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Adipose tissue can be a source of bovine mesenchymal stromal/stem cells (MSCs). However, most studies do not incorporate post-mortem collection or in vitro differentiation of these cells from bovine fat and other sources into three mesodermal lineages. This study characterized and cryopreserved bovine adipose tissue-derived MSCs (AD-MSCs) collected post-mortem. Cells were isolated from cattle (Bos taurus) and cultured under standard conditions for ex vivo expansion and cryopreservation. Cell growth kinetics was determined by cell doubling time after consecutive cellular passages. Clonogenic capacity was determined using the colony-forming unit fibroblast (CFU-F) assay. The trilineage differentiation assay was performed to determine its in vitro multipotency. The in vitro proliferation and clonogenic capacity of bovine AD-MSCs was maintained across successive passages (P2--P6). Greater clonogenic capacity was found in fresh than post-cryopreservation cells. Cells showed multipotential capacity in adipose, cartilage and bone lineages. In conclusion, no changes were observed in the growth kinetics and colony-forming capacity of the successive passages evaluated. Clonogenic capacity was higher in fresh than post-cryopreserved cells. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introdução: A pandemia de covid-19 alterou a dinâmica de conservação dos enxertos e de realização dos transplantes de células progenitoras hematopoiéticas (TCPH) alogênicos, o que pode ter afetado a sobrevida dos pacientes. Objetivo: Analisar a sobrevida dos pacientes pós-TCPH imediato (100 dias pós-TCPH) segundo a exposição aos diferentes tipos de transplantes e fontes de enxerto, na pré-pandemia e na pandemia de covid-19. Método: Estudo de coorte retrospectivo de base hospitalar com 246 pacientes que realizaram TCPH em hospital de referência no município do Rio de Janeiro entre janeiro/2016 e dezembro/2021. Os métodos de log-rank e Kaplan-Meier foram utilizados para estimar as funções de sobrevida de pós-TCPH imediato. Resultados: A taxa de mortalidade foi ligeiramente superior na pandemia quando comparada à pré-pandemia (10,1% vs. 8,8%). O enxerto mais utilizado em todo o período estudado foi medula óssea (MO) com 85%. Porém, na pandemia, 50,5% das coletas alogênicas foram realizadas utilizando o sangue periférico mobilizado (SPM). Oito por cento dos enxertos criopreservados não foram infundidos. Não foram observadas diferenças na sobrevida entre pacientes que utilizaram SPM como fonte de enxerto em relação à MO. Conclusão: Os tipos de enxerto e as fontes de transplantes não influenciaram a sobrevida dos pacientes em ambos os períodos. A criopreservação se apresentou como uma ferramenta importante para superar os desafios logísticos ligados à pandemia de covid-19, porém, um percentual relevante de enxertos criopreservados não foi utilizado. Assim, é necessário que os centros transplantadores voltem a realizar TCPH com produtos frescos, reduzindo o percentual de inutilização dos enxertos.

The present study evaluated the cryoprotectant efficacy of dimethylacetamide (DMA) and ethylene glycol in a one-step protocol to freeze boar sperm. The sperm-rich portion of the ejaculates from two boars were collected once a week, for 10 weeks. After collection, the ejaculates were diluted (1:1; v/v) in the cooling extender. After determining their spermatozoa concentration, the ejaculates were pooled with the same number of spermatozoa from each boar and stabilized at 20°C for 120 min. Distinct cryoprotectants were added to the cooling extender at 20 °C, at different concentrations, composing six treatments: 1.25% and 2.5% glycerol (control); 1.25% and 2.5% ethylene glycol; 2.5% and 5.0% DMA. The samples were stored in 0.25 mL straws, containing 35 × 106 spermatozoa. After 90 min at 20 °C, the straws were submitted to a cooling curve until 5 °C (0.3 to 0.5 °C/min) and kept at 5°C for 60 min. Freezing was conducted by placing the straws horizontally 5 cm above the liquid nitrogen for 10 min, followed by immersion on liquid nitrogen. After thawing at 37 °C for 30 seconds, sperm quality was evaluated through a computer-assisted semen analysis system and flow cytometry. Sperm motility was greater (P< 0.05) in treatments with 5.0% and 2.5% DMA (22.2 ± 2.6% and 20.0 ± 2.8%, respectively) than in treatment with 2.5% ethylene glycol (8.2 ± 1.0%). The integrity of the plasma membrane (P = 0.08) and mitochondrial membrane potential (P = 0.27) was similar among the treatments. The treatment with 2.5% ethylene glycol was the least efficient to maintain intact acrosome membrane (P< 0.01). Some kinetics parameters (DAP, DCL, DSL, VAP, VCL, VSL e ALH) were positively affected by 5.0% DMA. The one-step freezing protocol resulted in unsatisfactory boar sperm motility after thawing, regardless of the cryoprotectant. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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O sêmen equino tem sido historicamente refrigerado usando meios à base de leite. No entanto, o uso de componentes de origem animal causa várias preocupações potenciais, como variabilidade nas formulações, contaminação microbiana e questões regulatórias. Objetivou-se avaliar o potencial de inclusão de diferentes concentrações de lecitina de soja (LS) no meio quimicamente definido BWW - Biggers, Whitten e Whittingham para refrigeração de sêmen equino e armazenamento na temperatura de 15°C. Os ejaculados foram diluídos em seis diferentes grupos experimentais: 1) BotuSêmen® (controle); 2) BWW; 3) BWW + 1% lecitina de soja (LS); 4) BWW + 2% LS; 5) BWW + 4% LS e 6) BWW + 6% LS. O meio BWW, não preservou a motilidade, a velocidade, a retilinearidade (STR), a linearidade (LIN), a amplitude do deslocamento lateral da cabeça (ALH), a frequência de batimento flagelar cruzado (BCF), a integridade funcional e estrutural dos espermatozoides equino durante 24 h de refrigeração quando comparado ao BotuSêmen® (P 0,05). Ainda assim, o diluidor comercial BotuSêmen® apresentou superioridade em preservar o percentual de espermatozoides progressivamente móveis, a velocidade média da trajetória (VAP), a velocidade linear progressiva (VSL) e a frequência do batimento flagelar cruzado (BCF) durante a refrigeração comparado aos demais diluidores (P

