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Additional file 1: Table S1. Lutzomyia longipalpis mortality (%) after blood meal (determined up to 120 h after blood meal) on fluralaner (Bravecto®)-treated dogs for up to 12 months post-treatment.

To confirm that Beagle dogs are a good experimental model for Chagas disease, we evaluated hematological alterations during the acute and chronic phases in Beagle dogs infected with the Y, Berenice-78 (Be-78) and ABC strains of Trypanosomacruzi, correlating clinical signs with the parasitemia curve. We demonstrate that the acute phase of infection was marked by lethargy and loss of appetite. Simultaneously, we observed anemia, leukocytosis and lymphocytosis. Also,we describe hematological alterations and clinical signs that were positively correlated with the parasitemia during the experimental infection with the three strains of T.cruzi, and demonstrate that experimental infection of Beagle is a trustworthy model for Chagas disease. Para confirmar que cães Beagle são um bom modelo para doença de Chagas, foram avaliadas as alterações hematológicas durante as fases aguda e crônica em cães Beagle infectados com as cepas Y, Berenice-78 (Be-78) e ABC de Trypanosomacruzi, correlacionando os sinais clínicos com a curva de parasitemia. Foi demonstrado que a fase aguda da infecção foi marcada por letargia e perda de apetite. Simultaneamente, observou-se anemia, leucocitose e linfocitose. Ainda, foram descritas alterações hematológicas e sinais clínicos positivamente correlacionados com a parasitemia durante a infecção experimental com as três cepas de T.cruzi estudadas, demonstrando que a infecção em cães Beagle constitui um modelo fidedigno para a doença de Chagas.

Para confirmar que cães Beagle são um bom modelo para doença de Chagas, foram avaliadas as alterações hematológicas durante as fases aguda e crônica em cães Beagle infectados com as cepas Y, Berenice-78 (Be-78) e ABC de Trypanosoma cruzi, correlacionando os sinais clínicos com a curva de parasitemia. Foi demonstrado que a fase aguda da infecção foi marcada por letargia e perda de apetite. Simultaneamente, observou-se anemia, leucocitose e linfocitose. Ainda, foram descritas alterações hematológicas e sinais clínicos positivamente correlacionados com a parasitemia durante a infecção experimental com as três cepas de T. cruzi estudadas, demonstrando que a infecção em cães Beagle constitui um modelo fidedigno para a doença de Chagas. To confirm that Beagle dogs are a good experimental model for Chagas disease, we evaluated hematological alterations during the acute and chronic phases in Beagle dogs infected with the Y, Berenice-78 (Be-78) and ABC strains of Trypanosoma cruzi, correlating clinical signs with the parasitemia curve. We demonstrate that the acute phase of infection was marked by lethargy and loss of appetite. Simultaneously, we observed anemia, leukocytosis and lymphocytosis. Also,we describe hematological alterations and clinical signs that were positively correlated with the parasitemia during the experimental infection with the three strains of T. cruzi, and demonstrate that experimental infection of Beagle is a trustworthy model for Chagas disease.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O álcool (etanol ou álcool etílico) é, sem dúvida, a droga lícita de abuso mais consumida no mundo. O uso excessivo desta substância pode causar o transtorno por uso de substâncias, uma das doenças mais devastadoras dentre aquelas relacionadas às drogas de abuso. Os efeitos de reforço do uso moderado de álcool são resultado da interação com sistemas neurotransmissores como, por exemplo, dopamina (DA), serotonina (5HT), ácido gama-aminobutírico (GABA) e glutamato. No entanto, sabemos que alguns indivíduos são mais sensíveis aos efeitos do álcool enquanto outros são mais resistentes, resposta que pode estar relacionada a fatores genéticos e ambientais/sociais. Determinar a relação entre o perfil comportamental e uso do álcool é difícil, visto que deve ser levado em consideração tanto a análise comportamental quanto a neurofisiológica do indivíduo. A fim de melhor compreender estes aspectos do consumo de álcool, o zebrafish (Danio rerio) vem se tornando animal modelo promissor, pois oferece a possibilidade de investigação tanto sobre álcool quanto sobre diferenças individuais, possui neurotransmissores clássicos de vertebrados, além de ter elevada semelhança genética com seres humanos. Outra vantagem é o conhecido repertorio comportamental derivado da exposição ao álcool, que também mostra similaridades aos comportamentos humanos. Nesse sentido, este trabalho avaliou através de testes comportamentais se as diferenças individuais estabelecidas precocemente podem ser preditivas dos efeitos do consumo de álcool. Os resultados encontrados mostram animais emergentes