Search

Submitted by Larissa Aparecida Gonçalves (larissa.a.goncalves@unesp.br) on 2019-03-22T13:51:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Larissa Aparecida Gonçalves 2019_REPOSITÓRIO UNESP.pdf: 1779052 bytes, checksum: 9d940d70063c0eb33d4a5c8555103687 (MD5) Approved for entry into archive by Cristina Alexandra de Godoy null (cristina@adm.feis.unesp.br) on 2019-03-22T18:27:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 goncalves_la_me_ilha_par.pdf: 940232 bytes, checksum: a2c7cf56c6fdb8cac8f83c14780bb551 (MD5) Made available in DSpace on 2019-03-22T18:27:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 goncalves_la_me_ilha_par.pdf: 940232 bytes, checksum: a2c7cf56c6fdb8cac8f83c14780bb551 (MD5) Previous issue date: 2019-01-25 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Rhizoctonia solani AG-1 IA é um patógeno habitante do solo que causa doenças em pastagens e plantas cultivadas, em vários estados brasileiros. Para penetrar e colonizar os tecidos do hospedeiro, o microrganismo utiliza enzimas que podem ser de interesse biotecnológico e industrial. O objetivo do presente trabalho foi produzir e caracterizar a α-amilase secretada por R. solani AG-1 IA utilizando produtos e resíduos agroindustriais como substratos para fermentação. Para todos os ensaios foi adotado o processo de cultivo em estado sólio (CES) à temperatura de 25 °C e umidade inicial de 60%. Inicialmente, nove isolados de R. solani provenientes de diferentes hospedeiros (arroz, braquiária e soja) foram comparados quanto à produção amilolítica. As maiores atividades enzimáticas foram proporcionadas pelos isolados TO_022 e MT_SO85, procedentes da cultura da soja. Na etapa seguinte, foi avaliado o efeito do substrato sobre a produção enzimática. Farelo de trigo (12,98 U mL-1; TO_022), farelo de soja (3,97 U mL-1; MT_SO85) e braquiária lavada (4,95 U mL-1; TO_022) induziram eficientemente a produção amilolítica. O perfil de produção enzimática no farelo de trigo, melhor substrato avaliado no cultivo, indicou o tempo de 216 h como o mais apropriado para a obtenção de α-amilases pelo isolado TO_022 (22,14 U mL-1), e 240 h para o isolado MT_SO85 (22,84 U mL-1). Para caracterização físico-química da enzima foi utilizado o extrato enzimático bruto do isolado TO_022. A α-amilase de R. solani TO_022 exibiu máxima atividade a 55 °C e pH 5,5, e manteve atividade (em torno de 80%) quando incubada à 25 °C, pelo período de 24 h, em pH 4,5 a 7,0. A enzima também é estável quando incubada pelo período de 1 h, em temperaturas de até 45 °C. Rhizoctonia solani AG-1 IA is a soil-borne pathogen that causes diseases in pastures and cultivated plants in several Brazilian states. To penetrate and colonize host tissues, the microorganism uses enzymes that may be of biotechnological and industrial interest. The aim of the present work was to produce and characterize the α-amylase secreted by R. solani AG-1 IA using agroindustrial products and residues as substrates for fermentation. For all the tests, the solid state cultivation process (SSC) at 25 °C and initial humidity of 60% was adopted. Initially, nine isolates of R. solani from different hosts (rice, Brachiaria grass and soybean) were compared for amylolytic production. The major enzymatic activities were provided by the isolates TO_022 and MT_SO85, from the soybean crop. In the next step, the effect of the substrate on the enzymatic production was evaluated. Wheat bran (12.98 U mL-1; TO_022), soybean meal (3.97 U mL-1, MT_SO85) and washed ruzigrass (4.95 U mL-1; TO_022) efficiently induced amylolytic production. The enzymatic production profile in wheat bran, the best substrate evaluated in the culture, indicated the time of 216 h as the most appropriate to obtain α-amylases by the TO_022 isolate (22.14 U mL-1), and 240 h for the isolated MT_SO85 (22.84 U mL-1). For the physicochemical characterization of the enzyme, the crude enzymatic extract of the TO_022 isolate was used. The α-amylase of R. solani TO_022 exhibited maximum activity at 55 °C and pH 5.5, and maintained activity (around 80%) when incubated at 25 °C for 24 h at pH 4.5 to 7.0. The enzyme is also stable when incubated for 1 h at temperatures up to 45 °C. CAPES: Código de Financiamento 001

Submitted by RAISA DÉLI DE OLIVEIRA SANCHES (raisa_oliveira_deli@hotmail.com) on 2019-01-10T18:19:44Z No. of bitstreams: 1 RAISA DELI DE OLIVEIRA SANCHES.docx: 1891575 bytes, checksum: 81221b1c1af43ae35ab5c8f908965ff1 (MD5) Rejected by Paula Torres Monteiro da Torres (paulatms@sjrp.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) É necessário que o arquivo contendo a sua tese esteja no formato Portable Document Format (PDF) e não esteja protegido. Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso. Agradecemos a compreensão. Atenciosamente, Paula Torres on 2019-01-11T15:07:25Z (GMT) Submitted by RAISA DÉLI DE OLIVEIRA SANCHES (raisa_oliveira_deli@hotmail.com) on 2019-01-11T16:56:56Z No. of bitstreams: 1 Raisa Déli de Oliveira Sanches.pdf: 1177874 bytes, checksum: 0573414d14940c313393ec6d6144d643 (MD5) Rejected by Paula Torres Monteiro da Torres (paulatms@sjrp.