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Introduction: Measurable residual disease (MRD) has been reported as a strong independent prognostic factor in AML, particularly in guiding decisions for hematopoietic cell transplantation in first remission. The recent consensus guidelines established by the European Leukemia NET (ELN) have emphasized molecular characterization and risk stratification for individuals with AML and recommended MRD by flow cytometry (FC) assessment in the evaluation of treatment response and monitoring in AML. Aim: We evaluated the impact of MRD status on clinical outcomes after initial induction therapy in pediatric patients diagnosed with AML and MRD-FC as a tool to support relapse risk classification. Material and methods: Overall, 48 bone marrow (BM) samples of 16 pediatric patients (62% F and 38% M), median age of 8,5 years – 0 to 16 years) were diagnosed with AML between 2021-2024, at a public pediatric hospital. All patients received the chemotherapy protocol GELMAI. BM samples were obtained at different time points after treatment (15 post induction I, 14 post induction II, 13 post intensification, 2 pre-transplant and 4 post-transplants). MRD-FC was performed in all samples with a panel with antibody combinations - 8 colors, according to ELN. All BM samples were studied with the acquisition of ≥1,5 × 106 events per sample. FACS Canto cytometer and Infinicyt software were used for acquisition and analysis. Risk classification considers molecular and cytogenetics findings at diagnosis and MRD status during treatment response assessment (positive MRD > 0.1% after induction II). The patients were classified according to GELMAI protocol as low-risk, intermediate risk, and high-risk. Event-free survival curves (EFS), defined as the time from diagnosis to progression and/or disease recurrence or patient death during the study. The study was approved by local ethics committee. Results: Positive MRD was detected in 42% (20/48) of BM studied, being 67% (10/15) at post induction I, 35% (5/14) at post induction II and 38% (5/13) at post intensification. In this study, 56% of patients were stratified as high-risk. Throughout the study, 3/16 patients relapsed after intensification phase and 4/16 died early (one after induction phase and one before starting treatment). Negative MRD AML patients at post-induction II had longer EFS compared to positive MRD cases and did not relapse, although the difference was not statistically significant (p = 0.06). Discussion: AML is a complex hematological neoplasm from a cytogenetic, molecular and morphological point of view. Several studies have shown MRD by flow cytometry is an important biomarker in AML being used for prognostic, predictive, monitoring, and efficacy-response assessments. MRD is a fast, sensitive method and can provide an independent prognostic factor when evaluated after post-induction therapy. We demonstrated that MRD is crucial for risk stratification and treatment planning, with MRD positivity linked to an increased risk of early relapse, though not statistically significant due to limited sample size and follow-up. Thus, further investigations with larger series of paired diagnostic and follow-up BM samples from AML patients are required. Conclusion: MRD-FC has become an indispensable tool for prognosis, clinical management, and guiding decisions, being feasible to introduce as a tool for treatment response assessment and risk stratification after post-induction.

Células tumorais metastáticas na medula óssea são encontradas em cerca de 15% dos pacientes pediátricos ao diagnóstico. A detecção precisa do envolvimento metastático é essencial para o estadiamento, estratificação terapêutica e prognóstico. A citometria de fluxo multiparamétrica (CFM) é uma ferramenta indispensável para o diagnóstico e seguimento de neoplasias hematológicas. Porém, pouco explorada para diagnóstico e seguimento de tumores sólidos não-hematopoiéticos. Nesse estudo, desenvolvemos um método de detecção e identificação de células tumorais metastáticas na medula óssea por citometria de fluxo multiparamétrica. Para o processamento, alíquotas de medula óssea foram submetidas a uma solução de cloreto de amônio (BulkyLise) para lise de hemácias. As amostras foram marcadas com um painel de anticorpos monoclonais para orientação de tumores sólidos (STOT): cyCD3+CD271/ CD45/ CD8+CD99/ nuMiogenina/ CD4+EpCAM/ CD56/ GD2/ smCD3+CD19+FVS780 (marcador de viabilidade). Foram adquiridos 5 milhões de eventos (ou a amostra total) em um citômetro FACSCantoII® (BDB), com a utilização do FACSDiVa® (BDB) e a análise dos dados foi feita através do Infinicyt® (Cytognos). Um total de 135 amostras de medula óssea de 86 pacientes; mediana de idade 3 anos (0-18 anos); de 3 centros pediátricos brasileiros (IPPMG, INCA e Hospital José Alencar) e 2 Europeus (Ghent e Monza); com suspeita de câncer pediátrico foram estudados com um tubo de 12 marcadores/8 cores, STOT- “Solid Tumor Orientation Tube” para detecção de células metastáticas tumorais. Dessas amostras, 45/135 (33%) estavam infiltradas por células metastáticas (31 neuroblastomas, 5 rabdomiossarcomas, 9 neoplasias hematológicas - 4 LLAB, 4 LMA, 1 LLAT). A mediana do número de eventos adquiridos foi de 4.000.000 de eventos adquiridos (6,5 × 104 – 1 × 107) com um limiar de detecção de 1 × 10-5 (mediana 1,2%; 0,0038% a 96,8%), 28/136 (20%) pacientes sem neoplasias malignas e 62/135 (45,5%) livres de doença (estadiamento de pacientes com câncer). A concordância entre o diagnóstico histopatológico/imunohistoquímico (HP/IQ) foi de 97,8%, sendo que em 3/45 (6,5%) amostras infiltradas por neuroblastoma, as células metastáticas foram detectadas apenas pela CFM e não pela HP/IQ, devido a sua baixa frequência (0,012 até 9,5), com uma sensibilidade de 100% e especificidade de 96.74%. O diagnóstico de infiltração metastática da medula óssea por citometria de fluxo é amplamente utilizado na rotina diagnóstica e detecção de doença residual mínima para neoplasias hematológicas, mas não para neoplasias não-hematológicas. Nesse estudo, a técnica da CFM apresentou resultados preliminares superiores à técnica “padrão-ouro” atual HP/IQ com uma taxa de concordância de 97,8. Nossos resultados sugerem que, a detecção de células metastáticas de neoplasias não-hematológicas por citometria de fluxo através do STOT podem integrar o fluxo diagnóstico da rotina dos laboratórios, acelerando a detecção do envolvimento metastático. A implementação na rotina clínica da CFM para diagnóstico e seguimento de neoplasias não-hematológicas pode permitir o diagnóstico em sítios menos invasivos, acrescentar informações valiosas para estratificação terapêutica e avaliar resposta ao tratamento.

Objetivos: Células tumorais circulantes (CTCs) são células raras no sangue periférico de pacientes com câncer, refletindo o estado tumoral em tempo real. A detecção de CTCs pode indicar disseminação metastática e formação de micrometástases. Tumores sólidos pediátricos representam cerca de 30% das malignidades pediátricas, com subtipos como neuroblastoma, rabdomiossarcoma, sarcomas ósseos e tumor de Wilms. O diagnóstico padrão-ouro não aborda a heterogeneidade tumoral e suas metástases. A citometria de fluxo de próxima geração (NGF- Next Generation Flow) é uma abordagem promissora para identificar CTCs em tumores sólidos pediátricos. Este trabalho visa detectar CTCs por NGF em pacientes com suspeita de tumores sólidos pediátricos ao diagnóstico e durante o seguimento. Material e métodos: Alíquotas de 2-4ml de sangue periférico, coletadas em centros pediátricos no Brasil e Europa, foram tratadas com cloreto de amônio para lise de hemácias. As amostras foram marcadas com anticorpos monoclonais para tumores sólidos (STOT): cyCD3+CD271/CD45/CD8+CD99/nuMiogenina/CD4+EpCAM/CD56/GD2/smCD3+CD19+FVS780. Foram adquiridos 5 milhões de eventos no citômetro FACSCantoII® e analisados no Infinicyt®. Resultados: Foram analisadas 128 amostras de sangue periférico de 125 pacientes (3 pacientes ao diagnóstico e no seguimento), com mediana de idade de 6 anos (0-17 anos), suspeitos de câncer pediátrico, usando um tubo de 12 marcadores/8 cores, STOT- “Solid Tumor Orientation Tube” para detecção de CTCs. Das amostras, 12/128 (9%) apresentavam CTCs (neuroblastomas - 8/31 (25%); rabdomiossarcomas – 3/11 (27%); e meduloblastoma - 1/3 (33%)). Todos os pacientes com CTCs ao diagnóstico apresentavam doença disseminada. De acordo com os marcadores utilizados, as CTCs de tumores sólidos não-hematopoiéticos apresentaram o seguinte fenótipo: i) neuroblastoma: CD45-/ CD56++/ GD2++/ CD271-/ nuMiogenina-/ EpCAM-; ii) rabdomiossarcoma: CD45-/ CD56++/ GD2-/ CD271++/ nuMiogenina-/+fraco/ EpCAM-; meduloblastoma: CD45-/ CD56++/ GD2+/CD271-/nuMiogenina-/EpCAM-). A mediana de eventos adquiridos foi de 3,4 × 10-6 (9,7 × 104 - 3,1 × 106), com limite de detecção mediano