Para o isolamento de linfócitos T e B numa amostra de sangue, a separação sequencial apresentou melhores resultados na obtenção de amostras com contagem absoluta de células ≥400 células/μL e de pureza >90%. In patients submitted to allogeneic stem cell transplantation, the monitoring of chimerism is important for determining the success of the transplant. The chimerism analysis on different lymphocyte subpopulations enables the monitoring of specific lines and may be dependent on the purity of the isolated cells. The purity of the cellular subpopulations can be evaluated by molecular techniques or by flow cytometry. It has been recently been developed kits based on molecular biology techniques, such as Accumol’s Non-T Genomic Detection Kit and Non-B Genomic Detection Kit, which detect the presence of deoxyribonucleic acid from contaminating cells in samples of genomic deoxyribonucleic acid from isolated T and B lymphocytes. The aim of this study was to evaluate the purity of the lymphocyte subpopulations, T and B, used in the monitoring of chimerism. Before evaluation of purity, samples of T and B lymphocytes were isolated by immunomagnetic means, direct separation and sequential separation, then proceeding to the extraction of deoxyribonucleic acid. Amplification of short tandem repeats following multiplex polymerase chain reaction technique, the amplified fragments were separated by capillary electrophoresis. The assessment of purity by flow cytometry, the antibodies used in labeling were CD45+, CD3+ and CD19+, the results were analyzed with software Navios. Assessment of purity with Accumol kit was performed after amplification of the polymerase chain reaction fragments and respective separation by capillary electrophoresis, analysis was performed on the GeneMapper software. In this study we analyzed samples from 31 allotransplant patients. In the isolation of T lymphocytes by direct separation, 53% of the samples had an absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90%. In direct separation of B cells it was not obtained any sample with absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90%. In isolation by sequential separation, there was an absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90% in 77% of T lymphocytes samples, and 8% of B lymphocytes samples. The majority of T-cell samples showing complete or mixed chimerism had purity >90%. The B lymphocytes samples with complete and mixed chimerism, the percentage of purity was variable. With this study it can be concluded that with lymphocyte counts ≥0,5x103/μL in peripheral blood it is possible to obtain an absolute cell count ≥400 cells/μL, as well as purity values >90%, especially in the isolation of sub-population of T lymphocyte. The same was not observed in B lymphocyte samples, the majority did not reach the target values of cells ≥400 cells/μL and purity >90%. Even for isolation in the same sample of T and B lymphocytes, sequential separation showed better results in obtaining samples with absolute cell count ≥400 cells/μL and of >90% purity.

Dissertação de Mestrado em Bioquímica A análise de quimerismo, nos doentes pós transplante alogénico de progenitores hematopoiéticos, tornou-se um procedimento de rotina para avaliar o sucesso do transplante e na deteção de falência do enxerto. Após alotransplante o doente apresenta quimerismo completo, quando apenas têm células do dador ou quimerismo misto, quando têm células próprias e do dador. Para a análise de quimerismo, as células do dador e do doente são distinguidas por marcadores genéticos designados como short tandem repeats informativos, que são utilizados para efetuar o seguimento dos doentes no período pós transplante. Este trabalho teve como objetivos monitorizar o estado de quimerismo em doentes pós alotransplante, e comparar duas técnicas moleculares para avaliação do estado de quimerismo: amplificação de short tandem repeats, e amplificação do gene da amelogenina em pares dador/doente de sexos diferentes, pela técnica de reacção em cadeia da polimerase seguida de electroforese capilar. Os short tandem repeats utilizados foram: D11s, F131, THO, VWA, FES, FGA, HPRT. A análise foi realizada através de ADN extraído do sangue, nas subpopulações de leucócitos - células mononucleares e granulócitos. No presente estudo, foi analisado o quimerismo de 24 doentes alotransplantados, o seguimento médio destes doentes foi de 6 meses. O quimerismo foi analisado pela amplificação de short tandem repeats (n=24) e do gene da amelogenina (n=14). Os resultados obtidos para a análise de quimerismo foram: 20 doentes apresentaram sempre quimerismo