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O Quimerismo é uma condição rara em que o indivíduo contém mais de um material genético em sua constituição, podendo desenvolver complicações após o nascimento ou ao longo da sua vida. Assim, paralelo ao quimerismo, outras doenças gênicas são comumente vistas em diferentes pessoas impactando na qualidade de seu diagnóstico, uma vez que esses enfermos não recebem uma imediata atenção. Desse modo, objetivando avaliar o desempenho profissional em lidar com situações envolvendo pacientes com imbróglios genéticos, o grupo de seis integrantes realizou um levantamento para análise de diversos casos registrados a partir da década de noventa em sites acadêmicos de busca, como PubMed, Scielo e Google Acadêmico, de pacientes vítimas do quimerismo que procuraram amparo médico e obtiveram diferentes diagnósticos para sua intempérie. Foram constatados que em casos antigos os diagnósticos e análises feitas eram, por vezes, ineficazes, havendo casos em que ela não era solicitada gerando, inclusive, complicações jurídicas. Destarte, no decorrer do tempo e análogo ao desenvolvimento de estudos e do aconselhamento genético, foi notado uma melhora na qualidade e velocidade dos resultados, concomitante, sendo mais frequentes para com profissionais (geralmente médicos) especializados na área genética, apesar de que ainda há uma necessidade em aprimorar investimentos para o atendimento de indivíduos que possuem complicações genômicas. Portanto, visto a complexidade da genética humana e a constante presença de patologias relacionadas a ela, é necessária a presença de diagnósticos eficientes e melhor desempenho profissional em analisa-las, ademais, essa realidade tem se tornando mais atual.

En este artículo se describirán ejemplos de especies animales en las que se da la clonación o el quimerismo en forma natural. Se revisarán algunos de los trabajos pioneros de autores que inspiraron las líneas de investigación en las que he estado involucrado. Pero, primordialmente, se analizarán varios de los progresos que hemos alcanzado con diferentes equipos de colegas desde 1993. Se incluyen experimentos de fecundación in vitro (FIV), inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), clonación, transgénesis y edición génica, realizadas en diferentes especies de mamíferos. La aplicación futura de estas tecnologías a la producción animal debería estar sujeta al seguimiento de pautas de bienestar animal y bioética, siendo fundamental nuestra capacidad de imaginación e innovación. Por otro lado, los animales que ya se han generado con algunos métodos (FIV, ICSI y clonación), cuyas figuras se presentan en esta revisión, son verdaderas postales del futuro que demuestran la factibilidad de las metodologías descriptas., Presentación del Dr. Bernardo J. Carrillo., Academia Nacional de Agronomía y Veterinaria

Dissertação de Mestrado em Bioquímica Nos doentes submetidos a transplante hematopoiético alogénico, a monitorização do quimerismo é importante na avaliação do sucesso do transplante. A análise de quimerismo nas diferentes sub-populações linfocitárias possibilita a monitorização em linhagens específicas, podendo estar dependente da pureza das células isoladas. A pureza das sub-populações celulares pode ser avaliada por técnicas moleculares ou por citometria de fluxo. Recentemente foram desenvolvidos kits baseados em técnicas de biologia molecular, tal como o Non-T Genomic Detection Kit e o Non-B Genomic Detection Kit da Accumol, que detetam a presença de ácido desoxirribonucleico (ADN) de células contaminantes em amostras de ácido desoxirribonucleico genómico de linfócitos T ou B isolados. Este estudo teve como objetivo avaliar a pureza das sub-populações linfocitárias, T e B, importantes na monitorização do quimerismo. As amostras de linfócitos T e B foram isoladas por meios imunomagnéticos, separação direta e separação sequencial, procedendo-se de seguida à extração de ácido desoxirribonucleico. A amplificação dos Short Tandem Repeats foi realizada através da técnica de reação em cadeia da polimerase multiplex e os fragmentos amplificados foram separados por eletroforese capilar. Na avaliação da pureza por citometria de fluxo os anticorpos utilizados na marcação foram CD45+, CD3+ e CD19+, os resultados foram analisados com o software Navios. A avaliação da pureza com o kit Accumol realizou-se nas amostras extraídas anteriormente para o estudo do quimerismo, de seguida amplificaram-se os fragmentos por reação em cadeia da polimerase e respetiva separação por eletroforese capilar, a análise foi efetuada no software GeneMapper. No presente estudo, foram analisadas 31 amostras provenientes de doentes alo-transplantados. No isolamento de linfócitos T por separação direta, 53% das amostras apresentaram contagem absoluta de células ≥400 células/μL e pureza >90%. Após o isolamento direto de linfócitos B, não foram obtidas amostras com contagens absolutas de células ≥400 células/μL e purezas >90%. No isolamento por separação sequencial, verificou-se contagem absoluta de células ≥400 células/μL e pureza >90% em 77% das amostras de linfócitos T e em 8% amostras de linfócitos B. A maioria das amostras de linfócitos T com quimerismo completo e misto, apresentaram pureza >90%. Nos linfócitos B, com quimerismo completo e quimerismo misto, a percentagem da pureza foi variável. Com este estudo, pode-se concluir que com contagens linfocitárias ≥0,5x103/μL no sangue periférico é possível obter uma contagem absoluta de células ≥400 células/μL, assim como valores de pureza >90%, principalmente no isolamento de sub-populações de linfócitos T. O mesmo não se verificou nas amostras de linfócitos B, pois a maioria não atingiu valores de contagem absoluta de células ≥400 células/μL e de pureza >90%. Para o isolamento de linfócitos T e B numa amostra de sangue, a separação sequencial apresentou melhores resultados na obtenção de amostras com contagem absoluta de células ≥400 células/μL e de pureza >90%. In patients submitted to allogeneic stem cell transplantation, the monitoring of chimerism is important for determining the success of the transplant. The chimerism analysis on different lymphocyte subpopulations enables the monitoring of specific lines and may be dependent on the purity of the isolated cells. The purity of the cellular subpopulations can be evaluated by molecular techniques or by flow cytometry. It has been recently been developed kits based on molecular biology techniques, such as Accumol’s Non-T Genomic Detection Kit and Non-B Genomic Detection Kit, which detect the presence of deoxyribonucleic acid from contaminating cells in samples of genomic deoxyribonucleic acid from isolated T and B lymphocytes. The aim of this study was to evaluate the purity of the lymphocyte subpopulations, T and B, used in the monitoring of chimerism. Before evaluation of purity, samples of T and B lymphocytes were isolated by immunomagnetic means, direct separation and sequential separation, then proceeding to the extraction of deoxyribonucleic acid. Amplification of short tandem repeats following multiplex polymerase chain reaction technique, the amplified fragments were separated by capillary electrophoresis. The assessment of purity by flow cytometry, the antibodies used in labeling were CD45+, CD3+ and CD19+, the results were analyzed with software Navios. Assessment of purity with Accumol kit was performed after amplification of the polymerase chain reaction fragments and respective separation by capillary electrophoresis, analysis was performed on the GeneMapper software. In this study we analyzed samples from 31 allotransplant patients. In the isolation of T lymphocytes by direct separation, 53% of the samples had an absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90%. In direct separation of B cells it was not obtained any sample with absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90%. In isolation by sequential separation, there was an absolute cell count ≥400 cells/μL and purity >90% in 77% of T lymphocytes samples, and 8% of B lymphocytes samples. The majority of T-cell samples showing complete or mixed chimerism had purity >90%. The B lymphocytes samples with complete and mixed chimerism, the percentage of purity was variable. With this study it can be concluded that with lymphocyte counts ≥0,5x103/μL in peripheral blood it is possible to obtain an absolute cell count ≥400 cells/μL, as well as purity values >90%, especially in the isolation of sub-population of T lymphocyte. The same was not observed in B lymphocyte samples, the majority did not reach the target values of cells ≥400 cells/μL and purity >90%. Even for isolation in the same sample of T and B lymphocytes, sequential separation showed better results in obtaining samples with absolute cell count ≥400 cells/μL and of >90% purity.

