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O presente estudo teve como objetivo verificar a presença dos genes mecA, mecA LGA251, blaZ em isolados de S. aureus resistente a antibióticos beta-lactâmicos, provenientes de amostras de vacas diagnosticadas com mastite subclínica de rebanhos do norte de Minas Gerais. Isolados previamente identificados através da detecção do gene femA e MALDI-TOF MS e resistentes a antibióticos do grupo beta-lactâmicos foram utilizados. Os isolados foram submetidos à extração de DNA e para o rastreamento dos genes de resistência utilizou se a técnica de PCR. Embora fenotipicamente resistente a oxacilina e cefoxitina nenhuma das linhagens apresentou resultado positivo para os genes mecA e mecALGA251 nos ensaios efetuados, a ausência destes não descarta a possibilidade da presença de outros genes de resistências nas propriedades rurais em estudo. Porém, a presença do gene blaZ foi verificada em 4 (12,90%) dos isolados em estudo.Os resultados destacam a necessidade do monitoramento e adoção de medidas de controle que evitem à disseminação desses genes que representam grande risco a saúde pública. The present study aimed to verify the presence of the mecA and mecA LGA251 genes and blaZ in isolates of S. aureus previously identified and resistant to beta-lactams antibiotics, from samples of cows diagnosed with subcli-nical mastitis on the surface of bovine ceilings herds in north of Minas Gerais. Isolates previously identified through the detection of the femA gene and MALDI-TOF MS and resistant to antibiotics of the beta-lactams group were used. The isolates were subjected to DNA extraction and the screening of resistance genes was performed using the PCR technique. Although phenotypically resistant to oxacillin and cefoxitin, none of the strains showed positive results for the mecA and mecALGA251 genes in the tests performed, their absence does not rule out the possibility of the presence of other resistance genes in the rural properties under study. However, the presence of the blaZ gene was verified in 4 (12.90%) of the isolates under study. The results highlight the need for monitoring and adoption of control measures that prevent the spread of these genes that represent a great risk to public health.

Orientador: Jose Satiro de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola Resumo: Existe, no Brasil, uma carência de informações a respeito da flora lática do leite cru, tal como chega na plataforma de recepção da indústria. Assim, com o objetivo de caracterizar essa flora, foram isoladas, a partir de 50 amostras de leite cru, 300 culturas de bactérias láticas. Para a realização dos isolamentos foi utilizado o meio de cultura agar APT-S, desenvolvido, neste trabalho, a partir do agar APT, pela incorporação de 0,1% de sorbato de potássio, 0,5% de agar e concomitante redução do pH para 6,0, pela adição de ácido lático. Comprovou-se que este meio teve um bom comportamento para contagem e isolamento dos microrganismos do grupo lático, apresentando uma eficiência seletiva nas condições utilizadas. Nenhuma inibição sobre culturas puras de bactérias láticas foi detectada. Dentre os isolados, S. Lactis apresentou uma expressiva predominância, correspondendo a 79,20% do total. As demais espécies isoladas compreenderam: S. lactis subsp diacetylactis, (6,55%), S. lactis subsp cremoris (6,55%), L. casei (4,40%), L. lactis, (2,20%) e Leuconostoc cremoris (1,10%). De todas as espécies isoladas, S. lactis foi encontrado em cem por cento das amostras, enquanto que as demais tiveram um índice de ocorrência inferior a 15%. Tais resultados, possivelmente estão relacionados com as condições ecológicas e de manuseio na fase de produção do leite no país. Na caracterização das culturas isoladas foram determinados: comportamento frente a diferentes temperaturas, atividades acidificantes, tempo de geração e atividades proteolíticas. Foi constatado que varias culturas mostraram capacidade de crescer igualmente nas temperaturas de 21°, 32° e 42°C. Entre os isolados, vários apresentaram atividade acidificante superior aquela normalmente descrita para os microrganismos mesófilos. A metodologia empregada no presente trabalho mostrou -se adequada para o isolamento e seleção do microrganismos láticos com potencialidade de serem empregados como fermentos industriais. Abstract: There is very little information about the lactic flora of the fresh raw milk by the time it arrives at the reception platform in the dairy industry in Brazil. For this reason, the present research work was undertaken to study 300 cultures of lactic acid bacteria isolated from 50 raw milk samples. The isolation was performed on APT-S agar medium which was developed during this research by the adaptation of the APT agar through the incorporation of 0.1% of potassium sorbate, 0,5% of bacto agar and pH adjustment to 6.0 with lactic acid. The resulting culture medium proved to be quite suitable for the enumeration and isolation of typical lactic microorganisms. There was a good selectivity under the conditions adopted and no inhibition was detected when tested with known pure cultures of lactic acid bacteria. Among the isolates, S. lactis showes a predominance of 79,20% of the total. The other species were: S. lactis subsp diacetylactis, (6,55%), S. lactis subsp cremoris (6,55%), L. casei (4,40%), L. lactis, (2,20%) e Leuconostoc cremoris (1,10%), S. lactis was also present in one hundred percent of the samples, while the others had occurence values below 15%. These results indicate a possible influence of the production conditions mainly in aspects related to climate and way of handling the raw milk in this country. The characterization of the isolated cultures included different incubation temperatures, acid production activity, gene ration time and proteolytic activity. Several isolates presented regular growth in all three temperatures tested: 21, 32 and 42°C. Also, were detected cultures with higher acid production activity than the results indicated in the literature for similar microorganisms. The isolation sequence utilized in the present research work indicated an adequate procedure for isolation and selection of lactic acid bacteria with good potencial for being used as starter cultures in the dairy industry. Doutorado Doutor em Ciência de Alimentos