completo e 4 doentes quimerismo misto. Dos doentes com quimerismo misto, 2 evoluíram para quimerismo completo e 2 mantiveram o mesmo estado. Foi possível concluir que, para a avaliação do quimerismo dos doentes, ambas as técnicas, short tandem repeats e gene da amelogenina, são informativas e podem ser realizadas separadamente ou de uma forma complementar. Chimerism analysis after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation has become a routine procedure, for monitoring the engraftment of donor cells, thus allowing early detection of graft failure. After allogeneic stem cell transplantation the patient has complete chimerism when only has donor cells, or mixed chimerism when he has his own and the donor’s cells. To the chimerism analysis, donor cells and patient’s cells are distinguished by genetic markers, named informative STR. They are used to perform the following of patients in the post-transplant period. The aim of this study were to monitor chimerism status in patients following allogeneic stem cell transplantation, and to compare two molecular techniques to assess the state of chimerism: amplification of short tandem repeats and amplification of amelogenin gene in pairs donor/patient of different gender by polymerase chain reaction technique. The analysis was performed using DNA extracted from blood leukocyte subpopulations - mononuclear cells and granulocytes. The short tandem repeats used were: D11s, F131, THO, VWA, FES, FGA, HPRT and the amelogenin gene, were amplified by the polymerase chain reaction, followed by capillary electrophoresis analysis. In this study, we performed follow up evaluation of 24 patients submitted to allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. The median follow up of these patients was 6 months. The chimerism was analyzed by amplification of short tandem repeats (n=24) and amelogenin gene (n=14). Majority of patients (n=20) consistently showed complete chimerism and 4 patients showed mixed chimerism. From the patients with mixed chimerism, 2 progressed to complete chimerism and 2 remained in the same condition. In summary, both techniques, short tandem repeats and amelogenin gene, are informative and can be performed individually or in a complementary way to evaluate the chimerism status of allotransplanted patients.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T14:58:04Z No. of bitstreams: 1 ARQUIVO FINAL_DANIEL DELUIZ MARTINS.pdf: 865420 bytes, checksum: da513ff26adf63fb8c7c38f58c6310e9 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T14:58:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ARQUIVO FINAL_DANIEL DELUIZ MARTINS.pdf: 865420 bytes, checksum: da513ff26adf63fb8c7c38f58c6310e9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-04 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Extremely resorbed alveolar ridges may lead to insufficient bone volume for dental implants placement, as well as jeopardize the final prosthesis in the aesthetic and functional standpoints. In the last decade, several studies have demonstrated the application of allogeneic grafts as bone substitutes in the alveolar reconstruction. Although case reports and case series are well documented in the literature, the use of the allograft bone requires more well-designed studies to guide the clinical practice. The aim of this study was to evaluate the clinical behavior of bone allograft blocks before and after implant placement and to investigate its incorporation and remodeling. In a 53-months period, patients who had indication for maxillary bone block reconstruction were consecutively included in the study. The trial was divided into four studies to investigate the following parameters separately: the incorporation and remodeling; the prevalence of complications and the survival rate of the implants; histological and tomographic long-termdata; and a pilotstudy. The grafts showed resorption rates from 13.98% (4 months) to 31.52% (6 months); new bone formation from 20.79% (4 months) to 27.2% (6 months); presence of bone cells and absence of inflammatory infiltratehistologically; intense positivity for a physiological bone activitymarker; 22.14% prevalence of complications; and a implants survival rate of 94.03%. After a 4 years follow-up with loaded implants, the grafts demonstrated a reabsorption rate from 2.1 to 7.7%. Histologically, remnants of allograft tissue were found along with an abundant number of osteocytes, osteoblasts and vessels. The evaluated parameters showed to be similar to other reconstructive procedures, demonstrating the viability of allogeneic bone block grafts as an option to augment thealveolar