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Objective: To describe the main microorganisms associated with respiratory infections, thus listing bacteria, viruses, fungi, protozoa and helminths. Methodology: This is a descriptive literature review with a qualitative approach, whose material selection was carried out using pre-established criteria, which corroborated the specificity of the search in the databases: SciELO, PubMed and the portal of CAPES journals, including a total of 42 contents, these, published between 2010 and 2020. Results and Discussion: Several are the organisms responsible for the involvement of respiratory tract infections, with bacteria as the main infectious agents in this sense, being acquired in the community, but with emphasis on its contamination, in the hospital environment. Viruses, in turn, correlate with the potential for morbidity and mortality in the diseases caused by them. In addition to these microorganisms, fungi, protozoa and helminths also have the ability to promote lung infections. Conclusion: In short, we can affirm the wide variety of microorganisms involved in the involvement of respiratory infections. In view of the physiological essentiality of the lungs, and the compromise that the infections result, often irreversibly or leaving sequelae, there is a need for studies aimed at developing therapies for the stabilization of compromised patients. Objetivo: Describir los principales microorganismos asociados a las infecciones respiratorias, enumerando bacterias, virus, hongos, protozoos y helmintos. Metodología: Se trata de una revisión descriptiva de la literatura con enfoque cualitativo, cuya selección de material se realizó mediante criterios preestablecidos, que corroboró la especificidad de la búsqueda en las bases de datos: SciELO, PubMed y el portal. de revistas CAPES, incluyendo un total de 42 contenidos, estos, publicados entre 2010 y 2020. Resultados y Discusión: Varios son los organismos responsables de la participación de las infecciones del tracto respiratorio, siendo las bacterias los principales agentes infecciosos en este sentido, adquiriéndose en la comunidad, pero con énfasis en su contaminación, en el ámbito hospitalario. Los virus, a su vez, se correlacionan con el potencial de morbilidad y mortalidad en las enfermedades causadas por ellos. Además de estos microorganismos, los hongos, protozoos y helmintos también tienen la capacidad de promover infecciones pulmonares. Conclusión: En definitiva, podemos afirmar la amplia variedad de microorganismos implicados en la implicación de las infecciones respiratorias. En vista de la esencialidad fisiológica de los pulmones y el compromiso que resultan de las infecciones, a menudo de forma irreversible o dejando secuelas, existe la necesidad de estudios dirigidos a desarrollar terapias para la estabilización de pacientes comprometidos. Objetivo: Descrever os principais microrganismos associados as infecções respiratórias, listando assim, bactérias, vírus, fungos, protozoários e helmintos. Metodologia: Trata-se de uma revisão de literatura do tipo descritiva com abordagem qualitativa, cuja seleção de materiais foi realizada por meio de critérios pré estabelecidos, os quais, corroboraram para a especificidade da busca nas bases de dasos: SciELO, PubMed e o portal de periódicos da CAPES, sendo inclusos, um total de 42 conteúdos, estes, publicados entre os anos de 2010 a 2020. Resultados e Discussão: Vários são os microrganismos responsáveis pelo acometimento de infecções no trato respiratório, tendo as bactérias como os principais agentes infecciosos neste sentido, sendo adquiridas na comunidade, mas com ênfase para sua contaminação, no ambiente hospitalar. Os vírus, por sua vez, se correlacionam com o potencial de morbidade e mortalidade nas doenças por eles causadas. Além desses microrganismos, os fungos, protozoários e helmintos também possuem a capacidade de promover infecções pulmonares. Conclusão: Em suma, pode-se afirmar a grande variedade de microrganismos envolvidos no acometimento de infecções respiratórias. Frente a essencialidade fisiológica dos pulmões, e o comprometimento que as infecções resultam, muita das vezes de forma irrversiveis ou deixando sequelas, gera-se a necessidade de estudos destinados a elaboração de terapêuticas para a estabilização dos pacientes comprometidos.

The species S. molle L. is widely distributed in Rio Grande do Sul. The aerial parts of S. molle are popularly used for different therapeutic purposes as antiinflammatory, anti-haemorrhagic, antiseptic, mild laxative, astringent, anti-asthmatic, digestive stimulant, menstrual, diuretic and tonic disorder. The need to seek new therapeutic alternatives for respiratory diseases, preferably with minimal side effects, justifies this work, both from the point of view of scientific and social interest. The present work aimed to obtain the crude extract of S. molle leaves by the maceration process, perform phytochemical analysis, identify and quantify compounds present in the extract, evaluate biological activities, such as anti-inflammatory and antimicrobial activity, as well as evaluate cyto and genotoxicity and antioxidant potential against reactive oxygen and nitrogen species. S. molle extract after analysis showed concentrations of 79,14; 231,67; 52,65 mg equivalents/g of extract that were determined by phytochemical dosages in S. molle extract for total phenols, tannins and flavonoids, respectively. S. molle was able to capture reactive oxygen and nitrogen species with antioxidant capacity with IC50 = 30.54 ± 0.41 μg/mL. It did not present cytotoxicity and genotoxicity, being a safety indicator. Antimicrobial activity was not significant in relation to the microorganisms Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Mycobaterium tuberculosis, M. abcessus, M. massiliense, M. fortuitum and M. smegmatis. The extract showed no hematological alterations, even in the group induced pleurisy with 2% carrageenan. The flavonoids rutin (58,63 mg/g) and quercetin (0,665 mg/g) were identified and quantified. A espécie S. molle L. é amplamente distribuída no Rio Grande do Sul. As partes aéreas da S. molle são utilizadas popularmente para diferentes finalidades terapêuticas como anti-inflamatória, anti-hemorrágica, antisséptico, laxativo leve, adstringente, antiasmática, estimulante digestivo, distúrbio menstrual, diurético e tônico. A necessidade de buscar novas alternativas terapêuticas para doenças respiratórias, de preferência, com o mínimo de efeitos colaterais, justifica este trabalho, tanto pelo ponto de vista do interesse cientifico, quanto pelo social. O presente trabalho teve por objetivo obter o extrato bruto das folhas de S. molle pelo processo de maceração, realizar análise fitoquímica, identificar e quantificar compostos presentes no extrato, avaliar atividades biológicas, como atividade antiinflamatória e antimicrobiana, bem como, avaliar cito e genotoxicidade e potencial antioxidante frente as espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. O extrato de S. molle após as análises apresentou concentrações de 79,14; 231,67; 52,65 mg de equivalentes/g de extrato que foram determinadas por dosagens fitoquímicas no extrato de S. molle para fenóis totais, taninos e flavonoides, respectivamente. A S. molle mostrou-se capaz de capturar espécies reativas de oxigênio e nitrogênio com capacidade antioxidante com IC50=30,54±0,41 μg/mL. Não apresentou citotoxicidade e genotoxicidade, sendo um indicativo de segurança. A atividade antimicrobiana foi não significativa frente aos microrganismos Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Mycobaterium tuberculosis, M. abcessus, M. massiliense, M. fortuitum e M. smegmatis. O extrato não demostrou alterações hematológicas, mesmo no grupo induzido pleurisia com carragenina 2%. Os flavonoides rutina (58,63 mg/g) e quercetina (0,665 mg/g) foram identificados e quantificados.

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In this sense, the present work had as objectives the isolation of the majority diterpenic acids present in the Copaifera multijuga oil: copalic and 3-hydroxy-copalic acids and Copaifera reticulata: hardwickiic acid, with structural modifications in the 2 (two) lowcost and optimized chemistries, as well as in vitro and in vivo assays of the substance with the best anti-inflammatory screening and subsequent in silico studies. After isolation, the substances were semi-synthesized and their structures elucidated by 1H and 13C NMR analysis, and therefore, tested in cell viability assay and TNF-?? inhibition activity check test in vitro. The in vivo model of pleurisy/pleuritis in balb-c mice was performed with the best anti-inflammatory substance (ACD13B-esterification of ibuprofen with 3-hydroxy-copalic acid), as well as expression assay of IKB-?? protein. In addition, the gastrointestinal test was also performed with the same substance. The semi-synthesized derivatives were: ACD4- epoxidation of copalic acid, ACD13B-esterification of ibuprofen with 3-hydroxy-copalic acid and ACD51-acylation of phthalic anhydride with 3-hydroxy-copalic acid. ACD13B showed no cytotoxic potential in the THP-1 line when tested at the concentration of 2 ??M. The other substances did not present significant cytotoxicity at concentrations tested. In addition, ACD13B significantly inhibited TNF-?? production in LPS-stimulated THP-1 cells. In animals with induced pleurisy, ACD13B reduced the total number of leukocytes by 40% and the number of mononuclear cells at a dose of 100 mg/kg intraperitoneally (IP) by up to 50%. There was also inhibition of pIKB-??. ACD13B presented a lower gastrointestinal effect when compared to ibuprofen in mice. The docking study revealed the affinity and mode of interaction of the substance ACD13B in COX-2 and COX-1, identifying hydrophobic and hydrophilic interactions. The results indicate that the ibuprofen derivative with 3-hydroxy copalic acid is a prototype of an anti-inflammatory drug with a lower gastrointestinal effect than ibuprofen, which may be explored in the future for other functional and therapeutic properties. O ??leo de copa??ba oriundo de diversas esp??cies do g??nero copaifera tem sido utilizado h?? muitos anos, comercialmente, em virtude de sua poss??vel a????o modulat??ria sobre processos inflamat??rios. Estudos fitoqu??micos das esp??cies, que elucidam sua composi????o qu??mica, fracionada em sesquiterpenos e diterpenos, tem sido realizados. Apesar do ??leo bruto ser bastante estudado, o conhecimento do efeito de suas subst??ncias isoladas ?? escasso, e poucos s??o os estudos sobre modifica????es estruturais desses ??cidos diterp??nicos, buscando melhorar suas atividades biol??gicas. Neste sentido o presente trabalho teve como objetivos o isolamento dos ??cidos diterp??nicos majorit??rios presentes no ??leo de Copaifera multijuga: ??cidos cop??lico e 3-hidr??xi-cop??lico e Copaifera reticulata: ??cido hardw??ckiico, realizando-se modifica????es estruturais nos 2 (dois) primeiros, por rea????es qu??micas de baixo custo e otimizadas, bem como ensaios in vitro e in vivo da subst??ncia com melhor screening antiinflamat??rio e posteriormente estudo in silico. Ap??s o isolamento, as subst??ncias foram semissintetizadas e suas estruturas elucidadas por an??lise de RMN 1H e 13C, e por conseguinte, testadas em ensaio de viabilidade celular e teste de verifica????o da atividade de inibi????o do TNF-?? in vitro. O modelo in vivo de pleurisia/pleurite em camundongos balb-c foi realizado com a subst??ncia de melhor screening anti-inflamat??rio (ACD13B-esterifica????o do ibuprofeno com o ??cido 3-hidr??xi-cop??lico), assim como ensaio de express??o da prote??na IKB-??. Alem disso, o ensaio de gastrotoxicidade tamb??m foi procedido com a mesma subst??ncia. Os derivados semissintetizados foram: ACD4-epoxida????o do ??cido cop??lico, ACD13B-esterifica????o do ibuprofeno com o ??cido 3-hidr??xi-cop??lico e ACD51-acila????o do anidrido ft??lico com o ??cido 3-hidr??xi-cop??lico. O ACD13B n??o apresentou potencial citot??xico na linhagem THP-1 quando testado na concentra????o de 2 ??M. As demais subst??ncias n??o apresentaram citotoxicidade nas concentra????es testadas. Al??m disso, o ACD13B inibiu significativamente a produ????o de TNF-?? em c??lulas THP-1 estimuladas por LPS. Em animais com pleurisia induzida o ACD13B reduziu em torno de 40% o total de leuc??citos e em at?? 50% o n??mero de mononucleares na dose de 100 mg/Kg por via intraperitonial (IP). Houve tamb??m inibi????o da pIKB-??. O ACD13B apresentou menor efeito gastrot??xico quando comparado ao ibuprofeno em camundongos. O estudo de docking revelou a afinidade e o modo de intera????o da subst??ncia ACD13B em COX-2 e COX-1, identificando intera????es hidrof??bicas e hidrof??licas. Os resultados obtidos indicam que o derivado do ibuprofeno com o acido 3-hidr??xi cop??lico apresenta-se como um prot??tipo de f??rmaco anti-inflamat??rio com menor efeito gastrot??xico que o ibuprofeno, o qual pode ser futuramente explorado quanto a outras propriedades funcionais e terap??uticas.

Resumen El objetivo principal del estudio fue describir las lesiones pulmonares en ovinos faenados. Se realizó un estudio descriptivo transversal que incluyó 26 pulmones de ovinos faenados sin signos clínicos de la enfermedad, en el norte del departamento de Bolívar, Colombia. Se estableció la frecuencia relativa de las lesiones pulmonares macroscópicas y microscópicas, así como la asociación entre las lesiones macroscópicas y la condición corporal. El 92% de ovinos presentó lesiones macroscópicas y microscópicas. Se encontraron 32 lesiones macroscópicas: pleuritis (34 %), neumonía intersticial (32 %), neumonía embólica (13 %), neumonía granulomatosa (6 %), bula enfisematosa (6 %), neumonía verminosa (3 %), bronconeumonía supurativa (3 %) y atelectasia (3 %). La pleuritis mostró una relación altamente significativa con la condición corporal (p

