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Supplemental material, Supplemental_material for A new molecular method for the rapid subtyping of bovine herpesvirus 1 field isolates by Silvina S. Maidana, Samuel Miño, Romina M. Apostolo, Gabriel A. De Stefano and Sonia A. Romera in Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Cada vez con mayor énfasis, la comunidad científica promueve la conducción responsable ybasada en principios éticos de los procedimientos experimentales que utilizan recursos biológicos.En el mismo sentido, se acentúa la adopción de métodos alternativos. Fil: Romera, Sonia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; Argentina Fil: Diaz, Silvia. No especifíca; Fil: Alfaro, Maria de la Paz. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Vega, Celina Guadalupe. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Mansilla, Florencia Celeste. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Davies, Patricio. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina Fil: Maidana, Silvina Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas. - Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Virología E Innovaciones Tecnológicas; Argentina

BoHV-1 genera en el ganado bovino una amplia gama de manifestaciones clínicas, tales como la rinotraqueítis infecciosa bovina, abortos y vulvovaginitis pustular infecciosa, que dependen de la virulencia del virus y del estado inmunitario del hospedador. En este trabajo se caracterizaron en Argentina 44 aislamientos de BoHV-1 por el análisis de restricción con endonucleasas (REA). El ADN viral fue sometido al clivaje de la enzima HindIII, la cual permite la diferenciación entre los subtipos 1.1, 1.2a y 1.2b. De acuerdo al perfil REA de los aislamientos, 35 cepas (80%) mostraron un patrón similar a la cepa K22 (prototipo BoHV- 1.2b), 7 cepas (16%) exhibieron un patrón similar a la cepa LA (prototipo BoHV-1.1) y sólo 2 cepas (4%) revelaron un patrón similar a la cepa ST (prototipo BoHV-1.2a). Los resultados demuestran una mayor prevalencia del subtipo 1.2b entre los aislamientos BoHV-1 argentinos. Además, se reporta por primera vez en Argentina, la circulación del subtipo BoHV-1.2a. BoHV-1 in cattle results in a wide range of clinical manifestations, such as infectious bovine rhinotracheitis, abortion and infectious pustular vulvovaginitis, depending on the virulence of the virus and the immune status of the host. Forty-four Argentinean BoHV1 isolates were characterized by restriction endonuclease analysis (REA). Viral DNA was cleaved with HindIII which allows the differentiation among subtypes 1.1, 1.2a and 1.2b. According to the REA, 35 field strains (80%) showed a pattern similar to K22 strain (BoHV-1.2b prototype), 7 field strains (16%) showed a clear pattern similar to LA strain (BoHV-1.1 prototype) and only 2 filed strains (4%) showed a clear pattern similar to ST strain (BoHV-1.2a prototype). The results demonstrated the presence of a marked prevalence of subtype 1.2b among Argentinean BoHV-1 isolates. We also report for the first time in Argentina the circulation of the subtype BoHV-1.2a. BoHV-1 in cattle results in a wide range of clinical manifestations, such as infectious bovine rhinotracheitis, abortion and infectious pustular vulvovaginitis, depending on the virulence of the virus and the immune status of the host. Forty-four Argentinean BoHV1 isolates were characterized by restriction endonuclease analysis (REA). Viral DNA was cleaved with HindIII which allows the differentiation among subtypes 1.1, 1.2a and 1.2b. According to the REA, 35 field strains (80%) showed a pattern similar to K22 strain (BoHV-1.2b prototype), 7 field strains (16%) showed a clear pattern similar to LA strain (BoHV-1.1 prototype) and only 2 filed strains (4%) showed a clear pattern similar to ST strain (BoHV-1.2a prototype). The results demonstrated the presence of a marked prevalence of subtype 1.2b among Argentinean BoHV-1 isolates. We also report for the first time in Argentina the circulation of the subtype BoHV-1.2a. Instituto de Virología Fil: Maidana, Silvina Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Cátedra de Inmunogenética; Argentina Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina Fil: De Stefano, Gabriel Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina Fil: Combessies, Gustavo. Laboratorio Azul; Argentina Fil: Romera, Sonia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales. Cátedra de Inmunogenética; Argentina. Universidad del Salvador. Cátedra de Inmunología; Argentina

