Evaluation of the cytotoxicity and genotoxicity of the methanolic extract of Chrysobalanus icaco L leaves

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T18:24:43Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO LETICIA CRUZ.pdf: 1939773 bytes, checksum: d0508ddb84adb8d2b3052b7494978cd1 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T18:24:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO LETICIA CRUZ.pdf: 1939773 bytes, checksum: d0508ddb84adb8d2b3052b7494978cd1 (MD5) Previous issue date: 2015-02-11 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Medicinal plants are used for the treatment and cure of various diseases since the dawn of humanity, because of their therapeutic properties. In Brazil, this practice has been influenced by Indian, African and European civilizations. From the popular knowledge, these plant species are used in different forms such as teas, potions, baths, essential oils and cuisine. The diversity of special metabolites present in different parts of the plants has attracted great interest from the pharmaceutical industry, with currently over 25% of marketed drugs are derived, directly or indirectly, of medicinal plants. Among them, Chrysobalanus icaco L., or abajeru as it is popularly known, has many biological activities, detacando the effects: antiviral and hypoglycemic. The literature suggests isolating one triterpene (pomólico acid) from the methanol extract of this plant, capable of inhibiting growth and inducing apoptosis in a erythroleukemic cell line. In order to confirm this activity in other tumor type, samples of C. icaco were collected in the Parque das Dunas, Cabo Frio, RJ, and extracts were prepared from leaves immersed in methanol (200 g / L). Human lung carcinoma cells (A549 strain) and a normal line (MRC5) were treated with different concentrations of extract. After the 24 hour treatment period, the cytotoxic activity was assayed by blue exclusion method and trypan clonogenic recovery, while the genotoxic by the comet assay. The most cytotoxic effect was observed when cells were exposed to I2FP extract at concentrations of 6.25 and 12.5 ug / ml. Additionally, the genotypes of both the cell lines and plants, can play an important role in these effects since the cancer cells showed reduced mitogenic capacity and observed DNA damage in cells by the comet assay. The chromatographic analysis of the extract was performed by high performance liquid chromatography (HPLC), and it was detected, mostly, phenolic compounds such as flavones. The histochemical technique of the leaf also detected the presence of phenolic compounds other alkaloids. The treatment with plasmids extracts induce breaks in DNA, in addition to increasing the transforming capacity thereof. Finally, the survival rate was lower in tumor cell line A549 cells than in normal cells (MRC5). It has been shown the potential cytotoxic, genotoxic and anti-genotoxic the methanol extract of C. icaco in different biological systems and secondary metabolites may be responsible for the activities identified in this study. In addition to emphasizing the need to be careful in the indiscriminate use of these extracts as well as any other product, called by the people of "natural" Plantas medicinais são empregadas para o tratamento e cura de várias doenças desde os primórdios da humanidade, devido às suas propriedades terapêuticas. No Brasil, esta prática tem sido influenciada pelas civilizações indígena, africana e européia. A partir do conhecimento popular, essas espécies de plantas são usadas em diferentes formas, como chás, garrafadas, banhos, óleos essenciais e na culinária. A diversidade de metabólitos especiais presentes em diferentes partes das plantas tem despertado grande interesse da indústria farmacêutica, sendo que, atualmente, mais de 25% dos medicamentos comercializados são derivados, direta ou indiretamente, de plantas medicinais. Dentre elas, Chrysobalanus icaco L., ou abajeru, como é popularmente conhecida, apresenta, muitas atividades biológicas, detacando-se os efeitos: antiviral e hipoglicemiante. A literatura cita o isolamento um triterpeno (ácido pomólico), a partir do extrato metanólico dessa planta, capaz de inibir o crescimento e induzir apoptose em uma linhagem celular eritroleucémica. Com o objetivo de confirmar essa atividade em outra linhagem tumoral, amostras de C. icaco foram coletadas no Parque das Dunas, Cabo Frio , RJ, e extratos foram preparados a partir de folhas imersas em metanol (200 g/L). Células pulmonares humanas de carcinoma (linhagem A549) e linhagem normal (MRC5) foram tratadas com diferentes concentrações desse extrato. Após o período de tratamento de 24 horas, a atividade citotóxica foi analisada pelos métodos de exclusão de azul de trypan e recuperação clonogenica, enquanto que a genotóxica, pelo ensaio cometa. O maior efeito citotóxico foi observado quando as células foram expostas ao extrato I2FP nas concentrações de 6,25 e 12,5 μg/mL. Complementarmente, os genótipos, tanto das plantas como das linhagens celulares, podem desempenhar um papel importante nestes efeitos, uma vez que as células neoplásicas mostraram diminuição da capacidade mitogênica e observou-se danos no DNA das células pelo ensaio cometa. A análise cromatográfica do extrato foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), tendo-se detectado, majoritariamente, compostos fenólicos, tais como as flavonas. A técnica de histoquímica da lâmina foliar também detectou a presença de compostos fenólicos, além de alcalóides. O tratamento de plasmídeos com os extratos induziu quebras no DNA, além de aumentar a capacidade transformante dos mesmos. Finalmente, a taxa de sobrevivência foi menor na linhagem tumoral A549 do que nas células normais (MRC5). Demonstrou-se os potenciais citotóxico, genotóxico e anti-genotóxico do extrato metanólico de C. icaco em diferentes sistemas biológicos e que metabólitos secundários possam ser responsáveis pelas atividades detectadas neste estudo. Além de enfatizar a necessidade de se ter cuidado no uso indiscriminado destes extratos, assim como de qualquer outro produto, chamado pela população de natural