CBP&D/Café - Consórcio Brasileiro de Pesquisa e Desenvolvimento do Café Tuberculose (TB) é uma doença causada por diferentes agentes do complexo Mycobaceterium tuberculosis, com uma epidemiologia complexa onde há envolvimento de diferentes hospedeiros, presença de co-morbidades e outros fatores de risco. Uma abordagem em Saúde Única pode auxiliar o processo de controle da TB em humanos, especialmente regiões de produtoras de leite bovino, haja vista que a ingestão de leite cru e derivados é a principal fonte de infecção na transmissão bovino-humano. Objetivou-se, com o presente estudo analisar fatores de risco para TB humana e suas relações com os casos de tuberculose bovina em região de maior produção leiteria do Brasil. A partir dos dados de notificação de TB humana no Sistema Informação de Agravos de Notificação, no período de 2011 a 2015, foram selecionados 1.483 casos de tuberculose em humanos nas áreas analisadas, sendo 314 TB extrapulmonar e 1189 TB pulmonar. Por meio da análise de regressão logística multivariada hierarquizada foi possível evidenciar como fatores de risco a baixa escolaridade para forma pulmonar e ser portador do HIV para forma extrapulmonar. As informações sobre as notificações de bovinos reagentes positivos as provas intradérmicas oficiais foram obtidos no Instituto Mineiro de Agropecuária, responsável por receber os relatórios de notificação, para o período de 2011 a 2017. Para análise de condenação de carcaças por suspeita de tuberculose foram avaliados o abate diário de três frigoríficos na área de estudo, onde foi analisado idade do animal e destinação da carcaça após a condenação. Através de regressão linear observou-se tendência decrescente nas notificações de reagentes positivos e inconclusivo. Já os dados de condenação de carcaça demonstraram-se estacionários, com maior número de fêmeas condenadas, e lesões características de processo de generalização da doença. A discordância entre os dados de notificação e abate, e ausência de animais abatidos acompanhados de atestado positivo declarando o status sanitário do animal, expõe ao risco todas as pessoas envolvidas no manejo, transporte e no abate desses bovinos. Ainda que a tuberculose esteja presente com prevalência moderada nas propriedades da região estudada, o diagnóstico diferencial para M. bovis em casos de tuberculose humana não é realizado resultando em subnotificações ou negligência com TB por M. bovis. A obrigatoriedade de comunicação entre os serviços de defesa animal e saúde pública não vem sendo cumprida, os presentes resultados trazem alerta para falta de conectividade entre as áreas de vigilância da TB o que exige do profissional de Medicina Veterinária uma abordagem em Saúde Única com educação em saúde, acompanhamento do abate sanitário ou eutanásia do bovino reagente positivo, orientação dos serviços de saúde humana para investigação de casos suspeitos, proteção à saúde dos ecossistemas. Tuberculosis is a disease caused by different agents of the complex Mycobaceterium tuberculosis, with a complex epidemiology involving different hosts, presence of comorbidities and other risk factors. One Health approach could aid the TB control process in humans, especially dairy cattle producer regions, because raw milk and dairy products is the main source of infection in bovine-human transmission. The objective of this study was to analyze risk factors for human TB and its relationship with cases of bovine tuberculosis in a region with higher dairy production in Brazil. Cross-sectional study involving all cases of TB reported to the Brazilian Notifiable Diseases Surveillance System (Sistema de Informações de Agravo de Notificação - SINAN) in Brazil between 2011 and 2015. Sociodemographic and clinical characteristics of patients with exclusively PTB and exclusively EPTB were compared. Following analysis with Pearson’s chi-square test, variables with p < 0.05 were included in a hierarchical regression model. Variables with p < 0.05 in the corresponding level were kept in the model. It was selected 1,483 cases of tuberculosis in humans were selected in the areas analyzed, being 314 extrapulmonary TB and 1189 TB of the pulmonary. By means of hierarchical regression analysis, it is possible to show that the low level of schooling for the pulmonary form is a risk factor for extrapulmonary HIV infection was prominent. The information about positive bovine the official intradermal tests were obtained from the Instituo Mineiro de Agropecuária, responsible for receiving the notification reports, between 2011 and 2017. For the analysis of carcass condemnation for suspicious lesions of bovine tuberculosis were the daily slaughter of three slaughterhouses was analyzed in the study area, where the age of the animal was analyzed, carcass destination after condemnation. Through linear regression there was a decreasing tendency in the reports of positive and inconclusive reagents. On the other hand, the carcass condemnation data were stationary, with bigger condemned females, and lesions characteristic of the disease generalization process. Disagreement between notification and slaughtering data, and the absence of slaughtered animals accompanied by a positive attestation stating the animal's health status, exposes all persons involved in the handling, transportation and slaughter of these animals to risk. Although tuberculosis is present with moderate prevalence in the properties of the studied region, the differential diagnosis for M. bovis in cases of human tuberculosis is not performed, resulting in underreporting or negligence with TB by M. bovis. The obligation of communication between animal and public health services has not been fulfilled, the present results bring to the attention the lack of connectivity between the TB surveillance areas, which requires the Veterinary Medicine professional to have One Health approach with education in health, monitoring of slaughter or euthanasia of positive reactive bovine, guidance of human health services for investigation of suspected cases, protection of ecosystem health. Tese (Doutorado)

