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Orientador: Holanda Gondim de Freitas Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A febre da Chikungunya é uma doença emergente causada pelo vírus da Chikungunya (CHIKV), entendida como um problema de saúde pública, e que vem se estabelecendo em novas áreas, com epidemias ocorrendo de forma recorrente no mundo, inclusive no Brasil. Na última epidemia, em 2016, ocorreu aumento de novos casos no Brasil em consequência da falta de profilaxia ou terapias para conter a doença. Com isso, estudos focados em antivirais são de extrema importância para a descoberta e desenvolvimento de um novo fármaco para futura aplicação na sociedade. Para esse fim, este trabalho teve o objetivo de desenvolver um ensaio celular fenotípico, no qual foi possível realizar triagens com bibliotecas de compostos farmacologicamente ativos e/ou clinicamente aprovados contra a infecção de CHIKV in vitro. O ensaio foi baseado na metodologia de triagem de alto conteúdo (HCS, High Content Screening), sendo a infecção em células de linhagens humanas Huh 7 por CHIKV imageada e quantificada por meio de imunofluorescência e análise automatizada de imagens. O ensaio foi validado, demonstrando-se robusto e reprodutível, com valor de fator-Z¿ > 0,8, com coeficiente de variação 0.8 , coefficient of variation < 10% and high correlation coefficient between independent runs with r of 0.9 , demonstrating that the assay is reliable, consistent and reproducible. In total were selected 4 compounds with promising activity were selected to conduct complementary in vitro assay. The compounds pentamidine isethionate, brequinar sodium, dequalinium chloride and sofosbuvir showed activity dependent on concentration in different CHIKV strains, with high selective indexes in Huh 7 cell line. Moreover, all compound treatment significantly reduced CHIKV infectivity titer in vitro showing a promising antiviral candidates. Thus, further evolution of pentamidine isethionate and dequalinium chloride point they might act an early CHIKV stage viral infection cycle, such as binding, internalization and initial replication phase. Here we presented a robust and reliable HCS phenotypic method to screening compounds against CHIKV which provide to identified and characterized promising compounds candidate as starting point therapeutic development against CHIKV Doutorado Microbiologia Doutora em Genética e Biologia Molecular CAPES FAPESP 2016/03780-5 CNPEM

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2017-12-06T12:15:32Z No. of bitstreams: 1 Deborah de Farias Guimaraes.pdf: 1687954 bytes, checksum: e5f2a9cf898f17aa2213bda98fc5c502 (MD5) Made available in DSpace on 2017-12-06T12:15:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Deborah de Farias Guimaraes.pdf: 1687954 bytes, checksum: e5f2a9cf898f17aa2213bda98fc5c502 (MD5) Previous issue date: 2017-07-13 The flavivirus genus (family Flaviviridae) comprises some of the most relevant arboviruses for public health, that can cause disease in humans and animals. Some members of this Family such West Nile virus (WNV) and Saint Louis Encephalitis virus (SLEV) are antigenically related. They develop similar symptoms and their serological diagnosis may show cross reaction with other Flavivirus, present in the same geographical area. In this context, the establishment of a platform for differential serological diagnosis in these arboviruses, is crucial. Among other methodologies, the Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is the most used technique for flavivirus diagnosis, with subsequent confirmation by plaque reduction neutralization test (PRNT). Thus, the present work aimed to develop a differential immunoassay diagnostic platform for WNV and SLEV, using their structural proteins as antigens, derived from viral chimeras YFV-17D-WNV-3M and YFV-17D-SLEV respectively, previously constructed in our research group (Department of Virology, Fiocruz / PE). We analyzed 155 samples of equine sera from the state of Pernambuco-Brazil, for WNV and SLEV by blocking ELISA technique, resulting in 149 and 132 positive samples among them, respectively. All samples were tested by PRNT75 for validating the results of ELISA confirming 31 positive samples for WNV and 20 for SLEV. These results demonstrated that the platform of large-scale serological screening developed in this work is effective and has the potential use for evaluation of sera, from different species of flavivirus in Brazil. O gênero Flavivirus, família Flaviviridae, compreende algumas das arboviroses mais importantes