Se describe un brote IBR con aislamiento de Herpes Virus Bovino tipo 1 (BoHV1) en la Patagonia argentina. Durante los meses de junio-julio de 2013 tuvo lugar un brote de rinitis y conjutivitis en un lote de terneros confinados en una recría a corral en el Valle 16 de Octubre, al noroeste de la provincia de Chubut. Debido a que los síntomas eran compatibles con la infeccion por BoVH1, se procedió a tomar muestras de secreciones oculares y nasales de 12 animales y muestras de suero de 7 animales. A partir de las muestras de secreciones se lograron aislar 10 cepas de BoHV1. Si bien el hallazgo no permite concluir sobre el rol del BoHV1 en el brote, constituye el primer reporte de aislamiento de BoVH1 y confirma los trabajos previos sobre evidencia serológica de su circulación en la Patagonia argentina. An outbreak of IBR with the isolation of Bovine Herpes Virus type 1 (BoHV1) in Argentinean Patagonia is described. During June-July 2013, an outbreak of rhinitis and conjunctivitis occurred in a group of calves confined to a farm in 16 de Octubre Valley, northwest of Chubut. Because the symptoms were compatible with the infection with BoHV1, samples of ocular and nasal secretions from 12 animals and serum samples from 7 animals were collected. Ten strains of BoHV1 from the secretion samples were isolated. Although the finding does not allow to conclude about the role of BoHV1 in the outbreak, it constitutes the first report of isolation of BoHV1 and confirms previous studies on serological evidence of its circulation in Argentinean Patagonia. Estación Experimental Agropecuaria Bariloche Fil: Apostolo, Romina Maria. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Esquel. Grupo de Producción Animal; Argentina Fil: Maidana, Silvina Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituo de Investigación Virología; Argentina Fil: Martinez Stanziola, Juan Pablo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Esquel. Agencia de Extensión Rural Trevelin; Argentina Fil: Romera, Sonia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituo de Investigación Virología; Argentina Fil: Robles, Carlos Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Bariloche. Area de Produccion Animal. Grupo de Sanidad Animal; Argentina

Una encuesta transversal ad hoc se llevó a cabo entre abril y noviembre del 2011 en 37 unidades productoras familiares (UPF) del departamento de Rivadavia, provincia de Salta, con el objetivo de describir las prácticas productivas y la presencia de enfermedades en sus majadas caprinas en el Chaco Salteño. Se recabaron datos del manejo general y sanitario en particular. Se procesaron sueros para el diagnóstico de brucelosis por la prueba tamiz BPA y confirmadas por fijación de complemento, para paratuberculosis (PTBC), artritis-encefalitis (CAEV), chlamydiosis, herpesvirus caprino tipo 1 (CaHV-1), fiebre Q y toxoplasmosis se utilizó ELISA indirecto y para leptospirosis la microaglutinación. Se determinaron los valores de Cu2+, Mg2+ y Ca2+ sérico por espectofotómetría de absorción atómica. En heces, se realizó el recuento de huevos de helmintos por gramo (hpg) y la diferenciación de géneros por coprocultivo. Las UPF tuvieron en promedio 165.0± 102.1 caprinos (sin contar cabritos), siendo el 87% cabras madres. Las instalaciones de las UPF fueron muy precarias, en su mayoría solo constaban de corrales de troncos y enramadas con limitada disponibilidad de agua. La cría fue extensiva con encierre nocturno y la alimentación de la majada es en base al ramoneo de hojas y frutos del monte, con escasa oferta de gramíneas. El servicio fue continuo y la parición se concentraba en dos períodos, en abril-junio donde paría casi la totalidad de la majada y una segunda parición que se dividía entre agosto-septiembre (60%) y octubre-noviembre (30%). El destino de la producción caprina de las UPF fue la venta de cabritos y el consumo interno de capones y cabras adultas, aunque un 43.2% ordeñaba en promedio 25.6±18.7 cabras al vender los cabritos. El 61.1% de los productores desparasitaba en forma rutinaria toda la majada en otoño o invierno, generalmente con ivermectina y un 19,6% inyectaba mineralizantes-vitamínicos a toda la majada. El promedio de la tasa de mortalidad anual por majada fue del16.2±12.4%. En el 71.9% de las UPF se registró la ocurrencia de abortos, mayormente con retención de placenta (70%). El promedio intramajada de abortos comunicados es del 15.2±14.8%. Se detectó ectima contagioso en un 71.4% de las UPF y en un 53.1% cuadros de muertes agudas o subagudas probablemente por infecciones clostridiales. En el 96.9% de las UPF se registraron problemas de mastitis, fundamentalmente durante los períodos de lluvias. La seroprevalencia positiva a brucelosis, leptospirosis, paratuberculosis, toxoplasmosis, CpHV-1, CAEV y fiebre Q en las UPF fue respectivamente de 27%, 70%, 60%, 100%, 100%, 10% y 0%. En cuanto a ectoparásitos las UPF destacaron la importancia de las miasis (Cochliomyia hominivorax: 87,5%), de los piojos, (Linognathus spp.: 90.3%), del pique (Tunga penetrans: 77.4%). El promedio de los hpg fue de 714, 536 y 340 para los meses de abril, julio y octubre con Haemonchus y Trichostrongylus como nematodes predominantes. En el 61,3% de las UPF se describió la presencia a la faena de quistes hidatídicos. En un 54.3% de las majadas se describieron signos de ataxia enzóotica en cabritos; El promedio por UPF de cobre, magnesio y calcio séricos fueron respectivamente de 0.49±0.12 ppm, 