ridgefor dental implants placement Rebordos alveolares extensamente reabsorvidos podem levar a um volume ósseo insuficiente para a instalação de implantes osseointegrados, assim como comprometer as restaurações definitivas no ponto de vista estético e funcional.Na última década, diversos estudos têm demonstrado a aplicação de enxertos alógenos como substitutos ósseos nareconstruçãoalveolar.Apesar de bem documentado em relatos e séries de casos, o uso do tecido alógeno ainda requer estudos mais bem desenhados para a orientação da prática clínica e das condutas na sua utilização. O objetivo do presente estudo foi avaliar o comportamento clínico dos aloenxertos ósseos em bloco antes e após a instalação dos implantes, além de investigar sua incorporação e remodelação. Em um período de 53 meses, pacientes que tivessem indicação para reconstrução maxilar óssea em bloco foram consecutivamente incluídos no estudo. O trabalho foi dividido em 4 estudos para a investigação dos parâmetros separadamente: a incorporação e remodelação; a prevalência de complicações e taxade sobrevivência dos implantes;dados histológicos e tomográficos de longo prazo; além de um ensaio piloto.Os enxertos apresentaram taxas de reabsorção entre 13,98% (4 meses) e 31,52% (6 meses); neoformação óssea entre 20,79% (4 meses) e 27,2% (6 meses);presença de células ósseas e ausência de infiltrado inflamatório histologicamente; intensa positividade para um marcador de atividade óssea fisiológica; prevalência de complicações de 22,14%; além demonstrar uma taxa de sobrevivência dos implantes instalados de 94,03%. Após 4 anos de acompanhamento com implantes em carga, demonstram uma reabsorção entre 2,1 a 7,7%. Histologicamente, foram encontrados remanescentes do tecido alógeno juntamente com um número abundante de osteócitos, osteoblastos e vasos.Os parâmetros avaliados apresentam-se similares aos de outras modalidades reconstrutivas, demonstrando a viabilidade dos enxertos em bloco alógenos como uma opção para o aumento ósseo maxilar com fins de instalação de implantes dentais.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2015 Made available in DSpace on 2017-03-07T09:40:46Z (GMT). No. of bitstreams: 3 MICF_Ana_Raquel_Abreu.pdf: 5002909 bytes, checksum: 4705dae02a2c270cc9fd30ec541bcf16 (MD5) license.txt: 1195 bytes, checksum: 25733b0b84e8845b1d09ead22e7c5a2c (MD5) MICF_Ana_Raquel_Abreu.pdf: 5002909 bytes, checksum: 4705dae02a2c270cc9fd30ec541bcf16 (MD5) Previous issue date: 2015

The dose escalation of chemo-radiotherapy that is achievable with stem cell transplantation is often insufficient to eradicate malignancy, and an associated immune-mediated graft-versus-malignancy effect may be equally important for many diseases. The most directly compelling evidence for its presence has been provided by the efficacy of donor lymphocyte infusions (DLI) in generating anti-tumor responses, particularly for relapsed chronic-phase CML. Response rates and durability appear lower with myeloma and AML/MDS, and minimal with ALL. There is relatively little data on indolent lymphoid malignancies. Issues that remain to be resolved include the precise nature of the effector cells and their target antigens, the best strategies for separating graft-versus-malignancy from graft-versus-host disease (GVHD) and their effect on the durability of responses, and the role of adjuvant chemotherapy/cytokines. Similar issues surround routine combination with nonmyeloablative transplantation protocols and preliminary data suggests that GVHD may continue to provide a major obstacle.A quimioterapia seqüencial e transplante de células progenitoras, habitualmente são insuficientes para erradicar a neoplástica e uma associação do efeito enxerto contra o tumor imune mediado pode ser importante para o controle de muitas doenças uma evidencia deste efeito é proporcionado pela eficácia da infusão de lifócitos de doadores com a finalidade de gerar respostas anti-tumoral particularmente na leucemia mielóide crônica. A freqüência de respostas, durabilidade aparentaram ser pequenas no mieloma e na LM1/SMD e mínima na LLA. Existem de dos insuficientes nos linfomas indolentes. Vários aspectos necessitam ser esclarecidos incluindo a natureza presença das células efetoras e os antígenos alvos, e as melhores estratégias para separar o enxerto-versus-tumor da doença enxerto contra o hospedeiro, e o seu efeito na durabilidade das respostas e o seu papel como adjuvante no tratamento. Aspectos similares permeiam também os protocolos de transplante não mieloablativos em que os dados preliminares apontem como maior obstáculo à doença enxerto contra o hospedeiro.

