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RESUMO Objetivo: Avaliar possíveis mecanismos atribuídos ao valor prognóstico da reserva microvascular isquêmica periférica em pacientes com sepse. Métodos: Este estudo de coorte observacional incluiu 46 pacientes consecutivos com sepse em uma unidade de terapia intensiva entre novembro de 2020 e outubro de 2021. Após a ressuscitação volêmica com fluidos, avaliou-se a reserva microvascular isquêmica periférica mediante a associação dos testes hiperemia reativa pós-oclusão e índice de perfusão periférica. Adicionalmente, amostras de sangue venoso periférico foram coletadas para avaliar os níveis dos neuropeptídeos substância P e peptídeo relacionado ao gene da calcitonina no membro superior do paciente antes e imediatamente após o teste de hiperemia reativa pós-oclusão. Resultados: Não houve correlação estatisticamente significativa (p > 0,05) entre os valores basais ou variações dos níveis de neuropeptídeos e a reserva microvascular isquêmica periférica. Conclusão: Embora o peptídeo relacionado ao gene da calcitonina e a substância P possam desempenhar papel prognóstico na sepse, esses neuropeptídeos não parecem contribuir para a reserva microvascular isquêmica periférica.

Constipation is a serious public health problem that afflicts thousands of patients worldwide. It is believed that with the modern lifestyle, followed by constant stress and inadequate eating habits, the incidence of constipation will increase considerably in coming decades. Constipation is caused by abnormal functioning of the digestive tract which is not yet fully elucidated. It is known that the enteric nervous system is responsible for sensory and motor functions of the digestive tract, which makes it work in perfect sync and perform peristalsis, promoting proper transit of the bolus and subsequently fecal mass. The vast majority of pathologies afflicting the gastrointestinal tract are originated from disturb in specific neurons in the enteric nervous system and probably the same happens with constipation. Hence, the objective of this study was, by immunohistochemistry, to characterize and compare the expression of several neuropeptides of the enteric nervous system in patients with constipation and individuals not constipated. The results showed that among the various types of neurons studied, constipated patients have fewer neurons expressing calretinin and choline acetyltransferase, characteristic neuropeptides from afferent neurons and excitatory neurons engines. We believe that these results can help in future treatment techniques and prevention of constipation. A constipação intestinal é um problema grave de saúde pública que aflige milhares de pacientes em todo o mundo. Acredita-se que, com o estilo de vida moderno, seguido de constante estresse e inadequação dos hábitos alimentares, a incidência da constipação intestinal aumente consideravelmente nas próximas décadas. A constipação é causada por alterações no funcionamento do trato digestório que ainda não estão completamente elucidadas. Sabe-se que o sistema nervoso entérico é responsável pelas funções sensitivas e motoras do trato digestivo, o que confere a este funcionar sob perfeita sincronia e realizar a peristalse, promovendo o trânsito adequado do bolo alimentar e posteriormente do bolo fecal. A grande maioria das patologias que afligem o trato gastrointestinal são originadas de distúrbios em neurônios específicos do sistema nervoso entérico e, provavelmente, o mesmo ocorre com a constipação intestinal. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi, através da técnica de imunohistoquímica, caracterizar e comparar a expressão dos diversos neuropeptídios do sistema nervoso entérico em pacientes portadores de constipação intestinal e indivíduos não constipados. Os resultados demonstraram que, dentre os vários tipos de neurônios estudados, os pacientes constipados apresentam uma menor quantidade de neurônios que expressam calretinina e colina-acetiltransferase, neuropeptídios característicos de neurônios aferentes e de neurônios motores excitatórios. Acreditamos que esses resultados possam colaborar com futuras técnicas de tratamento e com a prevenção da constipação intestinal. Mestre em Ciências da Saúde

Orientadores: Claudio Aparecido Casatti, Roelf Justino Cruz Rizzolo Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O hormônio concentrador de melanina (MCH) e a orexina A (OXA) são neuromediadores expressos em neurônios distribuídos no diencéfalo, principalmente na área hipotalâmica lateral, que emitem projeções para inúmeras regiões do neuroeixo. Esses neuropeptídeos exercem potente ação orexigênica, estimulando a ingestão alimentar e o controle do balanço energético. Em vista disso, propusemos analisar esses sistemas neuropeptidérgicos no núcleo motor dorsal do nervo vago, um importante grupamento neuronal pré-motor parassimpático responsável pelas modulações da motilidade e secreção do tubo gastrointestinal, que indiretamente colaboram na ingestão alimentar. Para esses propósitos, foram empregados os métodos de transporte neuronal retrógrado e imunoistoquímica. Os principais dados advindos desse estudo neuroanatômico permite concluir que o núcleo motor dorsal do nervo vago apresenta uma distribuição heterogênea da inervação imunorreativa a OXA (OXA-ir) e ao MCH (MCH-ir), com preponderância da inervação OXA-ir. Os neurônios desse núcleo parassimpático que enviam fibras nervosas para a parte abdominal do esôfago, estômago e segmento proximal do duodeno, recebem inúmeros contatos morfológicos dos terminais nervosos OXA-ir ou ao MCH-ir, sugestivos de contatos sinápticos. Finalmente, as aferências diencefálicas OXA-ir ou ao MCH-ir para o DMV, foram elucidadas, revelando que as partes dorsais e laterais da área hipotalâmica lateral são os principais locais de origem dessa inervação neuropeptidérgica. Abstarct: Melanin-concentrating hormone (MCH) and orexin-A (OXA) are neuromediators expressed in neurons distributed in the diencephalum, mainly in the lateral hypothalamic area, projecting nerve fibers to several parts of the central nervous system. These neuropeptides exert potent orexigenic activity, increasing feeding and controlling the energetic balance. Consequently, these neuropeptidergic systems were evaluated in the dorsal motor nucleus of the vagus nerve, a fundamental premotor parasympathetic nucleus that modulates the motility and secretion of the gastrointestinal tract, indirectly collaborating in the feeding behaviour. For these purposes retrograde neuronal tracing and immunohistochemistry methods were used. The main results from this neuroanatomical study showed that the dorsal motor nucleus of the vagus nerve exhibits a heterogeneous rostro-caudal MCH- or OXA-innervation patterns, being the latter more significant. Parasympathetic neurons that send nerve fibers to subdiafragmatic esophagus, stomach and proximal duodenum receive MCH- or OXA-immunoreactive nerve endings like synapses. Finally, the MCH or OXA-immunoreactive diencephalic afferents to dorsal motor nucleus of the vagus nerve were elucidated. These afferents are mainly from dorsal and lateral parts of the lateral hypothalamic area. Doutorado Anatomia Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)]/Mas receptor is a counter-regulatory axis that counteracts detrimental renin-angiotensin system (RAS) effects, especially regarding systemic inflammation, vasopressin (AVP) release, and hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) activation. However, it is not completely understood whether this system may control centrally or systemically the late phase of systemic inflammation. Thus, the aim of this study was to determine whether intracerebroventricular (i.c.v.) administration of Ang-(1-7) can modulate systemic inflammation through the activation of humoral pathways in late phase of endotoxemia. Endotoxemia was induced by systemic injection of lipopolysaccharide (LPS) (1.5 mg/kg, i.v.) in Wistar rats. Ang-(1-7) (0.3 nmol in 2 &micro, L) promoted the release of AVP and attenuated interleukin-6 (IL-6) and nitric oxide (NO) levels but increased interleukin-10 (IL-10) in the serum of the endotoxemic rats. The central administration of Mas receptor antagonist A779 (3 nmol in 2 &micro, L, i.c.v.) abolished these anti-inflammatory effects in endotoxemic rats. Furthermore, Ang-(1-7) applied centrally restored mean arterial blood pressure (MABP) without affecting heart rate (HR) and prevented vascular hyporesponsiveness to norepinephrine (NE) and AVP in animals that received LPS. Together, our results indicate that Ang-(1-7) applied centrally promotes a systemic anti-inflammatory effect through the central Mas receptor and activation of the humoral pathway mediated by AVP.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2020. Em insetos, diversas moléculas podem ser estudadas e utilizadas no controle de pragas, como neuropeptídeos, que atuam como hormônios em processos fisiológicos diversos, como atividade muscular, cardíaca, metamorfose, reprodução, entre outros. Estas moléculas agem e são controladas diretamente pela combinação do sistema endócrino e neural. Neste estudo, incialmente foram avaliados oito neuropeptídeos e/ou receptores de neuropeptídeos distintos do inseto-praga Anthonomus grandis, visando a identificação de moléculas alvo para seu controle, incluíndo o receptor de hormônio ecdisona (EcR), e o receptor de hormônio precursor de ecdise (ETHR), hormônio adipocinético e seu receptor (AKH/AKHR), hormônio relacionado a AKH/Corazonin e seu receptor (ACP/ACPR) e hormônio alatostatina e seu receptor (AST/ASTR). A validação funcional destas moléculas foi realizada, via RNA interferente, em larvas de 3o instar e fêmeas adultas de A. grandis. O silenciamento destes genes através do dsRNA, em larvas, resultou em sete genes com letalidade acima de 40%: EcR, ETHR, AKH, ACP, ACPR, AST e ASTR. Em fêmeas adultas, o silenciamento destes genes resultou também em setes genes que possuíam mortalidade acima de 40%: EcR, ETHR, AKHR, ACP, ACPR, AST e ASTR. Ademais, as toxinas Cry também podem ser uma alternativa de controle de insetos por sua alta especificidade para determinadas espécies ou ordens. Além disto, essas toxinas não são tóxicas para vertebrados, o que é uma vantagem ambiental e alternativa ao uso de inseticidas. Devido a sua utilização no controle de insetos-praga, surgiram também necessidades de entendimento dos mecanismos de sua ação, ligação aos receptores e pontos que podem modular a resistência às toxinas Cry nas mais variadas ordens de insetos ou espécie de alto interesse agrícola. Os receptores de toxina Cry são fundamentais nos estudos do entendimento da toxicidade dessas toxinas, visto que são o elo entre a atividade tóxica ou resistência. Estes receptores estão localizados no intestino dos insetos e recentemente com a técnica do RNA interferente foi possível elencar com maiores chances os receptores de determinada toxina e em determinada espécie. No presente estudo também foram selecionados possíveis receptores de toxina Cry1Ba6 e Cry10Aa em A. grandis, que mostraram atividade tóxica, especialmente a toxina Cry10Aa, que é de grande interesse e necessidade. A seleção incial resultou em 5 candidatos finais. Em seguida, foram produzidas as toxinas Cry em sistema de expressão heterólogo E. coli, com distintas construções e alterações, mas que não obteve sucesso pela baixa quantidade de toxina resultante, tornando-se inviável. Mesmo sem a toxina para os testes de atividade tóxica e desafio do silenciamento dos candidatos a receptor, o silenciamento destes genes foi testado quanto a letalidade para a dose inicial de 500 ng em larvas de 3o instar. Destes, um se mostrou altamente letal, resultando em mortalidade acima de 90% com 500 ng de dsRNA para o gene CADERINA e mesmo em baixa concentração, 5 ng, com mortalidade em torno de 70%, e fenótipo letal de larvas escurecidas não desenvolvidas. Portanto, até o presente momento não foi possível identificar nenhum receptor de toxina Cry10Aa ou Cry1Ba6, mas foi possível identificar diversos neuropeptídeos que demonstraram grande potencial de aplicação no controle de A. grandis, e também um possível receptor de toxina Cry, altamente letal, confirmando suas funcionalidades para a sobrevivência e o desenvolvimento desse inseto. Diante de sua importância no desenvolvimento de A. grandis e na compreensão da fisiologia desta importante praga, futuramente esses genes poderão ser utilizados junto a ferramentas biotecnológicas mais específicas. In insects, several molecules can be studied and used in pest control, such as neuropeptides, which act as hormones in different physiological processes, such as muscle, cardiac, metamorphosis, reproduction, among others. These molecules act and are controlled directly by the combination of the endocrine and neural systems. In this study, eight neuropeptides and / or neuropeptide receptors distinct from the pest insect Anthonomus grandis were initially evaluated, aiming at the identification of target molecules for their control, including the ecdysone hormone receptor (EcR), and the ecdysis precursor hormone receptor (ETHR), adipokinetic hormone and its receptor (AKH / AKHR), hormone related to AKH / Corazonin and its receptor (ACP / ACPR) and hormone alatostatin and its receptor (AST / ASTR). The functional validation of these molecules was performed, via interfering RNA, in 3rd instar larvae and adult A. grandis females. The silencing of these genes through dsRNA, in larvae, resulted in seven genes with lethality above 40%: EcR, ETHR, AKH, ACP, ACPR, AST and ASTR. In adult females, the silencing of these genes also resulted in seven genes that had mortality above 40%: EcR, ETHR, AKHR, ACP, ACPR, AST and ASTR. In addition, Cry toxins can also be an alternative to insect control due to their high specificity for certain species or orders. In addition, these toxins are not toxic to vertebrates, which is an environmental advantage and an alternative to the use of insecticides. Due to its use in the control of insect pests, there were also needs to understand the mechanisms of its action, connection to receptors and points that can modulate resistance to Cry toxins in the most varied orders of insects or species of high agricultural interest. Cry toxin receptors are essential in studies to understand the toxicity of these toxins, since they are the link between toxic activity or resistance. These receptors are located in the intestine of insects and recently with the interfering RNA technique it was possible to list the receptors of a certain toxin and in a specific species with greater chances. In the present study, possible receptors for toxin Cry1Ba6 and Cry10Aa in A. grandis were also selected, which showed toxic activity, especially the toxin Cry10Aa, which is of great interest and need. The initial selection resulted in 5 final candidates. Then, the Cry toxins were produced in a heterologous E. coli expression system, with different constructions and alterations, but which was not successful due to the resulting low amount of toxin, making it unfeasible. Even without the toxin for the tests of toxic activity and challenge of silencing the candidate candidates, the silencing of these genes was tested for lethality for the initial dose of 500 ng in 3rd instar larvae. Of these, one proved to be highly lethal, resulting in mortality above 90% with 500 ng of dsRNA for the CADERINA gene and even in low concentration, 5 ng, with mortality around 70%, and lethal phenotype of undeveloped black larvae. Therefore, up to the present moment it has not been possible to identify any Cry10Aa or Cry1Ba6 toxin receptor, but it has been possible to identify several neuropeptides that have shown great potential for application in the control of A. grandis, as well as a possible Cry toxin receptor, highly lethal, confirming its functionalities for the survival and development of this insect. In view of its importance in the development of A. grandis and in the understanding of the physiology of this important pest, in the future these genes may be used together with more specific biotechnological tools.

Em insetos, diversas moléculas podem ser estudadas e utilizadas no controle de pragas, como neuropeptídeos, que atuam como hormônios em processos fisiológicos diversos, como atividade muscular, cardíaca, metamorfose, reprodução, entre outros. Estas moléculas agem e são controladas diretamente pela combinação do sistema endócrino e neural. Neste estudo, incialmente foram avaliados oito neuropeptídeos e/ou receptores de neuropeptídeos distintos do inseto-praga Anthonomus grandis, visando a identificação de moléculas alvo para seu controle, incluíndo o receptor de hormônio ecdisona (EcR), e o receptor de hormônio precursor de ecdise (ETHR), hormônio adipocinético e seu receptor (AKH/AKHR), hormônio relacionado a AKH/Corazonin e seu receptor (ACP/ACPR) e hormônio alatostatina e seu receptor (AST/ASTR). A validação funcional destas moléculas foi realizada, via RNA interferente, em larvas de 3o instar e fêmeas adultas de A. grandis. O silenciamento destes genes através do dsRNA, em larvas, resultou em sete genes com letalidade acima de 40%: EcR, ETHR, AKH, ACP, ACPR, AST e ASTR. Em fêmeas adultas, o silenciamento destes genes resultou também em setes genes que possuíam mortalidade acima de 40%: EcR, ETHR, AKHR, ACP, ACPR, AST e ASTR. Ademais, as toxinas Cry também podem ser uma alternativa de controle de insetos por sua alta especificidade para determinadas espécies ou ordens. Além disto, essas toxinas não são tóxicas para vertebrados, o que é uma vantagem ambiental e alternativa ao uso de inseticidas. Devido a sua utilização no controle de insetos-praga, surgiram também necessidades de entendimento dos mecanismos de sua ação, ligação aos receptores e pontos que podem modular a resistência às toxinas Cry nas mais variadas ordens de insetos ou espécie de alto interesse agrícola. Os receptores de toxina Cry são fundamentais nos estudos do entendimento da toxicidade dessas toxinas, visto que são o elo entre a atividade tóxica ou resistência. Estes receptores estão localizados no intestino dos insetos e recentemente com a técnica do RNA interferente foi possível elencar com maiores chances os receptores de determinada toxina e em determinada espécie. No presente estudo também foram selecionados possíveis receptores de toxina Cry1Ba6 e Cry10Aa em A. grandis, que mostraram atividade tóxica, especialmente a toxina Cry10Aa, que é de grande interesse e necessidade. A seleção incial resultou em 5 candidatos finais. Em seguida, foram produzidas as toxinas Cry em sistema de expressão heterólogo E. coli, com distintas construções e alterações, mas que não obteve sucesso pela baixa quantidade de toxina resultante, tornando-se inviável. Mesmo sem a toxina para os testes de atividade tóxica e desafio do silenciamento dos candidatos a receptor, o silenciamento destes genes foi testado quanto a letalidade para a dose inicial de 500 ng em larvas de 3o instar. Destes, um se mostrou altamente letal, resultando em mortalidade acima de 90% com 500 ng de dsRNA para o gene CADERINA e mesmo em baixa concentração, 5 ng, com mortalidade em torno de 70%, e fenótipo letal de larvas escurecidas não desenvolvidas. Portanto, até o presente momento não foi possível identificar nenhum receptor de toxina Cry10Aa ou Cry1Ba6, mas foi possível identificar diversos neuropeptídeos que demonstraram grande potencial de aplicação no controle de A. grandis, e também um possível receptor de toxina Cry, altamente letal, confirmando suas funcionalidades para a sobrevivência e o desenvolvimento desse inseto. Diante de sua importância no desenvolvimento de A. grandis e na compreensão da fisiologia desta importante praga, futuramente esses genes poderão ser utilizados junto a ferramentas biotecnológicas mais específicas. Made available in DSpace on 2020-11-25T09:05:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2020-AnaGabrielaBorgesLeite.pdf: 3332568 bytes, checksum: 8ee8ce14da71635d31c78b991173ec81 (MD5) Previous issue date: 2020 Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)- Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília, DF. Orientadora: Maria Fatima Grossi-de-Sa, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.