3.0±0.37mg/d y 8.28±0.21 mg/dl. Se describieron casos de timpanismo y muertes (18.8%) atribuidas por los propietarios a la ingesta de sacha sandia y frutos del chañar. Un 56.3% de los propietarios declararon tener problemas de pérdidas de animales en el monte a causa del ataque en mayor medida de pumas. Estos primeros resultados en cuanto a prácticas productivas, mortandad, pérdidas y presencia de enfermedades y zoonosis, muestran la importancia de llevar a cabo estudios más específicos respecto de la salud de las majadas para incrementar la competitividad en la producción, la salud de los propietarios y por ende el bienestar general de las familias productoras. A cross-sectional survey was performed between April and November 2011 in 37 family farming units (FFU) from Rivadavia department, Salta province, with the aim of describing production practices and disease occurrence in goat flocks in the Chaco region of Salta. Farmers were subjected to an ad hoc survey to gather data on general management and specific health issues. Sera were processed to diagnose brucellosis using the BPA screening test and positive sera were confirmed by complement fixation test. Paratuberculosis (PTBC), caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV), Q fever and toxoplasmosis were tested by indirect ELISA, and leptospirosis by microagglutination test. Serum Cu2+, Mg2+ and Ca2+ were determined by atomic absorption spectrophotometer. Fecal samples were taken for counting helminth eggs (epg) and identifying genera by coproculture. FFUs had on average 165.0± 102.1 goats (not including kids), with 87% being does. FFU facilities were very poor and water availability was limited; facilities were mostly composed of corrals enclosed by logs and branches. Animals are extensively bred, with nocturnal enclosure, and flock feeding is based on browsing of woodland leaves and fruits, with low offer of graminoids. Breeding is continuous and kidding is concentrated in two periods: April-June, when almost all the flock kids, and a second period that is subdivided into August-September (60% of kid) and October-November (30% of kid). Goat production of FFUs is devoted to the sale of kids and internal consumption of wethers and adult goats; however, 43.2% of FFUs milks on average 25.6±18.7 goats when kids are sold and does are weaned. Farmers (61.1%) routinely treat all the flock against parasites in autumn and winter, generally with ivermectin, and 19.6% provide all the flock with mineral-vitamin mixtures. Mean annual mortality rate per flock was 16.2±12.4%. Abortions were recorded in 71.9% of the FFUs, mostly with retained placenta (70%). Mean within-flock reported abortions were 15.2±14.8%. Contagious echtyma (orf) was detected in 71.4% of the FFUs and acute or subacute deaths probably due to clostridial infections were recorded in 53.1% of the FFUs. Mastitis-associated problems were recorded in 96.9% of FFUs, mainly during the rainy periods. Positive seroprevalence of brucellosis, leptospirosis, paratuberculosis, toxoplasmosis, CpHV-1, CAEV and Q fever in FFUs was 27%, 70%, 60%, 100%, 100%, 10% and 0%, respectively. The following ectoparasites were indicated as important by FFU farmers: myiasis by Cochliomyia hominivorax (87.5%), lice Linognathus spp. (90.3%) and fleas Tunga penetrans (77.4%). Mean epg was 714, 536 and 340 for April, July and October, respectively, with Haemonchus and Trichostrongylus being the prevailing nematodes. The presence of hydatid cysts in slaughtered animals was indicated by 61.3% of FFUs. Signs of enzootic ataxia in kids were observed in 54.3% of the flocks. Mean serum Cu2+, Mg2+ and Ca2+ per FFU was 0.49±0.12 ppm, 3.0±0.37mg/d and 8.28±0.21 mg/dl respectively. Cases of bloat and death (18.8%) were reported due to distended abdomen and colic which farmers attributed to the ingestion of sacha sandia (Capparis salicifolia) and fruits of chañar Geoffroea decorticans. Some farmers (56.3%) indicated loss of animals in the woodland, mostly due to the attack by pumas. These first results regarding production practices, mortality, production losses and occurrence of diseases and zoonosis show the importance of conducting specific studies about the health of flocks in order to increase competitiveness in goat production, farmers’ health and, therefore, general welfare of smallholder families. Fil: Suarez, Víctor Humberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Rosetto, C. B.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina Fil: Gaido, A. B.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Salatin, A. O.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Bertoni, E. A.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Dodero, M.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Viñabal, A. E.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Instituto de Investigación Animal del Chaco Semiárido; Argentina Fil: Pinto, G.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina Fil: Brihuega, Bibiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina Fil: Romera, Sonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina Fil: Maidana, Silvina Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina

El creciente interés en la producción de cabras en los últimos años demanda información sobre aspectos relacionados a la propagación, diagnóstico y control de la enfermedad. El herpesvirus caprino 1 (CpHV 1) se asocia con una variedad de afecciones de cabras, como infecciones gastrointestinales generalizadas en los animales jóvenes o subclínica en infecciones respiratorias y genitales en adultos. La infección con CpHV 1 es responsable de graves pérdidas económicas debidas a abortos y trastornos reproductivos. El diagnóstico serológico de la infección por CpHV1 se puede realizar utilizando el ensayo de seroneutralización y/o el ensayo ELISA. En este trabajo se evaluó la seroprevalencia de herpesvirus caprino en cabras de la provincia de San Luis. The emerging interest in goat production in recent years demand information on aspects of propagation, diagnosis and control of disease. The caprine herpesvirus-1 (CpHV-1) is associated with a variety of afections of goats, i.e. generalized gastroenteric infections in young animals or subclinical genital and respiratory infections in adults. CpHV-1 infection is responsible for severe economic losses due to abortions, stillbirths and reproductive. Serological diagnosis of CpHV1 infection can be accomplished using serum neutralization (SN) test and ELISA assay. In this work we studied the seroprevalence to caprine herpesvirus in goats in the province of San Luis. Fil: Maidana, Silvina Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentina Fil: Echague, Hernán Roberto. Universidad del Salvador; Argentina Fil: Ferreccio, Carola María. Universidad del Salvador; Argentina Fil: Garcìa, Sebastiàn. Universidad del Salvador; Argentina Fil: Rey, Juan Pablo. Miniterio del Campo; Argentina Fil: Spina, María Julieta. Laboratorio del Campo; Argentina Fil: Delgado, María Gabriela. Laboratorio del Campo; Argentina Fil: Odeon, Maria Mercedes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentina Fil: Rodríguez, Alejandro. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina Fil: Romera, Sonia Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina. Universidad de Morón. Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales; Argentina. Universidad del Salvador; Argentina

Establishment of latent infection within specific tissues in the host is a common biological feature of the herpesviruses. In the case of bovine herpesvirus 2 (BoHV-2), latency is established in neuronal tissues, while bovine herpesvirus 4 (BoHV-4) and ovine herpesvirus 2 (OvHV-2) latent virus targets on cells of the monocytic lineage. This study was conducted in quest of BoHV-2, BoHV-4 and OvHV-2 DNA in two hundred trigeminal ganglia (TG) specimens, derived from one hundred clinically healthy cattle, majority of them naturally infected with bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) and bovine herpesvirus 5 (BoHV-5). Total DNA extracted from ganglia was analyzed by polymerase chain reaction (PCR) designed to amplify part of the genes coding for BoHV-2, and BoHV-4 glycoprotein B and, for OvHV-2, the gene coding for phosphoribosylformylglycinamidine synthase-like protein. BoHV-2 DNA was detected in TG samples of two (2%) and BoHV-4 DNA in nine (9%) of the animals, whereas OvHV-2 DNA could not be detected in any of the TG DNA. The two animals in which BoHV-2 DNA was identified were also co-infected with BoHV-1 and BoHV-5. Within the nine animals in which BoHV-4 DNA was detected, six were also co-infected with BoHV-1 and BoHV-5. This report provides for the first time evidence that viral DNA from BoHV-2 and BoHV-4 can be occasionally detected in TG of naturally infected cattle. Likewise, in this report we provided for the first time evidence that the co-infection of cattle with three distinct bovine herpesviruses might be a naturally occurring phenomenon. Fil: Campos, F. S.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Franco, A. C.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Oliveira, M. T.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Firpo, R.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Strelczuk, G.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Fontoura, F. E.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Kulmann, M. I. R.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil Fil: Maidana, Silvina Soledad. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina Fil: Romera, Sonia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Spilki, F. R.. Universidade Feevale; Brasil Fil: Silva, A. D.. Ministerio da Agricultura Pecuaria e Abastecimento de Brasil. Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria; Brasil Fil: Hübner, S. O.. Universidade Federal de Pelotas; Brasil Fil: Roehe, P. M.. Universidade Federal do Rio Grande do Sul; Brasil. Instituto de Pesquisa Veterinária Desiderio Finamor; Brasil