precoces alteram seu comportamento em moderadas concentrações de álcool, como 0,25% enquanto animais emergentes tardios têm seu comportamento alterado em concentrações baixas de álcool, como 0,10%. Além disso, emergentes precoces são mais propensos a riscos, exploram mais o ambiente e tomam decisões mais rápidas ao contrário de animais emergentes tardios. Neste estudo foi possível observar que as diferenças individuais aparecem desde muito cedo na vida de um indivíduo. Animais com diferentes tempo de eclosão diferem comportamentalmente quando expostos ao álcool, emergentes precoces são mais resistentes ao álcool enquanto emergentes tardios são mais sensíveis, de maneira que emergentes precoces apresentam características comportamentais semelhantes ao perfil bold, enquanto emergentes tardios mostram-se mais próximos ao perfil shy. Alcohol (ethanol or ethyl alcohol) is undoubtedly the most widely used legal drug of abuse in the world. The excessive use of this substance can cause substance use disorder, one of the most devastating diseases among those related to drugs of abuse. The reinforcing effects of moderate alcohol use are the result of the interaction with neurotransmitter systems such as, for example, dopamine (DA), serotonin (5HT), gamma-aminobutyric acid (GABA) and glutamate. However, we know that some individuals are more sensitive to the effects of alcohol while others are more resistant, a response that may be related to genetic and environmental / social factors. Determining the relationship between the behavioral profile and alcohol use is difficult, since both the individual's behavioral and neurophysiological analysis must be taken into account. In order to better understand these aspects of alcohol consumption, the zebrafish (Danio rerio) has become a promising model animal, because it offers the chance to investigate alcohol and individual differences effects, it presents classic vertebrate neurotransmitters, and shows high genetic similarity with humans. Another advantage is the well-known behavioral repertoire derived from zebrafish alcohol exposure, which also shows similarities to human behavior. In this sense, this work evaluated through behavioral tests whether individual differences established early in life can be predictive of the effects of alcohol consumption. The results show that early emergent animals alter their behavior in moderate concentrations of alcohol, such as 0.25% while late emerging animals have their behavior altered in low concentrations of alcohol, such as 0.10%. In addition, early emerging are more prone to risk, explore the environment more and make faster decisions as opposed to late emerging. In this study it was possible to observe that individual differences appear from an early age in an individual's life. Animals with different hatching times differ behaviorally when exposed to alcohol, early emerging are more resistant to alcohol while late emerging are more sensitive, so that early emerging have behavioral characteristics similar to the bold profile, while late emerging are closer to the profile shy.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Os cães são os reservatórios primários dos parasitos do gênero Leishmania. A resposta imunológica induzida por Leishmania infantum é importante para a resistência à infecção e para a patogenia nestes animais. As metaloproteinases de matriz (MMPs) são uma família de enzimas proteolíticas que desempenham múltiplos papeis na resposta imunológica e no remodelamento tecidual. Entretanto, a ação destas enzimas pode levar à imunopatogênese em um processo infeccioso, que causa morbidade ou mortalidade do hospedeiro. Poucos estudos demonstram a correlação entre a expressão de MMPs e as manifestações clínicas dos animais portadores de leishmaniose visceral canina (LVC). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de MMPs em cães infectados naturalmente por Leishmania infantum e correlaciona-los aos quadros de manifestações clínicas da doença (assintomáticos, oligossintomáticos, sintomáticos). Para isso, a expressão relativa das MMPs, seus inibidores teciduais (TIMPs) e as citocinas, IL-10 e TNF-α, foi analisada no tecido hepático dos cães por meio de PCR em tempo real. O processo inflamatório e a citoestrutura do tecido hepático foi mensurado usando a coloração de hematoxilina-eosina. Cães infectados por L. infantum apresentaram aumento na expressão de MMPs (2, 3, 9, 11 e 13) e TIMPs (1 e 4) em tecido hepático, quando comparado a animais não infectados. Ademais, animais sintomáticos e oligossintomáticos apresentaram maior expressão de MMP-2 e IL-10, quando comparado ao grupo de cães assintomáticos. Cães oligossintomáticos apresentaram infiltrado inflamatório hepático maior e mais difuso, quando comparado a cães assintomáticos e sintomáticos. Os resultados indicam que a elevada expressão de MMPs (MMP2, MMP3, MMP9, MMP11 e MMP13) e TIMPs (TIMP1 e TIMP4) está correlacionada positivamente a expressão das citocinas TNF-α e IL-10 em cães naturalmente infectados por L. infantum, podendo contribuir para a destruição do parênquima hepático e para a evolução clínica da leishmaniose visceral nos animais. Dogs are the primary reservoir of Leishmania parasites. The immune response induced by Leishmania infantum is important for resistance to infection and pathogenesis in these animals. Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of proteolytic enzymes that play multiple roles in immune response and matrix remodeling. However, the enzyme action may lead to immunopathology in an infectious process that causes host morbidity or mortality and favors the the pathogen spread and its persistence. Few studies demonstrate the correlation between MMPs expression and clinical manifestations of animals with canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of the study was to evaluate matrix metalloproteinases expression in dogs naturally infected with Leishmania infantum and correlate them to the clinical manifestations of the disease (asymptomatic, oligosymptomatic, symptomatic). The relative expression levels of MMPs, their tissue inhibitors (TIMPs) and the cytokines, IL-10 and TNF-α, were analyzed in liver tissues of dogs by real time PCR. The inflammatory process and cytostructure of liver tissue were measured using hematoxylin-eosin staining. Dogs infected with L. infantum showed increased expression of MMPs (2, 3, 9, 11 and 13) and TIMPs (1 and 4) in liver tissue, when compared to uninfected animals. In addition, symptomatic and oligosymptomatic animals showed higher expression of MMP-2 and IL-10, when compared to the group of asymptomatic dogs. Oligosymptomatic dogs showed larger and more diffuse hepatic inflammatory infiltrate when compared to asymptomatic and symptomatic dogs. The results indicate that the high expression of MMPs (MMP2, MMP3, MMP9, MMP11 and MMP13) and TIMPs (TIMP1 and TIMP4) is positively correlated with the expression of the cytokines TNF-α and IL-10 in dogs naturally infected by L. infantum, which may contribute to the destruction of the liver parenchyma and to the clinical evolution of visceral leishmaniasis in animals.

O processo de envelhecimento é acompanhado por declínios funcionais no sistema visual mesmo na ausência de quadros patológicos. Dentre os componentes desse sistema, o complexo geniculado lateral do tálamo (CGL) é subdividido em: núcleo geniculado lateral dorsal (GLD), folheto intergeniculado (FIG) e núcleo geniculado lateral ventral (GLV). Uma característica desses núcleos é a imunorreatividade a proteínas ligantes de cálcio (CaBPs), cuja expressão varia regional e diariamente de acordo com as condições de iluminação e tem função de tamponar a concentração intracelular desse íon. Em paralelo, teorias modernas do envelhecimento correlacionam déficits funcionais de neurônios à perda dos mecanismos de homeostase de cálcio. Nesse sentido, o presente trabalho visa descrever parâmetros morfoquantitativos do CGL e imunorreatividade da CaBP calretinina (CR) em diferentes fases do dia e grupos de idade. Para isso, ratos Wistar machos foram divididos em 3 grupos etários, sendo jovens (3 meses), meia-idade (13 meses) e idosos (23 meses). Esses animais foram perfundidos com formalina (10%) em horas de Zeitgeber (ZTs) correspondentes a distintas condições fóticas ao longo do dia, quais sejam: ZT 0 (transição escuro-claro), ZT 6 (claro), ZT 12 (transição claro-escuro), ZT 14 (início do escuro) e ZT 18 (escuro). Os animais tiveram o encéfalo seccionado coronalmente e os cortes foram processados histologicamente por imunoistoquímica para proteína neuronal nuclear (NeuN) com contra marcação de Nissl ou imunoistoquímica para CR. Através das metodologias estereológicas do fracionador óptico e estimador de Cavalieri, foram estimados o volume, número de neurônios, número de células gliais, razão glia/neurônio e número de células CRpositivas nos núcleos do CGL. Mostramos que o envelhecimento não causa alteração no número de neurônios, mas sim aumento glial, na razão glia/neurônio e no volume de forma região-específica no CGL. Além disso, observamos um pico de células imunorreativas a CR na fase de claro que foi diminuído no início da fase de escuro em todos os subnúcleos do CGL de animais jovens. Relatamos ainda uma redução idade-dependente de células CRpositivas em todos os núcleos no ZT 12, bem como no ZT 6 no FIG e na porção externa do GLV. Sugerimos que essas alterações estão relacionadas com a capacidade da célula em expressar CR nesses horários específicos, uma vez que não há redução idade-dependente significativa no número total de neurônios. A perda de ritmicidade diária de CR já pode ser detectada na