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Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:17:02Z No. of bitstreams: 1 Ana Carolina da Cruz Campos Dissertacao completa.pdf: 2252356 bytes, checksum: b400ce2fe3e5d3a6c50b76439cf6e5e9 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:17:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Carolina da Cruz Campos Dissertacao completa.pdf: 2252356 bytes, checksum: b400ce2fe3e5d3a6c50b76439cf6e5e9 (MD5) Previous issue date: 2018-03-18 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro The metallic ions iron, cooper and zinc are essentials elements to survival of both microorganisms and hosts. To microorganisms, metallic ions take part of proteins structures and perform an important role in enzymatic activities as co-factors. However, these metals might also have a deleterious effect to cells, since in high concentrations they take part in free radical generation, act on peroxidation of membrane lipids and block action of fundamental enzymes to cellular metabolism. On a previous study, inhibition of iron capitation altered biofilm formation and adherence of enteroaggregative E. coli (EAEC) to epithelial cells. Hence, we decided to investigate the metallic ions influence in adherence of EAEC strains to biotic and abiotic surfaces. The strains used on this study had been already characterized regarding their fimbriae expression. Besides other characteristics, such as presence of iron capitation genes in strains, were considered when we evaluated the responses to metallic ions. Data showed that there is no parallel between these characteristics and the strains response to metallic ions. Nevertheless, results showed that metallic ions, especially cooper and zinc ions reduce biofilm formation in most of the tested strains. Additionally, other aspects like substrate influence biofilm formation. On this work, we observed that metallic ions interfere with biofilm formation in a distinguish way, there is a different response depending of the substrate, glass or polystyrene. We also tested if the presence of oxygen interfered with biofilm formation and it might increase or reduce biofilm in some of the strains. In addition, the strains showed increased or reduced hydrophobicity in the presence of metallic ions. Metals not only altered biofilm formation but also reduced cell viability on the biofilm. The cytotoxicity assays were performed in eukaryotic cells to verify the metals influence on cellular viability. Three cells lines were tested, HEp-2, T84 and Caco-2. The most resistant cell line, Caco-2, was chosen to adherence assays. We observed that metals modify the adherence pattern of some bacterial strains. In conclusion metallic ions interfere with EAEC pathogenesis, probably altering the surface of bacteria. O íons metálicos de ferro, cobre e zinco são elementos essências para a sobrevivência de microrganismos e de mamíferos. Para os microrganismos os íons metálicos participam da estrutura de proteínas exercendo um papel importante na atividade enzimática como co-fator. No entanto, esses metais também podem ter efeitos deletérios para as células. Uma vez que em altas concentrações participam da geração de radicais livres, atuam na peroxidação de lipídeos de membrana e bloqueiam a ação de enzimas fundamentais para o metabolismo celular. Em um estudo recente foi demonstrado que a inibição da captação de íons ferro alterou a formação de biofilmes e a aderência das cepas EAEC. Foram usados neste estudo cepas já caracterizadas quanto à expressão de fimbrias. Além disto, outras características, como a presença de genes de captação de ferro pelas cepas foram levados em conta na finalidade de se encontrar alguma relação destas características com as respostas aos íons metálicos. Nossos resultados mostraram que de fato não se tem nenhum paralelo entre essas características e a resposta das cepas aos íons metálicos. Contudo, resultados obtidos mostram que os íons metálicos principalmente os íons de cobre e zinco reduziram a formação de biofilme para a maioria das amostras testadas. Além disto, a formação de biofilme também foi influenciada por outros aspectos como o substrato. Os íons metálicos foram capazes de interferir na formação do biofilme de forma distinta. Dependendo do substrato, vidro ou poliestireno, levou a uma resposta diferente na formação de biofilme. Também foi testado se a presença de oxigênio interfere na formação do biofilme. Para algumas cepas na presença de metais e em aerobiose ocorreu aumento da formação de biofilme, enquanto para outras ocorreu redução. As cepas apresentaram também alteração na hidrofobicidade na presença dos íons metálicos. Os metais além de alterar a formação de biofilme também reduziram a viabilidade das células no biofilme. Foi realizado o teste de citoxidade das células eucarióticas para verificar a influência dos metais na viabilidade celular. Foram testados três linhagens, HEp-2, T84 e Caco-2. A mais resistente, a Caco-2, foi escolhida para os experimentos de aderência. Observamos que os metais alteraram o padrão de aderência de algumas cepas bacterianas. Todos esses resultados sugeriram que os íons metálicos podem interferir em processos da patogênese de EAEC, provavelmente alterando a superfície bacteriana.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:21:03Z No. of bitstreams: 1 Tese final - Biblioteca - Graziela da Silva Mello.pdf: 6161212 bytes, checksum: e4e525284a1eb6bd67a1b28f16639cd4 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese final - Biblioteca - Graziela da Silva Mello.pdf: 6161212 bytes, checksum: e4e525284a1eb6bd67a1b28f16639cd4 (MD5) Previous issue date: 2016-04-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Schwartzia brasiliensis is a native species, with neotropical distribution, usually found in salt marsh environments. Some studies indicate its medicinal potential with analgesic, anti-inflammatory, antibacterial and trypanocidal activity and DNA protective. Currently, cancer is recognized as the disease responsible for more deaths worldwide, and it s treatment usually invasive and not always effective, which stimulates the search for new drugs, including those from plant origin. Considering the need for exploitation of plant resources in a sustainable manner, plant tissue culture techniques can be used as an alternative to continous production of medicinal interest substances. Thus, this study aimed to establish different in vitro systems of S. brasiliensis, aiming at the production metabolites of medicinal interest, as well as evaluation of the genotoxic, antigenotoxic, antineoplastic potential and determining the phytochemical profile of extracts and fractions of materials obtained in vivo and in vitro. Studies have been conducted on the production of callus and cell suspensions evaluate and the influence of different