En el trasplante alogénico (alo-TPH), las infecciones fúngicas invasivas (IFI) siguen teniendo un gran impacto sobre la morbi-mortalidad. La profilaxis primaria, es la única estrategia farmacológica de manejo de las infecciones fúngicas que ha demostrado disminuir la mortalidad global y la mortalidad relacionada con la IFI en el alo-TPH y en base a una revisión sistemática y metaanálisis de 64 estudios randomizados [Robenshtok E et al. J Clin Oncol 2007; 25: 5471-5489], debe administrarse profilaxis antifúngica a todos los pacientes alotrasplantados. Posaconazol es el único antifúngico recomendado con máxima evidencia por las guías internacionales [National Comprehensive Cancer Network (http://nccn.org), ECIL 3-2009 Update (Maertens J et al. Bone Marrow Transplant. 2011; 46: 709-718), Infectious Diseases Society of America (Walsh TJ et al. Clin Infect Dis 2008; 46: 327-60)] como profilaxis primaria para los pacientes con neutropenia prolongada tras quimioterapia para leucemia aguda mieloide y síndrome mielodisplásico y para los pacientes alotrasplantados con enfermedad injerto contra huésped (EICH); sin embargo, el potencial beneficio de Posaconazol en la fase precoz del alo-TPH sin EICH no había sido analizado. En la presente tesis se presentan los primeros datos de eficacia clínica, seguridad e interacciones medicamentosas de la profilaxis antifúngica primaria con Posaconazol en la fase precoz del alo-TPH. En el primer manuscrito se recoge un estudio observacional, monocéntrico, prospectivo y retrospectivo para evaluar la eficacia clínica y seguridad de la profilaxis antifúngica primaria con Posaconazol versus Itraconazol en la fase precoz del alo-TPH. La principal conclusión del estudio es que la profilaxis con Posaconazol reduce la incidencia de IFI (0% vs 12.5%, p=0.04) y se asocia a una mejor supervivencia global (91 vs 63%; p=0.011) y libre de infección fúngica (91 vs 56%; p=0.003) en la fase precoz del alo-TPH en comparación con Itraconazol. En el segundo manuscrito, se presenta un estudio que analiza el impacto de Posaconazol sobre el manejo de Ciclosporina A (CsA) en el post alo-TPH inmediato. Los resultados confirman que Posaconazol aumenta los niveles de CsA en sangre (p=0.011). Sin embargo, a pesar de que el aumento de los niveles ya es significativo desde la primera semana de tratamiento combinado (desde 225.8ng/ml a día 0 hasta 293.1ng/ml a día 7; p=0.028), no es necesario reducir la dosis de CsA antes de iniciar Posaconazol (p=0.857), sino hasta pasadas las dos semanas del tratamiento combinado (p, Invasive fungal infections (IFI) are recognized as the leading infectious cause of mortality in allogeneic blood and marrow transplant (allo-BMT) recipients. As a general antifungal strategy, primary prophylaxis reduces all-cause mortality and IFI-related mortality in allo-BMT, and should be used for all allo-BMT recipients according to a systematic review and meta-analysis of 64 randomized controlled trials [Robenshtok E et al. J Clin Oncol 2007; 25: 5471-5489]. Posaconazole is the only antifungal drug recommended with the maximum evidence by international guidelines [National Comprehensive Cancer Network (http://nccn.org), ECIL 3-2009 Update (Maertens et al. Bone Marrow Transplant. 2011; 46: 709-718), Infectious Diseases Society of America (Walsh TJ et al. Clin Infect Dis 2008; 46: 327-60)] as primary antifungal prophylaxis in prolonged neutropenia after intensive chemotherapy for acute myeloid leukemia or myelodisplastic syndrome and allo-BMT recipients with graft-versus-host disease (GVHD). However, we had no data on whether this experience would translate onto the use of posaconazole for antifungal prophylaxis in the early phase of allo-BMT in the absence of GVHD. In this thesis, we present the first studies analysing clinical efficacy, safety and drug interactions of primary antifungal prophylaxis with posaconazole in the early phase of allo-BMT. In the first article, we present an observational single-centre prospective and retrospective study analysing clinical efficacy and safety of primary antifungal prophylaxis with posaconazole versus itraconazole in the early phase of allo-BMT. The main conclusion of the study was that antifungal prophylaxis with posaconazole, as compared with itraconazole, may reduce the incidence of IFI (0% vs 12.5%, p=0.04) and improve fungal-free survival (91 vs 56%; p=0.003) and overall survival (91 vs 63%; p=0.011) in allo-BMT recipients. In the second article, we present an analysis of the impact of posaconazole prophylaxis on Cyclosporine A (CsA) management in the early post allo-BMT period. Our results confirm that posaconazole increases CsA blood-levels in allo-BMT recipients (p=0.011). However, despite a significant effect can already be detected within the first week of combined treatment (from 225.8ng/ml at day 0 up to 293.1ng/ml at day 7; p=0.028), the CsA dose-reduction is not required before starting posaconazole (p=0.857), but until more than two weeks after combined treatment (p

