Search

Orientador: José Mauro Granjeiro Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O objetivo do trabalho foi avaliar comparativamente a neoformação óssea e o perfil de gelatinases 2 e 9 durante o reparo de defeito crítico em crânio de ratos tratados com osso autógeno ou xenoenxerto desmineralizado. Um defeito ósseo de tamanho crítico (8 mm) foi confeccionado no crânio de 90 ratos Wistar (90 dias de vida), e preenchido com osso autógeno (grupo controle) obtido durante a confecção do defeito ou com matriz óssea bovina desmineralizada (grupo teste). Após os períodos de 7, 14, 21, 30 e 90 dias, os animais foram eutanasiados e as peças coletadas para análises histomorfométrica (em hematoxilina e eosina) e zimográfica. A análise paramétrica foi realizada utilizando análise de variância (teste de Tukey se p

Orientador: Dagmar Ruth Stach-Machado Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A doença periodontal é caracterizada como um grupo de lesões que afetam os tecidos que rodeiam e suportam os dentes nos seus alvéolos. A placa bacteriana é seu agente etiológico principal, todavia inúmeras evidências sugerem que a doença periodontal não está simplesmente associada à colonização da cavidade oral por microrganismos patogênicos, mas à susceptibilidade ou resistência do hospedeiro, uma vez que, dependendo da resposta imune mediada a estes microrganismos poderá resultar ou não na destruição do tecido periodontal. Nos tecidos periodontais saudáveis, há um delicado equilíbrio entre os microrganismos encontrados na placa e a resposta do hospedeiro. Embora a resposta seja essencialmente protetora é influenciada por diversos fatores que podem gerar uma resposta imune exacerbada e deste modo, contribui para o agravamento das lesões e cronificação da doença periodontal. Entre os fatores de risco está o Diabetes Mellitus, caracterizado pela ineficiência na produção ou utilização inadequada de insulina pelo organismo, afetando o metabolismo de proteínas, carboidratos e gordura, resultando em severas desordens metabólicas. O objetivo inicial deste trabalho foi estudar o desenvolvimento da doença periodontal experimental em ratos sob influência do diabetes induzido por estreptozotocina (STZ), caracterizando as alterações morfológicas encontradas no tecido epitelial e conjuntivo, uma vez que, indivíduos diabéticos apresentam um retardo na capacidade de cicatrização. Os resultados obtidos confirmaram que os animais diabéticos tiveram cronificação da resposta inflamatória com aumento de células inflamatórias no tecido do periodonto, degradação maior e mais rápida de fibras colágenas, que levou ao acúmulo de fibras colágenas densas, aumentou aparentemente a quantidade de fibroblastos, aumentou a degradação de fibras reticulares que sustentam a membrana da basal, houve involução das papilas dérmicas e aumento da camada córnea. Uma vez que, nos animais diabéticos o processo fibrótico foi mais acentuado com o avanço da inflamação afetando a organização estrutural do tecido epitelial e conjuntivo, provavelmente devido ao aumento da degradação da matriz extracelular. Deste modo, efetuamos a avaliação das MMP2 e 9, também denominadas gelatinases, as quais entre outras atividades biológicas atuam na degradação proteolítica da matriz extracelular. Os resultados obtidos na quantificação da atividade enzimática das MMPs por zimografia mostrou que,a expressão das isoformas de MMP 2 foram significativamente menores nos animais diabéticos quando comparados aos animais normais durante todo decorrer do tempo experimental. Todavia, a atividade enzimática da MMP9 foi maior nos animais diabéticos. Estes dados foram confirmados pela imunofluorescência, uma vez que a MMP2 em animais normais foi expressa em vários tipos celulares como as células basais do epitélio, endotélio dos vasos, no tecido conjuntivo e algumas regiões entre fibras musculares. Todavia, em animais diabéticos sua expressão esteve mais limitada às células do epitélio e do tecido conjuntivo. Enquanto que, a expressão da MMP9 é mais evidente nos animais diabéticos. Entretanto, a análise da expressão da MMP2 por PCR quantitativo mostrou não haver diferença significativa entre os animais diabéticos e normais, todavia a expressão gênica da MMP9 apresentou expressão inversamente proporcional. Nos animais normais a sua expressão foi mínima na ausência do estimulo inflamatório e apresentou aumento no decorrer dos tempos experimentais. No animal diabético ocorreu o contrário, uma vez que, na ausência do estimulo inflamatório o nível de expressão da MMP9 foi elevado e durante a resposta inflamatória houve diminuição significativa da sua expressão. Estes dados sugerem que as MMP2 e MMP9 podem estar envolvidas na dinâmica da resposta do tecido periodontal atuando na degradação da matriz extracelular e resultam em diferentes padrões de fibrose nos animais normais e diabéticos Abstract: The periodontal disease is characterized as a group of lesions that affect the tissues which surround and support the teeth in their correct places. The bacterial plaque is the major ethiological agent, and most evidences suggest the periodontal disease is not simply associated with oral cavity colonization by pathogenic microorganisms, but to host susceptibility or resistance to the disease, once that, the destruction of periodontal tissue can occur depending on the immune response activated by these microorganisms. In health periodontal tissues there is a slightly equilibrium between bacterial plaque microorganisms and host response. Although the immune response is essentially protective, ir s influenced by some factors which can develop an exacerbated immune response, and in this way, contributing to appearance of worse lesions and a periodontal disease more severe. The Diabetes Mellitus is one of many risk factors and is characterized by inefficient production of insulin or its inadequate utilization by the individual, affecting the protein, carbohydrate and lipids metabolisms, resulting in severe metabolic disorders. The aim of this project was to study the development of experimental periodontal disease in rats under influence of diabetes induced by streptozotocin (STZ), characterizing the morphological changes found in epithelial and connective tissues, considering that patients affected by this disease shows a delay in the healing capacities. Our results confirmed that the diabetic animaIs presented a chronic inflammatory response with an increase of inflammatory cells in the periodontal tissues, and higher and faster collagen fibers degradation occurred, causing their accumulation. Moreover, the amount of fibroblasts raised, the reticulin fibers that support the basal membrane were more destroyed, and finally there was an involution in dermic papillas and a comium layer thicker. In the diabetic animaIs, the fibrosis was more emphasized with the inflammation progression, affecting the structural organization of epithelial and connective tissues, probably due to the increase in extracellular matrix degradation. In this way, we evaluated the MMP 2 and 9, called gelatinases, which has a proteolytic activity in the extracellular matrix. The MMPs enzymatic activity quantification by zymography showed that, the MMP2 isoform expressions was significantly lower in diabetic animaIs when compared to controls, during alI the experimental time. However, the MMP9 enzymatic activity was higher in diabetic animaIs. These data were confirmed by immunoflorescence, because MMP2 in controls was expressed in more than one cellular type such as basal epithelial cells, endothelium cells, Cl»)J)ecÚve tjssues and some regions between musc1e fibers. Otherwise, in diabetic animaIs, its expression was limited to epithelial cells and connective tissue. The MMP2 expression in quantitative PCR showed no significant differences between diabetic and control animaIs, while MMP9 presented a genic expression inversely proportional. In controls, the MMP9 expression was minimal in lack of inflammatory stimulation and showed an increase during the experimental time. Otherwise, in the diabetic animaIs the MMP9 expression was higher, and during the inflammatory response, its expression decreased. These data suggest that MMP2 and MMP9 can be involved in dynamics of periodontal tissue response, acting in the extracellular matrix and resulting in different pattems of fibrosis in control and diabetic animaIs Mestrado Imunologia Mestre em Genética e Biologia Molecular

The aim of this paper was to assess the biocompatibility and expression of metalloproteinase -9 of two dentin bonding agents in human teeth, using different methods of dentin pre-treatment and different time intervals. Deep Class I cavities were prepared on the occlusal surface of 18 sound molars. Restorations were performed with XP Bond™ (Dentsply) and Futurabond® DC (VOCO). After 30, 90 or 120 days, the teeth were extracted and processed for histological and immunohistochemical assessment. In XP Bond group, was observed a moderate inflammatory infiltrate and immunoreactivity of metalloproteinase -9 in all storage intervals. In Futurabond DC group, a slight inflammatory infiltrate was found in the first intervals. After 120 days, the inflammatory infiltrate was either slight or absent, while the tissue morphology remained normal. The immunoreactivity of metalloproteinase -9 was considered moderate, except for two specimen after 120 days, that demonstrated no immunoreactivity. Therefore, etch-and-rinse adhesives exhibited a more intense pulpal response than self-etching agents. When performing adhesive restorations in medium and deep cavities in human teeth, the use of a self-etching adhesive strategy should be considered in view of the lower induction of inflammatory and proteolytic activity. Further studies of molecular events should be conducted, taking into consideration the possible inflammatory pulp reactions that can contribute to the success of restorative procedures. El objetivo de este trabajo fue evaluar la biocompatibilidad y expresión de la metaloproteinasa -9 de dos agentes adhesivos de dentina en dientes humanos, utilizando diferentes métodos de pretratamiento de dentina y diferentes intervalos de tiempo. Se prepararon cavidades profundas de clase I en la superficie oclusal de 18 molares sanos. Las restauraciones se realizaron con XP Bond ™ (Dentsply) y Futurabond® DC (VOCO). Después de 30, 90 o 120 días, los dientes fueron extraídos y procesados para evaluación histológica e inmunohistoquímica. En el grupo XP Bond, se observó un infiltrado inflamatorio moderado e inmunorreactividad de metaloproteinasa -9 en todos los intervalos de almacenamiento. En el grupo Futurabond DC se encontró un leve infiltrado inflamatorio en los primeros intervalos. Después de 120 días, el infiltrado inflamatorio era leve o ausente, mientras que la morfología del tejido permanecía normal. La inmunorreactividad de la metaloproteinasa -9 se consideró moderada, a excepción de dos muestras después de 120 días, que no demostraron inmunorreactividad. Por lo tanto, los adhesivos de grabado y enjuague exhibieron una respuesta pulpar más intensa que los agentes de autograbado. Al realizar restauraciones adhesivas en cavidades medias y profundas en dientes humanos, se debe considerar el uso de una estrategia adhesiva de autograbado en vista de la menor inducción de actividad inflamatoria y proteolítica. Se deben realizar más estudios de los eventos moleculares, teniendo en cuenta las posibles reacciones inflamatorias de la pulpa que pueden contribuir al éxito de los procedimientos de restauración. O objetivo deste trabalho foi avaliar a biocompatibilidade e expressão da metaloproteinase -9 de dois agentes adesivos dentinários em dentes humanos, usando diferentes métodos de pré-tratamento dentinário e diferentes intervalos de tempo. Cavidades profundas Classe I foram preparadas na superfície oclusal de 18 molares hígidos. As restaurações foram realizadas com XP Bond ™ (Dentsply) e Futurabond® DC (VOCO). Após 30, 90 ou 120 dias, os dentes foram extraídos e processados para avaliação histológica e imunohistoquímica. No grupo XP Bond, foi observado infiltrado inflamatório moderado e imunorreatividade da metaloproteinase -9 em todos os intervalos. No grupo Futurabond DC, um leve infiltrado inflamatório foi encontrado nos primeiros intervalos. Após 120 dias, o infiltrado inflamatório era discreto ou ausente, enquanto a morfologia do tecido permanecia normal. A imunorreatividade da metaloproteinase -9 foi considerada moderada, exceto para duas amostras após 120 dias, que não apresentaram imunorreatividade. Portanto, os adesivos convencionais exibiram uma resposta pulpar mais intensa do que os agentes autocondicionantes. Na realização de restaurações adesivas em cavidades médias e profundas em dentes humanos, o uso de uma estratégia adesiva autocondicionante deve ser considerada tendo em vista a menor indução de atividade inflamatória e proteolítica. Novos estudos de eventos moleculares devem ser realizados, levando-se em consideração as possíveis reações inflamatórias pulpares que podem contribuir para o sucesso dos procedimentos restauradores.