meia-idade, mas fica evidente na fase idosa, sendo as alterações na fase de claro as mais características durante o processo de envelhecimento. Normal aging is accompanied by declines in visual system even in the absence of pathological processes. Among the components of this system, the lateral geniculate nucleus (LGN) comprises the dorsal lateral geniculate nucleus (dLGN), intergeniculate leaflet (IGL) and ventral lateral geniculate nucleus (vLGN). A characteristic of these nuclei is the immunoreactivity of calcium binding proteins (CaBPs), which regulates the intracellular concentration of this ion and presents a daily and regional expression. In parallel, modern theories of aging correlates functional deficits of neurons to dysregulation of calcium homeostatic mechanisms. In this context, the present study aims to describe quantitative morphological parameters of LGN and immunoreactivity of the CaBP calretinin (CR) in distinct phases of day across different age groups. Male wistar rats were divided into three age groups: young, middle-age and aged (3, 13 and 23 months old) and perfused with formalin (10%) in Zeitgeber times (ZTs) corresponding to distinct photic conditions, namely ZT 0 (dark/light transition), ZT 6 (light), ZT 12 (light/dark transition), ZT 14( beginning of dark) and ZT 18 (dark) . Then, the brains were sectioned and submitted to immunohistochemistry for Neuronal Nuclei protein (NeuN) with Nissl counterstain or immunohistochemistry for CR. Through the stereological methodologies of optical fractionator and Cavalieri estimator we estimated the regional volume, neuronal and glial number, glia/neuron ratio and CR+ neuronal number in the CGL nuclei. We observed LGN neuronal numbers remained stable during aging. However, glial numbers, glia/neuron ratio and volume increased in a regionspecific manner. In addition, we observed a peak of CR-immunoreactive cells in the light phase that was diminished in the beginning of the dark in all LGN subnuclei of young animals. Furthermore, we show an age-related reduction of CR+ cells in all subnuclei at ZT 12, as well as in ZT 6 of IGL and the external portion of vLGN. These reductions seem to be due to the neuron capacity in express CR rather than neuronal loss, since no alterations were observed in total cell numbers. The daily rhythm of CR observed in young is lost in middle-aged and aged animals and were detected only in the light phase.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A toxoplasmose é uma doença infecto-parasitária causada pelo Toxoplasma gondii (T. gondii), um parasito intracelular obrigatório capaz de determinar um equilíbrio delicado entre o parasitismo e a resposta imune do hospedeiro, a qual é modificada devido fatores ambientais e genéticos. Devido a isso, objetivamos investigar as frequências alélicas e genotípicas de SNPs específicos nos genes IL17A e IL17RA, bem como a produção de IL-17A, IL-33 e CCL2 em gestantes infectadas pelo T. gondii do Estado do Rio Grande do Norte, Brasil. Através das técnicas PCR-RFLP, foram avaliados dois SNPs implicados na modulação do perfil de resposta imune Th17, IL17A rs2275913 (G>A) e IL17RA rs4819554 (A>G) em mulheres grávidas, infectadas ou não pelo T. gondii e atendidas na Maternidade Escola Januário Cicco, Natal/RN. Estas mulheres também foram avaliadas quanto a produção de citocinas implicadas na modulação da resposta imune, CCL2, IL-33 e IL-17A, pelo método de ELISA direto. Os resultados mostraram que o alelo G do SNP rs2275913 (IL17A) pareceu se protetor nesta população, enquanto o alelo G do SNP rs4819554 (IL17RA) foi associado a uma maior susceptibilidade à infecção pelo T. gondii [P valor= 0,025; OR= 2,815 (1,118- 7,089); IC= 95%]. Quanto às citocinas, nenhuma delas teve influência sobre os parâmetros analisados (aborto e hipertensão). Diante destes resultados, esse estudo inédito traz importantes evidências imunogenéticas, em humanos, que apoiam a existência de uma parcela de contribuição do genótipo do hospedeiro no resultado da imunomodulação exercida pelo T. gondii; este ainda abre perspectivas para outras futuras abordagens da relação parasito-hospedeiro. Toxoplasma gondii (T. gondii) is a parasitic infectious parasitic disease that is an obligate intracellular parasite capable of determining a delicate balance between parasitism and the immune response of the host, which is modified due to environmental and genetic factors. Due to this, we aimed to investigate the allelic and genotype frequencies of specific SNPs in the IL17A and IL17RA genes, as well as the production of IL-17A, IL-33, and CCL2 in pregnant women infected with T. gondii from the State of Rio Grande do Norte, Brazil. Through PCR-RFLP techniques, two SNPs implicated in Th17 immune response, IL17A rs2275913 (G> A) and IL17RA rs4819554 (A> G) modulation were evaluated