growth regulators, luminosity, types of explants and elicitors on these systems. In addition, was evaluated the genotoxic, antigenotoxic, antineoplastic potential and the phytochemical profile of the material obtained in vivo and in vitro. The addition of the growth regulators KIN and PIC favored the production of friable callus in the presence or absence of light from leaf and stem explants, while the use of BAP associated with NAA influenced the production of compact callus from leaf explants, under light. The use of methyl jasmonate as elicitor induced higher accumulation of biomass in callus of S. brasiliensis. Cell suspension cultures were established from friable callus obtained from stem explants, in the absence of light. The assessment of the genotoxic and antigenotoxic potentials were conducted through plasmid DNA agarose gel electrophoresis and showed that aqueous and methanolic extracts of leaves and stems, besides the methanol extracts of cell suspensions obtained in vitro were able to reduce breakage caused by SnCl2, and did not cause DNA damage. The evaluation of antineoplasic potential of extracts and fractions in K562 cell line revealed through the cell viability test by MTT assay, the ethyl acetate fraction is more cytotoxic (IC50 = 32,94±6,49 µg mL), results demonstrated by optical microscopy. It was evaluated by flow cytometry technique, the type of death, DNA fragmentation and cell cycle induced by the fractions from methanolic extract of leaves of S. brasiliensis cultivated in vivo. All fractions induced cell death, mainly by necrosis. Only the aqueous fraction caused further fragmentation of the DNA compared to the negative control. In parallel, ethyl acetate and hexane fractions induced an increase in the number of cells in the S phase of the cell cycle. Analyses by HPLC-UV-DAD indicate that antigenotoxic and antineoplastic potentials of S. brasiliensis grown in vivo and in vivo, could be due to flavonoids. These results are the first studies for the species Schwartzia brasiliensis é uma espécie nativa, com distribuição neotropical, encontrada geralmente em ambientes de restinga. Alguns estudos indicam seu potencial medicinal para as atividades analgésica, anti-inflamatória, antibacteriana, tripanocida e protetora ao DNA. Atualmente, o câncer é reconhecido como a doença responsável pelo maior número de óbitos no mundo, sendo seu tratamento geralmente invasivo e nem sempre eficaz, o que estimula a busca de novos fármacos, inclusive de origem vegetal. Considerando a necessidade de exploração dos recursos vegetais de forma sustentável, as técnicas de cultura de tecidos vegetais podem ser utilizadas como alternativa para a produção contínua de substâncias de interesse medicinal. Dessa forma, o presente trabalho objetivou o estabelecimento de diferentes sistemas de cultivo in vitro de S. brasiliensis visando à produção de metabólitos de interesse medicinal, avaliação do potencial genotóxico, antigenotóxico, antineoplásico e a determinação do perfil fitoquímico de extratos e frações de materiais obtidos in vivo e in vitro. Foram realizados estudos sobre a produção de calos e suspensões celulares e a influência de diferentes fitorreguladores, luminosidade, tipos de explantes e elicitores sobre estes sistemas. Adicionalmente, foram avaliados o potencial genotóxico, antigenotóxico, antineoplásico e o perfil fitoquímico do material obtido in vivo e in vitro. A adição dos fitorreguladores KIN e PIC propiciou a produção de calos friáveis, na presença ou ausência de luz, a partir de explantes foliares e caulinares, enquanto o uso do fitorregulador BAP associado ao ANA influenciou a produção de calos compactos a partir de explantes foliares, sob luminosidade. O uso do elicitor metil jasmonato induziu o maior acúmulo de biomassa em calos de S. brasiliensis. Culturas de células em suspensão foram estabelecidas a partir de calos friáveis obtidos a partir de explantes caulinares, sem luminosidade. Os extratos metanólico e aquoso de folhas e caules, assim como o extrato metanólico de suspensões celulares obtidas in vitro foram capazes de reduzir a quebra do DNA causado pelo SnCl2, e não causaram dano ao DNA. A avaliação do potencial antineoplásico de extratos e frações em células da linhagem K562 revelou, através do método de viabilidade celular por MTT, que a fração acetato de etila é a mais citotóxica (IC50 = 32,94±6,49 μg/mL), após resultado foi comprovado através da microscopia óptica. Avaliou-se, por citometria de fluxo, o tipo de morte, a fragmentação do DNA e alteração no ciclo celular induzidos pelas frações obtidas a partir de extrato metanólico de folhas de S. brasiliensis cultivada in vivo. Todas as frações induziram a morte celular, principalmente por necrose. Somente a fração aquosa causou maior fragmentação do DNA, quando comparada ao controle negativo. Paralelamente, as frações acetato de etila e hexano induziram um aumento do número de células na fase S do ciclo celular. As análises por CLAE-UV-DAD indicam que o potencial antigenotóxico e antineoplásico de S. brasiliensis cultivada in vivo e in vivo pode estar relacionado à presença de flavonoides. Estes resultados constituem os primeiros estudos realizados para a espécie

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:24:43Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO LETICIA CRUZ.pdf: 1939773 bytes, checksum: d0508ddb84adb8d2b3052b7494978cd1 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:24:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO LETICIA CRUZ.pdf: 1939773 bytes, checksum: d0508ddb84adb8d2b3052b7494978cd1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Medicinal plants are used for the treatment and cure of various diseases since the dawn of humanity, because of their therapeutic properties. In Brazil, this practice has been influenced by Indian, African and European civilizations. From the popular knowledge, these plant species are used in different forms such as teas, potions, baths, essential oils and cuisine. The diversity of special metabolites present in different parts of the plants has attracted great interest from the pharmaceutical industry, with currently over 25% of marketed drugs are derived, directly or indirectly, of medicinal plants. Among them, Chrysobalanus icaco L., or abajeru as it is popularly known, has many biological activities, detacando the effects: antiviral and hypoglycemic. The literature suggests isolating one triterpene (pomólico acid) from the methanol extract of this plant, capable of inhibiting growth and inducing apoptosis in a erythroleukemic cell line. In order to confirm this activity in other tumor type, samples of C. icaco were collected in the Parque das Dunas, Cabo Frio, RJ, and extracts were prepared from leaves immersed in methanol (200 g / L). Human lung carcinoma cells (A549 strain) and a normal line (MRC5) were treated with different concentrations of extract. After the 24 hour treatment period, the cytotoxic activity was assayed by blue exclusion method and trypan clonogenic recovery, while the genotoxic by the comet assay. The most cytotoxic effect was observed when cells were exposed to I2FP extract at concentrations of 6.25 and 12.5 ug / ml. Additionally, the genotypes of both the cell lines and plants, can play an important role in these effects since the cancer cells showed reduced mitogenic capacity and observed DNA damage in cells by the comet assay. The chromatographic analysis of the extract was performed by high performance liquid chromatography (HPLC), and it was detected, mostly, phenolic compounds such as flavones. The histochemical technique of the leaf also detected the presence of phenolic compounds other alkaloids. The treatment with plasmids extracts induce breaks in DNA, in addition to increasing the transforming capacity thereof. Finally, the survival rate was lower in tumor cell line A549 cells than in normal cells (MRC5). It has been shown the potential cytotoxic, genotoxic and anti-genotoxic the methanol extract of C. icaco in different biological systems and secondary metabolites may be responsible for the activities identified in this study. In addition to emphasizing the need to be careful in the indiscriminate use of these extracts as well as any other product, called by the people of "natural" Plantas medicinais são empregadas para o tratamento e cura de várias doenças desde os primórdios da humanidade, devido às suas propriedades terapêuticas. No Brasil, esta prática tem sido influenciada pelas civilizações indígena, africana e européia. A partir do conhecimento popular, essas espécies de plantas são usadas em diferentes formas, como chás, garrafadas, banhos, óleos essenciais e na culinária. A diversidade de metabólitos especiais presentes em diferentes partes das plantas tem despertado grande interesse da indústria farmacêutica, sendo que, atualmente, mais de 25% dos medicamentos comercializados são derivados, direta ou indiretamente, de plantas medicinais. Dentre elas, Chrysobalanus icaco L., ou abajeru, como é popularmente conhecida, apresenta, muitas atividades biológicas, detacando-se os efeitos: antiviral e hipoglicemiante. A literatura cita o isolamento um triterpeno (ácido pomólico), a partir do extrato metanólico dessa planta, capaz de inibir o crescimento e induzir apoptose em uma linhagem celular eritroleucémica. Com o objetivo de confirmar essa atividade em outra linhagem tumoral, amostras de C. icaco foram coletadas no Parque das Dunas, Cabo Frio , RJ, e extratos foram preparados a partir de folhas imersas em metanol (200 g/L). Células pulmonares humanas de carcinoma (linhagem A549) e linhagem normal (MRC5) foram tratadas com diferentes concentrações desse extrato. Após o período de tratamento de 24 horas, a atividade citotóxica foi analisada pelos métodos de exclusão de azul de trypan e recuperação clonogenica, enquanto que a genotóxica, pelo ensaio cometa. O maior efeito citotóxico foi observado quando as células foram expostas ao extrato I2FP nas concentrações de 6,25 e 12,5 μg/mL. Complementarmente, os genótipos, tanto das plantas como das linhagens celulares, podem desempenhar um papel importante nestes efeitos, uma vez que as células neoplásicas mostraram diminuição da capacidade mitogênica e observou-se danos no DNA das células pelo ensaio cometa. A análise cromatográfica do extrato foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), tendo-se detectado, majoritariamente, compostos fenólicos, tais como as flavonas. A técnica de histoquímica da lâmina foliar também detectou a presença de compostos fenólicos, além de alcalóides. O tratamento de plasmídeos com os extratos induziu quebras no DNA, além de aumentar a capacidade transformante dos mesmos. Finalmente, a taxa de sobrevivência foi menor na linhagem tumoral A549 do que nas células normais (MRC5). Demonstrou-se os potenciais citotóxico, genotóxico e anti-genotóxico do extrato metanólico de C. icaco em diferentes sistemas biológicos e que metabólitos secundários possam ser responsáveis pelas atividades detectadas neste estudo. Além de enfatizar a necessidade de se ter cuidado no uso indiscriminado destes extratos, assim como de qualquer outro produto, chamado pela população de natural

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:15:57Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao donizeti versao final rev biblioteca.pdf: 1039846 bytes, checksum: 8c4c24cd8f698ebf2b195c2453f62021 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao donizeti versao final rev biblioteca.pdf: 1039846 bytes, checksum: 8c4c24cd8f698ebf2b195c2453f62021 (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 Diphtheria is a disease it could be preventable by immunization although remains endemic in many regions of the world. Besides the classical cases of diphtheria, invasive diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia and catheter-related infections, has affected adults partially immunized. The multifactorial nature of virulence factors that promote biofilm formation and survival in macrophages have been shown to Corynebacterium diphtheriae. However, few are the studies that investigated the influence of environmental conditions on the virulence of the pathogen. Since oxidants are capable of generating free radicals lead to oxidative stress and, consequently, may result in adaptive response and influence in biofilm formation and bacterial virulence, this study aimed to evaluate the effects of hydrogen peroxide (H2O2), paraquat and potassium tellurite (K2TeO3) in biological properties of strains of C. diphtheriae of different origins. The results show that the strains of C. diphtheriae showed levels of resistance K2TeO3, H2O2 and paraquat, but in varying intensities and independent production capacity of diphtheria toxin. Some samples, toxigenic or non-toxigenic, isolated respiratory tract demonstrated adaptive response to H2O2 passing thus expressing increased resistance after exposure prior to said oxidizing agent. C. diphtheriae seemed not display adaptive responses to K2TeO3 and paraquat. C. diphtheriae was able to produce biofilm on the surface of substrates abiotic hydrophilic in nature (glass) and hydrophobic (polystyrene) in the presence of oxidizing agents - K2TeO3, H2O2 and paraquat. The presence of oxidizing agents influence the biofilm formation of some samples.The paraquat inhibited the production of biofilm from all samples. The sample TR241 had inhibited the production of biofilm in the presence of oxidizing agents three analyzed. Moreover, the presence of H2O2 and K2TeO3 stimulated biofilm production of some samples. For all samples C. diphtheriae tested, independent of the origins and biotypes production capacity of diphtheria