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Visceral leishmaniasis (VL) is a neglected and endemic zoonosis that occurs throughout Brazil; nevertheless, few studies have focused on the early detection of the disease. The municipality of Ourinhos is a non-receptive, silent and vulnerable area for VL, where the seroprevalence of this disease has so far not been investigated. The present study aimed to determine the seroprevalence of canine VL in Ourinhos-SP, and to identify the presence of risk factors. Blood samples were obtained from 604 dogs during a rabies vaccination campaign together with application of a socioeconomic questionnaire, environmental and animal characteristics and tutor's knowledge about the disease. The samples were subjected to indirect ELISA and new samples were collected from reactive and suspect animals, including whole blood and lymph node aspiration evaluated by parasitological method, complete blood count and PCR. No animal was diagnosed as positive based on the combination of direct and indirect tests and the tutors' answers indicated little knowledge about leishmaniasis, being often confused with other diseases transmitted by arthropods; hence, according to the proposed methods, the presence of canine leishmaniasis in the city of Ourinhos was not confirmed and health education campaigns about the disease should be carried out. Resumo A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose negligenciada e endêmica presente em todas as regiões do Brasil, mas mesmo assim poucos estudos têm objetivado a detecção inicial da doença. O município de Ourinhos - SP é uma área não receptiva, silenciosa e vulnerável à LV, não havendo até o momento estudos que tenham investigado a soroprevalência no município. Nesse sentido, o presente estudo objetivou determinar a soroprevalência da LV canina em Ourinhos-SP, bem como associar a presença de fatores de risco. Amostras sanguíneas de 604 cães foram obtidas juntamente com a aplicação de questionário socioeconômico, características ambientais e dos animais e conhecimento sobre a doença. As amostras foram submetidas à sorologia por ELISA e novas amostras coletadas de cães reagentes ou suspeitos foram analisadas por método parasitológico direto, hemograma e PCR. Nenhum animal foi considerado positivo na combinação de testes direto e indireto, e as respostas dos tutores indicaram pouco conhecimento sobre a leishmaniose, sendo muitas vezes confundida com outras doenças transmitidas por artrópodes. Dessa forma, de acordo com os métodos propostos, a presença de leishmaniose canina, na cidade de Ourinhos, não foi confirmada. Por isso campanhas de educação em saúde sobre a doença deveriam ser realizadas.

Serum samples from 200 vaccinated adult bovine females from two herds were analyzed by buffered antigen acidified plate test (AAT) (Rose Bengal Plate Test), indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISAI), 2-mercaptoethanol test (2-ME) and complement fixation test (FC). For ELISAI, the fixed value of 45 percent positivity (PP) was used. Group A was composed of 100 animals, with description of reproductive disturbances compatible with brucellosis and reagent to the AAT. Group B was composed of 100 animals serologically free of B. abortus for at least two years. Additionally, all serum samples were tested using the AAT, the 2-ME and the FC to confirm negative status. The combination of two tests, FC and 2ME was used as the gold standard. The relative sensitivity and specificity and the Kappa were calculated for each test. The result of kappa for 2-ME in relation to the FC and of the AAT and the ELISAI in relation to the gold standard was, respectively, 0.78, 0.86 And 0.84. The relative sensitivities (Sr) were, respectively, 84.1% (53/63), 100% (53/53) and 98.1% (52/53), and the relative specificities (Er) were 93.3% (111/119), 90.1% (100/111) and 90.1% (100/111). For comparison between the ELISAI and the AAT, there was obtained a Kappa of 0.91, Sr of 93% (93/100) and Er of 98% (98/100). Conclusions: 1 The option of constituting the gold standard based on at least two tests was the most suitable for this study; 2 The ELISAI resulted in values of Sr and Er similar to the AAT. Therefore, the AAT and the ELISAI are good for screening in regard to the diagnosis of brucellosis. RESUMO O estudo objetivou comparar o desempenho do teste mercaptoetanol (2-ME) com o teste fixação de complemento (FC) e os testes antígeno acidificado tamponado (AAT) e ELISA indireto (ELISAI) frente ao gold standard, para o sorodiagnóstico da brucelose em bovinos. Também se comparou o ELISAI com o AAT. Foram processadas 200 amostras de soro de fêmeas bovinas adultas de dois rebanhos, denominados grupos A e B. O grupo A foi composto de 100 fêmeas vacinadas contra brucelose, com histórico de problemas reprodutivos compatíveis com a doença e reatoras ao AAT. O grupo B foi composto de 100 fêmeas vacinadas e não reatoras ao AAT por mais de dois anos. Todos os soros foram submetidos aos quatro testes. Foi empregado, como gold standard, a combinação do FC com o 2ME. O índice Kappa foi usado como medida de concordância e seu resultado, para o 2-ME, o AAT e o ELISAI foi de, respectivamente, 0,78, 0,86 e 0,84. As sensibilidades relativas (Sr) foram de, respectivamente, 84,1%, 100% y 98,1% e as especificidades relativas (Er), 93,3%, 90,9% e 90,1%. Entre o ELISAI e o AAT, obteve-se Kappa de 0,91, Sr de 93% e Er de 98%. Conclusões: 1-A opção de se contituir o gold standard baseado em dois testes foi a mais adequada para este estudo; 2-Os valores de Sr e Er do ELISAI foram semelhantes aos do AAT. 3-O AAT e o ELISAI mostraram ser testes muito sensíveis e de boa especificidade e, portanto, adequados para serem usados como triagem no diagnóstico da brucelose.

