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Recurrent Aphthous Stomatitis (RAS) is characterized as an ulcer with a yellowish background delimited by an erythematous halo that can affect the entire oral mucosa, varying in shape, size and number. The wound healing process lasts around 10 to 14 days, with painful symptoms and a decrease in the patient's quality of life. These lesions are commonly found in all age groups, drawing attention to their high prevalence in the hebiatric population, a phase in which care with usual hygiene is not always a priority, as is the quality of food, which sometimes promotes acidification of the body. oral medium. In order to avoid systemic medication, promote analgesia and reduce inflammation caused by different types of stomatitis, Low Power Laser irradiation (LLLT) has been studied. The objective of this study was to analyze the effectiveness of LLLT in tissue repair, analgesia and recurrence of lesions of the three types of RAS in hebiatric patients, divided into 2 groups: Group I (LLLT), contact application in two sessions with an interval of 24 hours and Group II (control), only follow-up. Both were evaluated at 4 different times. LLLT, in addition to reducing pain, had an effect on the tissue repair process on protein synthesis, accelerating the healing process. Therefore, it can be concluded that LLLT is effective on RAS, and can be recommended as an adequate and reliable treatment, reducing the discomfort of patients affected by this type of ulcer. La Estomatitis Aftosa Recurrente (RAS) se caracteriza por una úlcera de fondo amarillento delimitada por un halo eritematoso que puede afectar a toda la mucosa oral, variando en forma, tamaño y número. El proceso de cicatrización de la herida dura alrededor de 10 a 14 días, con síntomas dolorosos y disminución de la calidad de vida del paciente. Estas lesiones se encuentran comúnmente en todos los grupos de edad, llamando la atención su alta prevalencia en la población hebiátrica, fase en la que no siempre es prioritario el cuidado con la higiene habitual, al igual que la calidad de la alimentación, que en ocasiones favorece la acidificación del organismo. medio oral. Con el fin de evitar la medicación sistémica, promover la analgesia y reducir la inflamación causada por diferentes tipos de estomatitis, se ha estudiado la irradiación láser de baja potencia (LLLT). El objetivo de este estudio fue analizar la efectividad de la LLLT en la reparación tisular, analgesia y recurrencia de lesiones de los tres tipos de EAR en pacientes hebiátricos, divididos en 2 grupos: Grupo I (LLLT), aplicación de contacto en dos sesiones con un intervalo de 24 horas y Grupo II (control), sólo seguimiento. Ambos fueron evaluados en 4 momentos diferentes. LLLT, además de reducir el dolor, tuvo un efecto en el proceso de reparación de tejidos en la síntesis de proteínas, acelerando el proceso de curación. Por lo tanto, se puede concluir que la TLBI es eficaz sobre la EAR, y puede recomendarse como un tratamiento adecuado y fiable, reduciendo las molestias de los pacientes afectados por este tipo de úlcera. A Estomatite Aftosa Recorrente (EAR) caracteriza-se como uma úlcera de fundo amarelado delimitado por um halo eritematoso que pode afetar toda a mucosa oral, variando em forma, tamanho e número. O processo de cicatrização das lesões dura em torno de 10 a 14 dias, com sintomatologia dolorosa e diminuição da qualidade de vida do paciente. Estas lesões são comumente encontradas em todas as faixas etárias, chamando a atenção para sua alta prevalência na população hebiatra, fase em que nem sempre os cuidados com a higiene habitual são prioritários, assim como a qualidade da alimentação, que por vezes promove a acidificação do meio bucal. Com o objetivo de evitar medicação sistêmica, promover analgesia e diminuir a inflamação ocasionada pelos diferentes tipos de estomatites, a irradiação com Laser em Baixa Potência (LBI) tem sido estudada. O objetivo desse estudo foi analisar a efetividade do LBI na reparação tecidual, analgesia e recorrência de lesões dos três tipos de EAR em pacientes hebiatras, divididos em 2 grupos: Grupo I (LBI), aplicação de contato em duas sessões com intervalo de 24 horas e Grupo II (controle), apenas acompanhamento. Ambos foram avaliados em 4 momentos distintos. O LBI, além de reduzir a dor, teve ação no processo de reparação tecidual sobre a síntese protéica, acelerando o processo cicatricial. Sendo assim, pode-se concluir que o LBI possui efetividade sobre EAR, podendo ser recomendado como tratamento adequado e confiável, diminuindo o desconforto dos pacientes acometidos por este tipo de úlcera.

