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En el presente trabajo se evaluaron tratamientos germinativos de semillas maduras e inmaduras de Caesalpinia spinosa. Tras la germinación se evaluó la influencia de biorreguladores auxinas [ANA, y AIA] y giberelinas [AG3] en el desarrollo de plántulas. Órganos específicos mostraron mejor desarrollo según la combinación de biorreguladores aplicada. In the present work, germination treatments of mature and immature seeds of Caesalpinia spinosa were evaluated. After germination, the influence of auxin [ANA, and AIA] and gibberellin [AG3] bioregulators on seedling development was evaluated. Specific organs showed better development according to the combination of bioregulators applied.

[ES] Las plantas tienen una enorme capacidad de interpretar señales ambientales y modificar su comportamiento para optimizar el uso de recursos. En este contexto, la plasticidad se puede definir como el rango de intensidad de señales que puede percibir una planta y que modifica algún aspecto de su desarrollo. Las plantas tienen en general una plasticidad elevada, pero no se conocen los circuitos genéticos que explican dicha propiedad. Las hormonas giberelinas (GAs) modulan la expresión de muchos genes de crecimiento y desarrollo en respuesta a las condiciones ambientales, y se ha postulado que su papel evolutivo ha sido el de favorecer la adaptación a través de aumentar la plasticidad, pero nunca se ha demostrado experimentalmente. El Trabajo de Fin de Máster que planteamos tiene como objetivo probar si las GAs realmente afectan a la plasticidad. Para ello se estudiarán plantas silvestres, mutantes sin señalización por GAs, y mutantes con una señalización constitutiva de GAs, a las que se someterán a un rango determinado de señales de distinta naturaleza. Por ejemplo, intensidades crecientes de luz desde 0 hasta 200 µmol m-2 s-1 o cantidades crecientes de sal en el medio inhiben el crecimiento del hipocotilo, mientras que temperaturas entre 16 y 29ºC aumentan el crecimiento. Si las GAs regulan la plasticidad, plantas con más o con menos señalización de GAs tendrán una plasticidad menor; es decir, el intervalo de intensidades de señales (luz, temperatura, sal¿) al que responderán será menor que en una planta silvestre., [EN] Plants have an enormous capacity to interpret environmental signals and modify their behavior to optimize the use of resources. In this context, plasticity can be defined as the range of signal intensity that a plant can perceive and that modifies some aspect of its development. Plants generally have high plasticity, but the genetic circuits that explain this property are not known. Gibberellin hormones (GAs) modulate the expression of many growth and development genes in response to environmental conditions, and their evolutionary role has been postulated to promote adaptation through increased plasticity, but this has never been proven. experimentally. The aim of the Master's Thesis is to test whether GAs really affect plasticity. To do this, we will study wild plants, mutants without GAs signaling, and mutants with constitutive GAs signaling, which will be subjected to a determined range of signals of a different nature. For example, increasing light intensities from 0 to 200 µmol m-2 s-1 or increasing amounts of salt in the medium inhibit hypocotyl growth, while temperatures between 16 and 29ºC enhance growth. If GAs regulate plasticity, plants with more or less GA signaling will have lower plasticity; that is, the range of signal intensities (light, temperature, salt...) to which they will respond will be less than in a wild plant.

[ES] Las giberelinas (GAs) regulan múltiples procesos a lo largo de la vida de las plantas vasculares (floración, crecimiento de los órganos, producción de madera). La ruta de señalización de GAs consiste en la percepción de la hormona por parte de un receptor (GID1) que entonces es capaz de interaccionar físicamente con las proteínas DELLA a través de su domino N-terminal, provocando su degradación por el proteasoma. Estas proteínas son reguladores transcripciones que interaccionan con factores de transcripción a través de su dominio C-terminal (o dominio GRAS). Los musgos y las hepáticas son especies vegetales que carecen de receptor de GAs, pero sí que conservan proteínas DELLA con función equivalente a las de plantas vasculares. ¿Qué le pasará a las plantas de estas especies si les introducimos la capacidad de percibir giberelinas y responder a ellas? El objetivo general de este trabajo es introducir en la especie Marchantia polymorpha un receptor de GAs capaz de iniciar toda la cascada de señalización para eventualmente comparar su comportamiento en competición con la versión silvestre de dicha especie. Para ello se proponen los siguientes objetivos y tareas: Objetivo 1: Construir una proteína DELLA quimérica capaz de actuar en M. polymorpha y de interaccionar con un receptor de GAs. Se fusionará el N-terminal de la proteína GAI de A. thaliana (AtGAI-N) con el dominio GRAS de MpDELLA mediante linkers de varios tamaños, y se evaluará mediante ensayos de doble híbrido en levadura la capacidad de interacción con AtGID1 exclusivamente en presencia de GAs. Se seleccionará la quimera que presente mejor comportamiento (AtGAI-N:MpDELLA-GRAS). Objetivo 2: Introducir la quimera, fusionada a GFP, en M. polymorpha. La construcción AtGAI.N:MpDELLA-GRAS:GFP bajo el control del promotor constitutivo EF1a se transformará en la variedad Tak-1 silvestre de M. polymorpha y se comprobará su funcionalidad evaluando diversos aspectos del fenotipo. Ya se sabe que la sobreexpresión de MpDELLA reduce el crecimiento y activa la expresión de genes de síntesis de flavonoides. Es de esperar que la proteína quimérica funcione de la misma manera. Objetivo 3: Introducir AtGID1 en M. polymorpha. El gen se expresará bajo el control de un promotor constitutivo en una línea silvestre (para evaluar posibles efectos secundarios de la expresión de este gen) y en una línea AtGAI-N:MpDELLA-GRAS:GFP. En esta línea se evaluará la capacidad de las GAs de (i) inducir la degradación proteolítica de la DELLA quimérica (comprobando los niveles mediante Western blot con anti-GFP); y (ii) rescatar el fenotipo de enanismo causado por la sobreexpresión de la proteína quimérica., [EN] Gibberellins (GAs) regulate multiple processes throughout the life of vascular plants (flowering, organ growth, wood production). The GAs signaling pathway consists of the perception of the hormone by a receptor (GID1) which is then capable of physically interacting with the DELLA proteins through its N-terminal domain, causing its degradation by the proteasome. These proteins are transcription regulators that interact with transcription factors through their C-terminal domain (or GRAS domain). Mosses and liverworts are plant species that lack the GAs receptor, but do retain DELLA proteins with functions equivalent to those of vascular plants. What will happen to the plants of these species if we introduce the ability to sense gibberellins and respond to them? The general objective of this work is to introduce into the species Marchantia polymorpha a GAs receptor capable of initiating the entire signaling cascade for eventually compare their behavior in competition with the wild version of that species. To this end, the following objectives and tasks are proposed: Objective 1: Build a chimeric DELLA protein capable of acting in M. polymorpha and interacting with a GAs receptor. The N-terminal of the GAI protein from A. thaliana (AtGAI-N) will be fused with the GRAS domain of MpDELLA using linkers of various sizes, and the ability to interact with AtGID1 exclusively in the presence of Of gas. The chimera with the best behavior (AtGAI-N:MpDELLA-GRAS) will be selected. Objective 2: Introduce the chimera, fused to GFP, into M. polymorpha. The AtGAI.N:MpDELLA-GRAS:GFP construct under the control of the constitutive EF1a promoter will be transformed into the M. polymorpha wild type Tak-1 and its functionality will be checked by evaluating various aspects of the phenotype. It is already known that overexpression of MpDELLA reduces growth and activates the expression of flavonoid synthesis genes. It is to be expected that the chimeric protein will work in the same way. Objective 3: Introduce AtGID1 into M. polymorpha. The gene will be expressed under the control of a constitutive promoter in a wild type line (to assess possible side effects of the expression of this gene) and in an AtGAI-N:MpDELLA-GRAS:GFP line. In this line, the capacity of the GAs to (i) induce the proteolytic degradation of the chimeric DELLA will be evaluated (checking the levels by Western blot with anti-GFP); and (ii) rescuing the dwarfing phenotype caused by overexpression of the chimeric protein.