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017. Introdução: Calea uniflora Less. é uma planta perene e subarbustiva, conhecida popularmente como: arnica e erva-de-lagarto. Esta planta pertence à família Asteraceae, que compreende cerca de 125 espécies, distribuídas mundialmente principalmente nas áreas tropicais e subtropicais utilizadas na medicina popular para o tratamento do reumatismo, doenças respiratórias e problemas digestivos. Objetivos: 1) Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto, frações e compostos isolados obtidos da C. uniflora, sobre a migração dos leucócitos, lesão pulmonar, exsudação, edema, atividade de enzimas mieloperoxidase (MPO), adenosina-desaminase (ADA), concentrações de nitrito/nitrato (NOx) e de citocinas: interleucina-1ß (IL-1ß), interleucina-6 (IL-6), interleucina-10 (IL-10), interleucina-17A (IL-17A), fator de necrose tumoral-a (TNF-a), interferon-gama (IFN-?), proteína quimiotática de monócitos-1 (MCP-1), 2) Avaliar o efeito dos compostos isolados sobre a atividade das enzimas catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD) e glutationa S-transferase (GST) e das concentrações de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), além da fosforilação da subunidade das proteínas p65 (RelA) do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da cinase ativada por mitógeno p38 (p38-MAPK), Ainda verificar a citotoxicidade e a apoptose de neutrófilos isolados do peritônio de camundongos. Metodologia: As folhas frescas de C. uniflora foram trituradas e submetidas a maceração em etanol 92%, para obtenção do extrato bruto (EB). Este extrato foi dissolvido em água e particionado com diferentes solventes: n-hexano, diclorometano e acetato de etila para obter as frações: hexano (Hex), diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e resíduo aquoso (Aq). Os compostos noreugenina (NRG), orobol + buteína (OR+BU) e a-hidroxi-buteína (AH-BU) foram isolados a partir da fração DCM e da fração AcOEt, respectivamente. A elucidação dos compostos isolados foi realizada utilizando-se técnicas de cromatografia líquida a vácuo (CLV), cromatografia em coluna (CC) e análise de seus dados espectrais (1H NMR, COSY, HSQC e HMBC). Nos ensaios in vivo foram utilizados camundongos albinos Swiss. A pleurisia foi induzida segundo metodologia descrita por SALEH et al., 1996 e, foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas: MPO e ADA, concentrações de NOx e de citocinas inflamatórias (IL-1ß, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-a, IFN-?, MCP-1), enzimas anti-oxidantes (CAT, SOD e GST), TBARS, proteínas p65 e p38 totais e fosforiladas, edema, preservação e espessamento da arquitetura do septal alveolar. Estas dosagens foram realizadas em diferentes tecidos (lavado pleural e/ou tecido pulmonar). As dosagens de MPO, ADA, NOx, SOD, GST, CAT, TBARS foram realizadas por testes colorimétricos no lavado pleural e/ou tecido pulmonar. As citocinas, proteínas p65 e p38 foram mensuradas por citometria de fluxo ou enzimaimunoensaio no lavado pleural e/ou tecido pulmonar. Já análise histológica do pulmão foi realizada por coloração com Hematoxilina-eosina (HE). Para os ensaios in vitro, os neutrófilos foram obtidos do lavado peritoneal dos camundongos albinos Swiss. Neste protocolo foram analisados os parâmetros: viabilidade celular, usando solução de azul de Trypan (0,4%), a MPO, dosada por ensaio colorimétrico e apoptose, analisada por citometria de fluxo. A análise estatística dos parâmetros inflamatórios estudados foi realizada pelo teste de análise de variância (ANOVA) complementados, pelo teste de Newman-Keuls e/ou teste t de Student. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EB (50 - 200 mg/kg), Aq (10 - 50 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), DCM (5 - 50 mg/kg), AcOEt (5 - 50 mg/kg), NRG (5 - 10 mg/kg), OR+BU (5 - 10 mg/kg), AH-BU (2,5 - 10 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (p < 0,05). Da mesma forma, EB (50 mg/kg), Aq (10 mg/kg), Hex (10 mg/kg), DCM (5 mg/kg), AcOEt (5 mg/kg), NRG (5 mg/kg), OR+BU (5 mg/kg), AH-BU (2,5 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, as concentrações de NOx, de citocinas (IL-1ß, IL-6, IL-17A, TNF-a, IFN-?, MCP-1), e de enzimas anti-oxidantes (SOD, CAT e GST), TBARS, além da ativação do NF-?B e da p38-MAPK (p < 0,01). Ainda os compostos isolados aumentaram as concentrações da IL-10. Por fim, nos ensaios in vitro os compostos isolados reduziram a atividade de MPO e aumentaram a apoptose de neutrófilos, sem alterar a viabilidade dos neutrófilos. Conclusões: C. uniflora possui importante atividade anti-inflamatória devido principalmente à inibição do influxo de leucócitos e da exsudação. Este efeito parece ser em parte mediado pela inibição de mediadores inflamatórios, de enzimas anti-oxidantes, produtos da peroxidação lipídica, bem como um aumento da citocina anti-inflamatória (IL-10) e a indução de apoptose de neutrófilos ativados. Por fim, a noreugenina (NRG), orobol + buteína (OR+BU) e a-hidroxi-buteína (AH-BU) parecem ser, em parte, responsáveis pelo efeito anti-inflamatório apresentado pela C. uniflora por meio da inibição de vias de sinalização intracelular: NF-?B e de p38 MAPK. Abstract : Introduction: Calea uniflora Less. is a perennial and sub-shrub plant, popularly known as: arnica and erva-de-lagarto. This plant belongs to the Asteraceae family, with almost 125 species, and it is widely distributed prior to tropical and subtropical regions of the world and they are used in folk medicine for the treatment of rheumatism, respiratory diseases and digestive problems. Objectives: 1) To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract, fractions and isolated compounds from C. uniflora upon: leukocyte migration, lung injury, exudation, oedema, myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) enzymes activities, nitrite/nitrate (NOx) and cytokines (interleukin-1ß (IL-1ß), interleukin-6 (IL-6), interleukin-10 (IL-10), interleukin-17A (TNF-a), interferon-gamma (IFN-?), monocyte-1 chemotactic protein (MCP-1)) concentrations and, 2) To evaluate the effect of the isolated compounds upon: catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and glutathione S-transferase (GST) activities, and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), concentrations, and p65 (RelA) nuclear subunit of nuclear factor kappa B (NF-?B) and kinase activated by mitogen p38 (p38-MAPK) phosphorylations, besides the cytotoxicity and apoptosis of neutrophils isolated from peritoneal in mice. Methodology: The fresh leaves of C. uniflora were triturated and submitted to maceration with ethanol 92%, to obtain the crude extract (EB). This extract was dissolved in water and partitioned with different solvents: n-hexane, dichloromethane and ethyl acetate solutions to obtain the hexane (Hex), dichloromethane (DCM), ethyl acetate (AcOEt) and residual aqueous (Aq) fractions. The isolated compounds, noreugenin (NRG), orobol + butein (OR+BU) and a-hydroxy-butein (AH-BU) were isolated from the DCM fraction and AcOEt fraction, respectively. The elucidation of the isolated compounds was performed using vacuum liquid chromatography (CLV), column chromatography (CC) and analysis of its spectral data (1 H NMR, COZY, HSQC and HMBC). In the In vivo assays it was used Swiss mice. The pleurisy was induced according to the methodology described by SALEH et al., 1996. The following inflammatory parameters were evaluated: leukocytes, exudation, MPO and ADA activities, and NOx and inflammatory cytokines (IL-1ß, IL-6, IL-10, IL-17A, TNF-a, IFN-?, MCP-1) concentrations, antioxidant enzymes (CAT, SOD, GST) activities, TBARS concentration, total and phosphorylated p65 and p38 proteins, oedema, preservation and thickening of the alveolar septal architecture. These dosages were evaluated in different tissues (pleural lavage and/or lung tissue). The dosages of MPO, ADA, NOx, SOD, GST, CAT, TBARS were performed by colorimetric tests in the pleural lavage and/or lung tissue. The cytokines, p65 and p38 proteins were performed by flow cytometry or enzyme immunoassay in the pleural lavage and/or lung tissue. The histological analysis of the lung was analysed by staining with Hematoxylin-eosin (HE). For the in vitro assays, neutrophils were obtained from the peritoneal lavage of Swiss mice. In this protocol, the following parameters were analyzed: cell viability, using Trypan blue solution (0.4%), MPO, measured by colorimetric assay and apoptosis, analyzed by flow cytometry. Statistical analysis of the studied inflammatory parameters were determined by analysis of variance test (ANOVA), and complemented by test Newman-Keuls and/or Student's t test. Values of p < 0.05 was considered significant. Results: EB (50 - 200 mg/kg), Aq (10 - 50 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), DCM (5 - 50 mg/kg), AcOEt (5 - 50 mg/kg), NRG (5 - 10 mg/kg), OR+BU (5 - 10 mg/kg), AH-BU (2.5 - 10 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (p < 0.05). Also, EB (50 mg/kg), Aq (10 mg/kg), Hex (10 mg/kg), DCM (5 mg/kg), AcOEt (5 mg/kg), NRG (5 mg/kg), OR+BU (5 mg/kg) and AH-BU (2.5 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, NOx, cytokines (IL-1ß, IL-6, IL-6, IL- IL-17A, TNF-a, IFN-?, MCP-1) concentrations, anti-oxidant enzymes (SOD, CAT and GST) activities, TBARS concentrations, and p-p65 NF-?B and p-p38 MAPK levels (p < 0.01). Also the isolated compounds increased IL-10 concentration. Finally, the isolated compounds reduced MPO activity and increased neutrophil apoptosis, without altering neutrophil viability in the in vitro assays. Conclusions: The C. uniflora present important anti-inflammatory activity mainly due to the reduction of the influx of leukocytes and exudation. This effect appears to be related, in part, by the inhibition of inflammatory mediators release, anti-oxidant enzymes, lipid peroxidation products, as well as, an increase in the anti-inflammatory cytokine (IL-10) levels and neutrophil apoptosis induction. Finally, noreugenin (NRG), orobol + butein (OR + BU) and a-hydroxy-butein (AH-BU) seems to be, in part, responsible for this anti-inflammatory effect presented by C. uniflora sice it promote intracellular pathways inhibition (NF-?B and p38 MAPK).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2017 Fragaria x ananassa Duch., conhecida como morango-de-jardim, é consumida mundialmente in natura ou na forma de sucos, geleias e iogurtes produzidos pela indústria alimentícia. Diversos estudos têm demonstrado que o morango pode ter importantes atividades biológicas, como antioxidante, anti-hipertensivo e também anti-inflamatório. Neste sentido, avaliamos o efeito anti-inflamatório do extrato dos frutos de Fragaria x ananassa e seu principal composto, a pelargonidina-3-O-glicosídeo (P3G), analisando seus efeitos na migração de leucócitos, níveis de exsudação, atividades da mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-a) e de interleucina-6 (IL-6), utilizando o modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Também foi realizado um estudo in vitro para identificar a ação específica de P3G em proteínas cinases ativados por mitógeno (p38MAPK), cinase c-Jun N-terminal (JNKMAPK), fator de transcrição nuclear kappa B (NF-?B) e proteína ativadora-1 (AP-1). Para realização dos ensaios in vivo, os frutos congelados de morangos foram sonicados com 25 mL de metanol acidificado (HCl 1%) durante 75 minutos. Os extratos foram filtrados, e o solvente evaporado sob pressão reduzida até à secura produzindo o extrato bruto (EB). O composto majoritário presente no EB (P3G) foi utilizado nos experimentos, em forma de padrão obtido a partir de fonte comercial (Sigma-Aldrich, Co.). Em ambos os experimentos a dexametasona (Dex) foi utilizada como medicamento de referência anti-inflamatório. Na análise estatística, utilizou-se a análise de variância (ANOVA) seguida pelo teste post-hoc de Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Os resultados apresentados neste estudo demonstraram que o EB e P3G foram capazes de reduzir todos os parâmetros inflamatórios avaliados no modelo da pleurisia induzida pela carragenina (p < 0,05) e também na cultura celular de macrófagos murinos induzidos por lipopolissacarídeo (LPS) (p < 0,01), com exceção para a P3G, que não causou inibição na fosforilação da p38MAPK. Além disso, foi demonstrado que o mecanismo molecular desse efeito, envolve a inibição da ativação de IkB-a (p < 0,05) e a redução da fosforilação de JNKMAPK (p < 0,01). Esses efeitos levaram a uma redução da ativação do NF-?B (p < 0,05) e do AP-1 (p < 0,001), dois fatores de transcrição de destaque na cascata inflamatória desencadeada pela ativação do receptor de membrana Toll-like tipo 4 (TLR4). Esses resultados sugerem que o composto testado é um potencial candidato para o desenvolvimento de agentes anti-inflamatórios para utilização em patologias nas quais essa via exerce um papel de destaque. Abstract: Fragaria x ananassa Duch., known as garden strawberry, is worldwide consumed in natura or in the form of juices, jams or yogurts produced by the food industry. Studies have shown that strawberry may have important biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory and antihypertensive. We therefore evaluated the anti-inflammatory effect of Fragaria x anannassa fruit extract and its major compound, pelargonidin-3-O-glucoside (P3G), analyzing its effect on leukocyte migration, exudation levels, myeloperoxidase (MPO), adenosine deaminase (ADA) activities and nitric oxide (NOx), tumoral necrosis factor (TNF-a) and interleukin 6 (IL-6) levels, using an in vivo murine model of pleurisy. We also have carried out an in vitro study to identify the specific action of P3G in p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK), c-Jun N-terminal kinase (JNKMAPK), nuclear transcript factors ?B (NF- ?B) and activated protein 1 (AP-1). To this end, the plant material was subjected to extraction. Briefly, frozen fruits of strawberry were sonicated with 25 mL of acidified (HCl 1%) methanol for 75 minutes. The extracts were filtered, and the solvent evaporated under reduced pressure to dryness yielding the crude extract (CE). The major compound present in CE (P3G) was used in our experiments as a standard obtained from commercial source (Sigma-Aldrich, Co.). In in vivo experiments, all inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, p.o.) was used as anti-inflammatory reference drug. In in vitro experiments, the inflammatory parameters were measured by Western Blot, also using dexamethasone as reference drug (Dex 7 µM). For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. P values < 0.05 were considered significant. The results presented in our study demonstrated that the crude extract (CE), and P3G are able to reduce the inflammatory parameters evaluated in the murine model of pleurisy (p < 0,05), and also in the cell culture of murine macrophages (p < 0,01), except for P3G, that did not cause inhibition in p38MAPK phosphorylation. Moreover, we demonstrated that the molecular mechanism of this effect involves the arrest of IkB-a activation (p < 0,05) and reduction in JNKMAPK phosphorylation (p < 0,01). These effects lead to a reduction in NF-?B (p < 0,05) and AP-1 activation (p < 0,001) of the transcription factors conductors of the inflammatory pathway triggered by the activation of TLR4. These results suggests that the tested compound is a potential candidate for a development of anti-inflammatory agent to treat diseases in which this pathway exerts a pivotal role.