Breast cancer (BC) is the type of cancer with the highest incidence in women worldwide. It has four molecular subtypes (Luminal A, Luminal B, HER2 and Triple Negative / Basal) and each of them has different prognoses and needs for interventions that are efficient in the treatment and increase patient survival. In this sense, the evaluation of gene and protein expression in neoplastic breast tissues of the CM subtypes using translational bioinformatics (TB) allows a wide analysis of several databases. TB works by bringing biological knowledge that can be applied in the clinic based on genomic, proteomic, histological and clinical data of patients with CM. The objective of this work is to identify the immunological profile through gene and protein expression in the molecular subtypes of breast cancer using bioinformatics tools.The methodology used involved several computational tools that allowed data collection in databases (Genomic Cancer Atlas -TCGA, Entrez Gene of NCBI, GeneCards, Proteomic Cancer Atlas -TCPA, DAVID) and analyzes (Venn diagram, Encyclopedia of Genes and Genomes -KEGG, TCGAbiolinks, Tumor Immune Cell Estimation Resource - TIMER, Prediction of Clinical Data of Genomic Profiles - PRECOG). In the statistical analyzes, the GraphPad Prism Software version 7, the Two-Way ANOVA two-way test and the two-tailed unpaired t test were used. The analysis of the differentially expressed genes (GDEs) associated with cancer metabolic pathways, genes expressed exclusively in each subtype were identified when compared to normal breast tissue: Cd38 at basal, Erbb2 at Her2 and Esr1 and Pgr in the luminal. In the analysis of immune cells, M1 macrophages were found in the subtypes with the worst prognosis (baseline and HER2) and M2 in those with the Best prognosis (luminal A and luminal B). The genes associated with the Thelper1, Thelper2, Thelper17 and Treg responses did not quantitatively determine the type of immune response. However, the basal subtype had more genes associated with the Treg response when compared to the other subtypes. In the evaluation of cell type genes (macrophages, neutrophils, neuropeptides and neuroreceptors), genes with impact on survival were identified and some that were also associated with the presence or absence of neutrophils, such as Lrp2, Serpina1, Cxcl10 and Qrfpr, and the proteins associated with immunosuppression, such as PDL1, which were more expressed at basal when compared with the other subtypes of CM and those associated with the pathways that stimulate carcinogenesis and/or dysregulation of cell proliferation, such as IRS1 and AKT that were more expressed in the neoplasic breast tissues of the luminal and basal subtypes in relation to the other subtypes, respectively. Therefore, the genes and proteins that had an impact on survival and/or interfere by some mechanism in the recruitment of immune cells found in the tumor microenvironment can be the target of in vitro and in vivo studies that can elucidate the metabolic mechanisms. With the results of this study confirmed, these genes and proteins can be new markers of CM and enable the development of new, more effective therapies. O Câncer de mama (CM) é o tipo de câncer com maior incidência nas mulheres no mundo. Ele apresenta quatro subtipos moleculares (Luminal A, Luminal B, HER2 e Triplo Negativo/Basal) e cada um deles têm prognósticos diferentes e necessidade de intervenções que sejam eficientes no tratamento e aumentem a sobrevida dos pacientes. Nesse sentido a avaliação da expressão gênica e proteica nos tecidos mamários neoplásicos dos subtipos de CM utilizando a bioinformática translacional (BT) permite uma análise ampla de diversos bancos e dados. A BT atua trazendo conhecimento biológico que pode ser aplicado na clínica a partir de dados genômicos, proteômicos, histológicos e clínicos de pacientes com CM. O objetivo deste trabalho é identificar o perfil imunológico através da expressão gênica e proteica nos subtipos moleculares de câncer de mama utilizando ferramentas de bioinformática. A metodologia utilizada envolveu diversas ferramentas computacionais que permitiram a coleta de dados em bancos de dados (Atlas Genômico do Câncer -TCGA, Entrez Gene do NCBI, GeneCards, Atlas Proteômico do Câncer -TCPA, DAVID) e as análises (diagrama de Venn, Enciclopédia de Genes e Genomas -KEGG, TCGAbiolinks, Recurso de Estimativa de Células Imunes do Tumor - TIMER, Predição de Dados Clínicos de Perfis Genômicos - PRECOG). Nas análises estatísticas foi utilizado o Software GraphPad Prism versão 7, o teste Two-Way ANOVA bidirecional e o teste t bicaudal não pareado. A análise da expressão de genes diferencialmente expressos (GDEs) associados a vias metabólicas do câncer foi identificado genes expressos exclusivamente em cada subtipo quando comparado com o tecido mamário normal: Cd38 no basal, Erbb2 no Her2 e Esr1 e Pgr nos luminais. Na análise de células imunes foi encontrado macrófagos M1 nos subtipos de pior prognóstico (basal e HER2) e M2 naqueles de melhor prognóstico (luminal A e luminal B). O genes associados as resposta Thelper1, Thelper2, Thelper17 e Treg quantitativamente não determinaram o tipo de resposta imune. No entanto, o subtipo basal apresentou mais genes associados a resposta Treg quando comparado aos outros subtipos. Na avaliação dos genes dos tipo celulares (macrófagos, neutrófilos, neuropeptídeos e neuroreceptores) foi identificados genes com impacto na sobrevida e alguns que também estavam associados a presença ou ausência de neutrófilos, como Lrp2, Serpina1, Cxcl10 e Qrfpr, e as proteínas associadas à imunossupressão, como PDL1, que foram mais expressas no basal quando comparada com os outros subtipos de CM e àquelas associadas as vias que estimulam a carcinogênse e/ou desregulação da proliferação celular, como IRS1 e AKT que foram mais expressas nos tecido mamários neoplásicos dos subtipos luminais e basal em relação aos outros subtipos, respectivamente. Portanto, os genes e proteínas que tiveram impacto na sobrevida e/ou interferem por algum mecanismo no recrutamento das células imunes encontradas no microambiente tumoral podem ser alvo de estudos in vitro e in vivo que possam elucidar os mecanismos metabólicos. Sendo confirmado os resultados desse estudo, esses genes e proteínas podem ser novos marcadores do CM e possibilitar o desenvolvimento de novas terapias mais eficazes.

Objective: To evaluate the safety, tolerability and potential therapeutic effects of gastrin-releasing peptide in three children with autistic spectrum disorder. Methods: Case series study with the intravenous administration of gastrin-releasing peptide in the dose of 160 pmol/kg for four consecutive days. To evaluate the results, parental impressions the Childhood Autism Rating Scale (CARS) and the Clinical Global Impression (CGI) Scale. Each child underwent a new peptide cycle after two weeks. The children were followed for four weeks after the end of the infusions. Results: The gastrin-releasing peptide was well tolerated and no child had adverse effects. Two children had improved social interaction, with a slight improvement in joint attention and the interaction initiatives. Two showed reduction of stereotypes and improvement in verbal language. One child lost his compulsion to bathe, an effect that lasted two weeks after each infusion cycle. Average reduction in CARS score was 2.8 points. CGI was “minimally better” in two children and “much better” in one. Conclusions: This study suggests that the gastrin-releasing peptide is safe and may be effective in improving key symptoms of autism spectrum disorder, but its results should be interpreted with caution. Controlled clinical trials–randomized, double-blinded, and with more children–are needed to better evaluate the possible therapeutic effects of gastrin-releasing peptide in autism. Resumo: Objetivo: Avaliar a segurança, tolerabilidade e possíveis efeitos terapêuticos do peptídeo liberador de gastrina em três crianças com transtorno do espectro autista. Métodos: Estudo de casuística com administração intravenosa de peptídeo liberador de gastrina na dose de 160 pmol/kg por quatro dias consecutivos. Para avaliar os resultados, foram utilizadas a impressão dos pais, a Escala de Classificação de Autismo na Infância (CARS) e a Escala de Impressão Clínica Global (CGI). Cada criança foi submetida a novo ciclo de peptídeo após duas semanas. As crianças foram acompanhadas por quatro semanas após o término das infusões. Resultados: O peptídeo liberador de gastrina foi bem tolerado e nenhuma criança apresentou efeitos adversos. Duas crianças apresentaram melhora na interação social, com melhora na atenção compartilhada e nas iniciativas de interação. Duas mostraram redução dos estereotipias e melhora na linguagem verbal. Uma criança perdeu sua compulsão por banhos, efeito que durou duas semanas após cada ciclo de infusão. A redução média no escore da CARS foi 2,8 pontos. Quanto à CGI, os resultados foram “minimamente melhor em duas crianças” e “muito melhor” em uma. Conclusões: Este estudo sugere que o peptídeo liberador de gastrina é seguro e pode ser efetivo na melhora dos principais sintomas do transtorno do espectro autista, porém seus resultados devem ser interpretados com cautela. Ensaios clínicos controlados, randomizados, duplo-cego e com maior número de crianças são necessários para melhor avaliar os possíveis efeitos terapêuticos do peptídeo liberador de gastrina sobre o autismo. Keywords: Gastrin-releasing peptide receptor, Neuropeptides, Autism, Autism spectrum disorder, Palavras-chave: Receptor do peptídeo liberador de gastrina, Neuropeptídios, Autismo, Transtorno do espectro autista

Submitted by Carla de Moraes Machado (carla.demoraes@yahoo.com.br) on 2019-04-29T01:36:50Z No. of bitstreams: 1 Tese Carla de Moraes-completa corrigida.pdf: 13082869 bytes, checksum: fd6b1ec5cef89cd22837235261b2bc9e (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: Ficha catalográfica No arquivo submetido não consta a ficha catalográfica, item obrigatório para submissão. A ficha deve ser inserida no arquivo PDF logo após a folha de rosto do seu trabalho. problema 2: Financiamento recebido Nos agradecimentos você cita também a FAPESP como financiadora do seu projeto. Se recebeu auxilio de ambas coloque também a Fapesp no formulário de submissão. Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2019-04-29T13:08:54Z (GMT) Submitted by Carla de Moraes Machado (carla.demoraes@yahoo.com.br) on 2019-04-29T14:21:23Z No. of bitstreams: 1 Tese Carla de Moraes-completa corrigida.pdf: 13144551 bytes, checksum: d66b3443eb146d1b49f198a53786621e (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-04-30T13:30:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 machado_cm_dr_bot_par.pdf: 967103 bytes, checksum: eccb6ccc9c37fe455f11e6423f9b05f1 (MD5) Made available in DSpace on 2019-04-30T13:30:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 machado_cm_dr_bot_par.pdf: 967103 bytes, checksum: eccb6ccc9c37fe455f11e6423f9b05f1 (MD5) Previous issue date: 2019-02-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A associação do baixo peso ao nascer com alto risco de doenças como obesidade, diabete tipo 2 e doenças cardiovasculares na vida adulta levaram à hipótese da “Origem Desenvolvimentista da Saúde e Doença” (DOHaD). Nessa hipótese, Programação se refere às adaptações executadas pelo organismo frente a insultos ocorridos durante seu desenvolvimento, gerando efeitos permanentes ou não na estrutura e função de órgãos. A nutrição materna durante o desenvolvimento do indivíduo é considerada um importante indutor de Programação, visto que a deficiência de nutrientes, durante a prenhez e a lactação, provoca alterações significativas no peso corpóreo, no balanço energético, na ingestão alimentar e na expressão de neuropeptídeos. O hormônio concentrador de melanina (MCH) e o transcrito regulado pela cocaína e anfetamina (CART) são neuropeptídeos expressos na área hipotalâmica lateral (LHA), que participam da regulação do balanço energético e do comportamento alimentar, nos quais o MCH desempenha papel orexígeno e o CART, anorexígeno. Nosso objetivo foi analisar o número e a distribuição de neurônios MCH e CART e sua ultraestrutura na LHA de ratos cujas mães foram submetidas à restrição alimentar durante a prenhez e lactação. Fêmeas prenhes Wistar foram separadas em dois grupos experimentais: grupo controle (GC), dieta padrão ad libitum, e grupo restrição calórica (GR), dieta de 50% de restrição em relação ao grupo controle durante os períodos de prenhez e lactação. Foram avaliados o número de animais de cada prole e o peso no DPN 1. Os filhotes machos, provenientes dos grupos restrição (GR) e controle (GC), foram divididos em cinco subgrupos etários (n=8) de 21, 28, 50, 90 e 540 dias. Foram avaliados o peso e comprimento corpóreo de cada animal, sua ingestão alimentar após o desmame, e os níveis sanguíneos de glicose, insulina e leptina, além dos testes de tolerância oral à glicose e à insulina nos animais de 540 dias. Os encéfalos foram processados para análise do número e da distribuição dos neurônios MCH e CART na área hipotalâmica lateral, segundo protocolos de imuno-histoquímica (n=5) e microscopia eletrônica de transmissão (n=3). O mapeamento e a estimativa do número de neurônios MCH e CART na LHA foram realizados, respectivamente, por reconstrução tridimensional e estereologia. A ultraestrutura dos neurônios MCH e CART foi analisada qualitativamente por MET. Nossos dados indicaram que a restrição alimentar materna provocou diminuição permanente no peso e comprimento corporais, no peso encefálico e das gorduras visceral e retroperitoneal. Não foram observadas modificações no metabolismo de glicose e na eficiência alimentar do GR, embora a ingestão alimentar relativa desses animais tenha sido superior ao GC. Não foram observadas alterações nos níveis séricos de leptina, porém os animais do GR apresentaram diminuição dos níveis de insulina no DPN 21. Aos 540 dias de idade, o GR apresentou uma diminuição do número de neurônios CART na LHA. Não houve diferenças no número de neurônios MCH entre os grupos, mas a área e o volume da LHA foi menor no GR em 21, 50 e 90 dias. Modificações na distribuição dos neurônios CART na LHA foram observadas no DPN 540, com diminuição do número de células na região perifornicial e nas secções mais caudais da LHA. Nenhuma alteração ultraestrutural foi observada no GR, tanto nos neurônios CART quanto nos MCH. Concluimos que a restrição alimentar materna durante a prenhez e lactação modificou a estrutura corporal dos descendentes e seu comportamento alimentar. Além disso, diminuiu o número de neurônios CART da LHA, alterando sua distribuição, sem alterações nos neurônios MCH, que não foram refletidas na ultraestrutura. The association between lower birth weight and an increased risk of obesity, diabetes type 2 and cardiovascular diseases in adult life led to Developmantal Origins of Health and Disease (DOHaD) hypothesis. In this hypothesis, programming is related to the adjustments performed by the organism to insults occurring at key stages of their development, which may lead to long-lasting effects in the organs structure and function. Maternal nutrition during critical periods of individual development is considered an important Programming inductor, since the nutrient deficiency during pregnancy and lactation causes significant changes in body weight, energy balance, food intake and neuropeptides expression. The melanin-concentrating hormone (MCH) and the cocaine- and amphetamine-regulated transcript (CART) are neuropeptides expressed in the lateral hypothalamic area (LHA) that are involved in the regulation of energy balance and feeding behavior in which MCH plays an orexigenic role and CART an anorexigenic one. Thus, our aim was to analyze the number and the distribution of MCH and CART and the ultrastructure of these neurons in the LHA of rats whose mothers were subjected to food restriction during pregnancy and lactation. After pregnancy confirmation, female Wistar rats were divided in two groups: control group (CG), ad libitum standard diet, and caloric restriction group (RG), 50% diet restriction compared to the control group during pregnancy and lactation. After birth, the number of pups and their body weight in postnatal day (PND) 1 were evaluated. The male pups from both groups were divided into five age subgroups (n = 8): PND 21, 28, 50, 90 and 540. Body weight and nasoanal distance of each animal, their weekly food intake after weaning and glycemia, leptin and insulin serum concentrations were evaluated. An oral glucose tolerance test and insulin tolerance test were also executed in PND 540. Brains were processed for analysis of MCH and CART number and distribution in the LHA, according to immunohistochemistry protocols (n=5) and transmission electron microscopy (n=3). The mapping and estimate of MCH and CART neurons in the LHA were performed using three-dimensional reconstruction and stereological study. The ultrastructure of MCH and CART neurons was analyzed by transmission electron microscopy. Our data indicated that caloric restriction during pregnancy and lactation decreased body weight, body length, brain weight and visceral and retroperitoneal adipose tissues throughout life. No differences were observed in the glucose metabolism and in RG food efficiency, although the relative food intake was increased in RG. There were no differences in the leptin concentration; however RG has showed lower insulin concentration in PDN 21. Stereological data have shown a decreased number of CART neurons in the LHA of RG540. There were no differences in the number of MCH neurons among groups, however the LHA area and volume were smaller in RG in PND 21, 50 and 90. Modifications were observed in the distribution of CART neurons in RG540, with lower number of neurons on perifornicial region and caudal sections of LHA. No ultrastructural alterations in CART and MCH neurons were caused by caloric restriction during pregnancy and lactation. In conclusion, maternal food restriction during pregnancy and lactation changed biometric parameters in the offspring and their food intake. Furthermore, there was a decrease in CART neurons in LHA and changes in its distribution, with no effects on MCH neurons and on both neuropeptides ultrastructure. FAPESP 2016/13136-6