A alta demanda pelo feijão tem impulsionado a adoção de técnicas que visam aumentar a produtividade sem que ocorra aumento de área plantada. O presente trabalho se inseriu nesse contexto com o objetivo de avaliar a germinação, emergência e crescimento inicial de feijão comum sob diferentes produtos e doses de bioestimulantes. A pesquisa foi conduzida em Sítio Monte Alegre, em Carvalhópolis, município da Região Sul de Minas Gerais no período de junho a agosto de 2022. O delineamento experimental foi em delineamento inteiramente casualizado (DIC), em esquema fatorial 4x2 contendo três repetições. Os fatores experimentais consistiram em diferentes concentrações das substâncias bioestimulantes (0; 0,1; 0,2; 0,4 ml/kg) e substâncias bioestimulantes comerciais (Stimulate®; C3®). Após esse período, as sementes de feijão foram semeadas em vasos de polipropileno com volume de 1 litro com Carolina Soil. No período de quinze dias foram avaliadas as características de germinação; Índice de Velocidade de Germinação (IVG); Comprimento médio total de plântulas; Comprimento médio da raiz; Comprimento médio da parte aérea; Biomassa seca da parte aérea. O bioestimulantes Bioestimulate® promoveu maior acréscimo no desenvolvimento radicular que o bioestimulante C3®. Para a velocidade de emergência, desenvolvimento do sistema radicular e de parte aérea e biomassa do feijoeiro o acréscimo dos bioestimulantes teve efeito quadrático sendo que doses próximas à 0,2 ml kg-1 apresentam maior capacidade de incremento nas variáveis analisadas. The high demand for beans has driven the adoption of techniques aimed at increasing productivity without increasing the planted area. The present work was inserted in this context with the objective of evaluating the germination, emergence and initial growth of common bean under different products and doses of biostimulants. The research was conducted at Sítio Monte Alegre, in Carvalhópolis, in the southern region of Minas Gerais, from June to August 2022. The experimental design was in a completely randomized design (DIC), in a 4x2 factorial scheme with three replications. The experimental factors consisted of different concentrations of biostimulating substances (0; 0.1; 0.2; 0.4 ml/kg) and commercial biostimulating substances (Stimulate®; C3®). After this period, the bean seeds were sown in polypropylene pots with a volume of 1 liter with Carolina Soil. In the period of fifteen days, the characteristics of germination were evaluated; Germination Speed ​​Index (GVI); Average total length of seedlings; Average root length; Average shoot length; Dry biomass of aerial part. The biostimulants Bioestimulate® promoted a greater increase in root development than the biostimulant C3®. For emergence speed, development of the root system and aerial part and bean biomass, the addition of biostimulants had a quadratic effect, with doses close to 0.2 ml kg-1 showing greater capacity for increment in the variables analyzed. La alta demanda de frijol ha impulsado la adopción de técnicas encaminadas a aumentar la productividad sin aumentar el área sembrada. El presente trabajo se inserta en este contexto con el objetivo de evaluar la germinación, emergencia y crecimiento inicial del frijol común bajo diferentes productos y dosis de bioestimulantes. La investigación se realizó en el Sitio Monte Alegre, en Carvalhópolis, en la región sur de Minas Gerais, de junio a agosto de 2022. El diseño experimental fue en un diseño completamente al azar (DIC), en un esquema factorial 4x2 con tres repeticiones. Los factores experimentales consistieron en diferentes concentraciones de sustancias bioestimulantes (0; 0,1; 0,2; 0,4 ml/kg) y sustancias bioestimulantes comerciales (Stimulate®; C3®). Después de este período, las semillas de frijol se sembraron en macetas de polipropileno con un volumen de 1 litro con Carolina Soil. En el período de quince días se evaluaron las características de germinación; Índice de Velocidad de Germinación (GVI); Longitud total promedio de las plántulas; Longitud media de la raíz; Longitud media de los brotes; Biomasa seca de la parte aérea. Los bioestimulantes Bioestimulate® promovieron un mayor incremento en el desarrollo radicular que el bioestimulante C3®. Para velocidad de emergencia, desarrollo del sistema radicular y parte aérea y biomasa del frijol, la adición de bioestimulantes tuvo un efecto cuadrático, con dosis cercanas a 0.2 ml kg-1 mostrando mayor capacidad de incremento en las variables analizadas.

En la Argentina, entre los problemas sanitarios que afectan al cultivo de tomate (Solanum lycopersicum), se encuentran los fitonematodos. Actualmente, se usan fumigantes y nematicidas, siendo más complejo su control a partir del compromiso del país de eliminar el uso de bromuro de metilo. Como alternativa de bajo impacto ambiental, que garantiza la sustentabilidad del sistema, se encuentra la aplicación de elicitores y, entre ellos las hormonas vegetales. El Ácido Salicílico (AS), el Ácido Jasmónico (AJ) y el Etileno (ET) son hormonas vegetales que intervienen en todos los procesos de crecimiento e inducción de defensas de las plantas. La hipótesis de esta tesis fue: “La aplicación de hormonas induce o favorece la defensa de las plantas frente al ataque de Nacobbus aberrans, que disminuye la eficacia biológica y permite la producción de tomate en suelos infestados con este nematodo, sin aplicación de nematicidas o plaguicidas”; planteándose como objetivos generales: 1. comprobar, entender y desarrollar la Resistencia Sistémica Adquirida (RSA) y la Resistencia Sistémica Inducida (RSI), mediante la aplicación de hormonas en el sistema radical de plantines, trasplantados en suelos infestados con Nacobbus aberrans, 2.cuantificar el efecto del costo de la eficacia biológica, y 3. medir el rendimiento y sus componentes en un cultivo de tomate tratado con hormonas bajo condiciones de invernáculo. Se condujeron en forma consecutiva tres ensayos en maceta y uno sobre el suelo, todos en un invernáculo metálico de 24 por 40 m, en la Estación Experimental Julio Hirschhorn, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, UNLP (33º56'42,6”S, 60º33'35,6”W), utilizando tomate cv. Elpida. Para los ensayos en maceta se planteó un diseño enteramente aleatorizado con 5 repeticiones, mientras que en el campo el diseño fue en bloques completos aleatorizados con 4 repeticiones. Los datos se sometieron a análisis de la varianza y prueba de Tukey (p, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas Raspberry is consumed fresh or industrialized, it contains polyphenols and anthocyanins with health benefits. Worldwide, Mexico contributes 15% of production, but in the country there are no varieties of its own that satisfy the climatic requirements of the producing region in the state of Michoacán, and it is necessary to generate varieties that adapt to them; the application of biotechnological techniques such as organogenesis are useful genetic improvement techniques. Auxins and cytokinins are very important growth regulators in this process, since before using any biotechnological breeding method it is necessary to have an efficient regeneration protocol. In this study, different doses and combinations of growth regulators were used to induce direct organogenesis from foliar explants on five raspberry genotypes; 'C-6', 'Joan J.', 'A-1', 'UMC-702' and 'Her'. According to the results obtained, it was determined that the BAP regulator decreased the oxidation of the explants in the genotypes 'C-6', 'Joan J.', 'A-1' and 'Her' in 36, 48, 60 and 68% respectively with reference to the control treatment; CIN decreased oxidation in genotypes 'C-6' (56%) and 'Joan J.' (28%) while TDZ had an effect on reducing oxidation of the five genotypes evaluated (72, 64, 72, 84 and 68% respectively with reference to the control treatment). The genotypes evaluated responded differently to the stimulation of organogenesis with the different growth regulators; the induction of regeneration was efficient with the use of TDZ in the five genotypes evaluated, as well as in the multiplication of the shoots. La frambuesa se consume en fresco o industrializada, contiene polifenoles y antocianinas con beneficios para la salud. A nivel mundial, México aporta 15 % de la producción, pero en el país no hay variedades propias que satisfagan los requerimientos climáticos de la región productora en el estado de Michoacán, y es necesario generar variedades que se adapten a éstas; por lo cual se puede recurrir a la aplicación de técnicas biotecnológicas como la organogénesis, que son útiles en los procesos de mejoramiento genético. Las auxinas y las citocininas son reguladores de crecimiento de gran importancia en este proceso, pues antes de utilizar cualquier método biotecnológico de mejoramiento es necesario contar con un protocolo eficiente de regeneración. El objetivo de esta investigación fue obtener información sobre la regeneración in vitro y las características morfológicas de genotipos de frambuesa (Rubus idaeus L.). Para esto se utilizaron diferentes dosis y combinaciones de reguladores de crecimiento para inducir organogénesis directa a partir de explantes foliares en cinco genotipos de frambuesa; ‘C-6’, ‘Joan J.’, ‘A-1’, ‘UMC-702’ y ‘Her’. De acuerdo a los resultados obtenidos, se determinó que el regulador BAP disminuyó la oxidación de los explantes en los genotipos ‘C-6’, ‘Joan J.’, ‘A-1’ y ‘Her’ en 36, 48, 60 y 68 % respectivamente con referencia en el tratamiento testigo; la CIN disminuyó la oxidación en los genotipos ‘C-6’ (56 %) y ‘Joan J.’ (28 %) mientras que TDZ tuvo efecto en la disminución de la oxidación de los cinco genotipos evaluados (72, 64, 72, 84 y 68 % respectivamente con referencia en el tratamiento testigo). Los genotipos evaluados respondieron de manera distinta a la estimulación de la organogénesis con los diferentes reguladores de crecimiento; la inducción de la regeneración fue eficiente con el uso de TDZ en los cinco genotipos evaluados, así como en la multiplicación de los brotes.