in pregnant women, infected or not by T. gondii and treated in Maternity School Januário Cicco, Natal / RN. These women were also evaluated for the production of cytokines involved in the modulation of the immune response, CCL2, IL-33, and IL-17A, by the direct ELISA method. The results showed that the G-allele of the SNP rs2275913 (IL17A) appeared to be protective in this population, while the rs4819554 (IL17RA) SNP G allele was associated with a greater susceptibility to T. gondii infection [P value = 0.025; OR = 2.815 (1.118-7.089); CI = 95%]. Regarding cytokines, none of them had any influence on the analyzed parameters (abortion and hypertension). In view of these results, this unpublished study brings important immunogenic evidence in humans that support the existence of a contribution of the host genotype to the immunomodulation result of T. gondii; this still opens perspectives for other future approaches of the parasite-host relationship.

A infecção pelo vírus Chikungunya causa alta morbidade devido principalmente a artralgia e artrite geradas. A inflamação induzida nas articulações pela infecção viral envolve a imunidade inata e adaptativa. Entretanto, os mecanismos imunológicos envolvidos na proteção ou patogênese não estão ainda, totalmente, elucidados. Dessa forma o objetivo do presente estudo foi avaliar as expressões de receptores da imunidade inata e citocinas induzidas por sua ativação em pacientes infectados pelo vírus Chikungunya. Neste estudo, foi avaliado a expressão de RNAm por PCR em tempo real dos receptores tipo Toll (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), RLR (MDA5 e RIG-1), Moléculas adaptadoras (TRIF e MyD88) e citocinas (IFNα, IFNβ, IFNγ, IL-6, IL-12 e TNFα) em sangue total de pacientes na fase aguda da infecção por Chikungunya (N=28) e em indivíduos saudáveis, não infectados (N=9) utilizados como grupo controle. Os pacientes infectados pelo CHIKV apresentaram aumento da expressão de RNAm de TLR3, em relação aos indivíduos saudáveis. Não foi observada diferença significativa da expressão de TLR7, TLR9, MDA5 e RIG-1 nos pacientes infectados pelo CHIKV, sendo observada, no entanto, uma redução da expressão de RNAm de TLR8, quando comparado aos indivíduos saudáveis. Nossos resultados indicam que a infecção pelo CHIKV em pacientes na fase aguda induz elevada produção de IFN-α, IFN-γ e IL-6, moléculas da imunidade inata, com ação antiviral provavelmente, devido ao reconhecimento do vírus por TLR3 e em menor proporção por MDA5 e RIG-1, além de mecanismos que, possivelmente, envolvam a colaboração de TLR9. Ainda, foram constatadas correlações positivas entre as expressões de RNAm de TLR3, TLR7, TLR9, MDA5 e RIG-1 com expressão IFN-α. De maneira interessante, também foram observadas correlações positivas entre as expressões de RNAm de TLR3 com IFN-α, IFN-γ e IL-12, e entre a expressão de RNAm de MDA5 com IFN-α, IFN-β, IFN-γ e IL-6, IL-12 e TNF-α. Chikungunya virus infection cause high morbidity mainly due to arthalgia and arthritis generated. An inflammation induced in the joints by viral infection involve innate and adaptive immunity. However, the immunological mechanisms involved in protection or pathogenesis have not yet been completely elucidated. Thus the aim of the present study was to evaluate the expression of innate immunity receptors and cytokines induced by their activation in patients infected with the Chikungunya virus. In this study the expression of mRNA by real-time PCR of Toll receptors (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), RLR (MDA5 and RIG-1), adaptive molecules (TRIF and MyD88) and cytokines (IFN-α, IFN-β, IFN-γ, IL-6, IL-12 and TNF-α) in whole blood of patients in the acute phase of the Chikungunya infection (N=28). Uninfected cases (N=9) were used as negative controls. Pacients infected with CHIKV are older than TLR3 mRNA expression in relation to healthy languages. Influences of the expression of TLR7, TLR9, MDA5 and RIG-1 in CHIKV infected patients in the past have not been confirmed but have been shown to decrease TLR8 mRNA expression when they were found in the healthy populations. Factors related to CHIKV infection in pacients in the suck phase, infection with IFN-α, IFN-γ and IL-6, infections of innate immunity with antiviral action, recognition of the virus by TLR3 and to a lesser extent by MDA5 and RIG-1, in addition to mechanisms that possibly involve TLR9 collaboration. Furthermore, positive correlations were found between the mRNA expression of TLR3, TLR7, TLR9, MDA5 and RIG-1 with IFN-α expression. Interestingly, positive correlations between TLR3 mRNA expression with IFN-α, IFN-γ and IL-12 were also observed, and between MDA5 mRNA expression with IFN-α, IFN-γ and IL-12 were also observed, and between MDA5 mRNA expression with IFN-α, IFN-β, IFN-γ and IL-6, IL-12 and TNF-α.