para saúde pública, causadoras de doenças em humanos e animais. Alguns membros desta família, como por exemplo, o vírus do oeste do Nilo (West Nile virus, WNV) e vírus da encefalite São Luís (Saint Louis encephalitis virus, SLEV) estão relacionados antigenicamente, o que significa que além de desenvolverem sintomatologia bastante parecida, o seu diagnóstico sorológico pode apresentar reação cruzada com outros flavivírus presentes na mesma área geográfica. Dessa forma, percebe-se a urgência de uma plataforma de diagnóstico sorológico diferencial entre as arboviroses anteriormente citadas. Dentre as metodologias atuais, o ELISA é o mais utilizado em flavivírus, com posterior confirmação por teste sorológico ouro, o ensaio de neutralização por redução de placas (PRNT). Diante disso, o presente trabalho objetivou a construção de uma plataforma de diagnóstico imunoenzimático diferencial para WNV e SLEV, através do ELISA de bloqueio e realizar uma comparação com a metodologia do ELISA de captura utilizando as mesmas amostras. Com isso, analisou-se 155 amostras de soros de equinos do Estado de Pernambuco para o WNV e SLEV por ELISA de bloqueio, resultando em 149 e 132 amostras positivas, respectivamente. Todas as amostras foram testadas por PRNT75 para validação dos resultados do ELISA, identificando neste teste 31 amostras positivas para WNV e 21 para SLEV. Demonstrando que a plataforma de triagem sorológica em larga escala, desenvolvida neste trabalho, é eficiente para a avaliações epidemiológicas e monitoramento de flavivírus no território brasileiro.

FACEPE A Influenza é uma doença infecciosa aguda, causada por um vírus pertencente à família Orthomyxoviridae. As drogas antivirais e a vacinação são importantes no controle da disseminação da doença, porém alguns vírus adquirem resistência a certas drogas, alertando a necessidade de novas drogas. Triagem de antivirais através de ensaios biológicos são laboriosos e demorados. Com intuito de facilitar a triagem de drogas foram desenvolvidas duas linhagens celulares repórteres distintas. A linhagem Vero-Gluc-NS-Neo é específica para o vírus da influenza, expressa o gene Gaussia luciferase na presença do vírus, e foi desenvolvida através da tranfecção de células Vero com o plasmídeo pGluc-NSNeo. A segunda linhagem, denominada de A549-ISRE-Luc-Hygro, foi desenvolvida a partir da transfecção de células A549 com o plasmídeo pISRE-Luc-Hygro, o qual expressa o gene repórter Firefly luciferase na presença do interferon do tipo (IFN-I). Seguida da transfecção, ambas linhagens foram selecionadas e submetidas a uma clonagem biológica por diluição limitante e os clones selecionados foram então caracterizados quanto à sua especificidade e sensibilidade no ensaio. Resultados importantes e promissores foram obtidos com a linhagem A549-ISRE-Luc-Hygro, a qual se mostrou eficiente para a triagem de antivirais para influenza e drogas indutoras do IFN-I. Em relação à linhagem Vero-Gluc-NS-Neo, apesar do plasmídeo construído se mostrar funcional e específico, não foi possível observar a expressão do gene repórter após a infecção viral, trazendo à tona questionamentos e mostrando ser necessária a realização de ensaios complementares Influenza is an acute infectious disease caused by viruses belonging to the Orthomyxoviridae family. Antiviral drugs are vital in controlling the spread of the disease, but some viruses become resistant to certain drugs, prompting the need for new drugs. Antiviral screening through biological tests are laborious and time consuming. In order to facilitate the screening of drugs, it was developed two distinct cell lineages reporters. The Vero-Gluc-Neo-NS cells line is specific for the influenza virus expresses the Gaussia luciferase gene in the presence of the virus, and it was developed by transfection of Vero cells with pGluc-NS-Neo plasmid. The second cell line, A549-called ISRE-Luc-Hygro, was developed from the transfection of A549 cells with pISRE-Hygro-Luc plasmid, which expresses the Firefly luciferase reporter gene in the presence of type one interferon (IFN-I). Followed by transfection, both cell lines were selected and subjected to a biological cloning by limiting dilution and selected clones were then characterized for specificity and sensitivity in the assay. Important and promising results were obtained with A549-Hygro-ISRE-Luc cells, which proved to be efficient for screening of antiviral drugs for influenza and IFN-I inducing drugs. Regarding the Vero-Gluc-NS-Neo cell line, despite the plasmid constructed to show functional and specific, it was not possible to observe the reporter gene expression after viral infection, bringing up questions and shown to be necessary to carry out further testing.