The aim of the present study was to determine the expression of MMP-9, MMP-13 and TIMP-3 after using the XP Bond ™ (Dentsply) dentin-bonding agent on 21 human teeth. Class I deep cavities were prepared and restored. After 01, 07, 14, 21, 30, 90 and 120 days, the teeth were extracted and processed for an immunohistochemical assessment (n=3). Immunohistochemical staining was performed using the monoclonal antibody anti-MMP-9, and polyclonal antibodies anti-MMP-13 and anti-TIMP-3. The immunoreactivity of metalloproteinases 9 and 13 was considered intense and moderate in the first storage intervals, before decreasing over time. In contrast, the immunoreactivity of TIMP-3 was considered absent in dentin and weak in pulp in the first time intervals, and completely absent in the subsequent intervals. MMP-9 expression in dentin and in pulp was prevalent in the dentinal tubules and odontoblastic layer, respectively. MMP-13 expression in dentin and in pulp was predominant in the pre-dentine region and odontoblastic layer, respectively. TIMP-3 expression was absent in dentin and predominantly located in the odontoblastic layer for pulp. In conclusion, the expression patterns of MMP-9, MMP-13 and TIMP-3 altered in the different time intervals studied. The increased expression of TIMP-3 in the first time intervals could suggest a synchronous response to the increased expression of MMPs in the same periods. The results confirmed the low performance of TIMP-3 in the physiological processes of the pulp-dentin complex for the conditions and materials tested herein. El presente estudio tenía como objetivo evaluar la inmunoexpresión de la MMP-9, MMP-13 y TIMP-3 después del uso de sistema adhesivo XP Bond™ (Dentsply) en 21 molares humanos. Cavidades profundas de clase I fueron preparadas y restauradas. Después de 01, 07, 14, 21, 30, 90 y 120 días, los dientes fueron extraídos y procesados para evaluación inmunohistoquímica (n=3). La técnica inmunohistoquímica fue realizada utilizando lo anticuerpo monoclonal anti-MMP-9, y policlonales anti-MMP-13 y anti-TIMP-3. La inmunoexpresión de MMPs 9 y 13 fue considerada intensa y moderada en los intervalos de 01 y 07 días, con menor expresión en los intervalos subsecuentes. En cambio, la inmunoexpresión de TIMP-3 se consideró ausente en dentina y ligera en pulpa en los primeros intervalos de tiempo y ausente en dentina y pulpa en los intervalos posteriores. La expresión de MMP-9 en dentina fue predominante en canales dentinarios y; en pulpa, en odontoblastos. La expresión de MMP-13 en dentina se localizó en la región predentinaria y; en pulpa, en los odontoblastos. La expresión de TIMP-3 estaba ausente en dentina y, en pulpa, se localizaba predominantemente en los odontoblastos. Concluimos que el patrón de expresión de MMP-9, MMP-13 y TIMP-3 está alterado en los diferentes intervalos de tiempo estudiados. El aumento de la expresión de TIMP-3 en los primeros intervalos de tiempo puede demostrar una respuesta al aumento simultáneo de la expresión de las MMPs en los mismos períodos. Los resultados mostraron la baja expresión de TIMP-3 en el complejo dentinopulpar para las condiciones y materiales probados. O objetivo do presente estudo foi avaliar a imunoexpressão da MMP-9, MMP-13 e TIMP-3 após o uso de sistema adesivo XP Bond™ (Dentsply) em 21 molares humanos. Cavidades classe I profundas foram preparadas e restauradas. Depois de 01, 07, 14, 21, 30, 90 e 120 dias, os dentes foram extraídos e processados para avaliação imuno-histoquímica (n=3). A técnica imuno-histoquímica foi realizada utilizando-se o anticorpo monoclonal anti-MMP-9, e policlonais anti-MMP-13 e anti-TIMP-3. A imunoexpressão das MMPs 9 e 13 foi considerada intensa e moderada, respectivamente, nos intervalos de 01 e 07 dias, com menor expressão nos intervalos subsequentes. Em contrapartida, a imunoexpressão do TIMP-3 foi considerada ausente em dentina e leve em polpa nos primeiros intervalos de tempo e ausente em dentina e polpa nos intervalos posteriores. A expressão da MMP-9 em dentina foi predominante nos canalículos dentinários e; em polpa, nos odontoblastos. A expressão da MMP-13 em dentina teve localização predominante na região de pré-dentina e; em polpa, nos odontoblastos. A expressão de TIMP-3 foi ausente em dentina e; em polpa, teve localização predominante nos odontoblastos. Conclui-se que o padrão de expressão das MMP-9, MMP-13 e do TIMP-3 sofre alteração nos diferentes intervalos de tempo estudados. O aumento de expressão do TIMP-3 nos primeiros intervalos de tempo pode demonstrar uma resposta ao simultâneo aumento da expressão das MMPs nos mesmos períodos. Os resultados evidenciaram a pouca expressão do TIMP-3 no complexo dentinopulpar para as condições e materiais testados.

Orientador: Kleber Gomes Franchini Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Mudancas dinamicas que ocorrem no intersticio do coracao contribuem diretamente para o remodelamento miocardico decorrente de doencas cardiacas tais como infarto do miocardio, cardiopatia hipertensiva e cardiomiopatias. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) sao importantes no remodelamento destas doencas. Estimulos mecanicos e neuro-humoral regulam a expressao e atividade de MMPs atraves de multiplos processos. Em estudos previos verificamos que o silenciamento da FAK no VE de camundongos inibe a fibrose e reduz a atividade de MMP2. Objetivamos avaliar o papel da FAK no controle da ativacao de fibroblastos cardiacos de ratos(FCRNs), induzidos por estiramento mecanico. Os FCRNs foram cultivados em placas Bioflex e submetidos a estiramento ciclico (10%) por ate 8 horas, exceto os controles. A expressao e atividade da FAK foram avaliadas por imunoblottings com anticorpos especificos para FAK ou pFAK Tyr397, respectivamente. A expressao das MMPs 2 e 9 foi avaliada em imunoblottings e a atividade por zimografia ambas no sobrenadante da cultura. O estiramento provocou aumento de 2.4 vezes da quantidade de FAK fosforilada em Tyr397, alem da expressao e a atividade de MMP 2 e 9. Alem disto, modificou os parametros de proliferacao dos FCRNs, mostrando aumento de celulas positivas para Ki67 e BrdU. Do mesmo modo, a diferenciacao em miofibroblastos foi ativada(celulas positivas para a-actina de musculo liso (a-SMA). A inibicao genica da FAK atraves da tecnica de interferencia de RNA (siRNAFAK), nos FCRNs, inibiu a expressao de a-SMA, a atividade e a expressao das MMPs 2 e 9. Alem disso, a deplecao da FAK em FCRNs promoveu a diminuicao da fosforilacao em AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, e S6 quinase Thr389 em resposta ao estiramento mecanico. A ativacao dos FCRNs foi impedida pelo pre-tratamento com o inibidor do complexo mTOR, rapamicina. Assim mostramos que a FAK medeia a ativacao de FCRNs invocado pelo estresse mecanico, possivelmente atraves da coordenacao da via de sinalizacao mTOR. Os resultados do presente estudo indicam a ativacao da FAK pode ter um papel critico na proliferacao e diferenciacao, e na ativacao de MMPs em FCRNs quando submetidos a estiramento, e ainda o knockdown da FAK apresenta efeitos contrarios, logo, infere-se o papel da FAK na ativacao de fibroblastos cardiacos. Abstract: Dynamic changes that occur in the heart interstitium contribute directly to the myocardial remodeling due to heart disease such as myocardial infarction, hypertensive heart disease and cardiomyopathies. The extracellular matrixmetalloproteinases (MMPs) play an important role in remodeling in these diseases. Mechanical and neuro-humoral stimuli regulate the MMPs expression/activity through several processes which include the control of expression, activation by cascades of own MMPs and endogenous inhibitors. In recent studies from our laboratory showed that the FAK silencing in the left ventricle of mice inhibits the fibrosis development, and in parallel reduced the MMP2.activity and expression. The purpose of this study was to evaluate the role of FAK in controlling the MMP 2 and 9 expression and activity in rat cardiac fibroblasts. Cardiac fibroblasts from neonatal rat (FCRNs) were grown on silicon plates and then subjected to cyclic stretch (10%) for up to 8 hours, except the controls. The FAK expression and activity were assessed for imunoblottings through with specific antibodies to FAK or phospho -FAK Tyr397, respectively. The expression of MMP 2 and 9 was evaluated with specific antibodies in imunoblottings and activity through zimography both in the supernatant culture. Furthermore, FCRNs depleted of FAK was defective in AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, and S6 kinase Thr389 phosphorylation in response to cyclic stretch. The activation of CF-P3/80 invoked by cyclic stretch was prevented by pre-treatment with the mTOR complex inhibitor rapamycin. These findings demonstrate that FAK signaling plays a critical role in mediating the activation of cardiac fibroblasts invoked by mechanical stress possibly by coordinating the downstream mTOR signaling pathway. The results of this study indicate that the activation of FAK can have a critical role to MMPs activation in cardiac fibroblasts, as well as, the proliferation and differentiation of these cells when subjected to stretching, and the FAK knockdown presents contrary effects, therefore, to corroborate infer the FAK role in differentiation and proliferation cell, and the MMPs balance in cardiac fibroblasts. Mestrado Biologia Estrutural, Celular e do Desenvolvimento Mestre em Fisiopatologia Médica

Ethnopharmacological relevance 22β-hydroxytingenone (22-HTG) is a quinonemethide triterpene isolated from Salacia impressifolia (Miers) A. C. Smith (family Celastraceae), which has been used in traditional medicine to treat a variety of diseases, including dengue, renal infections, rheumatism and cancer. However, the anticancer effects of 22-HTG and the underlying molecular mechanisms in melanoma cells have not yet been elucidated. Aim of the study The present study investigated apoptosis induction and antimetastatic potencial of 22-HTG in SK-MEL-28 human melanoma cells. Materials and methods First, the in vitro cytotoxic activity of 22-HTG in cultured cancer cells was evaluated. Then, cell viability was determined using the trypan blue assay in melanoma cells (SK-MEL-28), which was followed by cell cycle, annexin V-FITC/propidium iodide assays (Annexin/PI), as well as assays to evaluate mitochondrial membrane potential, production of reactive oxygen species (ROS) using flow cytometry. Fluorescence microscopy using acridine orange/ethidium bromide (AO/BE) staining was also performed. RT-qPCR was carried out to evaluate the expression of BRAF, NRAS, and KRAS genes. The anti-invasiveness potential of 22-HTG was evaluated in a three-dimensional (3D) model of reconstructed human skin. Results 22-HTG reduced viability of SK-MEL-28 cells and caused morphological changes, as cell shrinkage, chromatin condensation, and nuclear fragmentation. Furthermore, 22-HTG caused apoptosis, which was demonstrated by increased staining with AO/BE and Annexin/PI. The apoptosis may have been caused by mitochondrial instability without the involvement of ROS production. The expression of BRAF, NRAS, and KRAS, which are important biomarkers in melanoma development, was reduced by the 22-HTG treatment. In the reconstructed skin model, 22-HTG was able to decrease the invasion capacity of melanoma cells in the dermis. Conclusions Our data indicate that 22-HTG has anti-tumorigenic properties against melanoma cells through the induction of cell cycle arrest, apoptosis and inhibition of invasiveness potential, as observed in the 3D model. As such, the results provide new insights for future work on the utilization of 22-HTG in malignant melanoma treatment.

ARAÚJO, Antônio Roberto Lucena de, também é conhecido em citações bibliográficas por: LUCENA-ARAUJO, Antonio Roberto. CAPES Neoplasias mieloproliferativas (NMP) cromossomo Filadelfia (Ph) negativo englobam principalmente Policitemia Vera (PV), Trombocitemia Essencial (TE) e Mielofibrose (MF). Estas são malignidades hematológicas que surgem da proliferação clonal de células tronco neoplásicas na medula óssea e que compartilham de características fisiopatológicas e clínicas comuns. As metaloproteinases de matriz, por sua vez, são enzimas proteolíticas capazes de remodelar a matriz extracelular (MEC) ativando citocinas e fatores de crescimento que atuam em vias de sinalização tanto na homeostase como na carcinogênese. Com o objetivo de avaliar o papel das metaloproteinases nas NMP, foram investigados dois polimorfismos de base única nos genes MMP2 e MMP9 e suas possíveis associações com as características clínicas das doenças. O estudo foi do tipo análise exploratória. Foram analisados 293 pacientes, sendo 75 de PV, 165 de TE e 53 de MF. As genotipagens dos polimorfismos rs243865(C>T) e rs17576(A>G) foram realizadas por meio da técnica de PCR em tempo real utilizando sondas TaqMan. Empregando-se o modelo genético de herança dominante, nos homozigotos ancestrais (CC), foram encontradas associações significantes do polimorfismo rs243865, do gene MMP2, com maior frequência de sangria (p=0,041) em pacientes de PV e com hiperplaquetose (p=0,012) em pacientes de TE. O polimorfismo rs17576, do gene MMP9, tambémse mostrou associado a achados clínicos relevantes como prurido (p=0,002) em PV e a maior frequência de necessidade transfusional (p=0,019) em pacientes de MF, ambos para o genótipo AG, utilizando-se do modelo codominante. Nossos resultados revelaram associações significativas entre polimorfismos nos genes MMP2 e MMP9 com manifestações clínicas de pacientes com NMP podendo ser uma ferramenta útil no manejo destes pacientes. Philadelphia (Ph) negative myeloproliferative neoplasms (MPN) mainly comprise Polycythemia Vera (PV), Essential Thrombocythemia (TE) and Myelofibrosis (MF). These are haematological malignancies that arise from the clonal proliferation of neoplastic stem cells in the bone marrow and share common pathophysiological and clinical features. Matrix metalloproteinases, in turn, are proteolytic enzymes capable of remodeling extracellular matrix (ECM) activating cytokines and growth factors that act on signaling pathways in both homeostasis and carcinogenesis. In order to evaluate the role of metalloproteinases in MPN, two single base polymorphisms in the MMP2 and MMP9 genes and their possible associations with the clinical characteristics of the diseases were investigated. The study was exploratory analysis. There were analyzed 293 patients, 75 from PV, 165 from TE and 53 from MF. Genotyping of the rs243865(C>T) and rs17576 (A>G) polymorphisms was performed by real-time PCR using TaqMan probes. Using the dominant inheritance genetic model in ancestral homozygotes (CC), significant associations of the rs243865 polymorphism of the MMP2 gene were found, with higher phlebotomy frequency (p = 0.041) in PV patients and extreme thrombocytosis (p = 0.012) in TE patients. The rs17576 polymorphism of the MMP9 gene was also associated with relevant clinical findings such as pruritus (p = 0.002) in PV and the higher frequency of transfusion need (p = 0.019) in MF patients, both for the AG genotype, using is the codominant model. Although these findings still need to be replicated in other cohorts, our results revealed significant associations between MMP2 and MMP9 gene polymorphisms with clinical manifestations of patients with MPN.