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:06:03Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_DANIEL_DELUIZ_MARTINS.pdf: 698607 bytes, checksum: 8bf1bb6196a1bc25a1fd9c448b676890 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:06:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_DANIEL_DELUIZ_MARTINS.pdf: 698607 bytes, checksum: 8bf1bb6196a1bc25a1fd9c448b676890 (MD5) Previous issue date: 2011-12-05 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fresh-frozen homologous bone grafts have been reported achieving good clinical results as a substitute for autogenous bone in alveolar reconstruction. However, data regarding the incorporation and remodeling of these grafts are not available in the literature. The aim of this study is to determine the optimal period for the implant placement in alveolar ridges reconstructed with bone block allografts. 24 patients underwent alveolar ridge reconstruction with homologous bone prior to implant placement. Subjects were randomly assigned into one of three groups according to the waiting time for the second surgical stage (4, 6 and 8 months). Tomographic, histological and histomorphometric analisys were used to determine the rates of grafts resorption and incorporation at different time intervals for each group. Data from graft resorption showed statistically significant differences for the three healing intervals. Similarly, histomorphometric parameters as: osteocytes count and quantification of remaining graft in the biopsies showed significant differences between groups. According to this work, with regard to the remodeling and incorporation, the most favorable the short term period to implant placement after fresh-frozen block allografts ridge reconstruction is 4 months. Enxertos ósseos homólogos congelados têm sido documentados apresentando bons resultados clínicos como substituto ao material autógeno nas reconstruções alveolares. Entretanto, dados referentes à incorporação e remodelação destes enxertos não estão disponíveis na literatura. Este estudo tem por objetivo determinar um período ótimo de espera para instalação de implantes em rebordos reconstruídos com enxertos ósseos homólogos em bloco no que se refere à incorporação e reabsorção. 24 pacientes foram submetidos à reconstrução alveolar óssea homóloga previamente à instalação de implantes. Os indivíduos foram alocados randomicamente em um de 3 grupos de acordo com o tempo de espera para o segundo estágio cirúrgico (4, 6 e 8 meses). Análises tomográficas, histológicas e histomorfométricas foram utilizadas a fim de determinar o grau de reabsorção e incorporação dos enxertos nos diferentes intervalos de tempo para cada grupo. Os dados de reabsorção sofrida pelos enxertos demonstraram diferenças estatisticamente significativas para os três intervalos de espera. Da mesma forma, parâmetros histomorfométricos como contagem de osteócitos e quantificação de remanescentes de osso homólogo nas biópsias apresentaram diferenças significativas entre os grupos. De acordo com os dados do presente trabalho, no que diz respeito à remodelação e incorporação, o período mais favorável à instalação dos implantes a curto prazo após recontruções com enxertos homólogos é de 4 meses.

In this review the authors present a state of art tretment of multiple myeloma.High dose chemo-radiotherapy followed by autologous hematopoietic stem cell transplantation has been show to be superior a conventional chemotherapy and a double transplantation. The authors discuss too, the allogeneic transplantation with reduced intensity conditioning, allogeneic versus tandem autologous, results the patients long term outcome and a approach about the use of donor lymphocytes, anti thimocyte globulin and a overview of post transplant therapies. Neste relato os autores apresentam uma revisão sobre o estado atual do tratamento mieloma múltiplo. São enfatizados aspectos sobre a vantagem do transplante autólogo em seguimento à quimioterapia convencional e o duplo transplante. São discutidos o transplante alogênico e o condicionamento com intensidade reduzida, além do uso de linfócitos do doador, da globulina antitimocítica e uma visão geral do futuro da terapia da moléstia.