O estudo teve como objetivo avaliar a adição de polissacarídeos sulfatados (PS) extraídos de duas espécies de macroalgas verdes, Ulva lactuca e Caulerpa racemosa, no meio criodiluidor do sêmen de Colossoma macropomum. Para isso, foram avaliadas quatro concentrações de PS (1,0; 2,0; 3,0 ou 4,0 mg mL-1), de cada macroalga. A coleta de sêmen foi realizada durante o mês de setembro, em Fortaleza, Ceará, Brasil. As amostras de sêmen fresco foram analisadas quanto aos parâmetros de motilidade total dos espermatozoides, velocidade curvilinear (VCL), velocidade em linha reta (VSL), velocidade média do trajeto (VAP), morfologia espermática, integridade de membrana e integridade de DNA. Em seguida, foram criopreservadas em meio de congelação contendo dimetilsulfóxido (DMSO) 10% + glicose 5%, e suplementadas com as diferentes concentrações de PS, tendo ainda um tratamento não suplementado como controle. Após 15 dias, foram descongeladas em banho-maria a 45 ºC por oito segundos, e as mesmas análises do sêmen fresco foram realizadas. Através da análise estatística, os resultados mostraram que não houveram diferenças significativas (p > 0,05) entre as diferentes concentrações de PS testadas para nenhum dos parâmetros avaliados. Já em relação ao controle, não houve diferença nas concentrações (p > 0,05) para a motilidade total, no entanto, para VCL, VSL e VAP, as concentrações de 3,0 e 4,0 mg mL-1 de U. lactuca foram prejudiciais (p < 0,05). O mesmo foi observado em 4,0 mg mL-1 de C. racemosa para VSL e VAP. Para a morfologia, 1,0 e 4,0 mg mL-1 de C. racemosa reduziram os espermatozoides normais (p < 0,05), enquanto para as demais concentrações não houve diferença (p > 0,05). Para todas as concentrações de ambas as macroalgas, a integridade de membrana plasmática foi mantida (p > 0,05). Quanto à integridade do DNA, apenas 4,0 mg mL-1 de U. lactuca foi inferior ao controle (p < 0,05), enquanto as demais concentrações mantiveram o número de espermatozoides com DNA íntegro (p > 0,05). De acordo com os resultados obtidos, concentrações mais elevadas de PS são prejudiciais aos espermatozoides de tambaqui no meio de congelação, enquanto concentrações mais baixas mantiveram parâmetros espermáticos. Estudos posteriores são indicados para melhor avaliar o potencial antioxidante destes polímeros no meio criodiluidor do sêmen de C. macropomum, bem como de outras espécies de peixes.

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RESUMO Objetivou-se avaliar a condição metabólica e estrutural das células espermáticas bovinas após congelação, com adição prévia de IGF-I e insulina no meio diluidor seminal. Os ejaculados de seis touros Nelore foram submetidos a quatro tratamentos: controle; insulina (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) e insulina + IGF-I (50µUI/mL e 75ng/mL, respectivamente). Após a congelação, realizaram-se os testes de termorresistência rápida, coloração pelo corante azul de tripan e Giemsa, além da análise computadorizada da motilidade espermática, da integridade das membranas plasmática e acrossomal, e da peça intermediária por meio de sondas fluorescentes. O teste de termorresistência rápida apresentou efeito dentro do tempo de cada tratamento, mas não entre os tratamentos. Na análise computadorizada da motilidade espermática, foram observados movimento, motilidade e velocidade espermáticos; não houve efeitos dos tratamentos sobre qualquer uma dessas variáveis. Respostas iguais foram obtidas com as sondas fluorescentes e o corante azul de tripan/Giemsa. A adição de insulina e IGF-I, de forma isolada ou combinada, ao meio diluidor para congelação de sêmen não produziu efeitos sobre as condições metabólica e estrutural das células espermáticas.