Os receptores da imunidade inata, principalmente receptores do tipo toll (TLRs) e receptores do tipo Rig (RLRs) são moléculas importantes para o reconhecimento inicial do vírus Zika e modulação de resposta imunológica protetora com produção de IFN do tipo 1. Epidemias recentes pelo vírus Zika apresentaram como principais consequências o aumento do número de casos da síndrome de Guillain-Barré e o surgimento da síndrome congênita do vírus Zika que pode resultar em microcefalia e outros danos neurológicos. Os mecanismos imunológicos que conferem proteção ou patologia durante a infecção por esse vírus ainda não foram elucidados. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar o perfil da resposta imunológica inata em pacientes durante a infecção aguda pelo vírus Zika. Para isso, foi quantificada a expressão de RNA mensageiro (RNAm) dos TLRs (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), do RLR MDA-5 (Melanoma Differentiation-Associated protein 5), das moléculas adaptadoras TRIF (Toll/IL-1 Receptor Domain-Containing Adaptor-Inducing IFN-β) e Myd88 (Myeloid Differentiation Primary Response Gene 88) e das citocinas (IL-6, IL12, IFN-α, TNF-α, IFN-β, IFN-γ). Células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de 30 pacientes com sintomas da infecção aguda pelo vírus Zika com diagnóstico confirmado por RT-PCR em tempo real (qRT-PCR) e de nove indivíduos saudáveis não infectados foram utilizadas para quantificação do perfil de resposta imunológica. Pacientes com infecção aguda pelo vírus Zika apresentaram elevada expressão de TLR3, IFN-α, IFN-β e IFN-γ, quando comparado aos controles saudáveis. Ademais, houve correlação positiva entre a expressão de TLR3 em relação a IFN-α e IFN-β. Por outro lado, pacientes infectados pelo vírus zika apresentaram redução na expressão de TLR8, Myd88 e TNF-α. Foi observada expressão semelhante de TLR7, TLR9, MDA-5, TRIF, IL-6 e IL-12 entre o grupo de pacientes infectados pelo vírus zika e indivíduos do grupo controle. Nossos resultados indicam que a infecção aguda (até 5 dias após o aparecimento dos sintomas) pelo vírus Zika induz a produção de IFN-γ, IFN-α e IFN-β, principalmente por via dependente de TLR3. Por outro lado, os pacientes infectados pelo vírus zika apresentaram uma redução da expressão de TLR8, Myd88 e TNF-α, moléculas também envolvidas na imunidade antiviral. The receptors of the innate immunity, mainly Toll like receptors (TLRs) and RIG like receptors (RLRs) are important molecules for the initial recognition of Zika virus and modulation of protective immune response with production of type 1 IFN. Recent Zika virus epidemics presented the main consequences the increase in the number of cases of Guillain-Barré syndrome and the emergence of congenital Zika syndrome, which may result in microcephaly and other neurological damage. Immunological mechanisms that confer protection or pathology during infection by this virus have not yet been elucidated. Thus, the aim of the present study was to evaluate the profile of the innate immune response in patients during acute Zika virus infection. For this, the expression of messenger RNA (TLR3, TLR7, TLR8, TLR9), RLR MDA-5 (Melanoma Differentiation-Associated protein 5), TRIF adapter molecules (Toll / IL-1 Receptor (IFN-γ) and cytokines (IL-6, IL-12, IFN-α, TNF-α, IFN-γ and IFN-γ). Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 30 patients with symptoms of acute Zika virus infection with diagnosis confirmed by real-time RT-PCR (qRT-PCR) and nine uninfected healthy individuals were used to quantify the immune response profile. Patients with acute Zika virus infection had high expression of TLR3, IFN-α, IFN-β and IFN-γ when compared to healthy controls. In addition, there was a positive correlation between TLR3 expression in relation to IFN-α and IFN-β. On the other hand, patients infected by zika virus showed reduced expression of TLR8, Myd88 and TNF-α. Similar expression of TLR7, TLR9, MDA-5, TRIF, IL-6 and IL-12 was observed between the group of patients infected with zika virus and control subjects. Our results indicate that acute infection (up to 5 days after the onset of symptoms) by the Zika virus induces the production of IFN-γ, IFN-α and IFN-β, mainly via TLR3- dependent pathway. However, patients infected by the zika virus showed a reduction in the expression of TLR8, Myd88 and TNF-α, molecules also involved in antiviral immunity.