toxin, molecular assays indicated the presence of chromosomal gene sequences homologous to genes involved in tellurite resistance and protection against oxidative stress present in other bacterial species, genes encoding protein DIP 0906 (Ter) and protein DIP 1421 (oxyR). No correlation was observed susceptibility and adaptive response to oxidants with different biological activities bacterial: origin, isolation site, production of diphtheria toxin, sucrose metabolism and biofilm production. In conclusion, oxidative stress was able to influence virulence factors of C. diphtheriae, as the capacity of production of biofilm, which may be contributing to the pathogenesis of diphtheria classical as well as invasive disease caused by strains non-toxigenic. A difteria é uma doença imunoprevinível que permanece endêmica em diversas regiões do mundo. Além dos casos de difteria clássica, doenças invasivas como endocardite, osteomielite, pneumonia e infecções relacionadas à cateter, tem acometido indivíduos adultos parcialmente imunizados. A natureza multifatorial dos fatores de virulência que favorecem a formação de biofilme e sobrevivência em macrófagos tem sido evidenciada para o Corynebacterium diphtheriae. Entretanto, escassos são os trabalhos que investigaram a influência de condições ambientais na virulência do patógeno. Uma vez que agentes oxidantes são capazes de gerar radicais livres e levar ao estresse oxidativo que, consequentemente, podem resultar em resposta adaptativa e influenciar na formação do biofilme e na virulência bacteriana, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar os efeitos do peróxido de hidrogênio (H2O2), paraquate e telurito de potássio (K2TeO3) em propriedades biológicas de cepas de C. diphtheriae de origens diversas. Os resultados demonstraram que as amostras de C. diphtheriae apresentaram níveis de resistência ao K2TeO3, H2O2 e paraquate, porém em intensidades variadas e independentes da capacidade de produção da toxina diftérica. Algumas amostras, toxinogênicas ou não, isoladas do trato respiratório superior demonstraram resposta adaptativa para H2O2 passando, portanto, a expressar resistência aumentada após uma prévia exposição ao referido agente oxidante. C. diphtheriae não exibiu respostas adaptativas para o K2TeO3 e paraquate. C. diphtheriae foi capaz de produzir biofilme na superfície de substratos abióticos de natureza hidrofílica (vidro) e hidrofóbica (poliestireno) na presença de agentes oxidantes K2TeO3, H2O2 e paraquate. A presença dos agentes oxidantes influenciou na formação de biofilme de algumas amostras. O paraquate inibiu a produção de biofilme de todas amostras. A amostra TR241 teve a produçao de biofilme inibida na presença dos três agentes oxidantes analisados. Por outro lado, a presença de H2O2 e do K2TeO3 estimulou a produção de biofilme de algumas amostras. Para todas as amostras de C. diphtheriae testadas, independentes das origens, biotipos e da capacidade de produção de toxina diftérica, os ensaios moleculares indicaram a presença de sequências gênicas cromossômicas homólogas, codificadores da proteína DIP 0906 (TeR) e da proteína DIP 1421 (OxyR), envolvidos na resistência ao telurito e na proteção contra o estresse oxidativo, respectivamente. Não foi observada correlação da suscetibilidade e a resposta adaptativa aos agentes oxidantes com as diferentes características bacterianas: origem, sítio de isolamento, produção de toxina diftérica, metabolização de sacarose e produção de biofilme. Em conclusão, o estresse oxidativo foi capaz de influenciar fatores de virulência do C. diphtheriae, como a capacidade de produçao de biofilme, que podem estar contribuindo para a patogenia da difteria clássica assim como de doenças invasivas causadas por cepas atoxinogênicas.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:24:11Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAcao BIANKA - PDF - FINAL.pdf: 8935399 bytes, checksum: 0c46b64a97a6747c396f0ef9d1d9b0de (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:24:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAcao BIANKA - PDF - FINAL.pdf: 8935399 bytes, checksum: 0c46b64a97a6747c396f0ef9d1d9b0de (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Petiveria alliacea L. popularly known in Brazil as Guiné , Amansa-senhor or Tipi belongs to the Phytolaccaceae family. Native from the Amazon region, it has been cultivated in many tropical areas for medicinal or ritualistic purposes. The aim of this study was: i) the development and multiplication of plants of P. alliacea L. through tissue culture methods as well as monitoring phytochemical cultures; ii) comparative assessment of genotoxic and antigenotoxic potentialities between field collected and in vitro grown plants. Specimens from different populations occurring in the state of Rio de Janeiro were used as matrices for the culture. It was established a protocol for propagation in MS medium supplemented with different BAP + ANA concentrations and combinations whose best result (BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM) provided 8 plants per explant in average. The phytochemical analysis was based on chromatographic methods of different extracts both of field and in vitro plant populations resulting in different substances identified through the Thin-layer chromatography analyzing samples. The extracts were also assayed by cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas having identified various substances, including the dibenzyl disulfide, a degradation tiosulfinato s product with important function in plant defense and increasing use by the pharmaceutical industry. Field and in vitro plant aqueous extracts were evaluated for genotoxic and antigenotoxic potentialities using PUC 9.1 plasmid DNA. These results showed changes in the DNA structural conformation indicating the occurrence of single and double strand breaks induced by the extracts in a dose-response way. Finally, data also pointed to a protective effect of aqueous extract against stannous chloride oxidative damage, characterizing an antigenotoxic potentiality of aqueous extract. Petiveria alliacea L. é uma planta pertencente à família Phytolaccaceae, conhecida popularmente no país como guiné, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Região Amazônica tem sido cultivada em muitas áreas tropicais com propósito medicinal ou ritualístico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicação de plantas de P. alliacea L. através de métodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoquímico das culturas, e (ii) avaliação comparativa das potencialidades genotóxica e antigenotóxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populações ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicação das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentrações e combinações, que forneceu como