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-25T13:49:16Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) Made available in DSpace on 2017-04-25T13:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Miguel Gustavo Setúbal Andrade.pdf: 2741651 bytes, checksum: 408525066d9971f7289fcce0e1d3ae7e (MD5) CAPES;FAPESB A enxertia dos maxilares com osso córtico-medular aposicionado condiciona o rebordo para receber implantes de titânio. O osso alógeno congelado tem conquistado espaço por eliminar a necessidade de área doadora. Clinicamente, os enxertos aposicionados sofrem absorção, e o plasma rico em plaquetas (PRP) poderia minimizar esse fenômeno. Nesta tese, foram realizadas três pesquisas. A principal delas estudou a incorporação de enxertos autógenos e alógenos aposicionados à mandíbula de coelho em associação ou não com PRP. As alterações que o congelamento promoveu no osso e o processo de preparação do PRP também foram investigados. Utilizaram-se 54 coelhos. Enxertos córtico-medulares foram removidos do osso ilíaco e aposicionados bilateralmente à cortical externa da mandíbula. Parte dos animais recebeu osso autógeno fresco e outra parte recebeu osso alógeno congelado a -70°C por 120 dias. Em um lado da mandíbula, foi colocado PRP. A eutanásia ocorreu após 3, 7, 14, 28 e 56 dias. A diferença entre os grupos foi ponderada pelo teste de Bonferroni. O osso alógeno foi menos absorvido, mais osteogênico e fibrogênico que o osso autógeno. Sua cortical estava mais espessa e ele induziu maior quimiotaxia de macrófagos e osteoclastos. O PRP, apesar de melhorar, não interferiu significativamente nessas variáveis. Não houve reação de células T e B contra os enxertos. O efeito da criopreservação foi analisado no osso congelado a -20°C e -70°C por 30, 60, 90 e 120 dias e foi comparado ao osso fresco. A diferença foi estimada pelo teste de Tukey. O congelamento aumentou a área das células e dos núcleos na medular e diminuiu a área dos núcleos da cortical. O colágeno da cortical desnaturou com a diminuição da temperatura e o aumento do tempo de congelamento. Essas alterações só comprometeram a morfologia do tecido após 90 ou 120 dias na temperatura de -70°C. O sangue total e o PRP foram comparados pelo teste de correlação de Pearson. A plaquetometria do PRP não dependeu dos eritrócitos e do plasma pobre em plaquetas removidos, mas do hematócrito e da plaquetometria do sangue total. O hematócrito do PRP não interferiu na sua plaquetometria e leucometria, que foi dependente da leucometria inicial. Concluiu-se que o osso alógeno congelado foi bom material para enxertia aposicionada dos maxilares e não induz uma rejeição imunológica. O PRP apresentou apenas uma tendência em melhorar o reparo de enxertos aposicionados, e o congelamento foi eficaz em diminuir a antigenicidade do osso.

O mieloma multiplo (MM) e uma neoplasia hematologica incuravel com uma sobrevida mediana de tres anos com a utilizacao de tratamento convencional. O transplante de celulas-tronco hematopoeticas alogenico (TCTH-alo) pode curar alguns pacientes, mas esta associado com uma alta mortalidade relacionada ao transplante (MRT) podendo atingir mais de 40%. As vantagens do TCTH-alo sao a capacidade de coletar um enxerto livre de mieloma e o efeito enxerto-versus-mieloma (EVM). Entretanto, apesar destes fatores, a cura e rara. As recidivas ocorrem em uma taxa de 7% ao ano em seguimentos prolongados. A doenca do enxerto contra o hospedeiro (GVHD) pode tambem ser um problema, necessitando de tratamento especifico e prejudicando a qualidade de vida. Novas tecnicas para melhorar os resultados do TCTH-alo para o MM incluem a consideracao do status do paciente, a eficacia e a toxicidade do tratamento de inducao, o tipo do enxerto e o regime de condicionamento utilizado. Recentemente foi incluido o transplante autologo seguido pelo transplante alogenico nao mieloablativo e o TCTH- alo com deplecao de celulas T e subsequente infusao de linfocitos do doador. A utilizacao de novas estrategias terapeuticas direcionadas para a regulacao do ciclo celular podera prolongar a sobrevida dos pacientes e melhorar a qualidade de vida se comparada com os atuais resultados do transplante, que ainda apresentam claros beneficios na sobrevida.