"El presente trabajo se divide en tres capítulos, la primera describe el incremento del rendimiento del epímero 20 de estructura (20R)-22-oxocolestánica, a partir del compuesto 18, mediante creación de emulsiones que contienen nano gotas, promovidas por el uso de agitadores de alto cizallamiento a temperatura y presión ambiente, reduciendo tiempo, costos y sin la presencia de auxiliares quirales (Esquema A)."

La orquídea Epidendrum ibaguense es una especie endémica de Colombia la cual se encuentra en peligro de extinción, debido a su extracción ilegal y la pérdida de hábitat de la especie. La técnica de cultivo de tejidos vegetales in vitro es una herramienta para la propagación de especies, donde puede mejorarse la eficacia de la germinación, el crecimiento y desarrollo con fines de investigación y conservación. En este trabajo, se determinó el regulador de crecimiento más apropiado para inducir la formación de raíces en E. ibaguense cultivado in vitro. Para esto se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de los reguladores de crecimiento ANA, IBA, AIA, 2,4-D. El regulador que produjo la mayor inducción de raíces fue ANA en concentraciones de 1.0 5.0 y .0 2 mgL-1, seguido de IBA en concentración de 1.0 mgL-1. Adicionalmente, se evaluó el efecto de cuatro mezclas de sustratos en el desarrollo de estas plántulas sin raíz. Las mezclas fueron: fibra de coco: turba 1:1, fibra de coco: turba: compost 1:1: 0,2, fibra de coco: turba: compost 1:1: 0,5, fibra de coco: cascarilla de arroz quemada 1:1. Se obtuvo 80% de sobrevivencia de las plántulas sembradas en su fase de endurecimiento con la mezcla fibra de coco: turba 1:1. 1. RESUMEN 5 2. INTRODUCCIÓN. 5 3. MARCO DE REFERENCIA 7 3.2. Cultivo de tejidos vegetales in vitro 9 3.3. Cultivo in vitro en orquídeas. 9 3.4. Hormonas. 10 3.5. Reguladores de crecimiento. 10 3.6. Auxinas. 10 4. Objetivo General. 11 5. METODOLOGÍA. 11 5.1 Material vegetal 11 5.2. Inducción de raíces in vitro 12 5.3. Evaluación de sustratos en endurecimiento. 12 6. RESULTADOS y discusión. 13 6.1. Inducción de raíces in vitro 13 6. 2. Regulador de crecimiento ANA. 14 6. 3 Regulador de crecimiento IBA. 16 6.4. Regulador de crecimiento AIA (ácido indol-3-acético). 18 6.5. Regulador de crecimiento 2,4-D 20 7. Evaluación de sustratos en endurecimiento. 21 8. CONCLUSIONES 23 9. BIBLIOGRAFIA. 25 The Epidendrum ibaguense orchid is an endemic species of Colombia which is in danger of extinction, due to its illegal extraction and the loss of habitat of the species. The in vitro plant tissue culture technique is a tool for the propagation of species, where the effectiveness of germination, growth and development can be improved for research and conservation purposes. In this work, the most appropriate growth regulator was determined to induce root formation in E. ibaguense grown in vitro. For this, the effect of different concentrations of the growth regulators ANA, IBA, AIA, 2,4-D was evaluated. The regulator that produced the greatest root induction was ANA in concentrations of 1.0 5.0 and .0 2 mgL-1, followed by IBA in concentration of 1.0 mgL-1. Additionally, the effect of four substrate mixtures on the development of these rootless seedlings was evaluated. The mixtures were: coconut fiber: 1: 1 peat, coconut fiber: peat: 1: 1: 0.2 compost, coconut fiber: peat: 1: 1: 0.5 compost, coconut fiber: rice husk burned 1: 1. 80% survival of the seedlings sown in their hardening phase was obtained with the coconut fiber: peat 1: 1 mixture. Pregrado

Fil: Malovini, Emiliano. Becario Posdoctoral. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)-Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Almirante Brown 500. Chacras de Coria. Mendoza. M5528AHB. Argentina. Fil: Arancibia, Celeste. Becario Doctoral. Universidad Nacional de Cuyo-Corporación Vitivinícola Argentina (COVIAR). Fil: Durán, Martín. Becario Doctoral. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Fil: Fontana, Ariel. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Biología Agrícola de Mendoza (IBAM). Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Grupo de Bioquímica Vegetal. Fil: De Rosas María Inés. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Fisiología Vegetal. Instituto de Biología Agrícola (IBAM) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Fil: Deis, Leonor. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Fisiología Vegetal. Instituto de Biología Agrícola (IBAM) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Fil: Gargantini, Raquel. Instituto Nacional de Vitivinicultura (INV). Mendoza. Argentina. Av. San Martín 430. Mendoza. Argentina. Fil: Bottini, Rubén. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Instituto de Biología Agrícola de Mendoza (IBAM). Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Fil: Cavagnaro, Bruno. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Fisiología Vegetal. Instituto de Biología Agrícola (IBAM) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Fil: Martínez. Liliana. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Ciencias Agrarias. Laboratorio de Fisiología Vegetal. Instituto de Biología Agrícola (IBAM) Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET). Berry skins from red grape cultivars contain significant amounts of polyphenols that contribute to wine quality and provide health benefits. These compounds can be elicited by plant hormones. The aim of this work was to increase the content of anthocyanins (ANT) and trans-resveratrol (T-RES) by application of abscisic acid (ABA) and methyl jasmonate (MeJA) in five red V. vinifera cvs. (Bonarda, Malbec, Syrah, Cabernet Sauvignon, and Pinot Noir), in two Argentinean contrasting growing regions (Santa Rosa and Valle de Uco). Results showed positive and differential effects of ABA and MeJA on the total ANT content for the diverse cultivars with changes in the proportions of blue and red ANT. ABA increased total ANT in both viticultural region, while MeJA had a positive effect only in Santa Rosa. Also, ABA and MeJA induced an accumulation of T-RES in different cultivars, regardless of the region; T-RES accumulation elicited by ABA was not previously described. This work brings out the possibility to use these hormones as practical tools to produce high-quality red wines in two contrasting viticultural regions. Sitio de la revista: http://revistas.uncu.edu.ar/ojs/index.php/RFCA/article/view/2731

Tésis Doctoral de la Facultad de Biología de la Universidad de Salamanca. Departamento de Fisiología Vegetal y del Instituto de Recursos Naturales y Agrobiología Agrobiología de Salamanca del Consejo Superior de Investigaciones Científicas. 206 p., Resumen: En esta tesis se intenta conocer las respuestas de aclimatación al CO2 elevado del intercambio gaseoso del dosel vegetal - hojas superiores iluminadas o inferiores sombreadas - del trigo en cultivos bajo cámaras de campo con cantidades diferentes de fertilizante nitrogenado. También se trata de averiguar el papel en la aclimatación de la absorción de nitrógeno y su reparto entre compuestos y órganos de la parte aérea de la planta. Y por último valorar si la citoquinina exógena, con su accción en la transpiración y otros procesos, influye en la ganancia de nitrógeno y su distribución en la parte aérea de la planta y modifica así la aclimatación fotosintética al CO2., This thesis aims at understanding the acclimation responses to elevated CO2 of gas exchange of the plant canopy - illuminated upper leaves and shaded lower leaves – of wheat crops with different amounts of nitrogen fertilizer under field chambers. Determining the role in acclimation of nitrogen uptake and its distribution among compounds and organs of the aerial parts of the plant is another objective. Finally, an aim of this thesis is to assess whether exogenous cytokinin, with its known effects on transpiration and other processes, affects the nitrogen gain and distribution in the aerial part of the plant, thus modifying photosynthetic acclimation to CO2.

