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Objectives: As daptomycin adjunction is currently under clinical evaluation in the multicentre phase II AddaMAP study to improve the prognosis of pneumococcal meningitis, the present work aimed at evaluating the in vitro antimicrobial activity of daptomycin-based combinations against some of the most frequent species responsible for bacterial meningitis. Methods: Clinically relevant strains of Streptococcus pneumoniae, Listeria monocytogenes, Haemophilus influenzae and Neisseria meningitidis were obtained from National Reference Centers. The antimicrobial activity of amoxicillin, cefotaxime and rifampicin, either alone or in association with daptomycin, was explored through the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and fractional inhibitory concentration index (FICI) as well as time–kill assay (TKA) using the broth microdilution method. Results: All species taken together, the adjunction of daptomycin had no deleterious impact on the antimicrobial activity of amoxicillin, cefotaxime or rifampicin in vitro. Regarding Gram-positive bacteria, FICI and TKA analysis confirmed a global improvement of growth inhibition and bactericidal activity due to the adjunction of daptomycin. The synergistic effect prevailed for L. monocytogenes as demonstrated by FICI mainly 50%. In addition, daptomycin-based associations did not modify the activity of β-lactam antibiotics or rifampicin against Gram-negative bacteria, notably N. meningitidis. Conclusion: These results bring comforting evidence towards the clinical potential of daptomycin adjunction in the treatment of bacterial meningitis, which supports the ongoing AddaMAP clinical trial.

We developed a rat model of methicillin-resistant Staphylococcus epidermidis (MRSE) osteitis without implant to compare the efficacy of vancomycin, linezolid, daptomycin, ceftaroline, and rifampin either alone or in association with rifampin. A clinical strain of MRSE was inoculated into the proximal tibia. Following a 1-week infection period, rats received either no treatment or 3, 7, or 14 days of human-equivalent antibiotic regimen. Quantitative bone cultures were performed throughout the 14-day period. The mean ± SD quantity of staphylococci in the bone after a 1-week infection period was 4.5 ± 1.0 log(10) CFU/g bone, with this bacterial load remaining stable after 3 weeks of infection (4.9 ± 1.4 log(10) CFU/g bone). Vancomycin monotherapy was the most slowly bactericidal treatment, whereas ceftaroline monotherapy was the most rapidly bactericidal treatment. The addition of rifampin significantly increased the bacterial reduction for vancomycin, linezolid, and daptomycin. All tibias were sterilized after 2 weeks of treatment except for animals receiving vancomycin or daptomycin alone (66.6% and 50% of sterilization, respectively). These results show that ceftaroline and linezolid alone remain good options in the treatment of MRSE osteitis without implant. The combination with rifampin increases the antibiotic effect of vancomycin and daptomycin lines.

This study investigated the in vivo efficacy of three bacteriophages combined compared with linezolid in two mouse models (nondiabetic and diabetic) of Staphylococcus aureus foot infection. In both models, a single injection of bacteriophages in the hindpaw showed significant antibacterial efficacy. Linezolid was as effective as bacteriophages in nondiabetic animals but ineffective in diabetic animals. These findings further support preclinical and clinical studies for the development of phage therapy.

Candida albicans is the most frequent yeast responsible for systemic infections in humans. These infections mainly originate from the gastrointestinal tract where C. albicans can invade the gut epithelial barrier to gain access to the bloodstream. Along the gut, pathogens can use Microfold (M) cells as a portal of entry to cross the epithelial barrier. M cells are specialized cells mainly located in the follicule-associated epithelium of Peyer patches. In this study, we used scanning electron and fluorescence microscopy, adhesion and invasion assays and fungal mutants to investigate the interactions of C. albicans with M cells obtained in an established in vitro model whereby enterocyte-like Caco-2 cells co-cultured with the Raji B cell line undergo a phenotypic switch to morphologically and functionally resembling M cells. Our data demonstrate that C. albicans co-localizes with and invades preferentially M cells, providing evidence that the fungus can use M cells as a portal of entry into the intestinal barrier. In addition to active penetration, F-actin dependent endocytosis contributes to internalization of the fungus into M cells through a mechanism involving hypha-associated invasins including Ssa1 and Als3.