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico A formação de biofilmes nas indústrias de alimentos é caracterizada, inicialmente, pelo acúmulo de materiais orgânicos em superfícies, sobre as quais comunidades bacterianas podem se formar. Estas estruturas tornam as células mais resistentes e de difícil remoção durante o processo de higienização e representam fonte potencial de contaminação dos alimentos. Objetivou-se neste estudo, avaliar a formação de biofilmes multiespécie em cupons de aço inoxidável pela microbiota contaminante do leite cru e analisar sua diversidade. Foram utilizadas duas amostras de leite, um recém-ordenhado e outro granelizado, com contaminação média de 10 4 UFC/mL e 10 6 UFC/mL de aeróbios mesófilos, respectivamente. Cupons de aço inoxidável foram mantidos imersos no leite a 7 + 2 oC e, a cada dois dias, o leite cru foi trocado por outro de mesma procedência. A formação do biofilme foi acompanhada por contagem padrão em placas das células sésseis e por microscopia de epifluorescência ao longo de 10 dias. No décimo dia, os biofilmes foram observados também por microscopia confocal a laser para determinar a estrutura em seu estado hidratado e visualizar a viabilidade celular. Para analisar a diversidade do biofilme multiespécie, foi utilizada a Eletroforese em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE). As bandas de DNA foram obtidas após amplificação do material genético extraído das células do biofilme utilizando oligonucleotídeos universais para o domínio Bacteria. O número de células sésseis no biofilme formado a partir do leite recém-ordenhado alcançou contagem de 10 5 UFC/cm 2 de psicrotróficos no décimo dia, enquanto o biofilme formado na presença do leite granelizado atingiu 10 6 UFC/cm 2 . A partir do 4o dia de incubação foi observado, pela microscopia de epifluorescência, nos cupons imersos no leite granelizado, aglomerados celulares que possivelmente se tratavam de biofilme, enquanto nos cupons imersos no leite recém- ordenhado essas estruturas foram observadas a partir do 8o dia. Nos cupons que ficaram imersos no leite recém-ordenhado não se visualizou biofilme pela microscopia confocal a laser, enquanto que cupons imersos no leite granelizado foram observados biofilmes com espessuras em torno de 18 μm, com células viáveis desde a base até o ápice. Houve similaridade de 85 % entre a comunidade do biofilme formado na presença das amostras de leite utilizadas. Entretanto, no biofilme formado pela microbiota contaminante do leite recém-ordenhado, a diminuição na diversidade foi observada ao longo dos dias 6, 8 e 10 de incubação, enquanto no biofilme formado pela microbiota contaminante do leite granelizado a diversidade aumentou ao longo do tempo de incubação. Pode-se concluir que a microbiota contaminante do leite cru refrigerado pode se aderir nas superfícies de aço inoxidável e formar biofilmes multiespécies e o grau de contaminação influencia no tempo de formação dessas estruturas. The formation of biofilms in the food industry is characterized initially by the accumulation of organic materials on surfaces on which bacterial communities can form. These structures make the cells more resistant and difficult to remove during the hygiene process and represent a potential source of food contamination. The objective of this study was to evaluate the formation of multispecies biofilms in stainless steel coupons by the contaminating microbiota of raw milk and to analyze its diversity. It used two milk samples, one freshly milked and the other bulk tanks, with a mean contamination of 10 4 CFU/mL and 10 6 CFU/mL of mesophilic aerobes, respectively. Stainless steel coupons were kept immersed in the milk at 7 ± 2 oC and, every two days, raw milk was exchanged for another of the same origin. Biofilm formation was monitored by standard counting on sessile cells and by epifluorescence microscopy over 10 days. On the tenth day, biofilms were also observed by laser confocal microscopy to determine the structure in its hydrated state and visualize cell viability. In order to analyze the diversity of the multispecies biofilm, Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) was used. The DNA bands were obtained after amplification of the genetic material, extracted from the biofilm cells and using universal oligonucleotides for the Bacteria domain. The number of sessile cells in the biofilm formed from the freshly milked milk reached a count of 10 5 CFU/cm 2 of psychrotrophs on the tenth day, while the biofilm formed in the presence of the bulk tanks milk reached 10 6 CFU/cm 2 . From the 4 th day of incubation was observed by epifluorescence microscopy, in the coupons immersed in the bulk tanks milk, cell agglomerates that were possibly biofilms, while in the coupons immersed in the freshly milked milk these structures were observed from the 8 th day. In the coupons that were immersed in the freshly milked milk, no biofilm was visualized by laser confocal microscopy, while coupons immersed in the bulk tanks milk were observed biofilms with thicknesses around 18 μm, with viable cells from the base to the apex. There was a similarity de 85% between the community of the biofilm formed in the presence of the milk samples used. However, in the biofilm formed by the contaminating microbiota of freshly milked milk, a decrease in diversity was observed throughout days 6, 8 and 10 of incubation, while in the biofilm formed by the contaminating microbiota of bulk tanks milk the diversity increased over the time of incubation. It can be concluded that the contaminating microbiota of the refrigerated raw milk can adhere to the stainless steel surfaces and form multispecies biofilms and the degree of contamination influences the formation time of these structures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:38:47Z : No. of bitstreams: 1 franco_mmj_me_botfmvz.pdf: 346897 bytes, checksum: a14c6f0c3027c35c0fd164665eee96a8 (MD5) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) O leite constitui importante fonte de nutrientes para a alimentação humana. No entanto, também pode servir como veículo para disseminação de microorganismos patogênicos. A tuberculose e as micobacterioses estão entre as infecções mais debilitantes que acometem humanos e os animais, com evolução crônica e progressiva, tendo recrudescido sua incidência em vários países. Espécies de Mycobacterium sp. tem alta capacidade de sobrevivência em leite e seus subprodutos. O presente estudo investigou a ocorrência de micobactérias em amostras de leite bovino cru, de rebanhos do sudeste do estado de São Paulo, utilizando cultivo microbiológico nos meios de Lowenstein-Jensen e Stonebrink, seguido de tipificação molecular pelo teste de reação em cadeia pela polimerase com o uso de enzimas de restrição. Foram processadas 300 amostras, 100 de tanques de expansão individuais, 