de 1,5 × 10-5 (4,6 × 10-6 – 3,4 × 10-5). Discussão: A combinação de marcadores no STOT, via NGF, identificou corretamente as CTCs dos principais tumores sólidos pediátricos não-hematopoiéticos com um limite de detecção de até 10-6, sendo superior aos métodos moleculares descritos na literatura. Todos os pacientes apresentavam disseminação de doença ao diagnóstico correlacionando diretamente a presença de CTCs com seu estadio avançado. Em cada subgrupo tumoral analisado, o NGF foi capaz de detectar as CTCs em cerca de 30% dos pacientes estudados. Deste modo, a metodologia do NGF permite, a partir de uma amostra de SP, exame menos invasivo que as biópsias tradicionais, identificar precocemente as CTCs, sendo de grande impacto no diagnóstico, estadiamento e avaliação da resposta ao tratamento. Conclusão: A técnica de citometria de fluxo foi capaz de identificar CTCs em mais de 1/3 dos casos no SP de pacientes com tumores sólidos pediátricos. A diferente frequência de infiltração nos subtipos de tumores sólidos pediátricos pode estar relacionada ao potencial metastático dos subtipos tumorais ou devido a alguma limitação técnica do método. Nas seguintes etapas do trabalho, pretende-se ampliar a casuística e comparar com métodos moleculares a partir da biópsia líquida.

Introdução: Apesar das elevadas taxas de sobrevida das Leucemias Linfoides Agudas de células B (LLA-B) na infância, o manejo de pacientes com recidiva ou refratariedade à terapia ainda é um desafio. A elucidação da leucemogênese por meio do sequenciamento de nova geração (NGS) tem sido promissora e pode direcionar condutas que modifiquem a evolução dos pacientes. Caso clínico: Paciente de 26 meses, sexo feminino, sem comorbidades, admitida por dor abdominal e em membros inferiores. Ao exame físico: palidez e adenomegalias submandibular e inguinal. Ao hemograma: anemia (Hb 9,1 mg/dL; Ht 29,5%), sem alterações numéricas de leucócitos e plaquetas. Todavia, com blastos em lâmina de sangue periférico. Mielograma: 74% de blastos e imunofenotipagem de medula óssea compatível com diagnóstico de LLA-B; líquor sem evidências de infiltração em SNC. Apresentou cariótipo (46,XX) e pesquisa de translocações por RT-PCR com a fusão ETV6::RUNX1. No NGS, confirmou-se a t(12;21) e identificou-se a fusão RUNX1::CTC1. Foi iniciado o tratamento pelo protocolo ALL IC BFM 2009 adaptado. Evoluiu com boa resposta, apresentando valores de DRM no D15 = 0,11% e D33 = 0,006%, sendo, portanto, classificada como risco intermediário. No D78 (DRM indetectável), mas na 90ª semana do tratamento, apresentou leucocitose com blastos em sangue periférico. O AMO confirmou a recidiva medular, isolada e precoce, 23 meses após o primeiro diagnóstico com DRM = 81,8%. A avaliação da recidiva por NGS evidenciou as mesmas alterações do diagnóstico anterior. Iniciou o tratamento pelo protocolo BFM para LLA recaída de 2002 (grupo de alto risco, S3). A paciente apresentou refratariedade ao tratamento, com valor de DRM pós-ciclo F2 = 20%. Foi indicado uso de blinatumomabe, após o qual, a paciente ainda se mantinha refratária (DRM = 84,7%). Foi instituído outro resgate contendo um inibidor de proteassomo, em 2 ciclos, possibilitando o controle da doença, pós-2° ciclo, com redução da DRM a 0,03%. A criança realizou outro ciclo de blinatumomabe, resultando em negativação da DRM, possibilitando o TMO com doador aparentado, 10 meses após a recidiva. A paciente exibiu DRM indetectável em D+30, D+60, D+90, +4 e +6 meses no pós-TMO, com tempo de sobrevida de 42 meses. Discussão: A fusão ETV6::RUNX1 é associada ao bom prognóstico nas LLA-B. Contudo, outras formas de mutações somáticas do gene RUNX1 remetem a neoplasias de pior prognóstico. O gene componente do complexo de replicação do telômero CST 1 (CTC1) garante o alongamento e a proteção contra a degradação telomérica. Existe uma correlação positiva entre comprimento telomérico e leucemogênese (OR = 1.07; 95% CI = 1.00–1.14; p = 0.044), também evidente em casos de recidiva (OR = 1.19; 95% CI = 1.01–1.40; p = 0.043). Há associação entre a presença de blastos de LLA-B e o gene CTC1 (p = 0.002), indicando que o gene CTC1 pode ser utilizado como biomarcador para as LLA. Conclusão: No caso descrito, os métodos diagnósticos tradicionais foram insuficientes para justificar a agressividade da doença, enquanto o NGS ampliou o potencial diagnóstico, revelando uma nova fusão que pode explicar o comportamento fora dos padrões esperados.