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Na folha de rosto, falta a natureza da pesquisa. Problema 02) FOLHA DE APROVAÇÃO fora do padrão, na página da Seção de pós-graduação, em Instruções para Qualificação e Defesas de Dissertação e Tese, você pode acessar o modelo das páginas pré-textuais. Problema 03) Na Folha de rosto e folha de aprovação deve constar a financiadora. Ex.: Financiadora: CNPq – Proc. Problema 04) As palavras-chave no abstracts e no resumo devem ser escritas com a inicial maiúscula e separadas por ponto. Problema 05) Não deve constar no sumário, o RESUMO e ABSTRACT, pois são itens pré-textuais. Problema 06) Solicitamos que altere a nomenclatura de REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS para REFERÊNCIAS, segundo a norma ABNT NBR 6023 . Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Sua submissão será rejeitada para que você possa fazer as correções. Agradecemos a compreensão. Atenciosamente, Paula Torres on 2019-01-11T18:04:07Z (GMT) Submitted by RAISA DÉLI DE OLIVEIRA SANCHES (raisa_oliveira_deli@hotmail.com) on 2019-01-11T18:37:20Z No. of bitstreams: 2 Raisa Déli de Oliveira Sanches.pdf: 1177874 bytes, checksum: 0573414d14940c313393ec6d6144d643 (MD5) RAISA DELI DE OLIVEIRA SANCHES.pdf: 1180249 bytes, checksum: 857b5877203d8cb3a107411bb8dc1127 (MD5) Approved for entry into archive by Paula Torres Monteiro da Torres (paulatms@sjrp.unesp.br) on 2019-01-14T11:20:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sanches_rdo_dr_sjrp.pdf: 1180249 bytes, checksum: 857b5877203d8cb3a107411bb8dc1127 (MD5) Made available in DSpace on 2019-01-14T11:20:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sanches_rdo_dr_sjrp.pdf: 1180249 bytes, checksum: 857b5877203d8cb3a107411bb8dc1127 (MD5) Previous issue date: 2018-12-18 Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Uma ciclomaltodextrina glucanotransferase (E.C. 2.4.1.19, CGTase) produzida pelo microrganismo Paenibacillus campinasensis linhagem H69-3, foi obtida por fermentação submersa a 45 °C, e a CGTase purificada por cromatografia de afinidade bioespecífica em resina Sepharose 6B ativada com β-CD. A enzima foi purificada até 23 vezes, obtendo um rendimento de 11,0%, e a atividade específica de 32,6 U mg-1 ao final da etapa de purificação. A massa molecular da enzima purificada foi estimada em 72 kDa por eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida na presença de dodecil-sulfato de sódio. O pH ótimo para a atividade enzimática foi de 6,5 e a enzima foi estável na faixa de pH de 6,5 a 8,0. A temperatura ótima foi de 65 °C em pH 6,5, e foi térmicamente estável até 55 °C na ausência de substrato durante 1 h de incubação e estável até 65 °C na presença de Ca2+ 5 mmol L-1. A atividade enzimática aumentou na presença de Ba2+, Mg2+, Ca2+, Ni2+, K+, Zn2+ e foi inibida na presenca dos íons metálicos Cu2+, Hg2+, Ag+, Li2+, Al3+ e NH42+ e por β‑, γ‑CD, DMSO, Triton, SDS e NaN3. Utilizando maltodextrina como substrato a CGTase apresentou 11,0±0,5 µmol min·mg e 0,30 ± 0,07 mg mL‑1, Vmáx e Km, respectivamente. Avaliaram-se os parâmetros termodinâmicos da CGTase, que demonstrou mais de 11 horas a 65 ºC como tempo de meia vida, e elevada resistência estrutural à desnaturação térmica quando avaliados os resultados de entropia, energia de ativação e entalpia. A cyclomaltodextrin glucanotransferase (E.C. 2.4.1.19, CGTase) produced by 4 microorganism Paenibacillus campinasensis strain H69-3 was obtained by submerged fermentation at 45 °C and CGTase purified by biospecific affinity chromatography on β-CD activated Sepharose 6B resin. The enzyme was purified up to 23 times, yielding 11.0% yield, and the specific activity of 32.6 U mg-1 at the end of the purification step. The molecular weight of the purified enzyme was estimated at 72 kDa by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate. The optimum pH for the enzymatic activity was 6.5 and the enzyme was stable in the pH range of 6.5 to 8.0. The optimum temperature was 65 °C at pH 6.5 and was thermally stable at 55 °C in the absence of substrate for 1 h incubation and stable at 65 ° C in the presence of Ca2+ 5 mmol L -1. The enzyme activity increased in the presence of Ba2+, Mg2+, Ca2+, Ni2+, K+, Zn2+ and was inhibited in the presence of Cu2+, Hg2+, Ag+, Li2+, Al3+ and NH42+ ions and by β, γ -CD, DMSO, Triton, SDS and NaN3. Using maltodextrin as substrate CGTase presented 11.0 ± 0.5 μmol min · mg and 0.30 ± 0.07 mg mL-1, Vmax and Km, respectively. The thermodynamic parameters of CGTase, which demonstrated more than 11 hours at 65 ºC as a half-life, and high structural resistance to thermal denaturation were evaluated when the results of entropy, activation energy and enthalpy were evaluated. 140303/2016-2