Quimiocinas atuam no recrutamento e acumulação de leucócitos durante o processo inflamatório e por este papel têm importante participação no desenvolvimento das diferentes manifestações clínicas da doença de Chagas. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de quimiocinas e receptores de quimiocinas em pacientes com as diferentes formas clínicas desta doença. A quantificação do RNA mensageiro (RNAm) das quimiocinas (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL17, CCL22, CCL24, CCL27, CCL28, CXCL9, CXCL10) e receptores de quimiocinas (CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR10, CXCR3) de pacientes com as formas indeterminada (n=18), cardíaca (n=17), digestiva (n=15) e cardiodigestiva (n=15) foi realizada a partir de células mononucleares de sangue periférico (CMSP), por PCR em tempo real. Pacientes com a forma cardíaca apresentaram maior expressão relativa de RNAm de CXCL9, CXCL10, CXCR3 e CCR5 quando comparados aos pacientes com a forma indeterminada. Por outro lado, pacientes com a forma digestiva mostraram elevada expressão de transcritos de CCR3 em relação aos pacientes com as formas indeterminada e cardíaca, além disso, houve correlação positiva entre a expressão desse receptor com a dimensão do sigmoide. A expressão relativa de CCL5 foi maior em pacientes com a forma cardiodigestiva em comparação aos pacientes com as formas cardíaca e indeterminada. CXCL9, CXCL10, CXCR3 e CCR5 participam da migração de células do perfil de resposta Th1 e a elevada expressão dos seus RNAm em pacientes com cardiomiopatia chagásica indica a contribuição dessas moléculas no processo inflamatório no tecido cardíaco. Pacientes com a forma digestiva apresentaram maior expressão relativa de CCR3, receptor envolvido com o perfil Th2 de resposta imune, indicando a possível polarização para este perfil no desenvolvimento da forma digestiva. O envolvimento de quimiocinas e seus receptores no desenvolvimento das diferentes formas clínicas da doença de Chagas pode fornecer uma melhor compreensão dos mecanismos de patogênese da doença. Chemokines act in the recruitment and accumulation of leukocytes during the inflammatory process and play an important role in the development of the different clinical forms of Chagas’ disease. The aim of this study was to evaluate the expression of chemokines and chemokine receptors in patients with the different clinical forms of this disease. The mRNA quantification of chemokines (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL17, CCL22, CCL24, CCL27, CCL28, CXCL9, CXCL10) and chemokine receptors (CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR10, CXCR3) in patients with indeterminated form (n=18), cardiac form (n=17), digestive form (n=15) and cardiodigestive form (n=15) was performed in peripheral-blood mononuclear cells (PBMC) by real-time PCR. Patients with the cardiac form displayed higher mRNA expression of CXCL9, CXCL10, CXCR3 and CCR5, than patients with indeterminate form. On the other hand, patients with the digestive form showed high transcript expression of CCR3, when compared to patients with indeterminate and cardiac clinical forms of the disease. In addition there was positive correlation beteween CCR3 mRNA expression and sigmoid dimension. The relative expression of CCL5 was higher in cardiodigestive patients compared to those with the cardiac and indeterminate forms. CXCL9, CXCL10, CXCR3 and CCR5 participate in the migration of Th1-profile cells and the high expression in patients with chagasic cardiomyopathy indicates their contribution in the cardiac inflammatory process. Patients with digestive form showed high of CCR3 mRNA expression which is involved with Th2 immune profile, indicating possible polarization for this profile in development of digestive form of disease. The involvement of chemokines and chemokine receptors in different clinical forms of Chagas’ disease may provide a better understanding of the mechanism of disease pathogenesis.