Introduction Les donnees epidemiologiques actuelles sur les meningites bacteriennes de l’adulte font etat d’une large prevalence de Streptococcus pneumoniae [Clin Microbiol Infect. 2016 ;22 Suppl 3 :S37-62]. Du fait de facteurs de virulence intrinseques, cette espece conduit a la morbi-mortalite la plus elevee [N Engl J Med. 2004 ;351(18) :1826-8]. Bien que le traitement repose sur l’utilisation des beta-lactamines, plusieurs travaux de recherche suggerent un risque d’aggravation des lesions ischemiques cerebrales via l’effet pro-inflammatoire d’endotoxines liberees lors de la lyse bacterienne [Future Microbiol. 2015 ;10(7) :1195-213]. L’ajout de daptomycine, lipopeptide bactericide non bacteriolytique, est actuellement en cours d’evaluation clinique dans le but de reduire la mortalite et les sequelles des meningites a pneumocoques [ADDAMAP, www.infectiologie.com/fr/projets.html ]. Mais l’impact d’une telle adjonction sur l’efficacite du traitement de reference des autres meningites bacteriennes est encore inconnu. Ce projet prevoit d’evaluer in vitro l’efficacite d’associations a base de daptomycine sur les principales especes responsables de meningites bacteriennes chez l’adulte. Materiels et methodes Plusieurs souches d’interet epidemiologique ont ete selectionnees avec les centres nationaux de reference pour cinq especes bacteriennes : Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Listeria monocytogenes, Haemophilus influenzae et Streptococcus agalactiae. L’activite antimicrobienne de l’amoxicilline, du cefotaxime, de la rifampicine et de la daptomycine – seules ou en association – a ete evaluee par determination des concentrations minimales inhibitrices (CMI), des indices de concentration inhibitrice fractionnaire (FICI) et des vitesses de bactericidie. Resultats L’adjonction de daptomycine ne semble pas diminuer l’efficacite des beta-lactamines ou de la rifampicine sur les especes bacteriennes testees. Au contraire, les resultats de FICI et vitesses de bactericidie confirment une augmentation du potentiel bactericide lorsque la daptomycine est associee aux autres antibiotiques. Prenant l’exemple de Listeria monocytogenes, la valeur des FICI pour toutes les associations comprenant la daptomycine est comprise entre 0,9 et 0,2, temoignant d’un effet additif ou synergique–variant selon les souches–a l’origine d’une augmentation significative des vitesses de bactericidie, en moyenne quatre fois superieures a celles obtenues avec les antibiotiques seuls. Conclusion Ces resultats in vitro apportent des donnees rassurantes en faveur de l’adjonction de daptomycine au traitement probabiliste des meningites bacteriennes de l’adulte. Des etudes complementaires sont actuellement en cours afin de mieux comprendre cette potentialisation de l’effet bactericide des beta-lactamines et de la rifampicine, notamment l’impact de la daptomycine sur la membrane bacterienne.