melhor resultado em média 8 plantas por explante na concentração de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A análise fitoquímica foi baseada em métodos cromatográficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populações estudadas resultando em diferentes substâncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram também avaliados por cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substâncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradação de tiosulfinatos com importantes atividades biológicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos à avaliação da potencialidade genotóxica e antigenotóxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentrações utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alterações na conformação estrutural do DNA, indicando a ocorrência de quebras simples e duplas nesta molécula. Observou-se também que as lesões aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentração dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados também apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relação aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, também, uma potencialidade antigenotóxica do extrato aquoso.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:54Z No. of bitstreams: 1 Suelen Bozzi Costa Tese completa.pdf: 10709943 bytes, checksum: a254fed54de5f0edaf220bbe11ce2b8d (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suelen Bozzi Costa Tese completa.pdf: 10709943 bytes, checksum: a254fed54de5f0edaf220bbe11ce2b8d (MD5) Previous issue date: 2012-12-11 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro The epithelial cell is the first contact between microorganisms and host. This interaction results in production of several cytokines, chemokines, and inflammatory molecules by epithelial cells and also stimulate the generation of reactive oxygen species (ROS). In the present study, we have evaluated whether the interaction to HEp-2 cells causes genotoxicity to mutants derived from Escherichia coli K-12 deficient in some enzymes that are part of the system of base excision repair (BER). Moreover, we measured the expression of SOS system, which is induced by the presence of damage to the bacterial genome. Our results showed mainly presence of filamentous bacterial growth in xthA mutant (BW9091) and triple xthA nfo nth mutant (BW535) when submitted to HEp-2 cells interaction assays. When experiments were performed in the absence of mannose, data showed enhanced interaction of viable bacteria to HEp-2 cells for all strains tested. Furthermore, the removal of D-mannose resulted in an increase in both number and size of bacterial filamentous forms, indicating the involvement of mannose-sensitive adhesins in the filamentation of these strains. In order to verify whether the increased filamentation growth in this assay was a consequence of SOS induction, triggered by interaction to HEp-2 cells, we measured expression of SOS in the presence and absence of D-mannose. Indeed, we observed higher expression of SOS response in the absence of mannose than in experiments performed in the presence of D-mannose. Moreover, we observed that the absence of xthA was important to filamentation increasing in absence of D-mannose. Based on these results, we verified if interaction to abiotic surfaces, like glass, could lead to filamentation of these strains. We also observed numerous filaments in BER mutants, BW9091 and BW535, when compared to wild-type strain AB1157. The filamentation observed was a consequence of SOS induction, triggered by attachment to the glass surface. In part, the filamentation and SOS induction observed in these experiments were related to ROS production. We also quantified interacted bacterial cells and it was observed moderated biofilm formation in all strains tested. However, biofilm formation depended on the ability of the bacteria to induce the SOS response, under both aerobic and anaerobic conditions. The oxygen tension was important factor for interaction of the BER mutants, since these mutants exhibited decreased quantitative adherence under anaerobic conditions. However, this decrease was not related to BER mutants death. Scanning electron microscopy was also performed in the wild-type strain and BER mutants (BW9091 e BW535) and biofilm formation was confirmed under both aerobic and anaerobic conditions. We observed a structure similar to a extracellular matrix which involved biofilms of wild type strain (AB1157) and xthA mutant (BW9091). However, the formation of this structure by both strains depended on the oxygen tension, since biofilm formation, under anaerobiosis condition, did not presented this structure. In conclusion, was provided that bacterial interaction to biotic and abiotic surfaces can lead to damage of bacterial genome, resulting in SOS induction and associated filamentation. A célula epitelial é o primeiro contato entre os micro-organismos e o hospedeiro. Essa interação pode levar a produção de diversas citocinas, quimiocinas, moléculas inflamatórias e também estimular a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO). Neste trabalho avaliamos se a interação com as células HEp-2 poderia ser genotóxica para os mutantes derivados de Escherichia coli K-12 deficientes em algumas enzimas que fazem parte do sistema de reparo por excisão de base (BER). Além disto, avaliamos a expressão do sistema SOS, que é induzido pela presença de danos no genoma bacteriano. Os resultados obtidos mostraram a presença de filamentos, na interação com células HEp-2, principalmente, no mutante xthA (BW9091) e no triplo mutante xthA nfo nth (BW535). Quando a interação foi quantificada na ausência da D-manose, observamos um aumento das bactérias aderidas. Além disto, a quantidade e o tamanho dos filamentos também aumentaram, mostrando que as adesinas manose-sensíveis estavam envolvidas na filamentação bacteriana. Para comprovar se o aumento da filamentação observada neste ensaio foram uma consequência da indução do sistema SOS, desencadeada pela interação com as células HEp-2, quantificamos a expressão do SOS, na presença e na ausência da D-manose. De fato, observamos que a indução do SOS na ausência da D-manose foi maior, quando comparada, com o ensaio realizado na presença de D-manose. Além disto, observamos que a ausência de xthA foi importante para o aumento da filamentação observada na ausência de D-manose. Diante destes resultados, verificamos se a resposta de filamentação ocorreria quando as bactérias interagiam com uma superfície abiótica como o vidro. Observamos também inúmeros filamentos nos mutantes BER, BW9091 e BW535, quando comparados a cepa selvagem AB1157. Essa filamentação foi associada à indução do SOS, em resposta a interação das bactérias com o vidro. Em parte a filamentação e a indução do SOS observadas na interação ao