Orientador: Luiz Carlos Zeferino Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: O câncer do colo do útero é o quarto em incidência e mortalidade em mulheres no mundo. As expressões das metaloproteases de matriz 2, 9 e 14 (MMP-2, MMP-9, MMP-14), dos inibidores teciduais de metaloproteases 1 e 2 (TIMP-1, TIMP-2) e do fator de crescimento endotelial vascular A (VEGF-A) no microambiente tumoral estão envolvidas na invasão tumoral e metástase pela degradação da matriz extracelular e angiogênese. Uma associação destas proteínas com o prognóstico poderia indicá-las como alvos terapêuticos para esta patologia. Objetivo: Verificar se a expressão das proteínas MMP-2, MMP-9, MMP-14, TIMP-1, TIMP-2 e VEGF-A em células tumorais e estromais do câncer do colo do útero têm valor prognóstico. Materiais e Métodos: É uma coorte retrospectiva cuja amostra provém das 76 pacientes com carcinoma invasivo do colo do útero do estudo: "Expressão das proteínas MMP-2, MMP-9, MMP-14, TIMP-1, TIMP-2 e VEGF-A na NIC 3 e no carcinoma invasor do colo do útero", conduzido no Hospital da Mulher Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti da Universidade Estadual de Campinas. Das 76 mulheres, 64 foram incluídas. As expressões proteicas foram anteriormente obtidas por imunohistoquímica nas células tumorais e estromais de biópsias. A expressão foi definida pela porcentagem de células coradas e categorizada, para este estudo, entre alta e baixa usando pontos de corte definidos individualmente por curva ROC. Coletou-se dados clínicos e morfológicos para prosseguir com a análise de sobrevida doença-específica (DSS). Para tal, coletou-se as informações de tratamento e seguimento desde o diagnóstico até a última visita clínica. Os status clínicos foram categorizados em: viva livre de doença, viva com doença, óbito por causa desconhecida e óbito pela doença. Óbito pela doença foi associado com estádio do tumor, grau histopatológico, e com as expressões tumorais e estromais de MMP-2, MMP-9, MMP-14, TIMP-1, TIMP-2 e VEGF-A por modelos de regressão de Cox univariada e multivariada testadas por Hazard Ratio (HR) com intervalo de confiança 95% (IC95%). Para as associações significantes da univariada (p

SUMMARY OBJECTIVE: This study aims at investigating the expressions of TOLL-like receptor 4 (TLR-4) and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9)/ tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) in pulmonary blood vessels with chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and their relationships with pulmonary vascular remodelling (PVR). METHODS: 60 para-tumour tissues were divided into the COPD group and the control group (n=30); the inflammations, pulmonary artery wall area/total artery area (WA%), and wall thickness/vascular outer diameter (WT%) were compared. The expressions of TLR-4, MMP-9/TIMP-1, and PCNA in pulmonary vascular smooth muscle cells were detected, and their relationships with PVR were then analysed. RESULTS: The inflammations (1.6±0.8), WA% (44.0±6.4), and WT% (27.3±3.3) in the COPD group were higher than in the control group (0.3±0.5, 26.1±2.8, 15.6±1.8), and the expressions of TLR-4 (31.4±147) and MMP-9/TIMP-1 (2.2±2.6) were increased compared to the control group (4.7±4.5, 1.9±12). Correlation analysis: TLR-4 and MMP-9/TIMP-1 were positively correlated with the inflammations (r=0.18, P

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES In the present study, the sera levels of soluble CD40 ligand (sCD40L) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) were quantified by Luminex assay in Visceral leishmaniasis patients before and during treatment follow-up and after regular antimony treatment and also in individuals exposed to infection, living in endemic areas. Different from the other molecules present in sera from classic VL patients, sCD40L and MMP-9 are fairly increased, and increase over time during the follow-up of VL patients undergoing antimony treatment. sCD40L and MMP-9 sera levels were also high in individuals living in endemic settings at high risk of infection (endemic controls). On the other hand, sCD40L and MMP-9 were not observed in sera from non-endemic controls, which are not exposed of infection. Additionally, negative correlations were found between spleen sizes and MMP-9 before treatment and sCD40L at day 15 of treatment. Negative correlations were also found between parasite load with both sCD40L and MMP-9. These findings indicate that both molecules can be used in monitoring therapeutic efficacy in VL. Furthermore, these data suggest a protective effect of these molecules, since the individuals exposed to infection without the symptoms of disease have high sera levels of sCD40L and MMP-9. These data were published in BMC Infectious diseases journal [1]. To confirm the protective effect of sCD40L present in sera of VL patients and determine if this molecule had biological activity, the ability of sera from patients containing high levels of this molecule sCD40L to control infection in vitro in Leishmania infantum infected macrophages, and the ability to induce cytokines production. Thereby, macrophages from of healthy donor were infected with Leishmnia infantum, and later incubated in presence of sera from individuals exposed to infection in presence of anti-CD40L. The infection was evaluated by counting of the number of infected macrophages/100 and the number of intracellular amastigotes/100 macrophages. The data showed that serum sCD40L decrease the number of infected macrophages and the number of intracellular amastigotes. The blockage of sCD40L activity with specific antibody, increase the infection. Moreover, the analysis of cytokines in supernatant of these macrophage cultures by Luminex assay demonstrated that sCD40L induces the IL-12, IL-23, IL-27, IL-15 e IL-1 production. The levels of these cytokines is inversely correlated with infection rate and the number of intracellular parasites from infected macrophages. A second manuscript with these data were published in PLOS One [2] . These results demonstrated that serum sCD40L from individuals exposed to VL improve the microbicide effect and the inflammatory cytokine production, suggesting its potential use in VL immunotherapy. Nevertheless, there is still a long way to be approached in future experimental and clinical studies. No presente estudo, os níveis séricos dos marcadores inflamatórios CD40 ligante solúvel (sCD40L) e da metaloproteinase de matrix-9 (MMP-9) foram quantificados por Luminex nos pacientes com leishmaniose visceral antes, durante e após o tratamento com antimonial, e em indivíduos controles expostos à infecção, residindo em áreas endêmicas. Ao contrário das outras moléculas inflamatórias presentes nos soros de pacientes com LV, as moléculas sCD40L e MMP-9 apresentaram elevação moderada, havendo um aumento significativo de ambas no decorrer do tratamento com antimonial. Níveis séricos elevados de sCD40L e MMP-9 também foram encontrados nos indivíduos controles sem doença, provenientes de áreas endêmicas e expostos a infecção. Entretanto, o sCD40L e a MMP-9 não foram detectados nos soros de indivíduos de áreas não endêmicas, os quais não estão expostos a infecção. Adicionalmente, correlações negativas entre o tamanho do baço com a MMP-9 antes do tratamento e com o sCD40L 15 dias após o início do tratamento foram observadas, bem como correlações negativas entre ambas as moléculas com a carga parasitaria dos pacientes. Estes resultados indicam que estas moléculas podem ser utilizadas no monitoramento da eficácia terapêutica na leishmaniose visceral. Além disso, estes dados nos sugerem um efeito protetor dessas moléculas contra a doença, desde que os indivíduos expostos e sem a doença apresentaram concentrações elevadas dessas moléculas. Estes dados foram publicados no BMC Infectious diseases [1]. Para confirmar o efeito protetor do sCD40L e investigar se a molécula presente nos soros dos pacientes com LV tinha atividade biológica, foi avaliado se o sCD40L presente no soro dos indivíduos infectados teria ação na resposta leishmanicida e na produção de citocinas por macrófagos infectados por Leishmania infantum. Dessa forma, macrófagos de doadores normais foram infectados com L. infantum e posteriormente incubados com soro de indivíduos expostos a infecção na presença de anti-CD40L. A avaliação da infecção através da contagem de células infectadas e do número de parasitas intracelulares demonstrou que a presença do sCD40L sérico diminui o número de macrófagos infectados e o número de amastigotas intracelulares. O bloqueio da atividade do sCD40L com anticorpo específico reverteu este efeito, aumentando a infecção. Além disso, a análise de citocinas no sobrenadante das culturas de macrófagos por Luminex mostrou que a adição de sCD40L induziu a produção de IL-12, IL- 23, IL-27, IL-15 e IL-1. As concentrações destas citocinas correlacionaram-se inversamente com as taxas de infecção e com o número de parasitas intracelulares nos macrófagos infectados. Um segundo artigo com estes resultados foi publicado na PLOS One [2]. Estes resultados demonstram que o sCD40L sérico dos indivíduos expostos à LV melhora a capacidade microbicida e a produção de citocinas inflamatórias, sugerindo seu potencial uso na imunoterapia na LV humana, embora este seja um longo caminho a ser abordado em estudos futuros experimentais e clínicos.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária, Ciências Veterinárias O mastocitoma canino encontra-se entre as neoplasias cutâneas mais frequentes no cão. Apresenta um comportamento biológico significativamente variável podendo tanto comportar-se como um tumor benigno como crescer e metastizar. Têm sido desenvolvidos métodos para vaticinar o comportamento biológico deste tumor. Esses métodos estão assentes em critérios da gradação histológica. No entanto, outros métodos têm sido testados como potenciais marcadores de prognóstico na tentativa de prever com maior fiabilidade o comportamento desta neoplasia. Estes métodos incluem marcadores de proliferação celular (AgNORs, PCNA e Ki-67) e marcadores de expressão do gene supressor tumoral como p53. As metaloproteinases de matriz (MMP) são um importante grupo de enzimas proteolíticas responsáveis pela degradação da matriz extracelular. A sua expressão é encontrada tanto na renovação fisiológica da matriz extracelular como em processos patológicos como é o caso da invasão tumoral e desenvolvimento de metástases. A MMP-9 é um dos membros desta família que se encontra mais bem estudada a nível tumoral, tanto em medicina veterinária como em medicina humana, e tem sido associada à capacidade invasiva de neoplasias. A caderina-E é uma molécula de adesão celular com um importante papel na morfogénese e manutenção da arquitetura tecidular normal. A diminuição da sua expressão em diversas neoplasias tem vindo a ser associada a um tumor fenotipicamente mais agressivo. A expressão da MMP-9 e da caderina-E está descrita nos mastocitomas caninos. No entanto, não existem estudos que revelem associação entre elas. Neste estudo, com o objetivo de avaliar a possível existência da referida associação, foram utilizadas 30 neoplasias, classificadas como mastocitomas de diferentes graus e pertencentes ao arquivo do Laboratório de Histologia e Anatomia Patológica da Universidade de Trás-os-Montes e Alto-Douro. As amostras foram submetidas à técnica de imunohistoquímica com os anticorpos anti-MMP-9 e anti-caderina-E. A imunomarcação da MMP-9 foi avaliada apenas quanto à extensão de marcação em 50% dos mastócitos marcados. A imunomarcação da caderina-E foi avaliada quanto à extensão de marcação em 50% das células marcadas, e quanto à intensidade de marcação em fraca, moderada e forte. A intensidade de marcação da caderina-E revelou associação com o grau histológico do tumor (p=0,034), assim como a extensão de marcação da MMP-9 (p=0,039). Pelo contrário, a extensão de marcação da caderina-E não revelou qualquer associação com o grau histológico do mastocitoma (p=0,552). Ao comparar a extensão de marcação da MMP-9 com a intensidade de marcação da caderina-E não foi encontrada uma associação estatisticamente significativa (p=0,270). O mesmo se verificou na associação entre a extensão de marcação da MMP-9 e a extensão de marcação da caderina-E (p=0,627). Este estudo sugere o envolvimento da MMP-9 na progressão e malignidade de mastocitomas cutâneos caninos, assim como o envolvimento da caderina-E na manutenção da integridade tecidular atuando como um agente supressor tumoral. Mast cell tumours are among the most common cutaneous tumours in the dog. Its biological behaviour is significantly variable, as it can be benign or malignant. Various methods have been developed to predict said behaviour. These methods are based in histological grading criteria. However, other techniques have been tested as potential prognostic markers in an attempt to improve the prediction of the behaviour of this neoplasia. These techniques include cell proliferation markers (AgNORs, PCNA e Ki-67) and markers of the expression of tumour suppressor genes, such as p53. The matrix metalloproteinases (MMPs) are an important group of proteolytic enzymes responsible for the degrading of the extracellular matrix. Their expression is found both in the physiological renovation of the extracellular matrix and in pathological situations, such as tumour invasion and development of metastasis. MMP-9 is one of the best studied members of this family, both in veterinary and human pathology, and has been associated to a tumour’s invasive ability. E-Cadherin is an adhesion molecule with an important role in morphogenesis and maintenance of normal tissue architecture. A decrease in its expression in various tumours has been linked to a phenotypically more aggressive tumour. The expression of MMP-9 and E-Cadherin is described in canine mast cell tumours. However, there are no studies demonstrating an association between them. In this study, with the objective of evaluating the possible existence of said association, we used 30 tumours from the archive of the Laboratory of Histology and Pathological Anatomy of the University of Trás-os-Montes and Alto Douro, diagnosed as mast cell tumours of different grades. The samples were submitted to the immunohistochemistry technique with the antibodies anti-MMP-9 and anti-E-Cadherin. The immunostaining of the MMP-9 was evaluated regarding only its extent in 50% of stained mast cells. The immunostaining of the E-Cadherin was evaluated regarding its extent in 50% of stained cells, and concerning its intensity in weak, moderate or strong. The intensity of staining of the E-Cadherin demonstrated an association with the histological grade of the tumour (p=0,034), as well as with the extent of the staining of the MMP-9 (p=0,039). On the contrary, the extent of the staining of the E-Cadherin didn’t reveal any association with the histological grade of the mast cell tumours (p=0,552). Comparing the extent of the MMP-9 staining with the intensity of the E-Cadherin staining, we didn’t find any statistical significant association between them (p=0,270). The same occurred when evaluating the association between the extent of the MMP-9 staining with the extent of the E-Cadherin staining (p=0,627). This study suggests the participation of MMP-9 in the progression and malignancy of canine mast cell tumours, as well as the contribution of E-Cadherin in maintenance of tissue integrity, acting as a tumour suppressor agent.