Background: Mal de Río Cuarto virus (MRCV) infects several monocotyledonous species including maize and wheat. Infected plants show shortened internodes, partial sterility, increased tillering and reduced root length. To better understand the molecular basis of the plant-virus interactions leading to these symptoms, we combined RNA sequencing with metabolite and hormone measurements. Results: More than 3000 differentially accumulated transcripts (DATs) were detected in MRCV-infected wheat plants at 21 days post inoculation compared to mock-inoculated plants. Infected plants exhibited decreased levels of TaSWEET13 transcripts, which are involved in sucrose phloem loading. Soluble sugars, starch, trehalose 6-phosphate (Tre6P), and organic and amino acids were all higher in MRCV-infected plants. In addition, several transcripts related to plant hormone metabolism, transport and signalling were increased upon MRCV infection. Transcripts coding for GA20ox, D14, MAX2 and SMAX1-like proteins involved in gibberellin biosynthesis and strigolactone signalling, were reduced. Transcripts involved in jasmonic acid, ethylene and brassinosteroid biosynthesis, perception and signalling and in auxin transport were also altered. Hormone measurements showed that jasmonic acid, brassinosteroids, abscisic acid and indole-3-acetic acid were significantly higher in infected leaves. Conclusions: Our results indicate that MRCV causes a profound hormonal imbalance that, together with alterations in sugar partitioning, could account for the symptoms observed in MRCV-infected plants. Fil: de Haro, Luis Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentina Fil: Arellano, Sofía Maité. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentina Fil: Novák, Ondrej. Univerzita Palack; República Checa Fil: Feil, Regina. Max Planck Institute Of Molecular Plant Physiology; Alemania Fil: Dumón, Analía Delina. Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro de Investigaciones Agropecuarias. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Cordoba. Unidad de Fitopatologia y Modelizacion Agricola.; Argentina Fil: Mattio, Maria Fernanda. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Fitopatología y Fisiología Vegetal; Argentina Fil: Tarkowská, Danuse. Univerzita Palack; República Checa Fil: Llauger, Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina Fil: Strnad, Miroslav. Univerzita Palack; República Checa Fil: Lunn, John E.. Max Planck Institute Of Molecular Plant Physiology; Alemania Fil: Pearce, Stephen. State University of Colorado - Fort Collins; Estados Unidos Fil: Figueroa, Carlos Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina Fil: del Vas, Mariana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentina

Phytohormones govern plant physiology, environmental adaptation and phenotypic plasticity. Hormone auxin is critical for growth at every stage of plant’s life, from seed germination to fruit ripening. We investigated the relative roles of local auxin biosynthesis and polar transport in plant development using a variety of experimental approaches: pharmacological treatments with chemical inhibitors of auxin biosynthesis and transport, an array of auxin transport and production mutants, ectopic expression of auxin biosynthetic genes under the control of tissue-specific promoters, inducible CRE-LOX systems, recombineering-based whole-gene fusions with fluorescent protein reporters, and grafting. Our data indicate that local auxin biosynthesis acts redundantly and synergistically with auxin transport in the establishment and maintenance of robust morphogenic auxin maxima essential for root meristem activity, flower and leaf development. Plant architecture is, however, controlled by a combination of hormones. To enable monitoring of the sites of activity of several growth regulators at once, we are building tandems of compatible synthetic transcriptional sensors stacked in a single construct. Our collection of over a hundred GoldenBraid-compatible DNA parts includes synthetic hormone-responsive promoters, synthetic and viral core promoter elements and terminators, various fluorescent, luminescent and colorimetric markers, and subcellular localization signals. We have assembled and are testing the first ACE (auxin/cytokinin/ethylene) sensor, with the ultimate goal to multiplex the reporters for up to nine major growth regulators (ACE plus ABA, gibberellins, brassinosteroids, salicylic acid, jasmonate, and/or strigolactones), with an individual hormone readout distinguishable by fluorescent protein color and subcellular localization. Conferencia impartida con una ayuda de los fondos para conferenciantes del Departamento de Biología Molecular y Bioquímica Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

Spa: El objetivo de esta investigación fue evaluar el efecto de diferentes concentraciones de giberelinas (GA3) en el desarrollo temprano de Alnus acuminata y determinar si este tratamiento ofrece una pre-aclimatación bajo concentraciones de arsénico similares a las de los suelos de la minería del carbón. Semillas certificadas de A. acuminata fueron pre-embebidas en agua a 4 °C durante 24 horas y se sembraron en cajas con 16 tratamientos combinados de giberelinas (0, 80, 160 y 240 mg L-1) y arsénico (0, 3, 6 y 9 mg L-1). Se evaluó la germinación, la morfometría de los germinados, el desarrollo temprano y la biomasa final de plántulas a los 30 días posteriores a la siembra. La cinética de germinación de A. acuminata se vio afectada por GA3 y arsénico. El GA3 aumentó en un 44 % la germinación, pero el arsénico aumentó el tiempo medio de germinación en un 10 %. Las concentraciones de 3 mg L-1 y 6 mg L-1 de arsénico tuvieron efectos negativos en la germinación y la longitud de la raíz, pero estos efectos no se observaron a 9 mg L-1 de arsénico. De hecho, el arsénico en esta concentración combinado con giberelina, aumentó la biomasa y el vigor de A. acuminata., Incluye bibliografía y webgrafía al final de cada capítulo., Maestría, Magister en Ciencias Biológicas

Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2019 Las plantas han podido conquistar la tierra gracias a su plasticidad fenotípica. Parte de esta capacidad se explica por la posibilidad de generar nuevas estructuras a lo largo de la vida. En el presente trabajo se abordo la importancia de dos genes de la familia AZG (AtAzg1 y AtAzg2 ) en el desarrollo radical. Los antecedentes mostraban que estos genes codifica para potenciales transportadores de purinas y de algunos de sus derivados como las citoquininas. Ademas, experimentos realizados en Arabidopsis thaliana, señalaron que podrian estar relacionados con la regulacion de la arquitectura radical en estrecha relacion con los sistemas hormonales de plantas. Partiendo de esta base, nos propusimos en primer lugar comprender el origen de la familia genica especialmente en relacion con los sistemas de señalizacion hormonal. Mediante la busqueda de secuencias relacionadas en el grupo de Viridiplantae, se pudo obtener el primer arbol logenetico con los potenciales homologos de los genes de A. thaliana. La posibilidad de contar con un arbol permitido avanzar sustancialmente en el conocimiento acerca de la evolucion de esta familia genica. Se pudo relacionar la diversi cacion de la familia con eventos especificos como la conquista de la tierra y la aparicion de la raiz, asi como tambien se observo que los origenes de algunos sistemas de señalizacion coinciden con los de la familia genica AZG. Por otro lado, contar con gran numero de genes homologos de la familia, nos permite poner en relevancia secuencias altamente conservadas, asi como señalar regiones que expliquen las diferencias entre las variantes de los distintos genes de la familia AZGs. En el presente trabajo se continuo con la caracterizacion de los miembros de AZG de A. thaliana, AtAZG1 y AtAZG2, al estudiar la capacidad de ambos transportadores de interactuar con otras proteinas en el sistema de expresion heterologo de levaduras. Para ello, se realizaron ensayos de interaccion usando la tecnica de Split Ubiquitin System. En primer lugar, se pudo establecer que los transportadores son capaces de interactuar tanto consigo mismos como con el otro miembro de la familia. Es decir, se observaron asociaciones del tipo AZG1-AZG1, AZG2-AZG2 y AZG1-AZG2. Por otro lado, result o de inter es conocer la capacidad de estos transportadores de interactuar con algunos miembros de la cascada de senalizacion por citoquininas, por lo que se seleccionaron como candidatos los receptores y las fosfotransferasas. Si bien la interaccion de estas proteinas con AZGs habria resultado un interesante mecanismo de respuesta rapida para la regulacion del transporte de la hormona, no se observo interaccion entre AZGs con receptores de citoquininas y la interaccion con las fosfotransferasas no fue concluyente. A continuacion, se estudio el rol de estos transportadores en plantas. En primer lugar, se avanzo en la caracterizacion de la expresion de AZG1. Se pudo determinar que este gen se expresa en diversos organos y tejidos y que es inducible por exposicion a citoquininas. El estudio de distintas lineas mutantes del gen AtAzg1, mostraron que no existen diferencias evidentes en sus fenotipos al crecer en condiciones estandar. Sin embargo, motivados por observaciones hechas durante la descripcion de la expresion, se estudio la importancia del gen en la dominancia apical radical. Gracias a esto, se determino que AZG1 es importante para regular la regeneracion del sistema radical tras la escision del meristema apical radial. Para continuar el estudio de la relacion de este gen con citoquininas, se estudio como se desarrollan los mutantes del gen en presencia de la hormona. Se pudo determinar que la arquitectura radical era distinta en lineas carentes del gen, asi como en lineas que lo sobreexpresan, especialmente en el largo de la raiz principal. Para asegurar que esta diferencia se debe a la actividad de transportador se complementaron lineas deficientes en el transportador (knock-out), las cuales recobraron el fenotipo salvaje. Por otro lado se continuo con la caracterizacion de AZG2 en plantas. Si bien existian estudios previos sobre la expresion del gen, en el presente trabajo se pudieron profundizar y determinar que su expresion esta limitada solamente en un pequeño grupo de celulas rodeando los primordios de raiz lateral, correspondientes a la corteza y la epidermis. Ademas, se determino que existe otro dominio de expresion del gen en semillas en proceso de germinacion . Retomando su relacion con hormonas, se observo que en lineas knock-out mediante el reportero de citoquininas ARR5pro:GUS existan diferencias en la señalizacion, especialmente tras la aplicacion de la hormona. Esta diferencia en la señalizacion pudo ser cuantificada mediante el reportero de citoquininas TCSnpro:GFP. Este reportero mostro que lineas que no tienen AZG2 presentan menor actividad de citoquininas, relacionando asi los fenotipos descritos previamente para estas lineas al deficit en la señalizacion. Finalmente, se abordo el estudio de la localizacion subcelular de los transportadores mediante el uso de proteinas AZG fusionadas a proteinas uorescentes. AZG1 present o una clara localizacion en la membrana plasmatica en las distintas fusiones con proteinas uorescentes evaluadas. Por otro lado, la fusion con AZG2 fue localizada en la membrana plasmatica, aunque tambien se observo señal en el citosol. Mediante el uso de distintas construcciones y observando distintos tejidos, se pudo estimar que se tratara de reticulo endoplasm atico. Los resultados obtenidos en el presente trabajo permiten profundizar el conocimiento sobre el vinculo entre estos transportadores y la señalizacion hormonal en plantas. Se lograron establecer modelos que nos permiten explicar la actividad de ambos transportadores, contemplando su posicion en el contexto de señalizacion, su dominio de expresion asi como su localizacion y su relacion con otras vias de señalizaci on. Como perspectivas, el estudio permitio abrir nuevas puertas a proyectos de investigacion en curso que apuntan hacia el mejor entendimiento de la regulacion de la arquitectura radical. 2022