Objetivos: Verificar e comparar os impactos das deleções nos genes CDKN2A e 2B (delCDKN2A/B) em uma amostra de crianças latinas diagnosticadas com LLA-B em um hospital pediátrico de referência do Distrito Federal. Métodos: Incluiu-se 21 pacientes, de 0 a 18 anos, com LLA-B diagnosticada entre 2018 e 2022. Estudou-se seus achados biomoleculares por: análise de reação em cadeia de polimerase múltipla (MLPA), pesquisa de translocações por RT-PCR (RT-PCR) e sequenciamento de nova geração (NGS). As crianças foram estratificadas conforme os critérios de risco do National Cancer Institute (NCI). Além disso, avaliou-se as variáveis: faixa etária; sexo; presença de recidiva; realização de TMO e óbitos. Resultados: Estudamos 21 pacientes: 12 meninos e 9 meninas. As deleções em CDKN2A/B mono e bialélicas foram detectadas por MLPA. Cerca de 20% dos pacientes possuía alguma das deleções de interesse e, desses, 50% eram masculinos e 50% femininos. Em todos os pacientes com deleções, sempre houve pelo menos outra alteração de MLPA como: deleção em IKZF1, em ETV6, em RB1, mutação no gene PAR1 e aneuploidias do cromossomo 21 em pacientes sem síndrome de Down. Sempre houve alguma delCDKN2A/B, em 10% dos pacientes que foram a óbito. A média de idade de toda a coorte no diagnóstico foi 6 anos e 7 meses, enquanto a dos portadores das delCDKN2A/B foi de 10 anos e 4 meses (alto risco pelos critérios do NCI). Todos os portadores das alterações em destaque tiveram resultados benignos e 100% concordantes, por RT-PCR e NGS (50%: exames normais e 50%: fusão ETV6::RUNX1). Dos pacientes com as insuficiências gênicas destacadas: uma, com 14 anos e 11 meses (também com deleção em IKZF1) faleceu por complicações da imunossupressão severa. Um, com 10 anos e 6 meses, apresentou: falha indutória, conseguiu controlar a doença, apresentou recidiva medular isolada, esteve apto ao TMO, contudo, após o transplante, faleceu por choque séptico. Discussão: Estudos realizados em crianças de etnias orientais e ocidentais não latinas também comprovam a malignidade das deleções alélicas de CDKN2A/B. Como no nosso estudo, nas crianças orientais com LLA-B, a prevalência dessas deleções foi cerca de 20%, porém tais estudos, em conjunto, avaliaram 690 crianças. Outros trabalhos também associaram a presença das deleções à idade maior que 10 anos, à pior sobrevida livre de eventos (SLE) e a recidivas mais frequentes, do que em pacientes com leucemias sem as delCDKN2A/B. Em crianças ocidentais não latinas, quando a deleção foi bialélica, estimou-se SLE = 57,2% vs pacientes sem deleções: SLE = 89,6%. Alguns trabalhos também observaram a ocorrência simultânea das delCDKN2A/B com outras deleções, associando tais casos a desfechos clínicos piores, conforme também validamos. A presença de insuficiências em CDKN2A/B foi considerada um forte preditor independente de recidivas e diminuição da sobrevida global, tanto em crianças ocidentais, quanto orientais, sugerindo que essas alterações deveriam ser levadas em conta na estratificação de risco dessas crianças. Conclusão: Constatamos as malignidades das deleções alélicas em CDKN2A/B na nossa coorte e acreditamos que futuras estratificações de risco para as LLA-B na infância devam recomendar o uso de métodos diagnósticos biomoleculares capazes de flagrar tais deleções, devido aos seus potenciais maus prognósticos.