Submitted by Sirlene do Nascimento Senna (sirlenensenna@gmail.com) on 2018-09-24T16:30:48Z No. of bitstreams: 1 Produção, purificação parcial e caracterização de xilanase produzida por fungo filamentoso.pdf: 2581369 bytes, checksum: d6b0fad7c62880dff4c553542a6e660c (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-09-24T18:38:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 senna_sn_dr_sjrp_par.pdf: 507857 bytes, checksum: a3b9ad8fac4c2da438f46397b36df5bd (MD5) Made available in DSpace on 2018-09-24T18:38:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 senna_sn_dr_sjrp_par.pdf: 507857 bytes, checksum: a3b9ad8fac4c2da438f46397b36df5bd (MD5) Previous issue date: 2018-08-03 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Os fungos filamentosos são microrganismos muito eficientes na produção de xilanases, enzimas que apresentam diversas aplicações biotecnológicas, tais como, branqueamento do papel, aditivos em rações animais, panificação, extração e clarificação de sucos, entre outras. Este trabalho teve como objetivo selecionar e otimizar as condições de cultivo do microrganismo de maior potencial para a produção de xilanase, caracterizando a mesma bioquímicamente, e purificar parcialmente a de interesse. Onze fungos isolados em áreas de Cerrado, no estado do Mato do Grosso Sul, com crescimento a 30 ºC, foram reativados para ensaio de produção da xilanase. A maioria dos isolados produziram xilanase por cultivo em estado sólido, inicialmente, utilizando o farelo de trigo como substrato, se destacando três espécies identificadas como IPS8.2, IPS14.3F e IPS 9.3. O fungo IPS8.2 foi selecionado para estudo posteriores e identificado como Gongronella butleri com base sequenciamento de rDNA por ITSs. Além do cultivo inicial com farelo de trigo, esta espécie foi submetida ao efeito de diferentes fontes de carbono com outros substratos, tais como: casca de maracujá, serragem, papelão, casca de soja, sabugo triturado, bagaço de cana-de-açúcar, braquiária, sabugo de milho e xilana, nos cultivos em estado sólido (CES) e submerso (Csm). Os resultados obtidos nessa etapa não sobrepuseram à utilização inicial, em farelo de trigo em CES. Partindo desses resultados buscou-se verificar o efeito da concentração de sais, umidade e tempo no cultivo em estado sólido. Entre as condições testadas, Gongronella butleri IPS8.2 obteve sua melhor produção de xilanase em 72 horas de cultivo, com água destilada e 70% de umidade. A solução enzimática bruta, foi submetida à purificação parcial por troca iônica em Hitrap Q-Sepharose FF. As atividades da xilanase bruta e parcialmente purificada foram favorecidas à 45 ºC e pH 5,5. A enzima parcialmente purificada apresentou uma estabilidade de temperatura e uma faixa de estabilidade de pH inferiores à amostra bruta. A maioria dos íons utilizados não inibiu a xilanase bruta e à parcialmente purificada. Para ambas as condições testadas, o íon Ag+ foi o que proporcionou maior diminuição na atividade da enzima em estudo. Filamentous fungi are very efficient microorganisms in the production of xylanases, enzymes that present several biotechnological technologies, such as paper bleaching, additives in animal feed, breads, extraction and clarification of juices, among others. The goal of this work was to select and optimize the culture conditions of the microorganism with the greatest potential for the production of xylanase, characterizing the same biochemically, and to partially purify the one of interest. Eleven fungi, with growth at 30ºC, isolated in Cerrado areas, in the state of Mato Grosso do Sul, were reactivated for the production of the xylanase. The majority of isolates produced xylanase by solid-state cultivation, initially using wheat bran as substrate, highlighting three species identified as IPS8.2, IPS14.3F and IPS 9.3. The fungus IPS8.2 was selected for further study and identified as Gongronella butleri, based on rDNA sequencing by ITSs. In addition to the initial cultivation with wheat bran, this species was submitted to the effect of different sources of carbon with other subtracts, such as passion fruit peel, sawdust, cardboard, soybean hull, crushed cob, sugar cane bagasse, corn cob and xylan, in the solid state cultivation (SSC) and submerged culivation (SC). The obtained results at this stage did not overlap with the initial use of wheat bran at SSC. Based on these results, was tried to verify the effect of the concentration of salts, humidity and time in the solid state cultivation. Among the tested conditions, Gongronella butleri IPS8.2 obtained its best xylanase production at 72 hours of culture with distilled water and 70% of humidity. The crude enzymatic solution, was subjected to partial purification by ion exchange in Hitrap Q-Sepharose FF. The activities of crude and partially purified xylanase were favored at 45 °C and pH 5.5. The partially purified enzyme had a temperature stability and pH stability range lower than the crude sample. The majority of the ions used didn‟t inhibit the crude and partially purified xylanase. For both conditions tested, the Ag+ ion provided the greatest decrease in the activity of the enzyme under study