Every aspect of a plant life cycle, from germination to senescence, is coordinated by a small group of plant hormones. These small molecules do not work in isolation but through a complex network of interactions. In order to uncover the intricate interactions between different plant hormones, we have implemented a variety of technological tools, among them recombineering, ribosome footprinting or Ribo-seq), and high-throughput imaging. A brief overview of these technologies and their application to study the interaction between ethylene and auxin will be presented. Conferencia financiada con una ayuda del fondo para conferenciantes del Departamento de Biología Molecular y Bioquímica Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

Este artículo se encuentra disponible en la siguiente URL: https://www.mdpi.com/2076-3921/9/10/1023 Este artículo pertenece al número especial "Antioxidants in Veterinary medicine". Reproduction is a complex process that is substantially a ected by environmental cues, specifically feed/diet and its components. Farm animals as herbivorous animals are exposed to a large amount of polyphenols present in their natural feeding system, in alternative feed resources (shrubs, trees, and agro-industrial byproducts), and in polyphenol-enriched additives. Such exposure has increased because of the well-known antioxidant properties of polyphenols. However, to date, the argumentation around the impacts of polyphenols on reproductive events is debatable. Accordingly, the intensive inclusion of polyphenols in the diets of breeding animals and in media for assisted reproductive techniques needs further investigation, avoiding any source of reproductive waste and achieving maximum benefits. This review illustrates recent findings connecting dietary polyphenols consumption from di erent sources (conventional and unconventional feeds) with the reproductive performance of farm animals, underpinned by the findings of in vitro studies in this field. This update will help in formulating proper diets, optimizing the introduction of new plant species, and feed additives for improving reproductive function, avoiding possible reproductive wastes and maximizing possible benefits.

1 recurso en línea (páginas 416-424)., The tomato fruit is rich in antioxidant compounds and has great nutritional and economic importance, annually promoting research on the nutritional and productive characteristics. The present study aimed to evaluate whether foliar application of commercial products based on growth regulators [auxin, cytokinin and gibberellin (Ax+CK+GA)], micronutrients [cobalt and molybdenum (Mi)] and mixtures of macro and micronutrients [nitrogen, boron, copper, molybdenum and zinc (Ma+Mi)], isolated and in combination, increase productivity and improve the post-harvest quality of tomato fruits (Predador F1). The experiment design used randomized blocks, with seven treatments and four repetitions, which were (T1) control; (T2) Ax+CK+GA; (T3) Ma+Mi; (T4) Mi; (T5) Ax+CK+GA + (Ma+Mi); (T6) Ax+CK+GA + Mi; and (T7) Ax+CK+GA + Mi + (Ma+Mi). The variables production, precocity, soluble solids content (SS), titratable acidity (TA), ratio (SS/TA), pH, total soluble sugars, ascorbic acid and weight loss were evaluated. The Ax+CK+GA application, isolated or in combination with Ma+Mi, promoted the precocity, and the use of isolated Ax+CK+GA and Mi improved the tomato plant productivity. The growth regulators, macro and micronutrients, isolated or in combination, increased the ascorbic acid content in the fruits., El tomate es un fruto rico en compuestos antioxidantes y tiene gran importancia nutricional y económica; anualmente se promueve investigaciones relacionadas con las características nutricionales y productivas. El objetivo de este estudio fue evaluar si la aplicación foliar de productos comerciales a base de reguladores vegetales [auxina, citocinina y giberelina (Ax+CK+GA)], micronutrientes [cobalto y molibdeno (Mi)] y mezcla de macro y micronutrientes [nitrógeno, boro, cobre, molibdeno y zinc (Ma+Mi)], de forma individual y combinada, sobre el aumento de la productividad y mejora de la calidad poscosecha de los frutos de tomate (Predador F1). El diseño experimental consistió en bloques al azar, con siete tratamientos y cuatro repeticiones, siendo (T1) control; (T2) Ax+CK+GA; (T3) Ma+Mi; (T4) Mi; (T5) Ax+CK+GA + (Ma+Mi); (T6) Ax+CK+GA + Mi; (T7) Ax+CK+GA + Mi + (Ma+Mi). Se evaluaron las variables producción, precocidad, contenido de sólidos solubles (SS), acidez titulable (AT), relación SS/AT, pH, azúcares solubles totales, ácido ascórbico y pérdida de peso. La aplicación de Ax+CK+GA de forma individual o combinada con Ma+Mi promovió la precocidad, mientras el uso de Ax+CK+GA y Mi, de forma separada, mejoró la productividad del tomate. Los reguladores de crecimiento y los macro y micronutrientes, separados o combinados, proporcionaron un aumento en el contenido de ácido ascórbico en los frutos., Bibliografía y webgrafía: páginas 422-424

Es objeto de este trabajo es dar a conocer las posibilidades que el empleo de diferentes técnicas y productos ofrecen al cultivo de los cítricos. En esta línea y en la labor de transferencia del IFAPA, se presentan los resultados obtenidos de un ensayo experimental en el que se evaluó el rayado y el empleo de fitorreguladores, de origen natural, en la mejora del cuajado de `Navel Powell´.

