Estudo do efeito anti-inflamatório e imunomodulador da Ilex paraguariensis A. St. Hil e seus compostos majoritários no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. Introdução: O atual e crescente número de compostos derivados de plantas nos mais variados estágios de desenvolvimento, principalmente em estudos clínicos, indica que a investigação científica de produtos naturais é uma fonte viável na pesquisa de novos candidatos a fármacos. Neste contexto, a Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), conhecida popularmente como erva-mate, é a principal representante do gênero Ilex e uma espécie nativa da América do Sul, distribuída nas regiões subtropicais e temperadas da Argentina, Paraguai, Uruguai e Brasil. É amplamente usada na medicina popular para tratar artrite, obesidade, fadiga e acometimentos hepáticos e intestinais. Por este motivo, acreditamos que o seu estudo farmacológico merece destaque. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e imunomodulador do extrato bruto padronizado, frações e compostos majoritários da I. paraguariensis, administrados por via oral, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina (Cg) em camundongos. Método: Folhas secas e trituradas de I. paraguariensis foram submetidas à turbolização com etanol 20° GL para obtenção do extrato bruto (EB) liofilizado. As frações butanólica (BuOH) e residual aquosa (RAq) foram obtidas por partição com n-butanol. O perfil químico do extrato bruto foi determinado por cromatografia líquida de ultra eficiência (CLUE) e espectrometria de massas (EM). No modelo da pleurisia, foram utilizados camundongos albinos Swiss fêmeas, 1 mês, 18-25g (PP00965/CEUA/2015). A pleurisia foi induzida de acordo com a metodologia descrita por Saleh e colaboradores (1996). Após 4 horas de pleurisia, o lavado pleural obtido dos animais pré-tratados com EB, BuOH, RAq, cafeína (Caf), rutina (Rut) ou ácido clorogênico (AcCl) foi utilizado para avaliar a migração de leucócitos totais, neutrófilos e quantificação da concentração de exsudato. Em seguida, procedeu-se a avaliação das atividades das enzimas mieloperoxidase (MPO), adenosina desaminase (ADA), quantificação da concentração dos metabólitos do óxido nítrico (NOx), concentração de citocinas pró e anti-inflamatórias (IL-6, IL-17A, IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 e IL-10). O tecido pulmonar também foi coletado e utilizado para avaliação histológica e para avaliar a ação dos compostos majoritários sobre a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p-p65 NF-?B). Diferenças estatísticas foram determinadas por ANOVA complementada por Newman-Keuls onde P Abstract : Introduction: The current and growing number of plant-derived compounds in various stages of development, particularly in clinical trials, indicates that scientific research of natural products is a viable source in the search for new drug candidates. In this context, Ilex paraguariensis A. St. Hil. (Aquifoliaceae), popularly known as yerba mate, is a representative of the Ilex genus and a native species of South America, distributed in subtropical and temperate regions of Argentina, Paraguay, Uruguay and Brazil. It is widely used in folk medicine to treat arthritis, obesity, fatigue and liver and intestinal affections. For this reason, we believe that its pharmacological study must be highlighted.Objectives: Evaluate the anti-inflammatory and immunomodulatory effects of I. paraguariensis standardized crude extract, fractions and major compounds, orally administered, in the carrageenan (Cg)-induced murine model of pleurisy.Methodology: Dried and crushed leaves were subjected to turbolization process with 20° GL ethanol to obtain freeze-dried crude extract (EB). The butanolic fraction (BuOH) and aqueous residual fraction (RAq) were obtained by partitioning with n-butanol. The chemical profile of extract was determined by ultra performance liquid chromatography (UPLC) and mass spectrometry (MS). The pleurisy model employed female Swiss mice with 1 month, weighing 18-21g (this project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of UFSC - PP00965 / CEUA / 2015). Pleurisy was induced according to the method described by Saleh and coworkers (1996). Four hours after pleurisy, pleural fluids leakage obtained from pretreated animals with EB, BuOH, RAq, caffeine (Caf), rutin (Rut) or chlorogenic acid (AcCl) were used to evaluate the inflammatory parameters: total leukocytes and neutrophils migration, and quantification of exudate concentration. Then, proceeded to the evaluation of myeloperoxidase (MPO) and adenosine deaminase (ADA) activities, measurement of nitric oxide metabolites (NOx) concentration, quantification of pro-and anti-inflammatorycytokines (IL-6, IL-17A IFN-?, TNF-a, IL-2, IL-4 and IL-10). The lung tissues of all groups were collected and used for histologic evaluation of leukocyte infiltration and edema, and lung tissues obtained from groups treated only with major compounds were used to evaluate the p65 NF-?B phosphorylation (p-p65 NF-kB). Statistical differences were determined by ANOVA followed by Newman-Keuls post-hoc test. P