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Silva.pdf: 2397176 bytes, checksum: 10d2601e2d4c7bb5bd425131e63a0ebc (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 CAPES - Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior Inflammation is a physiological process that begins in response to infection or tissue damage. It is a mechanism focusing on tissue repair after injury and consists of a cascade of cellular and microvascular events that aims to remove damaged tissue and generation of new ones. In this cascade is observed an increasing in microvascular permeability, followed by adhesion and cell infiltration at the site of injury, apoptosis, and growth of new tissue and blood vessels. The nitrostyrene is a group of compounds consisting of an aromatic ring linked to a chain of the nitro group (NO2). It has been studied by having various biological activities such as anti-apoptotic, anti-platelet or anti-microbial, although few studies have been made for the anti-inflammatory activity of these compounds. The aim of this study was to evaluate anti-inflammatory activity of four new compounds from the class of nitrostyrene (NPA, 7B, 7D and 7E) in in vitro/in vivo assays. Initially, the compounds were submitted to in vitro testing in a murine macrophages model activated by lipopolysaccharide (LPS) and MRC5 human lung fibroblast in order to assess the cytotoxic potential of such compounds. Shortly thereafter, they were evaluated for inhibition of nitric oxide (NO??), for dosage of the cytokine TNF-?? and evaluation of the expression of proteins involved in the inflammatory process. To evaluate the acute inflammatory process in vivo was performed edema induction by carrageenan tests on zebrafish model of LPS-induced pleurisy in mice. The four new compounds tested showed cytotoxic activity on J774A.1 and MRC5 cell when tested in the concentrations (3.12-25 ??g/ml). For THP-1 cytotoxic activity was starting concentration of 10 ??g/ml. All compounds inhibited nitric oxide production by macrophages activated by LPS but only the NPA showed a possibly significant concentration-response at the concentrations of 10 and 20 ??g/ml. This same compound also reduced TNF-??, NF-???B and ERK 1/2 levels in THP-1 cells. The NPA possibly also inhibited the carrageenan-induced edema in Zebrafish fish and leukocyte migration into the pleural cavity of mice by inhibiting the intracellular signaling pathways NF-???B and ERK 1/2 in in vivo assays. In conclusion, compounds tested in this study not only presented significant cytotoxic activity, as also showed an excellent in vitro/in vivo anti-inflammatory potential, most likely by acting in the inhibition of NF-???B and ERK 1/2 pathways. Data were important to explore the biological activity of these novel compounds and their possible application in the treatment of inflammatory diseases. A inflama????o ?? um processo fisiol??gico que se inicia em resposta a uma infec????o ou dano aos tecidos. ?? um mecanismo direcionado ao reparo tecidual ap??s a les??o e consiste em uma cascata de eventos celulares e microvasculares que tem como objetivo a remo????o de tecidos danificados e a gera????o de outros novos. Nessa cascata ?? observado o aumento da permeabilidade microvascular, seguido pela ades??o e infiltra????o de c??lulas no local da les??o, apoptose celular e crescimento de novos tecidos e vasos sangu??neos. Os nitroestirenos s??o um grupo de compostos constitu??do por anel arom??tico ligado a uma cadeia do grupo nitro (NO2). Eles t??m sido estudados por apresentar diversas atividades biol??gicas tais como anti-apopt??tica, antiplaquet??ria e antimicrobiana, entretanto poucas pesquisas t??m sido realizadas quanto ?? atividade anti-inflamat??ria desses compostos. O objetivo deste estudo foi avaliar atividade anti-inflamat??ria de quatro novos compostos da classe dos nitroestirenos (NPA, 7B, 7D e 7E) em ensaios in vitro/in vivo. Inicialmente, os compostos foram submetidos a ensaio in vitro em modelo de macr??fagos murino ativados por lipopolissacar??deo (LPS) e fibroblastos de pulm??o humano MRC5, a fim de avaliar a capacidade citot??xica desses compostos. Logo em seguida, foram avaliados quanto ?? inibi????o de ??xido n??trico (NO??), dosagem da citocina TNF-?? e avalia????o da express??o de prote??nas envolvidas com o processo inflamat??rio. Para avaliar o processo anti-inflamat??rio agudo in vivo foi realizado ensaios de indu????o do edema por carragenina em peixe Zebrafish e o modelo de pleurisia induzido por LPS em camundongos. Os quatro novos compostos testados apresentaram atividade citot??xica em c??lula J774A.1 e MRC5 quando testados nas concentra????es (3.12-25 ??g/mL). Para THP-1 a atividade citot??xica foi apartir da concentra????o 10 ??g/mL. Todos os compostos inibiram a produ????o de ??xido n??trico em macr??fago ativado por LPS, entretanto somente NPA apresentou uma poss??vel concentra????o-resposta significativa nas concentra????es de 10 e 20 ??g/mL. Este mesmo composto tamb??m reduziu os n??veis de TNF-??, NF-???B e ERK 1/2 em c??lulas THP-1. O NPA tamb??m possivelmente inibiu o edema induzido por carragenina em peixe Zebrafish e a migra????o de leuc??citos na cavidade pleural de camundongos atrav??s da inibi????o das vias de sinaliza????o intracelular NF-???B e ERK 1/2 em ensaios in vivo. Em conclus??o, compostos testados neste estudo nao somente apresentaram atividade citot??xica significativa, como tamb??m demonstraram um excelente potencial anti-inflamat??rio in vitro e in vivo, provavelmente por atua????o de inibi????o das vias NF-???B e ERK 1/2. Os dados obtidos foram importantes para explora????o da atividade biol??gica destes novos compostos e sua poss??vel aplica????o na terap??utica de doen??as inflamat??rias.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. Introdução: O gênero Calea pertence à família Asteraceae e contém cerca de 125 espécies, distribuídas mundialmente em áreas tropicais e subtropicais, sendo que o maior número dessas espécies é registrado no Brasil. Espécies do gênero Calea são popularmente utilizadas para o tratamento de reumatismo, doenças respiratórias e, problemas digestivos. A Calea pinnatifida (C. pinnatifida), popularmente conhecida como ?aruca? e ?cipó-cruz?, é uma planta perene e subarbustiva encontrada principalmente nos estados do sul e sudeste do Brasil, utilizada na medicina popular para o tratamento de dores estomacais, giardíase e amebíase. Embora já existam trabalhos que demonstrem a atividade antiproliferatica e leishmanicida da C. pinnatifida, ainda não existem estudos farmacológicos descritos que tenham avaliado sua atividade anti-inflamatória. Objetivos: Investigar a atividade anti-inflamatória do extrato bruto, frações e compostos isolados das folhas da C. pinnatifida, utilizando um modelo murino de pleurisia induzida pela carragenina. Metodologia: As folhas da C. pinnatifida foram submetidas a um processo de maceração com etanol 92%, para obtenção do extrato bruto etanólico (EB). O EB foi submetido a uma partição líquido/líquido sob agitação manual de forma exaustiva e sucessiva, utilizando os solventes: hexano, clorofórmio e acetato de etila, respectivamente, para obter as frações hexano (Hex), diclorometano (DCM), e acetato de etila (AcOEt), bem como a fração aquosa remanescente, pelo qual foi obtido a fração metanólica (MeOH), a partir de uma cromatografia em coluna, utilizando da resina Amberlite XAD-4 como fase estacionária e metanol como fase móvel. Os compostos foram isolados a partir da fração acetato por métodos cromatográficos e identificados por meio de dados espectroscópicos de infra-vermelho (IV) e ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono treze. A pleurisia foi induzida segundo metodologia descrita por SALEH et al., 1996 e os parâmetros inflamatórios como: migração de leucócitos, exsudação, atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA), concentrações dos metabólitos do óxido nítrico (NOx) e das citocinas pró-inflamatórias, fator de necrose tumoral alpha (TNF-a), interleucina- 1 beta (IL-1ß) e interleucina- 17A (IL-17A), foram avaliados 4 h após a indução da inflamação. Além disso, também avaliou-se a capacidade dos compostos isolados, ácido 3,5-di-O-E-cafeoil quínico (3,5-diACQ) e ácido 4,5-di-O-E-cafeoil quínico (4,5-diACQ), em inibir a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B e p38 MAPK. Para isso, diferentes grupos deanimais foram tratados com EB (25-100 mg/kg), Hex (5-25 mg/kg), DCM (5-25 mg/kg), MeOH (5-25 mg/kg), AcOEt (2,5-25 mg/kg), 3,5-diACQ (1-5 mg/kg) ou 4,5-diACQ (1-5 mg/kg) administrados por via intraperitoneal (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução de Azul de Evans (25 mg/kg) por via intra-venosa (i.v.), 10 min antes da administração de EB, frações e compostos isolados da C. pinnatifida. Ensaios colorimétricos foram utilizados para analisar a atividade das enzimas MPO e ADA, bem como NOx. Testes imunoenzimaticos (ELISA) foram realizados, para determinar as concentrações das citocinas TNF-a, IL-1ß e IL-17A e também para avaliar a fosforilação de p65 (NF-?B) e p38 MAPK. Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinados utilizando análise de variância (ANOVA), complementados pelo teste post-hoc de Newman-Keuls, valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EB (50-100 mg/kg), Hex (10-25 mg/kg), MeOH (10-25 mg/kg), AcOEt (5-25 mg/kg), 3,5-diACQ (2,5-5 mg/kg) e 4,5-diACQ (5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos e exsudação (p < 0,05). EB (50 mg/kg), Hex (10 mg/kg), MeOH (10 mg/kg), AcOEt (5 mg/kg), 3,5-diACQ (2,5 mg/kg) e 4,5-diACQ (5 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, as concentrações de NOx e as citocinas IL-1ß e IL-17A (p < 0,05). EB, AcOEt, 3,5-diACQ e 4,5-diACQ, nas doses citadas acima, diminuiram as concentrações de TNF-a (p < 0,05). Os compostos 3,5-diACQ e 4,5-diACQ, também inibiram a fosforilação da p65 e p38 (p < 0,05). Conclusão: Este estudo demonstrou que a C. pinnatifida possui importante atividade anti-inflamatória, inibindo a migração de leucócitos do tipo neutrófilos, bem como a diminuição da exsudação. Esse efeito provavelmente foi devido a diminuição da concentração de mediadores pró-inflamatórios (TNF-a, IL-1ß e IL-17A e NOx) no lavado pleural e esses efeitos parecem estar relacionados em parte, pela capacidade dos compostos isolados em inibir vias intracelulares importantes envolvidas no processo inflamatório, como o NF-?B e p38 MAPK. Abstract : Introduction: Calea genus belongs to the Asteraceae family and contains about 125 species, distributed worldwide in tropical and subtropical areas, with the largest number of these species is registered in Brazil. Calea species of the genus are commonly used to treat rheumatism, respiratory diseases, and digestive problems. The Calea pinnatifida (C. pinnatifida), popularly known as "aruca" and "cipó-cruz", is a perennial and subshrub plant found mainly in the southern and southeastern Brazil states, used in folk medicine to treat stomach aches, giardiasis and amebiasis. Although there are studies that demonstrate the antiproliferative and leishmanicidal activities of C. pinnatifida, there are no pharmacological studies to describe its anti-inflammatory activity. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory activity of crude extract, fractions and isolated compounds from C. pinnatifida leaves using a murine model of pleurisy induced by carrageenan. Methodology: C. pinnatifida leaves were subjected to a maceration process with ethanol 92% to obtain a crude hydroalcoholic extract (CE). CE was subjected to a liquid/liquid partition under manual exhaustive and successively stirring using hexane, chloroform and ethyl acetate eluents, respectively, to obtain the hexane fractions (Hex), dichloromethane (DCM) and ethyl acetate (EtOAc) as well as the remaining aqueous fraction from which was obtained the methanolic fraction (MeOH), from the use of XAD-4 resin. The compounds were isolated from the EtOAc fraction by chromatographic methods and identified by spectroscopic data of infrared (IR) and nuclear magnetic resonance of hydrogen and carbon thirteen. Pleurisy was induced according to the methodology described by Saleh et al, 1996 and inflammatory parameters such as: Leukocyte migration, exudation, activity of myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), concentrations of nitric oxide metabolites (NOx) and pro-inflammatory cytokines, tumor necrosis factor-alpha (TNF-a), interleukin-1 beta (IL-1ß) and interleukin-17A (IL-17A) were evaluated 4 hours after inflammation induction. In addition, we also evaluated the ability of the isolated compounds, 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid (3,5-diCQA) and 4,5-di-O-E-caffeoylquinic (4,5-diCQA) acid to inhibit the phosphorylation of the NF-?B p65 subunit and p38 MAPK. For this, different groups of animals were treated with CE (25-100 mg/kg) Hex (5-25 mg/kg), DCM (5-25 mg/kg), MeOH (5-25 mg/kg), EtOAc (2.5-25 mg/kg), 3,5-diCQA (1-5 mg/kg) and 4,5-diCQA (1-5 mg/kg) administered by intraperitoneally route (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) administered by intrapleural route (i.pl.). To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue solution (25 mg/kg) administred by intravenous (i.v.) route. Colorimetric assays were used to analyze the MPO and ADA activities, as well as NOx and immunoenzymatic assays (ELISA) to determine the TNF-a, IL-1ß and IL-17A concentrations and also to evaluate the phosphorylation of p65 (NF-?B) and p38 MAPK. The significant differences between groups were determined using analysis of variance (ANOVA) followed by Newman?Keuls post hoc test and the values of p < 0.05 were considered significant. Results: CE (50-100 mg/kg), Hex (10-25 mg/kg), MeOH (10-25 mg/kg), EtOAc (5-25 mg/kg), 3,5-diCQA (2,5- 5 mg/kg) and 4,5-diCQA (5 mg/kg) inhibited: leukocytes, neutrophils, and exudation (p < 0.05). CE (50 mg/kg), Hex (10 mg/kg), MeOH (10 mg/kg), EtOAc (5 mg/kg), 3,5-diCQA (2.5 mg/kg) and 4,5-diCQA (5 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, NOx, IL-1ß and IL-17A concentrations (p < 0.05). At the same dose, only CE, EtOAc, 3,5-diCQA and 4,5-diCQA were able to decrease TNF-a concentrations (p < 0.05). The compounds 3,5-diCQA and 4,5-diACQ also inhibited phosphorylation of p65 and p38 (p < 0.05). Conclusion: This study demonstrated that C. pinnatifida has an important anti-inflammatory activity by inhibiting leukocyte migration, neutrophils and decreased exudation. This effect may be occurred by decrease of the concentration of pro-inflammatory mediators (NOx, TNF-a, IL-1ß and IL-17A) in pleural leakage and these effects appear to be related in part to the ability of the isolated compounds to inhibit important cellular pathways involved in inflammatory process, such NF-?B and p38 MAPK.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. Introdução: O atual e crescente número de compostos derivados de plantas nos mais variados estágios de desenvolvimento, principalmente em estudos clínicos, indica que a investigação científica de produtos naturais é uma fonte viável na pesquisa de novos candidatos a fármacos. Neste contexto, a Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é a principal representante do gênero Ilex e uma espécie nativa da América do Sul, distribuída nas regiões subtropicais e temperadas da Argentina, Paraguai, Uruguai e Brasil. É amplamente usada na medicina popular para tratar artrite, obesidade, fadiga e acometimentos hepáticos e intestinais. Por este motivo, acreditamos que o seu estudo farmacológico merece destaque. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e imunomodulador do extrato bruto padronizado, frações e compostos majoritários da I. paraguariensis, administrados por via oral, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg) em camundongos. Método: Folhas secas e trituradas de I. paraguariensis foram submetidas à turbolização com etanol 20° GL para obtenção do extrato bruto (EB) liofilizado. As frações butanólica (BuOH) e residual aquosa (RAq) foram obtidas por partição com n-butanol. O perfil químico do extrato bruto foi determinado por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) e espectrometria de massas (EM). No modelo da pleurisia, foram utilizados camundongos albinos Swiss fêmeas, 1 mês, 18-25g (PP00965/CEUA/2015). A pleurisia foi induzida de acordo com a metodologia descrita por Saleh e colaboradores (1996). Após 4 horas de pleurisia, o lavado pleural obtido dos animais pré-tratados com EB, BuOH, RAq, cafeína (Caf), rutina (Rut) ou ácido clorogênico (AcCl) foi utilizado para avaliar a migração de leucócitos totais, neutrófilos e quantificação da concentração de exsudato. Em seguida, procedeu-se a avaliação das atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), quantificação da concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), concentração de citocinas pró e anti-inflamatórias (IL-6, IL-17A, IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 e IL-10). O tecido pulmonar também foi coletado e utilizado para avaliação histológica e para avaliar a ação dos compostos majoritários sobre a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p-p65 NF-?B). Diferenças estatísticas foram determinadas por ANOVA complementada por Newman-Keuls onde P Abstract : Introduction: The current and growing number of plant-derived compounds in various stages of development, particularly in clinical trials, indicates that scientific research of natural products is a viable source in the search for new drug candidates. In this context, Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), popularly known as yerba mate, is a representative of the Ilex genus and a native species of South America, distributed in subtropical and temperate regions of Argentina, Paraguay, Uruguay and Brazil. It is widely used in folk medicine to treat arthritis, obesity, fatigue and liver and intestinal affections. For this reason, we believe that its pharmacological study must be highlighted.Objectives: Evaluate the anti-inflammatory and immunomodulatory effects of I. paraguariensis standardized crude extract, fractions and major compounds, orally administered, in the carrageenan (Cg)-induced murine model of pleurisy.Methodology: Dried and crushed leaves were subjected to turbolization process with 20° GL ethanol to obtain freeze-dried crude extract (EB). The butanolic fraction (BuOH) and aqueous residual fraction (RAq) were obtained by partitioning with n-butanol. The chemical profile of extract was determined by ultra performance liquid chromatography (UPLC) and mass spectrometry (MS). The pleurisy model employed female Swiss mice with 1 month, weighing 18-21g (this project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of UFSC - PP00965 / CEUA / 2015). Pleurisy was induced according to the method described by Saleh and coworkers (1996). Four hours after pleurisy, pleural fluids leakage obtained from pretreated animals with EB, BuOH, RAq, caffeine (Caf), rutin (Rut) or chlorogenic acid (AcCl) were used to evaluate the inflammatory parameters: total leukocytes and neutrophils migration, and quantification of exudate concentration. Then, proceeded to the evaluation of myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, measurement of nitric oxide metabolites (NOx) concentration, quantification of pro-and anti-inflammatorycytokines (IL-6, IL-17A IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 and IL-10). The lung tissues of all groups were collected and used for histologic evaluation of leukocyte infiltration and edema, and lung tissues obtained from groups treated only with major compounds were used to evaluate the p65 NF-?B phosphorylation (p-p65 NF-kB). Statistical differences were determined by ANOVA followed by Newman-Keuls post-hoc test. P

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2015. Senecio Brasiliensis Less (S. brasiliensis) popularmente conhecida como "Flor-das-almas", "Margaridinha" ou "Maria mole" é utilizada na medicina popular como um anti-inflamatório, no tratamento de úlcera gástrica e dor de estômago. Embora o gênero Senecio já tenha sido amplamente estudado para avaliar as atividades farmacológicas que suportam seu uso na medicina tradicional, poucos estudos têm avaliado a atividade anti-inflamatória desta espécie. Portanto, objetivo deste estudo foi investigar a atividade anti-inflamatória da S. brasiliensis, uma espécie nativa no Brasil, usando um modelo murino de pleurisia induzida pela carragenina. As flores secas de S. brasiliensis foram maceradas e extraídas com etanol obtendo-se o extrato bruto (CE). As frações acetato de etila (AcOEt), fração rica em alcalóides (AF), hexano (HEX) e diclorometano (DCM) foram obtidas a partir do CE. Senecionina (Sen), integerrimina (Int) e N-óxido senecionina foram obtidas da fração FA, e uma mistura de ácidos x,y-dicafeiolquínicos (1,4-, 3,4-, 3,5- e 4,5-: DCQs) foi obtida da fração AcOEt. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura dos compostos foram utilizadas técnicas de eletroforese capilar, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massa (HPLC/MS). Neste protocolo experimental utilizou-se o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Neste modelo foram estudados os efeitos da S. brasiliensis sobre: migração de leucócitos, atividades da mieloperoxidase (MPO) e adenosina desaminase (ADA) assim como as concentrações do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), interleucina 1-beta (IL-1ß) e interleucina 17A (IL-17A) . Todos estes parâmetros foram analisados no líquido da cavidade pleural, Além disso, foram analisados no tecido pulmonar, os efeitos dos compostos Sen, Int e DCQs, sobre a fosforilação da proteína p65 (p-p65) da via do fator de trancrição nuclear kappa B (NF-?B). Ensaios colorimétricos foram utilizados para analisar MPO e ADA e testes imunoenzimáticos (ELISA) para TNF-a, IL-1ß, IL-17A e a fosforilação da p65. O CE, as frações AcOEt e AF, e/ou os compostos Sen, Int e DCQs inibiram os leucócitos (p < 0.05), a atividade de MPO e ADA (p < 0.01), as concentrações de TNF-a(p < 0.05) e IL-17A (p < 0.01), O CE, as frações AcOEt e AF, e DCQs, também diminuíram as concentrações de IL-1ß (p < 0.01). Os compostos isolados Sen, Int e DCQs inibiram fosforilação da p-65 (NF-?B) (p < 0.05). Este estudo demonstrou que a S. brasiliensis tem uma importante atividade anti-inflamatória pela inibição da migração de leucócitos ativados devido a diminuição de neutrófilos no sítio da inflamação. Este efeito pode ser atribuído a inibição de citocinas pró-inflamatórias e também da ativação da via do NF-?B. Os compostos Sen, Int, e DCQs pode ser, pelo menos em parte, responsáveis pela ação anti-inflamatória da S. brasiliensis. Abstract : Senecio Brasiliensis (Spreng) Less (S. brasiliensis), known as "Flor-das-almas", "Margaridinha" or "Maria mole", is used in folk medicine as an anti-inflammatory and to treat gastric ulcers and stomach pain. While the Senecio genus has been widely studied for its pharmacological activities to support its use in traditional medicine, few studies focus on the anti-inflammatory activities of the species. To investigate the anti-inflammatory activities of S. brasiliensis, a specie native to Brazil, using a murine model of pleurisy induced by carrageenan. The dried flowers of S. brasiliensis were macerated and subjected to ethanol (96%) extration to obtain the crude extract (CE). The ethyl acetate (AcOEt), alkaloid (AF), hexane (HEX) and dichloromethane (DCM) fractions were obtained by extracting the CE with different solvents. Senecionine (Sen), integerrimine (Int) and senecionine N-oxide` and a mixture of dicaffeyoilquinic acids (1,4-, 3,4-, 3,5- and 4,5- dicaffeoylquinic acids, DCQs) were obtained from the AF and AcOEt fractions, respectively. The physical characteristics and column chromatography were used to extract and identify the compounds. Nuclear magnetic resonance (NMR), and gas chromatography?mass spectrometry (GC-MS), and high-performance liquid chromatography-diode array detector (HPLC-DAD) coupled with electrospray mass spectrometry (ESI-MS) (HPLC-DAD-MS/MS) and infrared (IR) spectroscopy were used to identify, elucidate and confirm the structures of the compounds. Swiss mice were used in the in vivo experiments. We evaluated the effect of the CE, its derived fractions (AcOEt, AF, HEX and DCM), and the isolated compounds (Sen, Int, N-oxide senecionine) and DCQs on: leukocyte migration, exudate concentrations, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, and tumour necrosis factor-a (TNF-a), interleukin 1ß (IL-1ß) and interleukin 17A levels in the fluid leakage from the pleural cavity using a mouse model of pleurisy induced by carrageenan. The effects of the isolated compounds, Sen, Int, N-oxide senecionine and DCQs, were also analysed for their ability to inhibit p65 phosphorylation (p-p65) in the nuclear factor-kappa B (NF-?B) pathway in the lung tissue. MPO and ADA were analysed by colorimetric assays, and the cytokines and protein p65 levels were determined using an enzyme immunoassay (EIA). The CE, its AcOEt and AF fractions, and its compounds (Sen, Int and DCQs), significantly reduced leukocyte migration (P < 0.05), MPO and ADA activities (P < 0.01), and TNF-a (P < 0.05), and IL-17A levels (P < 0.01). The CE, the AcOEt and AF fractions, and the DCQs also decreased IL-1ß levels (P < 0.01). The isolated compounds, Sen, Int and the DCQs, inhibited p65 phosphorylation (NF-?B) (P < 0.05). This study demonstrated that S. brasiliensis has important anti-inflammatory properties that are capable of inhibiting activated leukocyte migration by decreasing neutrophil migration. This effect may be attributed to the inhibition of pro-inflammatory cytokines and the reduction of the NF-?B pathway. The compounds Sen Int, and DCQs may be responsible for the anti-inflammatory actions of S. brasiliensis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK. Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p

