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Fil: Estein, S. M. Universidad Nacional del Nordeste. Instituto de Medicina Regional; Argentina. Fil: Bence, A. R. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Fil: Cacciato, C. S. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Fil: Echavarría, H. M. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Fil: Soto, P. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. El diagnóstico de brucelosis se apoya en el cultivo bacteriológico o en la detección de fragmentos de ADN de la bacteria mediante la reacción en cadena de la polimerasa. El empleo de una inmunoglobulina anti-Brucella conjugada a fluoresceína para la detección de este antígeno en tejidos constituye una técnica simple, fácil, reproducible, económica y rápida. El objetivo de este trabajo fue evaluar la fracción gammaglobulínica de un suero policlonal anti-Brucella abortus marcada con isotiocianato de fluoresceína (FITC), 1) contra distintas especies lisas y rugosas de Brucella sp, 2) contra bacterias de otros géneros, y 3) comparar los resultados obtenidos con la inmunofluorescencia directa y el cultivo bacteriológico para la detección de B. suis en distintos tejidos de porcinos infectados. Este conjugado detectó todas las brucelas con distinta intensidad de fluorescencia, pero no hubo fluorescencia inespecífica cuando se ensayaron las bacterias de otros géneros. La fluorescencia de fondo en muestras de los distintos tejidos infectados fue baja. La mayoría de los tejidos infectados mostraron la presencia de microorganismos verde-fluorescentes con la morfología de las brucelas. El anticuerpo conjugado a FITC permitió un diagnóstico de brucelosis rápido, efectivo y económico. Methods available for detection of Brucella sp from different specimens include bacteriological culture or detection of specific DNA fragments by polymerase chain reaction. The use of fluorescein-labeled anti-Brucella globulin for demonstrating this antigen in animal tissues is a simple, easy, reproducible, cheap and fast technique. The aim of this work was to evaluate the gamma globulin fraction of polyclonal anti-Brucella abortus serum labeled with fluorescein iso-tio-cyanate (FITC-labeled antibody): 1) against different smooth and rough Brucella sp, 2) against bacterium of other genus, and 3) to compare direct fluorescent antibody test results with bacteriological culture for the detection of B. suis in different tissues from infected animals. This conjugate stained all Brucella sp with different intensities but it did not stain any heterologous bacterium tested. Background fluorescence associated with its use on smears from infected sources of different specimens was particularly low. Most of the infected tissues showed the presence of yellowish-green fluorescent organisms with brucella morphology. The tested FITC-labeled antibody allows a quick, effective and inexpensive diagnosis of brucellosis.

The immunogenicity and protective efficacy of recombinant lumazine synthase from Brucella spp. (rBLS) administered with different adjuvants was evaluated in mice. Mice were immunized with rBLS in the absence or the presence of aluminum hydroxide gel (BLS-A1), monophosphoryl lipid A (BLS-MPA), or incomplete Freund's adjuvant (BLS-IFA). rBLS per se induced a vigorous immunoglobulin G (IgG) response, with high titers of IgG1 as well as IgG2. All the adjuvants increased this response; the BLS-IFA formulation was the most effective at inducing BLS-specific IgG antibodies. In addition, after in vitro stimulation with rBLS, spleen cells from BLS-IFA-, BLS-A1-, or BLS-MPA-immunized mice proliferated and produced interleukin-2 (IL-2), gamma interferon (IFN-γ), IL-10, and IL-4, suggesting the induction of a mixed Th1-Th2 response. Immunization with rBLS protected mice against challenge with B. abortus 544. The levels of protection in the spleen were similar for all adjuvants, but only BLS-A1 and BLS-IFA were effective in the liver. Our results indicate that BLS might be a useful candidate for the development of subunit vaccines against brucellosis, since it elicits antigen-specific cellular responses, with production of IFN-γ and protection, independently of the adjuvant formulation used.

International audience

Brucella ovisis the aethiological agent of ram contagious epididymitis, an infectious disease causing reproductive failure in sheep. Control measures include elimination of rams found positive in serological tests and/or bacteriological culture of semen, and vaccination when the prevalence is high. The principal vaccine used against ovine brucellosis isB. melitensisRev. 1, a live attenuated strain of B.melitensis. However Rev. 1 evokes antibodies interfering with the interpretation of serological tests used to diagnose infection byB. ovisandB. melitensis. B. ovisis a natural rough species so lacks O polisaccharide chain. The outer membrane proteins ofB.ovishave been studied by several groups searching for antigens useful for diagnosis and protection. A hot saline extract fron B.oviscontains rough lipopolysaccharide and several proteins, including abundant group 3 outer membrane proteins The most efficient and widely used tests for serodiagnosis ofB. ovisinfection are double gel diffusion, complement fixation test and ELISA. Hot saline extract has provided best diagnostic results in all tests. However some cross-reactivity in these tests can be seen with sera of sheep naturally infected withB. melitensisor afterB. melitensisRev. 1 vaccination. Less information is available on internalB. ovisantigens. Recently, an indirect ELISA using BP26 (periplasmic protein) has been developed for the differentiation of infected and vaccinated rams. The identification ofB. ovisantigens able to elicit a protective immune response is of great interest for the development of subcellular vaccines avoiding the drawbacks of living attenuated vaccine. In the mouse model, passive protection experiments with mixtures of anti-outer membrane proteins and rough lipopolysaccharide monoclonal antibodies have shown to protect againstB. ovisinfection., Brucella ovises el agente etiológico de la epididimitis contagiosa de los carneros, enfermedad infectocontagiosa que ocasiona infertilidad en el carnero y ocasionalmente abortos en la oveja. El control de esta enfermedad se apoya en la eliminación de los machos con diagnóstico serológico y/o séminocultivo positivo, y en la vacunación de los animales sanos en lugares de alta prevalencia. La mejor vacuna frente a la brucelosis ovina porB. ovis, esB. melitensisRev. 1, una cepa atenuada deBrucella melitensis. Sin embargo ésta vacuna heteróloga induce una respuesta serológica que interfiere con la interpretación de las pruebas serológicas utilizadas. B. ovises una especie naturalmente rugosa; carece de la cadena O del lipopolisacárido. Las proteínas de la membrana externa han sido objeto de estudio de varios grupos de investigación por su utilidad como antígenos para el diagnóstico y en la pruebas de protección. Un extracto salino obtenido por calentamiento deB. ovis, posee el lipopolisacárido rugoso y varias proteínas, siendo más abundante el grupo 3 de las proteínas de la membrana externa. Las técnicas más eficientes para el diagnóstico de la infección porB. ovis, son la inmunodifusión doble bidimensional en gel de agar, la fijación del complemento y ELISA. Como antígeno, el extracto salino ha dado los mejores resultados en las tres pruebas; sin embargo se ha observado reacción cruzada con sueros de animales infectados por B. melitensis o vacunados conB. melitensisRev. 1. Existe menos información disponible respecto de los antígenos internos deB. ovis. Recientemente, se ha desarrollado un ELISA indirecto utilizando la proteína periplásmica BP26 con utilidad para el diagnóstico de la infección porB. ovis, ya que permite diferenciar los carneros infectados de los vacunados. La identificación de los antígenos deB. oviscapaces de inducir una respuesta inmune protectora es de interés para el desarrollo de vacunas subcelulares que no presenten las desventajas de Rev. 1. Con ese objetivo se han desarrollado ensayos de inmunización pasiva con mezclas de anticuerpos monoclonales anti-proteínas de la membrana externa y anti-lipopolisacárido rugoso que han otorgado protección en el ratón contraB. ovis. &nbsp