Dissertação de Mestrado em Bioquímica A análise de quimerismo, nos doentes pós transplante alogénico de progenitores hematopoiéticos, tornou-se um procedimento de rotina para avaliar o sucesso do transplante e na deteção de falência do enxerto. Após alotransplante o doente apresenta quimerismo completo, quando apenas têm células do dador ou quimerismo misto, quando têm células próprias e do dador. Para a análise de quimerismo, as células do dador e do doente são distinguidas por marcadores genéticos designados como short tandem repeats informativos, que são utilizados para efetuar o seguimento dos doentes no período pós transplante. Este trabalho teve como objetivos monitorizar o estado de quimerismo em doentes pós alotransplante, e comparar duas técnicas moleculares para avaliação do estado de quimerismo: amplificação de short tandem repeats, e amplificação do gene da amelogenina em pares dador/doente de sexos diferentes, pela técnica de reacção em cadeia da polimerase seguida de electroforese capilar. Os short tandem repeats utilizados foram: D11s, F131, THO, VWA, FES, FGA, HPRT. A análise foi realizada através de ADN extraído do sangue, nas subpopulações de leucócitos - células mononucleares e granulócitos. No presente estudo, foi analisado o quimerismo de 24 doentes alotransplantados, o seguimento médio destes doentes foi de 6 meses. O quimerismo foi analisado pela amplificação de short tandem repeats (n=24) e do gene da amelogenina (n=14). Os resultados obtidos para a análise de quimerismo foram: 20 doentes apresentaram sempre quimerismo completo e 4 doentes quimerismo misto. Dos doentes com quimerismo misto, 2 evoluíram para quimerismo completo e 2 mantiveram o mesmo estado. Foi possível concluir que, para a avaliação do quimerismo dos doentes, ambas as técnicas, short tandem repeats e gene da amelogenina, são informativas e podem ser realizadas separadamente ou de uma forma complementar. Chimerism analysis after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation has become a routine procedure, for monitoring the engraftment of donor cells, thus allowing early detection of graft failure. After allogeneic stem cell transplantation the patient has complete chimerism when only has donor cells, or mixed chimerism when he has his own and the donor’s cells. To the chimerism analysis, donor cells and patient’s cells are distinguished by genetic markers, named informative STR. They are used to perform the following of patients in the post-transplant period. The aim of this study were to monitor chimerism status in patients following allogeneic stem cell transplantation, and to compare two molecular techniques to assess the state of chimerism: amplification of short tandem repeats and amplification of amelogenin gene in pairs donor/patient of different gender by polymerase chain reaction technique. The analysis was performed using DNA extracted from blood leukocyte subpopulations - mononuclear cells and granulocytes. The short tandem repeats used were: D11s, F131, THO, VWA, FES, FGA, HPRT and the amelogenin gene, were amplified by the polymerase chain reaction, followed by capillary electrophoresis analysis. In this study, we performed follow up evaluation of 24 patients submitted to allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. The median follow up of these patients was 6 months. The chimerism was analyzed by amplification of short tandem repeats (n=24) and amelogenin gene (n=14). Majority of patients (n=20) consistently showed complete chimerism and 4 patients showed mixed chimerism. From the patients with mixed chimerism, 2 progressed to complete chimerism and 2 remained in the same condition. In summary, both techniques, short tandem repeats and amelogenin gene, are informative and can be performed individually or in a complementary way to evaluate the chimerism status of allotransplanted patients.

El síndrome Freemartin es un estado de intersexualidad de muchas de las hembras bovinas provenientes de parto múltiple heterosexual (macho - hembra). Éste se origina en la vida fetal entre los 30 y 40 días de gestación producto del intercambio transplacentario de células mediante anastomosis vasculares, presentándose fenómenos de quimerismo 60XX/XY en varios tejidos, y esterilidad consecuente. En el presente trabajo se tomaron 106 muestras de sangre de terneras provenientes de parto múltiple heterosexual, se realizó extracción de ADN de leucocitos y se buscó la amplificación del gen SRY asociado al cromosoma "Y" mediante PCR y lectura en gel de agarosa. 90 terneras (84.9%) de las 106 amplificaron SRY, verificando el quimerismo 60XX/XY, y 16 terneras (15.1%) que no amplificaron el gen, libres del síndrome quimérico y por lo tanto, aptas reproductivamente. El análisis citogenético realizado mediante cultivo de linfocitos demostró la presencia del cromosoma "Y" en linfocitos de hembras positivas a SRY y la ausencia del quimerismo en hembras SRY negativas. El análisis anatómico post mortem de tractos reproductivos de hembras positivas a SRY detectó anormalidades características del síndrome tales como, clítoris hipertrofiados y atresias ductales cervicales. El análisis histopatológico de placas de gónadas de estos animales evidenció la presencia de ovotestículos. El presente estudio confirma la utilidad de las técnicas de biología molecular como herramientas diagnósticas del síndrome, para el aprovechamiento de hembras de reemplazo al servicio del hato bovino. Freemartin syndrome is a intersexuality condition developed in many of the female calfs born from heterosexual multiple calvings (male female). This originates in the fetal development between 30 and 40 days of gestation with transplacental exchange of cells through vascular anastomosis, occurring 60XX/XY chimerism in various tissues, and consequent sterility. In this paper was took blood samples from 106 female calves born from a multiple heterosexual calving. DNA was extracted from leucocytes and searched the SRY gene amplification associated with the Y chromosome by PCR and reading in agarose gel. 90 of 106 samples (84.9%) was amplified the SRY gene, verifying the 60XX/XY chimerism, and 16 samples (15.1%) that did not amplify the gene. Cytogenetic analysis using lymphocytes cell cultures showed the presence of Y chromosome in samples positive for SRY and absence of chimerism in SRY negative samples. The postmortem analysis of female reproductive tracts of SRY positive calves, shows anatomical abnormalities such as clitoris hypertrophia and cervical atresia. Histological examination of gonads of these animals confirmed the presence of ovotestis. This study confirms the usefulness of molecular biology techniques as diagnostic tools of the syndrome, for the use of replacement females in cattle.