Objective Although it is well established that a-calcitonin gene-related peptide (CGRP) stabilizes muscle-type cholinergic receptors nicotinic subunits (AChR), the underlying mechanism by which this neuropeptide regulates muscle protein metabolism and neuromuscular junction (NMJ) morphology is unclear. Methods To elucidate the mechanisms how CGRP controls NMJ stability in denervated mice skeletal muscles, we carried out physiological, pharmacological, and molecular analyses of atrophic muscles induced by sciatic nerve transection. Results Here, we report that CGRP treatment in vivo abrogated the deleterious effects on NMJ upon denervation (DEN), an effect that was associated with suppression of skeletal muscle proteolysis, but not stimulation of protein synthesis. CGRP also blocked the DEN-induced increase in endocytic AChR vesicles and the elevation of autophagosomes per NMJ area. The treatment of denervated animals with rapamycin blocked the stimulatory effects of CGRP on mTORC1 and its inhibitory actions on autophagic flux and NMJ degeneration. Furthermore, CGRP inhibited the DEN-induced hyperactivation of Ca2+-dependent proteolysis, a degradative system that has been shown to destabilize NMJ. Consistently, calpain was found to be activated by cholinergic stimulation in myotubes leading to the dispersal of AChR clusters, an effect that was abolished by CGRP. Conclusion Taken together, these data suggest that the inhibitory effect of CGRP on autophagy and calpain may represent an important mechanism for the preservation of synapse morphology when degradative machinery is exacerbated upon denervation conditions., Highlights • CGRP exerts antiproteolytic effects in atrophic denervated muscles and maintains the stability of NMJ. • CGRP blocks the endocytosis of AChRs and decreases the colocalization of autophagosome to NMJ in denervated muscles. • CGRP inhibits the Ca2+-dependent proteolysis, a degradative system that destabilizes NMJ during muscle atrophy. • The inhibition of autophagy and calpain induced by CGRP represents an important mechanism for the preservation of synapse.

The melanin-concentrating hormone (MCH) system is a robust integrator of exogenous and endogenous information, modulating arousal and energy balance in mammals. Its predominant function in teleosts, however, is to concentrate melanin in the scales, contributing to the adaptive color change observed in several teleost species. These contrasting functions resulted from a gene duplication that occurred after the teleost divergence, which resulted in the generation of two MCH-coding genes in this clade, which acquired distinctive sequences, distribution, and functions, examined in detail here. We also describe the distribution of MCH immunoreactivity and gene expression in a large number of species, in an attempt to identify its core elements. While initially originated as a periventricular peptide, with an intimate relationship with the third ventricle, multiple events of lateral migration occurred during evolution, making the ventrolateral and dorsolateral hypothalamus the predominant sites of MCH in teleosts and mammals, respectively. Substantial differences between species can be identified, likely reflecting differences in habitat and behavior. This observation aligns well with the idea that MCH is a major integrator of internal and external information, ensuring an appropriate response to ensure the organism’s homeostasis. New studies on the MCH system in species that have not yet been investigated will help us understand more precisely how these habitat changes are connected to the hypothalamic neurochemical circuits, paving the way to new intervention strategies that may be used with pharmacological purposes.

Malnutrition programs the neuroendocrine axis by disruption of food-intake control, leading to obesity. Taurine (Tau) is neuroprotective and improves anorexigenic actions in the hypothalamus. We evaluated the hypothalamic gene-expression profile and food-intake control in protein-restricted mice submitted to a high-fat diet (HFD) and Tau supplementation. Mice were fed on a control (14 % protein-C) or a protein-restricted diet (6 % protein-R) for 6 weeks. Thereafter, mice received, or not, HFD for 8 weeks (CH and RH) with or without 5 % Tau supplementation (CHT and RHT). Protein restriction led to higher food intake, but calories were matched to controls. Excessive calorie intake occurred in HFD mice and this was prevented by Tau supplementation only in the CH group. Additionally, RH and CH mice developed hypothalamic leptin resistance, which was prevented by Tau. Global alterations in the expressions of genes involved in hypothalamic metabolism, cellular defense, apoptosis and endoplasmic reticulum stress pathways were induced by dietary manipulations and Tau treatment. The orexigenic peptides NPY and AgRP were increased by protein restriction and lowered by the HFD. The anorexigenic peptide Pomc was increased by HFD, and this was prevented by Tau only in CH mice. Thus, food intake was disrupted by dietary protein restriction and obesity. HFD-induced alterations were not enhanced by previous protein deficiency, but the some beneficial effects of Tau supplementation upon food intake were blunted by protein restriction. Tau effects upon feeding behavior control are complex and involve interactions with a vast gene network, preventing hypothalamic leptin resistance.

Submitted by ISABELLA ZACARIN GUIATI null (isabella_zacarin@hotmail.com) on 2018-03-12T12:11:49Z No. of bitstreams: 1 Título - resumo - palavras chave.pdf: 69861 bytes, checksum: 9bb4b906a2940f449514d91567f56bb2 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: o arquivo submetido deve conter a versão completa do trabalho. As alterações para submissão parcial são feitas pela equipe do repositório. Lembrando que o arquivo deve ser único, estar em formato PDF, conter a ficha catalográfica e estar de acordo com as normas de apresentação de trabalhos acadêmicos do seu programa de pós. Assim que tiver efetuado essa correção submeta o arquivo novamente. Agradecemos a compreensão. on 2018-03-14T13:12:31Z (GMT) Submitted by ISABELLA ZACARIN GUIATI null (isabella_zacarin@hotmail.com) on 2018-03-14T17:41:52Z No. of bitstreams: 1 TEXTO DEFESA-versão final.pdf: 7434094 bytes, checksum: 0446a3fa684d251882c1f8a642f39cac (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-03-14T19:23:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 guiati_iz_me_bot_par.pdf: 384175 bytes, checksum: 71d06b3eda8ac70b7cc4a63abd879e61 (MD5) Made available in DSpace on 2018-03-14T19:23:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 guiati_iz_me_bot_par.pdf: 384175 bytes, checksum: 71d06b3eda8ac70b7cc4a63abd879e61 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O estado nutricional materno durante períodos críticos de desenvolvimento da prole (fetal e neonatal) é considerado um importante indutor de Programação. No sistema nervoso central, as alterações poderiam ocorrer especialmente em áreas importantes para o controle do comportamento alimentar, como o núcleo do trato solitário (NTS) que se desenvolve durante o período embrionário. A sinalização relacionada à saciedade é mediada pelos aferentes primários glutamatérgicos provenientes do estômago e duodeno, imunorreativos ao transportador vesicular de glutamato – tipo 2 (VGLUT2) e modulada por diversos neuropeptídeos como o hormônio concentrador de melanina (MCH) e o transcrito regulado pela cocaína e anfetamina (CART). Assim, nosso objetivo foi comparar a organização citoarquitetônica e a imunorreatividade ao MCH, ao CART e ao VGLUT2 no NTS de ratos cujas mães foram submetidas à restrição calórica durante a gestação e lactação. Para sua execução, foram realizados acasalamentos de ratos adultos da linhagem Wistar para obtenção das proles, as quais foram objeto de estudo. Após a detecção da prenhez, as fêmeas foram separadas para a formação de dois grupos experimentais: grupo controle (GC), dieta normal ad libitum, e grupo restrição calórica (GR), dieta de 50% de restrição em relação ao grupo controle durante os períodos de gestação e lactação. Os filhotes machos, provenientes dos grupos restrição (GR) e controle (GC), foram divididos em quatro subgrupos etários (n=5) de 21, 28, 50 e 90 dias. Foram avaliados: o número de animais de cada prole, peso no dia pós-natal 1, o peso e comprimento naso-anal, ingestão alimentar após o desmame e glicemia. Todos os animais foram fixados por perfusão transcardíaca e o encéfalo e os tecidos adiposos visceral e retroperitoneal foram pesados. Os encéfalos foram processados para detecção imuno-histoquímica no NTS de MCH, CART, VGLUT2 e estudo citoarquitetônico utilizando como marcadores a imunorreatividade à calbindina D-28K, histoquímica para a enzima NADPH diaforase e a coloração pelo método de Nissl. As análises foram realizadas por meio de reconstrução tridimensional e densitometria óptica nos subnúcleos do NTS relacionados a informação de saciedade: medial, gelatinoso e central. Os parâmetros biométricos (peso corporal, distância naso-anal, gorduras visceral e retroperitonial e peso encefálico) apresentaram redução no GR em relação ao GC. O estudo citoarquitetônico identificou 11 subnúcleos com preservação de sua organização. Não houve alteração morfométrica entre GC e GR. A imunorreatividade ao CART no GC demonstrou um padrão durante o desenvolvimento caracterizado por um pico aos 28 dias, seguido por uma queda aos 50 dias e ascensão aos 90, que não foi observado no GR. Para a imunorreatividade ao MCH, a distribuição ao longo do desenvolvimento foi semelhante a encontrada para o CART, com um pico aos 28 dias, queda aos 50 dias e manutenção aos 90 no GC, contudo, no GR o pico de imunorreatividade não acontece, sendo observado um crescimento lento dos 21 aos 50 dias e manutenção aos 90 dias. A imunorreatividade ao VGLUT2 demonstrou um aumento da imunorreatividade aos 28 dias no GC, assim como para o MCH e o CART, não observado no GR. Maternal nutritional status during critical periods of offspring development (fetal and neonatal) is considered an important Programming inductor. In the central nervous system, alterations could occur especially in areas important for food behavior control, such as the nucleus of the solitary tract (NTS) that develops during the embryonic period. Signs related to satiety are mediated by glutamatergic primary afferents from the stomach and duodenum, immunoreactive to the vesicular glutamate transporter type 2 (VGLUT2) and modulated by various neuropeptides such as melanin concentrating hormone (MCH) and the transcript regulated by cocaine and amphetamine (CART). So, our objective was to compare the cytoarchitectonic organization and immunoreactivity to MCH, CART and VGLUT2 in the NTS of rats whose mothers were subjected to caloric restriction during pregnancy and lactation. For their execution, mating of adult Wistar rats was carried out to obtain proles, which were the object of study. After detection of pregnancy, the females were separated to form two experimental groups: control group (CG), normal ad libitum diet, and caloric restriction group (GR), a 50% restriction diet in relation to the control group during pregnancy and lactation periods. The male offspring from the restriction (GR) and control (CG) groups were divided into four age groups (n = 5) of 21, 28, 50 and 90 days. The number of animals from each offspring, postnatal weight 1, weight and naso-anal length, food intake after weaning and blood glucose levels were evaluated. All animals were fixed by transcardiac perfusion and the brain and visceral and retroperitoneal adipose tissues were weighed. The brains were processed for immunohistochemical detection in the NTS of MCH, CART, VGLUT2 and cytoarchitectural study using immunoreactivity to D-28K calbindin, histochemistry for the enzyme NADPH diaphorase and staining by the Nissl method. The analyzes were performed through three - dimensional reconstruction and optical densitometry in the NTS subnuclei related to satiety information: medial, gelatinous and central. The biometric parameters (body weight, naso-anal distance, visceral and retroperitoneal fat and brain weight) showed a reduction in GR in relation to CG. The cytoarchitectonic study identified 11 subnuclei with preservation of their organization. There was no morphometric change between GC and GR. GC immunoreactivity to CART demonstrated a pattern during development characterized by a peak at 28 days, followed by a fall at 50 days and rise at 90, which was not observed in GR. For the immunoreactivity to MCH, the distribution along the development was similar to that found for CART, with a peak at 28 days, drop at 50 days and maintenance at 90 at GC, however, in the GR the immunoreactivity peak does not occur, being observed a slow growth from 21 to 50 days and maintenance at 90 days. Immunoreactivity to VGLUT2 demonstrated an increase in immunoreactivity at 28 days in GC, as well as for MCH and CART, not observed in GR. FAPESP: 2016\13136-6

The reproduction of seasonal breeders is modulated by exposure to light in an interval of 24 hours defined as photoperiod. The interruption of reproductive functions in seasonally breeding rodents is accompanied by the suppression of the Kiss1 gene expression, which is known to be essential for reproduction. In non-seasonal male rodents, such as rats and mice, short-day photoperiod (SP) conditions or exogenous melatonin treatment also have anti-gonadotropic effects; however, whether photoperiod is able to modulate the puberty onset or Kiss1 gene expression in mice is unknown. In the present study, we investigated whether photoperiodism influences the sexual maturation of female mice via changes in the kisspeptin system. We observed that SP condition delayed the timing of puberty in female mice, decreased the hypothalamic expression of genes related to the reproductive axis and reduced the number of Kiss1-expressing neurons in the rostral hypothalamus. However, SP also reduced the body weight gain during development and affected the expression of neuropeptides involved in the energy balance regulation. When body weight was recovered via a reduction in litter size, the timing of puberty in mice born and raised in SP was advanced and the effects in hypothalamic mRNA expression were reverted. These results suggest that the SP delays the timing of puberty in female mice via changes in the kisspeptin system, although the effects on hypothalamic-pituitary-gonadal axis are likely secondary to changes in body weight gain.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2017. O neuropeptídeo Y (NPY) possui uma distribuição ampla no sistema nervoso central (SNC) incluindo regiões envolvidas com a regulação do estresse e o processamento das memórias como o hipocampo dorsal (HD), a amígdala e o córtex pré-frontal. No HD, o NPY apresenta seus efeitos mediados principalmente pelos receptores Y1, Y2 e Y5. A função desses receptores em alguns comportamentos já foi elucidada, no entanto, seu papel na modulação da memória carece investigação. O objetivo geral foi avaliar o efeito da manipulação farmacológica dos receptores Y1 e Y5 do NPY presentes no HD durante a consolidação e reconsolidação de uma memória no condicionamento aversivo contextual (CAC) em ratos. Nossos resultados mostram que os receptores Y1 e Y5 apresentaram um aumento em seu imunoconteúdo após o CAC, e que a infusão do NPY no HD prejudicou a consolidação e a reconsolidação da memória aversiva. Estes efeitos foram reproduzidos com a infusão dos agonistas seletivos Y1 e Y5 (Y1r-LP-NPY e Y5r-5RA972, respectivamente) e prevenida pela administração prévia dos respectivos antagonistas seletivos. Observamos também que durante a consolidação da memória no CAC há um aumento no imunoconteúdo para BDNF e Arc que puderam ser prevenidos pela administração prévia do NPY. O mesmo efeito foi obtido com a marcação para Egr1/Zif268 durante a etapa da reconsolidação da memória. Nenhum efeito modulador do NPY foi observado durante a memória de curta duração, familiarização, ou quando a infusão se deu fora da janela de consolidação (6 h). Quanto à reconsolidação, vimos que o efeito do NPY foi dependente da reativação da memória, e o efeito do tratamento foi observado apenas quando a infusão se deu na janela de reconsolidação e não houve reinstalação da memória. As doses dos fármacos utilizados não alteraram o comportamento expresso no labirinto em cruz elevado nem no teste do choque imediato, sugerindo não haver um mero efeito antiaversivo ou alterações locomotoras. Com base no exposto acima, parece haver uma mudança na dinâmica de expressão dos receptores do NPY após um evento aversivo e a ativação farmacológica desses receptores parece prejudicar a formação e a manutenção desta memória aversiva, sugerindo um mecanismo para o papel pró-resiliência do NPY. Neste sentido, este mecanismo no HD pode ser uma importante abordagem terapêutica para algumas patologias relacionadas ao estresse, tal como o transtorno de estresse pós-traumático (TEPT). Abstract : Neuropeptide Y (NPY) has a broad distribution in the central nervous system (CNS) including regions involved with stress regulation and memories processing such as the dorsal hippocampus (DH), amygdala, and prefrontal cortex. In DH, NPY presents its effects mediated mainly by the Y1, Y2 and Y5 receptors. The role of these receptors in some behaviors has already been studied, however, its role in memory modulation needs more investigation. The general aim of the present study was to evaluate the effect of pharmacological manipulation of the Y1 and Y5 receptors in the DH during the memory consolidation and reconsolidation on contextual fear conditioning (CFC) in rats. Our data showed that Y1 and Y5 receptors present an increased immunocontent after CFC, as well as after the infusion of NPY in DH, impairing memory consolidation and reconsolidation. These effects were reproduced with the infusion of selective agonist Y1 and Y5 (Y1r-LP-NPY and Y5r-5RA972, respectively) and were prevented by prior administration of selective antagonists for these receptors. We also observed that during memory consolidation on CFC there was an increase on BDNF and Arc immunocontent that could be prevented by previous NPY administration. The same effect was obtained on Egr1/Zif268 during the memory reconsolidation phase. No effect of NPY was observed during short-term memory, familiarization, or outside the window of consolidation infusion (6 h). During the reconsolidation process, we found that the NPY effect was dependent on memory reactivation, and observed just in the reconsolidation window and there was no reinstallation of the memory. There was no effect on elevated plus-maze (EPM) of all doses of the drugs here used as well as no effect on the immediate shock test. After CFC it appears that occurs a change in the NPY receptor expression dynamics and the pharmacological activation of these receptors seems to impair the memory formation and its maintenance, suggesting a positive role for NPY in stress/fear resilience. On this regard, this NPY-DH mechanism could be a relevant therapeutic approach for some stress-related disorders, such as the posttraumatic stress disorder (PTSD).