Orientadores: Heitor Moreno Junior, Vanessa Fontana Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão arterial resistente (HAR) é definida pela presença de pressão arterial (PA) acima da meta pressórica com o uso de três classes de anti-hipertensivos, ou ainda os pacientes que atingem controle da PA utilizando quatro ou mais fármacos. A morbidade e mortalidade associadas à hipertensão são atribuídas às lesões de órgãos-alvo, sendo que a hipertrofia ventricular esquerda (HVE) e rigidez arterial são fatores de risco independentes para os desfechos cardiovasculares. A participação das metaloproteinases da matriz extracelular (MMPs), dentre elas, a MMP-9, no remodelamento que leva à HVE e à rigidez arterial são bem descritas em modelos animais, porém na hipertensão resistente não há estudos na literatura. Os polimorfismos do gene da MMP-9, -1562C>T (rs3918242) e um segundo, chamado de R279Q (rs17576) estão associados ao aumento nos níveis de MMP-9 e eventos cardiovasculares. Também, foi demonstrada a influência do polimorfismo R279Q sobre a rigidez arterial em indivíduos saudáveis. Por fim, o SNP não sinônimo Q668R (rs17577) foi associado com doença coronariana em pacientes hipertensos tratados com Anlodipino. Até o momento, nenhum polimorfismo no gene da MMP-9 foi avaliado na HAR. Portanto o presente trabalho teve como objetivos: (1) Determinar os níveis circulantes de MMP-9, do inibidor TIMP-1 e da razão MMP-9/TIMP-1 (atividade global da MMP-9) nos grupos de hipertensos resistentes (HAR) (n=124) e não resistentes (HAS) (n=136); (2) Avaliar a associação entre os níveis da MMP-9 e TIMP-1 com o grau de rigidez arterial e HVE nos grupos de hipertensos; (3) Avaliar as frequências dos alelos, genótipos e haplótipos para os polimorfismos da MMP-9 (rs3918242, rs17576 e rs17577) nos HAS e HAR e (4) Avaliar a relação dos polimorfismos com as concentrações de MMP-9 e com HVE e rigidez arterial. Os níveis plasmáticos de MMP-9 e TIMP-1 foram avaliados por ELISA. O grupo de HAR apresentou menor concentração de MMP-9, menor razão MMP-9/TIMP-1 e maiores valores de TIMP-1 comparados aos HAS. Em seguida, avaliamos a associação desses biomarcadores com a rigidez arterial, avaliada através de velocidade de onda de pulso (VOP), e com a HVE, avaliada através do índice de massa do ventrículo esquerdo (IMVE) por ecocardiograma. A MMP-9 e a relação MMP-9/TIMP-1 foram positivamente correlacionadas com o diâmetro diastólico do ventrículo esquerdo (DDVE) no grupo HAR. Já no grupo HAS, as mesmas correlações foram negativas. O TIMP-1 foi negativamente correlacionado com IMVE no grupo HAR e positivamente associado à IMVE no grupo HAS. Não foi encontrada correlação entre IMVE e MMP-9, nem correlações entre VOP com MMP-9 e TIMP-1 em ambos os grupos. Por fim, determinaram-se as frequências genotípicas dos polimorfismos -1562C>T por PCR seguida de eletroforese, e dos polimorfismos R279Q e Q668R, por PCR em tempo real utilizando sondas Taqman. As frequências haplotípicas foram estimadas pelo programa PHASE. Não houve diferenças nas frequências genotípicas, alélicas e haplotípicas entre os grupos. Nós avaliamos ainda a associação dos diferentes genótipos com as concentrações de MMP-9, rigidez arterial e prevalência de HVE, mas nenhuma associação foi encontrada. Nossos resultados sugerem que o equilíbrio entre MMP-9 e TIMP-1 varia de acordo com a gravidade da hipertensão e estão associados com HVE. Além disso, nossos dados demonstraram que os 3 polimorfismos genéticos da MMP-9 não estão associados com o fenótipo de HAR e não afetam os níveis plasmáticos de MMP-9 nos pacientes hipertensos estudados Abstract: Resistant hypertension (RHTN) is defined as BP that remains above goals despite of the concurrent use of 3 antihypertensive agents of different classes at optimal dose amounts. Also, patients whose BP are controlled but require 4 or more medications are considered resistant. Left ventricular hypertrophy (LVH) and arterial stiffness are important predictors of mortality and morbidity and it is related to major cardiovascular events. Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of zinc dependent enzymes. MMP-9 participates in cardiovascular remodeling that contributes to LVH and arterial stiffness. These relationships are well described in animal models of hypertension, however in RHTN remains unclear. Genetics polymorphisms in MMP-9 gene including -1562C>T (rs3918242) and R279Q (rs17576) were associated with MMP-9 levels and cardiovascular events. The relationship between R279Q and arterial stiffness was also described in healthy volunteers. Finally, non-synonymous SNP Q668R (rs17577) was related to coronary disease in hypertensive patients treated with Amodipine. To date, no MMP-9 polymorphisms were evaluated in RHTN. Therefore, this study aimed: (1) To evaluate the levels of MMP-9, TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 ratio in RHTN subjects (n=124) and non-RHTN (HTN) (n=136) (2) To evaluate the relationship between MMP-9 and TIMP-1 with arterial stiffness and LVH in both groups (3) To evaluate the frequencies of MMP-9 polymorphisms (rs3918242, rs17576 e rs17577) in HTN vs. RHTN (4) To evaluate the relationship of genetic polymorphisms with MMP-9 levels, LVH and arterial stiffness. Plasma levels of MMP-9 and TIMP-1 were measured by ELISA. RHTN subjects presented decreased levels of MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 ratio and higher TIMP-1 compared to HTN. We evaluated the association of these biomarkers with arterial stiffness, measured by pulse wave velocity (PWV), and with LVH, defined by left ventricular mass index (LVMI) (by echocardiogram). MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 ratio were positively correlated with LV diastolic diameter (LVDD) in RHTN group. On the other hand, these biomarkers were inversely related to LVDD in HTN group. TIMP-1 was negatively related to LVMI in RHTN subjects, while positive association was found in HTN group. No relationship was found between LVMI and MMP-9, neither between PWV and MMP-9 nor TIMP-1 in both groups. We assessed genotypic frequency of -1562C>T using PCR followed by electrophoresis. R279Q and Q668R polymorphisms were determined using Real Time PCR with Taqman probes. Haplotype frequencies were estimated by PHASE software. There were no significant differences in the genotypes, alleles or haplotypes distributions between the RHTN patients and HTN. Moreover, no differences were found in MMP-9 levels, PWV or LVMI according to MMP-9 genotypes. Our data suggest that MMP/TIMP balance varies according to the severity of hypertension and are associated with resistant hypertension and left ventricular hypertrophy. In addition, genetic polymorphisms in MMP-9 are not associated to RHTN phenotype and do not affect MMP-9 levels in the studied hypertensive patients Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia FAPESP 2012/23410-7

Dada a possível diferença fisiopatológica entre insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada (ICFEP) e reduzida (ICFER) associada à falta de biomarcadores capazes de diferencia-las, objetivamos comparar níveis de metaloproteinase-9, microRNAs e marcadores inflamatórios entre pacientes com ICFEP e ICFER durante e após episódios de IC descompensada. Os biomarcadores foram avaliados na admissão hospitalar, alta e em uma consulta ambulatorial. Os pacientes com ICFER apresentaram maiores níveis de MMP-9 e miR-150 após terapia aguda. MMP-9 e miR-150 reduziram e miR-21 aumentou após a alta comparado à admissão, porém, essas alterações foram transitórias nos dois grupos. Ainda, MMP-9 elevada e miR-21 reduzidos na consulta ambulatorial foram preditores de readmissão hospitalar. Os níveis de IL-18 no grupo ICFEP foram maiores, reduziram após a alta e se correlacionaram com troponina I. Concluímos que marcadores de remodelamento cardíaco estão mais alterados na ICFER e que a IL-18 pode atuar de forma distinta na ICFEP.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:44Z : No. of bitstreams: 1 000860307.pdf: 2478279 bytes, checksum: 671696c5fa16ba127a3f46167c9360a0 (MD5) A ovinocultura de corte está em constante ascensão no Brasil e tal fato leva ao aumento do número de animais confinados, visando maior ganho de peso em curto período de tempo. Tal situação predispõe os ovinos a desordens como acidose láctica ruminal aguda (ALRA) e, consequentemente, laminite aguda, as quais geram problemas econômicos pelos custos do tratamento, menor produtividade do rebanho e descarte de animais. Dez ovelhas adultas foram induzidas à ALRA através da administração oral de sacarose; posteriormente foram avaliadas quando ao exame físico além das análises hemogasométricas arteriais, hematológicas, avaliação da glicose e lactato plasmáticos, proteinograma sérico e zimografia para detecção das metaloproteinases 2 e 9. Todos os animais tiveram sinais clínicos de ALRA, a frequência respiratória permaneceu elevada até às 36 horas, retornando à normalidade com 48 horas. Cinco animais apresentam sinais clínicos característicos de laminite aguda, porém não foi necessária a realização de tratamento clínico. Os valores da contagem de hemácias, volume globular, hemoglobina, leucócitos totais e neutrófilos bastonetes e segmentados elevaram-se nas 24 horas. Os teores de glicose aumentaram até as 8 horas pelo aumento da síntese dos ácidos graxos voláteis e posterior absorção sanguínea; o lactato apresentou aumento até as 24 horas, com posterior diminuição dos valores. A partir de 4 horas ocorreu elevação do pH, bicarbonato e excesso de base. Após 12 horas, os animais apresentaram acidose metabólica. Com 28 horas houve normalização dos parâmetros hemogasimétricos, sem necessidade de tratamento. No proteinograma sérico foram identificadas 13 proteínas: imunoglobulinas A (IgA) e G (IgG), ceruloplasmina (Cp), transferrina (Tf), albumina (Ab), 1-antitripsina ( 1AT), haptoglobina (Hp), 1-glicoproteína ácida ( 1GA), 95 (PPM95), 46 (PPM46), 36 (PPM36) e 31 (PMM31) kDa proteínas de... The sheep meet industry is constantly rising in Brazil and this fact leads to an increase on the number of confined animals, looking for greater weight gain in short period of time. This situation predisposes to disorders such as acute lactic ruminal acidosis (ARLA) and, consequently, acute laminitis, which causes economic problems by the treatment costs, reduced productivity and disposal of animals. Ten adult sheep were induced to ALRA by oral administration of sucrose; were further evaluated to physical examination, arterial blood gas analysis, hematological parameters, glucose and lactate plasma, serum protein profile and zymography for detection of metalloproteinases 2 and 9. All animals had clinical signs of ARLA, the respiratory rate remained high up to 36 hours, returning to normal in 48 hours. Five animals showed typical clinical signs of acute laminitis, however clinical treatment was not necessary. The values of the red blood cell count, packed cell volume, hemoglobin, total leukocytes and neutrophils and segmented rod rases in 24 hours. Glucose content increased up to eight hours by increasing the synthesis of volatile fatty acids and subsequent blood absorption; lactate has increased to 24 hours, with a subsequent decrease. From four hours there was an increase of pH, bicarbonate and base excess. After 12 hours, the animals had metabolic acidosis. At 28 hours there was normalization of the hemogasometry parameters without need of treatment. In serum protein were identified 13 proteins: immunoglobulins A (IgA) and G (IgG), ceruloplasmin (Cp), transferrin (Tf), albumin (Ab), 1-antitrypsin ( 1AT), haptoglobin (Hp), 1- acid glycoprotein ( 1GA), 95 (MWP95), 46 (MWP46), 36 (MWP36) and 31 (MWP31) kDa molecular weight protein In all animals with ARLA the total protein showed changes from 08 hours, coinciding with clinical signs of dehydration, which occurred up to 36 hours after induction. Although five animals shown clinical ...

Childhood obesity is associated with increased risk of atherosclerosis and cardiovascular disease in adulthood. Increased intima-media thickness (IMT) of the carotid artery is linked to the initiation and progression of the chronic inflammatory processes implicated in cardiovascular disease. Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) plays an important role in the degradation of the extracellular matrix and, consequently, in the development, morphogenesis, repair and remodeling of connective tissues.(i) to determine and compare the concentrations of MMP-9, tissue inhibitor of metalloproteinase -1 (TIMP-1), and MMP-9/TIMP-1 ratio in obese and non-obese children and adolescents; (ii) to investigate the association of these markers with common and internal IMT of carotid arteries.Cross-sectional study involving 32 obese and 32 non-obese (control) individuals between 8 - 18 years of age.Significantly (p0.05) higher values of MMP-9 concentration, as well as a higher MMP-9/TIMP-1 ratio were detected in the obese group compared to control counterparts. Common and internal carotid IMT values were significantly higher (p0.001) in the obese group compared to the control group. Positive correlations were observed between the common carotid IMT values and MMP-9 concentrations as well as MMP-9/TIMP-1 ratio.Our data demonstrate that obese children and adolescents present higher mean IMT values, plasma MMP-9 and MMP-9/TIMP-1 ratio compared to the non-obese. Thus, these findings indicate that this group presents a risk profile for early atherosclerosis.