Orientadores: Cármino Antonio de Souza, José Andres Yunes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Apesar dos melhores resultados obtidos com o transplante de células-tronco hematopoiéticas ao longo dos anos, as altas taxas de recidiva da doença, que em pacientes com leucemias agudas pode variar de 30 a 70% dos casos, permanece um dos maiores desafios. O tratamento das recidivas tem melhores resultados se realizado precocemente. Estudos mostram que a detecção de quimera mista pós-transplante é capaz de prever a recaída na maioria dos casos e pode permitir o tratamento precoce e adequado, com probabilidade de sucesso maior do que se feito após a recaída hematológica da doença. A técnica atualmente utilizada para avaliação do quimerismo em pacientes transplantados na Unidade de Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) do Hospital das Clínicas da UNICAMP é o VNTR (variable number tandem repeats), cuja sensibilidade permite detectar quimera mista com tempo curto antes da recaída, o que não possibilita tempo hábil para o tratamento. Com o objetivo de antecipar a detecção da quimera mista, avaliamos neste estudo um método de quimerismo que utiliza a reação em cadeia da polimerase em tempo real (RQ-PCR) de polimorfismos de inserção/deleção (indels) dialélicos, que tem maior sensibilidade do que o VNTR. Foram analisadas amostras de 41 pacientes adultos transplantados na Unidade de TCTH da UNICAMP entre 2005 e 2010 com os diagnósticos de leucemia aguda, leucemia crônica e síndrome mielodisplásica. Todos os transplantes foram de doadores aparentados e totalmente compatíveis e 80% foram realizados com condicionamentos mieloablativos. Quase metade (46,9%) dos pacientes recidivou, a maioria (73,3%) nos primeiros 6 meses. A sobrevida global mediana no grupo que recaiu foi de 9 (2-28) meses e, ao final do período de observação, somente um paciente (6,6%) estava vivo. Entre os 17 pacientes não recidivados, 5 (29,4%) faleceram, 4 (23,5%) em 9 meses pós-transplante, principalmente por complicações infecciosas. O método de RQ-PCR foi capaz de quantificar o quimerismo pós-transplante em quase todas as amostras com alta sensibilidade e nível mínimo de detecção de 0,01%. A técnica ainda demonstrou que a cinética do quimerismo é bastante diferente entre os grupos de pacientes recidivados e não recidivados. O grupo de não recidivados mostrou, inicialmente, uma queda menos intensa e mais progressiva na porcentagem de células do receptor, seguida por queda contínua e progressiva, com a mediana de 6 meses para atingir níveis de quimerismo abaixo de 0,1%. Por outro lado, os pacientes no grupo de recidivados demonstraram uma queda intensa inicial e então um aumento rápido e precoce no quimerismo antes da recidiva hematológica. A técnica de quimerismo por PCR quantitativo em tempo real de polimorfismos indels foi reprodutível no grupo de pacientes transplantados em nossa instituição e demonstrou que a cinética do quimerismo é bastante diferente entre os grupos de pacientes recidivados e não recidivados. Devido à alta sensibilidade do método, a avaliação do quimerismo em níveis tão baixos poderia nos ajudar a compreender este complexo mecanismo onde células geneticamente distintas interagem em diversas situações pós-transplante e auxiliar a otimização dos regimes de condicionamento para obter melhores respostas com menores efeitos colaterais Abstract: Despite better results with hematopoietic stem cell transplantation over the years, high rates of relapse, which in acute leukemia patients can reach 30 to 70% of cases, remains a major challenge. The treatment of relapse has better outcomes if performed early. Studies show that the detection of mixed chimera after transplantation can predict for relapse in most cases and it may allow for earlier appropriate treatment, with higher chances of success than if done after hematologic relapse. The technique currently used for patients transplanted at the Stem Cell Transplantation (SCT) Unit of the University of Campinas is VNTR (variable number tandem repeats), which sensitivity permits the detection of mixed chimera shortly before relapse and doesn¿t allow enough time for treatment. In order to anticipate the detection of mixed chimera, in this study we tested a method of quantitative PCR of insertions¿deletions (indels) diallelic polymorphisms, which has higher sensitivity compared to VNTR. We analyzed samples from 41 adult patients submitted to HSCT at the SCT Unit of the University of Campinas between 2005 and 2010. Patients were diagnosed with acute leukemia, chronic leukemia or myelodisplastic syndrome. All transplants were performed with fully matched related donors and 80% used myeloablative conditionings. Almost half (46.9%) of the patients relapsed, most of them (73.3%) in the first 6 months. The median overall survival for relapsed patients was 9 (2¿98) months and, at the end of the observation period, only one patient (6.6%) was alive. Among 17 non-relapsed patients, five (29.4%) died, 4 four (23,5%) in 9 months post HSCT, mostly from infectious complications. The RQ-PCR method was able to quantify the chimerism in almost all samples and it was highly sensitive, with a minimum level of detection reaching 0.01%. This technique showed that the chimerism kinetics was very different between groups of relapsed and non-relapsed patients. The non-relapsed group showed, initially, a less deep and more progressive fall in the percentage of recipient cells, followed by a continuous and slow fall along the time, with a median period of about 6 months before chimerism clearance reached levels below 0.1%. Patients in the relapsed group, on the other hand, showed a steep initial drop and then a very early and fast rise in chimerism previous to hematologic relapse. The method of RQ-PCR of indels polimorphisms could be reproduced in this group of patients transplanted in our Institution and showed that the chimerism kinetics is very different between relapsed and non relapsed patients. Due to the high sensitivity of the method, the evaluation of chimerism in such low levels could help us understand the complex mechanism of genetically distinct cells interacting in different post-transplantation settings and lead to a better optimization of the current conditioning regimens for better outcomes with lower adverse effects Doutorado Clínica Médica Doutora em Clínica Médica FAPESP 2010/50105-5

O quimerismo é uma condição genética rara, que determina que o indivíduo possua dois tipos distintos de DNA em seu corpo. Numa primeira perspectiva, a temática interessaria principalmente aos estudos sobre o DNA e o genoma humano, entretanto o que se verifica é que o fenômeno também tem repercussões jurídicas. Para tanto, serão apresentados alguns casos que demonstram essa relação entre o quimerismo e o Direito.