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2016-08-01T15:38:22Z No. of bitstreams: 1 Kennya Genne Santos Lopes.pdf: 1276864 bytes, checksum: c83d62379a340a792ff753904d739f48 (MD5) Made available in DSpace on 2016-08-01T15:38:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kennya Genne Santos Lopes.pdf: 1276864 bytes, checksum: c83d62379a340a792ff753904d739f48 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Hepatitis E is an acute liver disease caused by hepatitis E virus (HEV). This virus is a member of family Hepeviridae, whose genome consists of a single-stranded RNA surrounded by a non-enveloped capsid. The HEV has four genotypes (genotypes 1-4), the genotypes 1 and 2, are found only found in humans, and genotypes 3 and 4 are considered as zoonotic. The pigs appear to be the main animal reservoir for zoonotic genotypes, although the virus has been identified in other animals. The concern of public health agencies with this infection has increased considerably due to its zoonotic potential. To evaluate the presence of HEV in confined pigs and wild boars, the enzyme immunoassay (ELISA) was used to identify anti-HEV IgG antibody in these animals. Among all samples in the present study, wild boar samples were negative (100%) for the presence of this antibody, whereas 50% of domestic pigs were positive. Although diagnostic methods have been developed and applied in the investigation of swine HEV infection, the available kits are imported and expensive to be use in research and routine laboratories. To contribute for the development of tools for diagnosis, this work also performed the cloning and expression methods in Escherichia coli bacteria system of a segment gene encoding the capsid HEV. The protein was expressed and purified although in small quantities. This work is the first serologic report about the HEV in wild boars from Brazil. These results confirm the circulation of HEV in Brazilian herds of domestic pigs and demostrates that the virus is not circulating among wild boars. This study shows that the risk of zoonotic transmission exist. Also, contributes to the HEV epidemiology studies in Brazil and to the development of biotechnological tools in the HEV infection. A hepatite E é uma doença aguda do fígado, causada pelo vírus da hepatite E (HEV). Este vírus é membro da família Hepeviridae, cujo genoma consiste de uma fita simples de RNA positivo envolto por um capsídeo não envelopado. O HEV possui quatro genótipos (genótipos 1-4), sendo os genótipos 1 e 2 encontrados apenas em humanos, e os genótipos 3 e 4 considerados zoonóticos. Os suínos parecem ser o principal reservatório animal para os genótipos zoonóticos, embora o vírus tenha sido identificado também em outros animais. Devido ao seu potencial zoonótico, a preocupação dos órgãos de saúde pública tem aumentado com esta infecção. Objetivando avaliar a presença do HEV em suínos confinados e javalis livres, realizou-se ensaio imunoenzimático (ELISA) para verificação da presença de IgG anti-HEV nesses animais. Do total de amostras analisadas, 100% das amostras de javalis foram negativas para a presença deste anticorpo, enquanto que 50% das amostras de suínos domésticos foram positivas. Embora métodos de diagnósticos tenham sido desenvolvidos e aplicados na investigação da infecção pelo HEV suíno, os kits disponíveis são importados e de alto custo para serem aplicados em pesquisa e na rotina de laboratórios. Objetivando contribuir no desenvolvimento de ferramentas para o uso em diagnóstico da hepatite E suína, este trabalho também realizou a clonagem e expressão em Escherichia coli de um segmento do gene que codifica o capsídeo do HEV. A proteína foi expressa e purificada, embora em pequena quantidade. Esse trabalho é a primeira análise sorológica da presença do HEV envolvendo suínos selvagens no Brasil. Os resultados obtidos confirmam a circulação desse vírus em rebanhos brasileiros, bem como a ausência do mesmo na população de javalis selvagens estudada. Assim, esse trabalho alerta para o risco de transmissão zoonótica, contribui para estudos de epidemiologia do HEV no Brasil, e no desenvolvimento de ferramentas para fins biotecnológicos no estudo da infecção pelo HEV.