100 de tanques coletivos e 100 obtidas no comércio informal da região amostrada. Obteve-se isolamento de 15 diferentes espécies de Mycobacterium, a saber: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae e M. vaccae. Os isolamentos ocorreram nas seguintes proporções: 9% das amostras de tanques individuais, 7% das amostras de tanques coletivos e 8% das amostras de leite informal. Não houve associação estatística entre a ocorrência de micobactérias com os fatores epidemiológicos considerados nas propriedades amostradas. Considerando o impacto das micobacterioses na saúde pública e animal, particularmente a tuberculose bovina, a prevenção da exposição da população ao risco destas infecções torna-se fundamental. A investigação da presença de micobactérias em leite pode contribuir na melhoria da segurança alimentar inerente ao produto Milk represents an important source of nutrients for humans. However, it can also serve as a dissemination vehicle for pathogenic microorganisms. Tuberculosis and micobacteriosis are among the most debilitating diseases that affect humans and animals, being chronic and progressive, re-emerging its incidence in many countries. Mycobacterium sp. has high survivability in milk and its byproducts. The main objective of the study was to investigate the occurrence of mycobacteria in bovine raw milk samples from farms along southeast region of Sao Paulo state, using microbiological culture on Lowenstein-Jensen and Stonebrink media followed by molecular typification with polymerase chain reaction tests using restriction enzimes. Three hundred milk samples were processed, 100 from individual bulk tanks, 100 from collective bulk tanks and 100 obtained in informal trading of sampled region. Fifteen different isolates of Mycobacterium species were obtained: M. bovis, M. gordonae, M. fortuitum, M. intracellulare, M. flavescens, M. duvalli, M. haemophilum, M. immunogenum, M. lentiflavum, M. mucogenicum, M. novocastrense, M. parafortuitum, M. smegmatis, M. terrae and M. vaccae. Isolations occurred on following proportions: 9% of the individual bulk tanks samples, 7% of the collective bulk tanks samples and 8% of the informal trade milk samples. There was no statistical association between the occurrence of mycobacteria on samples with the epidemiological factors considered on sampled farms. Considering the impact of mycobacteriosis on public and animal health, especially bovine tuberculosis, is from main importance the prevention of public exposure to risk of these diseases. Investigative approaches of the presence of mycobacteria in raw milk may contribute to improvement of food security inherent in the product

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-27Bitstream added on 2014-06-13T19:22:36Z : No. of bitstreams: 1 rabelo_rn_dr_jabo.pdf: 419029 bytes, checksum: 56edeae338cf6c261ac2c73378a0f5ac (MD5) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A contagem de células somáticas (CCS) do leite de tanques de expansão está relacionada com os índices de mastite no rebanho, enquanto a contagem bacteriana total (CBT) demonstra a higiene de ordenha e do ambiente em que os animais são alojados, além dos procedimentos de limpeza dos equipamentos de ordenha. Partindo dessa premissa, foram caracterizadas as qualidades celulares, microbiológicas, físicas e químicas de leites procedentes de tanques de expansão individuais no período de 2007 a 2011. Os resultados mostraram que para o ano de 2007, das 850 amostras analisadas, as CCS variaram de 5,3x105 céls.mL-1 (maio) a 1,1x106 céls.mL-1 (novembro) e para CBT variaram de 5,2x105 UFC.mL-1 (abril) a 1.,6x106 UFC.mL-1. Para 2008, das 892 amostras analisadas, as CCS variaram de 7,0x105 céls.mL-1 (abril) a 1,1x106 céls.mL-1 (outubro) e, para CBT variaram de 9,0x105 UFC.mL-1 (junho) a 1,8x106 UFC.mL-1 (abril). No ano de 2009 as CCS variaram de 6,7x105 céls.mL-1 (março) a 1,0x106 céls.mL-1 (fevereiro) e, para CBT variaram de 3,8x105 UFC.mL-1 (abril) a 1,7x106 UFC.mL-1 (janeiro). Para o ano de 2010, as CCS variaram de 5,6x105 céls.mL-1 (setembro) a 8,8x105 céls.mL-1 (novembro) e para CBT, variaram de 5,0x105 UFC.mL-1 (agosto) a 1,4x106 UFC.mL-1 (fevereiro). No ano de 2011, as variações foram de 5,1x105 céls.mL-1 (agosto) a 8,7x105 céls.mL-1 (janeiro) para CCS e para CBT essas variações foram de 4,6x105 UFC.mL-1 (maio) a 1,2x106 UFC.mL-1 (fevereiro). As CCS e CBT variaram na série histórica, com tendência à redução; o período de chuvas influenciou a incidência de CCS e CBT fora dos padrões da IN 51 e o período de chuvas e seca não interferiu nos parâmetros físicos e químicos em todos os anos pesquisados, com variações mínimas, mas dentro dos padrões estabelecidos pela legislação... Bulk tank somatic cell count (SCC), milk tanks expansion is related to the indices of mastitis in the herd, while the total bacterial count (CBT) demonstrates the hygiene of milking and the environment in which animals are housed, in addition to procedures for cleaning of the equipment of milking. From this premise, we characterized the cellular, microbiological and physical-chemical quality properties of milk coming from individual bulk tanks in the period 2008 to 2010. The results showed that for the year 2007, the 850 samples analyzed, the CCS ranged from 526x10³ cels.mL-1 (May) to 1,065x10³ cels.mL-1 (November) and CBT varied from 517x10³ UFC.mL-1 (April) to 1,643x10³ UFC.mL-1. The results showed that for the year 2008, of 892 samples analyzed, SCC ranged from 696x10³ cells.mL-1 (April) to 1,102x10³ cells.mL-1 (october), and for TBC varied from 896x10³ CUF.mL-1 (June) to 1,781x10³ CUF.mL-1 (april). In 2009 the SCC ranged from 667x10³ cells.mL-1 (march) the 1,026x10³ cells.mL-1 (February) and for TBC ranging from 377x10³ CUF/ mL (april) to 1,746x10³ CUF.mL-1 (january). For the year 2010, the SCC ranged from 561x10³ cells.mL-1 (september) to 883x10³ cells.mL-1 (november) and TBC, ranged from 503x10³ UFC.mL-1 (august) 1,395x10³ CUF.mL-1 (february). In the year 2011, the variations were 5.1 x105 cels.mL-1 (August) the 8.7x105 cels.mL-1 (January) to SCC and for TBC these variations were 4.6x105 CFU.ml-1 (may) the 1.2x106 CFU.ml-1 (February). The SCC and TBC varied in historical series, with a tendency toward reduction; the rainy period influenced the incidence of SCC and TBC outside of the patterns of IN 51, and rain and dry period did not interfere with physical and chemical parameters in all the years surveyed, with minimal changes, but within the standards established by current legislation. The individual results... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-14Bitstream added on 2014-06-13T19:35:16Z : No. of bitstreams: 1 miranda_es_me_botib.pdf: 341881 bytes, checksum: 0398d195977255821cd91dc539be7ad7 (MD5) A mastite é uma inflamação da glândula mamária, geralmente causada por infecção bacteriana, causando as maiores perdas econômicas na bovinocultura leiteira, devido à redução na produção de leite e de sua qualidade, aumento do uso de medicamentos e morte dos animais. Existem muitos micro-organismos responsáveis pela mastite bovina, mas Staphylococcus sp permanecem como os mais comumente isolados, em casos de mastites clínicas e subclínicas. São vários os fatores de virulência envolvidos nessa patogênese, principalmente a produção de biofilmes, o que explicaria a cronicicidade da infecção e a produção de toxinas. A presença constante desses micro-organismos pode ocasionar a seleção de cepas resistentes, além de ser um perigo no momento da ordenha, pois o leite contaminado pode causar intoxicações, devido à ingestão de enterotoxinas pré formadas. Assim, o objetivo do trabalho foi identificar os Staphylococcus sp isolados a partir de 279 amostras de leite de vacas saudáveis e 293 de vacas com mastite (clínica ou subclínica), quanto à formação de biofilmes, além da resistência a determinadas drogas. Foram isolados 63 (22,6%) cepas de Staphylococcus sp, entre as amostras de leite de animais hígidos e 80 (27,3%), entre os doentes. A espécie mais frequentemente isolada entre os animais doentes foi S. warneri (27,5%), mas S. aureus (17,5%) foi a única espécie onde ocorreu diferença estatisticamente significativa (p-valor 0,001) entre ambos os grupos, comprovando sua maior ocorrência em animais doentes. Em relação à produção de biofilme, foram testadas duas metodologias e a técnica da microplaca (p-valor 0,47) foi melhor que a do vermelho congo (p-valor 0,29). O gene mecA foi encontrado em 14 (9,8%) das 143 cepas analisadas,ocorrendo somente em estafilococos coagulase negativa (ECN). S. aureus ocorreu predominantemente em vacas doentes, enquanto... Mastitis is an inflammation of breast tissue, by bacterial infection. It causes economic losses to dairy cattle, because mastitis results in decrease of production and in low quality of milk, increasing antimicrobial treatment and cows mortality. Several microorganisms are associated to bovine mastitis, but Staphylococcus spp. remain as the most commonly isolated bacteria from clinical and subclinical mastitis. Several virulence factors are involved in mastitis pathogenesis; one of the most important of them is the biofilm production that can explain the infection persistency. The persistency of these microorganisms can select antimicrobial resistant strains, besides, can contaminate the milk during collection, resulting in foodborne for the consumers, if pre formed enterotoxins were present. The aim of this study was to identify the species of Staphylococcus, to detect the biofilm formation and to characterize the antimicrobial susceptibility patterns in strains isolated from milk of 279 healthy and 293 mastitic cows. Sixty-three strains of Staphylococcus spp. were isolated from milk of healthy cow (22.6%), and 80 from mastitic cow milk samples (27.3%). The most common species isolated from sick cows were S. warneri (27.5%), but S. aureus was the only species that was significantly (P value 0.001) more associated with mastitic cows group. Regarding to biofilm production, two methodologies were carried out. The microtiter plate assay detected more biofilm producer strains (47%) than the congo red agar technique (29%). In relation to mecA gene, that confers resistance to all beta-lactam antimicrobial agents, it was detected in 14 (9.8%) out of 143 analyzed strains, all of them occurring in coagulase-negative staphylococci. In summary, we observed that S. aureus occurred mainly in mastitic cows, while coagulase-negative staphylococci occurred equally between the healthy and sick (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-01Bitstream added on 2014-06-13T18:31:34Z : No. of bitstreams: 1 izidoro_tb_me_botfmvz.pdf: 1075508 bytes, checksum: 61e7b83d767ca33f48c8ac16e00fa37d (MD5) Universidade Estadual Paulista (UNESP) O emprego do resfriamento para a conservação do leite, isolado de medidas higiênicas adequadas, durante o processo de obtenção do produto, propicia a multiplicação de microrganismos altamente lipo-proteolíticos: os psicrotróficos. Com o intuito de quantificar as expressões metabólicas e esclarecer demais questões básicas a respeito deste grupo de bactérias, foram coletadas 30 amostras de leite e cada uma delas foi incubada em 3 diferentes temperaturas: 4oC, 8oC, 12oC; sendo por seguinte executadas, em diferentes momentos (0h, 12h, 24h, 48h), as seguintes análises: Contagem de microrganismos psicrotróficos, Porcentagem de microrganismos lipolíticos, Porcentagem de microrganismos proteolíticos (provas microbiológicas), determinação da acidez, determinação do índice crioscópico, determinação do teor de glico-macropeptídeo e dosagem dos ácidos graxos livres. As maiores contagens de psicrotróficos e as maiores alterações referentes às análises de acidez e crioscopia foram verificadas na temperatura de incubação de 12oC. Entretanto, o maior teor de GMP foi detectado na temperatura de incubação de 8oC, como se a microbiota buscasse uma compensação em decorrência de algum problema no metabolismo lipolítico. Independente, das ondulações metabólicas, as maiores alterações físico-químicas mostraram-se relacionadas a leites com contagens iniciais elevadas, em geral, superiores a 105 UFC/mL. o emprego do resfriamento para a conservação do leite;' isolado de medidas higiênicas adequadas, durante o processo de obtenção do produto, propicia a multiplicação de microrganismos altamente lipo-proteolíticos: os psicrotróficos. Com o intuito de quantificar as expressões metabólicas e esclarecer demais questões básicas a respeito deste grupo de bactérias, foram coletadas 30 amostras de leite e cada uma delas foi incubada em 3 diferentes temperaturas: 4°C, BOC, 12°C; sendo por seguinte executadas, em diferentes momentos (Oh, 12h, 24h, 4Bh), as seguintes análises: Contagem de microrganismos psicrotróficos, Porcentagem de microrganismos Iipolíticos, Porcentagem de microrganismos proteolíticos (provas microbiológicas), determinação da acidez, determinação do índice crioscópico, determinação do teor de glico-macropeptídeo e dosagem dos ácidos graxos livres. As maiores contagens de psicrotróficos e as maiores alterações referentes às análises de acidez e crioscopia foram verificadas na temperatura de incubação de 12°C. Entretanto, o maior teor de GMP foi detectado na temperatura de incubação de BOC, como se a microbiota buscasse uma compensação em decorrência de algum problema no metabolismo lipolítico. Independente, das ondulações metabólicas, as maiores alterações físico-químicas mostraram-se relacionadas a leites com contagens iniciais elevadas, em geral, superiores a 105 UFC/mL.