Introduction Les cellules phagocytaires des lignees monocytaire et neutrophile sont essentielles a la defense de l’organisme au cours d’une infection a Candida spp. Cependant in vitro, C. albicans , C. glabrata et C. lusitaniae sont capables de resister a la phagocytose. Notre hypothese est que les lipides, et en particulier les acides gras, pourraient constituer une ressource energetique privilegiee pour la levure afin de resister a la phagocytose. Chez les levures Ascomycetes, le catabolisme des acides gras est presume etre exclusivement localise dans les peroxysomes et repose principalement sur la β-oxydation. Methodes Nous avons construit par recombinaison homologue chez C. lusitaniae 11 mutants nuls (simples, doubles ou triples) afin de bloquer la β-oxydation peroxysomale (genes FOX1 , FOX2 , FOX3 ), mais aussi en amont l’import peroxysomal des acides gras a longue chaine carbonee (gene PXA1 ) et en aval le cycle du glyoxylate (gene ICL1 ). La caracterisation du phenotype des mutants obtenus a compris l’etude : – de l’assimilation des sources de carbone ; – de la consommation d’un substrat radioactif de la β-oxydation par des extraits bruts et fractions cellulaires ; – de l’immunolocalisation de la proteine Fox2 (western blot sur fractions cellulaires, microscopie electronique) ; – de la resistance in vitro a la phagocytose macrophagique (modele developpe au laboratoire) ; – de leur virulence dans un modele murin de candidemie. Resultats Contrairement a ce qui est rapporte pour C. albicans , l’inactivation du gene FOX2 (ou des genes FOX1 ou FOX3 ) ne se traduit pas par un blocage du catabolisme des acides gras chez C. lusitaniae . Nos travaux ont permis d’expliquer ce phenotype original par l’existence de 3 voies pour le catabolisme des acides gras chez C. lusitaniae et de demontrer la colocalisation inedite chez les Eucaryotes de la proteine Fox2 au peroxysome et a la mitochondrie. A 6 h d’infection, la survie des macrophages infectes par le mutant fox2Δ etait comprise entre celle des macrophages infectes par la souche sauvage (la plus faible) et celle des macrophages infectes par le mutant icl1Δ (la plus forte). Les mutants icl1Δ et fox2Δ se multipliaient moins que la souche sauvage. La virulence in vivo du mutant icl1Δ etait attenuee, alors que celle du mutant fox2Δ n’etait pas differente de la souche sauvage. Conclusion Le cycle peroxysomal de l’acide glyoxylique est indispensable pour la virulence de C. lusitaniae , et l’acetyl-CoA qui l’alimente ne provient pas seulement de la s-oxydation des acides gras.

Candida albicans est un pathogene opportuniste pouvant provoquer des infections systemiques chez des patients immunodeprimes. L’origine de ces infections est principalement d’origine endogene, notamment a partir du tractus gastro-intestinal, ou le champignon peut penetrer a travers la barriere epitheliale intestinale pour gagner ensuite la circulation sanguine. Au niveau de la muqueuse intestinale, les enterocytes forment une monocouche de cellules assurant l’integrite et l’impermeabilite du tissu digestif. Au niveau des plaques de Peyer notamment, les cellules Microfold (ou cellules M) sont associees aux enterocytes et jouent un role important dans l’homeostasie digestive. En effet, ces cellules epitheliales sont specialisees dans l’endocytose d’antigenes, de molecules ou encore de microorganismes presents dans la lumiere intestinale. Elles jouent le role de cellules presentatrices d’antigene puisqu’elles presentent au systeme immunitaire sous-jacent les antigenes endocytes. Ces cellules peuvent egalement etre utilisees par des pathogenes comme Yersinia enterocolitica ou Salmonella typhi comme porte d’entree pour traverser la barriere epitheliale intestinale. L’interaction de certaines bacteries pathogenes avec les cellules M constitue donc une etape importante dans la physiopathologie des infections causees par ces bacteries. Cependant, aucune etude n’a a ce jour etudie l’interaction de C. albicans avec les cellules M. Afin de mieux comprendre les premieres etapes des candidoses invasives a C. albicans , nous avons developpe un modele in vitro decrit par des Rieux et al., 2007, permettant d’obtenir des cellules M a partir de la differenciation d’enterocytes de la lignee Caco-2 mis en contact avec des lymphocytes B Raji. Nous avons ensuite etudie l’interaction specifique de C. albicans avec des cultures mixtes enterocytes/cellules M. A l’aide de techniques de microscopie electronique a balayage et a fluorescence, et de protocoles permettant d’evaluer l’adherence et l’invasion de souches sauvages et de mutants de C. albicans , nous avons pu montrer que C. albicans adherait preferentiellement aux cellules M dans des monocouches mixtes enterocytes/cellules M. De meme, nous avons observe que C. albicans pouvait utiliser les cellules M comme porte d’entree au franchissement de la barriere intestinale. Par ailleurs, alors que C. albicans est capable d’envahir la muqueuse intestinale par penetration active des hyphes dans les cellules epitheliales intestinales, nous avons montre que l’internalisation des levures etait egalement possible au niveau des cellules M par penetration active des hyphes mais egalement par endocytose F-actine dependante : alors que la penetration active dans les monocouches mixtes enterocytes/cellules M est facilitee en partie par certaines invasines associees aux hyphes de C. albicans (dont Als3 et Ssa1), la nature des invasines de C. albicans capables d’induire son endocytose par les cellules M reste a determiner.