Introduction: Oncohematological neoplasms are the most common disorders in children. However, few studies address the epidemiology of pediatric cancer, a fundamental aspect for decision-making in the management of this complex condition. Aim: This study aims to describe the epidemiological profile of oncohematological neoplasms diagnosed in a tertiary public pediatric hospital in the Federal District, between July 2023 and July 2024. Material and methods: This is a descriptive study, based on prospective analysis. The research was approved by local Ethics Committee. Results: During this period, 48 cases of oncohematological neoplasms were diagnosed, of which 79% (n = 38) were leukemias and 21% (n = 10) were lymphomas. Among the leukemias, 84% (n = 32) were classified as acute lymphoblastic - 68% (n = 26) type B (B-ALL) and 16% (n = 6) type T (T-ALL) - and 16% (n = 6) acute myeloid leukemia (AML). Of the lymphomas, 60% (n = 6) were Hodgkin's lymphomas (HL) and 40% (n = 4) non-Hodgkin's lymphomas (NHL). Both B-ALL and AML were more frequent in the age group between 0 and 5 years, 65% (n = 17) and 83% (n = 5), respectively. In T-ALL and NHL, the highest percentage, 50% (n = 3) and (n = 2), occurred in the age group of 6 to 11 years, and in HL, 67% (n = 4), between 12 and 17 years. The incidence was higher for males in T-ALL 83% (n = 5), AML 67% (n = 4) and NHL 67% (n = 4). In B-ALL and HL, there was no difference in incidence between the sexes. In the period considered, 8% (n = 2) of the children diagnosed with B-ALL suffered a relapse and 8% (n = 2) died. In T-ALL and AML, 17% (n = 1) and (n = 1) died, and in NHL and HL, 25% (n = 1) and 17% (n = 1), respectively, suffered a relapse. Discussion: Of the diagnosed cases, 79% were leukemias, which reflects their predominance among pediatric oncohematological neoplasms. Regarding the significant percentage of B-ALL identified, it reinforces the global trend of the most common classification in childhood. Among lymphomas, NHL is the most common among children, consistent with the profile found in this center. The age analysis revealed that leukemias, especially B-ALL and AML, are more frequent in early childhood, while lymphomas and T-ALL predominated in older age groups, corroborating the patterns found in the states with the highest rates of oncohematological diseases (Ceará and Santa Catarina). The predominance of males for T-ALL, AML and NHL highlights the profile observed in the literature, although the equal distribution between sexes for B-ALL and HL suggests a variability that may be specific to the group studied. In B-ALL and lymphomas, low relapse and death rates are similar to those in developed countries, where survival rates exceed 80%. In contrast, AML and T-ALL have a less favorable prognosis, which indicates the aggressive nature of these classifications and the need for greater attention from public health policies. Conclusion: However, understanding the epidemiology of pediatric oncohematological neoplasms is essential to improving early diagnosis and treatment, which can increase survival rates and enable personalized treatments based on the clinical and epidemiological profile of each group. In addition, understanding regional variations can guide the allocation of resources and health policies, and drive the development of research focused on precision diagnosis, expanding access to treatment based on personalized medicine.

Objectives: To analyze the overall survival (OS) and disease-free survival (DFS) in pediatric patients diagnosed with Ph-negative B-cell Acute Lymphoblastic leukemia (B-ALL) who underwent treatment with Blinatumomab for relapse/refractory disease. Materials and Methods: This is a retrospective cohort study that included pediatric patients aged ≤ 18 years with Ph-negative B-ALL in first hematological remission with relapsed/refractory, treated at the Hospital da Criança de Brasília José Alencar (HCB) between 2017 and 2024. Clinical, pathological, and therapeutic data were collected. The analysis of OS and DFS was performed using the Kaplan-Meier method, considering the period until death as OS or until relapse/death as DFS, from the diagnosis or initiation of treatment with Blinatumomab. Fisher's exact test was used to evaluate the association between general data and outcomes, considering the small sample size. The study was approved by the hospital's Research Ethics Committee [4.825.280]. Results: 16 patients with B-ALL were included in the study, with 10 (62.5%) were male, with a mean diagnosis age of 6.81 years The probability of overall survival was 105.20 months (median = 118.00). The average time to death from the use of Blinatumomab was 55.80 months, with a final cumulative survival of 0.63. For patients with pre-Blinatumomab positive minimal residual disease (MRD), the average time to death was 34.54 months. For patients with negative MRD, it was not possible to calculate survival due to the absence of deaths. The final cumulative survival for pre-Blinatumomab MRD was 0.53. After treatment, the average time to death was 