OBJECTIVE: This study intends to verify the expression levels and correlation of aromatase, matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) and CD44 in ductal carcinoma in situ (DCIS) and infiltrating ductal carcinoma (IDC) when both are found in the same breast. METHODS: One hundred and ten cases were evaluated by tissue microarray (TMA) and immunohistochemically screened with anti-aromatase polyclonal antibodies, anti-MMP-2 monoclonal antibodies, anti-MMP-9 policlonal antibodies and anti-CD44 monoclonal antibodies. RESULTS: Aromatase was expressed in IDC and DCIS in 63 (57.3%) and 60 (67%) of the cases respectively; MMP-2 was similarly expressed in IDC and DCIS in 15 (13.60%) cases; MMP-9 was positively expressed in IDC and DCIS in 83 (75.50%) and 82 (74.50%) cases, respectively; CD44 was positively expressed in IDC and DCIS in 49 (44.50%) and 48 (42.60%) of the cases, respectively; all of them were highly correlated (pOBJETIVO: O objetivo desse estudo é verificar as expressões e correlações da aromatase, metalloproteinase 2 da matriz (MMP2), metalloproteinase 9 da matriz (MMP-9) e CD44 no carcinoma ductal in situ (CDIS) e carcinoma ductal infiltrativo (CDI) quando ambos estão presentes simultaneamente na mesma mama. MÉTODOS: Foram avaliados 110 casos pelo método de tissue microarray (TMA) e através da utilização de anticorpos policlonais antiaromatase, anticorpos monoclonais anti-MMP-2, anticorpos policlonais anti-MMP-9 e anticorpos monoclonais anti-CD44. RESULTADOS: A aromatase estava expressa de forma positiva no CDI e CDIS em 63 (57,3%) e 60 (67%) casos, respectivamente. A expressão de MMP-2 estava expressa de forma positiva em 15 (13,6%) casos tanto no CDI, quanto no CDIS. A expressão da MMP-9 estava expressa de forma positiva em 83 (75,5%) e 82 (74,5%) casos de CDI e CDIS, respectivamente. A expressão de CD44 estava expressa de forma positiva em 49 (44,5%) e 48 (42,6%) casos de CDI e CDIS, respectivamente. Todos eles apresentando alta correlação (p

O aumento da expressão das metaloproteinases da matriz extracelular (MPM) é considerado um importante fator no desenvolvimento da doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). O presente estudo teve como objetivo avaliar os níveis de expressão da MPM-2 e MPM-9 na saliva de pacientes com DPOC em comparação com indivíduos saudáveis, verificando a viabilidade de usar a saliva para a caracterização de biomarcadores específicos em DPOC. Foram selecionados pacientes com DPOC (n=16) e controles saudáveis (n=9). Em ambos os grupos foram realizados teste espirométrico e obtidas amostras de saliva de cada indivíduo. Os níveis de MPM-2 e MPM-9 na saliva foram determinados pela técnica Western blot. A MPM-2 e a MPM-9 foram significativamente maiores em pacientes com DPOC do que no grupo de indivíduos saudáveis. Foi encontrada moderada correlação negativa entre a concentração de MPM-2 e o volume expiratório forçado no primeiro segundo (r= -0,582, p=0,014) em pacientes com DPOC. Estes resultados abrem novas perspectivas para o estudo específico de biomarcadores na saliva para predizer e monitorar a obstrução ao fluxo aéreo em pacientes com DPOC. The increased expression of matrix metalloproteinases (MMP) is considered a key factor in the development of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). This study aimed at assessing expression levels of MMP-2 and MMP-9 in saliva from patients with COPD, comparing them to those of healthy subjects, thus assessing the feasibility of characterizing specific biomarkers for COPD. Patients with COPD (n=16) and healthy controls (n=9) were selected; both groups submitted to spirometry and to collection of saliva samples. Saliva levels of MMP-2 and MMP-9 were determined by Western blot. MMP-2 and MMP-9 levels were significantly higher in COPD patients than in control subjects. In COPD patients, a moderate, negative correlation was found between MMP-2 concentration and forced expiatory volume at the first second (r= -0.582; p=0.014). These findings open new perspectives to study specific biomarkers in saliva to predict and monitor airway obstruction in COPD patients.

O aumento da expressão das metaloproteinases da matriz extracelular (MPM) é considerado um importante fator no desenvolvimento da doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). O presente estudo teve como objetivo avaliar os níveis de expressão da MPM-2 e MPM-9 na saliva de pacientes com DPOC em comparação com indivíduos saudáveis, verificando a viabilidade de usar a saliva para a caracterização de biomarcadores específicos em DPOC. Foram selecionados pacientes com DPOC (n=16) e controles saudáveis (n=9). Em ambos os grupos foram realizados teste espirométrico e obtidas amostras de saliva de cada indivíduo. Os níveis de MPM-2 e MPM-9 na saliva foram determinados pela técnica Western blot. A MPM-2 e a MPM-9 foram significativamente maiores em pacientes com DPOC do que no grupo de indivíduos saudáveis. Foi encontrada moderada correlação negativa entre a concentração de MPM-2 e o volume expiratório forçado no primeiro segundo (r= -0,582, p=0,014) em pacientes com DPOC. Estes resultados abrem novas perspectivas para o estudo específico de biomarcadores na saliva para predizer e monitorar a obstrução ao fluxo aéreo em pacientes com DPOC.The increased expression of matrix metalloproteinases (MMP) is considered a key factor in the development of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). This study aimed at assessing expression levels of MMP-2 and MMP-9 in saliva from patients with COPD, comparing them to those of healthy subjects, thus assessing the feasibility of characterizing specific biomarkers for COPD. Patients with COPD (n=16) and healthy controls (n=9) were selected; both groups submitted to spirometry and to collection of saliva samples. Saliva levels of MMP-2 and MMP-9 were determined by Western blot. MMP-2 and MMP-9 levels were significantly higher in COPD patients than in control subjects. In COPD patients, a moderate, negative correlation was found between MMP-2 concentration and forced expiatory volume at the first second (r= -0.582; p=0.014). These findings open new perspectives to study specific biomarkers in saliva to predict and monitor airway obstruction in COPD patients.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-20Bitstream added on 2015-04-09T12:47:47Z : No. of bitstreams: 1 000814346.pdf: 1337951 bytes, checksum: 9ed960afb83960e3296a726e4541f251 (MD5) A literatura cita que 1 a 5% dos casos de tumor venéreo transmissível (TVT) primário são metastáticos. Sendo assim, é importante estudar os mecanismos que colaborem para a invasão metastática assim como para sua implantação. Dentre estes mecanismos as metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9) e seus inibidores (TIMP-1 e TIMP-2), assim como o ATM, COX-2, VEGF e CDH-1 podem explicar a implantação tumoral no sítio primário e a ocorrência da invasão metastática do TVT no cão. O objetivo do presente trabalho é avaliar a expressão gênica dos marcadores acima e correlacionar a sua expressão com o poder de implantação e invasão metastática no TVT. Para este estudo foram avaliadas 32 amostras tumorais, que foram congeladas e delas extraídos RNAm. Utilizou-se o método de qRT-PCR para todos os transcritos. Os resultados foram comparados com sangue periférico de 10 cães saudáveis (grupo controle) com o teste de Mann Whitney. A expressão gênica de MMP-2 e TIMP-1 foi significativamente maior do que o grupo controle (p < 0,001; p = 0,037; respetivamente). A expressão dos transcritos dos genes MMP-9 e TIMP-2 não apresentou diferença estatística entre o TVT e grupo controle (p = 0,535; p = 0, 906; respetivamente). A avaliação de expressão de transcritos do ATMapresentou aumento significativo (p < 0,0001) de sua expressão no tecido tumoral (TVT) quando comparado com o grupo controle, enquanto a expressão dos transcritos do gene TP53 não apresentou diferença estatística entre os grupos (p = 0,26). Na avaliação da COX-2, VEGF, CDH-1 foi verificado aumento significativo (p < 0,0001; p < 0,0001; p = 0,04, respectivamente) da expressão de transcritos dos genes no tecido tumoral (TVT) em relação ao grupo controle. A super-expressão de MMP-2 e o TIMP-1 pode explicar a capacidade de implantação das células tumorais assim como a maior expressão de VEGF e COX-2 pode explicar o crescimento rápido local do tumor e ... The literature reports that 1-5% of cases of primary trasmissible venereal tumor (TVT) are metastatic. Thus, it is interesting to study the mechanisms that collaborate to the metastatic invasion and implantation of TVT. Among these mechanisms, the metalloproetinases (MMP-2 and MMP-9) and their inhibitors (TIMP-1 and TIMP-2), as well as ATM, COX-2, VEGF and CDH-1 may explain the tumoral implantation in the primary site and metastatic invasion of TVT in dogs. The objectives of this study are to evaluate the gene expression of these markers and to correlate their expression with the high ability of deployment and metastatic invasion of TVT. For this study, 32 tumor samples were frozen and their mRNA were extract using the qRT-PCR method for all transcripts. The results were compared with peripheral blood of 10 healthy dogs (control group) using the Mann Whitney test. The expression of MMP-2 and TIMP-1 were significantly higher than the control group (p

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25Bitstream added on 2015-04-09T12:48:09Z : No. of bitstreams: 1 000814074.pdf: 683274 bytes, checksum: 7aed95862bef3ef98072762605457374 (MD5) A doxorrubicina é um quimioterápico bastante utilizado em pacientes oncológicos e sua cardiotoxicidade está relacionada com vários mecanismos celulares, incluindo necrose e apoptose. Estudos têm aventado a participação das metaloproteinases da matriz e seus inibidores na cardiotoxicidade induzida pela doxorrubicina. Assim, esta pesquisa teve como objetivo avaliar as atividades plasmática e miocárdica das metaloproteinases da matriz 2 e 9 em coelhos com cardiomiopatia por doxorrubicina, correlacionando-as com o remodelamento cardíaco que acompanha tal enfermidade. Os animais foram divididos em dois grupos: controle (n=10) e doxorrubicina (n=15). As atividades plasmática e miocárdica foram analisadas através do método de zimografia. Foram evidenciadas apenas as formas inativas das MMPs (pro-MMP) nas amostras sanguíneas analisadas. A pro-MMP-2 foi documentada no plasma dos animais controle e daqueles com cardiomiopatia por doxorrubicina em todos os momentos de avaliação. Já a pro-MMP-9 foi encontrada em algumas amostras dos grupos controle e enfermo, principalmente nos momentos de valiação T30 e T45, porém em fraca marcação. Houve diferença significativa na atividade das pro-MMPs-2 e 9 ao longo dos tempos de estudo. Os testes de correlação entre as pro-MMPs plasmática e os parâmetros ecocardiográficos evidenciaram resultados significativos. Em T0 verificou-se correlação entre A’lat e pro-MMP-2; em T15 documentaram-se correlações entre a pro-MMP-2 e os parâmetros PPE e TEI; já em T30 constatou-se correlação entre pro-MMP-9 e PLVE%; em T45, finalmente, foram observadas correlações entre pro-MMP-2 e os parâmetros DIVEs, DIVEd, SIVs e Emitral/E’sep, assim como entre pro-MMP-9 e TEVE. No miocárdio evidenciou-se apenas a pro-MMP-2. A atividade plasmática das MMPs, em especial a pro-MMP 2, pôde ser relacionada às alterações morfofuncionais da cardiomiopatia induzida, sendo que não houve correlação ... Doxorubicin is a chemotherapy agent frequently used in oncology patients. Its cardiotoxicity is related to several cellular mechanisms, including necrosis and apoptosis. Some studies have ascribed a role to matrix metalloproteinases and their inhibitors in the cardiotoxicity induced by doxorubicin. Therefore, this research was aimed at evaluating the plasma and myocardial activities of matrix metalloproteinases 2 and 9 in rabbits with doxorubicin-induced cardiomyopathy, searching for a correlation between them and the cardiac remodeling attributable to such disease. The animals were assigned into two groups: control (n=10) and doxorubicin (n=15). The plasmatic and myocardial activities were analyzed through the method of zymography. Only the inactive MMPs (pro-MMP) have been identified in the blood samples. The plasma pro-MMP-2 was documented in both control and doxurubicin animals from T0 to T45. On the contrary, the pro-MMP-9 was found in some samples of control and doxurubicin groups, especially at T30 and T45, although only weak bands have been demonstrated. A significant difference was shown to occur in pro-MMPs-2 and 9 along time. Correlation tests between the plasma pro-MMPs and the echocardiographic data demonstrated significant results. At T0 a correlation was found between A’lat and pro-MMP-2; at T15 correlations were documented between pro-MMP-2 and the parameters PEP and TEI; at T30 a correlation was identified between pro-MMP-9 and PLVE%; lastly, at T45 correlations have been observed between pro-MMP-2 and the parameters LVIDs, LVIDd, IVSs e Emitral/E’sep, as well as between pro-MMP-9 and LVET. Only the pro-MMP-2 was documented at the myocardium, although no significant difference between groups could be demonstrated. The plasmatic activity of the MMPs, specially the pro-MMP2, could be related to the morphofunctional alterations of the induced cardiomyopathy, and that there was no correlation between the plasmatic ...