vidro, foram associadas à produção de ERO. Quantificamos também o número de bactérias aderidas e observamos que as nossas cepas formavam biofilmes moderados. Contudo, a formação de biofilme dependia da capacidade da bactéria induzir o sistema SOS, tanto em aerobiose como em anaerobiose. A tensão do oxigênio foi importante para interação dos mutantes BER, uma vez que os mutantes BW9091 e BW535 apresentaram uma quantidade de bactérias aderidas menor em anaerobiose. Contudo, a diminuição observada não estava vinculada a morte dos mutantes BER. Também realizamos microscopia de varredura na cepa selvagem e nos mutantes, BW9091 e BW535 e confirmamos que as três cepas formavam biofilmes tanto em aerobiose como em anaerobiose. Observamos uma estrutura sugestiva de matriz extracelular envolvendo os biofilmes da cepa selvagem AB1157 e do mutante BW9091. No entanto, a formação desta estrutura por ambas as cepas dependia da tensão de oxigênio, pois nos biofilmes formados em anaerobiose essa estrutura estava ausente. Em conclusão, mostramos que na interação das bactérias com a superfície biótica e abiótica, ocorreu lesão no genoma, com indução do SOS e a resposta de filamentação associada.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:57:48Z No. of bitstreams: 1 Cecilia de Andrade Bhering Dissertacao completa.pdf: 2170942 bytes, checksum: d862756248d590b09b2635a7fd970229 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:57:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia de Andrade Bhering Dissertacao completa.pdf: 2170942 bytes, checksum: d862756248d590b09b2635a7fd970229 (MD5) Previous issue date: 2012-07-31 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro Emodin is an anthraquinone structurally similar to aloe-emodin and both have been identified as capable of causing oxidative damage by ROS production. Its presence in skin cosmetics and toiletries, associated to the information that the photoactivation of anthraquinones leads to increased oxidative damage caused by ROS, make studies about the association of emodin with UVA relevant. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity induced by the combination of emodin with sublethal doses of UVA radiation in Escherichia coli cells (wild strain and strains deficient in enzymes of BER) by bacterial survival assay (UVA dose rate equal to 20J/m²/s, totaling 108kJ/m² at the end of 90min of experiment); and in A549 cell line by trypan blue exclusion assay and clonogenic survival(dose rate of UVA equal to 20J/m²/s, totaling 36kJ/m² at the end of 30 minutes of experiment). Furthermore, the genotoxicity of these agents was studied by electrophoresis on agarose gel of plasmid DNA (dose rate of UVA equal to 16J/m²/s, totaling 57,6kJ/m² at the end of 60 minutes of experiment). According to the results: i) concentrations equal or below 5.55mM of emodin did not affect the survival in any of the studied strains; ii) proteins Xth and Fpg appear to have an important role in the repair of lesions induced by emodin, at high concentrations, suggesting the involvement of base excision repair (BER) in this process, iii) the association of emodin with UVA showed to be cytotoxic in all strains of E. coli iv) The nfo gene was the most important in bacterial resistance to damages induced by the association of the two agents, reinforcing the involvement of BER and indicating a possible role of the nucleotide incision repair (NIR), v) emodin appears to have interacted with plasmid DNA, altering its migration pattern in the agarose gel; vi) in A549 cell line, emodin caused immediate toxic effects that seemed to be repaired with time. However, when the drug remained for 24 hours in contact with the cells, there was a reduction in cell survival which seems to be in a dose dependent mode, vii) The concentrations of 10μM and 25μM of emodin, when associated with UVA, were responsible for a survival reduction of more than 50% survival in A549 cells, reaching 100% of death with the concentration of 50μM of emodin, viii) UVA radiation potentiates the cytotoxic effect of emodin in two experimental models in the present study, indicating that this interaction is genotoxic and therefore harmful to health. A emodina é uma antraquinona estruturalmente semelhante à aloe-emodina e ambas tem sido apontadas como capazes de causar lesões oxidativas pela produção de ERO. Sua presença em produtos dermocosméticos e de higiene pessoal, associada às informações de que a fotoativação de antraquinonas levaria ao aumento de lesões oxidativas causadas por ERO, torna relevante o estudo da associação da emodina com a radiação UVA. O objetivo desse trabalho foi avaliar a citotoxicidade induzida pela associação da emodina com doses subletais de radiação UVA, em células de Escherichia coli (selvagem e cepas deficientes em enzimas do BER), através de ensaios de sobrevivência bacteriana (taxa de dose de UVA igual a 20J/m²/s, totalizando 108kJ/m² ao final de 90min de experimento), e em células da linhagem A549 pela exclusão do corante azul de tripan e sobrevivência clonogênica(taxa de dose de UVA igual a 20J/m²/s, totalizando 36kJ/m² ao final de 30min de experimento). Além disso, a genotoxicidade desses agentes foi estudada por eletroforese em gel de agarose de DNA plasmidial (taxa de dose de UVA igual a 16J/m²/s, totalizando 57,6kJ/m² ao final de 60min de experimento). De acordo com os resultados: i) Concentrações iguais ou abaixo de 5,55mM de emodina não alteraram a sobrevivência em nenhuma das cepas estudas; ii) As proteínas Xth e Fpg parecem ter um papel importante no reparo das lesões causadas pela emodina, em altas concentrações, sugerindo a participação do reparo por excisão de bases (BER) nesse processo; iii) A associação da emodina com a radiação UVA se mostrou citotóxica em todas as cepas de E. coli; iv) O gene nfo foi o mais importante na resistência bacteriana às lesões induzidas pela associação dos dois agentes, reforçando o envolvimento do BER e indicando uma possível participação do reparo por incisão de nucleotídeos (NIR); v) A emodina parece ter interagido com o DNA plasmidial, alterando seu padrão de migração no gel de agarose; vi) Em células da linhagem A549, a emodina causa efeitos tóxicos imediatos que parecem ser reparados ao longo do tempo. Porém, quando a droga permaneceu por 24 horas em contato com as células, houve uma diminuição na sobrevivência celular que parece ser dosedependente; vii) As concentrações de 10μM e 25μM de emodina, quando associadas ao UVA, se mostraram responsáveis pela redução de mais de 50% na sobrevivência nas células A549, chegando a 100% de morte quando a concentração de emodina foi de 50μM; viii) A radiação UVA potencializou os efeitos citotóxicos da emodina, nos 2 modelos experimentais do presente estudo, indicando que a interação da emodina com a radiação UVA seja genotóxica e portanto prejudicial à saúde.