54.00 months for positive MRD and 32.50 months for negative MRD, with cumulative survivals of 0.87 (positive) and 0.57 (negative), respectively. The estimated probability of DFS, from diagnosis to relapse/death, was 72.86 months (median = 75.00) The estimated mean duration from the start of Blinatumomab was 22.28 months (median = 25.00), with a final cumulative survival of 0.25 for pre-Blinatumomab MRD, the mean time to death was 25.84 months, and for negative MRD it was 70 months. After treatment, the mean duration was 54.00 months for positive MRD and 32.50 months for negative MRD, with cumulative survivals of 0.87 (positive) and 0.57 (negative). The Log Rank (Mantel-Cox) test did not find a significant difference between pre (p = 0.12) and post (p = 0.51) Blinatumomab survival curves. The Fisher's Exact test was used to evaluate the association between general data and outcomes; considering the small sample size, no quantitative variable showed significant differences. At the end of the study, 7 patients (43.75%) were in remission, 6 (37.5%) were in relapse, and 3 (18.75%) died. The treatment of one patient was discontinued due to neurotoxicity. Discussion: Other studies have already demonstrated promising results for pediatric patients with relapsed/refractory B-ALL, such as long-term OS improvement and better response rates for negative MRD, supporting the findings of this study. Conclusion: The inclusion of Blinatumomab in new therapeutic regimens for Ph-negative B-ALL is a promising approach to achieving better outcomes in patients with poor prognoses. However, it is important to note that neurotoxicity may be a significant adverse event associated with the use of Blinatumomab.

Introdução: Neoplasias de células mastocíticas (CM) compõem um grupo heterogêneo de doenças, mas com apresentação clínica semelhante, sendo a histopatologia e biologia molecular (BM) essenciais para diagnóstico diferencial. Na Leucemia Mieloide Aguda (LMA) core binding fator, frequentemente CM estão aumentadas, sendo parte dessas leucemias secundária a Mastocitose Sistêmica (MS). Esses achados já foram relatados em adultos, mas é raro em crianças. A mutação D816V está relacionada à LMA e é o principal componente para diferenciá-la da Leucemia Mielomastocítica Aguda (LMMA). O objetivo desse trabalho foi relatar um caso de LMA com MS e com fusão RUNX1-RUNX1T1 mutação no éxon 8 do gene KIT em uma paciente pediátrica. Metodologia: Dados clínicos e laboratoriais foram obtidos por prontuário médico. A análise da medula óssea (MO) utilizou: citometria de fluxo para Imunofenotipagem (IFT) e Doença Residual Mínima (DRM), banda G para citogenética, RT-PCR para fusão gênica e sequenciamento Sanger para o gene KIT. Caso: Paciente com 6 anos, feminino, procedente da Guiana, admitida em dezembro de 2022 com história de febre e dor abdominal. A mãe é portadora de HIV, fazendo uso de retroviral durante toda a gestação, sem saber referir qual medicamento. Ao exame físico mostrava discretas petéqueas em tronco e abdome, exoftalmia à esquerda com hiperemia e edema de partes moles. Exames laboratoriais mostraram: funções renal e hepática preservadas, sorologia negativa para HIV, mas positivo para CMV, EBV e Parvovírus; foi visto ainda alterações hematológicas (Hb: 5,3 g/dL, HTC: 16,3%, Plaquetas: 16.000/mm3, Leucometria: 38.260/mm3) com 89% de blastos. A IFT da MO mostrou a presença de duas populações de células blásticas de linhagem mieloide: I- 39,1% e II- 28,7%. Além disso, foi observada a presença de 3,73% de CM. A citogenética mostrou 46,XX,der(8)t(8;21)(q22;q22)[12]/ 46,XX,t(8;21)(q22;q22)[2]/46,XX[6] e a BM evidenciou fusão RUNX1-RUNX1T1, e as mutações A) KIT :c.1249_1250insCTTTTT p.Ile416_Leu417insProPhe e B) KIT :c.2447A>T p.Asp816Val nos éxons 8 e 17 do gene KIT, respectivamente. A paciente foi diagnosticada com LMA com MS sendo tratada pelo protocolo GELMAI como alto risco. Após o primeiro MAG, a DRM mostrou 22,9% da população I e 0,67% da II, além de 22,6% de CM. A mutação B não estava presente, mas mantinha a A e a fusão RUNX1-RUNX1T1. Já após o ADE, a DRM mostrava ausência de blastos, mas 19,46% de CM e a BM se mantinha igual à avaliação anterior. A presença de CM, sem blastos, e com fusão RUNX1-RUNX1T1 se manteve até a última avaliação (dia 02.06.2023). A mutação A foi detectada até a avaliação pós ADE. A paciente foi encaminhada para transplante de medula óssea, e no momento está aguardando o procedimento. Discussão: O caso apresentado mostra um achado raro por se tratar de um paciente pediátrico. A mutação B foi essencial para diagnosticá-la como uma LMA com MS e não como LMMA. Mesmo após o desaparecimento dos blastos e da mutação B, as CM permanecem, assim como a fusão RUNX1-RUNX1T1. Isto leva a crer que a fusão está presente apenas nas CM, juntamente com a mutação A. Este é o primeiro caso relatado de uma LMA com MS, com mutação no éxon 8 do KIT em um paciente pediátrico. Conclusão: A análise de BM foi essencial para o diagnóstico. Maiores estudos são necessários para avaliar se a fusão RUNX1-RUNX1T1 estava presente apenas nas CM.