[spa] El fósforo es un macroelemento esencial para el desarrollo y crecimiento de todas las plantas. Sin embargo, el fósforo inorgánico (Pi), forma asimilable por las plantas, es cada vez más escaso en los suelos naturales y es el limitante más importante para las plantas en suelos calcáreos. La deficiencia del Pi afecta enormemente al estado fisiológico de la planta, activando sus mecanismos de respuesta al estrés. Por ello, la presente tesis se centrará fundamentalmente en el papel de la vitamina E, potente antioxidante en plantas, y en la producción de jasmonatos, hormonas de respuesta a estrés, ante la distinta disponibilidad de Pi. En la presente tesis se observó que la vitamina E (siendo el α-tocoferol la forma más abundante en hojas) juega un papel importante en el control de la longevidad de las plantas y sus efectos dependen de la disponibilidad de Pi. En concreto, el α-tocoferol incrementó la longevidad y previno la senescencia de las plantas en condiciones control, exceso de Pi o de disponibilidad leve de Pi, mientras que aceleró la senescencia ante una deficiencia muy severa de Pi. Por otro lado, observamos que la vitamina E participa activamente en la señalización celular. La vitamina E afecta, a través del control de la peroxidación lipídica, a la síntesis de diversas hormonas que derivan de hidroperóxidos lipídicos, como los jasmonatos que participan directamente en la señalización celular. Además, la deficiencia en α-tocoferol conlleva una reprogramación transcripcional de numerosos factores de transcripción relacionados con el crecimiento y las defensas químicas (muchos de ellos asociados a la síntesis de etileno), lo cual se observó tras el análisis de 1.880 factores de transcripción en la planta modelo Arabidopsis thaliana. De modo que la presencia o ausencia de α-tocoferol cambia la expresión de muchos factores de transcripción esenciales para el desarrollo y crecimiento de la planta. Además, la vitamina E tiene una papel importante en la regulación del metabolismo de ácidos grasos y puede ayudar al intercambio de señales del cloroplasto al núcleo, sugiriendo que la vitamina E influye en la señalización retrógrada. También se ha abordado el estudio del efecto del priming, o efecto memoria ante un estrés reiterado, debido a que en la naturaleza los estreses y las deficiencias nutricionales suelen ser recurrentes. En nuestros estudios se han observado efectos del priming en los niveles de transcripción de 45 factores de transcripción fuertemente asociados con el crecimiento y estrés. Además, la exposición reiterada de la deficiencia de Pi o priming, ha producido un gran incremento de α-tocoferol, remarcando la idea del papel fundamental que desempeña frente a la distinta disponibilidad de Pi. Por otro lado, nos hemos centrado en el papel de los jasmonatos, hormonas vegetales de respuesta a estreses bióticos y abióticos. Los mutantes deficientes en vitamina E estudiados, con menor crecimiento que las plantas con α-tocoferol, sintetizan mayores cantidades de jasmonatos, sugiriendo un compromiso (trade-off) entre activar los mecanismos de fotoprotección y su crecimiento, con la capacidad de activar las defensas bióticas o químicas en la planta. Resulta curioso que las plantas deficientes en vitamina E presenten especialmente valores más altos de ácido 12-oxo-fitodienoico (OPDA), precursor del resto de jasmonatos. Dicho incremento del OPDA también se observó en la ortiga (Urtica dioica), fundamentalmente en plantas hembras. Ello sugiere que, además de ser el precursor de los jasmonatos, el OPDA podría desempeñar un papel defensivo y específico en plantas hembras de ortigas y en plantas de Arabidopsis deficientes en vitamina E. Nuestros resultados muestran además un marcado dimorfismo sexual secundario en términos de fotoinhibición, estrés oxidativo y fotoprotección en la ortiga junto a cambios en el sex-ratio según la disponibilidad de Pi., [eng] Phosphorus is a macroelement essential for the development and growth of all plants. Phosphorus deficiency causes many symptoms in plants, activating their stress response mechanisms. The response of stress in plants is usually based on the level of antioxidants produced and the synthesis of endogenous hormones. We studied the role of vitamin E, an important antioxidant in plants, and the production of jasmonates, a stress response hormone, in response to phosphorus availability. Vitamin E played an important role in controlling longevity, depending on the phosphorus availability. α-Tocopherol increased longevity and prevented senescence in plants under control conditions, excess phosphorus or mild phosphorus starvation. However, α-tocopherol accelerated senescence under severe phosphorus deficiency. Furthermore, vitamin E deficiency increased jasmonates levels, suggesting a trade-off between activating the mechanism of photoprotection and the activation of biotic or chemical defences in plant. A reduced growth and photoprotection in vitamin E mutant´s favours the capacity to synthesize chemical defences, such as jasmonates under abiotic stress conditions, thus suggesting again, a trade-off between growth, photoprotection and chemical defences. Conversely, vitamin E plays a major role in the regulation of fatty acid metabolism and could help transfer signals from chloroplast to the nucleus, suggesting vitamin E influences retrograde signalling. In addition, there are effects of priming on the transcript levels of 45 genes encoding, transcriptions factors mainly associated with growth and stress in wild-types plants in response to low phosphorus availability. Therefore, it appears α-tocopherol not only protects plants from photo-oxidative stress under phosphorus availability, but also controls defence-related transcriptional reprogramming and hormonal modulation. On the other hand, an increased nutrient availability in the soil can alleviate photoinhibition and photo-oxidative stress in the leaves of drought stressed nettle plants, especially in females. Sexratio increased under reduced phosphorus availability, increasing the number of females over males, probably because females are the most vulnerable gender under stress conditions. Females enhanced 12-oxo-phytodienoic acid contents under reduced phosphorus availability. This increase was, however, not accompanied by increases in other jasmonates, thus suggesting specific defensive roles for 12-oxo-phytodienoic acid in females.

Es una comunicación a un Congreso Internacional de primera línea en el campo objeto de la Tesis Doctoral de Álvaro García Brassinosteroids (BRs) is a group of steroidal hormones that play critical roles in multiple aspects of plant growth and development. BR stimulation at the PM receptors initiates a series of phosphorylation events enabling the nuclear accumulation and activity of the key transcription factor BZR1 and BES1. Previous studies have shown that all BR components associate form an interconnected signaling pathway, although it is not known how these proteins are brought together for the prompt signal transduction upon BR perception. Here we report that plant-specific Tetratricopeptide Thioredoxin-Like TTL proteins are positive regulators of BR signaling functioning as a scaffold of the BR pathway in Arabidopsis. TTL3 interacts with most core components involved in transducing BR signaling, BRI1, BSK1, and BIN2 kinases, the BSU1 phosphatase and the transcription factors BZR1 and BES1. Consistent with this role in BR signaling, mutations in TTL1, TTL2, and TT4 genes cause reduced BR responses, defects that are highly enhanced in a triple ttl1/ttl3/ttl4 mutant. We also show that a functional TTL3-green fluorescence protein is mainly localized in the cytoplasm and that BR treatment increases the association to the plasma membrane. We also show that the cytoplasmic/plasma membrane localization of a functional TTL3-green fluorescence protein is dependent on BR. We propose a novel mechanistic model for optimized BR signaling, in which cytoplasmic/nuclear BR components bound to TTL proteins are translocated to the plasma membrane upon BR perception, which in turn allow the assembly of a BR signaling complex with the goal of ensuring TF de-phosphorylation and nuclear accumulation of the transcription factors. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech. This work was supported by grants from: (1) Ministerio de Ciencia e Innovación AGL2013-48913-C2-2-R and BIO2014-55380-R; (2) Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (BES-2015-071256)

En el capítulo 1 de esta Tesis Doctoral se analizó la regulación transcripcional de distintos marcadores asociados a las diferentes rutas hormonales en raíces de plantas de tomate infectadas por Phelipanche ramosa durante los estadíos iniciales de la infección. En el capítulo 2 se investiga más detenidamente el papel que podrían desempeñar las SLs en la regulación de la respuesta de defensa en la planta frente a patógenos. Para ello, se analizó el efecto de distintos tipos de patógenos fúngicos, tanto de parte aérea como de raíz, en plantas de tomate deficientes en SLs junto con respecto a sus silvestres. En el capítulo 3, se estudió una posible interacción de las SLs y el JA en la regulación de la ramificación del tallo. Para ello, se realizó un análisis de la ramificación aérea total en diferentes plantas de tomate alteradas en JA (spr1, spr2 y jai1), detectándose únicamente una mayor ramificación en plantas spr2 respecto a su silvestre. En el capítulo 4, mediante el tratamiento con sistemina exógena en plantas ps- observamos un efecto directo de la sistemina en la producción de SLs tanto a nivel hormonal como transcripcional en condiciones de alta producción de SLs, In Chapter 1, we analysed the transcriptomic regulation of molecular markers associated to different hormonal pathways in roots of tomato plants infected by Phelipanche ramosa during the initial stages of infection. In Chapter 2, the potential role of SLs in plant defence has been explored in more detail. To this end, the resistance/susceptibility of different SL-deficient tomato plants against different fungal – shoot- and root-borne – pathogens was analysed. It was observed that the SL-deficient plants Slccd8 and Slccd7 were more susceptible to the necrotrophic pathogen Botrytis cinerea than their corresponding wild-types. In Chapter 3, the possible interaction between SLs and JA in shoot branching regulation was investigated. The total number of branches in different tomato plants altered in JA levels or signalling (spr1, spr2 and jai1) was analysed, only detecting a greater branching in spr2 plants respect to the wild-type. In Chapter 4, after exogenous application of systemin into psplants grown under low Pi conditions, an increase in SL levels was observed. In addition, the expression of molecular markers for SL biosynthesis was promoted by the treatment with systemin., Tesis Univ. Granada. Programa Oficial de Doctorado en: Biología Fundamental y de Sistemas, Beca predoctoral FPI del Ministerio de Ciencia e Innovación., Beca de movilidad FPI para estancias breves del Ministerio de Ciencia e Innovación.

