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Summary: Lymphatic endothelial cells (LECs) of the lymph node (LN) parenchyma orchestrate leukocyte trafficking and peripheral T cell dynamics. T cell responses to immunotherapy largely rely on peripheral T cell recruitment in tumors. Yet, a systematic and molecular understanding of how LECs within the LNs control T cell dynamics under steady-state and tumor-bearing conditions is lacking. Intravital imaging combined with immune phenotyping shows that LEC-specific deletion of the essential autophagy gene Atg5 alters intranodal positioning of lymphocytes and accrues their persistence in the LNs by increasing the availability of the main egress signal sphingosine-1-phosphate. Single-cell RNA sequencing of tumor-draining LNs shows that loss of ATG5 remodels niche-specific LEC phenotypes involved in molecular pathways regulating lymphocyte trafficking and LEC-T cell interactions. Functionally, loss of LEC autophagy prevents recruitment of tumor-infiltrating T and natural killer cells and abrogates response to immunotherapy. Thus, an LEC-autophagy program boosts immune-checkpoint responses by guiding systemic T cell dynamics.

Abstract Tumor endothelial cells (TECs) actively repress inflammatory responses and maintain an immune‐excluded tumor phenotype. However, the molecular mechanisms that sustain TEC‐mediated immunosuppression remain largely elusive. Here, we show that autophagy ablation in TECs boosts antitumor immunity by supporting infiltration and effector function of T‐cells, thereby restricting melanoma growth. In melanoma‐bearing mice, loss of TEC autophagy leads to the transcriptional expression of an immunostimulatory/inflammatory TEC phenotype driven by heightened NF‐kB and STING signaling. In line, single‐cell transcriptomic datasets from melanoma patients disclose an enriched InflammatoryHigh/AutophagyLow TEC phenotype in correlation with clinical responses to immunotherapy, and responders exhibit an increased presence of inflamed vessels interfacing with infiltrating CD8+ T‐cells. Mechanistically, STING‐dependent immunity in TECs is not critical for the immunomodulatory effects of autophagy ablation, since NF‐kB‐driven inflammation remains functional in STING/ATG5 double knockout TECs. Hence, our study identifies autophagy as a principal tumor vascular anti‐inflammatory mechanism dampening melanoma antitumor immunity.

Autophagy is essential to endothelial cell homeostasis. Here the authors show that lipophagy in LEC supports fatty acid oxidation to sustain a mitochondrial-Prox1 gene expression circuit and promote response of LEC to lymphangiogenic mediators.

Stomatal cell lineage is an archetypal example of asymmetric cell division (ACD), which is necessary for plant survival.sup.1-4. In Arabidopsis thaliana, the GLYCOGEN SYNTHASE KINASE3 (GSK3)/SHAGGY-like kinase BRASSINOSTEROID INSENSITIVE 2 (BIN2) phosphorylates both the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signalling module.sup.5,6 and its downstream target, the transcription factor SPEECHLESS (SPCH).sup.7, to promote and restrict ACDs, respectively, in the same stomatal lineage cell. However, the mechanisms that balance these mutually exclusive activities remain unclear. Here we identify the plant-specific protein POLAR as a stomatal lineage scaffold for a subset of GSK3-like kinases that confines them to the cytosol and subsequently transiently polarizes them within the cell, together with BREAKING OF ASYMMETRY IN THE STOMATAL LINEAGE (BASL), before ACD. As a result, MAPK signalling is attenuated, enabling SPCH to drive ACD in the nucleus. Moreover, POLAR turnover requires phosphorylation on specific residues, mediated by GSK3. Our study reveals a mechanism by which the scaffolding protein POLAR ensures GSK3 substrate specificity, and could serve as a paradigm for understanding regulation of GSK3 in plants.POLAR, identified in a survey of the protein interactome of BRASSINOSTEROID INSENSITIVE 2 in Arabidopsis thaliana, has a key role in coordinating cell polarity and enabling asymmetric cell division., Author(s): Anaxi Houbaert [sup.1] [sup.2] , Cheng Zhang [sup.1] [sup.2] , Manish Tiwari [sup.1] [sup.2] , Kun Wang [sup.1] [sup.2] [sup.3] , Alberto de Marcos Serrano [sup.4] , Daniel V. [...]