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença linfoproliferativa infecciosa dos bovinos causada pelo vírus da leucemia bovina (BLV), um membro da família Retroviridae, gênero deltaretrovirus. A LEB é caracterizada por linfocitose persistente e linfossarcoma e tem um impacto econômico expressivo devido a perdas na exportação, tratamento de infecção secundária, redução na produção de laticínios e também devido ao manejo especial necessário. Não obstante, o DNA proviral e as proteínas estruturais do vírus foram encontradas em tecidos humanos, especialmente aqueles associados ao câncer de mama, sugerindo que este vírus pode ser transmitido naturalmente aos seres humanos. A principal forma de detecção da LEB é através do diagnóstico laboratorial, já que muitos animais infectados não apresentam sinais clínicos e os achados clínicos não são conclusivos. O diagnóstico de LEB pode ser feito por métodos moleculares e pela detecção de anticorpos específicos em amostras de soro ou leite. O animal infectado desenvolve uma resposta imune humoral contra proteínas virais, principalmente contra a gp51 (proteína de envelope), e sua identificação é crucial para a vigilância epidemiológica, certificação de áreas livres de doenças e estudos de prevalência. Este trabalho de conclusão de curso compõe-se de um capítulo de revisão de literatura e um capítulo descrevendo o desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto usando um peptídeo sintético predito in silico como antígeno. O capítulo de revisão tem como objetivo descrever a biologia, epidemiologia, patogênese, sinais clínicos e diagnósticos para o BLV, assim como a importância da infecção na resposta imune dos animais, e apresentar os mais recentes estudos sobre a possível infecção dos humanos pelo BLV. O segundo capítulo compreende a predição in silico, a síntese química do peptídeo linear KIPDPPQPDFPQL, denominado pgp51 e posterior padronização do ELISA. O ELISA pgp51 foi eficiente para segregar amostras de soro positivas e negativas, indicando que ele tem um grande potencial para ser usado no diagnóstico sorológico de LEB. Posteriormente, o ELISA-i, recém padronizado, foi comparado a testes diagnósticos disponíveis comercialmente. O ELISA indireto utilizando peptídeo sintético pgp51 após predição de epítopos in silico obteve resultados comparáveis aos testes diagnósticos utilizados atualmente podendo também ser usado como teste diagnóstico para LEB para estudos de prevalência da doença no Brasil. Além disso, foi possível observar divergência nos resultados obtidos entre os testes comerciais disponíveis para o diagnóstico do BLV, o que leva a reconsiderações no sistema de diagnóstico usado atualmente. Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious lymphoproliferative disease of cattle caused by bovine leukemia virus (BLV), a member of the Retroviridae family, genus Deltaretrovirus. The EBL is characterized by persistent lymphocytosis and the presence of lymphosarcoma. It has anexpressive economic impact due to export losses, treatment of secondary infection; decrease of dairy production and also due to a differential handling required. Nevertheless, proviral DNA and structural virus proteins have been found in human tissues, especially those associated with breast cancer, suggesting that BLV could be transmitted naturally to humans. The main form for EBL diagnosis is by laboratory methods, once infected animals show no clinical signs or they are usually inconclusive. The diagnosis of EBL can be performed by molecular techniques and by the detection of specific antibodies in serum or milk samples. The infected animal develops a humoral immune response to viral proteins, primarily to gp51 (an envelope protein), and its identification is crucial for epidemiological surveillance, certification of disease-free areas, and prevalence studies. This work consists of a literature review chapter and of another chapter describing the development and standardization of an indirect ELISA using a synthetic peptide predicted in silico as antigen. The review chapter aims to describe the biology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs and diagnoses for BLV, as well as the importance of this infection in the immune response of the animals, and present the latest evidencies on the possible human infection by BLV. The second chapter comprises the in silico prediction, the chemical synthesis of the linear peptide KIPDPPQPDFPQL, described as pgp51, and the subsequent standardization of the ELISA. The pgp51 ELISA was efficient to segregate positive and negative serum samples, indicating that it has a great potential to be used in the serological diagnosis of EBL. Afterward, the newly standardized ELISA-i was compared to commercialized available diagnostic tests. The indirect ELISA using synthetic peptide pgp51 after prediction of in silico epitopes obtained results comparable to the currently used diagnostic tests and thus it also can be used as diagnostic test for EBL in studies of prevalence in Brazil. In addition, the commercial tests showed divergence in the results for the diagnosis of BLV, which explicit need to reconsideration in the diagnostic system used currently.

Introducción: la paratuberculosis (PTBC), también llamada enfermedad de Johne, es un trastorno gastrointestinal crónico de rumiantes domésticos y silvestres causado por Micobacterium avium subespecie paratuberculosis (MAP). Está distribuida mundialmente y genera un alto impacto en la ganadería, debido a que disminuye la producción, se pierde potencial genético por reemplazos tempranos de animales infectados y se incrementa la mortalidad. Objetivos: evaluar la presencia de anticuerpos anti-MAP en fincas lecheras del sur de Nariño y describir su distribución de acuerdo con características poblacionales. Métodos: se realizó un estudio transversal descriptivo en 958 vacas mayores de 2 años en 16 fincas lecheras. Para determinar la presencia de anticuerpos, se usó la prueba diagnóstica de Elisa indirecto (kit comercial Svanova®). La seropositividad fue asociada con las variables de raza, edad, ubicación, condición corporal, número de lactancias y estadio clínico mediante la prueba estadística de chi cuadrado. Resultados: se encontraron 15 fincas (94 %) con al menos un animal positivo y 77 vacas (8 %) con anticuerpos anti-MAP. Se estableció una asociación significativa (p < 0,05) con la condición corporal del animal. Conclusiones: en los principales municipios lecheros se encontraron vacas con anticuerpos anti-MAP y no se encontró relación entre edad, raza, ubicación y estatus clínico con la seroprevalencia-MAP, pero sí con la condición corporal. Introduction: Paratuberculosis (PTB), or Johne's disease, is a chronic gastrointestinal disorder in domestic and wild ruminants caused by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP). It is distributed worldwide and generates a high impact on livestock, due to a decrease in production, loss of genetic potential by early replacement of infected animals, and increase in mortality. Objectives: To evaluate the presence of anti-MAP antibodies in dairy farms in southern Narino and to describe their distribution according to population characteristics. Methods: A descriptive cross-sectional study was performed on 958 cows over 2 years of age in 16 dairy farms. To determine the presence of antibodies, the indirect Elisa diagnostic test was used (Svanova® commercial kit). Seropositivity was associated with variables of race, age, location, body condition, lactation number, and clinical state by using the chi-square test statistic. Results: There were found 15 farms (94%) with at least one positive animal and 77 cows (8%) with anti-MAP antibodies. A significant association (p < 0.05) with the animal's body condition was established. Conclusions: Cows with anti-MAP antibodies were found in major dairy municipalities; it was found that MAP-seroprevalence is not connected to age, race, location and clinical status, but it is linked to body condition. Introdução: a paratuberculose (PTBC), também conhecida como doença de Johne, é um transtorno gastrointestinal crônico de ruminantes domésticos e silvestres causado por Mi-cobacterium avium subespécieparatuberculose (MAP). Está distribuída mundialmente e gera um alto impacto na pecuária, devido a que diminui a produção, se perde potencial genético por substituições precoces de animais infectados e aumenta a mortalidade. Objetivos: avaliar a presença de anticorpos anti-MAP em fazendas de gado do sul de Nariño e descrever sua distribuição de acordo com características populacionais. Métodos: realizou-se um estudo transversal descritivo em 958 vacas maiores de 2 anos em 16 fazendas produtoras de gado. Para determinar a presença de anticorpos, se usou a prova diagnóstica de Elisa indireto (kit comercial Svanova®). A soro positividade foi associada com as variáveis de raça, idade, localização, condição corporal, número de lactancia e estádio clínico através da prova estatística de chi quadrado. Resultados: se encontraram 15 fazendas (94 %) com pelo menos um animal positivo e 77 vacas (8 %) com anticorpos anti-MAP. Estabeleceu-se uma associação significativa (p < 0,05) com a condição corporal do animal. Conclusões: nos principais municípios produtores de leite se encontraram vacas com anticorpos anti-MAP e não se encontrou relação entre idade, raça, localização e status clínico com a soro prevalência-MAP, mas sim com a condição corporal.