A depressão periparto acomete aproximadamente 10% das mulheres na gestação e puerpério e está associada a morbidade para a mãe e a prole, incluindo prejuízo nos cuidados maternos e consequências emocionais e cognitivas nos filhos. Diversas alterações neurobiológicas estão relacionadas à depressão periparto, incluindo desregulação do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal e baixos níveis de ocitocina. Os anticorpos antiocitocina (antiOT) possuem ocorrência natural e já foram relacionados à depressão maior. Objetivo: Este estudo avaliou os anticorpos antiOT na gestação e pós-parto em relação à depressão perinatal. Material e Método: A amostra foi composta por um recorte de 73 mulheres que apresentaram depressão periparto e 59 mulheres sem depressão selecionadas aleatoriamente como grupo controle em coorte de gestantes do ambulatório de obstetrícia da Universidade Federal de Minas Gerais. A depressão foi definida pelo MINI-Plus no segundo e terceiro trimestres de gestação e pós-parto. Os sintomas depressivos foram avaliados pela Escala de Edinburgo, Inventário de Depressão de Beck e Escala de Hamilton. Os títulos de anticorpos antiOT IgM e IgG livres foram dosados utilizando a técnica de ELISA no segundo trimestre e no pós-parto. Resultados: Títulos de anticorpos IgG e IgM antiOT são mais baixos no pós-parto em relação à gestação, mas diferenças entre mulheres com depressão periparto e controles não são significativas. Títulos elevados de IgG livre antiOT estão associados a parto cesárea. A IgG também está relacionada a depressão periparto e antenatal nas gestações de risco habitual e correlaciona positivamente com escores de depressão. Conclusão: A associação entre anticorpos antiOT e depressão perinatal permanece inconclusiva, mas a hipótese de que os anticorpos antiOT possam modular as ações da ocitocina no cérebro, influenciando na ocorrência de depressão perinatal, e perifericamente, influenciando nas contrações uterinas e se relacionando à ocorrência de parto cesárea, deve ser futuramente explorada. Peripartum depression affects 10% of women during pregnancy and postpartum and is associated with morbidity for the mother and offspring, including impairment in maternal care and emotional and cognitive consequences in children. Several neurobiological changes have been associated to peripartum depression, including dysregulation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis and low oxytocin levels. The anti-oxytocin antibodies have natural occurrence and have been linked to major depression. Objective: This study evaluated oxytocin antibodies in pregnancy and postpartum in relation to peripartum depression. Methods: The sample was composed by a cut of 73 women who presented peripartum depression and 59 women without depression randomly selected as controls from a cohort of pregnant women from obstetrics clinic of Federal University of Minas Gerais. Depression was defined by the MINI-Plus in the second and third trimester of pregnancy and postpartum. Depressive symptoms were assessed by the Edinburgh Postpartum Depression Scale, Beck Depression Inventory and Hamilton Depression Scale. The titles of free IgM and IgG anti-oxytocin antibodies were mesured in plasma by ELISA technique in the second trimester and postpartum. Results: Free IgM and IgG oxytocin antibodies are lower in postpartum in relation to pregnancy levels, but differences between peripartum depression and controls are not significant. Higher levels of free IgG oxytocin antibodies are associated with cesarean delivery. Free IgG oxytocin antibodies are also associated with peripartum and antenatal depression in regular risk pregnancies and correlate positively with depression scores. Conclusion: The association between anti-oxytocin antibodies and perinatal depression remains inconclusive, but the hypothesis that oxytocin antibodies may modulate the oxytocin functions in the brain, influencing peripartum depression occurrence, and peripherally, influencing uterine contractions and relating to cesarean delivery, should be further explored.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016 Diversas evidências indicam que há um comprometimento da sinalização do neuropeptídeo Y (NPY) no sistema nervoso central (SNC) tanto no envelhecimento quanto na doença de Alzheimer (DA), e que este possa representar um novo alvo terapêutico para o alívio de diversos sintomas associados a estas condições. Nesse trabalho foi avaliado o efeito da administração central do NPY sobre prejuízos cognitivos associados ao envelhecimento em camundongos C57BL/6 com 2 e 11 meses de idade. Também foi avaliado o efeito do pré-tratamento com NPY ou com o agonista seletivo do receptor Y2 (NPY(13-36)) sobre os prejuízos comportamentais induzidos por oligômeros de ß-amilóide (AßO) em camundongos suíços adultos, um modelo animal da DA. Ademais, foram avaliados os efeitos do NPY e do NPY(13-36) sobre a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) induzida por AßO em cultura neuronal hipocampal de ratos Wistar. Uma única injeção intracerebroventricular (i.c.v.) de NPY (23,4 pmol) foi capaz de reverter o prejuízo de memória espacial associado ao envelhecimento em camundongos C57BL/6 com 11 meses de idade avaliados no teste de localização de objetos. Entretanto, a administração i.c.v. da mesma dose de NPY prejudicou o desempenho de camundongos com 2 meses de idade no mesmo teste. A injeção i.c.v. de AßO (10 pmol) em camundongos suíços induziu prejuízos em memórias de reconhecimento e espacial de curto prazo, evidenciados pelos testes de reconhecimento e localização de objetos, respectivamente, sendo que o pré-tratamento com NPY (23,4 pmol, i.c.v.) foi capaz de prevenir estes prejuízos induzidos pelos AßO. A ativação dos receptores Y2 pelo agonista NPY(13-36) (23,4 pmol, i.c.v.) foi capaz de prevenir os prejuízos na memória espacial de curto prazo nos camundongos, além de prevenir a geração de ROS induzidas por AßO (0,5 µM) in vitro. Nenhum dos compostos avaliados (NPY, NPY(13-36) e AßO) alterou significativamente os parâmetros comportamentais relacionados à emocionalidade avaliados nos testes do splash e nado forçado. Por fim, a administração do NPY prejudicou a discriminação olfatória de camundongos suíços. Os resultados desse trabalho em conjunto com a literatura suportam a hipótese de que a restauração dos níveis de NPY e o uso de agonistas dos receptores Y2 representam estratégias com potencial para o controle dos prejuízos cognitivos associados ao envelhecimento e observados em fases iniciais da DA. Abstract : Several evidences indicate that the neuropeptide Y (NPY) signaling is compromised in the central nervous system during ageing and Alzheimer s disease (AD), and that this may represent a new therapy target for the relief of symptoms associated with these conditions. At the present work, the effect of central administration of NPY over the cognitive deficits associated to ageing was evaluated in C57BL/6 mice at 2 and 11 months of age. It was also evaluated the effect of pre-treatment with NPY or the Y2 receptor selective agonist NPY(13-36) over the behavioral deficits due to amyloid-ß oligomers (AßO) administration in adult Swiss mice, an animal model of AD. Moreover, the effects of NPY or NPY(13-36) over the reactive oxygen species production (ROS) induced by AßO were evaluated in a Wistar rat neuronal hippocampi cell culture. A solely NPY (23,4 pmol) intracerebroventricular (i.c.v.) injection was enough to revert the spatial memory deficit associated with ageing evaluated by the object location test in C57BL/6 mice at 11 months of age. However, the same dose of NPY impaired the performance of mice at 2 months of age at the same test. An i.c.v. injection of AßO (10 pmol) induced recognition and spatial shot-term memory deficits highlighted by the object recognition and location tests, respectively, in Swiss mice, and the pre-treatment with NPY (23,4 pmol, i.c.v.) was able to prevent those deficits induced by AßO. The Y2 receptor activation by its agonist NPY(13-36) (23,4 pmol, i.c.v.) was enough to prevent these spatial short-term memory deficits in mice in addition to prevent the ROS generation induced by AßO (0,5 µM) in vitro. None of the compounds evaluated (NPY, NPY(13-36) and AßO) significantly altered the behavioral parameters related to emotionality evaluated in the splash and forced swim tests. At last, NPY administration damaged the olfactory discrimination in Swiss mice. The results found at the present work together with the literature support the hypothesis that NPY levels restoration and the use of Y2 receptor agonists are potential strategies for the management of age-associated cognitive deficits as well as those present in initial stages of AD.

In humans, bromocriptine (BRO) is used as a treatment for many disorders, such as prolactinomas, even during pregnancy and lactation. Previously we demonstrated that maternal BRO treatment at the end of lactation programs offspring for obesity and several endocrine dysfunctions. Here, we studied the long-term effects of direct BRO injection in neonatal Wistar rats on their dopaminergic pathway, anxiety-like behavior and locomotor activity at adulthood. Male pups were either s.c. injected with BRO (0.1μg/once daily) from postnatal day (PN) 1 to 10 or from PN11 to 20. Controls were injected with methanol-saline. Body mass, food intake, neuropeptides, dopamine pathway parameters, anxiety-like behavior and locomotor activity were analyzed. The dopamine pathway was analyzed in the ventral tegmental area (VTA), nucleus accumbens (NAc) and dorsal striatum (DS) at PN180. PN1-10 BRO-treated animals had normal body mass and adiposity but lower food intake and plasma prolactin (PRL). This group had higher POMC in the arcuate nucleus (ARC), higher tyrosine hydroxylase (TH) in the VTA, higher dopa decarboxylase (DDc), higher D2R and μu-opioid receptor in the NAc. Concerning behavior in elevated plus maze (EPM), BRO-treated animals displayed more anxiety-like behaviors. PN11-20 BRO-treated showed normal body mass and adiposity but higher food intake and plasma PRL. This group had lower POMC in the ARC, lower TH in the VTA and lower DAT in the NAc. BRO-treated animals showed less anxiety-like behaviors in the EPM. Thus, neonatal BRO injection, depending on the time of treatment, leads to different long-term dysfunctions in the dopaminergic reward system, food intake behavior and anxiety levels, findings that could be partially due to PRL and POMC changes.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) The corticotropin-releasing factor (CRF) is involved in behavioral and physiological responses to emotional stress through its action in several limbic structures, including the bed nucleus of the stria terminalis (BNST). Nevertheless, the role of CRF1 and CRF2 receptors in the BNST in autonomic adjustments during aversive threat is unknown. Therefore, in the present study we investigated the involvement of CRF receptors within the BNST in autonomic responses evoked by the acute restraint stress in rats. For this, we evaluated the effects of bilateral treatment of the BNST with selective agonists and antagonists of either CRF1 or CRF2 receptors in the arterial pressure and heart rate increase and the decrease in tail skin temperature induced by restraint stress. Microinjection of the selective CRF1 receptor antagonist CP376395 into the BNST reduced the pressor and tachycardiac responses caused by restraint. Conversely, BNST treatment with the selective CRF1 receptor agonist CRF increased restraint-evoked arterial pressure and HR responses and reduced the fall in tail skin temperature response. All effects of CRF were inhibited by local BNST pretreatment with CP376395. The selective CRF2 receptor antagonist antisauvagine-30 reduced the arterial pressure increase and the fall in tail skin temperature. The selective CRF2 receptor agonist urocortin-3 increased restraint-evoked pressor and tachycardiac responses and reduced the drop in cutaneous temperature. All effects of urocortin-3 were abolished by local BNST pretreatment with antisauvagine-30. These findings indicate an involvement of both CRF1 and CRF2 receptors in the BNST in autonomic adjustments during emotional stress. O fator liberador de corticotropina (CRF) está envolvido em respostas comportamentais e fisiológicas ao estresse emocional por meio de sua ação em várias estruturas límbicas, incluindo o núcleo leito da estria terminal (NLET). No entanto, o papel dos receptores CRF1 e CRF2 no NLET nas respostas autonômicas durante situações aversivas é desconhecido. Portanto, no presente estudo nós investigamos o envolvimento de receptores de CRF do NLET nas respostas autonômicas evocadas pelo estresse de restrição agudo em ratos. Para isso, foram avaliados os efeitos do tratamento bilateral do NLET com agonistas e antagonistas seletivos dos receptores CRF1 ou CRF2 nas respostas de aumento da pressão arterial e frequência cardíaca e de diminuição da temperatura cutânea da cauda induzidas pelo estresse por restrição agudo. Microinjeção do antagonista seletivo do receptor CRF1, CP376395, no NLET reduziu as respostas de aumento da pressão arterial e frequência cardíaca evocadas pelo estresse por restrição. Por outro lado, o tratamento do NLET com o agonista seletivo do receptor CRF1, CRF, causou um aumento das respostas pressora e taquicárdica e reduziu a resposta de queda de temperatura cutânea da cauda. Os efeitos do CRF foram inibidos pelo pré-tratamento do NLET com CP376395. O antagonista seletivo do receptor CRF2, antisauvagine-30, reduziu o aumento da pressão arterial e a queda da temperatura cutânea da cauda induzidas pelo estresse por restrição. O agonista seletivo do receptor CRF2, urocortina-3, potenciou as respostas pressora e taquicárdica e reduziu a queda na temperatura cutânea da cauda. Todos os efeitos da urocortina-3 foram abolidos pelo pré-tratamento local no NLET com antisauvagine-30. Esses resultados indicam um envolvimento de ambos os receptores CRF1 e CRF2 no NLET nos ajustes autonômicos durante o estresse emocional.

Três sub-divisões hipotalâmicas são importantes no ciclo sono-vigília: o hipotálamo anterior (núcleos gabaérgicos e núcleos supraquiasmáticos), o hipotálamo posterior (núcleo túbero-mamilar histaminérgico) e o hipotálamo lateral (sistema hipocretinas). O sistema gabaérgico inibitório do núcleo pré-óptico ventro-lateral (VLPO) do hipotálamo anterior é responsável pelo início e manutenção do sono NREM. Os neurônios supraquiasmáticos (NSQs) do hipotálamo anterior são responsáveis pelo ritmo circadiano do ciclo sono-vigília. Os núcleos aminérgicos, histaminérgicos, as hipocretinas e núcleos colinérgicos do prosencéfalo basal apresentam-se ativos durante a vigília, inibindo o núcleo pré-óptico ventro-lateral, promovendo a vigília. O processo de inibição-estimulação é a base do modelo da interação recíproca entre os grupos de células wake-off-sleep-on e células wake-off-sleep-on reguladores do ciclo sono-vigília. O modelo da interação recíproca também se aplica aos núcleos colinérgicos (células REM-on) e aminérgicos (células REM-off) do tronco cerebral no controle temporal do sono REM-NREM.

Os neuropeptídeos são neurotransmissores relevantes na fisiologia nasal e o conhecimento crescente acerca de seu papel na fisiopatologia de doenças nasais abre novas perspectivas. A sua investigação na mucosa nasal humana baseia-se em grande parte em marcação imunológica, método complexo e sujeito a inúmeros fatores de erro. Com o intuito de viabilizar este tipo de pesquisa em nosso meio, um método de imunofluorescência para peptídeo intestinal vasoativo (VIP) na mucosa nasal humana é proposto e avaliado. FORMA DE ESTUDO: Coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Oito pacientes submetidos a cirurgia funcional do nariz têm um fragmento de mucosa coletado da concha inferior. O tecido foi fixado em solução de Zamboni (paraformaldeído 4% tamponado e ácido pícrico 0,4%), congelado em nitrogênio líquido e armazenado. Cortes de 14 µm foram realizados e submetidos à reação de imunofluorescência para VIP (Península Laboratories). As imagens microscópicas foram documentadas em fotografia convencional. A especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade de execução foram avaliadas. A reprodutibilidade de interpretação de resultados foi avaliada através da comparação de graus de marcação (0 a 4) atribuídos às fotos por seis observadores. RESULTADOS: Os resultados mostraram ser o método suficientemente específico, sensível, além de reprodutível em sua execução. A interpretação de resultados mostrou depender do perfeito esclarecimento do observador no julgamento das imagens de imunofluorescência, mas mostrou uniformidade. CONCLUSÃO: O método proposto foi considerado útil na pesquisa de neuropeptídeos na mucosa nasal humana.Neuropeptides are important neurotransmitters in nasal physiology and the increasing knowledge of their role in nasal diseases brings new therapeutic perspectives. The investigation of human nasal mucosa neuropeptides is based mostly on immunocytochemistry, a complex approach whose resulting factors may be variable. Aiming to make this kind of research available, an immunofluorescence approach for vasoactive intestinal peptide (VIP) in human nasal mucosa is proposed and evaluated. STUDY DESIGN: Transversal cohort. MATERIAL AND METHOD: Human inferior turbinate samples were obtained at time of nasal surgery from eight patients. The samples were fixed in Zamboni solution (4% phosphate-buffered paraformaldehyde and 0.4% picric acid), snap-frozen and stored at -70ºC. 14 µm sections were then obtained. Immunofluorescence staining for VIP (Peninsula Laboratories) was performed and its images documented by conventional photography. The method's specificity, sensitivity and reproducibility of execution were evaluated. Additionally, the reproducibility of interpretation of results was evaluated through the comparison of staining scores (0 to 4) attributed to the images by six observers. RESULTS: The results showed the approach to be very specific and sensible, besides being reproducible in its execution. The interpretation of results may depend on the observer's accuracy in judging immunofluorescence images, but it showed uniformity. CONCLUSION: The proposed method was highly useful for research purposes in neuropeptides in human nasal mucosa.