Resumo não disponível

FUNDAMENTO: O papel de metaloproteinases (MMP) séricas após o infarto do miocárdio (IM) é desconhecido. OBJETIVO: O objetivo deste estudo foi o de avaliar o papel das MMP-2 e -9 séricas como marcadores prognósticos da remodelação ventricular seis meses após o IM anterior. MÉTODOS: Fizemos um registro prospectivo dos pacientes após o seu primeiro IM anterior. A atividade de MMP foi analisada entre 12 a 72 horas após o IM. Foi feito um ecocardiograma durante a internação e seis meses depois. RESULTADOS: Incluímos 29 pacientes; 62% mostraram remodelação ventricular. Os pacientes que mostraram remodelação tinham maior tamanho de infarto baseado nos valores pico da creatinofosfoquinase (CPK) (p = 0,037), alta prevalência de insuficiência cardíaca congestiva em hospitais (p = 0,004), e redução da fração de ejeção (FE) (p = 0,007). Os pacientes com remodelação ventricular tiveram menores níveis séricos de MMP-9 inativa (p = 0,007) e maiores níveis da forma ativa da MMP-2 (p = 0,011). Em um modelo de regressão logística multivariada, ajustado pela idade, pico de CPK, FE e prevalência de insuficiência cardíaca, os níveis séricos da MMP-2 e -9 estavam associados à remodelação (p = 0,033 e 0,044, respectivamente). CONCLUSÃO: Níveis séricos mais elevados da MMP-9 inativa foram associados com a preservação dos volumes ventriculares esquerdos, e níveis séricos mais elevados da forma ativa da MMP-2 foram um preditor da remodelação seis meses após o IM.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-07Bitstream added on 2014-08-13T18:01:12Z : No. of bitstreams: 1 000735368_20151001.pdf: 255424 bytes, checksum: 80f4b36d3292e89d01ab069df6f8c857 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-10-01T13:00:53Z: 000735368_20151001.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-01T13:01:37Z : No. of bitstreams: 1 000735368.pdf: 1530513 bytes, checksum: 5a441b8954592db5004cbab5c7437548 (MD5) Neste estudo foi avaliada a cinética de expressão, a localização do EMMPRIN e a correlação de sua expressão com a expressão das MMPs -1, -2 e -9 e com a perda óssea alveolar, durante o desenvolvimento da lesão periapical experimentalmente induzida em camundongos. Foram utilizados 40 camundongos wild-type (WT) da linhagem C57BL/6. As lesões periapicais foram induzidas nos 1os molares inferiores e após os períodos experimentais de 7, 14, 21 e 42 dias, os animais foram mortos e as mandíbulas foram removidas. Como controles foram usados 1os molares hígidos. A mensuração das lesões periapicais foi efetuada em microtomografia computadorizada. A expressão do RNA mensageiro (mRNA) do EMMPRIN, MMPs -1, -2, e -9 foi determinada por meio de RT-PCR em tempo real. A presença, a localização e a expressão do EMMPRIN e das MMPs nas lesões periapicais foram avaliadas por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por meio dos testes ANOVA, Bonferroni e correlação de Spearman com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a área da lesão periapical aumentou significativamente dos 7 para os 14 dias (83%) e a partir de então houve estabilização. No grupo controle, o EMMPRIN foi expresso fortemente nas células da camada odontoblástica da polpa dentária. Nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias, foram observadas imunomarcações intensas para o EMMPRIN, MMPs -1, -2 e -9 na região adjacente ao forame apical, onde havia infiltrado inflamatório denso e ocasionalmente em outras regiões da lesão periapical. O EMMPRIN, MMP-1, -2 e -9 apresentaram forte expressão em células inflamatórias mononucleares e polimorfonucleares e marcação discreta em fibroblastos. A imunoexpressão do EMMPRIN na região periapical foi maior nos períodos de 7, 14, 21 e 42 dias comparado ao controle. A expressão do gene EMMPRIN apresentou-se maior no grupo controle em relação aos 7, 14, 21 e 42 dias... This study evaluated the kinetics of expression and location of EMMPRIN and the correlation of its expression with expression of MMPs -1, -2 and -9 and with alveolar bone loss during the development of experimentally induced periapical lesions in mice. A total of 40 C57BL/6 wild-type mice (WT) were used. The periapical lesions were induced in first lower molars. After 7, 14, 21 and 42 days, the animals were killed and the mandibles were removed. Mice without pulp exposure served as controls. Measurement of periapical lesions was performed in micro-computed tomography. mRNA levels of EMMPRIN, MMPs-1, -2, and -9 were detected by real time RT-PCR. Presence, localization, and expression of EMMPRIN and MMPs were evaluated by immunohistochemistry. Data were analyzed using ANOVA, Bonferroni and Spearman correlation tests with significance level of 5%. The results showed that periapical lesion area was significantly increased from 7 to 14 days (83%) and thereafter become stable. In the control group, EMMPRIN was strongly expressed in odontoblastic layer of the dental pulp. At 7, 14, 21 and 42 days there was intense immunostaining for EMMPRIN, MMPs -1, -2 and -9 in the adjacent region of apical foramen, where there was dense inflammatory infiltrate. These proteins were expressed in other parts of the periapical lesion occasionally. EMMPRIN, MMP-1, -2 and -9 were intensely expressed in mononuclear and polymorphonuclear inflammatory cells and discretely expressed in fibroblasts. In the periapical region, the EMMPRIN immunostaining was higher at 7, 14, 21 and 42 days compared with control. The expression of EMMPRIN gene was higher in control group compared with 7, 14, 21 and 42 days. The expression of MMP-1 gene increased at 7 days and stays elevated until 42 days. The mRNA levels of MMP -2 and -9 increased significantly at 14 days and returned to control level at 21 and 42 days. The EMMPRIN immunostaining was...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:56:32Z : No. of bitstreams: 1 lima_tb_me_jabo.pdf: 771997 bytes, checksum: 40a70c69fd98451018e80c0fa212d383 (MD5) Estudaram-se os efeitos do cetorolaco de trometamina à 0,5%, sem conservante, quanto ao tempo de epitelização, a alterações clínicas, histológicas (HE), sobre expressão da Óxido Nítrico Sintase induzível (iNOS) e da Metaloproteinase-9 (MMP-9) na ceratite ulcerativa causada por álcali em coelho. Doze olhos foram tratados (GT) com o fármaco e outros 12 com solução salina (GC), imediatamente à ocorrência das úlceras e a cada 6 horas. Decorridas 24h, seis córneas (n=6) de cada grupo foram colhidas (primeiro momento). As demais (n=6), o foram após a reepitelização (segundo momento). Em ambos os momentos, avaliaram-se o infiltrado inflamatório e as condições do epitélio neoformado (HE). Por imunoistoquímica, a imunomarcação de iNOS e de MMP-9 foi avaliada. A média do tempo de epitelização no GT foi de 55 horas. No GC, ele foi de 44 horas (p0,05) e camada epitelial simples. O GC mostrou maior estratificação no epitélio neoformado. A média de imunomarcação de iNOS em células do estroma foi maior em GT, no primeiro e segundo momentos, comparativamente a GC (p>0.05). No segundo momento, a região central expressou mais iNOS, comparativamente à periférica, tanto em GT (p 0.05) and simple epithelial layer. The GC showed greater stratification in the newly formed epithelium. The average immunostaining of iNOS in stromal cells was higher in GT, the first and second moments compared to control group (p> 0.05). In the second step, the central region expressed more iNOS compared to peripheral in both TG (p

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:51:08Z : No. of bitstreams: 1 semolin_lms_me_jabo.pdf: 459480 bytes, checksum: a04688b37ebdfeff1509f159e7641c20 (MD5) O linfoma é uma doença linfoproliferativa caracterizada pela multiplicação clonal de linfócitos malignos no seio dos órgãos linfóides, afetando principalmente os linfonodos, ou outros órgãos viscerais sólidos, com prognóstico dependente de vários fatores, incluindo invasão tecidual. Enzimas proteolíticas MMP-2 e MMP-9 estão sendo estudadas quanto à importância neste processo de progressão tumoral por propiciarem a penetração e infiltração celular. Considerando a importância atual destas enzimas e o papel ainda não fundamentado nas neoplasias hematopoiéticas, avaliou-se a expressão de MMP-2 e MMP-9 em cães acometidos por linfoma multicêntrico e cães hígidos, através de técnica imuno-histoquimica de linfonodo e eletroforese zimográfica de linfonodo e soro, estabelecendo a relação entre a expressão destas enzimas e os fatores prognósticos como estadiamento, imunofenotipo e grau histopatológico da neoplasia e resposta ao tratamento. Observou-se maior expressão tecidual de MMP-9 nos animais com linfoma, através de técnica imuno-histoquimica, sem correlação exata com prognóstico. Eletroforese zimográfica do linfonodo demonstrou correlação da MMP-9 com imunofenótipo T e animais em doença progressiva, inferindo possível prognóstico negativo quanto à sobrevida. Valores de MMP-2 não apresentaram relação clara com o processo tumoral, assim como os valores séricos das duas enzimas. Desta forma, a MMP-9 demonstrou participação no processo neoplásico, porém sem determinação prognóstica exata Lymphoma is a lymphoproliferative disease characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes within lymphoid organs, mainly affecting the lymph nodes, or other solid visceral organs, with prognosis depends on several factors, including tissue invasion. Proteolytic enzymes MMP-2 and MMP-9 have been studied as to the importance of tumor progression in this process by propitiate the penetration and cellular infiltration. Considering the current importance of these enzymes and the role not grounded in hematopoietic malignancies, we evaluated the expression of MMP-2 and MMP-9 in dogs affected by multicentric lymphoma and healthy dogs by immunohistochemistry technique of lymph node and zymography electrophoresis of lymph node and serum, establishing the relationship between the expression of these enzymes and prognostic factors such as tumor staging, immunophenotyping, histological grade and response to treatment. We observed increased expression of MMP-9 tissue in animals with lymphoma by immunohistochemistry technique, no exact correlation with prognosis. Zymography electrophoresis of lymph node demonstrated correlation of MMP-9 with T-cell phenotype and progressive disease, inferring possible negative prognosis regarding survival. Values of MMP-2 showed no clear relation with the tumoral process as well as serum levels of the two enzymes. Thus, MMP-9 demonstrated involvement in the neoplastic process, but without accurate prognostic determination

A 78-year-old male patient presented with double vision, painless palpable mass under the right superolateral orbital rim, downward displacement and restricted adduction of the right eye. His visual acuity was 20/50 OD and 20/20 OS. Hertel exophthalmometry was 21 mm OD and 17 mm OS. Computed tomographic scans showed an infiltrative orbital mass with ill-defined, irregular margins, involving the lacrimal gland and the lateral rectus muscle. The patient underwent an anterior transcutaneous transseptal orbitotomy with incisional biopsy and surgical debulking. Histopathologic evaluation revealed primary ductal adenocarcinoma of the lacrimal gland. Following the metastatic work up, he underwent an eyelid-sparing orbital exenteration. Microscopically, the tumor elements were characterized by large polygonal cells with vesicular nuclei, prominent nucleoli and amphophilic cytoplasm. The tumor components comprised duct-type structures with papillary and cribriform patterns, surrounded by prominent basement membrane. The tumor cells were positive for cytokeratin-7, matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, MMP-13 and proto-oncogene Her-2/neu, but negative for cytokeratin-5, cytokeratin-20, p63, prostate-specific antigen, S-100 protein and thyroid transcription factor. These histopathologic findings were compatible with poorly differentiated ductal adenocarcinoma of the lacrimal gland, T3N0M0. Twenty-four months after orbital exenteration, the patient was diagnosed with ipsilateral parotid gland and cervical lymph node metastases and died of disease. Paciente do sexo masculino e com 78 anos de idade apresentou diplopia, massa palpável abaixo da margem orbitária direita, deslocamento inferior do bulbo ocular direito e limitação da adução do olho direito. A acuidade visual foi 20/50 OD e 20/20 OE. A exoftalmometria de Hertel foi 21 mm OD e 17 mm OE. Tomografia computadorizada mostrou uma massa orbitária, infiltrativa e com margens irregulares, envolvendo a glândula lacrimal e o músculo reto lateral. O paciente foi submetido a uma orbitotomia anterior com biópsia incisional. O exame histopatológico revelou adenocarcinoma ductal primário da glândula lacrimal. Em seguida, o paciente foi submetido a uma exenteração orbitária com preservação das pálpebras. Microscopicamente, os elementos tumorais foram caracterizados por células poligonais grandes com citoplasma anfofílico, núcleo vesicular e nucléolo proeminente. Os componentes tumorais incluíram estruturas ductais com padrões cribriforme e papilífero e cercadas por membrana basal proeminente. As células tumorais foram positivas para citoqueratina 7, metaloproteinase 2 da matriz, metaloproteinase 9 da matriz, metaloproteinase 13 da matriz e Her-2/neu, mas negativas para citoqueratina 5, citoqueratina 20, p63, antígeno prostático específico, proteína S-100 e fator de transcrição da tiroide. Estes achados histopatológicos foram compatíveis com o diagnóstico de adenocarcinoma ductal pouco diferenciado da glândula lacrimal, T3N0M0. Vinte e quatro meses após a exenteração orbitária, o paciente foi diagnosticado com metástases nos linfonodos cervicais ipsilaterais e na glândula parótida ipsilateral e faleceu.

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A migrânea é uma cefaleia primária comum e altamente incapacitante que atinge cerca de 10% da população mundial, especialmente as mulheres. Apesar dos esforços, a fisiopatologia da migrânea não está completamente elucidada. No entanto, acredita-se que as metaloproteinases da matriz (MMPs) estejam envolvidas no rompimento da barreira-hematoencefálica durante uma crise de migrânea. O objetivo do presente trabalho é avaliar se polimorfismos funcionais nos genes da MMP-2 (C-1306T e C-735T) e da MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q) e haplótipos estão associados com a migrânea e se eles podem modificar os níveis circulantes de MMPs na migrânea. Para avaliar o efeito de polimorfismos da MMP-9, foram estudadas 102 mulheres sem migrânea (grupo controle) e 187 mulheres com migrânea (141 com migrânea sem aura; MSA e 46 com migrânea com aura; MA). As genotipagens para os polimorfismos C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q da MMP-9 foram realizadas por PCR-RFLP, PCR convencional seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida e PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo, respectivamente. As concentrações plasmáticas de MMP-9 e TIMP-1 foram determinadas por ELISA. Os genótipos para os polimorfismos da MMP-2 foram determinados por PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo em 148 mulheres sem migrânea e em 204 mulheres com migrânea (153 MSA e 51 MA). As concentrações plasmáticas da MMP-2 e do TIMP-2 foram avaliadas, respectivamente, por zimografia e por ELISA. Os haplótipos foram inferidos utilizando o programa PHASE. Este estudo é o primeiro a mostrar que polimorfismos funcionais e haplótipos nos genes da MMP-2 e da MMP-9 podem afetar os níveis circulantes das MMPs em pacientes com migrânea. Enquanto o haplótipo H6 (CLQ) da MMP-9 foi associado aos maiores níveis plasmáticos de MMP-9 nas pacientes com migrânea (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml para o CLR; 201,5±18,67ng/ml para o CHR e 200,2±17,02ng/ml para o CHQ), as maiores concentrações de MMP-2 foram encontradas nas pacientes com migrânea com aura com o genótipo CC para o polimorfismo C-735T (1,29±0,07U.A. versus 0,96±0,06U.A. para os genótipos CT ou TT) e com o haplótipo H1 (CC) (1,24±0,05U.A. versus 0,94±0,05U.A. para o haplótipo CT) no gene da MMP-2. Apesar de não investigarmos os mecanismos moleculares que explicam esses resultados, podemos sugerir que o aumento dos níveis das MMPs associados a genótipos e haplótipos específicos podem predispor essas pacientes a um aumento da permeabilidade vascular da barreira hematoencefálica, promovendo assim o desenvolvimento de um ambiente neuroinflamatório no sistema nervoso central, contribuindo para uma crise de migrânea Abstract: Migraine is a common primary headache and highly disabling, affecting approximately 10% of the population worldwide, especially women. Despite the efforts, the pathophysiology of migraine is not completely understood. However, it is believed that the matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the disruption of blood-brain barrier (BBB) during migraine attacks. The aim of this study was to evaluate whether functional polymorphisms in MMP-2 (C-1306T and C-735T) and MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n and R(279)Q) genes and haplotypes are associated with migraine and whether they modify circulating MMPs levels in migraine. To evaluate the effect of MMP-9 polymorphisms, we studied 102 healthy women (controls) and 187 women with migraine (141 migraine without aura; MWA, and 46 migraine with aura; MA). Genotypes for C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q MMP-9 polymorphisms were determined by PCR-RFLP, by conventional PCR followed by electrophoresis in polyacrylamide gels and by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays, respectively. The plasma MMP-9 and TIMP-1 concentrations were measured by ELISA. Genotypes for MMP-2 polymorphisms were determined by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays in 148 healthy women without history of migraine and in 204 women with migraine (153 MWA and 51 MA). The plasma concentrations of MMP-2 and TIMP-2 were evaluated by gelatin zymography and ELISA, respectively. Haplotypes were inferred using the PHASE program. This is the first study to show that functional MMP-2 and MMP-9 polymorphisms and haplotypes can affect the circulating MMPs levels in patients with migraine. While the MMP-9 H6 (CLQ) haplotyple is associated with high MMP-9 concentrations in patients with migraine (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml for CLR; 201,5±18,67ng/ml for CHR and 200,2±17,02ng/ml for CHQ) , the highest concentrations of MMP-2 were found in patients with migraine with aura carrying the CC genotype for C-735T polymorphism (1,29±0,07A.U. versus 0,96±0,06A.U. for CT or TT genotypes) and the H1 (CC) haplotype (1,24±0,05A.U. versus 0,94±0,05A.U. for CT haplotype) in the MMP-2 gene. Although we have not investigated the molecular mechanisms explaining these results, we can suggest that an increase of the MMPs levels associated with these genotypes and haplotypes may predispose these patients to increased vascular BBB permeability, thus promoting the development of an inflammatory environment in their central nervous systems, which contributes to migraine attacks Doutorado Farmacologia Doutora em Farmacologia