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is a worldwide pathogen associated with important losses to livestock production. Most of these losses come from reproductive disorders and from the ability of the virus to produce persistent infections following in utero infection of the fetus. A number of reverse genetics methodologies have been used for BVDV in order to better understand the biology of the virus, which allowed the elucidation of a number of biological features including virus replication, host-virus interaction, immune response, and the pathogenesis of fetal infection. The present study describes the construction, characterization and manipulation of an infectious clone out of a non-cytophatic Brazilian BVDV strain IBSP4-ncp. The cDNA recombinant clone was constructed by yeast homologous recombination with a low-copy vector, from three genomic fragments comprising the open reading frame (ORF). The two untranslated regions (5' and 3' UTR) were replaced by the respective UTRs of the reference strain NADL. The constructed vector was transcribed in vitro and the resulting RNA was transfected on MDBK cells to rescue infectious virus. The rescued viruses (IC-pBSC_IBSP4-ncp#2 and #3) were maintained for ten passages in tissue culture and characterized in vitro, showing replication dynamics, focus size and morphology similar to those of the parental IBSP-4. Genomic analysis revealed five point mutations in the gene coding for Npro protein, resulting in amino acid changes. These mutations probably reflect an adaptation of the virus to the heterologous UTRs. The infectious clone IC-pBSC_IBSP4-ncp#2 was further used for the construction of a recombinant virus expressing the Gaussia luciferase (Gluc) reporter gene. The reporter gene was inserted between the Npro and Core genes, being flanked by an upstream linker and a downstream sequence of the Foot and Mouth Disease virus protease (FMDV2Apro) for accurate protein processing. The recombinant vector was in vitro transcribed and the RNA was transfected on MDBK cells. Recombinant infectious viruses were rescued (IC-pBSC_IBSP4-ncpGluc#3 and #4) and characterized in vitro, showing replication dynamics, focus size and morphology similar to those of the parental IBSP-4 clone. The Gluc reporter gene was accurately expressed and processed by the recombinant virus during 15 passages in tissue culture. These studies revealed that the infectious clone constructed herein can be easily manipulated and is able to carry in its genome heterologous genes up to 555 base pairs in length in a stable fashion and without interference with its replication efficiency. Thus, the constructed clone may be very useful for genetic manipulation towards studying different aspects of the BVDV biology and its interactions with the host, and for the development of vaccine strains with attenuated phenotype and/or with antigenic markers. O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é um patógeno de bovinos distribuído mundialmente, associado com importantes perdas econômicas. As maiores perdas devem-se aos problemas reprodutivos causados pela infecção, e pela capacidade do vírus de causar persistência após infecção fetal no terço inicial da gestação. Para entender melhor a biologia desse vírus, sistemas de genética reversa foram desenvolvidos e tem permitido a elucidação de vários aspectos da replicação viral, interação vírus hospedeiro, resposta imune e patogenia da infecção fetal. O presente estudo relata a construção, caracterização e manipulação de um clone infeccioso, a partir da cepa brasileira não-citopática IBSP4-ncp. O clone de DNA recombinante foi construído pela técnica de recombinação homóloga em levedura, utilizando um vetor de baixo número de cópias, construído a partir de três fragmentos genômicos, que compreendiam a fase aberta de leitura (open reading frame, ORF) do vírus. As duas regiões não traduzidas (5 e 3 UTR) foram substituídas pelas respectivas UTRs da cepa de referência NADL. O vetor construído foi transcrito in vitro e o RNA obtido foi transfectado em células MDBK para recuperação de vírus infecciosos. Os vírus recuperados (CI-pBSC_IBSP4-ncp#2 e #3) foram mantidos por 10 passagens em cultivo celular e caracterizados in vitro, apresentando dinâmica de replicação, tamanho e morfologia de focos similares ao vírus parental IBSP-4. A análise do genoma por sequenciamento revelou cinco mutações pontuais no gene Npro, com trocas de aminoácidos, provavelmente refletindo uma adaptação do vírus às UTRs heterólogas. O clone infeccioso construído CIpBSC_ IBSP4-ncp#2, foi então utilizado para a construção de um vírus recombinante expressando o gene repórter Gaussia luciferase (Gluc). O gene repórter foi inserido entre os genes Npro e Core do vírus. Para o processamento da proteína repórter, uma sequência ligante foi adicionada anteriormente ao gene, e a sequência da protease do vírus da Febre Aftosa (FMDV2Apro) foi inserida após o gene. O vetor recombinante construído foi transcrito in vitro e o RNA obtido foi transfectado em células MDBK. Vírus recombinantes infecciosos foram recuperados (CI-pBSC_IBSP4-ncpGluc#3 e #4) e caracterizados in vitro, apresentando dinâmica de replicação, tamanho e morfologia de focos similares ao vírus obtido do clone infecioso. O gene repórter Gluc foi corretamente expresso e processado pelo vírus recombinante durante 15 passagens em cultivo celular. Com os resultados obtidos nestes estudos, conclui-se que o clone infeccioso construído pode ser facilmente manipulado e é capaz de carrear em seu genoma, e expressar de forma estável, genes heterólogos com até 555 pares de base, que parecem não interferir com sua capacidade replicativa. Dessa forma, o clone obtido pode ser muito útil para manipulação genética visando estudar diferentes aspectos da biologia do BVDV e de suas interações com o hospedeiro, assim como para a produção de cepas vacinais com fenótipo atenuado e/ou com marcadores antigênicos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-21T14:59:20Z No. of bitstreams: 1 Raissa Ivna Alquete de Arreguy Baptista.pdf: 2230272 bytes, checksum: cef42ffe53e9331ff98354f138a3b404 (MD5) Made available in DSpace on 2016-10-21T14:59:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raissa Ivna Alquete de Arreguy Baptista.pdf: 2230272 bytes, checksum: cef42ffe53e9331ff98354f138a3b404 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Two articles were made to assessed the behavioral and physiological parameters of pigs housed in individual stalls and metabolism cages. The first article was to evaluate the effects of period (before and during), type of housing (individual stall and metabolic cage) and feeding treatment (T1, T2, T3 and T4) in salivary cortisol concentrations. Was collected from the oral fluid of 16 crossbred pigs [Pietrain x (Large White x Duroc)] castrated males, in early growth stages, with initial average weight of 23.6 ± 6.5 kg and mean age of 63 days. In the period “before”, all animals were housed in individual cages and in the “during” period, half of the animals (n=8) remained in individual pens and the other half (n=8) were transferred to metabolic cages. During this period, the animals began to receive four types of diets with different formulations (T1, T2, T3 and T4). Thereafter, cortisol was measured and analyzed by immuno-assay (EIA). According to the data, the animals showed a circadian pattern with highest values by the morning. There was no significant difference (p>0,05) in salivary cortisol levels in “before” and “during” periods in individual stalls. The animals housed in individual pens, even being feeded with different diets (T2, T3 and T4) did not show cortisol levels consistent with stress. The animals housed in metabolic cages, when feeded with different diets (T2, T3 and T4) may have stress, which can be evidenced by the flattening of the circadian rhythm. In the second article the aim was to evaluate the effects of period (before and during), type of housing (individual stalls and metabolic cage) and feeding treatment (T1, T2, T3 and T4) in the behavior and physiological parameters such as frequency respiratory and surface body temperature for growing pigs. We used 25 crossbred pigs [Pietrain x (Large White x Duroc)], castrated in early growth stages, with a mean age of 63 days. According to the results, the behavior can be modified according to the feeding schedule, type of accommodation, type of treatment and ambient temperature. The respiratory rate is not influenced by the period “before” and “during”, but is influenced by the type of accommodation and type of treatment and ambient temperature and; The surface temperature is influenced by period, by type of accommodation and type of treatment and ambient temperature. Foram feitos dois artigos que avaliaram o comportamento e os parâmetros fisiológicos de suínos alojados em baias individuais e gaiolas metabólicas. O primeiro artigo teve como objetivo avaliar os efeitos do período (antes e durante), tipo de alojamento (baia individual e gaiola metabólica) e tratamento alimentar (T1, T2, T3 e T4) nas concentrações de cortisol salivar. Foi feita a coleta do fluido oral de 16 suínos mestiços [Pietrain x (Large White x Duroc)], machos castrados, em fase inicial de crescimento, com idade média de 63 dias. No período antes, todos os animais foram alojados em baias individuais e no período durante, metade dos animais (n=8) permaneceu nas baias individuais e a outra metade (n=8) foi transferida para as gaiolas metabólicas. Nesse período os animais passaram a receber quatro tipos de ração com formulações diferentes (T1, T2, T3 e T4). De acordo com os dados, não houve diferença significativa (p>0,05) nos níveis de cortisol salivar entre o período antes e durante, em baias individuais. Os animais alojados em baias individuais, mesmo sendo alimentados com dietas diferentes (T2, T3 e T4) não apresentaram níveis de cortisol compatíveis com estresse. Os animais alojados em gaiolas metabólicas, quando alimentados com dietas diferentes (T2, T3 e T4) podem apresentar estresse, que pode ser evidenciado pelo achatamento do ritmo circadiano. No segundo artigo o objetivo foi avaliar os efeitos do período (antes e durante), tipo de alojamento (baia individual e gaiola metabólica) e tratamento alimentar (T1, T2, T3 e T4) no comportamento e nos parâmetros fisiológicos, tais como a frequência respiratória e temperatura corporal superficial de suínos em crescimento. Foram utilizados 25 suínos mestiços [Pietrain x (Large White x Duroc)], machos castrados, em fase inicial de crescimento, com idade média de 63 dias. De acordo com os resultados, o comportamento pode ser modificado de acordo com os horários de arraçoamento, tipo de alojamento, tipo de tratamento e temperatura ambiental; A frequência respiratória não é influenciada pelo período antes e durante, mas é influenciada pelo tipo de alojamento e tipo de tratamento e temperatura ambiental e; A temperatura superficial é influenciada pelo período, pelo tipo de alojamento e tipo de tratamento e temperatura ambiental.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A avicultura brasileira gera grandes divisas para o país e fornece alimento a baixo custo para a população. Entretanto, os problemas sanitários que acometem a indústria avícola afetam todo o sistema produtivo, podendo acarretar perdas no mercado mundial ou elevação dos preços do produto final. Dentre as enfermidades mais frequentes na avicultura mundial e brasileira está a coccidiose, causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Eimeria spp., sendo E. maxima, E. acervulina e E. tenella os agentes causadores mais comuns. Este estudo avaliou a expressão gênica em resposta à infecção por E. tenella no baço de três linhagens de galinhas: uma selecionada para altas taxas de crescimento e desenvolvimento muscular (TT), outra selecionada para altas taxas de fertilidade e postura de ovos (CC), e uma terceira linhagem não selecionada geneticamente (CCc), um controle genético de CC. As duas linhagens selecionadas (TT e CC) apresentaram, em estudo anterior, diferenças na resistência/susceptibilidade à coccidiose. As aves foram inoculadas com E. tenella e seus tecidos foram colhidos aos dias 0 (pré-infecção), 2, 6 e 9 pós-infecção. O perfil de expressão gênica no baço das aves foi avaliado por meio de microarranjos de DNA contendo 13.000 pontos de genes impressos, oriundos de tecido linfóide de aves. RT-PCR quantitativo em tempo real foi realizado para avaliar o perfil de expressão de NK-lisina uma citocina produzida por linfócitos T e células natural killer, e responsável pelo recrutamento e ativação de outras citocinas e células de defesa. O estudo de microarranjos revelou importantes conjuntos de genes diferencialmente expressos entre as linhagens. Aves da linhagem mais resistente CC apresentaram um padrão de expressão de genes que codificam imunoglobulinas e citocinas maior do que os animais TT. Dentre esses genes, encontram-se galinacina, uma β-defensina de aves, e IRF-10. Ambas atuam no combate a patógenos intracelulares. Já a linhagem TT apresentou maior expressão de IL1-F5, uma citocina antagônica de IL-1, que atua inibindo NF-κB, um fator importante na diferenciação de linfócitos e estímulo de IRF10 e IFN-γ. Entre as linhagens que compartilham uma maior proximidade genética, CC e CCc, as diferenças foram quantitativa e qualitativamente mais sutis. Consistente com esse padrão, os níveis de expressão de NK-lisina foram maiores na linhagem CC durante o período pré-infecção. Já no segundo dia após a infecção, TT mostrou uma expressão muito superior a CC e CCc, possivelmente devido à sua inabilidade em prontamente combater a doença. Ao avançar da infecção, a expressão gênica foi homogênea entre as linhagens. É possível que a seleção genética para características de postura possa ter favorecido a expressão basal de genes envolvidos com defesa celular, promovendo maior condição de resistência a doenças aos animais