A toxoplasmose é uma zoonose na qual, mamíferos e aves podem participar do seu ciclo como hospedeiros intermediários e os felídeos como hospedeiros definitivos. O Felis catus é reconhecido como o principal responsável pela contaminação ambiental por oocistos de Toxoplasma gondii. O diagnóstico sorológico pouco revela sobre a eliminação de tal fase no ambiente, o que representa o real impacto daquela espécie na Saúde Pública frente à toxoplasmose. São escassos os dados da frequência da toxoplasmose felina no Estado de Goiás. Assim sendo, objetivou-se com esta pesquisa avaliar a frequência da infecção da toxoplasmose em gatos domésticos e o seu potencial papel na sua transmissão, através da eliminação de oocistos no ambiente e dos respectivos fatores associados à infecção. Para isto, foram coletadas 102 amostras de sangue e 98 amostras fecais, de 102 gatos provenientes de Goiânia-Goiás. Os animais foram divididos em grupos de acordo com a faixa etária, gênero e livre acesso à rua ou não. Foi realizada a hemaglutinção indireta para a determinação do nível de anticorpos anti-T. gondii e o ELISA indireto para a detecção da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV). Para a pesquisa e detecção da eliminação de oocistos de T. gondii nas fezes dos gatos foi feita a centrifugo-flutuação em solução de Sheather, posterior extração de DNA e realização da PCR convencional. Os resultados revelaram que 18,63% (19/102) dos gatos foram positivos para o T. gondii, com títulos variando entre 1:32 a 1:8.192, sendo que nenhuma das amostras fecais foi positiva na PCR. A frequência de positivos para o FIV foi de 55,91% (52/93), com coinfecção de 18,28% (17/93). Com a regressão logística multivariada verificou-se que os fatores associados foram os mesmos para as duas infecções, porém uma não interferiu diretamente na outra. Os fatores associados para a infecção pelo T. gondii e pelo vírus da imunodeficiência felina foram a vida livre e a idade igual ou superior a seis meses, já o gênero não apresentou relação estatística com nenhuma das enfermidades. Toxoplasmosis is a zoonotic disease in which mammals and birds can join the cycle as intermediate hosts, and felids as definitive hosts. Felis catus is recognized as the main responsible for the environmental contamination by Toxoplasma gondii oocysts. Serological diagnosis reveals little about the elimination of oocysts of T. gondii into the environment, principally by F. catus, which plays an important role in Public Health. There are few data on the frequency of feline toxoplasmosis in the State of Goiás. Therefore, the aim of this research was to evaluate the frequency of toxoplasmosis infection in domestic cats and their potential role in its transmission through the oocyst elimination into the environment and the respective factors associated with the infection. For this, we collected 102 blood samples and 98 fecal samples from 102 cats from Goiânia, State of Goiás. The animals were divided into groups according to age, gender and free access to the street or not. Indirect hemagglutination test was performed to determine the level of anti-T. gondii and indirect ELISA for the detection of infection by feline immunodeficiency virus (FIV). For search and detection of T. gondii oocysts elimination in the feces of cats we performed a centrifugal-flotation with Sheather's solution, subsequently we extracted DNA and used conventional PCR. The results showed that 18.63% (19/102) of the cats were positive for T. gondii, with titers ranging from 1:32 to 1: 8.192, while none of the fecal samples were positive in the PCR. The frequency of positive animals for FIV was 55.91% (52/93), and 18.28% (17/93) presented coinfection. By multivariate logistic regression we found the associated factors were the same for both infections, but one did not interfere with another. The factors associated with infection by T. gondii and feline immunodeficiency virus were free life and age under six months, since the sex was not statistically related to any of the illnesses.

O controle da anemia infecciosa equina (AIE), doença causada por um lentivírus, é realizado principalmente pela eliminação de animais positivos detectados pela técnica de imunodifusão em gel ágar (IDGA), que é o teste oficial e único utilizado para o diagnóstico desta enfermidade no Brasil. O teste de IDGA pode apresentar resultados falsos negativos ou duvidosos, formando uma linha de precipitação muito fraca, principalmente quando se trata de animais recém-infectados ou em amostras de asininos e muares. Em um estudo pioneiro, foi mapeado e identificado através da técnica de spot synthesis um epítopo consenso, localizado na região do gene que codifica a proteína gp45 transmembrana do envelope viral, para uso em diagnostico e identificação de equinos, asininos e muares infectados pelo EIAV. Com base nesses resultados, foi sintetizado um peptídeo (pgp45) solúvel linear com 20 aminoácidos e utilizado como antígeno em um teste de ELISA indireto. Quando avaliado em amostras de campo, no qual foram testadas 859 amostras de soros de equídeos, observou-se uma concordância com IDGA de 96,1%, sensibilidade e especificidade de 98,6 e 95,6%, respectivamente. O pgp45 foi capaz de detectar um animal como soropositivo no 13º dia após inoculação experimental com amostra Wyoming do EIAV. O peptídeo pgp45 foi eficiente em detectar anticorpos anti-EIAV em equinos, asininos e muares infectados, podendo ser uma alternativa para o diagnóstico, principalmente se utilizado como um teste de triagem, pois obteve-se uma alta sensibilidade, contribuindo para o controle da AIE. The control of equine infectious anemia (EIA), a disease caused by a lentivírus, is made primarily by the elimination of positive animals detected by the agar gel immunodiffusion test (AGIDT), which is the official test and the only method used for the diagnosis of EIA in Brazil. The AGIDT may show false negative or doubtful results, since a very weak line of precipitation is formed, especially when it comes to newly infected animals or samples from donkeys and mules. In a pioneering study, we mapped and identified by spot synthesis technique an epitope consensus for identify equids infected with EIAV, located in the region encoding the envelope protein gp45 of EIAV. Based on these results, we synthesized a soluble peptide (pgp45) with 20 amino acids in length that was used as antigen in an indirect ELISA test. When evaluated on field, in which 859 equine serum samples were tested it revealed a correlation of 96.1% with AGID and 98.6 and 95.6%, of sensitivity and specificity respectively. The pgp45 was able to detect an animal as seropositive at 13° day after experimental inoculation with the Wyoming strain of EIAV. The peptide pgp45 was efficient in detecting antibodies against EIA in horses, donkeys and mules infected with EIAV as well and, could be an alternative for the diagnosis, especially if used as a screening test, since it has a high sensitivity, contributing to the control of the EIA.