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-25Bitstream added on 2014-06-13T18:59:03Z : No. of bitstreams: 1 villa_fb_me_botfmvz.pdf: 205940 bytes, checksum: a185143d92251c25b3e9f7b3f2c4c20a (MD5) Universidade Estadual Paulista (UNESP) O trabalho teve como objetivo realizar uma avaliação físico-química, microbiológica, bem como pesquisar a presença de resíduos de antimicrobianos em amostras de leite in natura comercializado informalmente em Brotas, SP. Os resultados das análises físico-químicas revelaram que 13,6% de amostras encontravam-se fora do padrão legal para acidez, 7,4% para densidade, e 16,0% para o índice crioscópio, indicando adulteração pela adição de água ao produto. No tocante aos resultados das análises microbiológicas, 77,2% de amostras excederam o limite de 1,0 x 106 UFC/mL de leite para microrganismos mesófilos, dados indicativos de sérias deficiências na higiene do processo de ordenha, bem como na sua conservação, desde a obtenção até a sua comercialização direta ao consumidor. Quanto à pesquisa de resíduos de antimicrobianos, 6,0% de amostras mostraram-se positivas para o teste empregado (Delvotest®), resultado preocupante, já que além dos efeitos intrínsecos indesejáveis da presença de resíduos de tais fármacos no alimento, é indicativo de que parte do leite é oriunda de animais que estavam ou estão sob tratamento com quimioterápicos em virtude de quadros de mastite clínica ou sub-clínica. Pode-se concluir que o leite é de má qualidade microbiológica, alvo de adulterações pela adição de água, representando um risco para os consumidores que o adquirem, já que não recebe nenhum tipo de tratamento e fiscalização. The present work has the objective to evaluate the physical-chemical, microbiological and antibiotics residues in informal raw milk informally commercialized in Brotas, SP. The physical-chemical tests results showed that to the acidity test, with 13.6% samples, 7.4% for the density test, 16.0% for crioscopy test indicating water addition. The microbiological tests results showed to be the major quality problem with 77.2% exceeding the legal standards parameters of 1.0x106 UFC/mL of milk to mesofilic microorganisms, indicating hygiene deficiency in the production, conservation, since the milking to the trading. As the result of antibiotics residues research, 6.0% were positives to the used test (Delvotest®), a worried result, because, beyond the problems that the residues can cause by itself, it is indicative of an amount of the milk came from cows that were or still are under treatment with drugs to clinical or subclinical mastits. It can be concluded that this type of product has poor microbiological, target of water adition, quality and can even represent a risk to the consumers health who buy it without any treatment or fiscalization.

O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito de fatores determinados pela granelização do leite cru refrigerado na estabilidade do leite. Foram enfati- zados os efeitos da temperatura de refrigeração e do tempo de estocagem na composição da microbiota contaminante do leite cru, na atividade proteolítica do leite, na atividade enzimática residual após tratamento UHT, bem como seu possível efeito na estabilidade do leite UHT. Amostras de leite cru coletadas em tanques de refrigeração, na fonte de produção e no silo de uma indústria processadora de leite UHT, foram analisadas quanto as suas características microbiológicas. Bactérias psicrotróficas proteolíticas Gram-negativas e Gram- positivas foram isoladas do leite cru refrigerado, sendo o gênero Pseudomonas o mais freqüentemente isolado, especialmente a espécie P. fluorescens. Bactérias Gram-positivas e Gram-negativas fermentadoras de glicose apre- sentaram predominantemente atividade proteolítica a 6,5, 21 e 35oC e bactérias Gram-negativas não-fermentadoras de glicose apresentaram um maior percentual de isolados com atividades associadas de proteases, lipases e lecitinases a 6,5 e 21oC, ressaltando seu maior potencial deteriorador. A presença de atividade de enzimas proteolíticas termorresistentes foi observada em sobrenadantes de culturas de bactérias psicrotróficas proteolíticas. A capacidade de adesão a superfícies de aço inoxidável foi constatada em bactérias psicrotróficas proteolíticas Gram-positivas e Gram-negativas até uma densidade de 10 5 células por cm 2 , quando inoculadas em leite desnatado esterilizado a 7oC, por 48 horas. Observou-se o crescimento de P. fluorescens inoculado em leite desnatado a 2, 4, 7 e 10°C, constatando-se o aumento de sua população, do grau de proteólise e da velocidade específica máxima de crescimento com o aumento da temperatura de estocagem. O tempo, em dias, para a perda de estabilidade térmica dessas amostras foi maior a 2 e a 4oC, em relação a 7 e 10oC. Por meio da eletroforese em gel de poliacrilamida obser- vou-se que a temperatura e o tempo de estocagem influenciaram na hidrólise das frações de caseína e da albumina. As amostras de leite cru integral, coletadas assepticamente e usadas como controle, não diferiram quanto aos perfis eletroforéticos após seis dias de estocagem, nas temperaturas avaliadas, demonstrando a importância de investimentos para a implementação de práticas higiênicas de obtenção e conservação da matéria-prima. O tratamento UHT reduziu, em média, 93,2% da atividade proteolítica presente no leite cru integral usado como matéria-prima para o processamento do leite UHT, indicando a presença de atividade proteolítica residual de origem bacteriana e, ou, endógena. Observou-se o aumento da massa de sedimentos, do grau de proteólise e da atividade proteolítica durante a estocagem do leite UHT integral a 37°C, por 120 dias. Em nenhuma das amostras