O objectivo deste estudo foi avaliar, nos doentes submetidos a transplante de progenitores hematopoiéticos (TPH) alogénico, o efeito do regime de condicionamento, da fonte de progenitores, das compatibilidades ABO e HLA e do parentesco do par dador/receptor no consumo transfusional no período pós-transplante. Avaliamos retrospectivamente os doentes submetidos ao primeiro alotransplante no período compreendido entre Janeiro 2003 e Setembro 2005. Consultaram-se as bases de dados do Departamento de Imuno-Hemoterapia. A análise estatística foi realizada com recurso ao programa SPSS®. No período considerado realizaram-se 97 alotransplantes, dos quais 94 foram primeiros transplantes e elegíveis para o estudo (43,6% sexo feminino e 56,4% sexo masculino, mediana de idades de 38,5 anos, limites 6 meses-66 anos). Foram submetidos a um regime de condicionamento mieloablativo 50 doentes (53,2%) e a condicionamento de intensidade reduzida (CIR) 44 doentes (46,8%). Relativamente à fonte de progenitores utilizados, em 88,3 % dos doentes (n=83) foram células progenitoras hematopoiéticas perifericas (CPHP), em 7,5% (n=7) medula óssea (MO) e em 4,2% (n=4) sangue de cordão umbilical (SCU). No que respeita ao sistema HLA e ao parentesco, 95,7 % (n=90) dos transplantes foram HLA compatíveis e 87,2% (n=82) foram de dador relacionado. Relativamente ao sistema ABO do par dador/receptor, 27,6% (n=26) dos casos apresentavam incompatibilidade maior, 10,6% (n=10) menor e 57,4% (n=54) eram compatíveis. Não observamos diferenças estatisticamente significativas nas medianas de episódios transfusionais de concentrados de eritrócitos (CE) e de concentrados de plaquetas (CP) no que se refere a incompatibilidade ABO (p>0,05). Nos doentes transplantados com CPHP observamos uma tendência para um menor consumo transfusional de CP relativamente aos transplantados com SCU e MO. No entanto, o teste estatístico aplicado não mostrou um resultado significativo para os CE (p=0,054), provavelmente por causa do pequeno número de doentes transplantados com SCU e MO na população estudada. Os CIR foram associados a um menor consumo de CP (p< 0,0001). Não observamos diferenças significativas no número de episódios transfusionais de CE e CP no que se refere a incompatibilidade HLA e ao parentesco no par dador/receptor (p>0,05). We retrospectively studied all the first allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) performed in our Centre between January 2003 and September 2005. We evaluated the influence of haematopoietic stem cell source, ABO and HLA compatibility and relationship in donor/recipient pair as well as conditioning regimen (myeloablative versus reduced intensity) on transfusion requirements. We analysed patients’ transfusion requirements during a 100 days period after transplantation. The medians of red blood cells (RBC) and platelets (PL) transfusion episodes (TE) were considered as an estimative of the transfusion requirements. We performed a statistical analysis recurring to the SPSS® software. Ninety four patients (43.6% women, 56.4% men), median age 38.5 years (range 6 months-66 years), were submitted to a first HSCT. In 88.3% (n=83) of patients the haematopoietic stem cell source was peripheral blood, in 7.4% (n=7) bone marrow (BM) and in 4.3% (n=4) umbilical cord blood (UCB). In 95.7% of cases there was HLA compatibility and in 87.2% a relationship between the donor and the recipient. We observed a major ABO incompatibility in 27.6% (n=26) of cases and minor in 10.6% (n=10). In 57.4% (n=54) of transplants there was ABO compatibility. Conditioning regimen was myeloablative and of reduced intensity in 53.2% (n=50) and in 46.8% (n=44) of patients, respectively. We observed that ABO compatibility had not a major impact on transfusion requirements (p>0.05). Patients transplanted with peripheral blood progenitor cells (PBPC) showed a tendency to a lesser PL transfusion need when compared to patients transplanted with UCB and BM but the test applied was not significant for RBC, probably because of the low number UCB and BM transplants considered in this study. Reduced intensity conditioning was associated with a reduced PL transfusion need (p< 0.0001). In unrelated transplants and HLA mismatches the transfusion episodes after transplantation were not higher when compared to related and HLA compatible transplants (p>0.05).