Submitted by Boris INFORMAT (boris@uerj.br) on 2021-04-26T01:10:52Z No. of bitstreams: 1 Antonio Carlos T da S Junior.pdf: 5453661 bytes, checksum: 25de8547051d66474fc9316dc0a3b6fd (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-26T01:10:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonio Carlos T da S Junior.pdf: 5453661 bytes, checksum: 25de8547051d66474fc9316dc0a3b6fd (MD5) Previous issue date: 2011-12-07 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Didactically, we can divide the ultraviolet radiation (UV) spectrum into three bands: UVA (400 to 320 nm), UVB (320-290 nm) and UVC (290-100 nm). Despite the UVC or far-UV be efficiently filtered by Earth´s ozone layer and its atmosphere, this is one of bands of UV spectrum used to explore the consequences of DNA damages, since the UVC-induced lethality is related to direct damage in genome cells, such as pyrimidine dimers, which are lethal if not repaired. However, it was shown that UVC radiation can generate reactive oxygen species (ROS) such as singlet oxygen (1O2). Although hydroxyl radical ( OH) cause oxidative modifications in DNA bases, some works suggests that 1O2 is also involved in oxidative DNA damage. This ROS is produced by several biological systems and photosensitivity reactions when chromophores are exposed to visible light or excited by UV light, allowing that energy can be transferred to the oxygen being converted to 1O2, which is known to modify guanine residues, generating 8-oxoG, if not repaired can lead to a GC-TA transversion. The objective of this work was to elucidate the ROS involvement in the genotoxic and mutagenic effects generated by UVC radiation, as well as the enzymes involved in the repair process of these lesions in Escherichia coli cells. In the assays, cultures were irradiated with UVC (254 nm, 15 W General Electric germicidal lamp G15T8, USA). Our results show that the use of iron chelators did not affect the UVC-induced lethality. The sodium azide, a 1O2 quencher, protected strains against the genotoxic damage produced by UVC and also decreased the frequency of mutations induced in rifampicin assay. Reversal specific GC-TA was induced more than 2.5 fold in the mutagenesis assay. The deficient strain in the repair protein Fpg, an enzyme that corrects 8-oxoG lesions, had less DNA breakage than the wild strain in electrophoresis alkaline assay. The UVC-induced lethality was increased in mutants transformed with the pFPG plasmid, while representing a decrease in mutagenic induction. There was a reduction in the transformation efficiency with plasmid pUC 9.1 on Fpg-strain compared to wild-type strain. Also there was a lethality increase in the association between fpg and uvrA mutants. These results shows that 1O2 participates in UVC-induced damages through the generation of 8-oxoG lesion, a mutagenic lesion that is repaired by the Fpg protein. Didaticamente, podemos dividir o espectro da radiação ultravioleta (UV) em três faixas: UVA (400 a 320 nm), UVB (320 a 290 nm) e UVC (290 a 100 nm). Apesar do UVC ou UV-curto ser eficientemente filtrado pela camada de ozônio da Terra e sua atmosfera, este é uma das faixas do espectro de UV mais usadas para explorar as consequências de danos causados ao DNA, já que a letalidade induzida por este agente está relacionada aos danos diretos no genoma celular, como as lesões dímero de pirimidina, que são letais se não reparadas. Contudo, demonstrou-se que a radiação UVC pode gerar espécies reativas de oxigênio (ERO), como o oxigênio singleto (1O2). Embora, o radical hidroxil ( OH) cause modificações oxidativas nas bases de DNA, alguns trabalhos indicam que o 1O2 também está envolvido nos danos oxidativos no DNA. Esta ERO é produzida por vários sistemas biológicos e reações fotossensibilização, quando cromóforos são expostos à luz visível ou são excitados pela luz UV, permitindo que essa energia possa ser transferida para o oxigênio sendo convertido em 1O2, que é conhecido por modificar resíduos de guanina, gerando 8-oxoG, que caso não seja reparada pode gerar uma transversão GC-TA. O objetivo deste trabalho foi o de elucidar a participação de ERO nos efeitos genotóxicos e mutagênicos gerados pela radiação UVC, assim como as enzimas envolvidas no processo de reparação destas lesões em células de Escherichia coli. Nos ensaios as culturas foram irradiadas com o UVC (254 nm; 15W General Electric G15T8 germicidal lamp, USA). Nossos resultados mostram que o uso de quelantes de ferro não alterou a letalidade induzida pelo UVC. A azida sódica, um captador de 1O2, protegeu as cepas contra os danos genotóxicos gerados pelo UVC e também diminuiu a frequência de mutações induzidas no teste com rifampicina. A reversão específica GC-TA foi induzida mais de 2,5 vezes no ensaio de mutagênese. A cepa deficiente na proteína de reparo Fpg, enzima que corrige a lesão 8-oxoG, apresentou menos quebras no DNA do que a cepa selvagem no ensaio de eletroforese alcalina. A letalidade induzida pelo UVC foi aumentada nos mutantes transformados com o plasmídeo pFPG, ao mesmo tempo que representou uma redução na indução mutagênica. Houve dimuição na eficiência de transformação com plasmídeo pUC 9.1 na cepa fpg quando comparado a cepa selvagem. Assim como, um aumento da sensibilidade ao UVC na associação entre mutantes fpg e uvrA. Estes resultados mostram que o 1O2 participa dos danos induzidos pelo UVC, através da geração da lesão 8-oxoG, uma lesão mutagênica, que é reparada pela proteína Fpg

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:52:35Z No. of bitstreams: 1 Ellen Serri da Motta.pdf: 3123994 bytes, checksum: 875973e718a730fafc4b492a32e4054f (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ellen Serri da Motta.pdf: 3123994 bytes, checksum: 875973e718a730fafc4b492a32e4054f (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Stannous chloride (SnCl2) and ultraviolet radiation A (UVA) are able to induce lesions in different cellular structures, including DNA, manly through ROS generation. The aim of this work was to study the mutagenesis and repair of lesions induced by the association of UVA (pre treatment) with SnCl2. It was evaluated the action of base excision repair (BER) enzymes in Escherichia coli (E. coli) by alkaline gel electrophoresis and bacterial survival. It was also evaluated the SoxRS system induction by chromotest and mutagenesis through the Ames test. According to the results: i) UVA induced DNA strand breaks in all strains and fpg-nfo and fpg mutants showed greater delay in the repair of lesions; ii) SnCl2 induced more breaks than UVA and nfo and fpg mutants showed more difficult to repair the damage; iii) UVA + SnCl2 caused more breaks than the SnCl2 and nfo