Cancer cell-stromal cell crosstalk is orchestrated by a plethora of ligand-receptor interactions generating a tumor microenvironment (TME) which favors tumor growth. The high pro-angiogenic nature of the TME perpetuates the chaotic network of structurally immature, low pericyte-covered vessels characteristic of the tumor vasculature. We previously demonstrated that chloroquine (CQ) -a lysosomotropic agent used as first-generation autophagy blocker in clinical trials- induced tumor vessel normalization and reduced tumor hypoxia. CQ improved both vessel structure and maturation, whereas the conditional knockout of the crucial autophagy gene Atg5 in endothelial cells (ECs) did not, thus highlighting a potential differential role for EC-associated autophagy and the lysosomes in pathological tumor angiogenesis. However, how CQ or ATG5-deficiency in ECs affect angiogenic signals regulating EC-pericyte interface and therefore vessel maturation, remains unknown. Here, we show that in ECs CQ constrained VEGF-A-mediated VEGF receptor (VEGFR)2 phosphorylation, a driver of angiogenic signaling. In the presence of CQ we observed increased expression of the decoy receptor VEGFR1 and of a lower molecular weight form of VEGFR2, suggesting receptor cleavage. Consequently, VEGF-A-driven EC spheroid sprouting was reduced by CQ treatment. Furthermore, CQ significantly affected the transcription and secretion of platelet-derived growth factor (PDGF)-AB/BB (upregulated) and Endothelin-1 (EDN1, downregulated), both modulators of perivascular cell (PC) behavior. In contrast, silencing of ATG5 in ECs had no effect on VEGFR2 to VEGFR1 ratio nor on PDGFB and EDN1 expression. Accordingly, mice harboring B16F10 melanoma tumors treated with CQ, displayed both an increased number of αSMA+ PCs covering tumor vessels and co-expressed PDGF receptor-β, enabling PDGF ligand dependent recruitment. Moreover, upon CQ treatment the tumoral expression of angiopoietin-1 (Angpt1), which retains mural cells, and induces vessel stabilization by binding to the EC-localized cognate receptor (TIE2), was increased thus supporting the vessel normalization function of CQ. These features associated with improved tumor vasculature were not phenocopied by the specific deletion of Atg5 in ECs. In conclusion, this study further unravels endothelial cell autonomous and non-autonomous mechanisms by which CQ “normalizes” the intercellular communication in the tumor vasculature independent of autophagy.

In Arabidopsis thaliana, brassinosteroid (BR) signaling and stomatal development are connected through the SHAGGY/GSK3-like kinase BR INSENSITIVE2 (BIN2). BIN2 is a key negative regulator of BR signaling but it plays a dual role in stomatal development. BIN2 promotes or restricts stomatal asymmetric cell division (ACD) depending on its subcellular localization, which is regulated by the stomatal lineage-specific scaffold protein POLAR. BRs inactivate BIN2, but how they govern stomatal development remains unclear. Mapping the single-cell transcriptome of stomatal lineages after triggering BR signaling with either exogenous BRs or the specific BIN2 inhibitor, bikinin, revealed that the two modes of BR signaling activation generate spatiotemporally distinct transcriptional responses. We established that BIN2 is always sensitive to the inhibitor but, when in a complex with POLAR and its closest homolog POLAR-LIKE1, it becomes protected from BR-mediated inactivation. Subsequently, BR signaling in ACD precursors is attenuated, while it remains active in epidermal cells devoid of scaffolds and undergoing differentiation. Our study demonstrates how scaffold proteins contribute to cellular signal specificity of hormonal responses in plants. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Koolen-de Vries syndrome (KdVS) is a multi-system disorder characterized by intellectual disability, friendly behavior, and congenital malformations. The syndrome is caused either by microdeletions in the 17q21.31 chromosomal region or by variants in the KANSL1 gene. The reciprocal 17q21.31 microduplication syndrome is associated with psychomotor delay, and reduced social interaction. To investigate the pathophysiology of 17q21.31 microdeletion and microduplication syndromes, we generated three mouse models: 1) the deletion (Del/+); or 2) the reciprocal duplication (Dup/+) of the 17q21.31 syntenic region; and 3) a heterozygous Kansl1 (Kans1+/-) model. We found altered weight, general activity, social behaviors, object recognition, and fear conditioning memory associated with craniofacial and brain structural changes observed in both Del/+ and Dup/+ animals. By investigating hippocampus function, we showed synaptic transmission defects in Del/+ and Dup/+ mice. Mutant mice with a heterozygous loss-of-function mutation in Kansl1 displayed similar behavioral and anatomical phenotypes compared to Del/+ mice with the exception of sociability phenotypes. Genes controlling chromatin organization, synaptic transmission and neurogenesis were upregulated in the hippocampus of Del/+ and Kansl1+/- animals. Our results demonstrate the implication of KANSL1 in the manifestation of KdVS phenotypes and extend substantially our knowledge about biological processes affected by these mutations. Clear differences in social behavior and gene expression profiles between Del/+ and Kansl1+/- mice suggested potential roles of other genes affected by the 17q21.31 deletion. Together, these novel mouse models provide new genetic tools valuable for the development of therapeutic approaches.