Recurrent aphthous stomatitis (RAS) is one of the most common pathologies in routine dentistry, manifested through necrotizing ulcers that are, in most cases, quite painful and that can last for up to 14 days, affecting the patient's quality of life. Although uncertain, studies indicate that its appearance may be related to the immune system, lack of vitamins, genetic predisposition, among other factors. Its treatment consists of reducing the patient's symptoms and the duration of the lesion in the oral cavity, associated with drugs or therapies that speed up the repair and analgesia process. Low-intensity laser irradiation (LLL) has been used and studied as an auxiliary therapy for RAS. It has, among several pros, analgesic, anti-inflammatory and regenerative effects. The aim of this study was to analyze the effectiveness of LLLT in tissue repair, analgesia and recurrence of recurrent major aphthous lesion in a patient selected from the Hebiatrician at the University of Mogi das Cruzes Dental Clinic followed up since 2019, in which contact length irradiation was performed of an infrared wave of 808nm and a dose around 105J/cm2 in 4 intraoral points, followed by an extraoral application for lymphatic drainage, in two sessions with an interval of 24 hours, with follow-up after 60 days and after 2 years. Using the visual analogue scale (VAS), the patient indicated the intensity and evolution of pain, which was reduced from 10 (severe pain) in the 1st session to 1 (mild pain) in the 2nd session and remained at 0 in the 3rd session. after 60 days and after 2 years. Clinically, the lesion took around 14 days to heal and with irradiation the time decreased to 3 days, with no recurrence after 2 years. LLLT has been shown to be effective in tissue repair, analgesia and recurrence of major aphthous stomatitis lesion for two years, proving to be an effective and reliable treatment. La estomatitis aftosa recurrente (EAR) es una de las patologías más comunes en la rutina odontológica, manifestándose a través de úlceras necrosantes que son, en la mayoría de los casos, bastante dolorosas y pueden durar hasta 14 días, afectando la calidad de vida del paciente. Aunque es incierto, los estudios indican que su aparición puede estar relacionada con el sistema inmunológico, falta de vitaminas, predisposición genética, entre otros factores. Su tratamiento consiste en disminuir los síntomas del paciente y el tiempo de lesión en la cavidad bucal, asociado a fármacos o terapias que aceleren el proceso de reparación y analgesia. La irradiación láser de bajo nivel (LLLT) se ha utilizado y estudiado como terapia auxiliar para RAS. Tiene, entre muchos beneficios, efectos analgésicos, antiinflamatorios y regeneradores. El objetivo de este estudio fue analizar la efectividad de la TLBI en la reparación tisular, analgesia y recurrencia de lesión aftosa mayor recurrente en un paciente hebiátrico seleccionado en la Clínica Odontológica de la Universidad de Mogi das Cruzes con seguimiento desde 2019, en el que la irradiación por contacto con Se realizó onda infrarroja de 808nm y dosis alrededor de 105J/cm2 en 4 puntos intraorales, seguido de aplicación extraoral para drenaje linfático, en dos sesiones con intervalo de 24 horas, con seguimiento a los 60 días ya los 2 años. A través de la escala analógica visual (EVA), el paciente indicaba la intensidad y evolución del dolor, que se redujo de 10 (dolor intenso) en la 1ª sesión a 1 (dolor leve) en la 2ª sesión y se mantuvo en 0 en la 3ª sesión, después de 60 días y después de 2 años. Clínicamente, la lesión tardó alrededor de 14 días en cicatrizar y con la irradiación el tiempo se redujo a 3 días, sin recurrencia después de 2 años. La LLLT fue eficaz en la reparación tisular, analgesia y recurrencia de la lesión de estomatitis aftosa mayor durante dos años, demostrando ser un tratamiento eficaz y fiable. A estomatite aftosa recorrente (EAR) é uma das patologias mais comuns na rotina odontológica, sendo manifestada por meio de úlceras necrosantes que são, na maioria dos casos, bastante dolorosas e que podem perdurar por até 14 dias, afetando a qualidade de vida do paciente. Embora incerto, estudos indicam que o seu aparecimento pode estar relacionado ao sistema imunológico, falta de vitaminas, predisposição genética, entre outros fatores. O seu tratamento consiste na diminuição da sintomatologia do paciente e do tempo da lesão na cavidade bucal, associada a medicamentos ou terapias que acelerem o processo de reparação e analgesia. A irradiação com o laser em baixa intensidade (LBI) tem sido utilizada e estudada como terapia auxiliar para a EAR. Possui, entre diversos prós, efeitos analgésicos, anti-inflamatórios e eficácia regenerativa. O objetivo deste estudo foi analisar a efetividade do LBI na reparação tecidual, analgesia e recorrência da lesão aftosa maior recorrente em um paciente hebiatra selecionado na Clínica Odontológica da Universidade de Mogi das Cruzes acompanhado desde 2019, no qual foi realizada a irradiação de contato com comprimento de onda infravermelho de 808nm e dose em torno de 105J/cm2 em 4 pontos intrabucais, seguida de uma aplicação extrabucal para drenagem linfática, em duas sessões com intervalo de 24 horas, com acompanhamento após 60 dias e após 2 anos. Por meio da escala visual analógica (EVA), o paciente indicava a intensidade e evolução da dor, a qual foi reduzida de 10 (dor intensa) na 1ª sessão para 1 (dor leve) na 2ª sessão e permaneceu em 0 na 3ª sessão, após 60 dias e após 2 anos. Clinicamente, a lesão demorava por volta de 14 dias para cicatrizar e com a irradiação o tempo diminuiu para 3 dias, não havendo recidiva após 2 anos. O LBI se mostrou efetivo na reparação tecidual, analgesia e recorrência da lesão da estomatite aftosa maior por dois anos, evidenciando ser um tratamento eficaz e confiável.