Allergic diseases affect millions of people and their prevalence has constantly increased in the world every decade. Among the clinical manifestations, the allergic asthma is considered a major public healthy problem due to its number of cases and death records. Currently, these diseases are treated either with glucocorticoids, anti-histamines, mast cell stabilizers or immunomodulators. Although these drugs exert a strong anti-allergic effects, the long-term use may lead to harmful side-effects. Thus, considering the increase of allergic manifestations in the population and the requirement for new therapeutic tools with less side-effects, the discovery of drug of natural origin have been gaining prominence. Among products from natural origin, triterpenes are secondary metabolites and represent the largest group of phytochemicals in many plant species. Pharmaceutical preparations containing this metabolites are used in several countries because of their medicinal properties, which include anti-inflammatory, analgesic, antipyretic, hepatoprotective, cardiotonic effects, among others. Taking into account these information, the aim of this study was to investigate uvaol anti-allergic efficacy in experimental mouse models of allergy triggered by ovalbumin in mice. Firstly, it was found that in a model of the paw edema induced by OVA and histamine, the oral pretreatment with uvaol 1 hour prior to stimulation reduced both edema. Then, using the same treatment protocol, it was found that in the allergic pleurisy model, using a single allergic challenge, the uvaol significantly inhibited leukocyte recruitment, specially eosinophils, 24 h after allergic stimulation. Furthermore, IL-5 also presented a decreased levels in the pleural fluid. Using murine asthma models, with three exposures to the antigen daily for three consecutive days, it was found that oral administration of uvaol 1 h before each allergic stimulation reduced the accumulation of total leukocytes, mainly eosinophils present in the pulmonary parenchyma as well as IL-5 levels present in the inflamed lung tissue. Moreover, was observed that pretreatment with uvaol reduced the production of mucus after stimulus in airways of asthmatic animals. Bronchoalveolar lavage (BAL) of asthmatics animals pretreated with uvaol were evaluated and it was detected a significantly reduction in total cell number and eosinophils, as well as significantly reduced levels of IL-5. However, the pretreatment with uvaol was not able to interfere with the production of reactive oxygen species (ROS) in cells of the bronchoalveolar lavage. Therefore, considering all the data obtained so far, it was demonstrated for the first time that uvaol has a treatment potential of allergic disorders by reducing leukocyte recruitment and IL-5 levels, but not interfering in the generation of reactive oxygen species. Thus, uvaol shows up as a potential therapeutic tool for the treatment of allergic inflammation. Further studies are necessary to understand its molecular mechanism of action. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAL - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Alagoas As respostas inflamatórias de origem alérgica acometem milhares de pessoas em todo mundo, e a prevalência destas doenças na população vem aumentando a cada década. Dentre as manifestações clínicas, a asma alérgica chama a atenção por causa do grande impacto na saúde pública devido ao número de casos e óbitos registrados. Como fármacos disponíveis para a terapêutica destas doenças destacam-se os corticoides, estabilizadores de mastócitos e imunomoduladores. Porém, mesmo sendo de amplo uso pela população, ainda há limitações para estes fármacos, pois o uso prolongado causa diversos efeitos adversos. Assim, considerando a evidências de crescimento das manifestações alérgicas na população, aliado a necessidade de novas ferramentas terapêuticas eficazes e com menos efeitos adversos, a busca por fármacos de origem natural vem ganhando destaque. Dentre os produtos de origem natural os triterpenos são metabólitos secundários que representam o maior grupo de fitoquímicos em várias espécies vegetais. Preparações medicamentosas contendo estes metabólitos são utilizadas em muitos países devido aos amplos efeitos de interesse, incluindo, anti-inflamatório, analgésico, antipirético, hepatoprotetor, cardiotônico, dentre outras. Logo, considerando estas informações objetivou-se neste estudo caracterizar o potencial efeito antialérgico do uvaol em modelos de inflamação alérgica desencadeada por ovalbumina (OVA) em camundongos. Inicialmente, verificou-se que no modelo de edema de pata a resposta edematogênica induzida por OVA ou por histamina foi significativamente reduzida pelo pré-tratamento com o uvaol, por via oral 1 hora antes do estímulo. Em seguida, utilizando o mesmo protocolo de tratamento, verificou-se que no modelo de pleurisia alérgica, utilizando-se um único desafio alérgico, o uvaol inibiu significativamente o recrutamento leucocitário, em especial, os eosinófilos, 24 h após estímulo alérgico. Além disso, os níveis de IL-5 também se mostraram reduzidos no exsudato pleural. Utilizando o modelo animal de asma experimental, com três exposições ao antígeno uma vez ao dia por três dias consecutivos, constatou-se que a administração oral de uvaol 1 h antes de cada estímulo alérgico reduziu o acúmulo total de leucócitos, principalmente os eosinófilos, presente no parênquima pulmonar, bem como os níveis de IL-5 presente no tecido inflamado. Observou-se ainda que o tratamento com uvaol atenuou a produção de muco em células epiteliais brônquicas dos animais asmáticos após estímulo. Ao avaliar o lavado broncoalveolar (BAL) dos animais asmáticos tratados com uvaol notou-se uma redução significativa no número de células totais e eosinófilos, bem como uma redução nos níveis de IL-5. Porém, ao avaliar a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) nos leucócitos provenientes do BAL verificou-se que o tratamento com uvaol não interferiu na produção destas espécies reativas. Portanto, considerando todas as informações obtidas até o momento, demonstrou-se, pela primeira vez, que o uvaol possui potencial para tratamento de manifestações alérgicas por reduzir o recrutamento de leucocitário e geração de IL-5, mas não por interferir na geração de espécies reativas de oxigênio. Deste modo, concluiu-se que, mesmo necessitando de futuros estudos para demonstrar seu mecanismo molecular de ação, o uvaol mostra-se como uma potencial ferramenta terapêutica para tratamento das inflamações alérgicas

Objetivo: Avaliar o valor da punção-biópsia pleural no diagnóstico das doenças inflamatórias da pleura. Métodos: Foi feito um estudo retrospectivo de 82 toracocenteses realizadas durante um período de 42 meses em uma enfermaria de clínica médica no Rio de Janeiro. Os aspectos bioquímicos, citológicos e bacteriológicos do líquido pleural e o exame histopatológico do fragmento pleural foram correlacionados com o diagnóstico final. A sensibilidade, especificidade e os valores preditivos da concentração protéica e da percentagem de linfócitos no líquido pleural foram calculados utilizando diferentes valores de corte. Resultados: Dos 82 pacientes, 73 (89%) tinham tuberculose. Todos os pacientes com menos de 35 anos tinham tuberculose. O valor preditivo negativo para o diagnóstico de tuberculose aumentou de 17,1% para 66,7% utilizando 4,5g/dL e 2,5g/dL, respectivamente, como valores de corte para a concentração de proteínas no líquido pleural. O valor preditivo negativo do achado de 70% de linfócitos no líquido pleural foi de 100% e o seu valor preditivo positivo, de 94,2%. A pesquisa de BAAR no líquido pleural foi negativa nas 82 amostras. A sensibilidade do exame histopatológico da pleura foi de 69,2% para o diagnóstico de tuberculose. Conclusões: A tuberculose foi a causa mais comum de derrame pleural em todas as faixas etárias. O exame que mais contribuiu para confirmar este diagnóstico foi a análise histopatológica. Os autores sugerem que a punção pleural e a biópsia sejam realizadas simultaneamente nas populações em que a tuberculose tenha alta prevalência.Objective: To evaluate the efficacy of thoracentesis and pleural biopsy in the diagnosis of pleural inflammatory diseases. Methods: A retrospective study of 82 thoracenteses performed over a 42-month period in an internal medicine ward in Rio de Janeiro was conducted. Biochemical, cytological, and microbiological features of the pleural effusion, as well as the histopathological examination of the pleural tissue, were analyzed according to the final diagnosis. The sensitivity, sensibility, and predictive efficacy in the diagnosis of tuberculosis were calculated using different cut-off values of protein concentration and lymphocyte percentage. Results: Of the 82 patients, 73 (89%) had tuberculosis. This was the only diagnosis among patients aged 35 years or less. The negative predictive value (PV) raised from 17.1% to 66.7% when 4.5 and 2.5 g/dl, respectively, were used as cut-off values for protein concentration in the pleural fluid. Using 70% as the cut-off value for lymphocyte percentage in pleural fluid, negative PV was 100% and positive PV was 94.2%. Acid fast bacilli staining of the pleural fluid was negative in all samples. The sensitivity of the histopathological examination of the pleural tissue was 69.2% for the diagnosis of tuberculosis. Conclusions: Tuberculosis was the most common cause of pleural effusion in all age groups. Histopathological examination had the highest sensitivity to confirm tuberculosis. The authors suggest that, in populations with a high prevalence of tuberculosis, pleural tissue biopsy should be performed simultaneously with thoracentesis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. A Polygala molluginifolia é uma planta nativa do sul do Brasil popularmente chamada de cânfora. Plantas do gênero Polygala têm sido usadas na medicina tradicional para o tratamento de diferentes patologias, inclusive doenças inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto, frações e compostos obtidos da espécie Polygala molluginifolia (Polygalaceae) no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. O material vegetal da Polygala molluginifolia foi submetido a extração por maceração com etanol 96% para a obtenção do extrato bruto (EB). O EB foi submetido a procedimentos cromatográficos em silica gel para a obtenção de diferentes frações, dentre elas as frações aquosa (Aq), acetato de etila (AcOEt) e hexano (Hex). O composto 1 (5,3',4'-trihidroxi-6",6"-dimetilpirano [2",3":7,6] isoflavona) (Iso), foi isolado da fração AcOEt e o composto 2 (Rutina) (Rut), foi isolado da fração Aq e foram identificados por meio de espectroscopia de 1H e 13C NMR e quantificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). A avaliação do efeito anti-inflamatório foi realizada por meio da contagem de leucócitos, neutrófilos e concentrações de exsudato. Foram utilizadas técnicas padronizadas descritas na literatura para verificar a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA) e concentrações de nitrito/nitrato (NOx). Neste estudo também foi investigado o efeito da Polygala molluginifolia sobre a concentração e expressão do RNA mensageiro das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) e interleucina-1 beta (IL-1?), utilizando as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR) e sobre a via de sinalização do fator nuclear kappa B (NF-kB), mais especificamente sobre a fosforilação da subunidade p65. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Para todos os experimentos, a dexametasona (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. A análise estatística utilizada foi o teste de variância ANOVA, complementado pelo teste de Neuman-Keuls, e quando necessário, foram realizados teste t de Student e correlação de Pearson. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EB, as as frações Aq, AcOEt e Hex, além dos compostos Iso e Rutina, foram capazes de reduzir a migração de leucócitos, as custas de neutrófilos e a exsudação formada na cavidade pleural (p < 0,05), além das atividades de: MPO (p < 0,01), ADA (p < 0,001). As concentrações de NOx também foram inibidas (p < 0,001), exceto quando os animais foram tratados com a rutina. Além disso, houve redução na concentração da TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001). Os compostos isolados (Iso e Rutina) foram capazes de inibir a transcrição do RNAm do TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001) além de reduzir significamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-kB (p < 0,001). Finalmente, foi verificada uma correlação positiva entre a inibição na migração celular e exsudação com a capacidade de ambos compostos em reduzir a fosforilação da p65. Os resultados demonstraram que a P. molluginifolia tem importante ação anti-inflamatória e este efeito é devido, pelo menos em parte, a presença de Iso e Rutina. Além disso, esse efeito parece estar relacionado a capacidade dos compostos isolados interferirem na via de sinalização do NF-kB. Abstract : The Polygala molluginifolia is a plant native to southern Brazil that is popularly called "canfora". This study was conducted to investigate the anti-inflammatory activity of Polygala molluginifolia (Polygalaceae) on the mouse pleurisy model induced by carrageenan. The whole Polygala molluginifolia plant material was extracted by maceration with 96% ethanol. The crude hydroalcoholic extract (CE) was subjected to chromatographic procedures to produce derivate fractions, including aqueous (Aq), ethyl acetate (AcOEt), and hexane (Hex) fractions. Compound 1 (5,3',4'-trihydroxy-6?,6?-dimethylpyrano [2?,3?:7,6] isoflavone) (Iso), which was isolated from the AcOEt fraction, and Compound 2 (Rutin) (Rut), which was isolated from the Aq fraction, were identified using 1H and 13C NMR spectroscopy and quantified using an HPLC apparatus. In this experimental protocol, swiss mice were used in the murine carrageenan-induced pleurisy model previously described by Saleh et al. (1996). The anti-inflammatory effect was evaluated by total leukocyte and neutrophil count, exsudate concentration, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, nitrite/nitrate concentrations (NOx), concentrations and mRNA expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-?? and interleukin 1-beta (IL-1). In addition, we studied the effect of Polygala molluginifolia isolated compounds on the nuclear factor kappa B (NF-?B). The inflammatory parameters were evaluated 4 hours after pleurisy induction. Dexamethasone (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) was used as reference anti-inflammatory drug. For statistical analysis were used the variance test (ANOVA), complemented by Newman-Keuls and when required, Student's t test and Pearson's coeficient. p < 0.05 was considered significant. The CE, Aq, AcOEt, and Hex fractions, and the isolated compounds Iso and Rut were able to reduce cell migration and exudation (p < 0.05). Furthermore, the plant material also decreased the MPO (p < 0.01) and ADA (p < 0.001) activities and the nitric oxide (NOx) (p < 0.001), TNF-a (p < 0.001), and IL-1ß (p < 0.001) levels. In addition, Iso and Rut reduced the TNF-a (p < 0.01) and IL-1ß (p < 0.001) mRNA expression levels and significantly decreased NF-?B p65 phosphorylation (p < 0.001). Finally, was observed a positive correlation on leukocyte migration and exudate levels with inhibition upon p65 phosphorilation. The results show that P. molluginifolia has a significant anti-inflammatory action and that this effect is due, at least in part, to the presence of Iso and Rut in large amounts. Moreover, this effect was found to be closely related to the inhibitory effects of the isolated compounds on the NF-kB pathway.