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A hipertensão é uma doença muito comum, e está associada à alta morbidade e mortalidade cardiovascular. Em relação às doenças associadas à hipertensão, se observam diferenças étnicas, sendo que negros são expostos a maior risco cardiovascular que os brancos. A manutenção de níveis pressóricos elevados leva a alterações teciduais em vasos e no coração em um processo chamado remodelamento cardiovascular. No coração este processo leva à hipertrofia cardíaca. Esta condição causa progressiva perda na eficiência de contração do coração, e em casos avançados pode levar à morte dos pacientes. O remodelamento cardíaco envolve a participação de metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs), principalmente a MMP-2 e MMP-9. Diversos polimorfismos genéticos foram associados com alterações na expressão e/ou atividade destas enzimas, e é possível que diferenças nas distribuições dos polimorfismos ajudem a explicar as diferenças étnicas quanto à morbidade e mortalidade cardiovascular. Os principais polimorfismos da MMP-9 e MMP-2 são: um polimorfismo de base única (SNP) (C-1562T) e um microssatélite (-90 CA (14-24)) no promotor, e um SNP no exon 6 (A855G - Q279R) da MMP-9, e dois SNPs (C-1306T e C-735T) no promotor da MMP-2. Como estes polimorfismos também foram associados com diversas doenças, o propósito deste estudo foi avaliar se polimorfismos da MMP-9 e MMP-2 estão associados à hipertensão, a alterações ecocardiográficas em hipertensos e se diferem entre populações de brancos e de negros. Em nosso estudo avaliamos 173 hipertensos submetidos a eco cardiografia e 137 indivíduos normotensos, pareados para idade gênero e raça. Avaliamos também 140 indivíduos brancos e 177 indivíduos negros recrutados aleatoriamente. Nossos resultados mostraram uma associação do alelo H e do genótipo HH do microssatélite -90 CA(14-24) com hipertensão (P= 0,0058 e P=0,0085, respectivamente), e os portadores destes alelos apresentaram maior risco a estadoença, quando comparados com o alelo L (odds ratio, ou razão de chances (OR) =1,581) e genótipo LL (OR=2,32). Haplótipos da MMP-9 foram capazes de exercer efeitos protetores (H3, P=0,049) e deletérios (H7; P=0,0015) sobre o diâmetro diastólico final e protetores (H3, P=0,0367) e deletérios (H7; P=0,0057) sobre o índice de massa do ventrículo esquerdo. Não encontramos associações dos polimorfismos da MMP-2 com hipertensão, porém os haplótipos H1 e H3 mostraram efeitos protetores sobre diâmetro diastólico final e índice de massa do ventrículo esquerdo (H1; P=0,0290 e P=0,0318, respectivamente) e deletérios sobre e índice de massa do ventrículo esquerdo (H3; P=0,0187). Nós encontramos diferenças grandes nas distribuições dos polimorfismos estudados entre brancos e negros. O alelo H e genótipo HH do microssatélite -90 CA (14-24) é mais frequente em negros (P

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_luiz_eduardo_rilling_nova_cruz.pdf: 941247 bytes, checksum: b51c3277dc5892c9cf7c0ddc659e85c4 (MD5) Previous issue date: 2010-06-01 The objective of the present study was the immunohistochemical evaluation of the proportion of mononuclear cells and the expression of MMP-2 and 9 on chronic periodontitis between smokers and non-smokers. From the 127 patients examined 31(16 non-smokers and 15 smokers) fulfill the inclusion criteria were included in the study. These patients underwent surgical procedures and 31 biopsies were collected and divided in two parts, one for histological preparation and the other for zymography. Each sample was histologically processed and exposed to monoclonal antibodies for B cells (anti-CD20), memory T cells (anti-CD45RO) and macrophages or monocytes (anti-CD68) detection. The samples showed a similar pattern, with connective tissue rich in inflammatory cells. The histometric analysis showed that the total amount of mononuclear inflammatory cells labeled did not differ significantly between smokers and non-smokers (p> 0.05). Evaluating each cell type separately, significant differences were not detected between groups (p> 0.05). When stratifying the samples into regions (coronal, middle and apical third) to evaluate the presence of individual cell types in each region significant differences between the groups were not detected (p> 0.05). The zymography of the samples suggested that the expression of MMP-2 and 9 showed no statistically significant differences between the two groups (p> 0.05). Thus, within the limits of this study, we can conclude that sites with chronic periodontitis in smokers and non-smokers did not differ in the amount of mononuclear inflammatory cells and in the expression of MMPs 2 and 9. O estudo teve como objetivo a avaliação imunoistoquímica da proporção de células mononucleares e da expressão zimográfica da MMP-2 e 9 na periodontite crônica em fumantes e não-fumantes. Foram examinados 127 pacientes dos quais 31 preencheram os critérios de inclusão e foram inseridos no estudo, sendo 16 não-fumantes e 15 fumantes. Estes pacientes foram operados e 31 biópsias foram coletadas de área interproximal de dentes com bolsa periodontal >5mm e divididas longitudinalmente em duas partes, uma para análise histológica e outra para zimografia. As amostras foram processadas histologicamente e expostas aos anticorpos monoclonais para células B (anti-CD20), células T de memória (anti-CD45RO) e monócitos ou macrófagos (anti-CD68). De maneira geral, as amostras apresentaram padrão semelhante, com um tecido conjuntivo subjacente ao epitélio oral rico em células inflamatórias. A análise histométrica demonstrou que a quantidade total de células inflamatórias mononucleares marcadas não diferiu entre fumantes e não-fumantes (p>0,05). Ao avaliar cada tipo celular separadamente, também não foram detectadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p>0,05). Ao dividir as amostras em regiões (terço coronal, médio e apical) e avaliar a presença de cada tipo celular em cada uma das regiões também não foram detectadas diferenças estatísticas significantes entre os grupos (p>0,05). A avaliação das zimografias sugere que a expressão de MMP-2 e 9 não apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos (p>0,05). Assim, dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que os sítios com periodontite crônica de fumantes e não-fumantes não diferem em relação à quantidade e localização de células inflamatórias mononucleares e na expressão de MMPs 2 e 9.

OBJECTIVE: This study intends to verify the expression levels and correlation of aromatase, matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), matrix metalloproteinase 9 (MMP-9) and CD44 in ductal carcinoma in situ (DCIS) and infiltrating ductal carcinoma (IDC) when both are found in the same breast. METHODS: One hundred and ten cases were evaluated by tissue microarray (TMA) and immunohistochemically screened with anti-aromatase polyclonal antibodies, anti-MMP-2 monoclonal antibodies, anti-MMP-9 policlonal antibodies and anti-CD44 monoclonal antibodies. RESULTS: Aromatase was expressed in IDC and DCIS in 63 (57.3%) and 60 (67%) of the cases respectively; MMP-2 was similarly expressed in IDC and DCIS in 15 (13.60%) cases; MMP-9 was positively expressed in IDC and DCIS in 83 (75.50%) and 82 (74.50%) cases, respectively; CD44 was positively expressed in IDC and DCIS in 49 (44.50%) and 48 (42.60%) of the cases, respectively; all of them were highly correlated (p

Orientador: Sergio Luis Felisbino Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Diabetes mellitus é uma síndrome clínica heterogênea, causada pela falta de produção de insulina pelas células beta (?) pancreáticas ou pelo defeito nos receptores para insulina nas células-alvo, resultando em uma doença metabólica hiperglicêmica. Estudos têm demonstrado que as disfunções sexuais e reprodutivas incluindo impotência, redução da libido, prejuízo da espermatogênese, infertilidade e diminuição da qualidade espermática são frequentemente associadas com o diabete no homem e em animais de experimentação. Apesar dos efeitos do diabete sobre as funções testiculares e fertilidade de machos estarem bem esclarecidos, o impacto da doença sobre morfogênese e crescimento da próstata ainda não foi completamente descrito. Assim, o presente estudo teve por objetivo analisar os possíveis efeitos do diabete e da reposição com insulina durante o crescimento prostático na puberdade, com especial atenção para a atividade das metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9), enzimas envolvidas na remodelação dos componentes da matriz extracelular. Para tanto, foram realizadas análises morfológicas, morfométricas, imunoistoquímicas e bioquímicas de zimografia, nos lobos ventral, dorsolateral e anterior da próstata de ratos Wistar, nos quais o diabete foi induzido quimicamente aos 40 dias de idade por estreptozotocina. Nossos resultados mostraram que o diabete experimental prejudicou o crescimento glandular, caracterizado por um menor ganho de peso absoluto dos diferentes lobos da próstata e diminuição da relação parênquima/estroma, principalmente do lobo dorsolateral. O diabete causou diminuição nas concentrações plasmáticas de testosterona, mas não alterou a concentração de diidrotestosterona. As atividades das MMP-2 e MMP-9 foram menores no grupo diabético. O tratamento simultâneo e/ou tardio com insulina exógena além de reverter os parâmetros alterados nos animais diabéticos também foi efetivo em restaurar características histológicas e morfométricas dos lobos prostáticos em padrões semelhantes aos observados nos animais controles. Estes resultados permitem concluir que o diabete prejudica, mas não impede, o crescimento da próstata e causa importantes alterações estromais, evidenciadas pela diminuição da atividade das MMPs -2 e -9, reforçando o papel destas enzimas na próstata. Por outro lado, o tratamento com insulina reverteu os parâmetros alterados sugerindo que as alterações prostáticas causadas pelo diabete na próstata, nesta fase do desenvolvimento pós-natal, são aparentemente reversíveis. Abstract: The Diabetes mellitus is a heterogeneous clinical syndrome caused by lack of insulin production by beta cells (?) or the pancreatic defect in insulin receptors on target cells, resulting in hyperglycemic metabolic disease. Studies have shown that the reproductive and sexual dysfunctions including impotence, decreased libido, impaired spermatogenesis and infertility, decreased sperm quality, are often associated with diabetes in humans and experimental animals. Although vast publications have checked the effects of diabetes on testicular function and fertility in males, the impact of disease on growth and morphogenesis of the prostate is still poor understood. Thus, this study aimed to examine the possible effects of diabetes and insulin replacement, during the maturation process prostate, with special attention to the matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP2 and MMP9), enzymes involved in the extracellular matrix components remodeling during development and growth of prostate. For both, analyze morphological, morphometric, immunocytochemical and biochemical zymography were done in the ventral, dorsolateral and anterior prostatic lobes of Wistar rats, which diabetes was chemically induced at 40 days old by streptozotocin. Our results showed that diabetes impaired th prostatic lobe growth, characterized by a low absolute weight gain and reduction in parenchyma/stroma ratio, mainly in the dorsolateral lobe. Diabetes caused a reduction in the testosterone plasma levels, but not in the dihydrotestosterone. The activities of MMP2 and MMP9 were reduced in the prostatic lobes from diabetic animals. Both simultaneous and late insulin treatment maintain and restored, respectively, the age-matched control morphological and morphometrical parameters. These results allow to conclude that diabetes interfere negatively in the prostate growth during puberty with important stromal changes, including reduction in MMP2 and MMP9 activities, reinforcing the role of these enzymes in the normal prostate morphogenesis. On the other hand, even a late insulin replacement can restore the deleterious effects of diabetes in the prostate during puberty. Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-09Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 marangoni_nr_me_araca.pdf: 326349 bytes, checksum: 7dc73435330e73a5c923b91991a9e1f1 (MD5) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) A leishmaniose visceral canina, causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, é uma doença de grande ocorrência principalmente na América Latina. A caracterização das lesões sistêmicas associadas à infecção pelo parasita tem sido amplamente estudada, entretanto, poucos autores elucidam a patogenia na forma nervosa. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos envolvidos na inflamação do sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por L. chagasi, amostras de liquor e plexo coróide foram colhidas e submetidas à zimografia para a detecção de metaloproteinases (MMPs). Amostras do plexo coróide e liquor de cães sadios foram avaliadas como controle. Os géis de zimograma foram analisados quanto à presença e atividade proteolítica das metaloproteinases -2 e -9. Formas inativas das proteases foram detectadas no plexo coróide, sendo que o Grupo de animais positivos não diferiu do negativo. No liquor foram encontradas formas ativas e inativas das MMPs-2 e -9 e a atividade proteolítica das mesmas diferiu entre os Grupos positivo e negativo. A MMP-2 teve maior detecção nos animais negativos e a MMP-9 nos positivos. O aumento da MMP- 9 no liquor dos cães doentes representa seu possível envolvimento na patogenia das lesões encefálicas ao ocasionarem o rompimento das barreiras hematoencefálica e/ou hematoliquórica, permitindo a passagem de células e proteínas envolvidas no processo inflamatório Canine visceral leishmaniasis, caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) chagasi, is a disease with high occurrence in Latin America. The characteristics of the systemic lesions related to the infection have been widely studied, but few studies clarify the disease on a neurological aspect. With the aim of a better understanding of the inflammation mechanisms within the central nervous system of dogs naturally infected by L. chagasi, some samples of cerebrospinal fluid and choroid plexus were collected and submitted to zymography to detect metalloproteinases (MMPs). Samples of choroid plexus and cerebrospinal fluid from healthy dogs were evaluated as control. The zymogram gels were analysed taking into account the presence and the proteolytic activity of metalloproteinase -2 and -9. Inactive forms of the proteases were detected in the choroid plexus, and the group of positive animals did not differ from negative ones. In the cerebrospinal fluid, active and inactive forms of MMP-2 and -9 were found, and their proteolytic activity differed between negative and positive groups. MMP-2 had higher detection in the negative animals and MMP-9 in the positive ones. The increasing of MMP-9 in the cerebrospinal fluid of infected dogs represents its possible involvement in the brain injuries, by causing the disruption of blood-cerebrospinal fluid barrier and/or blood-brain-barrier, allowing the passage of cells and proteins involved in inflammation process