An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using non-purified antigen was developed for serological diagnosis of the bovine herpesvirus 1 (BoHV-1) infection. Some blocking substances to prevent nonspecific reactions were evaluated in different concentrations and combinations. The best results were obtained using 5% skim milk powder as blocking solution and the serum/conjugated buffer added with 10% MDBK cells, 10% equine serum, 1% skim milk powder. The system was evaluated with a collection of positives (n=60) and negatives (n=62) bovine serum previously analyzed by seroneutralization (SN) technique for the BoHV-1 antibodies. The indirect ELISA standardized showed 98.3% of sensitivity and 95.2% of specificity (kappa: 0.93) when compared with the SN technique. These results would allow its implantation in the laboratorial routine for the serological diagnosis of the BoHV-1 infection. The use of non-purified antigen in ELISA facilitate the elaboration, reduces the production cost and makes possible the application of these technique in seroepidemiological study of the BoHV-1 infection in cattle herds.Um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto utilizando antígeno não purificado foi desenvolvido para o diagnóstico sorológico da infecção pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1). Nos experimentos de padronização várias substâncias bloqueadoras de reações inespecíficas foram avaliadas em diferentes concentrações e associações. Os melhores resultados foram obtidos utilizando-se leite em pó desnatado (5%) como solução de bloqueio e o tampão de diluição dos soros/conjugado acrescido de células MDBK (10%), soro de eqüino (10%) e leite em pó desnatado (1%). O sistema foi avaliado frente a uma coleção de soros bovinos positivos (n=60) e negativos (n=62) para o BoHV-1 por meio da técnica de soro-neutralização (SN). O ELISA indireto padronizado nesse estudo, quando comparado com a SN, apresentou 98,3% de sensibilidade e 96,8% de especificidade (kappa: 0,93), valores que possibilitam a sua implantação na rotina laboratorial para o diagnóstico sorológico da infecção pelo BoHV-1. O desenvolvimento de um sistema de ELISA indireto utilizando antígeno não purificado facilita a elaboração da técnica, reduz o custo de produção e possibilita a sua aplicação em inquéritos soroepidemiológicos da infecção pelo BoHV-1 em rebanhos bovinos.

O Circovírus Suíno (CVS) é um vírus de DNA fita simples, que pertence à família Circoviridae, com genoma de 1,7kilobases. Apresenta dois tipos principais, o CVS1 e o CVS2. O CVS1 não é patogênico, enquanto que o CVS2 está associado a um conjunto de doenças como a Síndrome Multissistêmica do Definhamento de Suínos (SMDS). Estes tipos virais possuem a proteína Rep, essencial para replicação e a proteína Cap, formadora do capsídeo. A pCap possui epítopos imunoreativos e imunodominantes e tem sido utilizada como um antígeno tanto para o diagnóstico, quanto para aplicação vacinal, contra infecções causadas pelo CVS2. Pichia pastoris é uma levedura metilotrófica que utiliza metanol como única fonte de carbono e tem sido utilizada para expressar genes heterólogos por apresentar vantagens como, a realização de modificações pós-traducionais e sua fácil manipulação. Objetivou-se nesse estudo expressar o gene Cap códon-otimizado do CVS2 para expressar em Pichia pastoris, visando a produção secretória da pCap e sua aplicação como antígeno recombinante em imunoensaios. Para tanto, a construção pPICZαA/CVS2Capo obtida após clonagem gênica foi inserida no genoma da levedura por eletroporação e o sistema foi induzido com metanol, sob o controle do promotor AOX1, por 72h. Os clones expressos positivamente foram identificados em Colony blot e Dot blot, após a reação dos clones com anticorpo-antiHis. A rCap foi detectada com massa molecular de ~39 kDa em sobrenadante da P. pastoris por SDS-PAGE e Western blot. Neste último, a detecção foi feita pelo reconhecimento da rCap por anticorpos anti-CVS2 de soros de animais com histórico de SMDS. A rCap testada em ELISA indireto contra soros de animais sabidamente negativos e positivos, previamente determinados pela imunoperoxidase (IP), mostrou alta eficiência discriminatória com alta razão positivo/negativo de 597. Após análise preliminar de parâmetros concordantes e discordantes, entre o IP e ELISA, observou-se uma alta concordância entre eles. Os resultados representam a efetiva produção da rCap pela via secretória de P. pastoris, com sugestiva preservação dos epítopos imunoreativos na mesma. Isto demonstra a viabilidade do sistema eucarioto de expressão utilizado e o potencial uso da rCap para detecção de anticorpos anti-CVS2 como ferramenta auxiliar no diagnóstico de doenças causadas pelo CVS2 como a SMDS.

Bovine Leukemia Virus (BLV) is the etiologic agent of Enzootic Bovine Leukosis, a retrovirus exogenous to the bovine species. Once infected, there is no detectable viraemia but instead there is a strong and persistent immunological response to BLV structural proteins, essentially the gp51 envelope glycoprotein and the mayor core protein p24. We describe the test procedure of an indirect ELISA (I-ELISA) using polyclonal reagents for the detection of antibodies to BLV. For comparison, the sera were simultaneously tested by agar gel immunodiffussion (AGID) test, which is currently used as diagnostic standard for BLV infection. The antigen applied does not require a high degree of purification and the data from the analysis of the negative sera showed that the establishment of a cut-off level corresponding to 3 times the standard deviation (SD) above the mean for the negative control set of sera provided acceptable specificity, reducing the risk of false positives results. A comparison of the results obtained by AGID test and I-ELISA showed that considering a total of 465 serum samples, all of the 234 samples (50%) that were positive by AGID were positive to the I-ELISA. Of 225 serum samples which yielded negative results in the AGID test, 69 (15%) were found to be positive by the I-ELISA and 156 (33%) were negative by both techniques. Few sera (2%) that were non-specific by AGID were defined as negative or positive by I-ELISA.O Vírus da Leucose Bovina (VLB) é o agente etiológico da Leucose Enzoótica Bovina, um retrovirus exógeno da espécie bovina. Uma vez infectado, não se detecta viremia, mas uma forte e persistente resposta imunológica às proteínas estruturais, sobre tudo para gp51 da coberta e para proteína p24 do core. Neste trabalho se descreve o desenvolvimento de um ELISA indireto (ELISA-I), em que se utiliza o soro policlonal para a detecção de anticorpos para VLB. Os soros foram analisados pela prova de IDGA (imunodifusão dupla em gel de ágar) rotineiramente usada como prova padrão. O antígeno escolhido não necessita de alto grau de purificação e os resultados obtidos com os soros negativos permitiram estabelecer um valor de corte de três desvios padrão (DP) sobre a média do grupo de soros negativos, mostrando aceitável especificidade e reduzindo o risco de falsos positivos. A comparação dos resultados conseguidos por IDGA e ELISA-I demonstrou que em um total de 465 soros, 234 (50%) foram positivas por IDGA e ELISA-I. Dos 225 soros negativos por IDGA, 69 (15%) foram positivos por ELISA-I e 156 (33%) foram negativos pelas duas técnicas utilizadas. Apenas 2% dos soros foram inespecíficos por IDGA e se definiram como positivos ou negativos pelo ELISA-I