and fpg mutants also showed a slowest repair of injuries; iv) UVA did not inactivate any bacterial strains tested; v) nfo and fpg strains were more sensitive to SnCl2; vi) UVA + SnCl2 caused higher mortality in all strains tested, when compared to SnCl2, and, again, nfo and fpg mutants were the most sensitives to the treatment with both agents; vii) the transformation of nfo mutant with the plasmid pBW21 (nfo+) and fpg mutants with plasmid pFPG (fpg+) increased the survival of the strains to SnCl2 and UVA + SnCl2 treatments; viii) SnCl2 was able to induce SoxRS system; ix) SnCl2, UVA + SnCl2 and UVA did not induce mutagenesis; x) damage repair seems to be preferentially performed by Fpg and Nfo proteins. O cloreto estanoso (SnCl2) e a radiação ultravioleta A (UVA) são agentes que lesam diversas estruturas celulares, inclusive o DNA, principalmente pela geração de espécies reativas de oxigênio. O objetivo deste trabalho foi estudar a mutagênese e o reparo das lesões produzidas pela combinação do UVA, na condição de préiluminação, com o SnCl2. Avaliou-se a ação de enzimas do reparo por excisão de bases (BER), em Escherichia coli (E. coli), por eletroforese em gel alcalino de agarose e sobrevivência bacteriana. Também se estudou a indução do sistema SoxRS pelo cromoteste, e a mutagênese pelo teste de Ames. De acordo com os resultados: i) o UVA induziu quebras no DNA das cepas testadas e os mutantes fpgnfo e fpg apresentaram maior retardo no reparo das lesões; ii) o SnCl2 induziu mais quebras que o UVA e os mutantes nfo e fpg mostraram maior dificuldade em reparar as lesões; iii) o UVA+SnCl2 provocou mais quebras que o SnCl2 e os mutantes nfo e fpg também apresentaram maior lentidão no reparo das lesões; iv) o UVA não inativou as cepas testadas; v) as cepas nfo e fpg foram as mais sensíveis ao SnCl2; vi) o UVA+SnCl2 provocou maior letalidade em todas as cepas testadas, em relação ao SnCl2, e os mutantes nfo e fpg também foram os mais sensíveis ao tratamento com ambos os agentes; vii) a transformação dos mutantes nfo com o plasmídio pBW21 (nfo+) e dos mutantes fpg com o plasmídio pFPG (fpg+) aumentou a sobrevivência das cepas aos tratamentos com SnCl2 e UVA+SnCl2; viii) o SnCl2 induziu o sistema SoxRS; ix) o SnCl2, UVA e UVA+SnCl2 não induziram mutagênese; x) o reparo das lesões parece ser preferencialmente realizado pelas proteínas Fpg e Nfo.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-06T20:54:39Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Michelle Rodrigues biblioteca.pdf: 1367628 bytes, checksum: e01e1acaf11e063727111b4e4c65e8af (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-06T20:54:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Michelle Rodrigues biblioteca.pdf: 1367628 bytes, checksum: e01e1acaf11e063727111b4e4c65e8af (MD5) Previous issue date: 2008-08-29 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Alive cells are constantly threated by chemical and physical agents that can generate DNA damage. Here, the studied agent was stannous chloride (SnCl2), a 99mTc reducing agent employed in nuclear medicine. This salt can produce lesions through generation of reactive oxygen species (ROS) as H2O2 and OH . These ROS can be the origin of several diseases and cell death by apoptosis or necrosis. In this way it is important the research about the biological effects of this salt and the other substances composing the radiopharmaceuticals used in nuclear medicine.The aim of this work was to evaluate, in different biological systems, the stannous chloride toxic potentiality, associated or not to 99mTc-MDP radiopharmaceutical as well as the other kit components. Alkaline electrophoresis agarosis gel of E. coli AB 1157 to evaluate the genotoxicity in prokariotic cells; Comet assay in Wistar rats total blood to evaluate the genotoxicity in eukaryotic cells; Micronucleous assay in Wistar rats bone marrow cells to verify the aneugenic and clastogenic effects; Comet assay in human in peripherical total blood and mononuclear cells to evaluate the genotoxicity; Trypan blue viability assay and flow cytometry to evaluate citotoxicity in PBMC; Micronucleous assay in human lymphocyte cells to verify the aneugenic and clastogenic effects; SnCl2 and MDP when isolated induced breaks in E. coli genomic DNA. But, when used in an associated way it was observed an atenuation of the breaks number. 99mTc-MDP was not genotoxic, clastogenic nor aneugenic in Wistar rats In ex vivo human total blood, SnCl2 presented a dose-response effect In ex vivo PBMC; 99mTc-MDP induced a cellular viability reduction and presented genotoxic but not clastogenic or aneugenic effects. As células dos seres vivos são constantemente ameaçadas por agentes químicos ou físicos que possam causar danos ao DNA. Um dos agentes deste estudo foi o cloreto estanoso (SnCl2), utilizado na medicina nuclear como redutor de um isótopo radioativo do tecnécio, o 99mTc. O SnCl2 é um agente cujo mecanismo de produção de lesões em estruturas celulares envolve a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO), tais como o H2O2 e o radical OH . Essas ERO podem causar uma série de doenças, o envelhecimento e até mesmo a morte celular, por apoptose ou necrose. Sendo assim, torna-se importante a pesquisa sobre os efeitos biológicos, tanto desse sal, quanto das outras substâncias que compõem os radiofármacos utilizados em medicina nuclear. Desta forma, nosso objetivo geral foi avaliar a toxicidade do cloreto estanoso, associado, ou não, ao kit 99mTc-MDP, bem como dos demais componentes do kit, em diferentes sistemas biológicos. Eletroforese em gel alcalino de agarose em células de E. coli AB 1157 para a avaliação da genotoxicidade; Ensaio do Cometa em células de sangue total de ratos Wistar para estudar a genotoxicidade; Ensaio do Micronúcleo em células da medula óssea de ratos Wistar para verificar o potencial aneugênico e clastogênico; Ensaio Cometa em células de sangue total e em células mononucleares de sangue periférico humano para estudar a genotoxicidade; Ensaio de Viabilidade com Azul Trypan e citometria de fluxo para analisar a citotoxicidade em PBMC; Ensaio do Micronúcleo em linfócitos humanos para verificar o potencial aneugênico e clastogênico. Em cepas de E. coli AB1157, o SnCl2 e o MDP induziram quebras no DNA genômico, quando isolados; porém quando usados de forma associada, ocorreu uma atenuação do número de quebras. Em ratos Wistar, o 99mTc-MDP não foi genotóxico e também não induziu clastogênese ou aneugênese. Em Sangue total, in vitro, o SnCl2 apresentou efeito dose-resposta. Em PBMC, in vitro, o 99mTc-MDP causou redução da viabilidade celular e apresentou genotoxicidade, porém não induziu clastogênese e nem aneugênese.