Cyrtochilum loxense (Lindl.) Kraenzl. is an endemic and seriously endangered orchid species endemic in the Loja Province (Southern Ecuador). The main goals of this research were to analyze how culture media, plant growth regulators and photoperiod affect the growth of C. loxense. Eight month old plants (approximate 1 – 1.5 cm in height) obtained by in vitro germination, were cultivated on MS media or Knudson C; MS with three levels of naphthalene acetic acid (NAA) and 6-benzylaminopurine (BAP) (2/0.5; 1/0.5 y 0.5/ 0.5 mg-1L); and three photoperiodic regimes (24/0, 16/8, 8/16 h) on MS with and without plant growth regulators. No significant differences of shoot induction were observed on media with or without plant growth regulators, and all tested photoperiods. The highest growth (1.2 cm) was observed in plantlets cultivated on growth regulator-free media with a 16/8 photoperiod. Also the shoot and root formation was better in this species in absence of plant growth regulators. Probably this response is due to the endogenous hormone levels in the tissues or due to the kind and concentrations of PGRs used were too low to induce positive morphogenetic responses., Cyrtochilum loxense (Lindl.) Kraenzl. es una orquídea endémica y críticamente amenazada, distribuida en la provincia de Loja (Sur del Ecuador). Los objetivos principales de esta investigación fueron analizar la influencia del medio de cultivo, reguladores de crecimiento vegetal y fotoperíodo en el crecimiento de C. loxense. Plantas de ocho meses (altura aproximada de 1 – 1.5 cm.) obtenidas por germinación in vitro, fueron cultivadas en medio MS y Knudson C; medio MS con tres niveles de ácido naftalen acético (ANA) y 6-bencil amino purina (BAP) (2/0.5; 1/0.5 y 0.5/ 0.5 mg-1L); y tres fotoperíodos (24/0, 16/8, 8/16 h) en MS con o sin reguladores de crecimiento vegetal (RCV). No se observaron diferencias significativas en la inducción de brotes en medio con o sin RCV, entre todos los fotoperíodos testados. El tamaño más grande (1.2 cm) se registró en plántulas cultivadas en medio libre de reguladores de crecimiento vegetal, incubadas en un fotoperíodo de 16/8. Además, la mayor brotación y enraizamiento se observó para esta especie en medio libre de reguladores de crecimiento vegetal. Probablemente esta respuesta es debida a los niveles endógenos de hormonas vegetales en el tejido o el nivel de RCV usado fue muy bajo para inducir alguna respuesta morfogénica.

[ES] En nuestro laboratorio hemos iniciado el estudio del papel de la hormona giberelina (GA) en la formación de los óvulos de tomate. Mediante el análisis de mutantes, con alteraciones en los niveles hormonales o en su respuesta, hemos determinando que las giberelinas influyen negativamente en el número de óvulos que se forman dentro del ovario. La formación de los óvulos en la especie Arabidopsis también depende de otras hormonas como auxinas, citoquininas y brasinosteroides que tienen un efecto positivo sobre el número de óvulos. Utilizando mutantes de tomate que presentan alteraciones en la respuesta a auxinas (dgt y ent), pretendemos estudiar como influye esta hormona en la formación de los óvulos dentro del ovario y como actúan para determinar su número. Para ello estudiaremos el número y la morfología de los óvulos en los distintos mutantes mediante cortes frescos con un vibratomo. Además, realizaremos cuantificaciones hormonales por espectrometría de masas acoplada a cromatografía liquida (LC-MS) para determinar si la auxina (IAA) u otras hormonas con las cuales ésta puede interaccionar, como las giberelinas (GAs) o citoquininas (CKs), están alteradas en los ovarios en desarrollo., [EN] Plant ovule development is a very important factor in agriculture from an economic point of view, as it limits the number of available seeds, and consequently the crop yield. The aim of the proyect is to determine the role of auxin (AUX) in ovule formation and their interaction with other hormones in tomato (Solanum lycopersicum) For this, two tomate mutants which have altered auxin response (dgt and ent) are used, employing the parental introgession, the cv. Micro-Tom (MT), as control line. There have been conducted studies of the of ovules and ovaries. Hormonal quantifications are also performed by mass spectrometry coupled to liquid chromatography (LC-MS) as well as, auxin localization studies of auxin in flowers with different stages of development by GUS assays in lines DR5:GUS. The results suggest that there may be an interaction of auxin with the hormones salicylic acid (SA) and jasmonic acido (JA) at signaling level. And, finally, auxin may have a role in regulating the number of ovules and size, and consequently the number of seeds.

[ES] En nuestro laboratorio hemos iniciado el estudio del papel de las hormonas vegetales en la formación de los óvulos de tomate. Mediante el análisis de mutantes, con alteraciones en los niveles hormonales o en su respuesta, hemos determinando que las giberelinas influyen negativamente en el número de óvulos que se forman dentro del ovario. La formación de los óvulos en la especie Arabidopsis también depende de otras hormonas como auxinas, citoquininas y brasinosteroides que tienen un efecto positivo sobre el número de óvulos. Utilizando mutantes de tomate que presentan alteraciones en los niveles de la hormona brasinosteroide (BR) pretendemos estudiar como influye esta hormona en la formación de los óvulos dentro del ovario y como actúa para determinar su número. Para ello estudiaremos el número y la morfología de los óvulos en los ovarios, de las líneas mutante y su control isogénico (D+ / d-), mediante cortes frescos con un vibratomo. Además, realizaremos cuantificaciones hormonales por espectrometría de masas acoplada a cromatografía liquida (LC-MS) para determinar si alguna de las hormonas, que en Arabidopsis regula la formación de los óvulos; como la auxina (IAA), giberelinas (GAs) o citoquininas (CKs), están alteradas en los ovarios en desarrollo., [EN] The study of ovules development in plants is extremely important in agriculture from an economic point of view, due to the fact that ovules give rise to available number of seeds in the fruit, which limits the crops yield. This project was focused on substantiating if, just like in the Arabidopsis species, brassinosteroids (BRs) regulate the ovules formation in tomato (Solanum lycopersicum), affecting the number of ovules positively. Two tomato lines related with brassinosteroids were employed to carry out this study: DWARF line was provided with a normal content of BRs and Micro-Tom (MT) variety deficient in BRs. The morphology and the number of ovules in the ovaries were studied using these lines. Furthermore, hormonal quantifications were done through mass spectrometry connected to liquid chromatography (LC-MS) to determine if BRs have an influence in the regulation of other hormones. Moreover, the localization of the auxins (IAA) were studied through GUS staining with MT-DR5::GUS and DWARF-DR5::GUS. Obtained results confirm that BRs regulate ovule and seed numbers positively, and as well as BRs interact with giberelins (GAs) and salicylic acid (SA) reducing and increasing their levels, respectively. However, interaction between BRs and auxins levels was not observed, and differences in the IAA localization in the ovaries could not be detected.

In this research protocols for the use of gibberellic acid (GA3), butyric indole acid (IBA) and kinetin (Kin) were established through in vitro culture of Epidendrum jamiesonis, Epidendrum schistochilum and Oncidium ornithorhynchum, native orchids of Ecuador. Firstly, ideal reference concentrations were calibrated by bioassay using Solanum lycopersicum. To establish a dynamic in the percentage of germination by adding gibberellins, orchid seeds were sown in the Knudson C Modified Medium Plus and 130 µL of each hormone solution were added, determining the ideal concentration of 0,1 mg/L for Epidendrum and 0,2 mg/L for Oncidium. In addition, the effect of IBA, Kin and the combination IBA x Kin was analyzed in protocorms of the species Epidendrum jamiesonis and Epidendrum schistochilum. These were planted in the Orchid Maintanance Medium and 130µL of hormone solution was added. Regarding the kinetin, an ideal concentration of 0,01 mg/L for shoot length and 0,4 mg/L for number of shoot were established. It was also determined that the point of auxin-cytokinin balance in Epidendrum schistochilum is 7,5 mg/L IBA x 0,1 mg/L Kin, but in Epidendrum jamiesonis is 3 mg/L IBA x 0,4 mg/L Kin. However, a better development in the number of shoot, root and leaf growth was observed when applying the combination of hormones solution than individually. En esta investigación se estableció los protocolos para el uso de ácido giberélico (GA3), ácido indol butírico (IBA) y kinetina (Kin) mediante el cultivo in vitro de Epidendrum jamiesonis, Epidendrum schistochilum y Oncidium ornithorhynchum, orquídeas nativas del Ecuador. En primera instancia se calibraron concentraciones ideales de referencia mediante bioensayos en Solanum lycopersicum. Luego se estableció la dinámica en el porcentaje de germinación de semillas mediante la adición de giberelinas en orquídeas, se sembraron semillas en medio Knudson C Modificado Plus y se agregó 130 µL de cada solución de hormonas, determinándose una concentración ideal de 0,1 mg/L para Epidendrum y 0,2 mg/L para Oncidium. Además se analizó el efecto de IBA, Kin y la combinación IBA x Kin en el desarrollo de protocormos de las especies Epidendrum jamiesonis y Epidendrum schistochilum sembrados en el medio “Orchid Maintanance Medium” adicionando 130 µL de solución de hormona. En el caso de Kin se estableció una concentración ideal de 0,01 mg/L para longitud de brotes y 0,4 mg/L para número de brotes. Asimismo se determinó que el punto de equilibro auxina-citoquinina en la especie E. schistochilum es 7,5 mg/L IBA x 0,1 mg/L Kin, mientras que E. jamiesonis presenta mejores resultados a 3 mg/L IBA x 0,4 mg/L Kin. No obstante, se definió que existe un mejor desarrollo en cuanto al número de brotes, crecimiento radicular y foliar en la combinación de hormonas que al aplicarlas individualmente.