A ocorrência da infecção pelo Vírus da Leucose Enzoótica dos Bovinos (BLV) no Estado do Pará, foi estudada através do método de imunodifusão em ágar-gel (AGID) e por um ensaio imunoenzimatico (ELISA) indireto, paralelamente. Os exames foram realizados com amostras de soros sanguíneos oriundos de bovinos de diferentes raças sendo a maioria deles adultos. A prevalência observada foi de 49,8% (359/721) no ELISA e 26,0% (174/668) no AGID. Todos os 14 grupos dos animais estudados pelo ELISA indireto, mostraram a existência da infeção, enquanto que pelo método da AGID, dois grupos de animais foram negativos. The occurrence of the infection with Bovine Leukosis Virus (BLV) was examined in agar-gel immunodiffusion (AGID) test and with indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), in the State of Pará, Brazil. The blood sera were collected from different breeds including Nelore, Piemontes, Simental, Holstein Frisian, Indubrasil, Girolanda, Simbrasil and their cross-breedings. The majority of the animals were adults. The overall occurrence of infections was 49.8% (359/721) and 26.0% (174/668) for ELISA and AGID test, respectively. All animal groups examined showed infection in ELISA, however in the AGID test two groups were sera negative.

Keywords: IgY antibody – Tetanus toxoid – Antibody stability – ELISA – Clostridium tetani. Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2017-06-01T19:14:32Z No. of bitstreams: 1 10_v.8_3.pdf: 390371 bytes, checksum: fec8c68a5bd6eddfbad5af57220fddfd (MD5) Made available in DSpace on 2017-06-01T19:14:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10_v.8_3.pdf: 390371 bytes, checksum: fec8c68a5bd6eddfbad5af57220fddfd (MD5) Previous issue date: 2009-09 Abstract: Tetanus is an acute, occasionally a fatal, disease of the central nervous system, caused by the toxin of the tetanus bacterium Clostridium tetani. The current techniques used in the diagnosis and therapeutics of tetanus diseases employ monoclonal antibodies produced in mouse. The use of monoclonal antibodies has several advantages such as homogeneity and specificity. In contrast, a remarkable characteristic of polyclonal antibodies, especially the immunoglobulin class IgY, which is extracted from poultry, is obtained in greater amount than IgG antibodies. Therefore, the alternative production of IgY polyclonal antibodies against tetanus toxoid in chicken can become of great interest for immunology industry in therapeutic and diagnosis. In this work, IgY polyclonal antibodies against tetanus toxoid were produced through immunization of chickens with isolated toxoid and measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The effect of storage temperature on the stability of chicken IgY was measured through indirect ELISA. Results showed that the IgY antibodies were produced with success and easily isolated. The time and temperature influence was measured through indirect ELISA. Altogether, the results indicate the use IgY polyclonal antibodies purified from chicken as an alternative for the detection of the tetanus toxin with potential applications in diagnosis and treatment of infectious diseases. Salvador

Keywords: IgY antibody – Tetanus toxoid – Antibody stability – ELISA – Clostridium tetani. Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2017-06-01T19:14:32Z No. of bitstreams: 1 10_v.8_3.pdf: 390371 bytes, checksum: fec8c68a5bd6eddfbad5af57220fddfd (MD5) Made available in DSpace on 2017-06-01T19:14:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10_v.8_3.pdf: 390371 bytes, checksum: fec8c68a5bd6eddfbad5af57220fddfd (MD5) Previous issue date: 2009-09 Abstract: Tetanus is an acute, occasionally a fatal, disease of the central nervous system, caused by the toxin of the tetanus bacterium Clostridium tetani. The current techniques used in the diagnosis and therapeutics of tetanus diseases employ monoclonal antibodies produced in mouse. The use of monoclonal antibodies has several advantages such as homogeneity and specificity. In contrast, a remarkable characteristic of polyclonal antibodies, especially the immunoglobulin class IgY, which is extracted from poultry, is obtained in greater amount than IgG antibodies. Therefore, the alternative production of IgY polyclonal antibodies against tetanus toxoid in chicken can become of great interest for immunology industry in therapeutic and diagnosis. In this work, IgY polyclonal antibodies against tetanus toxoid were produced through immunization of chickens with isolated toxoid and measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The effect of storage temperature on the stability of chicken IgY was measured through indirect ELISA. Results showed that the IgY antibodies were produced with success and easily isolated. The time and temperature influence was measured through indirect ELISA. Altogether, the results indicate the use IgY polyclonal antibodies purified from chicken as an alternative for the detection of the tetanus toxin with potential applications in diagnosis and treatment of infectious diseases. Salvador

The objective of this work was to produce and characterize specific antisera against Brazilian isolates of Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Grapevine virus B (GVB), developed from expressed coat proteins (CPs) in Escherichia coli, and to test their possible use for the detection of these two viruses in diseased grapevines. The coat protein (CP) genes were RT-PCR-amplified, cloned and sequenced. The CP genes were subsequently subcloned, and the recombinant plasmids were used to transform E. coli cells and express the coat proteins. The recombinant coat proteins were purified, and their identities were confirmed by SDS-PAGE and Western blot and used for rabbit immunizations. Antisera raised against these proteins were able to recognize the corresponding recombinant proteins in Western blots and to detect GLRaV-2 and GVB in infected grapevine tissues, by indirect ELISA, discriminating healthy and infected grapevines with absorbances (A405) of 0.08/1.15 and 0.12/1.30, respectively. Expressing CP genes can yield high amount of viral protein with high antigenicity, and GLRaV-2 and GVB antisera obtained in this study can allow reliable virus disease diagnosis. O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar anti-soros específicos contra isolados brasileiros do Vírus do enrolamento-da-folha da videira 2 (GLRaV-2) e do Vírus B da videira (GVB), desenvolvidos a partir das proteínas capsidiais expressas em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus em videiras infectadas. Os genes da proteína capsidial (CP) foram amplificados via RT-PCR, clonados e seqüenciados. Foram, subseqüentemente, subclonados, e os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação das células de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. As proteínas capsidiais recombinantes foram purificadas, e suas identidades foram confirmadas em SDS-PAGE e "Western blot" e utilizadas para imunizar coelhos. Os anti-soros produzidos contra essas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em "Western blot", de detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, e de discriminar videiras sadias e infectadas, com absorbâncias (A405) de 0,08/1,15 e 0,12/1,30, respectivamente. A expressão dos genes CP pode produzir grandes quantidades de proteínas virais, com elevada antigenicidade, e os anti-soros de GLRaV-2 e GVB obtidos neste trabalho possibilitam a diagnose confiável desses vírus.