The goal of this study was to investigate the expression of some metalloendopeptidases in squamous cell carcinomas of the oropharynx as well as its relation to histological differentiation, staging of disease, and prognosis. Paraffin blocks from 21 primary tumors were obtained from archives of the Department of Pathology, Paulista Medical School, Federal University of Sao Paulo, UNIFESP/EPM. Immunohistochemistry was used to detect the expression of EP24.15 and EP24.16 by means of tissue microarrays. Expression of EP24.15 or EP24.16 was not correlated with the stage of disease, histopathological grading or recurrence in squamous cell carcinomas of the oropharynx. In summary, our results support the notion that EP24.15 and EP24.16 are expressed in carcinoma of the oropharynx; however, these do not appear to be suitable biomarkers for histological grading, disease stage or recurrence as depicted by tissue microarrays and immunohistochemistry. Univ Fed Sao Paulo, UNIFESP, Dept Biosci, BR-11060001 Santos, SP, Brazil Univ Fed Sao Paulo, UNIFESP, Dept Pathol, BR-11060001 Santos, SP, Brazil Univ Fed Sao Paulo, UNIFESP, Dept Biosci, BR-11060001 Santos, SP, Brazil Univ Fed Sao Paulo, UNIFESP, Dept Pathol, BR-11060001 Santos, SP, Brazil Web of Science

Orientador: Prof. Dr. Tiago Rodrigues Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2019. A leucemia mielóide crônica (LMC) é responsável por aproximadamente 20% das leucemias em adultos e tem incidência de um a dois casos a cada 100 mil habitantes entre 45 a 55 anos de idade. É um tumor ocasionado pelo acúmulo de células mielóides e em 95% dos casos por alterações genéticas em células mielóides, ocasionando a formação do gene anormal bcr-abl, conhecido como cromossomo Philadelphia. Uma das formas de tratamento dessa doença atualmente é a utilização de inibidores de tirosina-quinase (targeted therapy), porém um dos principais problemas a ser enfrentado é o surgimento de resistência aos fármacos. Atualmente, o aumento da eficácia da quimioterapia com a descoberta de novos agentes antitumorais, juntamente com as tentativas de diminuição da resistência à quimioterapia, têm sido os principais objetivos no desenvolvimento de novas terapias. A reutilização de medicamentos antigos usados para outras doenças aplicados em pacientes oncológicos (drug repurposing) compõe uma interessante estratégia terapêutica, pois é de menor custo e o tempo para sua aprovação, considerando todas as etapas necessárias, seria muito mais curto. Isso pode ajudar a fechar a lacuna crescente entre as expectativas do paciente e os orçamentos de saúde, à medida que o custo da terapia médica anticâncer aumenta. Dados da literatura têm mostrado que fármacos antipsicóticos da família das fenotiazinas são capazes de induzir a morte de células tumorais, porém os efeitos colaterais das fenotiazinas com ação antipsicótica envolvem efeitos extrapiramidais e arritmias cardíacas, o que leva à necessidade de encontrar um derivado fenotiazínico com menores efeitos colaterais e que mantenha o efeito citotóxico em células tumorais. Assim, neste trabalho estudamos o efeito da PTZ , um derivado fenotiazínico com ação predominantemente anti-histamínica, sobre o metabolismo de células leucêmicas como alternativa de drug repurposing para auxiliar no tratamento da leucemia mielóide crônica. Os resultados obtidos mostraram que a PTZ apresenta uma potente capacidade citotóxica de forma concentração dependente, não afetando significativamente células normais. Em termos mecanísticos, observa-se disfunções mitocondriais induzidas pela PTZ e a autofagia tem papel crucial na morte celular. Ainda é necessário ser feita uma investigação mais aprofundada dos mecanismos moleculares de PTZ sobre a citotoxicidade especificamente na dinâmica mitocondrial para uma melhor compreensão da mitofagia induzida por PTZ, bem como avaliar in vivo a ocorrência deste efeito antitumoral, mas ainda sim, a PTZ mostrou grande potencial para ser usado como alternativa no tratamento da leucemia mielóide crônica. Chronic myelogenous leukemia (CML) is responsible for approximately 20% of adult leukemias and has an incidence of one to two cases per 100,000 inhabitants between 45 and 55 years of age. It is a tumor caused by the accumulation of myeloid cells and in 95% of cases by genetic changes in myeloid cells, causing the formation of the abnormal gene bcr-abl, known as Philadelphia chromosome. One way of treating this disease today is the use of targeted therapy tyrosine kinase, but one of the main problems to be faced is the emergence of drug resistance. Increasing the efficacy of chemotherapy with the discovery of new antitumor agents, in conformity with attempts to decrease resistance to chemotherapy, have been the main goals in the development of new therapies. The reuse of old drugs used for other diseases in cancer patients (drug repurposing) makes an interesting therapeutic strategy, since it is cheaper and the time for its approval, considering all necessary steps, would be much shorter. This may help close the growing gap between patient expectations and health budgets as the cost of anticancer medical therapy increases. The current literature have shown that antipsychotic drugs in the phenothiazine family are capable of inducing death of tumor cells, but the side effects of antipsychotic phenothiazines involve extrapyramidal effects and cardiac arrhythmias, which leads to the need to find a phenothiazine derivative with minor side effects and maintains