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A transfusão sanguínea alogênica tem sido associada com complicações em pacientes cirúrgicos e no trauma. Os leucócitos e plaquetas presentes nos hemocomponentes parecem ser uma das principais causas do efeito conhecido como imunomodulação associada à transfusão. Apesar das evidências clínicas dos efeitos deletérios da transfusão sanguínea, o real mecanismo envolvido não é conhecido. Realizamos um estudo observacional prospectivo para avaliar a presença de microquimerismo associado à transfusão e a resposta imune em 28 pacientes submetidos à cirurgia ortopédica eletiva comparando os pacientes transfundidos no intra-operatório com os não transfundidos. Os hemocomponentes utilizados foram concentrado de hemácias (CH) não leucodepletados. Os marcadores inflamatórios IL-1?, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-17, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, interferon-? (IFN-?), CD40 ligante solúvel (sCD40L) e fator de necrose tumoral (TNF?) foram quantificados no sangue periférico dos pacientes em três tempos: pré-operatório, final da cirurgia e 6 horas de pós-operatório. Além disso, avaliamos a presença de microquimerismo nos pacientes transfundidos durante a internação utilizando a reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real com um painel contendo iniciadores específicos para 12 alelos HLA DR. Como resultados, encontramos maiores concentrações de IL-6 (p = 0,023) e uma redução significativa de sCD40L (p = 0,016) ao final da cirurgia, assim como maiores níveis de IL-10 (p = 0,022) com 6 horas de pós-operatório nos pacientes transfundidos quando comparados aos não transfundidos. A presença de microquimerismo foi documentada em 13 dos 15 pacientes avaliados, com uma mediana de seguimento de 14 dias após a última transfusão (variando de 5 a 30 dias). Comparando os pacientes com e sem microquimerismo, não houve diferença nas características sexo, idade, número de unidades transfundidas ou na dosagem dos marcadores inflamatórios após a transfusão. Concluímos que a transfusão de CH não leucodepletados, neste contexto onde já existe um estresse inflamatório secundário ao trauma cirúrgico, leva a uma maior resposta inflamatória imediata, com aumento de IL-6 e diminuição do sCD40L e posterior estímulo imunossupressor evidenciado pelo maior aumento de IL-10; a redução da concentração de sCD40L no sangue periférico pode prever este efeito anti-inflamatório Abstract: Transfusion of red blood cells (RBCs) has been associated with complications in trauma and surgical patients. Leukocytes present in blood components seems to be one of the main causes of the effect know as transfusion-related immunomodulation. Despite evidence of deleterious clinical effects of allogeneic blood transfusion, the real mechanism involved is unclear. A prospective observational study was conducted to evaluate transfusion-associated microchimerism and immune responses in 28 patients undergoing elective orthopedic surgery divided into leukocyte-containing RBCs transfused and non-transfused groups. Inflammatory markers IL-1?, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-17, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, interferon-? (IFN-?), soluble CD40 ligand (sCD40L), Tumor necrosis factor (TNF?) were measured in both groups at three time points: preoperative, end of surgery and 6 hours of postoperative. The presence of microchimerism was performed by polymerase chain reaction (PCR) analysis using quantitative allele-specific HLA DR assays to detect non-recipient alleles in transfused patients. Higher levels of IL-6 (p = 0.023) and significant reduction of sCD40L (p = 0.016) at the end of surgery, as well as higher levels of IL-10 (p =0.022) after 6 hours of postoperative were demonstrated in transfused patients compared to non-transfused. Microchimerism was documented in 13 of 15 patients after leukocyte-containing RBC transfusion and the median time of evaluation was 14 days after transfusion (range 5-30 days). Comparing patients with and without microchimerism, there was no difference in sex, age, number of units transfused or in inflammatory markers after transfusion. We concluded that leukocyte-containg RBC transfusion is associated with an early inflammatory response followed by an anti-inflammatory response in trauma surgery patients and the reduction in sCD40L level, after transfusion, may predict an anti-inflammatory effect Mestrado Fisiopatologia Médica Mestra em Ciências FAPESP 2011/51959-0

The chimerism is a rare genetic condition and determines that the individual has two different types of DNA in your body. In a first aspect, the subject matters mainly to the studies of DNA and the human genome, but what is happening is that the phenomenon also has legal repercussions. For this, we present some cases that demonstrate this relationship between chimerism and the law., O quimerismo é uma condição genética rara, que determina que o indivíduo possua dois tipos distintos de DNA em seu corpo. Numa primeira perspectiva, a temática interessaria principalmente aos estudos sobre o DNA e o genoma humano, entretanto o que se verifica é que o fenômeno também tem repercussões jurídicas. Para tanto, serão apresentados alguns casos que demonstram essa relação entre o quimerismo e o Direito.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-06. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:37Z : No. of bitstreams: 1 000844259.pdf: 4595767 bytes, checksum: 71dce578d9bb8bd46aa509b0383e1407 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) O transplante de células germinativas é uma recente abordagem experimental que envolve a remoção de células germinativas indiferenciadas das gônadas de um animal doador, e transplante nas gônadas de um receptor originando espermatozoides com características genéticas do doador. Apesar de ser promissora em estudos que envolvem a biologia das células germinativas iniciais, preservação de espécies ameaçadas, biologia da reprodução e muitas outras abordagens biotecnológicas, a aplicação desta metodologia em peixes ainda é limitada. Deste modo, o transplante de células espermatogoniais de duas espécies filogeneticamente relacionadas, a piracanjuba Brycon orbignyanus em lambaris Astyanax altiparanae foi estudada. Para isto, a espermatogênese e a papila urogenital (via do transplante) da espécie receptora foram histologicamente analisadas, evidenciando a presença de nove gerações espermatogoniais e que a cada célula de Sertoli suporta o desenvolvimento de cerca de 140 espermátides. Além disso, a papila urogenital difere entre os sexos. Para o transplante, os testículos das piracanjuba foram enzimaticamente digeridos e as espermatogônias foram purificadas por um gradiente de densidade (Percoll), marcadas com PKH26, e injetadas, via papila urogenital, nos testículos dos lambaris, cuja espermatogênese endógena foi previamente suprimida por administração de busulfan (Myleran) associado com água quente (35°C) ou por sua manutenção nesta temperatura por um período maior. Cerca de 66,7% e 84,6% dos receptores tratados com busulfan + temperatura e somente temperatura, respectivamente, apresentaram cistos de células germinativas doadoras em seu epitélio. O transplante espermatogonial envolvendo B. orbignyanus e A. altiparanae foi realizado com sucesso e pode ser aplicado em pisciculturas auxiliando no aumento da produção e preservação da piracanjuba (criticamente ameaçada de e Germ cell transplantation is a recent approach which involves removal of undifferentiated germ cells from the donor gonads and transplantation into the gonads of a host, giving origin to sperm with genetic characteristics from the donor. Despite this methodology promising in studies involving initial germ cell biology, preservation of threatened species, reproductive biology and many other biotechnological approaches, the application of such a methodology in fish is still limited. Thus, the transplantation of spermatogonial cells from two phylogenetically related species piracanjuba Brycon orbignyanus into lambaris Astyanax altiparanae testis was histologically studied. Host spermatogenesis and urogenital papilla (transplantation via) were analyzed, highlighting nine spermatogonial generations and that each Sertoli cell supports the development of about 140 spermatids. Moreover, urogenital papilla is different between the sexes. For transplantation, piracanjuba's testes were enzymatic digested and spermatogonia were purified by a density gradient (Percoll), labeled with PKH26 and injected, through urogenital papilla, into lambaris testes, whose endogenous spermatogenesis had been previously suppressed by administration ofbusulfan (Myleran) associated with warm water (35°C) or by their maintenance at this temperature for longer time. About 66.67% and 84.6% of the host animals treated with busulfan + temperature and only temperature, respectively, presented cysts of donor germ cells into their epithelium. Spermatogonial transplantation involving B. orbignyanus and A. altiparanae was successfully performed and it can be applied in fish farms helping production increase and preservation of donor species piracanjuba (critically endangered), since donor spermatozoon can be obtained up to three weeks after transplantation process.