Cães são os reservatórios primários dos parasitos do gênero Leishmania. Receptores da imunidade inata fazem a detecção precoce do parasito e conduzem a imunidade adaptativa específica na tentativa de controlar a infecção. Entretanto, poucos estudos tem investigado a correlação entre a expressão de receptores da imunidade inata e a resistência ou susceptibilidade em cães infectados por Leishmania infantum. O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados clínicos em cães naturalmente infectados por L. infantum à expressão de receptores da imunidade inata (Toll Like Receptors-TLRs e Nod Like Receptors-NLRs). Inicialmente, o soro de 76 cães foi coletado no Centro de Controle de Zoonoses de Natal, Rio Grande do Norte, Brasil. A positividade dos cães para L. infantum foi confirmada pela reatividade nos testes de ELISA e DPP®. Os cães foram clinicamente avaliados e classificados como sintomáticos (n=19), oligossintomáticos (n=19), assintomáticos (n=19) e não infectados (n=19). Os cães naturalmente infectados por L. infantum e controles não infectados foram eutanasiados e fragmentos de fígado foram coletados para quantificação da expressão de RNAm de TLRs (TLR1-9), NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1 e NLRP3) citocinas (IL1β, IL-6, IL-12, IL-10, TNFα, IFN-γ) e iNOS com auxilio da técnica de PCR em tempo real. Os resultados demonstram o aumento na expressão da maioria dos receptores do tipo Toll e do tipo Nod nos cães naturalmente infectados por L. infantum, comparado a animais não infectados. Entretanto, cães sintomáticos apresentaram maior expressão de TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8, NLRP1, NLRP3, NOD1 e IL-1β quando comparado a animais assintomáticos, mostrando significante aumento na transcrição destas moléculas com a progressão da doença. Por outro lado, cães assintomáticos apresentaram maior expressão de RNAm de citocinas (IFN-γ, IL-12) e iNOS quando comparado a animais oligossintomáticos e sintomáticos. Este estudo gerou novos conhecimentos envolvendo receptores da imunidade inata (TLRs, NLRs) na leishmaniose visceral canina (LVC), podendo servir de base para o melhor entendimento dos mecanismos de resistência ou susceptibilidade à infecção por L. infantum em cães, bem como dar subsídio a estratégias profiláticas para o controle da LVC. Dogs are the primary reservoirs of parasites of the Leishmania genus. Innate immune receptors perform early detection of the parasite and lead to specific adaptive immune response in attempt to infection control. However, few studies have investigated a correlation between the expression of innate immunity receptors and the resistance or susceptibility pattern in dogs naturally infected with Leishmania infantum. The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum with the mRNA expression levels of innate imune receptors (Toll like receptors-TLRs and Nod Like Receptors-NLRs). Initially, serum of 76 dogs was collected at the Zoonoses Control Center in Natal, Rio Grande do Norte, Brazil. The L. infantum infection in dogs was confirmed by ELISA and DPP® tests. Subsequently, animals were clinially evaluated and classified as asymptomatic (n=19), oligosymptomatic (n=19), symptomatic (n=19) and uninfected (n=19). Dogs naturally infected by L. infantum and uninfected controls were euthanasied and liver samples were collected to quantify mRNA expression of TLRs (TLR1-9), Nod Like receptors-NLRs (NOD1, NOD2, NLRP1, NLRP3), cytokines (IL1β, IL-6, IL-12, IL-10, TNFα, IFN-γ) and iNOS using real-time PCR. The results demonstrate the increased expression of almost all TLRs and NLRs in dogs naturally infected by L. infantum compared with uninfected animals. However, symptomatic dogs showed higher expression of TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR7, TLR8 NLRP1, NLRP3, NOD1 and IL-1β than asymptomatic animals, revealing significant up regulation of transcription with disease progression. On the other hand, asymptomatic dogs presented greater cytokine mRNA expression (IFN-γ, IL-12) and iNOS when compared to oligosymptomatic and asymptomatic animals. This study unveil new knowledge involving innate immunity receptors (TLRs, NLRs) and cytokines in canine visceral leishmaniasis and may be used as a basis for better understanding of resistance or susceptibility mechanisms in dogs infected with L. infantum, as well as prophylactic strategies to control canine visceral leishmaniasis.