Leucose enzoótica bovina: uso de peptídeo sintético derivado da glicoproteína do envelope viral no imunodiagnóstico

A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença linfoproliferativa infecciosa dos bovinos causada pelo vírus da leucemia bovina (BLV), um membro da família Retroviridae, gênero deltaretrovirus. A LEB é caracterizada por linfocitose persistente e linfossarcoma e tem um impacto econômico expressivo devido a perdas na exportação, tratamento de infecção secundária, redução na produção de laticínios e também devido ao manejo especial necessário. Não obstante, o DNA proviral e as proteínas estruturais do vírus foram encontradas em tecidos humanos, especialmente aqueles associados ao câncer de mama, sugerindo que este vírus pode ser transmitido naturalmente aos seres humanos. A principal forma de detecção da LEB é através do diagnóstico laboratorial, já que muitos animais infectados não apresentam sinais clínicos e os achados clínicos não são conclusivos. O diagnóstico de LEB pode ser feito por métodos moleculares e pela detecção de anticorpos específicos em amostras de soro ou leite. O animal infectado desenvolve uma resposta imune humoral contra proteínas virais, principalmente contra a gp51 (proteína de envelope), e sua identificação é crucial para a vigilância epidemiológica, certificação de áreas livres de doenças e estudos de prevalência. Este trabalho de conclusão de curso compõe-se de um capítulo de revisão de literatura e um capítulo descrevendo o desenvolvimento e padronização de um ELISA indireto usando um peptídeo sintético predito in silico como antígeno. O capítulo de revisão tem como objetivo descrever a biologia, epidemiologia, patogênese, sinais clínicos e diagnósticos para o BLV, assim como a importância da infecção na resposta imune dos animais, e apresentar os mais recentes estudos sobre a possível infecção dos humanos pelo BLV. O segundo capítulo compreende a predição in silico, a síntese química do peptídeo linear KIPDPPQPDFPQL, denominado pgp51 e posterior padronização do ELISA. O ELISA pgp51 foi eficiente para segregar amostras de soro positivas e negativas, indicando que ele tem um grande potencial para ser usado no diagnóstico sorológico de LEB. Posteriormente, o ELISA-i, recém padronizado, foi comparado a testes diagnósticos disponíveis comercialmente. O ELISA indireto utilizando peptídeo sintético pgp51 após predição de epítopos in silico obteve resultados comparáveis aos testes diagnósticos utilizados atualmente podendo também ser usado como teste diagnóstico para LEB para estudos de prevalência da doença no Brasil. Além disso, foi possível observar divergência nos resultados obtidos entre os testes comerciais disponíveis para o diagnóstico do BLV, o que leva a reconsiderações no sistema de diagnóstico usado atualmente. Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious lymphoproliferative disease of cattle caused by bovine leukemia virus (BLV), a member of the Retroviridae family, genus Deltaretrovirus. The EBL is characterized by persistent lymphocytosis and the presence of lymphosarcoma. It has anexpressive economic impact due to export losses, treatment of secondary infection; decrease of dairy production and also due to a differential handling required. Nevertheless, proviral DNA and structural virus proteins have been found in human tissues, especially those associated with breast cancer, suggesting that BLV could be transmitted naturally to humans. The main form for EBL diagnosis is by laboratory methods, once infected animals show no clinical signs or they are usually inconclusive. The diagnosis of EBL can be performed by molecular techniques and by the detection of specific antibodies in serum or milk samples. The infected animal develops a humoral immune response to viral proteins, primarily to gp51 (an envelope protein), and its identification is crucial for epidemiological surveillance, certification of disease-free areas, and prevalence studies. This work consists of a literature review chapter and of another chapter describing the development and standardization of an indirect ELISA using a synthetic peptide predicted in silico as antigen. The review chapter aims to describe the biology, epidemiology, pathogenesis, clinical signs and diagnoses for BLV, as well as the importance of this infection in the immune response of the animals, and present the latest evidencies on the possible human infection by BLV. The second chapter comprises the in silico prediction, the chemical synthesis of the linear peptide KIPDPPQPDFPQL, described as pgp51, and the subsequent standardization of the ELISA. The pgp51 ELISA was efficient to segregate positive and negative serum samples, indicating that it has a great potential to be used in the serological diagnosis of EBL. Afterward, the newly standardized ELISA-i was compared to commercialized available diagnostic tests. The indirect ELISA using synthetic peptide pgp51 after prediction of in silico epitopes obtained results comparable to the currently used diagnostic tests and thus it also can be used as diagnostic test for EBL in studies of prevalence in Brazil. In addition, the commercial tests showed divergence in the results for the diagnosis of BLV, which explicit need to reconsideration in the diagnostic system used currently.