El acero al silicio es una aleación de importancia industrial, caracterizada por propiedades magnéticas blandas, bajas pérdidas por corrientes de Foucault y baja magnetostricción. Los aceros al silicio tienen ciclo de histéresis estrecho, lo que es una ventaja en aplicaciones con campos electromagnéticos, como transformadores, generadores, núcleos de motores eléctricos y otros componentes industriales. A pesar de su incomparable valor industrial, no hay convenio sobre la estructura atómica del acero al silicio. Obtener mayor conocimiento sobre los procesos de orden no sólo podría explicar las propiedades magnéticas sino que también podría abrir vías para la reducción de sus características más débiles, como su fragilidad, la cual afecta negativamente a la fabricación del acero al silicio y se asocia con altos costes de producción. Esta revisión resume los últimos conocimientos sobre orden en acero al silicio y describe las técnicas experimentales más importantes usadas para estudiar su estructura. Además, se da una explicación sobre la construcción de la parte rica en hierro del diagrama de fases del Fe-Si. Por último se ilustra la influencia del orden en las propiedades magnéticas y mecánicas.

La predicción del comportamiento mecánico de aceros laminados en caliente es un aspecto importante durante el procesamiento industrial. En el presente trabajo, las tensiones necesarias para el proceso de laminado, fueron estimadas usando tres métodos, el primero de los cuales se basa en la aplicación del modelo de Sellars, que toma en cuenta el coeficiente de fricción y el límite elástico. El segundo método, estima la tensión de laminado a partir de la tensión promedio obtenida durante los ensayos de tracción. El tercer método, estima la tensión de laminado a partir de los datos de potencia consumida por el equipo de laminación. Esta metodología fue aplicada en este estudio a un acero al carbono. La conclusión de este trabajo es que los resultados obtenidos por los métodos basados en el modelo de Sellars y de la potencia consumida, son coincidentes, en tanto que el método basado en la tensión de tracción, presenta valores ligeramente menores a los predichos por los otros modelos.

La industria del automóvil se enfrenta a una creciente demanda de vehículos de pasajeros más eficientes. Con el fin de disminuir el consumo de energía y la contaminación ambiental, el peso del vehículo tiene que ser reducido, al mismo tiempo que se garantizan altos niveles de seguridad. Ante esta situación, la elección de material se convierte en una decisión crucial en el diseño del vehículo. Como respuesta a las necesidades del sector automovilístico, nuevos aceros avanzados y de alta resistencia, han sido desarrollados por la industria siderúrgica. Dichos tipos de acero ofrecen un excelente equilibrio de precio, peso y propiedades mecánicas.