Los recientes avances en tecnologías biomédicas proporcionan herramientas a la Medicina Legal para el esclarecimiento de casos complejos y ejercer justicia basada en evidencia científica. ¿Pero qué ocurre cuando se imponen obstáculos como el quimerismo que podrían llevar a decisiones equivocadas? A pesar de que este fenómeno se creía casi inexistente, se han reportado interesantes casos, que han puesto a prueba la utilidad de las pruebas de ADN. El quimerismo se define como la presencia de líneas celulares con distinto material genético proveniente de diferentes orígenes en un único cuerpo. Esto tiene grandes implicaciones medico legales, principalmente en la investigación criminal. Por ejemplo en una escena de crimen, se pueden encontrar muestras de tejidos de un mismo individuo pero estas podrían tener ADN distinto si se trata de un individuo quimérico llevando a una mala interpretación de la información. También cabe resaltar las implicaciones del quimerismo en las pruebas de paternidad, ya que este fenómeno puede ocasionar falsos negativos en estas pruebas y por lo tanto un diagnóstico incierto de paternidad. El objetivo de esta revisión es describir las diferentes implicaciones médico legales del quimerismo y proponer posibles soluciones a los conflictos que podrían presentarse ante tales casos. Recent advances in biomedical technologies are able to clarify today’s complex cases that are faced by Legal Medicine; allowing this branch of medicine to exercise justice based in scientific evidence. But what happens when an obstacle such as chimerism is present and may lead to false decisions? Although this phenomenon was thought to be inexistent, interesting cases have been reported. Chimerism is defined as the presence of different cell linings in a unique organism. This phenomenon has important implication in Legal Medicine, especially in criminal investigation. For example, in a crime scene the samples gathered may present different DNA and lead to misinterpretation of the information. On the other hand, paternity tests are also implicated in the presence of a chimera since it may originate a false negative result. The purpose of this review is to describe different Legal Medicine’s implications linked to chimerism and propose possible solutions to the conflicts that may arouse from a case of a chimera.

Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pasquini Co-orientadora: Drª. Noemi Farah Pereira Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 01/08/2014 Inclui referências Resumo: O resultado do transplante de células-tronco hematopoéticas (TCTH) é avaliado por meio da recuperação hematológica e da análise do quimerismo. Este estudo tem como objetivo avaliar os níveis de quimerismo em pacientes com Anemia Aplástica Severa (AAS) Adquirida com mais de 18 meses de acompanhamento pós-TCTH, que apresentaram recuperação hematológica parcial ou completa no sangue periférico. Foram analisados 104 pacientes com AAS transplantados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná e monitorados no período de 1987 a 2012. Os pacientes foram divididos em dois grupos, conforme o regime de condicionamento. Os pacientes do grupo I (n=55) receberam ciclofosfamida (CFA) isolada, 200 mg/Kg de peso corpóreo e os do grupo II (n=49) CFA, 120 mg/Kg de peso corpóreo, associada ao bussulfano (BUS), 12 mg/Kg de peso corpóreo. Cada grupo foi subdividido de acordo com os seguintes níveis de quimerismo em relação às células do doador: ?50%, entre 51 e 90% e >90%. A análise de quimerismo foi realizada pela amplificação de locos VNTRs/STRs com detecção dos fragmentos em gel de poliacrilamida e coloração com sais de prata (84 pacientes) até julho de 2009 e após esse período por eletroforese capilar em Analisador Genético de DNA (20 pacientes). Os níveis de quimerismo foram correlacionados com as variáveis pré-transplante (idade e sexo do paciente e intervalo entre o diagnóstico e o TCTH), variáveis do transplante (idade e sexo do doador e número de células infundidas) e variáveis pós-transplante (número de neutrófilos, plaquetas e dosagem de hemoglobina após 18 meses do transplante). A análise dos resultados mostrou associação entre os níveis de quimerismo e os tipos de condicionamento empregados (p90% foi mais frequente no grupo II (89,8%) quando comparado ao grupo I (43,6%). As características pré-transplante (idade e sexo do paciente e intervalo entre o diagnóstico e o TCTH) e do transplante (idade e sexo do doador) não mostraram associação ao quimerismo em nenhum dos grupos. O maior número de células infundidas mostrou associação com níveis de quimerismo mais elevados nos pacientes do grupo I (p=0,013) e não apresentou associação nos do grupo II. A análise multivariada mostrou que o nível de quimerismo >90% está associado ao condicionamento com CFA+BUS (p90%. Chimerism analysis was performed by amplification of VNTR/STR loci followed by detection of fragments in polyacrylamide silver stained gels (84 patients) until July of 2009 and, from then on, by capillary electrophoresis in DNA Genetic Analyser (20 patients). Levels of chimerism were correlated to pre-transplant (patient's age, sex, and time elapsed from diagnosis to HSCT), transplant (donor's age, sex, and number of infused cells) and post-transplant (number of neutrophils and platelets, and hemoglobin levels from18 months on after transplant) variables. Data analysis showed an association between the levels of chimerism and the different conditioning regimens (p90% were more frequent in group II (89.8%) than in group I (43.6%). Pre-transplant (patient's age, sex, and time elapsed from diagnosis to HSCT) and transplant (donor's age and sex) characteristics did not show association with chimerism in either one of the groups. The largest number of infused cells showed association with higher levels of chimerism in patients from group I (p=0.013), but not with those in group II. Multivariate analysis indicated that the chimerism level >90% is associated with the conditioning regimen CY+BUS (p