Os receptores ativados por proteases (proteinase-activated receptor, PAR) fazem parte de uma família de receptores acoplados à proteína G que são ativados por serino-proteases através da clivagem proteolítica de uma sequência específica de aminoácidos em sua porção N-terminal. Sua ativação vem sendo associada à regulação de diferentes fenômenos inflamatórios. Estes receptores foram classificados de 1 a 4 por ordem de descoberta apresentando similaridade estrutural mas, também possuem diferenças no grupamento N-terminal e da serino-protease responsável pela clivagem. PAR-2 é expresso nas vias aéreas, no epitélio, endotélio e músculo liso do tecido pulmonar, fibroblastos da traqueia e brônquios, e células inflamatórias tais como mastócitos e eosinófilos. Nos últimos anos, estudos têm demonstrado o envolvimento de PAR-2 no recrutamento e na ativação de leucócitos, no entanto, embora existam na literatura alguns estudos mostrando a presença e ativação de receptores PAR-2 em eosinófilos, ainda não estão bem esclarecidos os mecanismos moleculares envolvidos na sinalização desencadeada pela ativação deste receptor pelos seus respectivos agonistas. Nosso objetivo foi avaliar o papel do PAR-2 para o recrutamento de eosinófilos em pleurisia experimental, bem como a participação da triptase de mastócitos e a importância de sua inibição para este fenômeno. Os protocolos experimentais foram aprovados pelo comitê de ética animal (CEUA/UFMG, 193/2012). Após realização do protocolo de tratamento os animais foram sacrificados em câmara de CO2, e o lavado pleural foi coletado para posteriores análises nos tempos adequados. As análises estatísticas utilizadas foram: One-Way ANOVA seguido do pós-teste de Newman-Keuls para as análises de migração celular e Students t test para as análises de western blotting. A injeção intrapleural (i.pl.) em camundongos BALB/c naive com agonista seletivo de PAR-2 SLIGRL-NH2 (30 g), ou triptase de mastócitos (300 ng) ou ovalbumina (1 g), em animais previamente sensibilizados para este antígeno, induziu recrutamento de eosinófilos para a cavidade pleural destes animais. Sendo assim, camundongos foram injetados por via i.pl. com antagonista seletivo de PAR-2 ENMD1068 (3 g) 15 minutos antes da injeção i.pl. de OVA (OVA; 1 g), em camundongos imunizados, ou com triptase de mastócitos (300 ng) ou eotaxina-1 (100 ng) em camundongos naive para estudar o papel de PAR-2 no recrutamento de eosinófilos. O ENMD1068 inibiu a eosinofilia induzida por OVA (97%), por triptase (87%) como também por eotaxina-1 (61%), o que sugere a participação da ativação de PAR-2 no recrutamento de eosinófilos induzido por estes estímulos. De outra forma, em camundongos tratados com triptase (300 ng) foi avaliada a expressão de PAR-2 por western blotting 4, 8, 24 e 48 horas após o estímulo i.pl. demonstrando aumento da expressão do receptor 24 e 48 horas após o tratamento quando comparados aos respectivos controles, em leucócitos obtidos do lavado pleural. Além disso, testes de imuno-citoquímica demonstraram co-localização do receptor PAR-2 na membrana e citoplasma de eosinófilos e células mononucleares 24 e 48 horas após desafio i.pl. com triptase. Uma vez demonstrada a participação do PAR-2 no recrutamento de eosinófilos induzido pela triptase, foi avaliada a importância da triptase endógena para o recrutamento de eosinófilos no modelo de pleurisia, e o pré-tratamento com APC366 (5 mg/kg) via um inibidor seletivo de triptase, diminuiu o recrutamento de eosinófilos induzido pelo SLIGRL-NH2 (30 g) ou eotaxina-1 (100ng). Em conclusão, nossos resultados sugerem um papel de PAR-2 e de sua ativação no controle do recrutamento de eosinófilos, e consequentemente para o desenvolvimento da resposta inflamatória na cavidade pleural. O presente estudo contribui para o entendimento dos mecanismos envolvidos na eosinofilia, sugerindo uma nova estratégia terapêutica para o seu controle, através do bloqueio de PAR-2. Suporte financeiro: CNPq/CAPES/ FAPEMIG. Proteinase-activated receptors (PAR) are part of a family of G-protein-coupled receptors that are activated by serine proteases via proteolytic cleavage of a specific sequence of amino acids in N-terminal portion, and its activation has been associated with the regulation of different inflammatory phenomena. These receptors were classified from 1 to 4 by order of discovery, have structural similarities but also have differences in the group N-terminal and the serine-protease responsible for cleavage. PAR-2 is expressed in the airways, the epithelium, endothelium and smooth muscle tissue of the lung, trachea and bronchial fibroblasts and inflammatory cells such as mast cells and eosinophils. In recent years, studies have shown the involvement of PAR-2 in the recruitment and activation of leukocytes, however, although there are few studies in the literature showing the presence and activation of PAR-2 in eosinophils, the mechanisms involved in molecular signaling triggered by activation of this receptor by their respective agonists are not well understood. Our objective was to evaluate the role of PAR-2 in the control of eosinophil recruitment in experimental pleurisy, as well as the participation of mast cell tryptase and its importance in inhibiting this phenomenon. The experimental protocols were approved by the animal ethics committee (CEUA / UFMG, 193/2012). After the treatment protocol, mice were sacrificed in a CO2 chamber, and pleural lavage was collected for further analysis in the proper times. One-Way ANOVA followed by Newman-Keuls post-test was used for analysis of cell migration and Student's t test for analysis of western blotting. Intrapleural (i.pl.) injection in naive BALB/c mice with selective agonist of PAR-2 SLIGRL-NH2 (30 g), or mast cell tryptase (300 ng) or ovalbumin (OVA; 1 g) in animals previously sensitized to this antigen, induced eosinophil recruitment into the pleural cavity of these animals. Thus, mice were injected i.pl. with selective antagonist of PAR-2 ENMD1068 (3 g) 15 minutes before the i.pl. injection OVA (1g) in mice immunized; or with mast cell tryptase (300 ng) and eotaxin-1 (100 ng) in naive mice to study the role of the PAR-2 in the recruitment of eosinophils. The ENMD1068 inhibited eosinophilia induced by OVA (97%), by tryptase (87%), and also by eotaxin-1 (61%), suggesting the involvement of PAR-2 activation in the recruitment of eosinophils induced by these stimuli. Otherwise, in mice treated with tryptase (300 ng) we evaluated receptor expression 4, 8, 24 and 48 hours after stimulation i.pl., using western blotting. The results demonstrated increased receptor expression 24 and 48 hours after treatment compared to their respective controls in leukocytes obtained pleural lavage. Furthermore, immuno-histochemical tests have demonstrated co-localization of the receptor PAR-2 in the membrane and cytoplasm of eosinophils and mononuclear cells 24 and 48 hours after i.pl. challenge with tryptase. Once demonstrated the involvement of PAR-2 in eosinophil recruitment induced by tryptase we evaluated the importance of endogenous tryptase to the recruitment of eosinophils in the pleurisy model, and the pre-treatment with APC366 (5 mg/kg), a selective inhibitor of tryptase, decreased the recruitment of eosinophils induced by SLIGRL-NH2 (30 g) and eotaxin-1 (100 ng). In conclusion, our results suggest a role of PAR-2 activation in the control of eosinophils recruitment and thus in the development of the inflammatory response in the pleural cavity. The present study contributes to the understanding of the mechanisms involved in eosinophilia, suggesting the blockage of PAR-2 as a new therapeutic strategy for its control. Financial support: CNPq/CAPES/ FAPEMIG.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2012 Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende aproximadamente 30 espécies identificadas, nativas de regiões tropicais, tais como México e Brasil, incluindo principalmente os Estados brasileiros de São Paulo, Bahia, Minas Gerias, Goiás e Mato Grosso do Sul. Estudos in vivo e in vitro demonstraram que plantas deste gênero apresentam propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As cascas secas da E. leiocarpa Engl. foram maceradas e extraídas com etanol para obter o EBH. A partir deste extrato, foram obtidas as frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), aquosa (Aq) e alcaloídica (Alc), sendo que esta última fração foi extraída com éter etílico originando duas subfrações: uma alcaloídica polar (AlcP) e outra apolar (AlcAp). O composto majoritário, o alcaloide indólico dihidrocorinanteol (DHC), foi isolado da subfração AlcAp. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura do composto majoritário presente na E. leiocarpa Engl., foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C) e espectrometria de massas. Em outro protocolo, o composto isolado identificado foi modificado por reações de substituição nucleofílica, originando os análogos acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, que foram utilizados em um estudo de relação estrutura-atividade, avaliando-se o efeito destes compostos sobre leucócitos, exsudação e atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). No modelo da pleurisia induzida pela carragenina, foram utilizados camundongos albinos Swiss e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas MPO e adenosina-deaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina 1-beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBH (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alc (1 - 10 mg/kg), AlcP (0,5 - 5 mg/kg), AclAp (0,1 - 2 mg/kg) ou DHC (0,1 - 0,5 mg/kg), administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), Newman-Keuls e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Além disso, realizou-se também o estudo de toxicidade do EBH por meio da análise da curva de sobrevida. Neste estudo, diferentes grupos de animais receberam diferentes doses do EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg e 1000 mg/kg, i.p.) e o número de óbitos foi observado diariamente, durante dez dias. Resultados: EBH da E. leiocarpa Engl. (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alc (5 - 10 mg/kg), AlcP (1 - 5 mg/kg), AlcAp (0,5 - 2 mg/kg) e DHC (0,25 - 0,5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (P < 0,05). Da mesma forma, EBH (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 ou 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), AlcP (1 ou 2 mg/kg), AlcAp (0,5 mg/kg) e DHC (0,25 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, além das concentrações de NOx, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). Em relação à toxicidade, observou-se que a dose de 250 mg/kg demonstrou-se segura, pois resultou em 100% de sobrevida dos animais após 10 dias de observação, enquanto que nas doses de 500 e 1000 mg/kg todos os animais morreram no primeiro dia. Observou-se também que o composto DHC apresentou melhor efeito anti-inflamatório do que seus análogos: acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, uma vez que somente o DHC inibiu ambos os parâmetros inflamatórios estudados: leucócitos e exsudação (P < 0,01). Além disso, os análogos do DHC inibiram a atividade da MPO (P < 0,01). Conclusões: Os resultados demonstraram que: 1) E. leiocarpa Engl. possui importante atividade anti-inflamatória; 2) este efeito ocorre principalmente em relação à inibição da migração leucocitária e da exsudação; 3) a inibição destes parâmetros inflamatórios está relacionada também à inibição de NOx, IL-1? e TNF-?; 4) a inibição da atividade da MPO e ADA está relacionada a diminuição de leucócitos ativados; 5) as doses utilizadas nos experimentos parecem ser seguras; 6) o DHC foi mais efetivo do que os seus análogos neste modelo de inflamação, e as alterações físico-químicas promovidas no DHC, após a inserção dos substituintes acetil, p-metilbenzoil, benzoil, p-metoxibenzoil e p-clorobenzoil na hidroxila do carbono 17, determinam a efetividade do efeito anti-inflamatório. Abstract : Introduction: Esenbeckia genus (Rutaceae) includes approximately 30 species native from tropical regions such as Mexico and Brazil, mainly in the Brazilian states of Sao Paulo, Bahia, Minas Gerais, Goias and Mato Grosso do Sul. Studies using in vivo and in vitro models have demonstrated that plants of this genus have anti-inflammatory properties. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions and compounds isolated from Esenbeckia leiocarpa Engl., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The dried E. leiocarpa Engl. bark was macerated and extracted with ethanol to obtain the CHE. The n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), aqueous (Aq) and alkaloids (Alk) fractions were obtained from CHE, and two alkaloid subfractions, polar (polar Alk) and nonpolar (nonpolar Alk) were obtained from the Alk fraction using an ethyl ether extraction. The major compound, the indole alkaloid dihydrocorinantheol (DHC) was isolated from nonpolar Alk subfraction. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and mass spectrometry were used to identify and elucidate the structure of the major compound present in the E. leiocarpa Engl. In another protocol, the isolated compound was subjected to chemical structural modifications by nucleophilic substitution reactions to develop the acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro analogs, which were used in a study of structure-activity relationships to evaluate the effect of these compounds upon leucocytes and exudation concentrations and myeloperoxidase (MPO) activity. Swiss mice were used in the carrageenan-induced murine model of pleurisy and the following inflammatory parameters were evaluated the fluid of the pleural cavity: leukocytes, exudation, MPO and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-1 beta (IL-1â) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-á). In this study, different groups of animals were pretreated with CHE (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alk (1 - 10 mg/kg), polar Alk (0.5 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.1 - 2 mg/kg) or DHC (0.1 - 0.5 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), Newman-Keuls and/or Student#s t test. P < 0.05 was considered significant. Further, the toxicity study of CHE we performed by analyzing the survival curve. In this study, different groups of animals received different doses of EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg and 1000 mg/kg, i.p.) and the number of deaths was observed daily for 10 days. Results: CHE (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alk (5 - 10 mg/kg), polar Alk (1 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 - 2 mg/kg) and DHC (0.25 - 0.5 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (P < 0.05). Also, CHE (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 or 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), polar Alk (1 or 2 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 mg/kg) and DHC (0.25 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, and the concentrations of NOx, IL-1â and TNF-á (P < 0.05). In relation to toxicity, it was observed that the dose of 250 mg/kg of CHE was safe because its administration resulted in 100% survival of the animals after 10 days, whereas at the doses of 500 mg/kg and 1000 mg/kg all animals died in the first day of observation. Furthermore, the DHC alkaloid showed better anti-inflammatory effect than its analogs: acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro, because only the DHC inhibits both studied inflammatory parameters: leukocytes and exudation concentrations (P < 0.01). Further, the DHC analogs inhibited MPO activity (P < 0.01). Conclusions: The results showed that: 1) E. leiocarpa Engl. has important anti-inflammatory activity; 2) this effect occurs mainly in relation to inhibition of leukocyte migration and exudation concentrations; 3) the Inhibition of these inflammatory parameters is also related to NOx, IL-1â and TNF-á inhibition; 4) the inhibition of MPO and ADA activities are associated with decrease of activated leukocytes; 5) the doses used in the experiments of this study appear to be safe; 6) DHC was more effective than its analogs in this model of inflammation, and the physicochemical modifications in the DHC after insertion of the acetyl, p-methylbenzoyl, benzoyl, p-methoxybenzoyl and p-chlorobenzoyl substituents radicals on the hydroxyl group at carbon 17 determine the effectiveness of the anti-inflammatory action.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2013 Introdução: A Croton antisyphiliticus Mart., conhecida popularmente como canela-de-perdiz ou curraleira, é uma planta arbustiva do cerrado brasileiro, encontrada principalmente no estado de Minas Gerais. A medicina popular descreve o uso desta espécie no tratamento da sífilis, inflamação, lesões ulcerativas, eczemas e reumatismos. Objetivo: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto, frações e compostos isolados obtidos da espécie Croton antisyphiliticus Mart. (Euphorbiaceae), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina (Cg), em camundongos. Metodologia: Partes aéreas da Croton antisyphiliticus foram secas, maceradas e submetidas o processo de extração com etanol 96%, para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). Através de uma extração líquido-líquido, o EBH foi fracionado com o uso de diferentes solventes de polaridade crescente em: hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt) e aquosa (Aq). A fração Aq foi cromatografada em coluna de sílica gel, fornecendo 2 compostos: vitexina (VT) e ácido quínico (AcQ). Nesse estudo, foram utilizados camundongos albinos Swiss, fêmeas (18-22 g), os quais foram submetidos ao modelo experimental da pleurisia induzida pela Cg. No protocolo experimental, os animais receberam injeção endovenosa do corante Azul de Evans (25 mg/kg), para análise indireta da exsudação. Em seguida, diferentes grupos de animais foram tratados com o material vegetal (EBH, frações ou compostos isolados), 0,5 h antes da indução da pleurisia com uma injeção intrapleural de Cg (1%). Após 4 h de pleurisia, avaliou-se o efeito do EBH, das suas frações: Hex, AcOEt e Aq, bem como dos composto isolados: VT e AcQ, obtidos das partes aéreas da Croton antisyphiliticus, sobre a migração de leucócitos, exsudação, mieloperoxidase (MPO), adenosina-deaminase (ADA), metabólitos de óxido nítrico (NOx), fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?) e interleucina-17 (IL-17). A análise estatística utilizada foi o teste de variância ANOVA, complementado pelo teste de Newman-Keuls. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EBH, Hex, AcOEt, Aq, VT e AcQ inibiram: migração de leucócitos (neutrófilos), exsudação, atividade da MPO e ADA, e diminuíram as concentrações de NOx, TNF-? e IL-17 (P < 0,05). Entretanto, o AcQ não inibiu a secreção de TNF-? e IL-17 (P > 0,05). Conclusão: Este estudo demonstrou que a Croton antisyphiliticus Mart. apresentou importante efeito anti-inflamatório, sendo a sua fração Aq, entre as frações avaliadas, a mais efetiva em diminuir a inflamação, o qual parece estar relacionado com a inibição da migração de leucócitos, principalmente os neutrófilos ativados, haja vista a capacidade da planta em reduzir a atividade das enzimas MPO e ADA. O material vegetal estudado também foi capaz de reduzir a concentração de mediadores pró-inflamatórios como: NOx, TNF-? e IL-17. Essa redução pode estar relacionada com a diminuição do recrutamento celular e extravazamento vascular para o sítio inflamatório, promovidos pelos compostos isolados, a VT e o AcQ. Abstract : Introduction: Croton antisyphiliticus Mart. is popularly named as canela-de-perdiz or curraleira. It is a shrub plant found in the Brazilian savanna, mainly in the state of Minas Gerais. The folk medicine describes the use of this species in the treatment of syphilis, inflammation, ulcer, eczemas and rheumatisms. Objective: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract, its fractions and isolated compounds obtained from the aerial parts of Croton antisiphyliticus Mart., in the carrageenan-induced pleurisy model. Methodology: Aerial parts of the plant were dried, macerated and extracted with ethanol 96% to obtain the crude hydroalcoholic extract (CHE), which was partitioned with solvents of increasing polarity to obtain 3 fractions: hexane (Hex), ethyl acetate (EA) and aqueous (Aq). The Aq fraction was chromatographed on silica gel column and resulted in 3 isolated compounds: vitexin (VT) and quinic acid (QA). Swiss mice, female (18-22 g), were used in the murine carrageenan-induced pleurisy model. In this experimental protocol, animals received a previous injection of Evans Blue Dye (25 mg/kg) intravenous, in order to evaluate the exudate concentration. Then, different groups of animals were pre-treated, by intraperitoneal route (i.p.), with the vegetable products obtained from Croton antisyphiliticus (CHE, its fractions and isolated compounds), 0.5 h before pleurisy induction with an intrapleural (i.pl.) injection of carrageenan (Cg: 1%). The anti-inflammatory effect of CHE, its fractions (Hex, EA and Aq) and isolated compounds (VT and QA) was investigated upon: leukocyte migration (neutrophyls), exudation, myeloperoxidase (MPO), adenosine-deaminase (ADA), nitric oxide metabolities (NOx), tumoral necrosis factor- alpha (TNF-á) and interlekin-17 (IL-17). It was used to statistical analysis the variance test of ANOVA, which was complemented by Newman-Keuls test. Values of P < 0.05 were considered significant. Results: CHE, Hex, EA, Aq, VT and QA inhibited leukocyte migration (neutrophils), exudation, and decreased MPO and ADA activities, as well as NOx, TNF-á and IL-17 levels (P < 0.05). Although QA had inhibited those inflammatory parameters, it did not decrease the concentration of TNF-á and IL-17 (P > 0.05). Conclusion: This study demonstrated the anti-inflammatory effect of Croton antisyphiliticus Mart. may be related to the inhibition of leukocyte migration, mainly activated neutrophils, since this plant is capable to reduce the activity of enzymes that is related to neutrophil activation (MPO and ADA). The extracted vegetable products obtained from this plant also decreased the levels of pro-inflammatory mediators, such as: NOx, TNF-á and IL-17. Among the analyzed fractions, Aq fraction performed the best anti-inflammatory effect, which may be associated with its isolated compounds, VT and AcQ, in the inhibition of leukocyte recruitment and vascular fluid leakage in the inflammatory site.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. Introdução: Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), conhecida como alecrim, é uma planta nativa da região mediterrânea e atualmente é cultivada em várias partes do mundo, incluindo o Brasil. Esta planta é empregada na medicina popular para o tratamento de doenças inflamatórias como a asma brônquica. Além disso, estudos têm demonstrado que esta planta possui atividades antimicrobiana, antioxidante, anti-inflamatória, hipoglicemiante, hepatoprotetora, antiplaquetária, antinoceptiva e antiviral. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto sem óleo (EBSO), frações e compostos isolados de R. officinalis L., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As partes aéreas frescas de R. officinalis L. foram submetidos às técnicas de extração por arraste de vapor para retirada dos óleos essenciais e de maceração em etanol 96%, para obtenção do extrato bruto sem óleo (EBSO). Este extrato foi particionado com hexano, acetato de etila e etanol para obter as frações hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt) e etanólica (EtOH) ambas sem óleos essenciais. Os compostos isolados, Carnosol (CAR) e Ácido rosmarínico (RA), foram isolados da fração AcOEt e EBSO, respectivamente. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura dos compostos isolados desta planta foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C). Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos Swiss. A pleurisia foi induzida segundo metodologia descrita por SALEH et al., 1996 e, foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina-17A (IL-17A) e interleucina-10 (IL-10), além do RNAm para IL-17A e IL-10. Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBSO (10 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), EtOH (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), CAR (1 - 10 mg/kg) ou RA (2,5 - 10 mg/kg) administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), e complementadas pelo teste Dunett e/ou teste t de Student. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: EBSO (50 - 100 mg/kg), HEX (25 - 50 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), CAR (2,5 - 10 mg/kg) e RA (5 - 10 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (p < 0,05). Da mesma forma, EBSO (50 mg/kg), HEX (25 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 mg/kg), CAR (2,5 mg/kg) e RA (5 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, as concentrações de NOx, as concentrações/RNAm para IL-17A, além de aumentar as concentrações/RNAm para IL-10 (p < 0,05). Conclusões: Os resultados demonstraram que a Rosmarinus officinalis L. possui importante atividade anti-inflamatória isto devido principalmente à redução do influxo de leucócitos e da exsudação. Este efeito parece ser em parte mediado pela inibição da liberação e/ou produção de mediadores pró-inflamatórios (NOx, IL-17A) e aumento da liberação e/ou produção de mediadores anti-inflamatórios (IL-10), incluindo a modulação da expressão do RNAm. Ainda, o carnosol e o ácido rosmarínido, parecem ser, em parte, responsáveis pelo efeito anti-inflamatório apresentado pela Rosmarinus officinalis L. Abstract : Introduction: Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), known as rosemary, is a native plant from Mediterranean region, which is currently cultivated in many parts of the world, including Brazil. This plant is widely used in folk medicine to treat inflammatory diseases, such as bronchial asthma. Furthermore, studies have demonstrated that this plant has antimicrobial, antioxidant, anti-inflammatory, hypoglycemic, hepatoprotective, antiplatelet, antinociceptive and antiviral activities. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude extract oil free (EBSO), fractions and isolated compounds from R. officinalis L., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The fresh R. officinalis L. aerial parts were underwent extraction through the steam technique to remove the essential oils and maceration with ethanol 96%, to obtain the crude extract oil free (EBSO). This extract was partitioned with hexane, ethanol and ethyl acetate solutions to obtain the hexane (HEX), ethyl acetate (AcOEt) and ethanol (EtOH) fractions, both with essential oils free. The isolated compounds, carnosol (CAR) and rosmarinic acid (RA) were isolated from the AcOEt fraction and EBSO respectively. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) were used to identify and elucidate the structure of the isolated compounds present in the R. officinalis L. Swiss mice were used throughout the experiments. Pleurisy was induced according to the methodology described by SALEH et al., 1996 and, the following inflammatory parameters were evaluated in the fluid leakage of the pleural cavity: leukocytes, exudation, myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-17A (IL-17A), and interleukin-10 (IL-10), and mRNA for IL-17A and for IL-10. In this study, different groups of animals were pretreated with EBSO (10 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), EtOH (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), CAR (1 - 10 mg/kg) or RA (2.5 - 10 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), and supplemented by test Dunett and/or Student's t test. p < 0.05 was considered significant. Results: EBSO (50 - 100 mg/kg), HEX (25 - 50 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), CAR (2.5 - 10 mg/kg) and RA (5 - 10 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (p < 0.05). Also, EBSO (50 mg/kg), HEX (25 mg/kg), EtOH (50 mg/kg), AcOEt (25 mg/kg), CAR (2.5 mg/kg) and RA (5 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, concentrations of NOx, concentration/mRNA for IL-17A, and increased concentration/mRNA for IL-hj10 (p