the cytotoxic effect on tumor cells. Thus, in this work we studied the effect of promethazine, a phenothiazine derivative with predominantly antihistaminic action, on the metabolism of leukemic cells as an alternative drug repurposing to assist in the treatment of chronic myeloid leukemia. The results showed that promethazine has a potent cytotoxic capacity in a concentration-dependent manner not significantly affecting normal cells. Mechanistically, promethazine-induced mitochondrial dysfunctions are observed and autophagy plays a crucial role in cell death. Further investigation of the molecular mechanisms of PTZ on cytotoxicity specifically in mitochondrial dynamics is required to better understand the PTZ-induced mitofagia, as well as to evaluate in vivo the occurrence of this antitumor effect, but rather promethazine as a great alternative in the treatment of chronic myeloid leukemia.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) It has been hypothesized that cysteine cathepsins (CTs) along with matrix metalloproteases (MMPs) may work in conjunction in the proteolysis of mature dentin matrix. The aim of this study was to verify simultaneously the distribution and presence of cathepsins B (CT-B) and K (CT-K) in partially demineralized dentin; and further to evaluate the activity of CTs and MMPs in the same tissue. The distribution of CT-B and CT-K in sound human dentin was assessed by immunohistochemistry. A double-immunolabeling technique was used to identify, at once, the occurrence of those enzymes in dentin. Activities of CTs and MMPs in dentin extracts were evaluated spectrofluorometrically. In addition, in situ gelatinolytic activity of dentin was assayed by zymography. The results revealed the distribution of CT-B and CT-K along the dentin organic matrix and also indicated co-occurrence of MMPs and CTs in that tissue. The enzyme kinetics studies showed proteolytic activity in dentin extracts for both classes of proteases. Furthermore, it was observed that, at least for sound human dentin matrices, the activity of MMPs seems to be predominant over the CTs one. Univ Estadual Campinas, Fac Dent Piracicaba, BR-13414903 Piracicaba, Brazil Univ Sao Paulo, Bauru Sch Dent, Dept Biol Sci, BR-17012901 Bauru, SP, Brazil Univ Bologna, Dept Biomed & Neuromotor Sci, I-40126 Bologna, Italy Univ Trieste, Dept Med Sci, I-34128 Trieste, Italy Univ Iowa, Coll Dent, Dept Operat Dent, 801 Newton Rd, Iowa City, IA 52246 USA CNR, IGM, Unit Bologna, IOR, I-40136 Bologna, Italy Univ Fed Ceara, Dept Pharm Dent & Nursing, BR-60020181 Fortaleza, Ceara, Brazil Univ Carlo Bo, Dept SteVA, I-61029 Urbino, Italy Georgia Hlth Sci Univ, Dent Coll Georgia, Oral Biol, Augusta, GA 30912 USA Univ Oulu, Inst Dent, FI-90014 Oulu, Finland Oulu Univ Hosp, Med Res Ctr Oulu, FI-90014 Oulu, Finland Univ Oulu, FI-90014 Oulu, Finland Univ Helsinki, Dept Oral & Maxillofacial Dis, FI-00014 Helsinki, Finland Helsinki Univ Hosp, FI-00014 Helsinki, Finland Univ Fed Sao Paulo, Dept Biochem, BR-04021001 Sao Paulo, Brazil Univ Mogi das Cruzes, Ctr Interdisciplinar Invest Bioquim, BR-08773520 Mogi Das Cruzes, Brazil Anhanguera Univ Sao Paulo UNIAN SP, Biomat Dent Program, BR-05145200 Sao Paulo, Brazil Anhanguera Univ Sao Paulo UNIAN SP, Biotechnol & Innovat Hlth Program, BR-05145200 Sao Paulo, Brazil Univ Fed Sao Paulo, Dept Biochem, BR-04021001 Sao Paulo, Brazil FAPESP: 2007/54618-4 FAPESP: 2009/14005-9 CNPq: 312768/2013-3 Web of Science

Orientador: Marcelo Giannini Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O objetivo desse trabalho in vitro foi avaliar a incorporação de dois agentes anti-cárie, Apigenin (Api) e tt-Farnesol (Far), em adesivos dentinários, resina composta (CO) e cimento resinoso (CE), e o seu efeito na redução da virulência do Streptococcus mutans, na adesão dos adesivos à dentina, e nas propriedades mecânicas dos CO e CE. Api (1 mM) e Far (5 mM) foram adicionados separados ou em combinação à um adesivo autocondicionante (Clearfil S3 Bond Plus: CS3) e à um convencional (OptiBond S: OPT). Api (5 mM) e Far (5 mM) também foram adicionados separados ou em combinação, com ou sem flúor (F) ao CO e CE e comparados aos controles sem adições. Biofilme de S. mutans foi crescido na superfície de discos de adesivo-hidroxiapatita e em discos de CO e CE. Após 115h de incubação, a viabilidade bacteriana, peso seco, polissacarídeos (insolúveis, solúveis e intracelulares), e proteína foram quantificados. Imagens qualitativas em MEV foram obtidas do biofilme. Resistência de união foi avaliada e imagens em MEV da interface adesivo-dentina foram obtidas. S. mutans foi crescido na superfície de cavidades classe I restauradas com CO ou CE. Após incubação, foram observados a desmineralização cariosa e a infiltração bacteriana ao longo do gap de contração em microscopia confocal. Em adição, a resistência à flexão e modulo de elasticidade do CO e CE foram determinados. Os adesivos, CS3 com Api ou Api+Far, e OPT com Api ou Far reduziram o peso seco do biofilme de S. mutans. Os polissacarídeos insolúveis reduziram com a adição de Api ao CS3 e Far ao OPT. Os polissacarídeos intracelulares reduziram com a adição de Api e Api+Far ao CS3. Nenhuma diferença foi observada nas proteínas ou nos polissacarídeos solúveis. A resistência de união ou a interface adesivo-dentina não foram alterados comparados aos grupos controles. No caso do CO e CE, a viabilidade bacteriana reduziu para o CE com Api+Far+F. O peso seco e os polissacarídeos insolúveis e intracelulares foram