Keywords: Canine parvovirus - Diagnosis - Egg yolk antibody- ELISA, indirect; Canine parvovirus - Diagnosis - HA-HI Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2016-09-15T16:43:52Z No. of bitstreams: 1 4_v.7_3.pdf: 214631 bytes, checksum: c74d99fe9749dea1e8fb6759c7a3c70a (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-15T16:43:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4_v.7_3.pdf: 214631 bytes, checksum: c74d99fe9749dea1e8fb6759c7a3c70a (MD5) Previous issue date: 2008-09 Canine parvovirus (CPV), cause an intestinal disease characterized by bloody diarrhea, is often fatal in puppies. The virus is transmitted by contact with infected dogs or their feces. The virus is very stable in the environment and may survive for several months in contaminated areas. The CPV attacks the rapidly diving cells of the bone marrow and the small intestine. Several laboratory tests have been developed and are available for specific viral diagnosis. Where facilities are available, rapid diagnosis can be made by electron microscopy (EM) of fecal material from cases with typical signs of disease. The virus also can be isolated in several feline and canine cell lines such as canine and feline kidney cells, but isolation is seldom used in practice since cell cultures are required and at least 1 week for results is required. Fecal hemagglutination-hemagglutination (HA-HI) tests have provided a simple and rapid method for detecting virus in fecal and tissue samples and are employed by several diagnostic laboratories, however the HA test is less sensitive than EM or enzyme-linked immunoassays (ELISA). In this work, the laying chickens are immunized with the canine parvovirus strain Cornell 780916-80 and the egg yolk antibody (IgY) isolated and characterized by indirect ELISA to detect canine parvovirus in feces. Salvador