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito anti-inflamatório da Lotus corniculatus no modelo de pleurisia induzida por bradicinina, em camundongos. Materiais e métodos: As partes aéreas da L. corniculatus var. São Gabriel foram secas ao ar e cortadas. Ao material obtido foi adicionado etanol 96% para obter o extrato bruto hidroálcoólico (CE). Este foi fracionado por partição líquido-líquido utilizando hexano, acetato de etila, n-butanol e água, em ordem crescente de polaridade, resultando nas frações hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt), butanol (BuOH), e aquosa (Aq). Os compostos 1 e 2 foram isolados das frações HEX e AcOEt por meio de coluna cromatográfica de sílica gel, e identificados como ácido oleanólico e canferitrina. Camundongos albinos suíços foram utilizados nos experimentos e a pleurisia foi induzida por bradicinina (BK), de acordo com metodologia descrita por Saleh et al. (1997). Inicialmente, diferentes grupos de animais foram tratados com diferentes doses de CE (25-200 mg/kg), HEX (5-25 mg/kg), AcOEt (5-25 mg/kg), BuOH (5-25 mg/kg), Aq (5-25 mg/kg), ácido oleanólico (1-5 mg/kg), ou canferitrina (1-10 mg/kg), 0,5 h antes da indução por BK. Os parâmetros inflamatórios (leucócitos, exsudação, atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA), e concentrações de nitrato/nitrito (NOx) e interleucina-17A (IL-17A)) foram avaliados 4 h após a indução da pleurisia. Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela analise de variância (ANOVA), complementadas quando necessário, com Dunnett ou teste t de Student. Valores de p < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: o CE, suas frações e compostos isolados inibiram significativamente os leucócitos, a exsudação, a atividade das enzimas MPO e ADA, assim como as concentrações de NOx e IL-17A (p < 0,05). Conclusão: A L. corniculatus apresentou importante efeito anti-inflamatório, principalmente pela inibição do influxo de leucócitos e exsudação causada pela BK. Este efeito parece ser em parte mediado pela inibição das enzimas MPO e ADA, e dos mediadores NO e IL-17A. Além disso, os compostos ácido oleanólico e canferitrina parecem ser responsáveis, em parte, pelo efeito anti-inflamatório observado.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 A Rosmarinus officinalis L. (Laminaceae), conhecida como alecrim, é uma planta nativa da região mediterrânea, que atualmente é cultivada em várias partes do mundo, inclusive no Brasil. Esta planta é utilizada na medicina popular para o tratamento de doenças inflamatórias como a asma brônquica. Além disso, estudos já demonstraram que seus constituintes possuem atividade anti-inflamatória. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto (CE) da Rosmarinus officinalis L., bem como de suas frações: hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt) e etanólica (ET), e dos compostos isolados: carnosol (CA), ácido betulínico (BA) e ácido ursólico (UA), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Metodologia: As partes aéreas da Rosmarinus officinalis L. foram secas à temperatura ambiente e submetidas à maceração com etanol 96% por 15 dias para a obtenção do CE. A seguir, o CE foi submetido a uma filtração em sílica utilizando-se solventes em ordem crescente de polaridade resultando nas frações HEX, AcOEt e ET. A partir das frações AcOEt e HEX foram isolados três compostos: CA, BA e UA. Para a avaliação da atividade anti-inflamatória foi utilizado o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos, e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios: influxo de leucócitos, atividade da mieloperoxidase (MPO), além das concentrações de nitrito/nitrato (NOx), exsudação, interleucina-1 beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Nesse protocolo experimental, foram utilizados camundongos albinos suíços, os quais foram inicialmente distribuídos em diferentes grupos e tratados com CE (25 - 100 mg/kg), HEX (10 - 50 mg/kg), AcOEt (5 - 50 mg/kg), ET (10 - 50 mg/kg), CA (1 - 10 mg/kg), BA (1 - 10 mg/kg) ou UA (2,5 - 25 mg/kg), administrados por via intraperitoneal (i.p.), 0,5 h antes da administração da carragenina (1%, i.pl.). Os parâmetros inflamatórios (leucócitos e exsudação) foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente (10 min.) com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Para avaliar a atividade da MPO e as concentrações de NOx, IL-1? e TNF-?, diferentes grupos de animais foram tratados com CE (50 mg/kg, i.p.), HEX (25 mg/kg, i.p.), AcOEt (10 mg/kg, i.p.), ET (50 mg/kg, i.p.), CA (2,5 mg/kg, i.p.), BA (2,5 mg/kg, i.p.) ou UA (25 mg/kg, i.p.) administrados 0,5 h antes da carragenina. A dexametasona e indometacina foram utilizadas como fármacos anti-inflamatórios de referência. Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA) e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: O extrato bruto da Rosmarinus officinalis L. (50 - 100 mg/kg), as frações (10 - 50 mg/kg), assim como os compostos isolados (2,5 - 25 mg/kg) inibiram: influxo de leucócitos, neutrófilos, atividade da MPO, além das concentrações de NOx, exsudação, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). A indometacina e a dexametasona inibiram todos os parâmetros inflamatórios estudados (P < 0,05). Conclusão: O extrato bruto, frações e compostos isolados da Rosmarinus officinalis L. demonstraram importante atividade anti-inflamatória. Os compostos isolados: carnosol, ácido betulínico e ácido ursólico podem ser os responsáveis por este efeito anti-inflamatório.

Resumo

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Eosinófilos são células efetoras que desempenham um papel importante na fisiopatologia de doenças alérgicas. Eosinófilos são fontes cruciais de proteínas citotóxicas, mediadores lipídicos e citocinas, que podem contribuir para a gravidade da doença. O acúmulo de eosinófilos no tecido depende não somente do número de células a serem recrutadas, mas também, do número de células que deixam o tecido. Assim, um defeito na remoção destas células está associado com o desenvolvimento de doenças inflamatórias crônicas. Investigamos no presente trabalho o papel desempenhado pelas espécies reativas de oxigênio na resolução inflamatória no modelo de pleurisia alérgica e asma. Para indução da resposta inflamatória, administramos ovalbumina com adjuvante hidróxido de alúminio em camundongos sensibilizados previamente com esse mesmo antígeno. Observou-se um acúmulo inicial de neutrófilos com 12 horas e um aumento de eosinófilos a partir de 24 horas da indução da pleurisia alérgica e asma. A resolução da resposta inflamatória eosinofilica iniciou-se com 48 horas e foi substancialmente resolvida após 72 horas do desafio antigênico. A administração de SOD e H2O2 resolveu a inflamação eosinofílica. Além disso, a resolução da inflamação induzida pelo tratamento com SOD e H2O2 foi acompanhada por um aumento de eosinófilos em apoptose. A produção de ROS em camundongos gp91phox-/- foi significativamente menor quando comparada aos camundongos selvagens e ocorreu um atraso na resolução da resposta inflamatória. Além disso, a inibição da produção de ROS pela NADPH oxidase através do tratamento com apocinina prolongou a resposta inflamatória no modelo de asma. Houve um atraso na resolução eosinofílica em camundongos gp91phox-/- mas não em camundongos iNOS-/-. Interessantemente, a produção de ROS foi significativamente menor em camundongos gp91phox-/- e a inibição da produção de ROS pela apocinina prolongou a resposta inflamatória no modelo de asma. Nossos resultados sugerem que a administração exógena ou a geração endógena de H2O2, pode induzir a resolução da inflamação in vivo em modelos de resposta inflamatória alérgica através da indução de apoptose nos eosinófilos. Esses resultados podem ser relevantes como futuras estratégias terapêuticas para o tratamento de doenças inflamatórias que se tornam crônicas devido a não resolução eosinofílica. Eosinophils are effector cells that play an important role in the pathophysiology of allergic disease. In allergic diseases, such as asthma, eosinophils are a crucial source of cytotoxic proteins, lipid mediators, oxygen metabolites, and cytokines, which may contribute to the severity of disease. The accumulation of eosinophil in tissue depends not only on the number of cells being recruited at any particular time, but also on the number of cells that are cleared or leave the tissue. Thus, defective removal of these cells plays an important role in the initiation and propagation of chronic inflammatory diseases. Here we investigated the role of ROS in the resolution of the inflammatory response after induction of asthma and allergic pleurisy in mice. Previous studies have demonstrated the role of ROS as pro-inflammatory mediators but the role of ROS in the resolution phase is poorly understood. For induction of the inflammatory response to ovalbumin adjuvant aluminum hydroxide in mice previously sensitized with the same antigen. There was an initial accumulation of neutrophils at 12 hours and an increase of eosinophils after 24 hours of pleurisy and asthma induction. The resolution of the eosinophilic inflammatory response was initiated with 48 hours and was substantially resolved after 72 hours of antigenic challenge. Administration of H2O2 or SOD resolved eosinophilic inflammation. In addition, the resolution of inflammation induced by SOD or H2O2 was accompanied by an increase in the number of apoptotic eosinophils. Furthermore, eosinophil resolution was delayed in gp91phox-/- mice but not in iNOS-/- mice. Interestingly, ROS production was diminished in gp91phox-/- mice. Moreover, the inhibition of ROS production by apocinin prolonged inflammatory response in asthma model. Our findings indicate that levels of H2O2 increase during eosinophil influx and are necessary for the resolution of allergic inflammation in vivo by induce apoptosis of eosinophils. These results may be relevant as future therapeutic strategies for the treatment of inflammatory diseases that may to become chronic due to lack of resolution.

Nas últimas décadas, alguns estudos demonstraram que o ácido nicotínico (NIA) e a nicotinamida (NIC), vitaminas da família B3, além das conhecidas funções nutricionais também apresentavam propriedades anti-inflamatórias. Para melhor entender como o tratamento com essas vitaminas interfere no processo de migração celular para o foco inflamatório, camundongos Balb/c machos, com massas entre 20-25 g, foram desafiados com carragenina (CG 200 g/cavidade-0,1 mL), zimosano (ZYM 200 g/cavidade-0,1 mL), leucotrieno B4 (LTB4 500 ng/cavidade-0,1 mL) ou interleucina-8 (IL-8 60 ng/cavidade-0,1 mL) para indução de pleurisia. Os animais foram tratados com NIC (250, 500 ou 1000 mg/Kg-0,2 mL, per os) ou NIA (150, 300 ou 600 mg/Kg-0,2 mL, per os) 30 min antes e 1 h após o desafio com os agentes flogogênicos. Os camundongos foram eutanasiados em câmara de CO2 4 h após o desafio, o lavado da cavidade pleural coletado, centrifugado e o precipitado utilizado para realização da contagem total e diferencial de leucócitos. O duplo tratamento com NIC (1000 mg/Kg) reduziu a migração de neutrófilos para a cavidade pleural de camundongos desafiados por CG, ZYM, LTB4 e IL-8. O duplo tratamento com NIA (600 mg/Kg) também reduziu a migração de neutrófilos em camundongos desafiados com CG, ZYM, LTB4 e IL-8. Para avaliar a adesão e o rolamento de leucócitos, foi realizado um protocolo de microscopia intravital. Os camundongos foram tratados com NIC (1000 mg/Kg) e ou NIA (600 mg/Kg), 30 min antes e 1 h após desafio com CG (100 g/cavidade) injetada diretamente na bolsa escrotal. Quatro horas após o desafio com CG, foram coletadas imagens da microcirculação do músculo cremaster com auxílio de um microscópio de fluorescência. A análise das imagens revelou que o duplo tratamento com NIC ou NIA reduziu o rolamento e a adesão de leucócitos na microcirculação do músculo cremaster de camundongos. Após a captação das imagens os animais foram eutanasiados, o músculo cremaster foi coletado e utilizado para confecção de lâminas para análise histológica. A análise qualitativa das lâminas revelou menor número de leucócitos na região intersticial nos animais tratados com NIC e NIA em relação aos animais não tratados. Concluindo, os resultados demonstram que o tratamento com NIC ou NIA reduziu a migração de neutrófilos para a cavidade pleural de camundongos desafiados com diferentes agentes flogogênicos. O tratamento com as vitaminas também reduziu o rolamento e a adesão de leucócitos na microcirculação do músculo cremaster, o que pode justificar, pelo menos em parte, a redução do número de neutrófilos na cavidade pleural de camundongos desafiados com diferentes agentes flogogênicos. During the last decades some sutudies have shown that nicotinic acid (NIA) and nicotinamide (NIC), vitamins of the B3 family, besides the known nutritional functions, have antiinflammatory properties. Therefore, to better understand how these vitamins can interfere with the process of cell migration to inflamed focus, male Balb/c mice, weighing 20-25 g, were challenged with carrageenan (200 g/cavity-0.1ml), zymosan (ZYM 200 g/cavity-0.1 ml), leukotriene B4 (LTB4 500 ng/cavity-0.1 mL) or interleukin-8 (IL-8 60 ng/cavity-0.1 mL) to pleurisy induction. These mice were treated with NIC (250, 500, 1000 mg/Kg-0.2 mL, per os) or NIA (150, 300, 600 mg/Kg-0.2 mL, per os) 30 min before and 1 h after the challenge with the inflammatory agents. Four hours after the challenge, the animals were euthanized in CO2 chamber, the lavage of pleural cavity was collected, centrifuged and the precipitate was used to perform the total and differential counting of leukocytes. The double treatment with NIC (1000 mg/Kg) reduced the migration of neutrophils to pleural cavity of mice challenged with CG, ZYM, LTB4 e IL-8. The double treatment with NIA (600 mg/Kg) also reduced the neutrophil migration in mice challenged with CG, ZYM, LTB4 and IL-8. To assess the profile of the adhesion and rolling of leukocyte, a protocol of intravital microscopy was performed. The mice were treated with NIC (1000 mg/Kg) or NIA (600 mg/Kg), 30 min before and 1 h after the challenge with CG (100 g/0.1 mL) injected directly into the scrotum. Four hours after the challenge with CG, images were collected from microcirculation of cremaster muscle with the aid of a fluorescence microscope. The analysis of images revealed that the double treatment with NIC or NIA reduced the process of rolling and adhesion of leukocytes on microcirculation of the cremaster muscle of mice. In addition, after the capture of images, the mice were euthanized, the cremaster muscle was collected and used for histological analysis. The qualitative analysis of the slides revealed a lower number of leukocytes in the interstitial region of mice treated with NIC and NIA compared to untreated mice. In conclusion, the results demonstrated that the treatment with NIC and NIA reduced the neutrophil migration to pleural cavity of mice challenged with different inflammatory agents. The treatment with B3 vitamins also reduced rolling and adhesion of leukocytes on microcirculation of cremaster muscle, so the inhibition on the neutrophil migration to pleural cavity of the mice could be explained, in part by the reduction of leukocyte rolling and adhesion induced by NIC e NIA.