de leite UHT foram consta- tadas contaminações por bactérias mesofílicas e por bactérias mesofílicas esporuladas, além de indícios de gelificação. Todas as amostras permane- ceram termicamente estáveis durante o período de validade do produto. This work aimed at investigating the effect of variables determined for refrigerated bulk raw milk on milk stability. Emphasis was given to the effects of refrigeration temperature and storage time on raw milk s contaminant microbiota composition, proteolytic activity, residual enzymatic activity after UHT treatment as well as their possible effect on UHT milk stability. Samples of bulk raw milk, collected from cooling tanks at the production sites and from a silo of a UHT milk processing industry were analyzed for microbiological characteristics. Gram-negative and Gram-positive proteolytic psychrotrophs were isolated from the refrigerated raw milk, with the genus Pseudomonas being the most frequently isolated strain, especially the species P. fluorescens. Gram-positive and Gram-negative glucose-fermenting bacteria presented a predominantly proteolytic activity at 6.5, 21, and 35oC and Gram-negative non-glucose fermenting bacteria presented a higher percentage of isolates with activities associated to proteases, lipases, and lecithinase at 6.5 and 21oC, indicating their higher deteriorating potential. The presence of heat-resistant proteolytic activity was observed in the supernatants of psychrotrophic bacterial cultures. The capacity to adhere to stainless steel surfaces was confirmed in Gram- positive and Gram-negative proteolytic psychrotrophics up to a density of 10 5 cells per cm 2 inoculated in sterilized skim milk at 7oC after 48 h of incubation. The maximum specific growth rate and the proteolytic activity of P. fluorescens inoculated in skim milk increased with increasing storage temperatures (2, 4, 7 and 10°C). Heat-stability loss (in days) for these samples was higher at 2 and at 4oC, in relation to 7 and 10oC. Temperature and storage time influenced the hydrolysis of casein and albumim. The raw whole milk samples, aseptically collected and used as control, showed no changes in the eletrophoretic profiles after six storage days under the temperatures evaluated, showing the importance of investing on the implementation of hygienic practices of raw material acquisition and conservation. The UHT treatment reduced, on average, 93.2% of the proteolytic activity in the raw whole milk used as raw material for UHT milk processing, indicating the presence of residual proteolytic activity of bacterial and, or endogenous origin. Increased sediment mass, proteolysis degree, and proteolytic activity were observed during storage of UHT whole milk at 37°C, for 120 days. None of the UHT milk samples were found to be contaminated with sporulating mesophilic bacteria or showed signs of gelation. All the samples remained heat stable during shelf-life.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-12-03Bitstream added on 2014-06-13T18:44:26Z : No. of bitstreams: 1 lago_ncmr_dr_jabo.pdf: 311083 bytes, checksum: d37d23bdb294492d8a23bb6c6424608b (MD5) O Bacillus cereus é um microrganismo ubíquo encontrado freqüentemente em produtos lácteos. As perdas econômicas e o risco que traz à saúde pública são alarmantes. Os objetivos deste trabalho foram pesquisar o Bacillus cereus em leite, verificar a sua capacidade enterotoxigênica e o risco que provoca à saúde pública e comparar diferentes técnicas utilizadas para detecção de toxinas. Para tal, foram analisadas 120 amostras de leite (30 de leite cru, 30 de leite pasteurizado, 30 de leite em pó e 30 de UAT). Para a pesquisa de enterotoxinas, foram utilizadas três técnicas. Encontraram-se contaminadas 15 (50,0%), 29 (96,7%), 22 (73,3%) e 4 (13,3%) amostras de leite cru, pasteurizado, em pó e UAT, respectivamente. Para a detecção de enterotoxinas pela técnica da alça ligada em coelhos, foram positivas, respectivamente, 1 (7,1%), 10 (35,7%) e 3 (13,6%) cepas das amostras de leite cru, pasteurizado e em pó. Para o teste de aumento de permeabilidade vascular dérmica, apresentaram-se enterotoxigênicas, respectivamente, 1 (7,1%), 1 (3,6%), 2 (9,1%) e 1 (4,0%) cepas isoladas de leite cru, pasteurizado, em pó e UAT. Para a detecção de enterotoxinas pela prova de aglutinação passiva em látex, apresentaram-se positivas 7 (63,6%), 4 (30,8%), 3 (33,3%) e 8 (80,0%) cepas isoladas, respectivamente, de leite cru, pasteurizado, em pó e UAT. Conclui-se que as amostras de leite analisadas, principalmente as amostras já processadas termicamente, deixam a desejar quanto a sua qualidade, colocando em risco a saúde dos consumidores. Conclui-se também que a técnica de aglutinação é a mais indicada para a detecção da enterotoxina produzida pelo Bacillus cereus. Bacillus cereus is a ubiquitous microorganism frequently found in milk products. The economic losses and the damage to public health they cause are enormous. The objectives of this work were to search for Bacillus cereus in milk, their enterotoxigenic activity to estimate the risks the use of this product may produce and to compare different techniques used to detection of enterotoxins. For that, 120 samples of milk were examined (30 of raw milk, 30 of pasteurized milk, 30 of milk powder and 30 of UHT milk). To test the enterotoxigenicity, three techniques were used. Bacillus cereus was present in 15 (50,0%), 29 (96,7%), 22 (73,0%) and 4 (13,3%) samples of raw milk, pasteurized milk, milk powder and UHT milk, respectively. For the enterotoxigenicity detection using the assay in the rabbit ileal loop, 1 (7,1%), 10 (35,7%) and 3 (13,6%) strains from raw milk, pasteurized milk and milk powder were positive. For the enterotoxigenicity detection using the assay for vascular permeability activity, 1 (7,1%), 1 (3,6%), 2 (9,1%) and 1 (4,0%) strains from raw milk, pasteurized milk, milk powder and UHT milk were positive, respectively. Using the reversed passive latex agglutination, diarrheal toxin production was shown to be 7 (63,6%), 4 (30,8%), 3 (33,3%) and 8 (80,0%) strains respectively isolated from raw milk, pasteurized milk, milk powder, and UHT milk. It was concluded that the milk samples analyzed didn't present good quality and may put in risk the health of consumers of such products. We also concluded that the reversed passive latex agglutination is the best technique to determine the enterotoxins produced from Bacillus cereus.