Introdução: Os neuropeptídeos regulam uma variedade de aspectos da função nervosa e neuroendócrina, atuando através da ativação de receptores específicos da membrana celular. No sistemana nervoso central (SNC) os receptores do pepetídeo liberador de gastrina (GRPR) são amplamente expressos, e numerosos efeitos centrais têm sido descritos com a sua ativação, incluindo efeitos sobre a saciedade, regulação do ritmo circadiano, termorregulação, modulação do stress, resposta ao medo, ansiedade e memória. Pesquisas mostram que o bloqueio farmacológico do GRPR em modelos animais leva ao aparecimento de deficits na interação social, padrões restritivos de comportamento e estereotipias motoras, sintomas semelhantes ao comportamento autista em humanos, sugerindo a possibilidade de que o complexo GRP/GRPR possa ter um papel na patogênese do transtorno do espectro autista (TEA). Recentemente, dois estudos não controlados com administração do peptídeo liberador de gastrina (GRP) a 13 crianças com autismo sugeriram que ele é seguro e que possa melhorar alguns sintomas do transtorno, principalmente interação social e sintomas associados à irritabilidade. Objetivos: Comparar a eficácia, segurança, tolerabilidade do GRP em relação ao placebo em sintomas do TEA. Metodologia: Ensaio clínico crossover, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, com uso de GRP 160 picomol/kg por 4 dias consecutivos, em 10 crianças com autismo. Os desfechos foram medidos através da escala Aberrant Behavior Checklist (ABC). Resultados: Todos os participantes eram do sexo masculino, com idade entre 4 e 9 anos. Houve uma redução nos escores da escala ABC e suas subescalas após o uso de GRP e de placebo. Apesar dessa redução ser mais proeminente com o GRP, principalmente nas subescalas Irritabilidade, Comportamento estereotipado e Hiperatividade, não houve diferença estatística entre os resultados (p 0,334). Após uma semana da infusão, 5 crianças apresentavam melhora maior que 25% no escore total da escala ABC com uso de GRP e 2 com uso de placebo, não apresentando diferença estatística (p 0,375). Não houve efeitos adversos, alterações dos sinais vitais ou variações laboratoriais associados ao uso de GRP em nenhum paciente. Conclusões: Os resultados deste estudo, apesar do tamanho reduzido da amostra, reforçam os dados anteriores sobre a segurança do GRP no uso a curto prazo. Apesar de ter ocorrido redução dos escores da escala ABC após uso de GRP, não houve diferença estatística em relação ao placebo. Devido ao desenho crossover e tamanho pequeno da amostra do estudo atual, não foi possível esclarecer a real eficácia do GRP na redução dos sintomas do TEA na infância. Existe a necessidade de novas pesquisas com outros delineamentos e tamanho amostral maior para confirmar a eficácia e segurança do GRP em crianças com autismo. Introduction: The neuropeptides regulate a variety of aspects of the nervous and neuroendocrine function, acting through activation of specific receptors of the cellular membrane. In system central nervous (CNS) the gastrin-releasing peptide recptors (GRPR) are widely expressed, and numerous central effects have been reported with their activation, including effects on satiety, regulating the circadian rhythm, thermoregulation, stress modulation, response to fear, anxiety and memory. Research has shown that pharmacological blockade of GRPR in animal models leads to the deficits in social interaction, restrictive patterns of behavior and motor stereotypies, autistic symptoms similar to human behavior, suggesting the possibility that the complex GRP/GRPR may have a role in the pathogenesis of autism spectrum disorder (ASD). Recently, two studies are not controlled with the administration of gastrin releasing peptide (GRP) to 13 children with autism suggest that it is safe and can improve some symptoms of the disorder, especially social interaction and symptoms associated with irritability. Objectives: To compare the efficacy, safety, tolerability GRP compared to placebo in ASD symptoms. Methodology: crossover clinical trial, randomized, double-blind, placebo-controlled, using GRP 160 picomol/kg for 4 consecutive days in 10 children with autism. Outcomes were measured by the Aberrant Behavior Checklist scale (ABC). Results: All participants were male, aged between 4 and 9 years. There was a reduction in the scores of the ABC range and its subscales after use GRP and placebo. Despite this reduction be more prominent with the GRP, particularly in subscales Irritability, Stereotypic behavior and Hyperactivity and noncompliance, there was no statistical difference between the results (p 0.334). After a week of infusion, 5 children showed improvement greater than 25% in the total score of the ABC scale in GRP use and 2 with placebo use, however there was no statistical difference (p 0.375). No adverse effects, changes in vital signs or laboratory abnormalities associated with use of GRP in any patient. Conclusions: The results of this study, despite the small sample size, reinforce previous data on the safety of the GRP in the short-term use. Although there was a reduction in ABC scale scores after use of GRP, there was no statistical difference from placebo. Due to the small sample size and design of the current study, it was not possible to clarify the real effectiveness of GRP in reducing the symptoms of ASD in childhood. There is a need for further research with other designs and larger sample size to confirm the efficacy and safety of GRP in children with autism.

Associação Fundo de Incentivo à Psicobiologia (AFIP) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) No hipotálamo existem neurônios que utilizam MCH (hormônio concentrador de melanina) como neuromoduladores. Esses neurônios projetam-se através do sistema nervoso central e possuem funções fisiológicas importantes; diversos estudos experimentais sugerem que o MCH atue na promoção do sono. Sendo assim, tivemos como objetivo investigar os efeitos da privação de sono, rebote e restrição de sono sobre o sistema MCHérgico em dois momentos do ciclo claro/escuro (ZT0 e ZT8).Para isso, nós quantificamos os níveis de MCH no líquor em ratos após privação de sono paradoxal (PS), rebote (RB) e restrição de sono (RS) durante o dia subjetivo (Zeitgeber time – ZT8, quando ocorrem maiores concentrações de sono ) e no final da noite subjetiva (ZT0, horário em que acendem as luzes do biotério, final da fase escura). Na condição controle (sono e vigília ad libitum), não houve diferença nos níveis de MCH no líquor entre ZT8 e ZT0. Entretanto, quando o sono foi perturbado, uma diferença significante foi observada. Além disso, quando o líquor foi coletado em ZT0, os níveis de MCH aumentaram significantemente no grupo RB 96 comparado ao CT. Quando as coletas de líquor foram realizadas em ZT8, o grupo RS apresentou aumento significante nos níveis de MCH em comparação ao CT, PS 96 e PS 120. A fim de obter informações sobre a relação entre os níveis de MCH no líquor (proteína circulante) e a expressão de genes a ele relacionados no cérebro, nós investigamos a expressão do precursor de MCH (Pmch) no hipotálamo e do receptor 1 (Mchr1) no córtex frontal e hipocampo. A expressão do Pmch não se alterou após PS, RB ou RS em ZT8 nem em ZT0. Porém, houve diferenças na expressão do receptor Mchr1 no córtex frontal e no hipotálamo em ZT0. No córtex frontal, houve uma diminuição nos níveis de expressão nos grupos PS 96 e PS 120 comparados ao controle e no hipocampo houve um aumento nos grupos RB 96 e RS comparados ao PS 96. Ao comparar os níveis de expressão gênica entre ZT0 e ZT8, observamos que a expressão do Pmch não difere entre esses dois ZTs no grupo CT, porém há um aumento em ZT8, em comparação a ZT0 nos grupos PS (96 e 120) e RB (96 e 120). Quanto ao Mchr1, há aumento em ZT8 em comparação a ZT0 nos grupos CT, RB (96 e 120) e RS. Nós concluímos que os níveis de MCH no líquor são regulados tanto por um fator circadiano, quanto pelo ciclo sono/vigília Em relação à expressão gênica, a expressão do Pmch não se alterou nos dois ZTs analisados, entretanto, a expressão gênica do Mchr1 foi alterada apenas em ZT0, e teve uma diminuição nos grupos privados de sono, com inatividade desses neurônios durante a vigília. Esses resultados demonstram que o sistema MCHérgico é controlado pelo ciclo sono/vigília e que quando o sono é perturbado, o sistema MCHérgico responde diferencialmente em dois momentos do dia. Within the hypothalamus there are neurons that utilize melanin concentrating hormone (MCH) as neuromodulators. These neurons project throughout the central nervous system and have important physiological functions; several experimental studies have suggested that MCH promotes sleep. So the objective of this study was investigate the effects of sleep deprivation, rebound and sleep restriction on the MCHergic system in twoo moments of the ligth-dark cycle (ZT0 and ZT8). For this we quantified the level of MCH in the cerebrospinal fluid (CSF) in rats after paradoxical sleep deprivation (SD), rebound (RB) and sleep restriction (SR) during subjective day (Zeitgeber time - ZT8, period of greater amount of sleep) and at the end of the subjective night (ZT0, time when the lights of the experimental room turn on). In the control condition (CT - waking and sleep ad libitum), there was no difference in the CSF MCH levels between ZT8 and. However, when sleep was disturbed, a significant difference was observed. Furthermore, when CSF was collected at ZT0, the MCH levels significantly increased in the RB 96 group compared to CT. When CSF collections were performed at ZT8, the SR group presented significantly increased levels of MCH compared to CT, SD 96 and SD 120.In order to know the dynamic relationship between MCH levels in the CSF (circulating protein) and its gene expression in the brain, we also investigated the MCH precursor (Pmch) expression in the hypothalamus and the receptor 1 (Mchr1) in the frontal cortex and hippocampus. The Pmch did not change after SD, RB or SR neither in ZT8 nor in ZT0. However, there were differences in the receptor Mchr1 expression in the frontal cortex and in the hypotalamus in ZT0. In the frontal cortex, there was a reduction of the expression levels in the SD 96 and SD 120 group compared to the CT and in the hippocampus there was an increase in the RB 96 and SR groups compared to SD 96. When we compared the gene expression levels between ZT0 and ZT8, we observed that Pmch expression did not differ between these two ZTs in the CT group, however, there was an increase in ZT8 compared to ZT0 in the SD (96 and 120) and RB (96 and 120). Considering the Mchr1, there was an increase in ZT8 compared to ZT0 in the CT, RB (96 and 120) and SR. We concluded that the MCH levels in the CSF are regulated by both a circadian factor and by the sleep-waking cycle Concerning gene expression, Pmch expression did not changed in the two ZTs analyzed, however, Mchr1 expression was altered only in ZT0, and has a decrease in SD groups in tandem with the inactivity of these neurons during wakefulness. Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016)

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2014 Submitted by Amelia Janeiro (ajaneiro@reitoria.ul.pt) on 2014-12-22T12:02:28Z No. of bitstreams: 1 ulsd069159_td_Sara_Santos.pdf: 14633733 bytes, checksum: 77215d487fe12e9d40ce248bd999da31 (MD5) Made available in DSpace on 2014-12-22T13:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulsd069159_td_Sara_Santos.pdf: 14633733 bytes, checksum: 77215d487fe12e9d40ce248bd999da31 (MD5) Previous issue date: 2014 Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Introdução: A disfunção na liberação de neuropeptídeos acarreta alterações na pele, podendo gerar distúrbios no processo cicatricial e/ou afecções cutâneas. Sendo assim, a liberação de neuropeptídeos é estudada na literatura, relacionando a utilização de agentes eletrofísicos. Objetivo: Investigar o efeito da estimulação elétrica na liberação de neuropeptídeos SP e CGRP em pele de ratos. Métodos: Foram utilizados 28 animais distribuídos em 4 grupos, Grupo Controle (GC): as amostras foram coletadas após 60 minutos da tricotomia sem estímulo elétrico; Grupo Sham (GS): após 60min da tricotomia foram colocadas as placas de eletrodos com esponja umedecida com cloreto de sódio 0,9% e sobreposto na linha mediana dorsal e dispersivo na região ventral, com o aparelho desligado por 30minutos; Grupo Estimulação Elétrica com Polo Positivo (GPP): após 60 minutos da tricotomia, foi realizada a estimulação elétrica sobre a linha mediana dorsal com polaridade Positiva e o no Grupo Estimulação Elétrica com polaridade Negativa (GPN): os mesmos parâmetros utilizados acima, com a mudança, onde o polo negativo passou para linha mediana dorsal. Ao término da estimulação elétrica, foram coletadas amostras de pele, submetidas ao Western blotting para análise dos neuropeptídeos CGRP e SP. Para a análise estatística foi utilizado o teste de Análise Variância (ANOVA) para identificar a diferença entre os grupos. Resultado: Não causou diferença significante na liberação de CGRP e SP na pele de rato. Conclusão: A estimulação elétrica ultraexcitante não influenciou na liberação de neuropeptídeos, CGRP e SP, em pele de ratos. Introduction: A dysfunction in the release of neuropeptides cause changes in the skin, and may cause disturbances in the healing process and/or skin disorders. Therefore the release of neuropeptides has been studied in the literature, connecting the use of electrophysical agents. Objective: To investigate the effect of electrical stimulation on the release of neuropeptides SP and CGRP in rat skin. Methods: 28 animals were randomly divided into 4 groups, Control Group (CG): the samples were collected 60 minutes after shaving without electrical stimulation; Sham Group (SG): after 60 minutes of trichotomy were placed electrodes plates with damp sponge with sodium chloride 0.9% and superimposed on the dorsal midline and dispersive on the ventral region, with the equipment off for 30 minutes; Electrical Stimulation Positive Pole Group (GPP): later 60 minutes of trichotomy, electrical stimulation was performed on the dorsal midline with positive polarity and the Electrical Stimulation Group with negative polarity (NPG): the same parameters used above, with the change where the negative pole was passed into the dorsal midline. At the end of electrical stimulation, skin samples, tested by Western Blotting for analysis of neuropeptides CGRP and SP, were collected. For statistical analysis, analysis of variance (ANOVA) was used to identify differences between the groups. Result: There was a minor release of neuropeptides from the negative and positive polarity, however, not significant. Conclusion: The ultra-exciting electrical stimulation did not influence the release of neuropeptides, SP and CGRP, in rat skin.

Fundamentos e Objetivo: O teste diagnóstico ideal para endometriose continua sendo investigado. Recentemente, um estudo do tipo caso-controle constatou que o neuropeptídeo urocortina é produzido no tecido endometriótico e sugeriu que suas concentrações plasmáticas estão aumentadas em mulheres com cisto endometriótico de ovário. No presente estudo, buscamos avaliar o valor preditivo da urocortina para o diagnóstico de endometriose em mulheres com suspeita da doença e indicação de laparoscopia. Métodos: Realizou-se um estudo de coorte incluindo 77 pacientes com dor pélvica crônica, infertilidade e/ou massa anexial sugestiva de endometrioma. No pré-operatório, uma amostra de sangue foi coletada em tubo revestido com EDTA, centrifugada a 4ºC, e o plasma foi estocado a -80 ºC até a extração em coluna de cromatografia e dosagem de urocortina por ensaio imunoenzimático (EIA). Todas as pacientes foram submetidas a videolaparoscopia e todas as lesões suspeitas foram biopsiadas. A concentração de urocortina plasmática foi analisada em função do diagnóstico final de endometriose (cirúrgico e anatomopatológico) e de outras características clínicas, como dor pélvica e infertilidade. Resultados: A prevalência de endometriose na coorte foi de 26 casos (34%). Urocortina foi detectada em todas as amostras de plasma avaliadas e apresentou concentrações significativamente mais altas nas mulheres com diagnóstico final de endometriose (mediana 62 pg/ml [intervalo interquartil 51-108 pg/ml], n=26) em comparação com aquelas em que se excluiu esse diagnóstico (47 pg/ml [33-66 pg/ml], n=51); p = 0,029, teste de Mann-Whitney. Foram identificados níveis de urocortina significativamente mais altos em pacientes com dor pélvica acíclica (p=0,006) e dispareunia (p=0,003), quando comparadas a pacientes sem os sintomas. Entretanto, não houve correlação linear entre a dosagem de urocortina e o tempo ou intensidade dos sintomas álgicos. Análise da curva ROC definiu o ponto de corte que discriminaria pacientes com endometriose com alta especificidade (90%) em 101 pg/ml. Esse limiar diagnóstico resultou em valor preditivo positivo de 62% e valor preditivo negativo de 72%. Conclusão: O valor preditivo positivo de 62% comparado à prevalência (probabilidade pré-teste) de 34% sugere que níveis altos de urocortina plasmática reforçam a probabilidade de endometriose em mulheres com sinais e sintomas sugestivos da doença. Background: Accurate non-invasive diagnostic tests for endometriosis are still missing. In a previous case-control study, high plasma levels of the neuropeptide urocortin were found in women with ovarian endometrioma, along with evidence of urocortin production by the endometriotic tissue. Here, we evaluated the predictive value of plasma urocortin to detect pelvic endometriosis in symptomatic women scheduled to laparoscopy. Methods: In a prospective cohort study, 77 women with chronic pelvic pain, infertility and/or adnexal mass suggestive of ovarian endometrioma were enrolled. Preoperative blood samples were obtained in EDTA-coated tubes, centrifuged at 4ºC, and the plasma was stored at -80 ºC until extracted in C-18 chromatography column and assayed for urocortin using enzyme immunoassay (EIA). All patients underwent laparoscopy and all suspect lesions were biopsied. Plasma urocortin levels were analyzed according to the final diagnosis of endometriosis (surgical and histological) and to clinical variables such as pelvic pain and infertility. Results: The prevalence of endometriosis in the cohort was 26 cases (34%). Urocortin was detected in all plasma samples. Plasma urocortin levels were significantly higher in the women with endometriosis (median 62 pg/ml, interquartile range 51-108 pg/ml, n=26) compared to those without the disease (47 pg/ml [33-66 pg/ml], n=51), p=0.029, Mann-Whitney test. Higher plasma urocortin levels were also found in association with acyclic pelvic pain (p=0.006) and dyspareunia (p=0.003). However, there was no linear correlation between plasma urocortin and the duration or intensity of pain. ROC curve analysis identified the 90% specificity cut-off point at 101 pg/ml. This value corresponded to positive predictive value of 62% and negative predictive value of 72%. Conclusion: In this cohort, the probability of endometriosis increased from 34% (pre-test probability, or overall prevalence) to 62% (post-test probability, or positive predictive value) after a positive urocortin test. The present findings suggest that high plasma urocortin levels increase the likelihood of endometriosis in symptomatic women.