Hematopoietic stem cell transplantation is the curative option for patients with myelodysplastic syndrome; however, it requires a long post-transplantation follow-up. A 53-year-old woman with a diagnosis of myelodysplastic syndrome underwent related donor allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in July 2006. Three months after transplantation, a comparative short tandem repeat analysis between donor and recipient revealed full chimerism, indicating complete, healthy bone marrow reconstitution. Three years and ten months after hematopoietic stem cell transplantation, the patient developed leukopenia and thrombocytopenia. Another short tandem repeat analysis was carried out which showed mixed chimerism (52.62%), indicating relapsed disease. A donor lymphocyte infusion was administered. The purpose of donor lymphocyte infusion is to induce a graft-versus-leukemia effect; in fact, this donor's lymphocyte infusion induced full chimerism. Successive short tandem repeat analyses were performed as part of post-transplantation follow-up, and in July 2010, one such analysis again showed mixed chimerism (64.25%). Based on this finding, a second donor lymphocyte infusion was administered, but failed to eradicate the disease. In September 2011, the patient presented with relapsed disease, and a second related donor allogeneic hematopoietic stem cell transplantation was performed. Subsequent short tandem repeat analyses revealed full chimerism, indicating complete bone marrow reconstitution. We conclude that quantitative detection of mixed chimerism is an important diagnostic tool that can guide early therapeutic intervention.

El quimerismo genético un concepto no bien esclarecido en la comunidad científica, aún confundido con mosaicismo. En la presente revisión pretendemos definirlo con un enfoque legal y ejemplificarlo con una serie de casos descritos en la literatura médica, los cuales nos orientan a la diferencia clara entre mosaicismo y quimerismo. Dentro de esta serie separamos los casos que se relacionan con hermafroditismo y los no relacionados. Además, hacemos referencia a un nuevo concepto que genera polémica en la investigación, el microquimerismo, relacionado con transfusiones sanguíneas, transplantes y la génesis de las enfermedades autoinmunes. Genetic chimerism is a not well defined concept among the scientific community; it is still confused with mosaicism. In the following review we intend to define the concept with a legal point of view and exemplify it with a series of cases described in medical texts. The cases lead us to find the clear difference between mosaicism and chimerism. Contained in these series of cases we have separated the ones related with hemaphroditism from the ones that are not related. We also make reference to a new concept that generates controversy in the investigation; microchimerism, which is related with blood transfusions, transplants and genesis of autoimmune diseases..

White-footed Tamarin (Saguinus leucopus) is a primate endemic to Colombia whose karyotype is described in this study from a pair of individuals located in the East of Caldas Wild Fauna Rehabilitation Center in Colombia. The blood samples were collected from the femoral vein and anti-coagulated with heparin sodium. The chromosomes obtained by the classic method of culture of lymphocytes as well as Q and G banding. The individuals display 46 chromosomes (2n = 46: 30Bi, 14A); sexual chromosomes XX in female and XY in the male (chimerism 46, XX/46, XY in this last one). An ideogram for the White-footed Tamarin karyotype is proposed. Ample similarities in S. leucopus chromosomes Xy 5 are observed and with human chromosomes Xy 19, respectively. Other partial similarities were demonstrated between chromosomes 1 of both species, S. leucopus 2 and 14 with human 7. The comparison of the size of exonic regions of two genes of S. leucopus and Homo sapiens did not show any difference. El tití gris (Saguinus leucopus) es un primate endémico de Colombia cuyo cariotipo se describe en el presente estudio a partir de una pareja de individuos ubicados en el Centro de Rehabilitación de Fauna Silvestre del Oriente de Caldas, Colombia. Las muestras de sangre fueron recolectadas de la vena femoral y anticoaguladas con heparina de sodio. Los cromosomas se obtuvieron por el método clásico de cultivo de linfocitos y bandeamiento Q y G Los individuos presentan 46 cromosomas (2n = 46: 30Bi, 14A); cromosomas sexuales XX en la hembra y XY en el macho (quimerismo 46,XX/46,XY en este último). Se propone un ideograma para el cariotipo del Tití Gris. Se observan amplias semejanzas en los cromosomas X y 5 de S. leucopus con los cromosomas X y 19 humanos, respectivamente. Otras similitudes parciales se evidenciaron entre los cromosomas 1 de ambas especies, 2 y 14 de S. leucopus con el 7 humano. La comparación del tamaño de regiones exónicas de dos genes de S. leucopus y Homo sapiens no arrojó diferencia.

El tití gris (Saguinus leucopus) es un primate endémico de Colombia cuyo cariotipo se describe en el presente estudio a partir de una pareja de individuos ubicados en el Centro de Rehabilitación de Fauna Silvestre del Oriente de Caldas, Colombia. Las muestras de sangre fueron recolectadas de la vena femoral y anticoaguladas con heparina de sodio. Los cromosomas se obtuvieron por el método clásico de cultivo de linfocitos y bandeamiento Q y G Los individuos presentan 46 cromosomas (2n = 46: 30Bi, 14A); cromosomas sexuales XX en la hembra y XY en el macho (quimerismo 46,XX/46,XY en este último). Se propone un ideograma para el cariotipo del Tití Gris. Se observan amplias semejanzas en los cromosomas X y 5 de S. leucopus con los cromosomas X y 19 humanos, respectivamente. Otras similitudes parciales se evidenciaron entre los cromosomas 1 de ambas especies, 2 y 14 de S. leucopus con el 7 humano. La comparación del tamaño de regiones exónicas de dos genes de S. leucopus y Homo sapiens no arrojó diferencia.