Orientadores: Ubirajara Ferreira, Valeria H. A. Cagnon Quitete Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A destruição do complexo da distroglicana dependente da metaloproteinase da matriz pode ter papel importante no desenvolvimento e progressão do tumor urotelial. O carcinoma urotelial humano é frequente na bexiga e menos comum no trato urinário superior. Não há um modelo experimental animal bem definido e reprodutível de carcinoma urotelial do trato superior. Objetivos: Propor um novo modelo experimental de carcinoma urotelial que resulta de refluxo vesicoureteral em animais submetidos a tratamento com associação entre n-metil-n-nitrosourea e citrato de sódio intravesicais. Caracterizar a imunolocalização dos receptores de ?-distroglicana e metaloproteinase 9 na bexiga urinária, ureter e pelve renal deste modelo, assim como descrever aspectos morfológicos, imunohistoquímicos e proliferativos nestes órgãos. Metodologia: Cinqüenta ratas Fisher 344 foram divididas em dois grupos: Controle - recebeu 0,30ml de solução salina 0,9% intravesical; MNU-citrato - recebeu 0,15ml de MNU e 0,15ml de citrato de sódio intravesical, ambos em semanas alternadas, nas semanas 0, 2, 4 e 6, totalizando quatro doses. Após 15 semanas de tratamento, a bexiga, os ureteres, e as pelves renais foram coletados para análises morfológicas e imunohistoquímicas. Resultados: O grupo MNU-Citrato apresentou imunoreatividade reduzida de ?-DG e aumentada de MMP-9 e Ki-67. O tratamento associado de MNU e citrato de sódio levou ao desenvolvimento de carcinoma urotelial na bexiga e no trato urinário superior de todos os animais. Conclusões: O modelo proposto induziu lesão maligna de diversos graus em 100 % dos animais, sem comprometimento muscular. A imunolocalização da ?-DG foi muito diminuída em contraposição ao aumento da imunolocalização da MMP-9 nos diferentes órgãos estudados neste modelo e os aspectos morfológicos, imunohistoquímicos e proliferativos ao longo do urotélio (bexiga urinária, ureter e pelve renal) foram muito semelhantes, sendo que ocorreu aumento de apoptose e proliferação celular com expressivo predomínio deste último. Palavras chave: Distroglicana; Metaloproteinase de matriz; Carcinoma urotelial; Modelo animal experimental; Trato urinário superior Abstract: The dystroglican complex destruction is done by matrix metalloproteinase and plays a critical role in the urothelial carcinoma development and progression. The human urothelial carcinoma is frequent on the bladder and less common on the upper urinary tract. There is no reproducible and well described experimental upper urothelial carcinoma model on this issue. Purposes: Describe a novel experimental upper urothelial carcinoma animal model which results in vesicoureteral reflux in animals submitted to associate treatment with the carcinogen n-methyl-n-nitrosourea and sodium citrate intravesically. Characterize the ?-DG and the MMP-9 immunolocalization in the bladder as well as in the upper urinary tract, and describe morphological, immunohistochemistry and proliferative aspects utilizing a novel experimental model. Materials and Methods: Fifty female Fischer 344 rats were divided into two groups: the control group received a 0.30ml dose of 0.9% physiological saline intravesically every other week for a total of 4 doses; the MNU-citrate group received 0.15 ml of MNU and 0.15ml of sodium citrate intravesically every other week for a total of 4 doses. After 15 weeks of treatment, bladder, ureters and renal pelvis were collected for morphological and immunohistochemistry analyses. Results: The MNU-Citrate group showed reduced ?-DG and increased MMP-9 and Ki-67 immunoreactivities. Associated treatment with MNU and sodium citrate was able to lead to both urinary bladder and upper urinary tract tumors in all animals. Conclusions: The proposed model showed cancer in several grades in 100 % of animals, with no muscular invasion. The immunolocalization was decreased for ?-DG and increased for MMP-9 in the analyzed tissues and the morphological, immunohistochemical and proliferative aspects of the urothelium (bladder, ureter e renal pelvis) were similar. Apoptosis and proliferation were increased, being the last one more intense Mestrado Cirurgia Mestre em Cirurgia

Tese de doutoramento, Medicina (Bioquímica), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2009 Nível de preservação: critical, Criado em: 2009-09-21 17:09:31, Criado por: creator:MARTA, Alterado em: 2009-09-23 10:03:04, Modificado por: viewer:internal Made available in DSpace on 2010-07-22T08:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 19099_ulsd_re_390_Tese_Henrique_Sobral_do_Rosario.pdf: 40181406 bytes, checksum: b64ee6d6d4f862099a3152b29ea1b928 (MD5) 19099.xml: 9782 bytes, checksum: 7a9bc69ebaf686e415a8dd6b921280b0 (MD5) Previous issue date: 2009

Objetivo: analisar a expressão da metaloproteinase da matriz 9 (MMP-9) e do fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) em um grupo de pacientes com câncer primário de mama, e correlacioná-los entre si e com outros indicadores de prognóstico. Métodos: estudo transversal que analisou a expressão da MMP-9 e do VEGF em 88 casos consecutivos de tumores primários de mama. As amostras foram obtidas de pacientes portadoras de câncer primário de mama, submetidas a tratamento cirúrgico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2004. A técnica de imuno-histoquímica, usando o complexo avidina-biotina-peroxidase, foi aplicada para avaliar a imunoreação dos antígenos nos tumores. A expressão qualitativa das proteínas foi avaliada por meio da observação da intensidade da coloração acastanhada dos anticorpos no citoplasma das células malignas, considerando positiva quando pelo menos uma célula tumoral apresentava coloração nítida e inequívoca para cada um destes marcadores. Para a determinação do escore qualitativo (0=ausente, 1=fraca, 2=média e 3=forte), foi considerada a intensidade da coloração citoplasmática mais forte na lâmina, independente do número de células coradas. A expressão quantitativa foi determinada pela percentagem média de células coradas, observadas em pelo menos dez campos microscópicos. A quantificação final da expressão da MMP-9 e do VEGF foi feita por meio da aplicação do algoritmo HSCORE=Σ[(I+1)]xPC, no qual I e PC representam a intensidade da coloração e a percentagem das células coradas, respectivamente. Resultados: a MMP-9 e o VEGF apresentaram alto percentual de positividade nos tumores estudados. A expressão final mostrou escore mediano de 180 e 190, respectivamente. Quando se comparou a expressão da MMP-9 e do VEGF com as variáveis “idade”, “diâmetro tumoral”, “tipo histológico”, “grau histológico”, “linfonodo axilar” e “invasão vascular”, não foi encontrada nenhuma correlação significativa. Comparadas entre si, a MMP-9 e o VEGF apresentaram uma correlação significativa (rho=0,23; p=0,03). A positividade do linfonodo axilar apresentou uma correlação positiva com o maior diâmetro tumoral (2,7±1,1 cm; p

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-18Bitstream added on 2014-06-13T18:41:15Z : No. of bitstreams: 1 pereira_ac_dr_sjc.pdf: 1357256 bytes, checksum: 54a1d7a83941d8216e3415116e38ca6e (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Para que ocorra a invasão das células epiteliais neoplásicas é necessário o rompimento da membrana basal, sendo que este processo depende, em grande parte, da ação enzimática realizada pela metaloproteinase-9 (MMP-9). O objetivo deste trabalho foi testar a hipótese que variações no gene da MMP-9 influenciam as características clínicas e histopatológicas do carcinoma espinocelular. Noventa e quatro camundongos hairless foram submetidos à carcinogênese química (DMBA 0,5%) induzida em pele, durante 16 semanas. Na 17ª semana, os animais foram sacrificados e as lesões fotografadas e avaliadas clinicamente (com relação ao tamanho e à presença de ulceração). As lesões foram então biopsiadas e fixadas em formaldeído 10%, para posterior avaliação histopatológica (padrão de invasão, estágio de invasão e diferenciação celular). No momento da biópsia, foi retirado 0,5 cm da cauda de cada animal, para extração do DNA e avaliação da presença de polimorfismos de repetição CA no promotor do gene da MMP-9. Foi utilizado o teste qui-quadrado (p

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-15Bitstream added on 2014-06-13T19:03:54Z : No. of bitstreams: 1 elias_gp_dr_araca.pdf: 1560641 bytes, checksum: 3dad8c2298005cfeb8d0a078880f5e66 (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade das glândulas salivares, a mineralização dental e a participação da metaloproteinase de matriz (MMP-9) nesta mineralização em filhotes de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) tratadas ou não com atenolol. Ratas SHR e normotensas Wistar foram tratadas com atenolol (100mg/Kg/dia, via oral) durante os períodos de prenhez e lactação. Os grupos controle receberam o mesmo volume de água sem atenolol. O fluxo salivar, induzido por nitrato de pilocarpina, a concentração de proteínas (método de Lowry), a atividade da amilase (método cinético a 405 nm), o peso das glândulas salivares (parótidas, submandibulares e sublinguais), a microdureza do esmalte e da dentina de incisivos e molares e a expressão da MMP-9 (imonuperoxidase) no tecido dental foram comparados entre filhotes de ratas SHR e Wistar tratadas ou não com atenolol. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste estatístico mais adequado, paramétrico (ANOVA ou test t de Student’s) ou não paramétrico (Kruskal-Wallis), sendo consideradas significativas as diferenças quando p

Introdução: a incidência dos melanomas permanece em ascensão em diversos países. Os nevos melanocíticos podem ser seus precursores ou marcadores de risco. A radiação ultravioleta é o principal fator de risco ambiental para o seu desenvolvimento. Estudos com nevos irradiados mostram que a radiação ultravioleta B (UVB) pode causar alterações morfológicas e bioquímicas semelhantes às de um melanoma in situ. As metaloproteinases da matriz (MMP) são enzimas proteolíticas e, particularmente, as MMP-2 e –9 (gelatinases A e B) parecem estar associadas à invasão tumoral, à formação de metástases e de neoangiogênese em melanomas. O objetivo do presente estudo é avaliar os efeitos da UVB nas expressões imunoistoquímicas de MMP-2 e –9 nas diferentes linhagens celulares de nevos melanocíticos. Métodos: quarenta e dois nevos melanocíticos tiveram suas metades irradiadas com dose de 2 DEM (dose eritematosa mínima) de UVB e foram excisados uma semana após. As expressões imunoistoquímicas das MMP-2 e -9 foram comparadas, quanto à sua intensidade, por três avaliadores diferentes entre os lados irradiados e não irradiados em queratinócitos, melanócitos de epiderme e derme superior, células endoteliais e fibroblastos. Os dados foram analisados pelo teste t pareado para as diferenças de expressão e pelo ICC para avaliação da homogeneidade entre as respostas dos observadores. Resultados: com relação à expressão imunoistoquímica de MMP-2, todas as linhagens celulares mostraram aumento no lado irradiado, especialmente os melanócitos epidérmicos. Quanto à MMP-9, somente nos queratinócitos, não se observou aumento de expressão do lado irradiado, ficando essa evidente nas demais linhagens celulares avaliadas. Conclusões: A UVB na dose de 2 DEM aumenta a expressão imunoistoquímica das MMP-2 e –9 em quase todas as linhagens celulares dos nevos melanocíticos avaliados até uma semana após a irradiação, com exceção feita queratinócitos, com a MMP-9. Background: the incidence of melanoma continues to increase in several countries. Melanocytic nevi may represent precursors or risk indicators of cutaneous melanoma. Ultraviolet radiation is the main environmental risk factor in their development. Studies with irradiated nevi show that ultraviolet B (UVB) radiation can cause morphological and biological alterations similar to those of a melanoma in situ. Matrix metalloproteinases (MMP) are proteolytic enzymes, and MMP-2 and -9 (gelatinase A and B) in particular, appear to be involved with tumour invasion, the formation of metastases and neoangiogenesis in melanomas. This study aims to evaluate the effects of UVB radiation on the immunohistochemical expression of MMP–2 and –9 in different cell lines from melanocytic nevi. Methods: one half of each of the forty-two melanocytic nevi used in the study was irradiated with 2 MEDs (Minimal Erythema Dosis) of UVB radiation and excised one week later. Three different observers were given the task of comparing the intensity of the immunohistochemical expression of the MMP –2 and –9 on the irradiated and nonirradiated sides of keratinocytes, melanocytes from the epidermis and upper dermis, endothelial cells and fibroblasts. The collected data were analysed using the paired t test for differences in expression and ICC in order to assess the homogeneity of the evaluations made by the observers. Results: in relation to the expression of MMP–2, all the cell lines showed an increase on the irradiated sides, especially the epidermal melanocytes. Regarding MMP-9, while no significant increase in its expression in keratinocytes was noted on the irradiated side, significant increases were observed in the remaining lines. Conclusions: UVB radiation at 2 MEDs increases the immunohistochemical expression of MMP –2 and –9 in almost all evaluated cell lines up to one week after irradiation, with the exception of MMP-9 in keratinocytes.

Resumo não disponível.