Coriandrum sativum L. (Umbelliferae), conhecido popularmente por coentro, é uma planta doméstica cultivada nas diversas partes do mundo, inclusive no Brasil. As folhas e frutos do coentro são utilizados como condimento em culinária e na medicina popular como analgésica, antirreumática, carminativa e colagoga. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento com o óleo essencial (OEC) e o extrato hidroalcóolico (EHC) do coentro em modelos experimentais de inflamação em roedores. A atividade antiinflamatória do coentro foi avaliada por meio dos testes de pleurisia em ratos e formação do edema de orelha em camundongos. A pleurisia foi induzida pela carragenina em animais tratados ou não com EHC. O edema de orelha induzido pela aplicação tópica de óleo de cróton e a atividade da mieloperoxidase foi avaliada em camundongos tratados ou não com OEC ou EHC. No teste da pleurisia o tratamento com EHC promoveu significativa diminuição no edema pleural, mas não sobre a migração leucocitária. Além disso, diferentemente ao observado com o tratamento com OEC, o uso tópico de EHC diminui significativamente o edema de orelha e a migração celular induzidos pela aplicação do óleo de cróton. Os dados indicam que EHC apresenta atividade antiinflamatória quando administrado pelas via oral e tópica, enquanto que OEC não apresenta atividade antiinflamatória tópica. Commonly known as coriander, Coriandrum sativum L. (Umbelliferae) is a home plant grown in several parts of the world, including Brazil. Its leaves and fruits have been used as condiment in cooking and in folk medicine as analgesic, antirheumatic, carminative and cholagogue. The aim of this study was to evaluate the effect of essential oil (EO) and hydroalcoholic extract (HE) from coriander on experimental inflammation models in rodents. Coriander anti-inflammatory activity was evaluated by pleurisy tests in rats and ear edema formation in mice. Pleurisy was induced by carrageenan in HE-treated or non-treated animals. The ear edema was induced by topical application of croton oil and the myeloperoxidase activity was evaluated in EO-treated and HE-treated or non-treated mice. In the pleurisy test, HE treatment significantly decreased pleural edema but not the leukocyte migration. Furthermore, differently from EO, the topical use of HE significantly decreased ear edema and cell migration induced by croton oil application. The results indicate that HE had anti-inflammatory activity when orally and topically administered, whereas EO did not present topical anti-inflammatory activity.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 Introdução: O micofenolato de mofetila (MMF) é um fármaco imunossupressor utilizado atualmente na clínica na rejeição de transplantes de órgãos e em algumas doenças auto-imunes, como na uveite e na glomerulonefrite. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e antioxidante do MMF administrado por via oral, na primeira (4 h) e segunda (48 h) fases da resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), no modelo da pleurisia, em camundongos. Materiais e Métodos: Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos suíços de 1 mês de idade. O modelo experimental utilizado foi o da pleurisia induzida pela Cg, segundo metodologia descrita por Saleh et al. (1996). A inflamação foi avaliada estudando-se alguns parâmetros da resposta inflamatória segundo metodologias já padronizadas e descritas na literatura (leucócitos e a exsudação), atividade das enzimas: mieloperoxidase (MPO), adenosina deaminase (ADA), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), as concentrações de: nitrito/nitrato (NOx) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Neste protocolo, também foram estudadas a influência do MMF sobre as concentrações das proteínas e sobre a transcrição do mRNA para o fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina-1 beta (IL-1?), fator de crescimento endotelial vascular alfa (VEGF-?), e interleucina 17A (IL-17A), utilizando-se as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Para a pesquisa da enzima óxido nítrico sintase induzida (ONSi) também foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h e 48 h após a indução da pleurisia. Como fármacos de referência anti-inflamatória foram utilizados: a dexametasona (Dex, i.p.) e o ibuprofeno (Ibu, v.o.). Em alguns experimentos para avaliar a exsudação, os animais foram tratados 10 minutos antes da aplicação da Cg, com solução de azul de Evans (25 mg/kg, 0,2 mL, i.o.). Para a análise estatística dos resultados foi utilizado o teste paramétrico ANOVA complementado, quando necessário, pelo teste de Dunnett, teste t de Student e teste de correlação de Pearson. Diferençcas com P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Em ambas as fases (4 h e 48 h) da resposta inflamatória induzida pela Cg, o MMF na dose de 100 mg/kg administrado por via oral (v.o.) inibiu os leucócitos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), as atividades de: MPO (P < 0,05), ADA (P < 0,01), CAT (P < 0,05), SOD (P < 0,05), GPx (P < 0,01) e GST (P < 0.01), as concentrações de: nitrito/nitrato (ONx) (P < 0,01) e TBARS (P < 0,05). Além disso, o fármaco também inibiu aumento das concentrações e a transcrição do mRNA de: TNF-? (P < 0,01), IL-1? (P < 0,01), VEGF-? (P < 0,01) e IL-17A (P < 0,01), bem como a transcrição da enzima ONSi (P < 0,01). Conclusão: Os resultados demonstraram que o MMF possui importante efeito anti-inflamatório e antioxidante, inibindo mediadores e enzimas que participam da resposta inflamatória no modelo da pleurisia em camundongos. Este efeito parece ocorrer também em nível pré-transcripcional uma vez que o MMF foi capaz de inibir não somente as concentrações de citocinas formadas, mas também a transcrição do mRNA para estas proteínas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. A Lotus corniculatus (Fabaceae) é distribuída em muitas regiões do mundo e possui grande valor agronômico por seus constituintes: proantocianidinas, flavonoides e ácido oleanólico. Esta planta é utilizada como alimento para o gado proporcionando o aumento no ganho de peso e na produção de leite, além do controle de infecções intestinais parasitárias nos animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito anti-inflamatório e antibacteriano do extrato bruto (CE) da Lotus corniculatus v. São Gabriel, frações (hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt), butanólica (BuOH) e resíduo aquoso (AF)), e compostos isolados (canferitrin, ácido oleanólico e ß-sitosterol). As partes aéreas da Lotus corniculatus foram secas a temperatura ambiente, e a partir desse material (620 g), foi extraído o extrato bruto (CE) por maceração com etanol 96% por um mês. O solvente foi evaporado resultando em 78 g de extrato bruto (CE). O extrato bruto foi fracionado por extração líquido-líquido utilizando solventes em ordem crescente de polaridade resultando nas frações hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt), butanólica (BuOH) e resíduo aquoso (AF). A partir da fração HEX foram isolados o ácido oleanólico e o ß-sitosterol, e a partir da fração AcOEt o canferitrin. Para a avaliação da atividade anti-inflamatória foi utilizado o modelo de pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos, e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios: concentrações de leucócitos, exsudação, atividade da mieloperoxidase (MPO) e da adenosina-deaminase (ADA), além das concentrações de nitrito/nitrato (NOx) e interleucina-1 beta (IL-1 ). Nesse protocolo experimental, foram utilizados camundongos albinos suíços, os quais foram distribuídos em diferentes grupos e tratados com CE (100 - 400 mg/kg), HEX (50 - 200 mg/kg), AcOEt (100 - 400 mg/kg), BuOH (50 - 200 mg/kg), AF (25 - 200 mg/kg), canferitrin (50 - 100 mg/kg), ácido oleanólico (10 - 100 mg/kg) ou ß-sitosterol (10 - 100 mg/kg) 0,5 h antes da administração da carragenina (1%, i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Todos os animais, exceto nos experimentos que foram analisadas as atividades enzimáticas, foi administrado previamente (10 min.) Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.) a fim de avaliar a exsudação. Dexametasona e indometacina foram utilizados como fármacos anti-inflamatórios de referência. Para a avaliação da atividade antibacteriana, foi utilizada a técnica de microdiluição em caldo para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e da concentração bactericida mínima (CBM). Neste protocolo, o material vegetal, o extrato bruto (CE), frações e compostos isolados, foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO) e transferidos para uma placa em diluição seriada e, a seguir, o inóculo bacteriano foi adicionado. Gentamicina foi utilizada como fármaco antibacteriano de referência. Diferenças estatísticas entre os grupos, para os parâmetros inflamatórios, foram determinadas pela análise dos testes t de Student ou de variância (ANOVA). Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. O extrato bruto da Lotus corniculatus (200 - 400 mg/kg) e frações (50 - 200 mg/kg), assim como os compostos isolados (25 - 100 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, exsudação, a atividade da MPO e da ADA, além das concentrações de NO e IL-1 (P < 0,05). A indometacina e a dexametasona inibiram todos os parâmetros inflamatórios estudados (P < 0,05). Em relação à atividade antibacteriana, somente as frações HEX e AcOEt, e os compostos isolados ácido oleanólico e canferitrin, revelaram atividade bactericida e/ou bacteriostática. A fração HEX demonstrou moderada atividade antibacteriana (CIM = 100 µg mL-1) para a bactéria Bacillus cereus, e fraca atividade antibacteriana (CIM = 600 a 1000 µg mL-1) para as bactérias Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Providencia alcalifaciens e Acinetobacter calcoaceticus. A fração AcOEt demonstrou fraca atividade antibacteriana (CIM = 800 µg mL-1) para as bactérias Enterococcus faecalis, Bacillus cereus e Acinetobacter calcoaceticus. O ácido oleanólico revelou boa atividade antibacteriana para Staphylococcus aureus meticilina resistente (CIM = 100 µg mL-1),Listeria monocytogenes e Bacillus cereus (CIM = 25 µg mL1), e o canferitrin demonstrou boa atividade antibacteriana para as bactérias: Staphylococcus epidermidis, Shigella flexinerii, Salmonella typhimurium e Acinetobacter calcoaceticus (CIM = 100 µg mL-1). Este composto demonstrou excelente atividade antibacteriana para as bactérias Enterococcus faecalis (CIM = 3.9 µg mL-1) e Bacillus cereus (CIM = 8.5 µg mL-1). O extrato bruto, frações e compostos isolados da Lotus corniculatus v. São Gabriel demonstraram importante atividade anti-inflamatória e antibacteriana. Os compostos isolados: canferitrin, ácido oleanólico e ß-sitosterol podem ser responsáveis por estes efeitos anti-inflamatório e/ou antibacteriano. The Lotus corniculatus (Fabaceae) is distributed in many regions of the world and has a high agronomic value for its constituted: proanthocyanidins, flavonoids and oleanolic acid. This plant is used as food for cattle providing the enhancement of the weight and of milk production beyond the control of intestinal parasitic infections in the animals. The aim of this study was to evaluate the anti-inflammatory and anti-bacterial effects of crude extract (CE), fractions (hexane (HEX), ethyl acetate (AcOEt), n-butanol (BuOH) and aquous fraction (AF)), and isolated compounds (kaempferitrin, oleanolic acid and ß-sitosterol) from Lotus corniculatus v. São Gabriel. The aerial parts of Lotus corniculatus were dried at room temperature and this material (620 g) the crude extract (CE) was extracted by maceration with ethanol 96% for one month. The solvent was evaporated resulting in 78 g of crude extract (CE). The crude extract was fractionated by liquid-liquid extraction using solvents in growing order of polarity resulting in hexane (HEX), ethyl acetate (AcOEt), n-butanol (BuOH) and aqueous fraction (AF). From the HEX fraction it was isolated the oleanolic acid and the ß-sitosterol and from AcOEt fraction the kaempferitrin. To evaluate the anti-inflamatory activity, it was used the mouse model of pleurisy induced by carrageenan and the following inflammatory parameters were evaluated: leukocytes, exudation, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, as well as, nitrite/nitrate (NOx) and interleukin-1 beta (IL-1ß) levels. In this experimental protocol, swiss mice were used in the in vivo experiments, which were distributed in different groups and they were treated with CE (100 - 400 mg/kg), HEX (50 - 200 mg/kg), AcOEt (100 - 400 mg/kg), BuOH (50 - 200 mg/kg), RA (25 - 200 mg/kg), kaempferitrin (50 - 100 mg/kg), oleanolic acid (10 - 100 mg/kg) or ß-sitosterol (10 - 100 mg/kg) 0,5 h before carrageenan (1%,i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated 4 h after. All animals, except in the experiments that were analyzed enzymatic activities, the animals were previously pretreated (10 min.) with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.) in order to evaluate the exudation. Dexamethasone and indomethacin were used as anti-inflammatory reference drugs. To evaluate the anti-bacterial activity, it was used the microdilution in broth technical to determine the minimal inhibitory concentraton (MIC) and the minimal bactericidal concentration (MBC) methodology. In this protocol the crude extract (CE), fractions and isolated compounds were dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO) and transferred to plate in serial dilution and, after, the bacterial inoculum were added. The gentamicin was used as the anti-bacterial reference drug. To the anti-inflammatory parameters, statistical differences between groups were determined by Student's t test and analysis of variance (ANOVA). Values of P < 0.05 were considered significant. The crude extract of Lotus corniculatus (200 - 400 mg/kg) and fractions (50 - 200 mg/kg), as well as its isolated compound (25 - 100 mg/kg) inhibited: lekocytes, neutrophils and exudation, the MPO and ADA activities, as well as NO and IL-1 levels (P < 0.05). Indomethacin and dexamethasone inhibited all the studied inflammatory parameters (P < 0.05). In regard to the anti-bacterial activity, only the HEX and AcOEt fractions and the isolated compounds, oleanolic acid and kaempferitrin, revealed anti-bacterial and/or bacteriostatic activities. The hexane fraction showed moderate anti-bacterial effect (MIC = 100 µg mL-1) on Bacillus cereus and weak anti-bacterial effect (MIC = 600 to 1000 µg mL-1) on Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Providencia alcalifaciens and Acinetobacter calcoaceticus. The AcOEt fraction demonstrated a weak anti-bacterial activity (MIC = 800 µg mL-1) on Enterococcus faecalis, Bacillus cereus and Acinetobacter calcoaceticus.The Oleanolic acid, isolated from hexane fraction, exhibited a good anti-bacterial activity on methycillin-resistant Staphylococcus aureus (MIC = 100 µg mL-1), Listeria monocytogenes and Bacillus cereus (MIC = 25 µg mL-1) and the kaempferitrin, a compound isolated from this fraction, demonstrated a good anti-bacterial effect on: Staphylococcus epidermidis, Shigella flexinerii, Salmonella typhimurium and Acinetobacter calcoaceticus (MIC = 100 µg mL-1). This compound showed an excellent anti-bacterial activity on Enterococcus faecalis (MIC = 3.9 µg mL-1) and Bacillus cereus (MIC = 8.5 µg mL-1). The crude extract, fraction and isolated compound from Lotus corniculatus v. São Gabriel, demonstrated important anti-inflammatory and anti-bacterial activities. The isolated compounds: kampferitrin, oleanolic acid and ß-sitosterol can be responsible for these anti-inflammatory and/or anti-bacterial effects.

A proposta deste estudo foi investigar o efeito potencial da terapia laser de baixa intensidade na modula??o de mediadores pr?-inflamat?rios e antiinflamat?rios na fase aguda da inflama??o no modelo de pleurisia em ratos. No modelo cl?ssico de pleurisia temos poucas evidencias do efeito antiinflamat?rio do laser e das caracter?sticas de dosagem, como o comprimento de onda, energia total, n?meros e formas de tratamento, necessitando ainda de mais estudos. A amostra de 48 ratas Wistar foram divididas em grupos controle e experimentais. A inflama??o foi induzida por carragenina (0.2 mL) injetada na cavidade pleural. Na 1?, 2? e 3? hora ap?s a indu??o o laser diodo de InGaAlP (660 nm) no modo cont?nuo (20 mW) foi usado nos grupos laser diferentes doses e formas de tratamento, com uma energia total de 0.9, 2.1 e 4.2 joules. Ap?s 4 horas o volume de exsudato, leuc?citos totais e diferencial, concentra??o de prote?nas, oxido n?trico (NO), interleucina (IL)-6, interleucina (IL)-10, fator de necrose tumoral (TNF)-J e prote?na quimioatrativa de mon?citos (MCP)-1 foram mensuradas no liquido pleural aspirado. Todas as formas de tratamento e quantidade de energia reduzem significativamente o volume do exsudato (P

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas. Introdução: O tacrolimus é um agente imunossupressor isolado do Streptomyces tsukubaensis e é utilizado principalmente na prevenção de rejeição de órgãos. Além disso, muitos trabalhos têm demonstrado o uso do tacrolimus em doenças de caráter inflamatório crônico como à asma brônquica e artrite reumatóide.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. Introdução: A espécie Solidago chilensis Meyen, nativa da América do Sul e comumente conhecida como "arnica do Brasil", tem demonstrado importante atividade antifúngica, antioxidante e antimicrobiana. No entanto, existem poucos estudos em relação a sua atividade antiinflamatória.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Farmácia. Introdução: Espécies de Passiflora (Passifloraceae) são plantas nativas de áreas tropical e subtropical das Américas (PIO CÔRREA, 1978). Apresentam como compostos majoritários, os flavonóides (PETRY et al., 2001, DE-PARIS et al., 2002). Na medicina popular além de serem usadas por suas propriedades psicotrópicas, são usadas para o tratamento de inflamações, como a da pele e bronquites (GUPTA, 1995, MORS; RIZZINI; PEREIRA, 2000). Estudos demonstraram seus efeitos no Sistema Nervoso Central (SPERONI; MINGHETTI, 1988; DE-PARIS et al., 2002; OGA et al., 1984). Por outro lado, são poucas as investigações farmacológicas sobre suas propriedades antiinflamatórias.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. Estudos têm demonstrado o efeito antiinflamatório do PK11195 e do Ro5-4864 em modelos experimentais (TORRES et al., 1999; 2000). Estes dois fármacos são denominados ligantes do receptor benzodiazepínico periférico (RBP) estão localizados em diversos tecidos, em nível periférico. Neste estudo foi utilizado o modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg, 1%/cav.), em camundongos. Este é um modelo pelo qual apresenta uma resposta inflamatória bifásica (4 e 48 h) importante para avaliação de novos fármacos com propriedades antiinflamatórias. Objetivos: 1) Avaliar o efeito do PK11195 e do Ro5-4864 sobre a resposta inflamatória induzida pela Cg na cavidade pleural de camundongos. Os parâmetros inflamatórios (leucócitos, exsudação, concentrações da mieloperoxidase (MPO), adenosina-deaminase (ADA), óxido nítrico (ONx) e permeabilidade vascular) foram estudados 4 e 48 h após a indução da pleurisia, 2) Avaliar se o possível efeito antiinflamatório dos fármacos estudados ocorre devido a síntese esteroidal. Materiais e métodos: Neste protocolo experimental, foram utilizados camundongos albinos suíços de ambos os sexos, pesando entre 18-22g. Todos os animais foram tratados previamente com solução de azul de Evans (25 mg/kg, i.v.) para análise indireta do exsudato, exceto para àqueles experimentos pelo qual, estudou-se as enzimas MPO e ADA, ONx e análise histológica. Inicialmente avaliou-se a curva dose, tempo e resposta sobre os parâmetros inflamatórios (leucócitos e exsudação). Após o estabelecimento da melhor dose e o melhor tempo de tratamento prévio dos animais com os fármacos em estudo, avaliou-se o efeito destes sobre as concentrações de MPO, ADA, ONx), tanto na primeira (4 h) como na segunda fase (48 h) da resposta inflamatória induzida pela carragenina na cavidade pleural de camundongos. Análise estatística: Os resultados obtidos com a contagem de leucócitos, exsudação, MPO, ADA, ONx e permeabilidade vascular foram expressos através da média ± e.p.m. A análise estatística para estes parâmetros foi realizada por meio do teste paramétrico ANOVA (Dunnett) complementado, quando necessário pelo teste t de student. A análise histológica foi expressa através de scores (0 = ausente; 1 = discreto; 2 = moderado e 3 = abundante). Para este último parâmetro a análise estatística utilizada foi o teste não paramétrico de Man-Whitney. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Resultados: Na primeira fase (4 h) da resposta inflamatória induzida pela carragenina, o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram significativamente o influxo de leucócitos (P < 0,01), às custas de neutrófilos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), os níveis de ONx (P < 0,01) no lavado pleural e a permeabilidade vascular no pulmão (P < 0,01). Além disso, somente o Ro5-4864 foi capaz de inibir significativamente as concentrações da enzima MPO no lavado da cavidade pleural 4 h após (P < 0,05). Nesta fase, ambos os fármacos também inibiram os leucócitos no sangue dos animais inflamados (P < 0,01). A análise histológica revelou que o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram de forma significativa a migração de neutrófilos, mononucleares e edema pulmonar (P < 0,01). No baço observou-se também a diminuição de leucócitos, neutrófilos na polpa vermelha, bem como diminuição da hiperplasia da polpa branca (P < 0,01). Neste último órgão, os fármacos estudados também aumentaram a apoptose (P < 0,01). Já no fígado, observou-se que o PK11195 e o Ro5-4864, diminuíram os neutrófilos e as células de Kuppfer (P < 0,01). Na segunda fase (48 h) da pleurisia induzida pela carragenina, o PK11195 e o Ro5-4864 inibiram de forma significativa os leucócitos (P < 0,01), às custas de mononucleares (P < 0,01), e os níveis de ADA no lavado pleural de xv camundongos inflamados (P < 0,01). A analise histológica revelou que ambos os fármacos inibiram os neutrófilos (P < 0,01) e os mononucleares, no pulmão (P < 0,01). No baço, tanto o PK11195 como o Ro5-4864 inibiram os neutrófilos e os mononucleares (P < 0,01), no entanto, somente o Ro5-4864 diminuiu de forma significativa o centro germinativo, neste órgão (P < 0,01). Já no fígado, observou-se que os dois fármacos diminuíram a hiperplasia de células de Küppfer (P < 0,01). Finalmente para avaliarmos o possível mecanismo de ação antiinflamatório do PK11195 e do Ro5-4864 utilizamos a DL-aminoglutatimida neste modelo experimental. Os resultados revelaram que este último fármaco reverteu o efeito antiinflamatório do PK11195 em relação a: exsudação, neutrófilos, mononucleares e níveis de ONx no lavado pleural (P < 0,01), na pleurisia induzida pela Cg 4 h. Nesta fase, este efeito ocorreu também em relação ao fármaco Ro5-4864 em relação a: neutrófilos, mononucleares, MPO e ONx (P < 0,01). Na pleurisia induzida pela Cg 48 h, a DL-aminoglutatimida reverteu os efeitos antiinflamatórios tanto do PK11195 como do Ro5-4864 em relação a: leucócitos, mononucleares, neutrófilos e exsudação na cavidade pleural de camundongos (P < 0,01). Além disso, a DL-aminoglutatimida reverteu também o efeito antiinflamatório do Ro5-4864 em relação aos níveis da ADA (P < 0,01). Conclusão: Estes resultados revelam que o efeito antiinflamatório tanto do PK11195 como do Ro5-4864 ocorre principalmente sobre o influxo de leucócitos ativados, bem como a inibição de enzimas pró-inflamatórios como MPO e ADA, além do mediador óxido nítrico. Além disso, parece que este efeito antiinflamatório é mediado pela síntese esteroidal. Estudos posteriores devem ser realizados para melhor elucidar o mecanismo de ação antiinflamatória dos ligantes do PBR.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. Introdução: O modelo da pleurisia induzido pela carragenina é caracterizado por um aumento significante da exudação e da migração celular, às custas de neutrófilos 4 h depois de indução de pleurisia. Esta fase é nomeada de fase recente. A fase tardia ocorre 48 h depois da indução da pleurisia e é caracterizada por um aumento significante da exsudação e migração celular às custas de mononucleares. O SSR180575 é um ligante do receptor benzodiazepínico periférico e sugere-se que

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia.