reduzidos com a adição de Api, Api+Far ou Api+Far+F para ambos os materiais. As proteínas reduziram com a adição de Api ou Api+Far ao CO, e Api ou Far ao CE. Nenhuma diferença foi observada nos polissacarídeos solúveis, resistência flexural, modulo de elasticidade, ou infiltração bacteriana para o CO e CE. Entretanto, uma menor fluorescência do esmalte remanescente foi observada para o CO e CE contendo as adições, e as imagens de MEV confirmaram um biofilme mais denso dos grupos controles para todos os materiais testados. CS3 com Api ou Api+Far e, CO ou CE com Api, Api+Far ou Api+Far+F mostraram uma maior redução na virulência do S. mutans. O efeito da incorporação desses compostos naturais é material dependente; entretanto, as adições não interferiram com a performance de adesão dos adesivos ou com as propriedades mecânicas do CO ou CE. Nenhuma adição foi capaz de suprimir a atividade do S. mutans, mas a incorporação de Api e Far em materiais restauradores pode ser uma abordagem promissora para melhorar as propriedades cariostáticas quando o esmalte ainda está presente Abstract: The aim of this in vitro study was to evaluate the incorporation of two anti-caries agents, Apigenin (Api) and tt-Farnesol (Far) into dental adhesives, a resin composite (CO), and a resin cement (CE), and its effect on the virulence of Streptococcus mutans, bonding performance to dentin, and mechanical properties of the CO and CE. Api (1 mM) and Far (5 mM) were incorporated separately, or in combination, into a self-etch adhesive (Clearfil S3 Bond Plus: CS3), and an each-and-rinse adhesive (OptiBond S: OPT). Api (5 mM) and Far (5 mM) were also incorporated separately or in combination, with or without fluoride (F), into CO and CE and compared to controls without additives. S. mutans was grown to form a biofilm on the surface of adhesive-coated hydroxyapatite, on CO or CE disks. Following 115 h of incubation, bacterial viability, dry-weight, polysaccharide composition (alkali soluble, water soluble and intracellular), and total protein content were quantified. Qualitatively SEM images from the biofilms were obtained. Bond strength was measured and SEM images of the dentin-adhesive interface were obtained. S. mutans biofilm was grown on the surface of class-I cavities restored using CO or CE. After incubation, was observed the carious demineralization and bacteria infiltration through a contraction-formed gap along the restoration margin, using confocal microscopy. In addition, the flexural strength and elastic modulus of CO and CE were determined. The adhesives, CS3 with Api or Api+Far, and OPT with Api or Far, reduced the dry-weight of S. mutans biofilm. Insoluble polysaccharide reduced with the addition of Api to CS3 and Far to OPT. Intracellular polysaccharide was also decreased by the addition of Api and Api+Far to CS3. No differences were observed in the total amount of protein or soluble polysaccharide. In addition, neither the bond strength nor the dentin-adhesive interfacial morphology was altered compared to the control groups. In the case of CO and CE, the bacterial viability reduced for CE with Api+Far+F. Dry-weight and insoluble and intracellular polysaccharides were reduced by the addition of Api, Api+Far or Api+Far+F for both materials. The amount of protein declined with the addition of Api or Api+Far to CO, and Api or Far to CE. No differences were observed in the soluble polysaccharides, flexural strength, elastic modulus, or bacteria infiltration for CO or CE. However, lower fluorescence of the remaining enamel was observed for both CO and CE groups with additives, and SEM images confirmed that the densest biofilms were observed in the control groups for all materials tested. CS3 with Api or Api+Far and, CO or CE with Api, Api+Far or Api+Far+F showed the greatest reduction of S. mutans virulence. The effect of incorporation of these natural compounds is material-dependent; however, the additives did not interfere with adhesive-bonding performance or with the mechanical properties of the CO or CE. No additive was able to completely suppress S. mutans activity, but the incorporation of Api and Far into restorative materials appears to be a promising approach for enhancing cariostatic properties when remaining enamel is present Doutorado Dentística Doutora em Clínica Odontológica CNPQ 140698/2013-2 FAPESP 2013/22813-9, 2014/17543-9

Orientadores: Fernanda Miori Pascon, Marcelo Giannini Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Os objetivos nesta tese foram: (1) investigar o efeito de FeCl3 na atividade da Catepsina K (CT-K) e capacidade de prevenir degradação do colágeno solúvel (CS) e insolúvel (CI); (2) comparar os efeitos do ácido fosfórico a 35% (AF) e soluções condicionantes contendo ácido cítrico (AC) e FeCl3 na resistência da união a dentina e degradação do colágeno. A tese foi apresentada em dois artigos: (1) para avaliar a atividade enzimática da CT-K e efeito de FeCl3 utilizou-se a espectrofluorimetria. Para avaliar a degradação do CS e CI (fibras de tendões de cauda de camundongo - FTCCs), os substratos foram incubados com CT-K e concentrações de 0,02% a 2% de FeCl3. O sobrenadante foi submetido à eletroforese de proteínas. Os experimentos foram feitos em triplicata. As FTCCs foram caracterizadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV). A quantidade de Fe absorvida foi determinada pela espectroscopia de energia dispersiva de raios-X (EDX). Os dados foram submetidos à análise de variância (Brown-Forsythe), normalidade (Shapiro-Wilk ou Anderson-Darling), ANOVA um fator + Holm-Sidak ou Tukey (?