Feridas de pele em mamíferos adultos geralmente resultam numa cicatriz com a substituição do tecido original por matriz extracelular rica em colágeno, mas em embriões é frequente a regeneração do tecido original. A ausência ou diminuição do infiltrado inflamatório na lesão tem sido correlacionada com maior ocorrência de regeneração ou uma melhora da cicatrização. O Hormônio Alfa-Melanócito Estimulante (-MSH) é produzido no sistema nervoso central e também por células do sistema imune ou na pele e um dos seus efeitos é estimular a síntese de eumelanina. A ação do -MSH ocorre por meio de sua ligação aos receptores de melanocortinas (MC-R), expressos em diferentes células da pele, além de macrófagos, mastócitos e linfócitos T. A proteína agouti é um antagonista dos MC-R1 e MC-R4 e sua ligação a estes receptores na pele inibe a produção da eumelanina. O -MSH também tem amplos efeitos anti-inflamatórios e pode inibir a síntese de citocinas, tais como IL-1, TNF-, IFN- ou mediadores inflamatórios tais como, prostaglandinas e histamina. Testamos se a injeção intraperitoneal de -MSH ou de agouti, 30 minutos antes da realização de lesões cutâneas em camundongos C57BL/6 adultos alteram o infiltrado leucocitário e a deposição de matriz extracelular no dias 3 e 40 após a lesão. A administração de 125mg/kg da proteína agouti não alterou o número (média ± SEM) de leucócitos (agouti 4,12 ± 0,28 vs controle 4,64 ± 0,34) e de mastócitos (agouti 11,0 ± 1,22 vs controle 9,5 ± 0,95) no terceiro dia após a lesão. Também não alterou significativamente a área da cicatriz medida 40 dias após a lesão, seja macroscopicamente (agouti 11,78 ± 0,48 vs controle 12,92 ±1,05) ou microscopicamente (agouti 0,30 ± 0,03 vs controle 0,33 ± 0,02). Entretanto a administração de 1,0 mg/kg de -MSH reduziu significativamente o número de leucócitos (-MSH 2,05 ± 0,06 vs controle 4,64 ± 0,34) e mastócitos (-MSH 5,5 ± 0,27 vs controle 9,5 ±0,95) 3 dias após realização da lesão e a área de cicatriz medida macroscopicamente (-MSH 9,24 ± 0,65 vs controle 12,92 ± 1,05) e microscopicamente (-MSH 0,22 ± 0,01 vs controle 0,33 ± 0,02) 40 dias após a mesma. A injeção de -MSH resultou em uma melhor organização das fibras colágenas e um aumento da quantidade de colágeno III (-MSH 0,78 ± 0,1 vs controle 0,51 ± 0,06) sem alterar a quantidade de colágeno I (-MSH 0,55 ± 0,05 vs controle 0,60 ± 0,1) 40 dias após a lesão. Skin wound healing in adult mammals frequently result in scar tissue formation where collagen replaces the original tissue, whereas wound closure in fetal skin heals with regeneration of the original tissue. Reduction or alteration in the inflammatory cell composition after wound has been correlated with regeneration or reduction of scar tissue formation. Alpha-melanocyte stimulating hormone (-MSH) is produced in the central nervous system as well as by immune cells or in the skin where it can stimulate eumelanin production. The action of -MSH is mediated by melanocortins receptors (MC-R1 and MC-R4) expressed on skin cells, macrophages, mast cells and T-lymphocytes. Agouti is one antagonist of MC-R1 and MC-R4 and binding of agouti to these skin receptors inhibits eumelanin production. Alpha-MSH also has broad anti-inflammatory effects inhibiting the production of pro-inflammatory cytokines, prostaglandins and histamine. We tested if the intraperitoneal injection of -MSH or agouti, 30 minutes before skin lesion in C57BL/6 adult mice, would alter the inflammatory infiltrate and extracellular matrix deposition as observed 3 and 40 days after lesion. The injection of 125 mg/Kg of agouti did not change leukocyte (mean ± SEM - agouti 4,12 ± 0,28 vs control 4,64 ± 0,34) or mast cell (agouti 11,0 ± 1,22 vs control 9,5 ± 0,95) numbers 3 days after the lesion. Nor did the injection of agouti change scar area measured macroscopically (agouti 11,78 ± 0,48 vs control 12,92 ±1,05) or microscopically (agouti 0,30 ± 0,03 vs control 0,33 ± 0,02) 40 days after the lesion. However, the injection of 1,0 mg/kg of -MSH significantly reduced leukocyte (-MSH 2,05 ± 0,06 vs control 4,64 ± 0,34) and mast cell (-MSH 5,5 ± 0,27 vs control 9,5 ±0,95) counts 3 days after the lesion and also reduced scar area 40 days after the lesion measured either macroscopically (-MSH 9,24 ± 0,65 vs control 12,92 ± 1,05) or microscopically (-MSH 0,22 ± 0,01 vs control 0,33 ± 0,02). In addition, -MSH injection resulted in better collagen deposition, increased collagen III (-MSH 0,78 ± 0,1 vs control 0,51 ± 0,06) without alteration in collagen I (-MSH 0,55 ± 0,05 vs control 0,60 ± 0,1), 40 days after the lesion.

Orientador: Márcio Alberto Torsoni Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A AMPK hipotalâmica age como um sensor energético e é capaz de modular a ingestão alimentar, homeostase de glicose e a biossíntese de ácidos graxos. É conhecido que a injeção intra-hipotalâmica de ácidos graxos suprime a produção de glicose pelo fígado, principalmente pela ativação de canais de potássio sensíveis a ATP hipotalâmico (K(ATP)). Uma vez que em todos os modelos estudados a biossíntese de malonil-CoA estava envolvida, nós hipotetizamos que a Acetil-CoA Carboxilase poderia modular respostas contra-regulatórias independente da disponibilidade de nutrientes. Nesse estudo foram empregados os seguintes métodos: Immunoblot, PCR em tempo real, ELISA e avaliações bioquímicas. Através desses métodos, nós mostramos que a redução da expressão de acetil-CoA carboxilase pela injeção de oligonucleotídeo antisense intraventricular resultou no aumento da ingestão alimentar e diminuiu a expressão dos mRNA de CART, CRH e TRH. Além disso, como nos ratos em jejum, os ratos tratados com oligonucleotídeo antisense apresentaram concentrações de corpos cetônicos e glucagon séricos aumentados, além de níveis de insulina e glicogênio hepático diminuídos. A redução de acetil-CoA carboxilase hipotalâmica também aumentou a expressão de PEPCK, fosforilação de AMPK e a produção de glicose no fígado. Interessantemente, esses efeitos foram observados sem modificação da fosforilação da AMPK hipotalâmica. Com isso, concluímos que a inibição da ACC hipotalâmica pode ativar resposta contra-regulatória hepática independente da ativação da AMPK hipotalâmica Abstract: BACKGROUND: Hypothalamic AMPK acts as a cell energy sensor and can modulate food intake, glucose homeostasis, and fatty acid biosynthesis. Intrahypothalamic fatty acid injection is known to suppress liver glucose production, mainly by activation of hypothalamic ATP-sensitive potassium (K(ATP)) channels. Since all models employed seem to involve malonyl-CoA biosynthesis, we hypothesized that acetyl-CoA carboxylase can modulate the counter-regulatory response independent of nutrient availability. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: In this study employing immunoblot, realtime PCR, ELISA, and biochemical measurements, we showed that reduction of the hypothalamic expression of acetyl-CoA carboxylase by antisense oligonucleotide after intraventricular injection increased food intake and diminished the expression of CART, CRH, and TRH mRNA. Additionally, as in fasted rats antisense oligonucleotide-treated rats, increased serum glucagon and ketone bodies were observed along with diminished levels of serum insulin and hepatic glycogen. The reduction of hypothalamic acetyl-CoA carboxylase also increased PEPCK expression, AMPK phosphorylation, and glucose production. Interestingly, these effects were observed without modification of hypothalamic AMPK phosphorylation. CONCLUSION/SIGNIFICANCE: Hypothalamic ACC inhibition can activate hepatic counter-regulatory response independent of hypothalamic AMPK activation Mestrado Clínica Médica Mestre em Clínica Médica

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. O neuropeptídeo Y (NPY) é o peptídeo mais abundante no sistema nervoso central (SNC), sendo encontrado em regiões envolvidas com a regulação do estresse, memória, ansiedade e medo, como o hipocampo (HPC), amígdala e córtex pré-frontal. Embora alguns trabalhos suportem o envolvimento do NPY na mediação do comportamento emocional tanto em roedores como em humanos, ainda existe uma carência de dados mostrando o papel do NPY na resiliência ao estresse. Para isso, nosso estudo buscou verificar o envolvimento do NPY exógeno e endógeno, além de investigar a participação do receptor Y1 no teste do condicionamento aversivo contextual (CAC). Primeiramente, baseado no amplo espectro de atividades fisiológicas desempenhadas pelo sistema NPY, buscou-se observar os efeitos de baixas doses de NPY e do agonista Y1 Leu31Pro34-NPY (LP-NPY) e assim minimizar a incidência de efeitos adversos ao tratamento do medo condicionado, como prejuízos cognitivos, sedação e alterações da emocionalidade. Então, verificamos que a administração intracerebroventricular (i.c.v.) de NPY (3 pmol) e de LP-NPY (1 pmol) inibiram a aquisição e a consolidação (imediata e tardia) da memória de medo avaliada no teste do CAC. Por sua vez, somente o NPY facilitou a extinção, além de prejudicar a reconsolidação do medo condicionado. O pré-tratamento com o antagonista Y1, BIBO3304 (BIBO) bloqueou os efeitos do NPY, indicando a importante participação do receptor Y1, embora se sugira que a extinção do medo tenha também o envolvimento do receptor Y2. Para investigar a influência do NPY endógeno, submetemos os ratos ao ambiente enriquecido (AE) por 14 dias e após, verificamos o comportamento destes ratos na extinção do CAC, além de verificar a expressão do receptor Y1 nos ratos ?enriquecidos? no HPC, estrutura do SNC amplamente envolvida no condicionamento contextual. Como esperado, o AE facilitou a extinção do medo no teste do CAC, confirmando a participação do NPY. O envolvimento do NPY e do receptor Y1 foi confirmado com a detecção de níveis elevados da proteína do receptor Y1 no HPC em ratos enriquecidos. Interessantemente, esta elevação ocorreu somente nos ratos ?enriquecidos? que foram submetidos ao CAC, sugerindo que o AE favorece a resiliência ao aumentar a reatividade do receptor Y1, deixando este preparado para modular as respostas fisiológicas/comportamentais quando da ocorrência de situações traumáticas. Também procuramos verificar se a extinção do medo no teste do CAC era facilitada pelo bloqueio do auto-receptor Y2 com BIIE0246 (BIIE), já que este receptor regula a liberação de NPY. Nossos resultados mostraram que o tratamento com BIIE inibiu completamente a expressão do medo no teste do CAC, fazendo com que o comportamento dos ratos tratados comparáveis a ratos que não foram condicionados. Todavia, este efeito observado com o tratamento com BIIE permanece mesmo após a interrupção do tratamento, sugerindo que este efeito não é estado-dependente de uma atividade ansiolítica. Em adição, a participação de NPY endógeno é confirmada ao bloquear o receptor Y1 com BIBO, que reverteu os efeitos observados com o tratamento com o BIIE. De fato, mesmo quando não mais presente no organismo, o NPY continua a exercer seus efeitos, provavelmente através de mecanismo de neuroproteção, como observado em nosso experimento onde o NPY foi administrado 7 dias antes do teste do CAC, onde o NPY mas não o LP-NPY facilitou a extinção do medo. Com base no exposto acima, nossos dados mostram um efeito robusto do NPY inibindo o medo no teste do CAC, resposta essa que é mediada em parte pelo receptor Y1. Estes efeitos podem estar relacionados com o aumento da resiliência do SNC às situações traumáticas, sendo então uma abordagem de potencial terapêutico importante para o TEPT.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. A histamina é encontrada no líquido sinovial de indivíduos saudáveis e pacientes com diversos tipos de artrite e anti-histamínicos H1 potencializaram o comportamento nociceptivo no teste de formalina articular. É sabido que a histamina provoca coceira nos tecidos cutâneos, no entanto, em tecidos profundos a sua função sensorial não está clara. Nosso objetivo foi elucidar as estruturas envolvidas com o mecanismo de hipernocicepção dos anti-histamínicos H1 e ao contrário, a hiponocicepção observada com a histamina na incapacitação articular após injeção de formalina em joelhos de ratos. A incapacitação articular foi medida através da contagem do tempo de elevação da pata (TEP; s) durante o período de 1 min de caminhada forçada, a cada 5 minutos, durante uma sessão experimental de 60 min. O edema articular foi avaliado pelo aumento de diâmetro articular, (DA; cm), e o extravasamento de plasma foi medido pela quantidade de azul de Evans (25 mg / kg, i.v., 30 min antes do teste) no líquido sinovial (EP; mg / ml) 1 hora após a injeção de formalina. A formalina 1,5 % evoca duas fases de incapacitação, aumento do DA e EP. A cetirizina, 1 hora antes da formalina, causou somente hipernocicepção na 2ª fase do teste da formalina. Cromoglicato de sódio coadministrado com formalina preveniu o efeito hipernociceptivo da loratadina. Nenhum dos tratamentos alterou o DA e o EP. Tele-metihistamina e 2-PEA coadministrados com formalina promoveram hiper e hiponociceptivo, respectivamente. Somente a maior dose de 2-PEA aumentou o TEP. A cetirizina, 1 h antes da formalina preveniu a hiponocicepção do 2-PEA. Nenhum tratamento alterou o DA e o EP. A dose subefetiva de morfina na medula espinhal foi potencializada em seu efeito hiponociceptivo pela dose subefetiva de 2-PEA coadministrado com formalina no joelho. Leu31 Pro34 NPY e BIBO 3304 administrados na medula espinhal diminui e aumentou o TEP, respectivamente. A dose subefetiva de BIBO 3304 na medula espinhal preveniu o efeito hiponociceptivo do 2-PEA coadministrado com formalina no joelho. A neurotoxina NPY-sap diminuiu a expressão do receptor Y1 no segmento lombar (L4-L5) e preveniu o efeito hiponociceptivo de 2-PEA coadministrado com formalina. Tripsina coadministrado com formalina diminuiu o TEP, e ao contrário do BIBO 3304 administrado na medula espinhal, a naloxona administrada de forma subcutânea preveniu o efeito hiponociceptivo da tripsina coadministrada com formalina no joelho. Estes dados mostram que a liberação de histamina articular a partir de mastócitos, atuando em receptores H1 tem um papel hiponociceptivo independente de qualquer efeito vascular. Além disso, estes resultados sugerem que o mecanismo hiponociceptivo evocado pela ativação do receptor H1 e não pelo receptor PAR-2 articular, provavelmente envolve a liberação de NPY na medula espinhal. Portanto, o conjunto de resultados sugere um novo mecanismo que pode ser coadjuvante no tratamento de inflamação articular. Abstract : Histamine is found in synovial fluid from healthy individuals and patients with various types of arthritis and H1 antihistamines potentiated the nociceptive behavior in the formalin test joint. It is known that histamine causes itching in the skin, however, in deep tissues its sensory functions is not clear. Our goal was to elucidate the structures involved in the mechanism of hypernociception H1 antihistamines and unlike hyponociception observed with histamine in articular incapacitation after formalin injection in rat knees. The articular incapacitation was measured by counting the paw elevation time (PET; s) during the period of 1 min walk forced, every 5 minutes during a 60-min experimental session. The joint swelling was evaluated by the increase in articular diameter (AD; mm) and plasma leakage (PL; mg / ml) was measured by the quantity of Evans blue (25 mg / kg, iv 30 minutes before the test) in synovial fluid 1 hour after the formalin injection. Formalin 1.5% evokes two phases of incapacitation (PET), increased AD and PL. Cetirizine, 1 hour before formalin caused hypernociception in phase 2 of the formalin test. Cromolyn sodium co-injected with formalin prevented the hypernociceptive effect of loratadine and none of the treatments changed the AD and PL. Tele-metilhistamine and 2-PEA co-administered with formalin promoted hyper and hyponociception, respectively. Only the highest dose of 2-PEA increased the PET. Cetirizine, 1 hour before formalin, prevented hyponociception effect of 2-PEA. No treatment altered the AD and PL. The subeffective dose of morphine in spinal cord was potentiated by subeffective dose of 2-PEA co-injected with formalin. Leu31 Pro34 NPY and BIBO 3304 in spinal cord, decreased and increased the PET, respectively. The subeffective dose of BIBO 3304 prevented the effect of hyponociceptive 2-PEA. The pre-treatment 14 days before with neurotoxin NPY-sap in spinal cord decreased the Y1 receptor expression in the lumbar segment (L4-L5) and prevented the hyponociceptive effect of 2-PEA co-injected with formalin. Trypsin co-injected with formalin decreased the TEP and unlike of BIBO 3304 in spinal cord, naloxone subcutaneous prevented this trypsin hyponociceptive effect. These data support that histamine release from articular mast cells on H1 receptors have a hyponociceptive role without vascular effect. Furthermore, these results suggest that the hyponociceptive mechanism of histamine and not trypsin, involves the NPY release in spinal cord. Therefore, the set of results suggests a new mechanism that may be useful in the treatment of joint pain.