Objectives: Determine minimal residual disease in children with acute lymphoblastic leukemia in treatment at the Children's Hospital of Brasilia according to the BFM 2009 adapted protocol; Evaluate risk stratification and molecular alterations as prognostic factors. Material and methods: Patients with ALL in treatment at the Hospital with the BFM 2009-adapted protocol from June 2018 to December 2022 were included in this study. Exclusion criteria were: patients with less than 1-year old; patients with Down Syndrome; history of chemotherapy for other cancers; and relapse at admission. Samples were collected at the Hospital's facilities and processed at the Laboratory of Translational Research. Immunophenotyping analysis were made using Infinicyt software and statistical analysis were made in SPSS software. Approval by the Ethical Committee: 85960218.5.0000.5553. Results: Of all 117 patients included, 51 were female and 66 were male, and 110 (94%) were diagnosed with B ALL, while only 7 (6%) with T-ALL. Risk stratification were made according to the following criteria: patients with age between 1 and 6 years old, initial leucometry < 20.000 mm3, MRD < 0.1% at D15 and < 0.01% at D33 and D78 and no risk factors were classified as Low Risk (LR); patients with MRD D15 > 5%, D78 > 0.01% or genetic alterations hypodiploidy, t(9;22) or t(4;11) were classified as High Risk (HR); patients who did not meet the criteria above were classified as Intermediate Risk. Twenty (17.%) patients were stratified as LR, 77 (65.8%) as IR and 20 (17.1%) as HR. Molecular biology tests showed that the majority (53%) of the patients did not have alterations; the most common alteration found was the t(12;21) translocation (23%), followed by t(1;19) (5%), t(9;22) (3%), del(1p32) (2%), alteration on gene IKZF1 (2%) and t(4;11) (1%); 6 patients (5%) had their test pending. Discussion: Of all 116 samples analysed at D15, 95 (81.9%) were positive and 21 (18.1%) were negative; IR and HR patients represented approximately 73.2% of all positive samples. At D33, number of negative MRDs was greater, representing 76.9% of all 108 samples processed. At D78, 90.6% of the 85 samples were negative. These results reflect the success of the treatment protocol; the decrease of the number of samples collected, however, is due to deaths and samples pending. Overall survival was 83.8%, a result close to that found in literature and excellent to a public health system hospital. As expected, high risk patients had a significantly lower survival when compared to the other risk groups or molecular alterations. Patients with bad prognostic molecular alterations (IKZ mutations, t(4;11) and t(9;22)) had the lowest overall survival , while patients with good prognostic alterations (t(1;19) and t(12;21)) had the greatest. Even though molecular biology was negative for more than half of the patients, OS was lower than 90%, which indicates the need for more sensitive techniques, like Next-Generation Sequencing (NGS). Conclusion: MRD analysis, although added to the ALL treatment protocol at the Children's Hospital of Brasilia only in 2018, was confirmed to be an effective and sensitive approach to disease monitoring. Furthermore, risk stratification as well as molecular alterations showed to have a high prognostic value for those patients.