Se tomaron muestras de acero al C-Mn-Si disponible en el mercado y mediante un proceso de laminación en caliente y bobinado, se obtuvo acero Dual Phase con microestructura y propiedades mecánicas dentro del rango teórico esperado de este material. El proceso termomecánico consistió en producir una fuerte reducción a temperaturas mayores a Ar3, mediante pasadas de laminación sucesivas, para posteriormente enfriar el acero durante aproximadamente 5 s, (a una velocidad de 20 °C/s) en el rango de equilibrio α+γ. La temperatura Ar3, medida mediante calorimetría diferencial de barrido, fue de 890 °C. A continuación se realizó un temple en el rango de temperaturas de bobinado (550-675 °C), enfriando posteriormente las muestras de acuerdo a una curva pre establecida, que corresponde a la curva de enfriamiento real de una bobina. La caracterización microestructural de las muestras obtenidas, se realizó mediante microscopía óptica, microscopía electrónica de barrido y microscopía de fuerza atómica. Adicionalmente se realizó una medición de texturas mediante difracción de rayos X, para el estudio de las orientaciones resultantes, producto de la variación de la temperatura de término de laminación (TTL) y la temperatura de bobinado (TB), determinándose cómo afectan estas variables a las distintas componentes de texturas. Se complementó la información microestructural con los valores de los índices de anisotropía normal y planar, medidos de acuerdo a la norma ASTM E-517. Se correlacionaron las intensidades de las componentes de texturas encontradas con los valores de los índices de anisotropía, encontrándose que sólo es posible producir leves mejoras en el índice de anisotropía normal, a través de una combinación apropiada de las temperaturas de término de laminación y de bobinado.

Los aceros eléctricos se usan, normalmente, en la construcción de motores eléctricos y transformadores debido a sus suaves propiedades magnéticas. Una de las tendencias actuales es producir aceros con contenidos mayores de silicio y/o aluminio (por encima de un 3 %, en peso) para reducir las pérdidas magnéticas a través del incremento de la resistividad eléctrica. Una de las desventajas de producir este tipo de aceros con altos contenidos de silicio y/o aluminio es el agrietamiento producido en el material durante el proceso de laminado en frío. Para incrementar el contenido de silicio y/o aluminio en aceros con bajos contenidos de estos elementos de aleación, se sugiere un procedimiento alternativo de producción que se basa, fundamentalmente, en depositar un recubrimiento rico en silicio y/o aluminio, en la superficie del acero. Por ejemplo, uno de los métodos utilizados es sumergir el material en una aleación liquida de Al-Si, seguido de un recocido para promover la difusión del aluminio y el silicio del recubrimiento al acero. Este proceso de difusión modifica, sustancialmente, la microestructura y, a su vez, deteriora las propiedades magnéticas y mecánicas. Algunos de los resultados obtenidos como parte del esfuerzo para optimizar este nuevo método de producción y sus efectos en los posibles cambios de la microestructura y propiedades, se presentan y analizan en este trabajo.

Los aceros eléctricos con alto contenido en silicio (hasta 6,5 % Si) son difíciles de procesar usando procedimientos convencionales: fenómenos de ordenamiento hacen que el material sea muy frágil para ser laminado en frío. El proceso de "inmersión en caliente y recocido de difusión" es una vía alternativa para obtener aceros de alto contenido en silicio (Si) y, eventualmente, también aluminio (Al), evitando los problemas durante la laminación. Los substratos con hasta 3,5 m'% de silicio se sumergen en un baño hipereutéctico de ALSi para depositar en su superficie una capa rica en silicio. Un recocido posterior permite lograr diferentes perfiles de concentración de este último como, por ejemplo, concentración homogénea de 6,5 % en todo el espesor o perfiles específicos con por ejemplo 6,5 % de Si en la superficie y 3,5 % en el interior de la lámina. En estos materiales se obtuvieron excelentes valores, en cuanto a pérdidas eléctricas.

Cuatro aleaciones Fe-Si en el rango de concentraciones 3,3-6,3 wt. % Si se fabricaron para estudiar su deformabilidad en frío. A partir del material colado se prepararon probetas cilíndricas que fueron ensayadas por compresión en una máquina servo-hidraúlica diseñada para mantener constante la velocidad de deformación durante el test. Los resultados proporcionaron información sobre el endurecimiento del material y confirmaron que la deformabilidad disminuye al aumentar el contenido en silicio. A partir de las curvas esfuerzo-deformación se dedujeron ecuaciones constitutivas, cuyos parámetros resultaron ser función de la concentración de silicio. El material deformado presentó un fuerte maclaje, mayor para las aleaciones más ricas en silicio.