Submitted by WANDERLÉIA RODRIGUES DOS SANTOS (wan_agrodemais@yahoo.com.br) on 2016-11-08T03:20:40Z No. of bitstreams: 1 SANTOS, Wanderléia R._ISOLAMENTO DE FUNGOS DO BIOMA PANTANAL E ESTUDOS DA PRODUCAO DE XILANASE E CELULASE.pdf: 5388286 bytes, checksum: 4a9fc8f2da75275e125b294bd9895f54 (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO null (luizaromanetto@hotmail.com) on 2016-11-09T11:57:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_wr_dr_ilha_par.pdf: 983362 bytes, checksum: dcac81a779c27e1d5068f59cfe259fed (MD5) Made available in DSpace on 2016-11-09T11:57:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_wr_dr_ilha_par.pdf: 983362 bytes, checksum: dcac81a779c27e1d5068f59cfe259fed (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Diante do recente interesse em valorizar os fungos degradadores da biomassa lignocelulósica oriunda das atividades agrícolas, agroindustriais e de florestas plantadas, torna-se necessário a prospecção de novos micro-organismos e a partir destes estudar seu potencial, bem como fatores que afetam o seu desenvolvimento, a produção de enzimas, e o rendimento como um todo. Após uma breve introdução e revisão de literatura, tem-se o Capítulo I expondo parte do projeto, onde o objetivo de estudo foi isolar e selecionar fungos da região do Pantanal Sul-mato-grossense, e testar sua eficiência na produção das enzimas xilanase, carboximetilcelulase (CMCase) e avicelase tendo 1% de palha de milho e papelão como substratos indutores no meio líquido de isolamento testados na temperatura de 35 e 45 °C. Neste processo, um total de 111 fungos foram obtidos, onde 80,7% dos isolados em meio contendo palha de milho, cresceram a temperatura de 35 °C e os isolados induzidos meio contendo papelão, 63,0% se manifestaram a 45 °C. O isolado WPPM 922 obteve as maiores atividades enzimáticas com 614,5 U g- 1, e 107,3 U g-1 e 5,37 U g- 1 para atividade de xilanase, CMCase e avicelase respectivamente, fermentado em farelo de trigo em 96 h a 35 °C. Oito isolados e o Trichoderma asperelloides F22, foram selecionados para avaliação do seu potencial na produção enzimática utilizando 6 tipos de resíduos agrícolas e agroindustriais. A casca de arroz foi o substrato que mais induziu as enzimas xilanase e CMCase pelos isolados testados. A maior produção de xilanase foi obtida pelo isolado WPPM 421A com 931,95 U g-1 em casca de arroz e por T. asperelloides F22 cerca de 876,48 U g -1 tendo o farelo de trigo como substrato. O isolado WPPM 622 apresentou a maior atividade da enzima CMCase, com atividade de 155,73 U g-1 na mistura bagaço de cana-de-açúcar, seguido pelo isolado WPPM 151 e o fungo T. asperelloides F22, com atividade de 60,52 U g-1 e 57,29 U g-1 respectivamente, fermentados em casca de arroz. No Capítulo II, descreve-se a importância das condições bioquímicas das enzimas xilanase e CMCase produzidas pelos isolados WPPM 421A e WPPM 622, e por T. asperelloides F22 quanto a temperatura e pH ótimos e estabilidade e a meia vida. O Trichoderma asperelloides F22 obteve seu pico de produção de xilanase em 72 h (606,23 U g-1), e o isolado WPPM 421A que obteve pico de produção de xilanase e CMCase em 96 h (547,27 U g-1 e 55,53 U g-1, respectivamente). O pH ótimo e estabilidade foi diferente para os isolados avaliados, no entanto, o isolado WPPM 421A, cultivado em farelo de trigo, demonstrou pH ótimo de 5,5, mas manteve sua atividade acima de 50% na faixa de pH 5-11. Quanto a termoestabilidade, o isolado WPPM 421A quando cultivado em sabugo de milho produziu xilanase mais termoestável, mantendo 67,4% da atividade a 90 °C. Essa xilanase conservou 60% de sua atividade após 12h de incubação a 60 °C, e manteve 50% de sua atividade após incubada 1 h a 70 °C. As propriedades estudadas colocam estas enzimas como promissoras para aplicações biotecnológicas. Before the recent interest in valuing the degrading fungi lignocellulosic biomass derived from agricultural, agroindustrial and planted forests, it is necessary to prospect for new microorganisms and from these study their potential as well as factors affecting their development the production of enzymes, and performance as a whole. After a brief introduction and review of the literature, there is Chapter I exposing part of the project, where the objective of the study was to isolate and select fungi from the Sul-mato-grossese Pantanal region, and test their efficiency in the production of xylanase enzymes, carboxymethylcellulase (CMCase) and avicelase having 1% corn straw and cardboard as an inducer substrate in the liquid isolation medium tested at 35 and 45 °C. In this process, a total of 111 fungi were obtained where 80.7% of the isolates were grown in medium with corn stover at 35 °C and induced in medium containing isolated cardboard, they are expressed in greater numbers at 45 °C, about 63.0%. Isolated WPPM 922 had the highest enzymatic activities 614.5 U g-1, and 107.3 U g-1 and 5.37 U g-1 xylanase, CMCase and avicelase respectively, fermented wheat bran at 96 h at 35 °C. Also in this chapter, eight isolates and the Trichoderma asperelloides F22, were tested for their potential to hydrolyze 6 types of agricultural and agro-industrial waste. Rice husk was the substrate that