Orientadores: Nancy Airoldi Teixeira, Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Neste trabalho investigamos o efeito do estresse crônico pré-natal sobre a resposta inflamatória em ratos. Ratas Wistar prenhes foram submetidas ao modelo de estresse proposto por WllLNER et alo(1987), que consistia de alterações variadas e transitórias no ambiente de criação dos animais durante as duas últimas semanas de gravidez, o grupo controle permaneceu sem qualquer manipulação, exceto os cuidados rotineiros. Os descendentes, entre 75 e 90 dias, foram submetidos aos seguintes testes: edema de pele, edema de pata, pleurisia não alérgica e pleurisia alérgica. Para o protocolo de pleurisia alérgica, os animais foram sensibilizados no primeiro dia do protocolo de estresse com uma injeção subcutânea de ovoalbumina (OVA), após o último dia do protocolo de estresse os animais eram desafiados com OVA na cavidade pleural. A pleurisia não alérgica foi induzida com carragenina, o edema de pata foi induzido com carragenina ou C48/80 e o edema de pele foi induzido com PAF, LPS, carragenina e C48/80. Na pleurisia alérgica o lavado pleural foi coletado 24h após o desafio antigênico com OVA, no procedimento de pleurisia não alérgica, o lavado pleural foi coletado 6, 24 e 48h após indução com carragenina. As medidas do volume das patas para o edema foram realizadas 60, 120, 180,240 e 300min após a indução com carragenina e 15, 30, 60, 120 e 180min pam 0.C48/80. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entre os grupos estressados e não estressados n o teste de edema de pele. No edema de pata induzido por C48/80, a resposta edematogênica foi diminuída, já quando o estímulo foi carragenina a resposta não foi alterada. Na pleurisia não alérgica, os animais prenatalmente estressados apresentaram um significativo aumento no influxo de eosinófilos em comparação aos animais não estressados no tempo de 24h. Na pleurisia alérgica os ratos prenatalmente estressados exibiram uma exacerbação no infiltrado de leucócitos, esta ocorreu em todos os tipos celulares estudados: neutrófilos, eosinófilos e células mononucleares Abstract: In this work we investigated the chronic mild prenatal stress effect on the vascular and cellular inflammatory response in rats. Pregnant female Wistar rats were submitted to the stress model proposed by WILLNER et al., 1987, that consisted of varied and transitory alterations of the environment of creation of the animals in the last 2 weeks of gestation, the control group stayed without any manipulation, except routine cares. The adults offspring were submitted to the following tests: skin oedema, paw oedema, non allergic pleurisy, allergic pleurisy. To the allergic pleurisy protocol, the animals were sensitized in the first day of stress protocol with a subcutaneous injection of ovalbumin (OVA), after the last day of the stress protocol the animals were challenged with OVA in the pleural cavity. The non-allergic pleurisy was induced by carrageenan, the oedema was induced by carrageenan or C48/80 and the skin oedema with PAF, LPS, carrageenan and C48/80. In the allergic pleurisy de pleural lavage was collected 24h after the antigenic challenge with OVA, in the non-allergic pleurisy procedure the pleural lavage was collected 6, 24 and 48h after induction by carrageenan. The volume of paws measure to non-allergic paw oedema was performed 60, 120, 180, 240 and 300min after induction by carrageenan and 15,30,60, 120 and 180min for C48/80. The results showed not significant difference between the stressed and non-stressed groups in the skin oedema to all stimulus. Already, the edematogenic response was diminished to the prenatally stressed rats in comparison to the non-stressed in the paw oedema induced C48/80, but not in the rats were stimulated with carrageenan. The non-alIergic pleurisy showed a significant enhancement in the eosinophils infiltration 24h challenge with carrageenan in prenatally stressed rats. In the allergic pleurisy the prenatally stressed rats exhibited a significant exacerbation in the leukocytes influx, differentially this exacerbation occurred to all cellular types studied: neutrophils, eosinophils and mononuclear cells Mestrado Mestre em Farmacologia

Objetivo: Avaliar o valor da punção-biópsia pleural no diagnóstico das doenças inflamatórias da pleura. Métodos: Foi feito um estudo retrospectivo de 82 toracocenteses realizadas durante um período de 42 meses em uma enfermaria de clínica médica no Rio de Janeiro. Os aspectos bioquímicos, citológicos e bacteriológicos do líquido pleural e o exame histopatológico do fragmento pleural foram correlacionados com o diagnóstico final. A sensibilidade, especificidade e os valores preditivos da concentração protéica e da percentagem de linfócitos no líquido pleural foram calculados utilizando diferentes valores de corte. Resultados: Dos 82 pacientes, 73 (89%) tinham tuberculose. Todos os pacientes com menos de 35 anos tinham tuberculose. O valor preditivo negativo para o diagnóstico de tuberculose aumentou de 17,1% para 66,7% utilizando 4,5g/dL e 2,5g/dL, respectivamente, como valores de corte para a concentração de proteínas no líquido pleural. O valor preditivo negativo do achado de 70% de linfócitos no líquido pleural foi de 100% e o seu valor preditivo positivo, de 94,2%. A pesquisa de BAAR no líquido pleural foi negativa nas 82 amostras. A sensibilidade do exame histopatológico da pleura foi de 69,2% para o diagnóstico de tuberculose. Conclusões: A tuberculose foi a causa mais comum de derrame pleural em todas as faixas etárias. O exame que mais contribuiu para confirmar este diagnóstico foi a análise histopatológica. Os autores sugerem que a punção pleural e a biópsia sejam realizadas simultaneamente nas populações em que a tuberculose tenha alta prevalência.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas O tratamento in vivo em camundongos com ligantes do receptor periférico benzodiazepínico (PBR) exerceram efeito inibitório na resposta inflamatória em dois modelos de inflamação aguda. No primeiro modelo o efeito antiinflamatório em de pré-tratamento com os ligantes PBR, PK11195 1-(2-chlorophenyl)-N-methyl-N(1-methylpropyl)-3-isoquinoline carboxamide e Ro5-4864 7-chloro-5-(4-Chlorophenyl)-1,3-dihydro-1-methyl-2-H-1,4-benzodiazepin-2, mostraram que a formação do edema em resposta a carragenina (300 mg/pata) foi inibida por PK11195 e Ro5-4864, em diferentes intervalos de tempo. O estudo do tempo resposta mostrou que a melhor resposta com ambos ligantes foi ótima em animais injetados no tempo de 24h, por esta razão este tempo de pré-tratamento foi escolhido para estudo da dose resposta. A formação do edema de pata em resposta a carragenina (300 mg/pata) foi reduzida por PK11195 e Ro5-4864 em diferentes doses (0,00001-10mg/kg, i.p.) produzindo uma inibição dose dependente na formação do edema de pata em camundongos induzida pela carragenina. PK11195 e Ro5-4864 (0.1 mg/kg, i.p.) quando administrado 24 h antes da indução do edema, inibiram de forma significativa o edema de pata de camundongos induzido por vários mediadores inflamatórios. No segundo modelo o pré-tratamento com os ligantes (0.1 mg/kg, i.p.), 24 h antes da indução da pleurisia induzida pela carragenina, mostrou uma significante inibição no recrutamento das células totais e diferenciais, principalmente a custas de neutrófilos, inibindo também a liberação de Interleucina-13 (IL-13) e Interleucina-6 (IL-6) no líquido pleural

Orientadores : Nancy Airoldi Teixeira, Edson Antunes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Neste trabalho investigamos o efeito estresse crônico sobre a resposta inflamatória vascular e celular induzida por estímulo alérgico ou não alérgico em ratos. Os ratos foram submetidos ao modelo de estresse proposto por WlLLNER et al.1987, que consistia de alterações variadas e transitórias no ambiente de criação dos animais durante 2 semanas, o grupo controle permaneceu sem qualquer manipulação, exceto os cuidados rotineiros. Após o último dia do protocolo de estresse os animais foram submetidos aos seguintes testes: lavado broncoalveolar (LBA), pleurisia, edema de pata induzido por estímulo alérgico e não alérgico. Para os protocolos de LBA e edema de pata alérgico os animais foram sensibilizados no primeiro dia do protocolo de estresse com um injeção subcutânea de ovoalbumina (OVA), após o último dia do protocolo de estresse os animais eram desafiados com OVA na região subplantar ou intratraquealmente. A pleurisia foi induzida com carragenina e o edema de pata não alérgico foi induzido com carragenina ou C48/80. O LBA foi coletado 48h após o desafio antigênico com OVA, no procedimento de pleurisia o lavado pleural foi coletado 6 e 24h após indução com carragenina. A medida do volume das patas para o edema de pata alérgico foi realizado nos tempos 15, 30, 60, 120, 180, 240 e 300min após desafio antigênico com OVA. No procedimento de edema de pata não alérgico os tempos avaliados foram 60, 120, 180? 240 e 300min após indução com carragenina e 15,30,60, 120 e 180min para C48/80. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa entre os grupos estressados e não estressados nos experimentos que avaliavam o perfil da migração celular (LBA e pleurisia). Já nos experimentos que avaliavam a resposta edematogênica houve um significativo aumento no edema dos ratos estressados em comparação aos não estressados nos edemas de pata induzidos por OVA e carragenina, mas não nos ratos que receberam C48/80, sugerindo que esta mudança no perfil edematogênico não é mediada pela histamina desgranulada de mastócitos Abstract: In this work we investigated the chronic stress effect on the vascular and cellular inflammatory response induced by allergic or non allergic stimulus in rats. The animaIs were submitted to the stress model proposed by WILLNER et al., 1987, that consisted of varied and transitory alterations of the environment of creation of the animaIs for 2 weeks, the control group stayed without any manipulation, except routine cares. Afier the last day of stress protocol the animaIs were submitted to the following tests: bronchoalveolar lavage (BAL), pleurisy, paw oedema induced by allergic and non aIlergic stimulus. To the BAL and allergic paw oedema protocols the animais were sensitized in the first day of stress protocol with a subcutaneous injection of ovalbumin I (OVA), afier the Iast day of the stress protocol the animais were challenged with OVA in the subplantar area or in to the airways. The pleurisy was induced by carrageenan and the non aIlergic paw oedema was induced by carrageenan or C48/80. BAL was collected 48h afier the antigenic challenge with OVA., in the pleurisy procedure the pleural lavage was collected 6 and 24h afier induction by carrageenan. The volume ofpaws measure to the allergic paw oedema was performed 15, 30, 60, 120, 180, 240 and 300min afier antigenic chaIlenge with OVA. In the non allergic paw oedema procedure the measure was performed 60, 120, 180, 240 and 300min afier induction by carrageenan and 15,30,60, 120 and 180minfor C48/80. The results showed not significant difference between the stressed and non stressed groups in the experiments that evaluated the profile of the cellular migration (BAL and pleurisy). Already, the edematogenic response was exacerbated to the stressed rats in comparison to the non stressed in the paw oedema induced by OVA and carrageenan, but not in the rats that received C48/80, suggesting that this phenomenon is not mediated by the histamine released by mast cells Mestrado Mestre em Farmacologia

Tese (Doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. O modelo da [pleurisia] induzida pela [carragenina] (1%), apresenta resposta inflamatória bifásica (4 e 48 h) na cavidade pleural de [camundongos]. A L-NOARG, o HOE 140, o NPC 17731, a diacereína, a indometacina, o meloxicam, a nabumetona e a dexametasona administrados 30 min antes da [carragenina], inibiram a migração celular e os níveis da [mieloperoxidase] na primeira fase (4 h) desta resposta inflamatória. Todas as drogas, com exceção da diacereína, inibiram a exsudação. Além disso, a diacereína, a nabumetona, a L-NOARG e a L-NAME inibiram também os níveis de [nitrito/nitrato]. Em relação à segunda fase (48 h), observou-se que a dexametasona e a diacereína, inibiram os leucócitos, enquanto que a terfenadina reduziu apenas a exsudação. Nenhuma das drogas estudadas reduziu os níveis da [mieloperoxidase] ou do [nitrito/nitrato]. O NPC 17731, o HOE 140 e o NPC 18884 inibiram tanto a exsudação como a migração celular induzida pela [carragenina], 4 h. Neste modelo experimental observa-se a participação de [citocinas] com efeitos pró-inflamatórios (TNFa, IL-1b, IL-8) e antiinflamatórios (IL-6, IL-10), com base nos resultados de que tanto anticorpos-policlonais como citocinas-recombinantes, administrados diretamente na cavidade pleural juntamente com a [carragenina], reproduziram parcialmente seus efeitos pró-inflamatórios ou antiinflamatórios. Neste modelo de inflamação, o PDTC e a sulfasalazina (inibidores do fator de transcrição nuclear [NF-kB]), foram eficazes em inibir a resposta inflamatória induzida pela [carragenina] (4 h). Além disso, a associação de doses subliminares de drogas antiinflamatórias e dos inibidores (PDTC ou sulfasalazina) que isoladamente não foram eficazes, quando associados, mostraram efeito antiinflamatório sinergístico, inibindo tanto a migração celular como a exsudação na [pleurisia] induzida pela [carragenina] (4 h). Nestes experimentos observou-se também aumento da expressão de células [CD18] positivas, na cavidade pleural e no pulmão, na primeira fase (4 h) da resposta inflamatória induzida pela [carragenina]. Além disso, no modelo experimental estudado, não se observou resposta inflamatória sistêmica caracterizada por aumento da permeabilidade vascular nos pulmões e no baço, em que se pese o aumento da molécula de adesão [CD18] em células pulmonares.

We investigated the effect of chloramphenicol succinate (30 mg/kg, every 12 h for 4 days, ip) on the reduced polymorphonuclear leukocytes (PMN) accumulation in carrageenin-induced pleurisy (150 mug) in diabetic (alloxan, 40 mg/kg, IV) rats (Wistar, males, 180-320 g, n = 12). Chloramphenicol produced an increase (p

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciencias Biologicas Caracterização do receptor B1, e dos mecanismos relacionados à resposta inflamatória induzida pela des-Arg9-bradicinina na cavidade pleural de camundongos. Os resultados mostram que a des-Arg9-bradicinina causa resposta inflamatória caracterizada por um pico de 1h para o extravasamento e um pico de 4 h para a migração de neutrófilos para a cavidade pleural dos animais. Nesta resposta inflamatória estão envolvidos vários mediadores inflamatórios, entre eles, as taquicininas, o CGRP, o óxido nítrico, e produtos das ciclooxigenases. O tratamento prévio dos animais com LPS não aumentou a expressão dos receptores B1 na cavidade pleural de camundongos, sugerindo que estes receptores estão presentes na sua forma constitutiva.

The effect of indomethacin and dexamethasone on PMN cell migration was studied in relation to chloramphenicol in the pleural cavity of rats, 4 hours after local injection of carrageenin or dextran. Pre-treatment of rats with chloramphenicol succinate (30mg/kg), ip, every 12h, during 4 days, potentiated the migration of PMN leucocytes to the inflamed cavity, when carrageenin (150mcg) was used as an irritant. However, responses to dextran (100mcg) remained the same. Chloramphenicol pre-treated rats that received indomethacin (2mg/kg, per os, 30min before carrageenin) or dexamethasone (0.25mg/kg, ip, 30min before carrageenin) showed inhibition of potentiated cellular responses. Mechanisms of the potentiating effect of chloramphenicol on the acute carrageenin-induced inflammation remains unclear. Neste trabalho estudaram-se os efeitos da indometacina e dexametasona sobre a migração das células polimorfonucleares (PMN), produzida pelo cloranfenicol 4h após a aplicação intrapleural de carragenina ou dextrano. Demonstrou-se que o pré-tratamento de ratos com cloranfenicol (30mg/kg, ip, a cada 12h, por 4 dias) potenciou a migração de PMN para a cavidade inflamada, quando a carragenina (150mg) foi utilizada como estímulo inflamatório, enquanto a resposta ao dextrano (100mcg) não se alterou, em comparação com animais não tratados com o antibiótico. Ratos que receberam cloranfenicol e foram tratados com indometacina (2,0mg/kg, per os, 30 min antes da aplicação de carragenina) ou dexametasona (0,25mg/kg, ip, 30 min antes da aplicação de carragenina) apresentaram inibição das respostas celulares potenciadas. O mecanismo pelo qual o cloranfenicol produz aumento da resposta inflamatória permanece obscuro.