Orientador : Fumio Yokoya Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: Levando-se em consideração os poucos conhecimentos sobre a incidência de bactériófagos de bactérias láticas mesofíliças, na indústria de leite do Estado de São Paulo, e a sua influência sobre a capacidade acidificante dos fermentos licticos disponíveis em nosso mercado, o presente trabalho foi conduzido com o intuito de esclarecer a real situação dos laticínios no Estado foram coletadas 33 amostras de soro de queijo em 17 laticínios, que foram submetidas ao teste de inibição da producão de ácido lático, como medida prévia para avaliar a presença de bacteriófagos. Os soros resultantes desses experimentos quando submetidos ao teste de placa de lise. indicaram, que uma diminuição de 10% na acidez na presença de amostra suspeita ao contrário do estabelecido na literatura, não reflete a veracidade da presença de bacteriófagos em uma amostra.Nossos resultados mostraram que 74% das amostras foram falso positivas e 1% delas, falso negativa. Dentre os 16 bacteriófagos isolados, 12 foram específicos para L. lactis, 3 para L. diacetylactis e 1 capaz de lisar ambos microrganismos, evidenciando atividade fágica em 65% das indústrias avaliadas.Utilizando uma mistura dos bacteriófagos isolados, procedeu-se aos testes com os fermentos lácticos comerciais (4 do tipo BD, 2 do tipo D, 5 do tipo O e 1 simples - Lactococcus diacetylactis). Em testes de acidificacão dos fermentos. em 8 horas, somente 2 do tipo O mostraram diferença na capacidade de acidificação. Verificou-se que os fermentos submetidos à repicagem diária, mantiveram os bacteriófagos após 2O subcultivos em 2 fermentos ( tipos BD e D), com variação na capacidade acidificante somente para o tipo BD. A partir dos fermentos, foram obtidas bactérias componentes, que foram testadas individualmente quanto à resistência aos bacteriófagos, mostrando que o nível de sensibilidade varia consideravelmente: 23% do fermento BD1 e 40% do fermento D2. O fermento O3 composto de 5 cepas, 1 mostrou sensibilidade e o fermento O4, constituído de 4 cepas, 2 foram sensíveis. 5 bacteriófagos de nossa coleção não se mostraram infectivos a nenhum dos isolados. Um dos bacteriófagos mostrou-se infectivo para a quase totalidade dos isolados Abstract: Since the knowledge of phage on mesophilic acid bacteria in milk processing industry of the State of São Paulo, and its effect on acidification performance of commercially avaliable lactic acid starter, this work was designed to elucidate the real situation of milk industry in this State. A total of 33 samples of whey were collecd in 17 cheese factories and tested on hability to inhibity acid production by selected starter as a mean to detect the presence of bacteriophage. These tests have shown that a decrease of 10% or more in the amount of acid produced in the presence of suspected sample, was not good indicative of presence of phage as it has bean assumed in the literature. Our results showed that 74% of samples were false positive and 1 % were false negative. Amongst 16 phages isolated 12 were specific for L. Lactis, 3 for L. diacetylactis and one was capable to cause lyses of both species, which indicates contamination in 65% of the industries analyzed. Commercially available starters (4 type BD; 2 type D; 5 type O and one simple starter) were tested with mixture of isolated phages. With acidification test for 8 hours, only 2 type O showed positive results. Daily transfer of cultured retained phages even after 20 subcultures in both types (BD and D), with acidification difference only on type BD. Pure cultures isolated from commercial starters were tested for phage resistance. Among isolated from BD1 23% were sensitive; from Dz 40% were sensitive. The starter 03 were composed of 5 strains, and one were sensitive; starter 04 with 4 strains, 2 were sensitive. Five of isolated phages were not infective on any of the isolates but one of them were infective for most of them Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Jose Satiro de Oliveira. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade Tecnologia de Alimentos Resumo: Foram coletadas 19 amostras de leite cru e 6 de leite pasteurizado em uma usina de beneficiamento de leite situada na região de Campinas - S.P. Após a contagem total, realizada de acordo com as recomendações do"Standard Methods for the Examination of Dairy Products", foi catada uma média de 21 colônias por amostra, as quais foram inoculadas em leite tornassolado e incubadas à temperatura ambiente. Após o crescimento, as culturas foram identificadas até família, gênero ou, em certos casos, em agrupamentos de espécies dentro de um mesmo gênero. A classificação foi feita utilizando uma seqüência simplificada de testes de fácil execução, baseada nas características típicas dos grupos de microrganismos comumente encontrados no leite. Percentualmente os grupos mais importantes encontra dos foram: no leite cru; Streptococcus 49,4%, Microcoacus 20%, Pseudomonadaceae 6,0%, Enterobacteriaceae 5,0%/, Lactobaaillus 4,6%, Achromobacteriaceae 3,6%, Bacillus 3,2% e Microbaaterium 2,4%. E no leite pasteurizado; Micrococcus 47,7%,Streptoco'çcus 18,3%, Microbacterium 11,0%, Achromobacteriaceae 8,2%, Bacillus 6,6% e Pseudomonadaceae 6,6%. Os resultados permitiram tecer várias considerações relativas aos cuidados higiênicos empregados no manuseio do leite, bem como aos problemas encontrados pela indústria de laticínios no tocante a qualidade e conservação do leite e seus derivados Abstract:: Nineteen samples of raw milk and six of pasteurized milk were collected in a milk pasteurizing plant in Campinas SP Brazil. After obtaining the Standard Plate Count, an average of 21 colonies were picked from each sample and inoculated into litmus milk tubes, which were incubated at room temperature until growth could be observed. The cultures isolated were identified as to family, genus or, in some cases, groups of species within a genus. The classification was done following a simplified sequence of tests based on tipical charactestics of the main groups of microorganisms usually present in milk. The main groups isolated, were distributed in percentages as follow: Raw milk; Streptococcus 49,4%, Micrococus 20%, Pseudomonadaceae 6,0%, Enterobaateriaaeae 5,0%; Lactobacillus 4,6%, Achromobacteriaceae 3,6%, Bacillus 3,2% and Microbacterium 2,4%. Pasteurized milk; Microbacterius 47,7%, Streptococus 18,3%, Microbacterium 11,0%, Aahromobaateriaaeae, 8,2%, Bacillus 6,6% and Pseudomonadaceae 6,6%. The results indicated several aspects related to sanitary problems in handling the milk from the farm to the dairy industry and its implications in the keeping quality of milk and dairy products Mestrado Mestre em Ciência de Alimentos