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas (Bioquímica Médica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2012 Submitted by amelia Janeiro (ajaneiro@reitoria.ul.pt) on 2013-01-16T11:18:58Z No. of bitstreams: 1 ulsd063331_td_Marta_Ribeiro.pdf: 7547837 bytes, checksum: 976dddb566bc6e99f66c428fba7cec5c (MD5) Made available in DSpace on 2013-01-16T11:22:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulsd063331_td_Marta_Ribeiro.pdf: 7547837 bytes, checksum: 976dddb566bc6e99f66c428fba7cec5c (MD5) Previous issue date: 2012 Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, SFRH/BD/42158/2007).

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Neurociências, Florianópolis, 2012. O acúmulo da proteína beta amilóide (AB) no sistema nervoso central (SNC) e os prejuízos cognitivos são sinais clássicos da doença de Alzheimer que estão fortemente associados ao estresse oxidativo e às alterações colinérgicas. Um número crescente de trabalhos tem relacionado à obesidade como um fator de risco para o desenvolvimento da doença de Alzheimer. Durante o ganho de peso existe uma redução nos níveis plasmáticos e no SNC dos hormônios orexígenos grelina (Ghr) e neuropeptídeo Y (NPY), que além de regularem a ingesta de alimentos, também participam da modulação de processos cognitivos, emocionais e neurodegenerativos. No presente estudo, foram investigados os efeitos do pré-tratamento com Ghr ou NPY sobre as alterações comportamentais e neuroquímicas induzidas pela infusão intracerebroventricular (i.c.v.) do peptídeo AB1-40, utilizado como um modelo experimental da doença de Alzheimer. Grupos independentes de camundongos albinos (3 meses de idade) receberam uma administração aguda de Ghr (3 nmol/µl, i.c.v.), NPY (0.0234 umol/uL, i.c.v.) ou PBS (i.c.v.) 15 min antes da infusão do AB1-40 (400 pmol/camundongo, i.c.v.). De 9 a 14 dias após os tratamentos, os animais foram avaliados em uma bateria de testes comportamentais para a investigação das funções cognitivas (realocação do objeto), emocionais (suspensão pela cauda e labirinto em cruz elevado) e locomotoras (campo aberto). Ao final dos testes comportamentais, os animais foram sacrificados para a avaliação da captação de glutamato no hipocampo. As analise de parâmetros bioquímicos relacionados ao estresse oxidativo e atividade da enzima acetilcolinesterase (AchE) foram realizadas 24 h após o tratamento com Ghr, NPY e AB1-40. O tratamento prévio com Ghr ou NPY preveniu os prejuízos na memória espacial e aumento no tempo de imobilidade no teste de suspensão pela cauda induzidos pela infusão i.c.v. de AB1-40. Além disso, o peptídeo AB1-40 induziu uma significativa peroxidação lipídica, redução na atividade da enzima glutationa redutase (GR) e na captação de glutamato, aumento na atividade da enzima AchE no córtex pré-frontal e/ou hipocampo de camundongos que foram prevenidos pelo pré-tratamento com Ghr ou NPY. Em conjunto, os resultados do presente estudo sugerem que a Ghr e o NPY são capazes de prevenir os déficits cognitivos induzidos pelo peptídeo AB1-40 e apresentar um comportamento tipo antidepressivo em camundongos, sendo estes efeitos protetores mediados, ao menos em parte, pela inibição do estresse oxidativo e disfunção dos sistemas glutamatérgico e colinérgico. Abstract : The accumulation of amyloid beta (AB) protein in the central nervous system (CNS) and the cognitive impairments are classic signs of Alzheimer's disease that are strongly associated with oxidative stress and changes in cholinergic system. A growing number of studies have related the obesity as a risk factor for the development of Alzheimer's disease. During the weight gain there is a reduction in CNS and plasmatic levels of orexigenic hormones ghrelin (GHR) and neuropeptide Y (NPY), which regulates the food intake and also participates in the modulation of cognitive, emotional and neurodegenerative disorders. In this study, we investigated the effects of pretreatment with Ghr or NPY on the behavioral and neurochemical changes induced by intracerebroventricular (i.c.v.) infusion of AB1-40 peptide, used as an experimental model of Alzheimer.s disease. Independent groups of Swiss albino mice (3 months old) received a single acute administration of Ghr (3 nmol/uL, i.c.v.), NPY (0.0234 umol/ uL, i.c.v.) or PBS (i.c.v.) 15 min before infusion of AB1-40 (400 pmol/mouse, i.c.v.). The animals were evaluated 9 to 14 days after the treatment on a battery of behavioral tests for the investigation of cognitive (object location), emotional (tail suspension and elevated plus-maze) and locomotion (open field) functions. At the end of behavioral tests, the animals were sacrificed for the evaluation of the glutamate uptake in hippocampus. The analysis of biochemical parameters related to oxidative stress and activity of the enzyme acetylcholinesterase (AChE) were performed 24 h after treatment with Ghr, NPY and AB1-40. Pretreatment with Ghr or NPY prevented the decline in spatial memory and the increased in immobility time in tail suspension test induced by the infusion icv of AB1-40. Moreover, the peptide AB 1-40 induced a significant lipid peroxidation, reduction in glutathione reductase (GR) activity and glutamate uptake, also causes an increase in enzyme AChE activity in the prefrontal cortex and/or hippocampus of mice that were prevented by pretreatment with Ghr or NPY. Altogether, the result of this study suggest that Ghr and NPY are capable of preventing cognitive deficits induced by peptide AB1-40 and present an antidepressant like-effect in mice, and these protective effects are mediated, at least in part, by inhibition of stress oxidative and dysfunction of the glutamatergic and cholinergic system.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Introdução: A complexidade da fisiopatologia na Esteatose Hepática Não Alcóolica (EHNA) envolve uma interface entre as adipocinas e a regulação neuroendócrina do balanço energético, incluindo o papel do sistema Neuropeptídeo Y/Proteína agouti relacionada. Objetivo: estabelecer a relação entre a razão NeuropeptídeoY/Proteína relacionada Agouti (AgRP) e a adiponectinemia, bem como avaliar a influência de neuropeptídeos orexígenos nos aspectos nutricionais de adolescentes obesos com EHNA submetidos a uma intervenção interdisciplinar de longo prazo. Métodos: Recrutou-se adolescentes obesos pós-púberes para participarem de uma intervenção interdisciplinar. O grupo foi analisado de acordo com a presença ou não de EHNA pela ultrassonografia (US). As amostras de sangue foram coletadas para a mensuração da glicemia, transaminases hepáticas e perfil lipídico, resistência e sensibilidade insulínica. As concentrações de Adiponectina, NPY e AgRP foram avaliadas por ELISA e a mensuração da gordura visceral e subcutânea pela US. A ingestão alimentar foi aferida por meio de registro alimentar de 3 dias. Resultados: No início da terapia, observou-se que parâmetros clínicos importantes como massa corporal, IMC, gordura visceral, HOMA-IR, QUICKI, triglicérides, VLDL-colesterol e transaminases hepáticas apresentaram-se mais alterados em pacientes com EHNA, os quais melhoram após tratamento. Além disso, a energia total e ingestão de macronutrientes reduziram significativamente em ambos os grupos. Observou-se correlação positiva entre AgRP e a gordura visceral em todos os pacientes, e correlação negativa entre NPY/AgRP com a concentração de adiponectina apenas em adolescentes obesos com EHNA. Ao analisar a influência da dieta nos neuropeptídeos orexígenos, apenas os pacientes com EHNA apresentaram correlação positiva entre a ingestão de ácidos graxos saturados com os neuropeptídeos orexígenos (NPY e AgRP); e carboidrato com NPY. Foi observada correlação positiva entre ingestão de energia, (%) de lipídio e ácidos graxos saturados com o acúmulo de gordura visceral. Conclusão: Os pacientes com EHNA apresentaram parâmetros clínicos mais alterados ao compará-los àqueles que não possuíam esta doença, incluindo a correlação negativa entre adiponectina e NPY/AgRP. Estes resultados sugeriram que adolescentes obesos com EHNA apresentaram perfil inflamatório alterado, o qual pode influenciar na regulação neuroendócrina do balanço energético indicando uma barreira adicional na terapia de redução de peso. Além disso, nossos achados revelaram uma importante influência da composição da dieta no sistema orexígeno, sendo essencial considerar a ingestão excessiva de gordura saturada como um fator determinante para o desenvolvimento de EHNA. BACKGROUND: The complexity physiophatology in the Non Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) involves interplay between adipokines and neuroendocrine regulation of energy balance, including the role of Neuropeptide Y/Agouti Related Protein system. AIM: establishing the relationship between Neuropeptide Y/Agouti Related Protein (NPY/AgRP) ratio and adiponectinemia, as well as to assess the influence of orexigenic neuropeptides in the nutritional aspects of NAFLD obese adolescents submitted to a long-term interdisciplinary approach. METHODS: A group of post-pubescent obese adolescents were recruited and included in the interdisciplinary intervention. The group was analyzed according to the presence or ausence of NAFLD by ultrassonography (US). Blood samples were collected to measure glycemia, hepatic transaminases and lipid profile, insulin resistance and sensitivity. Adiponectin, NPY and AgRP concentrations were measured by ELISA and the measurement of visceral ans subcutaneous fat by US. Food intake was measured using 3-day diet records. RESULTS: It was observed at baseline that important clinical parameters including body weight, BMI, visceral fat, HOMA-IR, QUICKI, triglycerides, VLDL-cholesterol and hepatic transaminases were more altered in NAFLD patients. After the intervention, these parameters, total energy and macronutrient intake were reduced significantly in both groups. The most important finding was the positive correlation between AgRP with visceral fat in all patients, and negative correlation between NPY/AgRP with adiponectin only in NAFLD obese adolescents. Analyzing the influence of the diet in the orexigenic neuropeptides, only the NAFLD patients presented a positive correlation between the saturated fatty acids intake and the orexigenic neuropeptides (NPY and AgRP); and carbohydrate with NPY. Indeed, it was observed a positive correlation between energy intake, lipid (%) and saturated fatty acids with visceral fat accumulation. CONCLUSION: NAFLD patients presented more altered clinical parameters than non-NAFLD, including the negative correlation between adiponectin and NPY/AgRP. These results suggested that NAFLD obese adolescents presented an altered inflammatory profile that can influence the neuroendocrine regulation of energy balance suggesting and additional impairment in the weigth loss therapy. Moreover, our findings showed an important influence of diet composition in the orexigenic system, being essential consider that the excessive saturated fatty acids intake could be a determinant factor to increase nonalcoholic fatty liver disease. FAPESP: 2008/53069-0 FAPESP: 2006/00684-3 FAPESP (CEPID/Sono): 9814303-3 TEDE

Dissertação de mestrado em Biologia Celular e Molecular apresentada ao Departamento de Ciências da Vida da Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade de Coimbra A cicatrização de feridas é um processo complexo delineado pelas seguintes fases: homeostase/coagulação, inflamação, migração-proliferação e remodelação. As células da pele são fundamentais no decorrer deste processo, nomeadamente as células de Langerhans (LCs), os mastócitos (MCs), os macrófagos, os queratinócitos, as células endoteliais e os fibroblastos (FBs). Esta dissertação baseou-se no estudo das células LCs e FBs, através do uso da linha celular dendrítica proveniente da pele de fetos de ratinhos (FSDC) e da linha celular de FBs proveniente de recém-nascidos humanos (BJ), em condições normais e inflamatórias in vitro (estimulação através de um lipopolisacarídeo – LPS), num ambiente hiperglicémico (30 mM de glucose). A activação de terminais nervosos sensoriais da pele é igualmente importante para a cicatrização, induzindo a expressão e libertação de neuropeptídeos na pele que se ligam a receptores acoplados a proteínas G das células da pele, modulando a activação de diferentes vias de sinalização. Na presente dissertação é estudado o efeito da neurotensina (NT) na activação das vias de sinalização Akt, cinases de proteínas activada por agentes mitogénicos (MAPK), nomeadamente JNK, p38 e ERK MAPKs, e na activação do factor de transcrição NF-B. O efeito da NT na viabilidade e migração celular, na produção de óxido nítrico (NO), na síntese de citocinas/quimiocinas pro/antiinflamatórias e na expressão de factores de crescimento, também foram avaliadas. Os resultados evidenciaram que os efeitos da NT dependem da sua concentração, do tipo e quantidade de receptores a que se ligam e a célula em que induz efeito. Assim, enquanto 100 nM de NT induziu efeitos pro-inflamatórios, 10 nM de NT induziu efeitos anti-inflamatórios nas células FSDCs; nas células BJ, a NT induziu efeitos anti-inflamatórios de um modo dependente da dose utilizada. A prévia descrição dos efeitos da NT nas células, também abrange condições de inflamação in vitro, nasquais se observou um aumento da síntese da NT nas células FSDCs, não observado nas células BJ, e um aumento da expressão dos receptores de NT nas células BJ, em oposição à sua diminuição nas FSDCs. Por conseguinte, estes resultados evidenciam o papel modelador da NT na inflamação, em que a NT pode ser produzida nas LCs e actuar de um modo parácrino em células da pele, como os FBs. O tratamento das células FSDCs com 10 nM de NT diminuiu a activação das vias inflamatórias NF-B e JNK, a produção de NO, a expressão das citocinas IL-6, TNF-α e IL-10 e o factor de crescimento vascular endotelial (VEGF), assim como activou a via de sobrevivência ERK e aumentou a síntese do factor de crescimento epidermal (EGF). Por outro lado, 100 nM de NT promoveram efeitos opostos. O tratamento das células BJ com 10 ou 100 nM de NT diminuiu a expressão das quimiocinas CCL4, CCL5, CCL11 e IL-8, assim como diminuiu a expressão das citocinas IL-1β e IL-6, de um modo dependente da dose utilizada. NT também induziu a expressão de EGF e promoveu a migração das células BJ. Reduzidas doses de NT modulam negativamente a capacidade imune das células FSDC e BJ, contrastando com o efeito pro-inflamatório de outros neuropeptídeos, como SP e CGRP. O aumento da expressão de EGF, adicionado à diminuição da capacidade imune das células, é importante na inibição da fase inflamatória da cicatrização, e consequente progresso para as fases de migração-proliferação e remodelação. Pelo contrário, altas doses de NT podem promover efeitos patológicos nas células FSDC (estado pro-inflamatório), limitando a progressão da cicatrização. Estes resultados perspectivam o aparecimento de novas terapias para o tratamento da ferida diabética, caracterizada por neuropatia e pro-inflamação, podendo mesmo terminar em úlceras incuráveis nos pés diabéticos (DFUs), com consequente amputação. Wound healing (WH) is a complex process which involves homeostasis/coagulation, inflammation, migration-proliferation and remodeling. Skin cells like Langerhans cells (LCs), mast cells (MCs), macrophages, keratinocytes, endothelial cells and fibroblasts (FBs) are fundamental to all stages of WH. In the present work, LCs and FBs were studied using a fetal skin dendritic cell line (FSDC) and a cell line obtained from normal newborn human foreskin fibroblasts (BJ), in homeostatic and in vitro inflammatory conditions, stimulated by lipopolysaccharide (LPS), and under a hyperglycemic (30 mM of glucose) environment. The activation of sensory nerve endings of the skin is also important in WH, inducing the expression and release of neuropeptides into the skin that bind to G-protein coupled receptors in skin cells and modulate the activation of different signaling pathways. This work shows the effects of the neuropeptide neurotensin (NT) in the activation of the intracellular signaling pathways of Akt, Mitogen-activated protein kinases (MAPK) (JNK, p38 and ERK) and the transcription factor NF-B. Moreover, the effect of NT on cell viability and migration, nitric oxide (NO) production, synthesis of pro- and anti-inflammatory cytokines/chemokines and expression of growth factors was also evaluated. The results showed that NT effects were dependent on NT concentration, on the type and amount of receptors that bind to NT and, consequently, on the host cells. Accordingly, while NT induced a pro (100 nM) or anti-inflammatory (10 nM) effect in FSDCs, in BJ cells, NT only induced a dose-response anti-inflammatory effect. NT also promoted its effects in in vitro inflammatory conditions. In addition, NT synthesis was upregulated in FSDCs and barely synthesized in BJ cells, as well as, NT receptors were downregulated in FSDCs and upregulated in BJ cells, in inflammatory conditions.These results enlighten that NT is an essential mediator of inflammation, produced by LCs to act in a paracrine way in surrounding cells, like FBs. NT (10 nM) treatment downregulated the inflammatory pathways of NF-B and JNK, the production of NO, the expression of the acute-phase proteins IL-6 and TNF-α, the anti-inflammatory cytokine IL-10 and the vascular endothelial growth factor (VEGF), while the survival pathway ERK and the epidermal growth factor (EGF) were upregulated in FSDCs. However, NT (100 nM) upregulated NO production and the expression of acute-phase proteins, while downregulated the expression of EGF. BJ cells treated with NT (10 or 100 nM) also downregulated the expression of pro-inflammatory chemokines, namely CCL4, CCL5, CCL11 and IL-8, as well as, the expression of pro-inflammatory cytokines, like IL-1β and IL-6, in a dose-dependent way. NT also induced the expression of EGF and promoted the migration of BJ cells. Low doses of NT negatively modulated the immune capacity of FSDCs and BJ cells, in contrast to other neuropeptides effects, like SP and CGRP that induce a proinflammatory status. In addition to this negative immunomodulation, the expression of EGF increases, important in the downregulation of the inflammatory phase of WH and promotion of the migration-proliferation and remodeling phases of WH. In contrast, high doses of NT may promote pathological effects in FSDCs (pro-inflammatory state), limiting the promotion of WH. These results may give new perspectives in the design of new therapies for diabetic wound healing, a disease characterized by neuropathy and a pro-inflammatory environment that can culminate into incurable diabetic foot ulcerations (DFUs) or even foot amputation.