=5%). (2) para avaliar a resistência da união a microtração (?TBS), 78 dentes foram distribuídos em 13 grupos de soluções contendo AC e/ou FeCl3 nas concentrações: 10%-1,8%, 10%-0,6%, 10% AC, 5%-1,8%, 5%-0,6%, 5% AC, 1%-1,8%, 1%-0,6%, 1% AC, 1,8% FeCl3, 0,6% FeCl3 (aplicadas por 15 segundos) e com AF (aplicado por 5 ou 15 segundos). Utilizou-se o sistema adesivo Adper Scotchbond Multi-Purpose, fotoativado por 20 segundos com o aparelho Bluephase G2 (1200Mw/cm2). A ?TBS foi avaliada em 24 horas e 9 meses de armazenamento. Para a degradação do colágeno dentinário, fatias de dentina (n=3) foram tratadas com e sem FeCl3 e incubadas com CT-K. O sobrenadante foi submetido à eletroforese de proteínas. A dentina foi caracterizada após a incubação utilizando MEV. Outras fatias foram submetidas às soluções condicionantes por 15 segundos e analisadas utilizando EDX. Os dados foram submetidos aos testes: normalidade, ANOVA dois fatores + Holm-Sidak, ANOVA um fator + Tukey ou Fisher (?=5%). A análise por espectrofluorimetria revelou que o FeCl3 inibiu a atividade de CT-K nas concentrações 0,005%-0,08%e suprimiu a atividade na concentração 0,08%. FeCl3 foi capaz de prevenir a degradação do CS e CI contra CT-K para as FTCCs e para a dentina desmineralizada. As micrografias revelaram desenovelamento das FTCCs na ausência de FeCl3 e integridade quando expostas a concentrações de 0,02%-0,8%de FeCl3. Observou-se interação Fe/colágeno. Os grupos 5-0,6 e 5-1,8 de AC/FeCl3 apresentaram maiores valores de ?TBS comparados ao AF, independentemente do tempo de armazenamento. Observou-se redução da ?TBS aos 9 meses para todos os grupos. A solução contendo 1,8% de FeCl3 preservou a estrutura da dentina. Observou-se pela análise de EDX que a imersão nas soluções condicionantes com FeCl3 por 15 segundos foi suficiente para que as fibrilas de colágeno adsorvessem Fe. Concluiu-se que o FeCl3 agiu como um indutor de reticulação do colágeno e como inibidor da atividade CT-K e estas duas habilidades atuaram em conjunto para a preservação do colágeno tipo I nas FTCCs e na dentina desmineralizada Abstract: The aim of this thesis was (1) to investigate the effect of FeCl3 on Cathepsin K (CT-K) activity of and the ability to prevent degradation of soluble (SC) and insoluble collagen (IC), and (2) to compare the effects of phosphoric acid 35% and conditioning solutions containing citric acid (CA) and/or FeCl3 in dentine bond strength and collagen degradation. The thesis was presented in two articles: (1) spectrofluorimetry was used to evaluate the FeCl3 effect against CT-K enzymatic activity. To evaluate SC and IC (mouse tail tendon fibers-MTTF) degradation, the substrates were incubating with CT-K with different concentrations of FeCl3 (0.02% to 2%). The supernatant was submitted to protein electrophoresis. The experiments were done in triplicate. The fibers were characterized after incubation by scanning electron microscopy (SEM). The amount of Fe absorbed was determined by X-ray dispersive energy spectroscopy (EDX). Data were submitted to analysis of variance (Brown-Forsythe), normality test (Shapiro-Wilk or Anderson-Darling), and one-way ANOVA (Holm-Sidak or Tukey post-test) (?=5%). (2) for the microtensile bond strength (?TBS), 78 teeth were distributed into 13 groups of solutions containing citric acid (AC) and/or FeCl3 in different concentrations: 10%-1,8%, 10%-0,6%, 10% AC, 5%-1,8%, 5%-0,6%, 5% AC, 1%-1,8%, 1%-0,6%, 1% AC, 1,8% FeCl3, 0,6% FeCl3 (applied for 15 seconds) e com AF (applied for 5 and 15 seconds). The Adper Scotchbond Multi-Purpose adhesive system was used and light/cured for 20 seconds with Bluephase G2 (1200Mw/cm2). The ?TBS was evaluated at 24 hours and 9 months of storage. For the dentine collagen degradation, dentine slices (n=3) were treated with and without FeCl3 were incubated with CT-K. The supernatant was submitted to protein electrophoresis. Dentine was characterized after enzymatic treatment by SEM, and other slices were submitted to conditioning solutions and analyzed by EDX. The data were submitted to the tests: normality, two¿way ANOVA and post-test Holm-Sidak, one¿way ANOVA and Tukey or Fisher tests (?=5%). Spectrofluorimetry analysis revealed that FeCl3 inhibited CT-K activity at concentrations 0.005%-0.08% and suppressed activity when using 0.08%. FeCl3 was able to prevent the degradation of soluble collagen and collagen fibers against CT-K for the MTTF and the demineralized dentine. The micrographs revealed unraveling of collagen fibers in the absence of FeCl3 and showed fiber integrity exposed to 0.02%-2% FeCl3 concentrations. The Fe/collagen interaction was observed. AC/FeCl3 5-0.6 and 5-1.8 solutions had higher ?TBS values ??compared to the AF, regardless of storage time. A reduction of ?TBS was observed at 9 months for all groups. The treatment solution 1.8% FeCl3 preserved the dentine structure. The EDX analysis indicated that the 15 second immersion in the FeCl3 conditioning solutions was sufficient for the collagen fibrils to adsorb Fe. It was concluded that FeCl3 acted both as an inducer of collagen cross-linking and as inhibitor of CT-K activity, both abilities acted together for the preservation of collagen type I on the MTTF and on the demineralized dentine Doutorado Materiais Dentários Doutora em Materiais Dentários CAPES 99999.010711/2014-07, 1777-2014