more induced the xylanase enzymes and CMCase the isolates tested. The highest xylanase production was obtained with the isolated WPPM 421A activity 931.95 U g-1 in rice husk, and T. asperelloides F22 with 876.48 U g-1 with wheat bran as substrate. The isolate WPPM 622 was the fungus that showed the highest activity of CMCase enzyme with activity 155.73 Ug-1 in the mixture of sugar cane bagasse and wheat bran, followed by isolated WPPM 151 and the T. asperelloides F22 with activity 60.52 U g-1 and 57.29 U g-1 respectively, fermented rice husk. In Chapter II, reports the importance of the minimum conditions for the fungi to express their potential to secrete degradative enzymes of cell wall, it aimed to with this process to obtain a kinetic production of xylanase enzymes and CMCase by isolated WPPM 421A and WPPM 622, and T. asperelloides F22 and after characterize the xylanase of these materials with the optimum temperature and pH, thermal and pH stability and half life of the enzyme. O Trichoderma asperelloides F22 obtained its peak xylanase production at 72 h (606.23 U g-1) and isolated WPPM 421A that obtained peak xylanase production and CMCase at 96 h (547.27 U g-1 and 55.53 U g-1, respectively). There was a difference in optimum pH and stability of the tested isolates, however, isolated WPPM 421A, cultivated in wheat bran showed optimum pH of 5.5, but maintained its activity above 50% in the pH 5-11 range. The thermostability, isolated WPPM 421A when grown on corn cobs produced more thermostable xylanase activity keeping in 67.4% when the reaction occurred at 90 °C, and also retained its activity by 60%, 12 h incubation at 60 °C, and retained 50% of its activity after incubated 1h at 70 °C. The properties studied enzymes make them promising for biotechnological applications. The region of Sul-mato-grossense has shown promise for the study of fungal microbiota for the production of enzymes, where 99% demonstrated ability to express cellulases and hemicellulases, with activity up to 900 U g- 1.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-09. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:30Z : No. of bitstreams: 1 000859578.pdf: 2407454 bytes, checksum: 8f8cd1ebd5ec7774fbfb7c2dd87ffc81 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Em conjunto com outras enzimas que degradam amido, as α-amilases e CGTases são incluídas na família 13 glicosilhidrolases caracterizada por uma conformação (α/β)8-barril. As amilases são grupo importante de enzimas industriais, representando cerca de 25% do mercado mundial de enzima.. Foram isoladas linhagens bacterianas de áreas do Cerrado que apresentaram alta produção de amilases em estudos anteriores. Devido ao interesse em ampliar os conhecimentos de α-amilases e CGTase com potencial de aplicação industrial, no presente trabalho, propôs-se realizar estudos de análises físico-químicas e do efeito da fonte de carbono, na produção de α-amilase das linhagens microbianas A-1.2 e A-18 e de CGTase produzida por Paenibacillus campinasensis H69-3 utilizando na fermentação submersa os amidos solúvel, trigo, milho, batata e mandioca; farelo de trigo e mandioca; Maizena e Arrozina como diferentes fontes de carbono alternativas Além disso, propôs-se aperfeiçoar os estudos de produção de amilases pela linhagem microbiana A-1.2 por meio da otimização dos constituintes nutricionais do meio de cultivo em que cada um dos ensaios do planejamento fatorial foi executado em triplicata e dessa forma, consideraram-se as médias dos resultados obtidos dessas repetições. Iniciar estudos de biologia molecular com a CGTase produzida por P. campinasensis H69-3 buscando estratégias para a clonagem e expressão da CGTase em hospedeiro heterólogo (Escherichia coli). As linhagens A-1.2 e A-18 tiveram as fontes de carbono amido solúvel, amido de mandioca, amido de milho e farelo de mandioca como os substratos que maximizaram a produção da enzima por ambas as linhagens, e o tempo de fermentação com maiores atividades foi entre 72 e 96 horas. O perfil de produção ao longo do tempo da CGTase de P. campinasensis H69-3 indicou o amido solúvel, amido de mandioca e a Maizena como as fontes de carbono que propiciaram as mais altas... Together with other enzymes that degrade starch, α-amylases and CGTases are included in the family 13 glycosylhydrolases, characterized by a conformation (α/β)8-barrel. Amylases are an important group of industrial enzymes, accounting for approximately 25% of the world enzyme market. Bacterial strains from the Cerrado areas, which have shown a high production of amylase in the previous studies, have been isolated. Due to the interest in expanding the knowledge of α-amylase and CGTase with potential for industrial application, the present work proposes to conduct studies of physical and chemical analysis and the effect of carbon source on the production of α-amylase of A-1.2 and A-18 microbial strains, as well as CGTase produced by Paenibacillus campinasensis H69-3 in submerged fermentation using the soluble starch, wheat, corn, potato and