Três sub-divisões hipotalâmicas são importantes no ciclo sono-vigília: o hipotálamo anterior (núcleos gabaérgicos e núcleos supraquiasmáticos), o hipotálamo posterior (núcleo túbero-mamilar histaminérgico) e o hipotálamo lateral (sistema hipocretinas). O sistema gabaérgico inibitório do núcleo pré-óptico ventro-lateral (VLPO) do hipotálamo anterior é responsável pelo início e manutenção do sono NREM. Os neurônios supraquiasmáticos (NSQs) do hipotálamo anterior são responsáveis pelo ritmo circadiano do ciclo sono-vigília. Os núcleos aminérgicos, histaminérgicos, as hipocretinas e núcleos colinérgicos do prosencéfalo basal apresentam-se ativos durante a vigília, inibindo o núcleo pré-óptico ventro-lateral, promovendo a vigília. O processo de inibição-estimulação é a base do modelo da interação recíproca entre os grupos de células wake-off-sleep-on e células wake-off-sleep-on reguladores do ciclo sono-vigília. O modelo da interação recíproca também se aplica aos núcleos colinérgicos (células REM-on) e aminérgicos (células REM-off) do tronco cerebral no controle temporal do sono REM-NREM. Neurochemically distinct systems interact regulating sleep and wakefulness. Wakefulness is promoted by aminergic, acetylcholinergic brainstem and hypothalamic systems. Each of these arousal systems supports wakefulness and coordinated activity is required for alertness and EEG activation. Neurons in the pons and preoptic area control rapid eye movement and non-rapid eye movement sleep. Mutual inhibition between these wake- and sleep-regulating systems generate behavioral states. An up-to-date understanding of these systems should allow clinicians and researchers to better understand the effects of drugs, lesions, and neurologic disease on sleep and wakefulness.

Os neuropeptídeos são neurotransmissores relevantes na fisiologia nasal e o conhecimento crescente acerca de seu papel na fisiopatologia de doenças nasais abre novas perspectivas. A sua investigação na mucosa nasal humana baseia-se em grande parte em marcação imunológica, método complexo e sujeito a inúmeros fatores de erro. Com o intuito de viabilizar este tipo de pesquisa em nosso meio, um método de imunofluorescência para peptídeo intestinal vasoativo (VIP) na mucosa nasal humana é proposto e avaliado. FORMA DE ESTUDO: Coorte transversal. MATERIAL E MÉTODO: Oito pacientes submetidos a cirurgia funcional do nariz têm um fragmento de mucosa coletado da concha inferior. O tecido foi fixado em solução de Zamboni (paraformaldeído 4% tamponado e ácido pícrico 0,4%), congelado em nitrogênio líquido e armazenado. Cortes de 14 µm foram realizados e submetidos à reação de imunofluorescência para VIP (Península Laboratories). As imagens microscópicas foram documentadas em fotografia convencional. A especificidade, sensibilidade e reprodutibilidade de execução foram avaliadas. A reprodutibilidade de interpretação de resultados foi avaliada através da comparação de graus de marcação (0 a 4) atribuídos às fotos por seis observadores. RESULTADOS: Os resultados mostraram ser o método suficientemente específico, sensível, além de reprodutível em sua execução. A interpretação de resultados mostrou depender do perfeito esclarecimento do observador no julgamento das imagens de imunofluorescência, mas mostrou uniformidade. CONCLUSÃO: O método proposto foi considerado útil na pesquisa de neuropeptídeos na mucosa nasal humana. Neuropeptides are important neurotransmitters in nasal physiology and the increasing knowledge of their role in nasal diseases brings new therapeutic perspectives. The investigation of human nasal mucosa neuropeptides is based mostly on immunocytochemistry, a complex approach whose resulting factors may be variable. Aiming to make this kind of research available, an immunofluorescence approach for vasoactive intestinal peptide (VIP) in human nasal mucosa is proposed and evaluated. STUDY DESIGN: Transversal cohort. MATERIAL AND METHOD: Human inferior turbinate samples were obtained at time of nasal surgery from eight patients. The samples were fixed in Zamboni solution (4% phosphate-buffered paraformaldehyde and 0.4% picric acid), snap-frozen and stored at -70ºC. 14 µm sections were then obtained. Immunofluorescence staining for VIP (Peninsula Laboratories) was performed and its images documented by conventional photography. The method's specificity, sensitivity and reproducibility of execution were evaluated. Additionally, the reproducibility of interpretation of results was evaluated through the comparison of staining scores (0 to 4) attributed to the images by six observers. RESULTS: The results showed the approach to be very specific and sensible, besides being reproducible in its execution. The interpretation of results may depend on the observer's accuracy in judging immunofluorescence images, but it showed uniformity. CONCLUSION: The proposed method was highly useful for research purposes in neuropeptides in human nasal mucosa.

The genus Aspidosperma (Apocyanaceae) is known to be rich in yohimbine type of indol alkaloids. This study was aimed to evaluate the alkaloid rich fraction (SF3-5) obtained from Aspidiosperma ulei Markgr. root bark for its general toxicity, behavioral effects in mice and a possible proerectile activity. Acute toxicity tests were performed to determine the LD50 in mice and LC50 with Artemia sp. Behavioral effects were studied in the tests of open-field, hole-board, plus-maze, rota-rod, forded-swimming, and on barbiturate-induced sleeping time. In vitro studies with the fraction were carried out using mouse vas deferens and the rabbit and human corpus cavernous tissues. The estimated values of i.p. LD50 in mice and LC50 with Artemia sp. were in the order of 400 mg/kg, and 3.94 microg/ml, respectively. Behavioral tests in mice revealed a general stimulant activity of SF3-5 on CNS but demonstrated no motor impairment in rota-rod test. At 25 mg/kg intraperitoneal injection of SF3-5, penile erections were evidenced in 75% of the mice. This effect was completely abolished by pretreatment with clonidine (alfa2 –adrenoceptor agonist) or haloperidol (dopaminergic antagonist) and only partially inhibited by L-NAME (nitric oxide synthase inhibitor) and by methylene blue (soluble guanylate cyclase inhibitor). SF3-5 also abrogated the fluoxetine-induced depression in sexual behavior. In mouse vas deferens, contractile effects induced by electrical field stimulation or noradrenaline but not induced by ATP were inhibited by SF3-5 (1-64 microg/ml). In both human and rabbit isolated corpus cavernosum preparations pre-contracted by phenylephrine, high potassium or PGF2alfa, SF3-5 (1-300 microg/ml) caused concentration-dependent relaxation. Our results indicate that SF3-5 manifests pro-erectile activity possibly involving both central (dopaminergic, adrenergic and nitriergic systems) and peripheral (relaxant effect on corpus cavernosal smooth muscle, probably involving Ca+2 flux) mechanisms. These data also suggest that Aspidiosperma ulei Markgr. can be explored as an alternative for the treatment of erectile dysfunction. The study further warrants the identification and isolation of the active chemical compound present in SF3-5, responsible for the pharmacological activity. O gênero Aspidosperma (Apocynaceae) é conhecido por ser rico em alcalóides indólicos do tipo ioimbina. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a toxicidade, efeitos sobre o comportamento e um possível pró-erétil de uma fração rica em alcalóides isolada da casca da raiz de Aspidosperma ulei Markgr. (SF3-5). Os testes de toxicidade aguda foram realizados para determinar a DL50 em camundongos e a CL50 em Artemia sp. Os efeitos sobre o comportamento foram estudados nos testes do campo aberto, placa perfurada, labirinto em cruz elevado, “rota-rod”, natação forçada e tempo de sono induzido por barbitúrico. Os estudos in vitro com a fração foram realizados em canal deferente de camundongos e corpos cavernosos de coelhos e humanos. Os valores estimados para a DL50 (i.p.) em camundongos e CL50 em Artemia sp. foram na ordem de 400 mg/Kg e 3,94 microg/mL, respectivamente. Os testes comportamentais em camundongos revelaram uma atividade estimulante de SF3-5 sobre o SNC mas não demonstraram incoordenação motora no teste do “rota-rod”. A injeção intraperitoneal de 25 mg/Kg de SF3-5 induziu a ereção peniana em 75 % dos camundongos. Este efeito foi completamente abolido pelo pré-tratamento com clonidina (agonista receptores adrenérgicos alfa2) ou haloperidol (antagonista dopaminérgico) e somente parcialmente inibido pelo L-NAME (inibidor da óxido nítrico sintase) e pelo azul de metileno (inibidor da guanilato ciclase solúvel). SF3-5 também reverteu a depressão do comportamento sexual induzida por fluoxetina. No canal deferente de camundongos, as contrações induzidas pela estimulação por campo elétrico ou noradrenalina, mas não as induzidas por ATP, foram inibidas por SF3-5 (1 – 64 microg/mL). SF3-5 (1 – 300 microg/mL) promoveu relaxamento concentração-dependente nas preparações de corpos cavernoso humanos e de coelhos pré-contraídas com fenilefrina, potássio ou PGF2alfa. Nossos resultados indicam que SF3-5 manifesta atividade pró-erétil possivelmente envolvendo mecanismos centrais (sistemas dopaminérgico, adrenérgico e nitrérgico) e periférico (efeito relaxante do músculo liso cavernoso aparentemente envolvendo o fluxo de Ca+2). Estes dados também sugerem que Aspidosperma ulei Markgr. pode ser explorada como uma alternativa para o tratamento da disfunção erétil. São necessários estudos futuros para identificar e isolar o composto químico ativo presente em SF3-5 responsável pela atividade farmacológica.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Este trabalho demonstrou que a contração induzida pela BK na íris isolada de porco é mediada pelos receptores B2, com liberação neuronal de ACh, noradrenalina, neuropeptídeos e derivados do ácido araquidônico, através das vias das COX-1, COX-2, LOX e TXA2. Além disso, demonstrou o envolvimento do influxo de cálcio do meio extracelular, através dos canais de cálcio do tipo L, N e P, bem como a possível participação das PKA e PKC mediando as ações da BK na íris. Os estudos também mostram que os receptores B1 não são constitutivos nessa preparação, no entanto, após 4 h de incubação com LPS, ocorre a ativação dos receptores B1, por meio de mecanismos dependentes da síntese protéica e de fatores de transcrição, como o NF-kB. A via das MAPKs, especialmente MEK-1, p38-MAPK e fosfatidilinositol 3-quinase, além de estarem envolvidas na indução dos receptores B1, também participam dos mecanismos que regulam as ações do receptor B1 após a indução com LPS. Além disso, confirma-se a participação das MEK-1 e p38-MAPK por meio dos estudos de biologia molecular. Por outro lado, demonstra-se que os neuropeptídeos como o NK1, NK2, NK3 e CGRP não participam das respostas contráteis induzidas pela des-Arg9-BK nessa preparação. Todavia, apresentam dependência significativa do cálcio extracelular, através dos canais de cálcio do tipo L e não do tipo N. Os resultados contribuem para melhor compreensão de alguns dos mecanismos envolvidos na regulação dos receptores de cininas B1 e B2 na íris isolada de porco. Além disso, geram subsídios para o melhor entendimento dos processos inflamatórios e dolorosos, como também para o desenvolvimento futuro de terapias antiinflamatórias e analgésicas.

Há evidências crescentes de que a inervação cutânea é capaz de modular uma variedade de fenômenos cutâneos agudos e crônicos, interagindo com as células da pele e seus componentes imunes. Essa forma de sinalização local entre tecido nervoso e tecido cutâneo ocorre especialmente por meio dos neuropeptídeos, uma numerosa família de neurotransmissores de natureza química comum e nomenclatura heterogênea presentes em todo o sistema nervoso e secretados pelas fibras nervosas cutâneas. São alvo desta revisão os neuropeptídeos substância P (SP), o peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), o peptídeo vasoativo intestinal (VIP), o peptídeo ativador da adenilato-ciclase pituitária (PACAP), o neuropeptídeo Y (NPY) e a somatostatina (SOM). Serão discutidas suas ações sobre as células da pele e sistema imune, bem como estudos recentes que sugerem a participação dos neuropeptídeos nas respostas inflamatórias cutâneas, nas reações de hipersensibilidade e em dermatoses humanas, notadamente na psoríase, dermatite atópica, hanseníase e alopecia. There is increasing evidence that cutaneous nerve fibers play a modulatory role in a variety of acute and chronic skin processes. Local interactions between skin cells, skin immune components and neuronal tissues occur specially through neuropeptides, a large family of chemically-related neurotransmitters exhibiting a heterogeneous nomenclature. Neuropeptides are ubiquitous in central and peripheral nervous systems, being directly released in skin by cutaneous nerve fibers. This review is focused on the actions of substance P (SP), calcitonin gene-related peptide (CGRP), vasointestinal peptide (VIP), pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP), neuropeptide Y (NPY) and somatostatin (SOM). Neuropeptide-related functions on skin and immune cells are also discussed, as well as recent findings implicating nerve fibers in cutaneous inflammatory responses, hypersensitivity reactions and dermatoses, namely psoriasis, atopic dermatitis, leprosy and alopecia.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia O presente trabalho estudou o papel da nociceptina (N/OFQ) e da nocistatina (NST) na modulação da ansiedade e da depressão experimental. Nossos dados mostraram que camundongos tratados com N/OFQ apresentaram um perfil do tipo ansiolítico no teste do labirinto em cruz elevado (LCE), enquanto que a NST induziu um efeito do tipo ansiogênico. Além disso, dados mostrados neste trabalho sugerem haver uma interação entre o sistema GABAérgico e a N/OFQ, mas não entre a NST, na modulação da ansiedade experimental. Em relação à depressão experimental, observamos que a N/OFQ e a NST não alteraram o comportamento dos camundongos submetidos ao teste da natação forçada (TNF), porém o UFP-101, um antagonista NOP, induziu um perfil do tipo antidepressivo no TNF em camundongos e ratos e no teste da suspensão pela cauda (TSC) em camundongos e, em linha com estes dados, camundongos knockout para o receptor NOP apresentaram um perfil do tipo antidepressivo no TNF e no TSC. No presente trabalho mostrou-se também que o efeito do tipo antidepressivo induzido pelo bloqueio do receptor NOP parece ser mediado pelo sistema monaminérgico e, em especial, pelo serotonérgico. Assim, os resultados apresentados nesta tese candidatam o sistema N/OFQ - receptor NOP como um alvo terapêutico promissor para o tratamento da ansiedade e da depressão.