O objetivo deste estudo foi determinar a prevalência de rebanhos positivos (focos) e identificar os fatores de risco que possam estar associados com a infecção pelo herpesvírus bovino 1 (BoHV-1) em rebanhos bovinos com atividade reprodutiva, na região Oeste do Estado do Paraná. O delineamento estatístico, amostras de soro e informações referentes às propriedades foram as empregadas para o estudo da brucelose bovina no Estado do Paraná dentro do contexto do Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose. Foram avaliadas 1930 fêmeas com idade igual ou superior a 24 meses, provenientes de 295 rebanhos não vacinados contra o BoHV-1. Para o diagnóstico sorológico da infecção pelo BoHV-1, foi utilizado um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto. Em cada propriedade foi aplicado um questionário epidemiológico, afim de obter informações epidemiológicas e práticas de manejo empregadas. Dos 295 rebanhos analisados, 190 foram considerados positivos para o BoHV-1, com a prevalência de rebanhos de 64,41% (I.C.95% = 58,65-69,87%). As variáveis consideradas fatores de risco para a infecção pelo BoHV-1 na análise de regressão logística multivariada foram: i) número (>23) fêmeas com idade >24 meses (OR=2,22; IC: 1,09-4,51); ii) compra de reprodutores (OR=2,68; IC: 1,48-4,82); iii) uso de pastagens comuns (OR=5,93; IC: 1,31-26,82); iv) histórico de abortamento nos últimos 12 meses (OR=2,37; IC: 1,09-5,16); v) presença de animais silvestres (OR=8,86; IC: 1,11-70,73). Estes resultados indicam que a infecção pelo BoHV-1 está amplamente distribuída na região estudada e que fatores relacionados às características das propriedades e ao manejo estão associados à infecção. The aim of this study was to determine the prevalence of positive herds and to identify the risk factors for BoHV-1 infection in breeding cattle herds in the Western region of Parana State. The statistic delineation, the serum samples and information regarding the selected farms, were the same employed in the study of bovine brucellosis for Parana State in the context of National Program for Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis. The sampling was performed in two stages. Blood samples were collected from 1930 females aged >24 months from 295 non vaccinated herds. Serum samples were tested for antibodies against BoHV-1 using an indirect ELISA. The epidemiological questionnaire was applied on all the selected farms and aimed to obtain epidemiological data. Hundred ninety of the 295 herds were positive for BoHV-1, presenting prevalence of positive herds of 64.41% [58.65-69.87%]. The number (>23) of females aged 24 months (OR=2.22; IC: 1.09-4.51), purchased cattle (OR=2.68; IC: 1.48-4.82), use of common grass (OR=5.93; IC: 1.31-26.82), history of abortion in the last 12 months (OR=2.37; IC: 1.09-5.16) and presence of wildlife animals (OR=8.86; IC: 1.11-70.73) were identified as risk factors for BoHV-1 infection in the multivariate logistic regression. These results indicate that BoHV-1 infection is widespread in the studied region and that factors related to the herd characteristic and management are associated with the infection.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008 - F?bio Jorge Moreira da Silva.pdf: 5100916 bytes, checksum: c0a353c763d3ea209bd91de14e9fe1e9 (MD5) Previous issue date: 2008-02-28 Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq This study was conducted with the objective to contribute with the agreement of the relation calves x ticks x hemoparasites in the sector of milk cows of the Farm of the Institute of Zootecnia (FAIZ) of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Seventeen female calves with age between 15 days old and 14 months old, between july of 2006 and june of 2007. These animals were subdivided in three ages bands: up to 2 months, between 3- 6 months and above of 7 months, in accordance with the handling of the property. Was realized ticks`s counting, collection of blood and hematological examination of all the animals in interval of 14 days. The exams were carrying through in laboratories of Parasites Diseases, Clinical Pathology of UFRRJ and the Serological of Embrapa Beef Cattle. Throughout 12 months, it can be verified the constant presence of larvaes, nymphs and females of tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The frequency of positive animals for the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), for the agents of the Tick-borne Disease (Babesia bigemina, B. bovis and Anaplasma marginale) and Borrelia sp., was verified that in all ages bands exist positive serological animal. The frequency and antibody levels, as much for B. bigemina as for B. bovis, evaluated through the indirect ELISA, had been high. This fact associated with the absence of infection symptoms suggests a situation of immunization of the animals and an area of enzootically stable. None trend of seasonal distribution of infections for B. bigemina, B. bovis, A. marginale and Borrelia sp. was observed. Este estudo foi conduzido com o objetivo de contribuir para o entendimento das rela??es bezerros x carrapatos x hemoparasitos no setor de bovinocultura de leite da Fazenda do Instituto de Zootecnia (FAIZ) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Foram utilizadas 17 bezerras com idade entre 15 dias e 14 meses, entre julho de 2006 a junho de 2007. Estes animais foram subdivididos em tr?s faixas et?rias: at? 2 meses, de 3-6 meses e acima de 7 meses, de acordo com o manejo zoot?cnico da propriedade. Procedeu-se contagem de carrapatos, coleta de sangue e exames hematol?gicos de todos animais em intervalo de 14 dias. Os exames foram realizados nos Laborat?rios de Doen?as Parasit?rias, de Patologia Cl?nica da UFRRJ e de Sorologia da Embrapa Gado de Corte. Ao longo de 12 meses, podese verificar a presen?a constante de larvas, ninfas e f?meas de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Em rela??o a freq??ncia de positividade pelo ensaio de imunoadsors?o enzim?tica (ELISA) indireto, para os agentes da Tristeza Parasit?ria Bovina (Babesia bigemina, B. bovis e Anaplasma marginale) e Borrelia sp., verificou-se que em todas as faixas et?rias haviam animais sorologicamente positivos. A freq??ncia e os n?veis de anticorpos, tanto para B. bigemina como para B. bovis, avaliados atrav?s do ELISA indireto, foram altos. Este fato associado ? aus?ncia de sintomas de infec??o sugere uma situa??o de pr?-imuniza??o dos animais e uma ?rea de estabilidade enzo?tica. N?o foi observada qualquer tend?ncia de distribui??o sazonal de infec??es por B. bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale e Borrelia sp.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The diagnosis of toxoplasmosis can be achieved by detecting specific antibodies in patient serum samples using serological methods, mainly the enzymatic ones. But these tests give a lot of false-positive and false-negative results, mostly for IgM and IgA antibodies, making the diagnosis of primary and congenital infections a challenging situation. This way, the present study aimed to evaluate the diagnostic performance of the monoclonal antibodies (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (anti-p22) e 1B8 (anti-p97) in a reverse ELISA (ELISA-mAb) to detect IgG, IgM and IgA antibodies anti-T. gondii in human serum samples. It was analysed 175 serum samples from patients at different stages of infection: recent (n=45), transitional phase (n=40) and chronic (n=55), and negative subjects (n=35) defined by conventional T. gondii serology. The achieved results were compared with those obtained by indirect ELISA using soluble T. gondii antigen (ELISA-STAg). The mAb A3A4 recognizes a conformational epitope in the p30 surface antigen of T. gondii tachyzoites, while A4D12 and 1B8 recognize linear epitopes in the p22 surface and p97 cytoplasmatic antigens, respectively. In an inhibition ELISA test, in which human sera with specific T. gondii IgG antibodies were used to compete with the mAbs for binding to their specific antigens, it was demonstrated that the mAb A3A4 rather than A4D12 and 1B8 showed a better competition capability. The results achieved by reverse ELISA-IgG using the mAbs A3A4 or A4D12 to detect IgG antibodies anti-p30 and anti-p22, respectively, were highly correlated with those obtained by ELISA- STAg, whereas the ELISA-mAb using A4D12 (anti-p22) for the detection of IgM and IgA isotypes showed the highest correlation with ELISA-STAg for both isotypes. ELISA-mAb using 1B8 did not showed significant associations with ELISA-STAg for all the immunoglobulin isotypes researched. In conclusion, this is the first report analyzing the performance of a reverse ELISA for the detection of IgG, IgM and IgA isotypes towards native p22, p30 and p97 molecules from STAg, using a panel of human sera from patients with recent and chronic toxoplasmosis. Thus, reverse ELISA based on capture of native p22 and p30 antigens of STAg by mAbs constitutes an alternative approach that may be considered as an additional tool for the serological diagnosis of toxoplasmosis, particularly in cases of primary and congenital infections. O diagnóstico da toxoplasmose se baseia na detecção de anticorpos específicos em amostras de soro de pacientes, por meio de técnicas sorológicas, particularmente as imunoenzimáticas. As maiores dificuldades na interpretação destes testes referem-se aos resultados falso-positivos e falso-negativos, principalmente com relação à detecção de anticorpos IgM e IgA anti-Toxoplasma gondii, tornando difícil o estabelecimento do diagnóstico da infecção primária e infecção congênita. O presente trabalho objetivou avaliar a utilização de anticorpos monoclonais (mAbs) A3A4 (anti-p30), A4D12 (antip22) e 1B8 (anti-p97) em um ensaio imunoenzimático (ELISA) reverso para a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA contra os antígenos p30, p22 e p97 de T. gondii em soros humanos. Foram analisadas 175 amostras de soros de pacientes com infecção recente (n=45), na fase de transição (n=40) e com infecção crônica (n=55), bem como de indivíduos soronegativos (n=35), definidos por testes sorológicos convencionais. Os resultados obtidos por ELISA reverso usando mAbs (ELISA-mAb) foram comparados aos do ELISA indireto clássico usando antígeno solúvel de T. gondii (ELISA-STAg). O mAb A3A4 reconhece um epítopo conformacional no antígeno de superfície p30, enquanto os mAbs A4D12 e 1B8 reconhecem epítopos lineares, respectivamente, no antígeno de superfície p22 e no antígeno citoplasmático p97 de taquizoítas de T. gondii. Em testes ELISA de inibição utilizando soros positivos para competir com os mAbs pela ligação a seus respectivos antígenos, o mAb A3A4 apresentou maior capacidade de competição que os mAbs A4D12 e 1B8. Os resultados dos ELISA-mAbs A3A4 e A4D12 para a detecção de IgG anti-p30 e anti-p22, respectivamente, foram altamente correlacionados com aqueles obtidos pelo ELISA-STAg. Em relação à detecção de IgM e IgA, os resultados do ELISA-mAb A4D12 (anti-p22) foram mais correlacionados com aqueles determinados pelo ELISA-STAg. ELISA-mAb 1B8 não mostrou associações significativas com ELISA-STAg para todos os isotipos de anticorpos analisados. Em conclusão, a detecção de anticorpos IgG, IgM e IgA específicos aos antígenos p30, p22 e p97 de T. gondii foi demonstrada, pela primeira vez, utilizando um ELISA reverso com mAbs que capturam estes antígenos presentes no STAg. Desta forma, os ELISAmAbs A3A4 e A4D12 para a captura dos antígenos p30 e p22 mostraram representar métodos alternativos para a detecção de anticorpos específicos a T. gondii e podem ser considerados como ferramentas adicionais para um diagnóstico mais seguro da toxoplasmose, particularmente nos casos de infecção primária e congênita. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Foram examinados 440 soros bubalinos, selecionados em um outro exame de cerca de 1200 amostras sangüíneas. Utilizaram-se seis diferentes testes sorológicos para o exame dessas amostras: dois de aglutinação, dois de ELISA indireto e dois de ELISA competitivo. Os animais positivos no ELISA competitivo da FAO/IAEA foram considerados como infectados, e a comparação com os resultados dos outros testes aconteceu neste sentido. A sensibilidade relativa foi de 100%, 98,57%, 97,14%, 91,42% e 79,28%, e a especificidade relativa de 99,33%, 97,33%, 95,66%, 94,00% e 86,33% nas provas de ELISA competitivo, ELISA indireto com conjugado antibovino de cadeia leve (anticorpo monoclonal com HRPO), ELISA indireto com conjugado contra IgG bovino total, teste do antígeno acidificado tamponado e aglutinação rápida, respectivamente. Discute-se o valor dos diferentes testes sorológicos no diagnóstico da brucelose. Four hundred and forty buffalo sera, selected from about 1,200 blood samples of another study, were examined. The samples were tested by six serological methods: two of agglutination, two of indirect ELISA and two of competitive ELISA. To determine the relative sensitivity and specificity of different tests, animals with a positive result to competitive ELISA of the FAO/IAEA were considered as infected. The relative sensitivity of competitive ELISA, indirect ELISA with conjugate anti-bovine light chain monoclonal antibody labelled with HRPO, indirect ELISA with anti-bovine IgG conjugate, rose Bengal test and rapid slide agglutination test was 100%, 98.57%, 97.14%, 91.42% and 79.28%, and the relative specificity 99.33%, 97.33%, 95.66%, 94.00% and 86.33%, respectively. The value of the different serological tests for the diagnosis of brucellosis is discussed.