[ES] En nuestro laboratorio hemos iniciado el estudio del papel de la hormonas vegetales en la formación de los óvulos de tomate. En Arabidopsis, las auxinas (IAA), las citoquininas (CKs) y los brasinosteroides (BRs) tienen un papel en la iniciacion y desarrollo de los ovulos. El papel de las giberelinas (GAs) no ha sido aun claramente establecido. Mediante el análisis de mutantes de tomate, con alteraciones en los niveles hormonales o en su respuesta, hemos determinado que las giberelinas influyen negativamente en el número de óvulos que se forman dentro del ovario. Este proyecto pretende estudiar si los genes que codifican los enzimas inactivadores de giberelinas (GA2ox) pueden tener un papel en la iniciacion y desarrollo de los ovulos. Para ello utilizaremos mutantes de tomate, donde estos genes han sido silenciados, para estudiar: 1 posibles alteraciones fenotipicas en el numero o desarrollo de los ovulos, 2 el efecto de estas mutaciones sobre los niveles de giberelinas activas en las fases y tejidos en que los ovulos se están desarrollando 3 y si existen otras hormonas, de las que influyen en la formación de los óvulos,cuyo metabolismo pudieran estar afectadas dentro del ovario Para ello estudiaremos el número y la morfología de los óvulos y los ovarios en los mutantes de RNA de interferencia (GA2ox-RNAi) y la linea isogenica control, mediante cortes frescos con un vibratomo. Además, realizaremos cuantificaciones hormonales por espectrometría de masas acoplada a cromatografía liquida (LC-MS) para determinar si las giberelinas estan alteradas en ovarios en desarrollo y si esta alteracion influye en el metabolismo de otras hormonas como auxinas y citoquininas., [EN] In plants it is important to understand the mechanisms that control the number of ovules and their development, because ultimately they determine the final number of seeds and thus the crop yield. Over recent decades, hormones have been identified as essential factors in ovule formation, as they play a key role in determining their final number. Especially, hormones such as auxins, brassinosteroids or cytokinins are considered very important in this process, where they have a positive effect on the ovule development. However, although the role of gibberellins (GAs) on the ovule development has not yet been described, there are indications that these hormones are essential in this process, having a negative effect on the final number of ovules, what has been studied by analyzing mutants that have changes in hormone levels of GAs or in its response. In this study, it is intended to affirm the negative role of GAs on the ovule development in tomato plants, using the transgenic lines L1i and L5i, where GA2ox genes, which encode gibberellin inactivating enzymes GA 2-oxidases, have been silenced. To do this, the phenotypic alterations in the number or morphology of the ovules, seeds and ovaries between transgenic lines, L1i and L5i, and the control MT were studied, as well as variations in the levels of gibberellins and other hormones (auxins, abscisic acid and jasmonic acid). The results of these studies show that silencing GA2ox genes leads to increased levels of bioactive gibberellin GA1 and decreased inactive products GA51, GA34, GA29 and GA8 in reproductive tissues of transgenic tomato lines, which was expected as a result of silencing GA 2-oxidases. Regarding the levels of auxins, abscisic acid and jasmonic acid, there were no differences relative to the control, suggesting that GAs do not influence the metabolism of these hormones. Moreover, the phenotypic study revealed significant differences only in the transgenic line L5i, where it was observed that variations in the levels of GAs resulted in smaller ovules, as well as a fewer number of ovules and seeds per fruit. This fact could confirm the negative role of gibberellins on the ovule number and its development. Concerning the L1i line, although variations in their levels of GAs were observed relative to MT, it did not show phenotypic alterations, which could be due to differences between the two transgenic lines in localization of the transgene.

El ácido indol-3-acético (IAA) es una fitohormona perteneciente al grupo de las auxinas cuya producción está ampliamente distribuida entre bacterias asociadas a plantas. El IAA está implicado, entre otros procesos, en proliferación celular y maduración de las plantas. Además, se ha descrito el papel de esta hormona en la regulación de la expresión génica en bacterias. En bacterias fitopatógenas, se han descrito varias rutas de síntesis de IAA, siendo la mejor caracterizada la ruta de la indol-3-acetamida (IAM), proveniente del triptófano por la acción de una monooxigenasa (gen iaaM), y transformándose en IAA mediante la acción de una hidrolasa (gen iaaH). Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi NCPPB 3335 (Psv) utiliza esta ruta para la síntesis de IAA, codificando dos parálogos de los genes iaaM e iaaH (operones iaaMH-1 e iaaMH-2). Anteriormente, demostramos que un mutante de Psv en el operón iaaMH-1 produce una cantidad de IAA significativamente inferior que la sintetizada por la cepa silvestre, así como induce una sintomatología reducida en olivo. Por el contrario, un mutante en el operón iaaMH-2 (que codifica un pseudogen iaaM-2), produce una cantidad de IAA similar a la cepa silvestre y no induce una virulencia atenuada. Sin embargo, e inesperadamente, tanto el mutante iaaMH-1 como en el doble mutante iaaMH- 1/iaaMH-2 sintetizan una cantidad residual de IAA, lo que sugiere la existencia de una ruta alternativa para la producción de este compuesto en Psv. Recientemente, hemos identificado otras cepas del complejo Pseudomonas syringae capaces de producir IAA que no codifican genes homólogos a los implicados en las rutas conocidas hasta la fecha. Tras la obtención de los borradores de los genomas de varios aislados pertenecientes a los diferentes patovares de P. savastanoi, y utilizando también otros genomas de cepas modelo incluidas en el complejo P. syringae, hemos llevado a cabo un análisis bioinformático de genes potencialmente implicados en la biosíntesis de IAA. Actualmente, estamos llevando a cabo la construcción de mutantes en algunos de estos genes, para posteriormente determinar su implicación en la biosíntesis de esta fitohormona. Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech.

Muchas fitohormonas han mostrado un gran potencial en la prevención y terapia contra el cáncer. Las estrigolactonas son hormonas vegetales derivadas de los caroteinoides que están implicadas en la inhibición de la ramificación de la raíz y el brote, promover la germinación de plantas parásitas e intervenir en el establecimiento de simbiosis con micorrizas arbusculares. Se ha descrito la capacidad antitumoral de diferentes análogos de estrigolactonas, entre ellos GR-24, frente a diferentes líneas celulares tumorales in vitro y en modelos xenográficos. En este estudio se ha evaluado la capacidad citotóxica y anti-angiogénica de GR-24, tanto in vitro como in vivo. In vitro, GR-24 presenta una IC50 entre 50 y 90 μM en diversas líneas celulares tumorales y endoteliales. Además, afecta a pasos clave del proceso angiogénico, como son la proliferación, diferenciación, migración y capacidad de degradación de la matriz extracelular de células endoteliales, a concentraciones menores que su IC50. En los ensayos in vivo, GR-24 muestra un gran efecto inhibidor sobre la formación de vasos sanguíneos en la membrana corioalantoidea de pollo y sobre la formación de vasos intersegmentales en embriones de Danio rerio. En conjunto, estos resultados sugieren que GR-24 puede ser un nuevo compuesto prometedor en la terapia anti-angiogénica y otras enfermedades dependientes de angiogénesis. [Our experimental work is supported by grants BIO2014-56092-R (MINECO and FEDER) and P12-CTS-1507 (Andalusian Government and FEDER) and funds from group BIO-267 (Andalusian Government). The "CIBER de Enfermedades Raras" is an initiative from the ISCIII (Spain)]. This communicaction has the support of a travel grant "Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech".

Strigolactones are rhizosphere signalling compounds that mediate host location in arbuscular mycorrhizal (AM) fungi and parasitic plants. Here, the regulation of the biosynthesis of strigolactones is studied in tomato (Solanum lycopersicum). * Strigolactone production under phosphate starvation, in the presence of the carotenoid biosynthesis inhibitor fluridone and in the abscisic acid (ABA) mutant notabilis were assessed using a germination bioassay with seeds of Orobanche ramosa; a hyphal branching assay with Gigaspora spp; and by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) analysis. * The root exudates of tomato cv. MoneyMaker induced O. ramosa seed germination and hyphal branching in AM fungi. Phosphate starvation markedly increased, and fluridone strongly decreased, this activity. Exudates of notabilis induced approx. 40% less germination than the wild-type. The LC-MS/MS analysis confirmed that the biological activity and changes therein were due to the presence of several strigolactones; orobanchol, solanacol and two or three didehydro-orobanchol isomers. * These results show that the AM branching factors and parasitic plant germination stimulants in tomato root exudate are strigolactones and that they are biosynthetically derived from carotenoids. The dual activity of these signalling compounds in attracting beneficial AM fungi and detrimental parasitic plants is further strengthened by environmental conditions such as phosphate availability, We acknowledge funding by the European Commission (Intra- European Marie Curie postdoctoral fellowship to J.A.L-R.; FP6-MEIF-CT-2005-024345) and The Netherlands Organi- zation for Scientific Research (NWO; VICI-grant to H.B., R.M. and F.V.).