CONTEXT AND OBJECTIVE: Non-myeloablative hematopoietic stem cell transplantation (NMA-HSCT) is performed in onco-hematological patients who cannot tolerate ablative conditioning because of older age or comorbidities. This approach does not completely eliminate host cells and initially results in mixed chimerism. Long-term persistence of mixed chimerism results in graft rejection and relapse. Involvement of graft-versus-host disease is concomitant with complete chimerism and graft-versus-tumor effect. The aim of this study was to evaluate the prevalence of chimerism in onco-hematological patients who underwent NMA-HSCT. DESIGN AND SETTING: Observational clinical study on chimerism status after human leukocyte antigen-identical NMA-HSCT at the Discipline of Hematology and Hemotherapy of Universidade Federal de São Paulo. METHODS: We sequentially analyzed the amplification of APO-B, D1S80, DxS52, FVW, 33.6, YNZ-2 and H-ras primers using variable number of tandem repeats (VNTR) on 17 pairs and fluorescent in situ hybridization (FISH) with the XY probe and SRY primer on 13 sex-unmatched pairs. RESULTS: The informativeness of the primers using VNTR was 60% for APO-B, 75% D1S80, 36% DxS52, 14% FVW, 40% YNZ-22 and 16% H-ras. The SRY primer was informative in female receptors with male donors. The XY-FISH method was informative in 100% of the sex-unmatched pairs. CONCLUSION: These methods were sensitive and informative. In VNTR, the association of APO-B with D1S80 showed 88% informativeness. The quantitative FISH method was more sensitive, but had the disadvantage of only being used for sex-unmatched pairs. CONTEXTO E OBJETIVO: O transplante de células hematopoiéticas não-mieloablativo é realizado em pacientes com doenças onco-hematológicas que não suportam condicionamentos ablativos devido à elevada idade ou ao acometimento por comorbidades. Esta abordagem não elimina completamente as células do hospedeiro, resultando, inicialmente, em quimerismo misto. A persistência do quimerismo misto na evolução de longo prazo resulta na rejeição ao enxerto e recaída. O acometimento pela doença do enxerto contra hospedeiro é concomitante ao quimerismo completo e ao efeito enxerto versus tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência do quimerismo em doenças onco-hematológicas tratadas com o transplante não-mieloablativo de células hematopoiéticas. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo clínico observacional do estado de quimerismo após transplante antígenos leucocitários humanos-idêntico não-mieloabaltivo realizado na Disciplina de Hematologia e Hemoterapia da Universidade Federal de São Paulo. MÉTODOS: Analisamos sequencialmente a amplificação dos primers APO-B, D1S80, DxS52, FVW, 33,6, YNZ-22, H-ras pelo VNTR (variable number of tandem repeats) em 17 pares e FISH (fluorescent in situ hybridization) pela sonda XY e do primer SRY em 13 pares de não relacionados a sexo. RESULTADO: A informatividade dos primers pelo VNTR foi de 60% para APO-B; 75% D1S80; 36% DxS52; 14% FVW; 40% YNZ-22 e 16% H-ras. O primer SRY foi informativo em receptores femininos com doadores masculinos. O método XY-FISH foi informativo em 100% dos pares de não relacionado a sexo. CONCLUSÃO: Estes métodos foram sensíveis e informativos. No VNTR, a associação do APO-B com D1S80 mostrou 88% de informatividade. O FISH, método quantitativo, foi mais sensível, porém com desvantagem de ser usado somente nos pares não relacionados a sexo.

O microquimerismo vem sendo identificado em uma série de situações biológicas, sendo decorrentes de procedimentos clínicos ou condições fisiológicas. A transfusão sangüínea é um dos procedimentos que pode produzir a mistura de células do doador com as do receptor. Na transfusão sanguínea, o maior constituinte são as hemácias, logo a interferência microquimérica que pode ocorrer deve-se apenas aos leucócitosque são transfundidos do doador. A admistração rotineira de produtos derivados do sangue é a principal causa de doenças, aonde estes hemocomponente vindos de doadores alogênicos contém leucócitos capazes de sobreviver e se expandir. Os leucócitos presentes nas bolsas de concentrado de hemácias usados em transfusões sanguíneas podem causar a doença do enxerto versus hospedeiro, febre, transmissão viral e interferir na identificação genética do receptor. Este trabalho teve como objetivo avaliar, em um primeiro momento, o limite de detecção de microquimerismo, através de microssatélites (STRs), em amostras biológicas misturadas em proporções conhecidas e, posteriormente, verificar a presença e o tempo de duração de microquimerismo em pacientes submetidos à transfusão sangüínea no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A análise foi realizada a partir de amostras biológicas de três grupos: sete misturas de DNA extraídos antes desse estudo, cinco misturas de sangue e 20 pacientes submetidos à transfusão sangüínea. Todas essas amostras foram também genotipadas individualmente. A genotipagem foi realizada através de PCR seguido por eletroforese capilar, sendo amplificadas as seguintes regiões do genoma: D3S1358, D16S539, THO1, TPOX, CSF1PO, D7S820 e Amelogenina. Os resultados obtidos no grupo de mistura de amostras de DNA foi observada a presença de microquimerismo de 1:30 (ou 3,3%). No grupo de misturas de sangue, microquimerismo foi identificado até a proporção de 1:10 (ou 10%). Entretanto, não foi identificada a presença de microquimerismo em amostras coletadas nas primeiras 24 hs de pacientes submetidos à transfusão sangüínea. Esses resultados sugerem que a metodologia utilizada é sensível para identificar microquimerismo em misturas biológicas até o limite de 3,3%. Portanto, podemos concluir que o microquimerismo em pacientes transfundidos avaliados nesse estudo não atingiu o limite mínimo de detecção da metodologia empregada nesse trabalho. Microchimerism has been identified in a series of biologic situations, being due to clinical procedures or from physiological conditions. Blood transfusion is a procedure that can produce a mixture of donor and receptor cells. In blood transfusions, where red blood cells are the major component, microchimeric interference is due to donor leukocytes. Even blood cell components previously processed may contain a small portion of leukocytes. In some cases, the routine administration of blood-derived products may be the main cause of diseases9 because these hemocomponents from allogeneic donors contain leukocytes capable of surviving and expanding10. Leukocytes present in bags of red blood cell concentrates used in blood transfusions may cause graft-versus-host disease (GVHD), as well as fever and, viral transmission, and may interfere in the genetic identification of the recipient. This work aimed to evaluate, at first, detection limit of microchimerism, using microssatelites (short tandem repeats - STR), in mixed biological samples of controlled proportions and, later, to verify presence and duration of microchimerism in patients postblood transfusion in the Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Analysis was performed in biological samples from three groups: DNA mixtures isolated previously to this study, blood mixtures and patients submitted to blood transfusion. All these samples were also analyzed individually. Allelic patterns were performed through PCR, using fluorescent primers, followed by capillary electrophoresis, with amplification of the following genome regions: D3S1358, D16S539, THO1, TPOX, CSF1PO, D7S820 and Amelogenin. These results in the group of DNA mixtures, microchimerism was observed up to 1:30 (or 3.3%). In the group of blood mixtures, microchimerism was identified up to 1:10 (or 10%). However, presence of microchimerism was not identified in samples collected up to 24 h from patients submitted to blood transfusion. These results suggest that the applied methodology is sensitive to identify microchimerism in biological mixtures up to the limit of 3.3%. Therefore, we can conclude that microchimerism in patients submitted to blood transfusion evaluated in this study did not reach the minimal detection limit for the methodology applied in this work.