El acero eléctrico al silicio, en tomo al 6,5 %, en masa de Si, es un material óptimo para aplicaciones de materiales magnéticos suaves. Sin embargo, la fragilidad que aparece por encima del 3,5 % de silicio hace muy difícil el procesamiento en frío. Generalmente, se cree que la fragilidad es causada por fenómenos de orden/desorden. Para estudiar los procesos de ordenamiento en aleaciones Fe-Si de, hasta 11,7 %, en masa de Si, se usó la espectroscopia Mössbauer. Se ha determinado el tipo y grado de orden y los resultados muestran que las aleaciones estudiadas nunca son soluciones desordenadas y que su grado de orden aumenta con el contenido en silicio. Además, se analizó el efecto del procesamiento termomecánico, incluyendo etapas de laminado en caliente y frío. Se muestra que el enfriamiento lento favorece el orden B2, mientras que el enfriamiento rápido hace lo contrario. Por otra parte, la laminación en frío tiende a causar desorden en las aleaciones.

En el presente trabajo se estructura de manera racional el cúmulo de datos experimentales extraídos, ya sea de laboratorio o de la planta de laminado en caliente de aceros, perteneciente a la industria siderúrgica local. Se realizó una modelización, basada en la técnica de elementos finitos, de las curvas de enfriamiento de estos aceros durante la etapa de bobinado. Con las curvas de enfriamiento obtenidas con esta técnica se calculó, a partir de un modelo cinético, la fracción precipitada de nitrógeno. Paralelamente, con los datos de composición química y porcentaje de reducción durante el laminado en caliente, se estableció un modelo capaz de predecir el tamaño de grano ferrítico final tras esta etapa. Mediante este valor de tamaño de grano y los resultados de nitrógeno libre, obtenidos a partir del modelo, más la composición química y las variables de proceso, se estimaron los valores de límite elástico y resistencia máxima a tracción. Los parámetros así obtenidos han sido validados con datos, tanto de laboratorio como de planta. Se realizó, además, una prueba estadística para respaldar la relación entre valores experimentales y predichos de las distintas propiedades modelizadas. Finalmente, las diferentes ecuaciones y algoritmos empleados se han integrado en un programa sencillo, fácil de usar y que permite, no sólo predecir propiedades mecánicas y microestructurales sino, también, realizar análisis de sensibilidad. Este tipo de análisis, a su vez, permite introducirse en la fabricación de nuevos materiales.

Cognitive and behavioral disorders are thought to be a result of neuronal dysfunction, but the underlying molecular defects remain largely unknown. An important signaling pathway involved in the regulation of neuronal function is the cyclic AMP/Protein kinase A pathway. We here show an essential role for coronin 1, which is encoded in a genomic region associated with neurobehavioral dysfunction, in the modulation of cyclic AMP/PKA signaling. We found that coronin 1 is specifically expressed in excitatory but not inhibitory neurons and that coronin 1 deficiency results in loss of excitatory synapses and severe neurobehavioral disabilities, including reduced anxiety, social deficits, increased aggression, and learning defects. Electrophysiological analysis of excitatory synaptic transmission in amygdala revealed that coronin 1 was essential for cyclic-AMP-protein kinase A-dependent presynaptic plasticity. We further show that upon cell surface stimulation, coronin 1 interacted with the G protein subtype Gαs to stimulate the cAMP/PKA pathway. The absence of coronin 1 or expression of coronin 1 mutants unable to interact with Gαs resulted in a marked reduction in cAMP signaling. Strikingly, synaptic plasticity and behavioral defects of coronin 1-deficient mice were restored by in vivo infusion of a membrane-permeable cAMP analogue. Together these results identify coronin 1 as being important for cognition and behavior through its activity in promoting cAMP/PKA-dependent synaptic plasticity and may open novel avenues for the dissection of signal transduction pathways involved in neurobehavioral processes.