cassava; wheat bran and cassava; Maizena and Arrozina like various alternative sources of carbon. Furthermore, it proposes enhancing the amylase study of the microbial strain A-1.2 by optimizing the nutritional components of the culture medium in which each of the factorial design experiments has been carried out in triplicate, and thus considering the average results of these repetitions. To initiate molecular biology studies with CGTase produced by P. campinasensis H69-3 searching strategies for the cloning and expression of the CGTase in a heterologous harbourer (E. coli). The A-1.2 and A-18 strains were the carbon sources of soluble, cassava and corn starch, and cassava bran as the substrate that maximized the enzyme production by both strains. And the fermentation time with higher levels of activity was between 72 and 96 hours. The production profile over the CGTase P. campinasensis H69-3 time has indicated the soluble and cassava starch and Maizena as carbon source that provided the highest enzymatic activities. The 72 hours period of time has been more appropriate in enzymatic tests, ...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-20Bitstream added on 2015-03-03T12:07:10Z : No. of bitstreams: 1 000810091.pdf: 234767 bytes, checksum: 7fb1d927fc0c334943580520a3a695bb (MD5) Foi avaliada a qualidade dos cortes cárneos contrafilé (Longissimus dorsi), picanha (Biceps femoris), coração da paleta (Triceps brachii) e filé-mignon (Psoas major), provenientes de cordeiros terminados em confinamento. As carnes foram embaladas a vácuo e, em seguida, analisadas após 30 horas (carne refrigerada a 6°C) do abate e maturadas (2 ?C) por 3, 7 e 14 dias. Foram realizadas análises qualitativas da carne, determinando-se pH, cor, oxidação lipídica, capacidade de retenção de água, força de cisalhamento, exsudato, perda por gotejamento, evaporação e cocção; também foi realizada análise sensorial da carne in natura, maturada por 3 e 7 dias. O delineamento experimental da análise sensorial foi o inteiramente casualizado, tendo 4 tratamentos (Longissimus dorsi, Biceps femoris, Triceps brachii e Psoas major) e 30 repetições (provadores); nas demais análises, o delineamento foi também o inteiramente casualizado, tendo 4 tratamentos constituídos por carne in natura, maturada por 3, 7 e 14 dias, com 8 repetições por tratamento. A coloração das carnes apresentou alterações, evidenciando-se tonalidade alaranjada e escurecimento com a maturação. A quantidade de exsudato presente na embalagem aumentou com a maturação; as perdas apresentaram diferenças com a maturação, tendo o valor menor no nono dia, 30,53 e 33,58, respectivamente, por evaporação e cocção. A menor capacidade de retencão de água foi 57,60, no oitavo dia. A maturação promoveu aumento da maciez; a máxima maciez foi obtida na carne maturada por 14 dias, 4,32 kgf/cm 2 . Os valores de pH e oxidação lipídica encontrados estão em acordo com o preconizado na literatura; respectivamente, sendo o máximo de 5,69, no quarto dia, e 0,29 mg malonaldeído/kg de amostra, no nono dia. Qualquer alteração relativa à cor da carne é indesejável, podendo acarretar prejuízos à comercialização, pois, a ... It was evaluated the quality of sirloin (Longissimus dorsi), top sirloin cap (Biceps femoris), heart of beef shoulder (Triceps brachii) and tenderloin (Psoas major) cuts from lambs treated in feedlot. The meat was vacuous packed and analyzed after 30 hours from the slaughter (meat refrigerated at 6o C) and maturation (2o C) for 3, 7 and 14 days. Qualitative meat analysis were made determining the pH, color, lipid oxidation, water retain capacity, power of shearing stress, exudate, drip loss, evaporation and cooking; sensorial analysis in natura meat matured for 3 and 7 days were also made. The experimental design of sensory analysis was totally randomized, were made with 4 treatments (Longissimus dorsi, Biceps femoris, Tríceps brachii and Psoas major) and 30 repetitions (tasters); the other analyses the design in totally randomized with 4 treatments with in natura meat, matured for 3, 7 and 14 days, with 8 repetitions per treatment. The meat coloring alternated, all of them presented orange hue and darkening after matured. The quantity of exudate in the package raises in the maturation process. The losses presented difference in the maturation, the lower value was on the ninth day, 30.53 and 33.58 for evaporation and cooking respectively. The lower capacity of water retain was 57.60 on the eighth day. The maturation increased the softness, the maximun level was obtained in the meat matured for 14 days, 4.32 kgf/cm. The pH values and lipid oxidation identified are according to the recommended ones in the literature, the maximum was 5.69 on the fourth day and 0.29 mg of the malonaldehyde/kg sample on the ninth day. The undesirable modification on the color of the meat may not be good for the commercialization because it is one of the requirements analyzed by the consumers when they buy it. The loss of meat liquid is also undesirable because it reduces the weight of the