Bovine Leukemia Virus (BLV) is the etiologic agent of Enzootic Bovine Leukosis, a retrovirus exogenous to the bovine species. Once infected, there is no detectable viraemia but instead there is a strong and persistent immunological response to BLV structural proteins, essentially the gp51 envelope glycoprotein and the mayor core protein p24. We describe the test procedure of an indirect ELISA (I-ELISA) using polyclonal reagents for the detection of antibodies to BLV. For comparison, the sera were simultaneously tested by agar gel immunodiffussion (AGID) test, which is currently used as diagnostic standard for BLV infection. The antigen applied does not require a high degree of purification and the data from the analysis of the negative sera showed that the establishment of a cut-off level corresponding to 3 times the standard deviation (SD) above the mean for the negative control set of sera provided acceptable specificity, reducing the risk of false positives results. A comparison of the results obtained by AGID test and I-ELISA showed that considering a total of 465 serum samples, all of the 234 samples (50%) that were positive by AGID were positive to the I-ELISA. Of 225 serum samples which yielded negative results in the AGID test, 69 (15%) were found to be positive by the I-ELISA and 156 (33%) were negative by both techniques. Few sera (2%) that were non-specific by AGID were defined as negative or positive by I-ELISA. O Vírus da Leucose Bovina (VLB) é o agente etiológico da Leucose Enzoótica Bovina, um retrovirus exógeno da espécie bovina. Uma vez infectado, não se detecta viremia, mas uma forte e persistente resposta imunológica às proteínas estruturais, sobre tudo para gp51 da coberta e para proteína p24 do core. Neste trabalho se descreve o desenvolvimento de um ELISA indireto (ELISA-I), em que se utiliza o soro policlonal para a detecção de anticorpos para VLB. Os soros foram analisados pela prova de IDGA (imunodifusão dupla em gel de ágar) rotineiramente usada como prova padrão. O antígeno escolhido não necessita de alto grau de purificação e os resultados obtidos com os soros negativos permitiram estabelecer um valor de corte de três desvios padrão (DP) sobre a média do grupo de soros negativos, mostrando aceitável especificidade e reduzindo o risco de falsos positivos. A comparação dos resultados conseguidos por IDGA e ELISA-I demonstrou que em um total de 465 soros, 234 (50%) foram positivas por IDGA e ELISA-I. Dos 225 soros negativos por IDGA, 69 (15%) foram positivos por ELISA-I e 156 (33%) foram negativos pelas duas técnicas utilizadas. Apenas 2% dos soros foram inespecíficos por IDGA e se definiram como positivos ou negativos pelo ELISA-I

A Indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit was used for diagnosis of foot and mouth disease virus (FMDV) typeS 01, A24, C3 which occured in Rio Grande do Sul State, Southern Brazil during 1984-1993. The samples were randomly selected and tested by. Elisa, Complement Fixation Test (CFT) and in tissue ctilture. Out of 106 samples 78 (73:5%) were positive by Elisa and 39(36.8 %) were found positive in CFT, when original suspensions were used. Once_those samples were inoculated onto tissue culture both tests gave similar results, although Elisa picked tip more positive samples during the lst passage in tissue culture. The negative samples (16) included in this study were negative in all tests. The Elisa was more sensitive than and as speci fie as CFT. Elisa and tissue culture together were shown to be a better system for detection of Foot and Mouth Disease (FMD) antigen than CFT. Um kit de elisa indireto foi usado para diagnosticar o virus da febre aftosa para os tipos 01, A24, C3 incidentes no Estado do Rio Grande do Sul no período 1984 - 1993. As amostras foram selecionadas ao acaso e testadas por elisa, fixação do complemento(FC) e em cultura de tecido.De um total de 106 amostras de suspensões originais, 78(73,5%) foram positivas em elisa e 39(36,8%) foram positivas por fixação do complemento. Quando estas amostras foram inoculadas em culturas de células, ambos os testes tiveram idêntica performance, embora o teste de elisa tenha sido capaz de detectar mais amostras positivas que o teste de fixação de complemento durante a l' passagem em cultura de tecido. Todas as amostras negativas(16) incluídas no experimento se mostraram negativas em todos os testes e durante toda a investigação. O teste de elisa foi mais sensível que FC; elisa e FC tiveram a mesma especificidade. Elisa e cultura de tecidos se mostraram o melhor sistema paradetectar o antígeno de febre aftosa que o teste de FC.&nbsp