A doença enxerto contra hospedeiro (DECH) é uma síndrome sistêmica que ocorre em pacientes que recebem linfócitos imunocompetentes. A fisiopatologia envolve uma reação imunológica entre linfócitos transplantados e tecidos do hospedeiro, e ocorre por ataque imune das células T do doador às células do hospedeiro, as quais diferem daquelas pelos antígenos de histocompatibilidade. É, assim, uma complicação primária do transplante de medula óssea (TMO) alogênico. O envolvimento cutâneo é freqüente na DECH e contribui para a morbidade e mortalidade do TMO. O dermatologista tem papel importante na avaliação dos pacientes auxiliando no reconhecimento precoce da DECH e suas complicações e no acompanhamento clínico desses pacientes. Nesta revisão os autores enfatizam as manifestações cutâneas da DECH, tendo como base sua experiência pessoal no acompanhamento de pacientes portadores de DECH transplantados de medula óssea no Centro Nacional de Transplante de Medula Óssea/Inca/MS, no Rio de Janeiro, nos últimos 14 anos. Graft-versus-host disease (GVHD) is a systemic disease that occurs in patients that receive immunocompetent lymphocytes. Pathophysiology involves an immunologic reaction between transplanted lymphocytes and tissues of the host, through an immune attack of donor T cells against recipient cells that differ from the donor's by histocompatibility antigens. It is a major complication of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. GVHD skin involvement is frequent and contributes to morbidity and mortality of bone marrow transplantation. Dermatologists have an important role on patient's evaluation, providing early diagnosis of GVHD disease and its complications, so as to follow-up these patients. In this review, we emphasize the skin manifestations of GVHD, taking into account our 14-year personal experience at Centro Nacional de Transplante de Medula Óssea/INCA/MS.

A doença enxerto contra hospedeiro (DECH) é uma síndrome sistêmica que ocorre em pacientes que recebem linfócitos imunocompetentes. A fisiopatologia envolve uma reação imunológica entre linfócitos transplantados e tecidos do hospedeiro, e ocorre por ataque imune das células T do doador às células do hospedeiro, as quais diferem daquelas pelos antígenos de histocompatibilidade. É, assim, uma complicação primária do transplante de medula óssea (TMO) alogênico. O envolvimento cutâneo é freqüente na DECH e contribui para a morbidade e mortalidade do TMO. O dermatologista tem papel importante na avaliação dos pacientes auxiliando no reconhecimento precoce da DECH e suas complicações e no acompanhamento clínico desses pacientes. Nesta revisão os autores enfatizam as manifestações cutâneas da DECH, tendo como base sua experiência pessoal no acompanhamento de pacientes portadores de DECH transplantados de medula óssea no Centro Nacional de Transplante de Medula Óssea/Inca/MS, no Rio de Janeiro, nos últimos 14 anos.

The dose escalation of chemo-radiotherapy that is achievable with stem cell transplantation is often insufficient to eradicate malignancy, and an associated immune-mediated graft-versus-malignancy effect may be equally important for many diseases. The most directly compelling evidence for its presence has been provided by the efficacy of donor lymphocyte infusions (DLI) in generating anti-tumor responses, particularly for relapsed chronic-phase CML. Response rates and durability appear lower with myeloma and AML/MDS, and minimal with ALL. There is relatively little data on indolent lymphoid malignancies. Issues that remain to be resolved include the precise nature of the effector cells and their target antigens, the best strategies for separating graft-versus-malignancy from graft-versus-host disease (GVHD) and their effect on the durability of responses, and the role of adjuvant chemotherapy/cytokines. Similar issues surround routine combination with nonmyeloablative transplantation protocols and preliminary data suggests that GVHD may continue to provide a major obstacle. A quimioterapia seqüencial e transplante de células progenitoras, habitualmente são insuficientes para erradicar a neoplástica e uma associação do efeito enxerto contra o tumor imune mediado pode ser importante para o controle de muitas doenças uma evidencia deste efeito é proporcionado pela eficácia da infusão de lifócitos de doadores com a finalidade de gerar respostas anti-tumoral particularmente na leucemia mielóide crônica. A freqüência de respostas, durabilidade aparentaram ser pequenas no mieloma e na LM1/SMD e mínima na LLA. Existem de dos insuficientes nos linfomas indolentes. Vários aspectos necessitam ser esclarecidos incluindo a natureza presença das células efetoras e os antígenos alvos, e as melhores estratégias para separar o enxerto-versus-tumor da doença enxerto contra o hospedeiro, e o seu efeito na durabilidade das respostas e o seu papel como adjuvante no tratamento. Aspectos similares permeiam também os protocolos de transplante não mieloablativos em que os dados preliminares apontem como maior obstáculo à doença enxerto contra o hospedeiro.