Orientador: Edgard Graner Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O carcinoma espinocelular (CEC) é a neoplasia epitelial maligna mais frequente na cavidade oral, que pode apresentar vários graus de diferenciação escamosa e emite metástases em linfonodos regionais precocemente. Ocorre predominantemente na quinta e sexta décadas de vida em pacientes etilistas e tabagistas. O prognóstico é dependente do tamanho do tumor primário e da presença de linfonodos positivos e/ou metástases à distância no momento do diagnóstico. A cirurgia é a principal modalidade terapêutica para o CEC oral, no entanto, em estágios avançados, os pacientes são incluídos em protocolos radioterápicos e quimioradioterápicos. 5-fluorouracil (5-FU), cisplatina (CDDP) e paclitaxel (PTX) são drogas usadas em regimes quimioterapêuticos de várias neoplasias, dentre as quais o CEC oral. Entretanto, independente da modalidade de tratamento, a taxa de sobrevida global em 5 anos ainda está próxima a 50%. Diversos estudos mostram que a enzima metabólica ácido graxo sintase (FASN), responsável pela biossíntese endógena de ácidos graxos de cadeia longa, apresenta expressão aumentada em neoplasias malignas, incluindo o CEC oral, no qual está aparentemente associada a um pior prognóstico. Orlistat (ORL) é uma droga antiobesidade que também possui propriedades antineoplásicas por inibir de maneira irreversivel FASN. Em nosso laboratório, demonstramos que os camundongos BALB/c nude inoculados de maneira ortotópica com células SCC-9 ZsGreen LN1 e tratados com ORL apresentam CECs de língua menores e redução significativa (43%) no número de metástases para linfonodos cervicais. Até o momento, não existem estudos investigando o efeito de ORL como adjuvante nos protocolos de quimioterapia em uso clínico. Portanto, no presente trabalho, investigamos os efeitos da associação de ORL com 5-FU, CDDP e PTX, em seus respectivos IC50, na linhagem celular metastática SCC-9 ZsGreen LN1, sobre a proliferação, morte, migração (em monocamada e em transwell) e invasão celular. As combinações ORL + CDDP (OC) e ORL + PTX (OP) foram as únicas capazes de aumentar significativamente os índices apoptóticos em 48 h de tratamento, o que foi precedido por acúmulo das células nas fases S e G2/M do ciclo celular, respectivamente. A terapia ORL + 5-FU (OF) não foi capaz de induzir alterações significativas na progressão do ciclo ou na morte celular. OP reduziu a expressão de ciclina B1, mas sem causar alterações significativas em CDK1 ou na fosfatase Cdc25C, os quais constituem complexos proteicos envolvidos diretamente na transição G2/M. Já OC, apesar de não alterar os níveis proteicos de CDK1, reduziu a expressão de ciclina B1 e de Cdc25C. OC e OP aumentaram a expressão de FASN mas não alteraram significativamente os níveis do receptor ERBB2, envolvido na regulação desta enzima. O fenótipo invasivo foi reduzido pelo tratamento com OC e OP, mas a capacidade migratória das células foi alterada principalmente pela ação de PTX. Em conjunto, estes achados sugerem que as combinações OC e OP têm efeitos sinérgicos nas células metastáticas SCC-9 ZsGreen LN-1 e potencial aplicação no tratamento de CECs orais Abstract: Squamous cell carcinoma (SCC) is the most frequent malignant epithelial tumor of the oral cavity, which presents variable degree of squamous differentiation and early regional lymph node metastases. It is most frequent in alcohol and tobacco users at the fifth and sixth decades of life. The prognosis of oral SCC depends on the size of the primary tumor, presence of positive lymph nodes and / or distant metastases at the moment of diagnosis. Surgery is the main treatment modality of choice for oral SCC, however, in advanced stages, patients are included in radiotherapy and chemoradiotherapy protocols. 5-fluorouracil (5-FU), cisplatin (CDDP) and paclitaxel (PTX) are used in chemotherapeutic regimens of several neoplasms, including OSCC. However, regardless the treatment modality, the overall 5-year survival rate is approximately 50%. Several studies demonstrate that the metabolic enzyme fatty acid synthase (FASN), responsible for the endogenous biosynthesis of long-chain fatty acids, is highly expressed in malignant neoplasms, including oral SCC, in which it seems to be associated with a worse prognosis. Orlistat (ORL) is an anti-obesity drug that also has antineoplastic properties by irreversibly inhibiting FASN. In our laboratory, we previously demonstrated that BALB/c nude mice orthotopically inoculated with SCC-9 ZsGreen LN1 cells and treated with ORL have smaller primary tumors as well as significant less cervical lymph node metastases (43%). To date, there are no studies investigating the effect of ORL as an adjuvant for chemotherapy of OSCC. In the present study, we describe the effects of ORL combined with 5-FU, CDDP and PTX at their respective IC50 on proliferation, death, migration and invasion on metastatic SCC-9 ZsGreen LN-1 cells. ORL + CDDP (OC) and ORL + PTX (OP) significantly increased apoptosis after 48 h, which was preceded by the accumulation of cells in the S and G2/M phases of the cell cycle, respectively. ORL + 5-FU therapy (OF) did not change cell cycle progression or cell death. OP decreased cyclin B1 production without significant changes in CDK1 and Cdc25C levels, which are responsible for G2/M transition. Although CDK1 were not changed by OC, this combination reduced the expression of cyclin B1 and Cdc25C. OC and OP increased FASN but not changed ERBB2, a cell surface receptor involved in the regulation of the former. The invasive phenotype was reduced by treatment with OC and OP, however, PTX was the main drug responsible for the inhibition of cell migration. Together, these findings suggest that OC and OP combinations show synergistic effects in the metastatic SCC-9 ZsGreen LN-1 cells and may have potential application for the oral SCC treatment Doutorado Patologia Doutora em Estomatopatologia FAPESP 2012/25160-8 CAPES