meat; as it is ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:59:35Z : No. of bitstreams: 1 fonseca_ic_me_ilha.pdf: 349171 bytes, checksum: 7f4e128b5b7da75ad5793a1ef2b84dda (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Bactérias e fungos são os organismos mais ativos na decomposição de compostos orgânicos no solo, afetando diretamente a disponibilidade de nutrientes para as plantas e as propriedades químicas e físicas dos solos. O solo ecossistema complexo e dinâmico, com transformações microbianas e reações químicas que podem ser alteradas sempre que nesse ecossistema ocorrer alguma interferência. Dessa forma, o manejo do solo e das culturas pode alterar o substrato, favorecer ou inibir diferentes grupos microbianos. Assim, o trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a microbiota local, fungos e bactérias do solo em sistemas de produção de grãos em Dourados-MS em Latossolo Vermelho Distroférrico textura argilosa Os tratamentos foram constituídos pelos seguintes cultivos de outono-inverno 1) milho solteiro (Zea mays), 2) milho consorciado com Brachiaria ruziziensis, 3) Brachiaria ruziziensis solteira e 4) feijão caupi (Vigna unguiculata) e soja no verão nos anos agrícolas de 2011 e 2012. As coletas do solo foram realizadas durante a fase de enchimento de grãos das espécies na entrelinha das culturas. Utilizados procedimentos clássicos para a quantificação microbiana e determinação das atividades amilásicas e celulásicas do solo. A comunidade bacteriana do solo tende a se desenvolver melhor quando as condições climáticas, principalmente umidade, são favoráveis, com destaque para maior numero de unidades formadoras de colônias no feijão caupi em 2011 e no verão para a soja em sucessão ao consórcio e os fungos em condições de seca A diferença observada entre as comunidades microbianas esta relacionada a sucessão das culturas e a influência do efeito rizosferico das culturas. A comunidade bacteriana se relaciona a atividade amilolítica com a degradação do amido e a fungica para a celulose. Devido às poucas... Bacteria and fungi are the most active organisms in the decomposition of organic compounds in the soil, directly affecting the availability of nutrients for plants and chemicals and physical soils properties. The soil complex and dynamic ecosystem with chemical reactions and microbial transformations that can be changed whenever some interference occurs in this ecosystem. Thus, the management of soil and crops can change the substrate, favor or inhibit different microbial groups. This study was to evaluate the microbiota, fungi and soil bacteria in grain production systems in Dourados-MS in a Distroferric Red Latosol The treatments consisted of the following crops of autumn-winter 1) corn (Zea mays), 2) maize intercropped with Brachiaria ruziziensis, 3) Brachiaria ruziziensis and 4) cowpea (Vigna unguiculata) and soybean in summer in the years 2011 and 2012. The soil samples were taken during the grain filling of species between rows of crops. Classical procedures used for the determination and quantification of microbial activities and amylase cellulase soil. The soil bacterial community tends to develop better climate conditions, especially moisture, favorable, especially for larger number of colony forming units in cowpea in 2011 and in the summer for the soybean crop to the intercroop and fungi in drought conditions The difference between microbial communities is related to the succession of cultures and the influence of crop rhizosphere effect. The bacterial community relates to amylase activity with starch degradation and fungal for cellulose. Due to limited information on the microbiota in this region... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-31Bitstream added on 2014-06-13T20:19:51Z : No. of bitstreams: 1 santos_eao_me_ilha.pdf: 4044422 bytes, checksum: c62efee73c7a71e03187bde6c4a67542 (MD5) Universidade Estadual Paulista (UNESP) Celulose e hemicelulose são os polissacarídeos mais encontrados em todo o mundo. Em plantas, a celulose e a hemicelulose estão situados entre a lignina formando as fibras de celulose. As enzimas hemicelulolíticas produzidas por micro-organismos têm atraído uma grande atenção desde a década passada, particularidade devida as suas características biotecnológicas em vários processos industriais como indústrias de alimentos, ração animal, etanol e papel e celulose. Assim neste trabalho foram isoladas linhagens fungicas de duas regiões de Cerrado, na qual oito linhagens fúngicas foram analisadas quanto ao perfil de produção enzimática sob fermentação em estado sólido, utilizando resíduo agroindustrial como substrato. Foram determinadas atividade enzimática para xilanase e CMCase. A melhor atividade enzimática para xilanase obteve-se a partir do fungo mesofílico Neosartorya spinosa P2D19 com 20,6 U ml-1 (133,0 U/g), após 72 horas de cultivo sob fermentação em estado sólido. A enzima mostrou-se mais ativa em pH 5,0, porém cerca de 85% da atividade foi mantida em pH 7,5. A temperatura ótima dessa xilanase foi em 60° C Cellulose and hemicellulose are polysaccharides found all over the world. In plants, the cellulose and hemicellulose are localed between the lignin forming the cellulose fibers. Hemicellulolytic enzymes produced by microorganisms has attracted great attention over the past decade due to its special features in several biotechnological industrial processes such as food industries, animal feed, ethanol and pulp and paper. In this study, fungal strains were isolated from two Cerrado areas, from which eight fungal strains were analyzed for enzyme production profile in solid fermentation state using agro industrial residue as substrate. Enzyme activity was determined for xylanase and CMCase. The highest xylanase enzyme activity was obtained with fungi mesophilic Neosartorya spinosa strain P2D16 with 20.6 U.ml-1 (133 U/g) after 72 hours of cultivation under solid fermentation state. The enzyme was more active at pH 5.0, although of its 85% activit was maintained at pH 7.5. The optimum temperature for xylanase activity was 60° C

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-02Bitstream added on 2014-06-13T19:43:44Z : No. of bitstreams: 1 martin_m_dr_rcla.pdf: 1037055 bytes, checksum: 944c98ccfd999b71ae555ffe401d2e45 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Organismos termofílicos produzem enzimas que, em geral, são mais termoestáveis que aquelas produzidas por mesofílicos. Além disso, essas enzimas geralmente apresentam várias características importantes sob o ponto de vista de aplicação industrial, como estabilidade em ampla faixa de pH e maior tolerância a solventes e outros desnaturantes proteicos. O tipo de processo fermentativo usado também pode influênciar a produção e as propriedades das enzimas obtidas. Foram isoladas várias cepas fúngicas termofílicas e pectinolíticas e entre elas, o fungo termofílico Thermomucor indicae-seudaticae N31 foi o que apresentou maior potencial de produção de poligalacturonase (PG) usando meios a base de resíduos agro-industriais. Em fermentação em estado sólido (FES) usando como meio de cultura uma mistura de farelo de trigo e bagaço de laranja (1:1) a 70% de umidade, o fungo produziu 14 U/mL em 48 horas e em fermentação submersa (FSm) com 1% farelo de trigo e 1% bagaço de laranja como substrato foram obtidas 13 U/mL em 96 horas de fermentação. A PG presente na solução enzimática bruta obtida de FSm foi mais termoestável do que aquela de FSS e mais estável em ampla faixa de pH. As exo-PGs produzidas em FSm e FSS foram purificadas até homegeneidade, com um fator de purificação de 8 e 2,5 vezes e um rendimento de 27,7% e 15,5% para FSm e FSS, respectivamente. A PG da FSm apresentou um massa molar de 38,9 kDa e a de FSS 37,1, kDa. O pH e temperatura ótimos foram de 5,5 e 4,5-5,0 e 55° e 60°C, para enzimas de FSm e FES, repectivamente. Ambas as PGs mostraram perfil de exo-PG, liberando ácido galacturônico por hidrólise de pectina com baixo grau de esterificação (DE). O km foi 590,9 e 661,6 e o Vmax de 4 e 4,9 umol min-1mg-1, para PG de FSm e FES, respectivamente. A termoestabilidade foi comprovada pela análise dos... Thermophilic organisms produce enzymes that, in general, are more thermostable than the ones produced by mesophilic. Moreover, these enzymes generally exhibit many important characteristics under the perspective of industrial application, such as stability in a wide range of pH and more tolerance to solvents and other protein denaturating substances. The type of fermentative process can also influence the production and properties of the enzymes obtained. Numerous strains of thermophilic and pectinolytic fungi were isolated and among them, the Thermomucor indicae-seudaticae N31 was the one that presented the highest potential for polygalacturonase (PG) production using media containing agro industrial residues. In solid state fermentation (SSF) using a mixture of wheat bran and orange bagasse (1:1) as substrate, at 70% moisture, the fungus produced 14 U/mL in 48 hours and in submerged fermentation (SmF) with 1% wheat bran and 1% orange bagasse as substrate, 13 U/mL were obtained in 96 hours of fermentation. PG in the crude enzymatic extract obtained from SmF was more thermostable than the one produced in SSF and stable in a wider range of pH. The exo-PGs produced in SmF and SSF were purified to homogeneity, with a final purification of 8 and 2.5- fold and overall recovery of 27.7% and 15.5%, respectively. PG from SmF exhibited a molecular mass of 38.9 kDa and PG from SSF 37.1 kDa. Optimum pH and temperature were 5.5 and 4.5-5.0 and 55°C and 60°C for the enzymes from SmF and SSF, respectively. Both PGs exhibited exo-PG profile, releasing galacturonic acid through the hydrolysis of low esterification level pectin. Km was 590.9 and 661.6 and Vmax was 4 and 4.9 umol min-1mg-1, for PG from SmF and SSF, respectively. The thermostability was confirmed by analyzing the enzymes thermodynamic parameters with PG produced in SmF being the most thermostable exhibiting higher values... (Complete abstract click electronic access below)