Introduction: The recent active use of immunotherapy based on CD19/CD3 bispecific T-cell engager (blinatumomab), brings significant problems on monitoring Minimal Residual Disease (MRD) based on Multiparameter Flow Cytometry (MFC), due to possible CD19 downregulation by tumor cells. This phenomenon breaks the well-established approach of MFC strategy analysis, based gating on CD19 positivity. Also, the selective pressure of the CD19-directed immunotherapy increases the incidence of the so-called lineage switch, which has become one of the possible mechanisms of BCP-ALL resistance to immunotherapy. At present, there is no consensus approach to MFC-MRD monitoring after blinatumomab therapy for BCP-ALL. There are several described changes in MRD methodology, including the addition of other early B-lineage antigens (e.g., CD22, CD24 and CD79a) or only the modification of the gating strategy using conventional sets of antibodies. Aim: Evaluated two different antibody panels to monitor MFC-MRD in patients Relapsed/Refractory (R/R) B-cell ALL after blinatumomab therapy. Materials and methods: All Bone Marrow (BM) samples the MRD detection was performed with panel EuroFlow BCPALL MRD protocol standardized and added two more tubes (8 colors) with early B-lineage antigens according to previously described in literature (e.g., Tube 1: CD66b/CD22/CD34/CD19/CD24/CD38/CD10/CD45; Tube 2: CD20/CD22/CD34/CD19/CD79a/CD38/CD10/CD45). All BM samples were studied following the EuroFlow SOPs with the acquisition at least ≥5×106 events per samples and in both panels. The cytometer FACSCanto 8-color and Infinicyt software was used for acquisition and analyzed data files. The study enrolled real-world children in public health care systems and was approved by the local ethics committees. Results: A total of 54 BM samples obtained from 11 children -48% M and 52% F with a median age of 10-years (0‒19) with R/R B-cell ALL were studied at different time points after treatment with blinatumomab, including: pré-transplant (n = 24) and post-transplant (n = 30). As controls without use of blinatumomab were include 04 BM from children with B-cell ALL at D15 of treatment with standard chemotherapy protocol. MRD were detected in 35% (19/54) of BM studied and of these 2/11 relapsed. We found 100% agreement between the two panels used. Only one sample was discordant at first time, but upon review it was noted that this CD19 negative population were very early CD19- normal B cell progenitors. Discussion: The wide implementation of CD19-directed therapy in the treatment in protocol for R/R BCP-ALL significantly complicated the rather routine procedure of MRD monitoring. Despite the subjective impressions by these investigators that other B-cell antigens such as CD22, CD24 and cyCD79a brings more confidence to analyze B-cell ALL MRD samples from patients treated with anti-CD19 therapy, for this studied cohort, we did not find difference on the results of MRD with the standard EuroFlow panel and the alternative panel. Conclusion: No difference was found on the MRD detection with the standard EUFOLOW panel and the alternative panel. Although introduction of CD22, and CD24 markers, with 8 colors strategy, it was not advantageous. Using 8 colors strategy, it may be recommended to investigate the comparative financial impact of the EuroFlow, and the alternative panel in the context of Blinatumomab therapy.

Objetivos: O estudo tem o objetivo de avaliar a implementação de protocolo de tratamento para leucemia linfoblástica (LLA) com estratificação de risco baseado em pesquisa de doença residual mínima (DRM). Material e métodos: Realizou-se estudo observacional e analítico com delineamento longitudinal retrospectivo. Incluíram-se pacientes com LLA, com idade entre 1 e 18 anos, que realizaram tratamento no Hospital da Criança de Brasília (HCB) entre 06 de 2018 e 06 de 2021. Nos dias 15, 33 e 78, realizou-se avaliação de DRM por citometria de fluxo de 8 cores de nova geração (CFNG) em medula óssea. Os pacientes foram estratificados para os braços de tratamento conforme descrito a seguir. Baixo Risco (BR): LLA-B; 5%; DRM D78 >0,01%; presença das translocações BCR-ABL ou MLL-AF4. Risco intermediário (RI): demais pacientes. Para casos específicos, aceitaram-se ajustes das classificações fora dos critérios descritos. O teste de Log Rank (Mantel-Cox) foi utilizado para comparação de curvas de sobrevida global (SG) e livre de doença (SLD). Resultados: Foram incluídos 82 pacientes, sendo 78 com LLA-B e 4 com LLA-T. Desses, 15 foram classificados como BR, 50 RI e 17 AR. Houve 14 óbitos (17,07%) e 4 recaídas (4,87%), sendo duas (2,43%) isoladas em SNC. Dos óbitos, 5 (35,71%) estavam classificados como RI e 9 (64,29%) como AR; não houve óbitos no grupo BR. Houve diferença estatística significativa para a SG entre os grupos de classificação de risco (p