Orientador: Giselle Zenker Justo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A epiderme é constantemente confrontada por inúmeros agentes estressores. Variações na umidade ou exposição à radiação ultravioleta afetam o balanço osmótico e o estado redox celular alterando, assim, as características fisiológicas da pele. Em resposta aos diferentes estímulos os queratinócitos ativam vias distintas de sinalização. Portanto, o balanço entre as vias de sobrevivência e morte determina o destino celular. A fim de se determinar possíveis alvos moleculares associados a morte e sobrevivência de queratinócitos, vias de sinalização celular disparadas pela exposição ao choque hiperosmótico e estresse oxidativo foram investigadas em células HaCaT tratadas com sorbitol e peróxido de hidrogênio (H2O2) respectivamente. Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que, em ambos os modelos, a redução da viabilidade celular dependeu da dose e do tempo de exposição ao agente extressor, apresentando valores de IC50 de aproximadamente 1 mol/L de sorbitol e 2 mmol/L de H2O2 após 2 e 4 h de exposição respectivamente. Os danos causados foram irreversíveis e estão associados à ativação da via intrínseca de morte celular apoptótica, acompanhada de perda da integridade da membrana lisossomal, extravasamento de catepsina B para o citosol e alterações morfológicas atípicas no citoesqueleto, principalmente no arranjo dos filamentos de actina. A investigação do status de funcionamento de proteínas quinases ativadas por mitógenos (MAPKs) e do estado redox celular indicou que esses eventos foram mediados por espécies reativas de oxigênio e pela ação da quinase c-Jun N-terminal (JNK). Adicionalmente, a exposição dos queratinócitos aos diferentes estímulos estressores foi acompanhada de ativação da proteína tirosina fosfatase de baixa massa molecular (LMWPTP), cuja relevância nos estudos de biologia celular aumentou nos últimos anos. A LMWPTP atua em importantes vias de sinalização que estão associadas à sobrevivência e morte celular. Cientificamente, este estudo é pioneiro ao demonstrar alterações no citoesqueleto e ação de proteínas quinases e fosfatases nos mecanismos que determinam o destino de queratinócitos expostos ao choque hiperosmótico e ao estresse oxidativo. De fato, o melhor conhecimento da relação entre as vias de sobrevivência e morte celular em queratinócitos é fundamental para promover o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas aplicadas às doenças dermatológicas. Desta maneira, o presente trabalho apresenta resultados inéditos, contribuindo no conhecimento da biologia dos queratinócitos e com sua aplicação no desenvolvimento da terapia dermatológica Abstract: The epidermis is constantly confronted with multiple environmental stressors. Changes in humidity or exposition to UV radiation affect the redox state and osmotic balance, modifying the physiological characteristics of the skin. In response to different stresses, epidermal keratinocytes can activate distinct signaling pathways and the balance between death and life signals will determine the cell fate, leading to programmed cell death or cell survival. In order to determine the possible molecular targets associated to death and survival of keratinocytes, the signaling pathways activated by the exposition of HaCaT cells to sorbitol (hyperosmotic shock) and H2O2 (oxidative stress) were investigated. The results showed that in both models the reduction in cellular viability was time and dose-dependent, displaying IC50 values of 1 mol/L for sorbitol and 2 mmol/L for H2O2 after 2 and 4 h of exposition to the stressors, respectively. The damages caused by the stressors were irreversible and associated to the induction of the intrinsic apoptotic pathway, accompanied by the loss of lisosomal membrane integrity, release of cathepsin B to cytosol and atypical morphological alterations in cytoskeleton, particularly in the arrangement of actin filaments. Analysis of the functional status of mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and the cellular redox state showed that such events were mediated by reactive oxygen species and occurred through c-Jun N-terminal kinase (JNK) activation. Additionally, exposure of keratinocytes to the different stress inducers was followed by low molecular weight tyrosine protein phosphatase (LMWPTP) activation, which is responsible for the regulation of important signaling pathways associated to cell survival and death. It is important to highlight the novelty of these results showing alterations in the cytoskeleton and the action of protein kinases and phosphatases during exposure of keratinocytes to hyperosmotic and oxidative stresses. In fact, the development of more efficacious therapies against skin diseases depends on the establishment of the relationships between the survival and death signaling pathways in keratinocytes. In this direction, this work contributes to a better understanding of the keratinocyte biology and the improvement of traditional dermatological therapies Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular