Identification and evaluation of compounds with antiviral proprieties against chikungunya infection using a phenotypic screening strategy

Orientador: Holanda Gondim de Freitas Junior Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A febre da Chikungunya é uma doença emergente causada pelo vírus da Chikungunya (CHIKV), entendida como um problema de saúde pública, e que vem se estabelecendo em novas áreas, com epidemias ocorrendo de forma recorrente no mundo, inclusive no Brasil. Na última epidemia, em 2016, ocorreu aumento de novos casos no Brasil em consequência da falta de profilaxia ou terapias para conter a doença. Com isso, estudos focados em antivirais são de extrema importância para a descoberta e desenvolvimento de um novo fármaco para futura aplicação na sociedade. Para esse fim, este trabalho teve o objetivo de desenvolver um ensaio celular fenotípico, no qual foi possível realizar triagens com bibliotecas de compostos farmacologicamente ativos e/ou clinicamente aprovados contra a infecção de CHIKV in vitro. O ensaio foi baseado na metodologia de triagem de alto conteúdo (HCS, High Content Screening), sendo a infecção em células de linhagens humanas Huh 7 por CHIKV imageada e quantificada por meio de imunofluorescência e análise automatizada de imagens. O ensaio foi validado, demonstrando-se robusto e reprodutível, com valor de fator-Z¿ > 0,8, com coeficiente de variação 0.8 , coefficient of variation < 10% and high correlation coefficient between independent runs with r of 0.9 , demonstrating that the assay is reliable, consistent and reproducible. In total were selected 4 compounds with promising activity were selected to conduct complementary in vitro assay. The compounds pentamidine isethionate, brequinar sodium, dequalinium chloride and sofosbuvir showed activity dependent on concentration in different CHIKV strains, with high selective indexes in Huh 7 cell line. Moreover, all compound treatment significantly reduced CHIKV infectivity titer in vitro showing a promising antiviral candidates. Thus, further evolution of pentamidine isethionate and dequalinium chloride point they might act an early CHIKV stage viral infection cycle, such as binding, internalization and initial replication phase. Here we presented a robust and reliable HCS phenotypic method to screening compounds against CHIKV which provide to identified and characterized promising compounds candidate as starting point therapeutic development against CHIKV Doutorado Microbiologia Doutora em Genética e Biologia Molecular CAPES FAPESP 2016/03780-5 CNPEM