La causa genética del pseudohermafroditismo no está bien dilucidada, sin embargo se han reportado distintos casos de pseudohermafroditas masculinos los cuales en la mayoría de los casos se han tratado de explicar por efectos hormonales sobre las gónadas en formación durante el desarrollo embrionario. Además se ha explorado poco la relación de este fenotipo con la constitución genómica de los organismos que presentan la disfunción sexual. En el presente trabajo se encontró una fuerte relación entre el quimerismo cromosómico XX/XY y el fenotipo pseudohermafrodita masculino exhibido por dos ejemplares de porcinos Landrace X Largewhite similar a lo encontrado en freemartinismo de bovinos.

El propósito de este trabajo es estudiar una serie de pacientes afectos de enfermedades hematológicas, en edad pediátrica, sometidos a un trasplante de progenitores hemopoyéticos (TPH). Para ello se ha realizado el seguimiento del trasplante en pacientes que han recibido un trasplante alogénico deun donante de diferente sexo mediante el estudio del QUIMERISMO y se ha relacionado con diferentes parámetros clínico-biológicos; el seguimiento en pacientes que presentaban una alteración cromosómica al diagnóstico, tanto si recibían un TPH autólogo o un TPH alogénico, mediante el estudio de la ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL (EMR); y se ha evaluado la Influencia del cariotipo observado y del pronóstico de las alteraciones cromosómicas detectadas en el diagnóstico de la enfermedad, en la recaída y en la supervivencia post-trasplante.Se han obtenido los siguientes resultados:En el estudio del quimerismo se ha establecido un valor umbral del 1%, para considerar detección de células del paciente. Se han detectado células del paciente en el 42% de los casos mediante la técnica de FISH y en el 16% mediante citogenética. 10 de ellos, han presentado un QM estable, de los cuales seis mostraron un aumento de células del paciente que provocó la recaída clínica en tres; en uno de ellos se detectó el aumento de las células residuales antes de la recaída clínica. Se ha observado una relación estadísticamente significativa entre la presencia de QM y el seso del paciente (el 80% con QM eran niñas, y el 69% con QC eran niños) y el régimen de acondicionamiento (el 60% con QM habían recibido únicamente quimioterapia mientras que el 80% con QC habían recibido quimioterapia e ICT). La SG ha sido la misma para los pacientes con QM o con QC (65%) y la SLE ha sido menor para el grupo con QM (51% vs 75%).En el estudio de la EMR se ha establecido un valor umbral del 6% de núcleos con la fusión para considerar presencia de la reorganización BCR/ABL mediante FISH. Se ha detectado el cariotipo observado al diagnóstico en el 26% (10/38) de los pacientes. De los 10 pacientes que han presentado la EMR, en ocho la detección coincidió con la recaída clínica y en dos la detección se realizó antes de la recaída.EN EL estudio del CARIOTIPO Y su Influencia en la EVOLUCION POSTTRASPLANTE se ha observado que las alteraciones cromosómicas detectadas al diagnóstico de la enfermedad, han mantenido su valor pronóstico después del TPH. Se ha observado la evidencia de una peor evolución de las alteraciones en 11q23 en las LLA (han fallecido 2/4), y una evolución no tan desfavorable en las LMA (no ha fallecido ninguno de 4). En la presente serie, la presencia de un cariotipo alterado ha constituido un factor de mal pronóstico, teniendo en cuenta que la SG, la SLE ha sido menor y la PR mayor en el grupo de pacientes con cariotipo alterado. El valor pronóstico del cariotipo se ha mantenido post-TPH, teniendo en cuenta que la SG, la SLE ha sido menor y la PR mayor en el grupo de pacientes con cariotipo de pronóstico desfavorable. En la presente serie, la indicación de un TPH autólogo en le grupo de pacientes con cariotipo de mal pronóstico, no ha resultado en una mejora en la supervivencia de estos, que quizás podrían beneficiarse de un TPH alogénico no emparentado; ya que la SG y la PR ha sido del 51,8% y del 31%, respectivamente para los pacientes que recibieron un TPH alogénico y del 33% y del 75% respectivamente, para los pacientes que recibieron un TPH autólogo, siendo estas diferencias estadísticamente significativas., In this work we have performed the follow-up of children with haematological diseases who received a progenitor cells transplantation (PCT). We have studied of chimerism in a sex-mismatched allogeneic PCT, the minimal residual disease (MRD) when the patient showed a chromosome aberration at diagnosis of the malignant disease, and we have analyzed the correlation between the karyotype at diagnosis and the outcome after of the PCT.- In the chimerism analysis we have observed a mixed chimerism (MC) we have detected more than 1% of host cells. The 42% patients showed host cells by FISH, and only the 16% by cytogenetics. Ten of them showed MC, and six of them showed a increase of the host cells, in one patient before of the clinical relapse a progressive increase of host cells was detected. The results indicate that female patients and a less intensive conditioning regimen are significantly associated with the MC status. The overall survival (OS) was similar for the patients with MC or donor chimerism (DC), and leukaemia-free survival was higher in DC than in the MC groups.- In the follow-up of MRD, BCR/ABL reorganization has been considered to exist when more than 6% of fusion nuclei was observed. The karyotype observed at diagnosis was detected 26% of patients. In two of them the karyotype showed at diagnosis was observed before of the clinical relapse.- The prognosis of the karyotype observed at diagnosis has been similar as prognostic factor in the outcome after PCT. The prognosis of 11~23 chromosome aberration in LLA was worse in LMA. To detect an abnormal karyotype at diagnosis of the disease are predictors of a poor outcome after PCT. To detect a karyotype of the worst prognosis at diagnosis of the disease are predictors of a poor outcome after PCT. The outcome of patient who showed a karyotype of worst prognosis at diagnosis of the disease and received an autologous PCT was worse the group of patients with karyotype of worst prognosis and who received an allogenic PCT.