RESUMO Objetivou-se avaliar o efeito do ácido docosa-hexaenoico (DHA), associado ou não ao Trolox®, na refrigeração de sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador. Foram refrigerados 10 ejaculados nos diluidores: D1) BotuSêmen® (BS; controle); D2) BS + 30ngmL-1 de DHA (BS30DHA); D3) BS30DHA + 40µM de Trolox® (BS30DHA40T); D4) BS + 50ngmL-1 de DHA (BS50DHA); D5) BS50DHA + 40µM de Trolox® (BS50DHA40T). Após 48 horas de refrigeração, foram avaliados os parâmetros de movimento espermático, a integridade estrutural e funcional da membrana plasmática e a longevidade espermática. Todos os diluidores testados preservaram, de forma semelhante, a motilidade, a linearidade, a retilinearidade, a amplitude do deslocamento lateral da cabeça, a frequência do batimento flagelar cruzado, o percentual de hiperativos e a integridade estrutural e funcional da membrana espermática (P>0,05). O diluidor BS50DHA foi superior ao BS30DHA40T em preservar a VCL e a VSL e foi superior ao BS30DHA40T e ao BS50DHA40T em preservar a VAP e o índice de oscilação (P

A criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais é uma perspectiva promissora para a preservação da fertilidade e desenvolvimento de banco de oócitos ou em caso de patologias e terapêuticas que possam comprometer as reservas foliculares. A grande vantagem da criopreservação do tecido ovariano é que independe da idade e fase do ciclo menstrual/estral, além de envolver menos questões éticas e sociais. No entanto, como qualquer exposição de um material biológico a temperaturas extremamente baixas, a criopreservação pode levar a um desequilíbrio na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs), podendo causar danos celulares. In vivo, as EROS são equilibradas pelo sistema de defesa de antioxidantes, porém, in vitro, a falta do sistema fisiológico, pode levar ao estresse oxidativo. Portanto, antioxidantes vêm sendo utilizados antes ou após a criopreservação, os quais pode-se destacar o ácido alfa lipóico ou ácido tióctico (ALA) e catalase (CAT). Por tanto, o objetivo desse artigo é auxiliar no entendimento da relevância da criopreservação do tecido ovariano para a preservação da fertilidade das fêmeas, bem como o controle na produção de EROS durante o processo, e a necessidade da suplementação de antioxidantes como o ALA e a CAT.

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Este estudo teve como objetivo avaliar a ação do heterodímero PSP-I/PSP-II como marcador de congelabilidade e sua influência na proteção espermática durante a criopreservação do sêmen suíno. O sêmen de quatro varrões foi congelado na presença ou não do heterodímero. Após a descongelação, analisou-se a integridade acrossomal (sodas fluorescentes), integridade da membrana plasmática (sondas fluorescentes), a atividade mitocondrial (citoquimica) e a motilidade espermática (CASA). Para a integridade da membrana plasmática e acrossomal, o tratamento com 3,0 mg/mL de PSP-I/PSP-II apresentou uma maior porcentagem de células intactas (p

Background: In artificial insemination, chicken egg yolk is added to bovine semen to protect it during the cryopreservation process, although it contains substances that can affect the microbiological quality and metabolism of sperm. Objective: To evaluate post-thaw quality of bovine cryopreserved semen added with centrifuged and non-centrifuged egg yolk, low-density lipoproteins (LDL), and trehalose (T). Methods: Ten ejaculates from five bulls were cryopreserved under the treatments T1: pure egg yolk (PEY) at 20% v/v, T2: centrifuged egg yolk (CEY) at 20% v/v, T3: LDL at 8% v/v, T4: T at 100 mM, and T5: T at 100 mM plus LDL at 8% v/v (TLDL). Spermatic motility and kinetics, functional membrane integrity (FMI), structural membrane integrity (SMI), sperm vitality (SV) and abnormal morphology (AM) were assessed using the Sperm Class Analyzer (SCA®) system, hypoosmotic test (HOST), SYBR/PI probes, and eosin-nigrosin staining, respectively. A completely randomized design was used. Normal distribution of the variables was validated through the Kolmogórov-Smirnov test. A generalized linear model was used to determine sources of variation. Means were compared using the Tukey test. Results: Inclusion of CEY or LDL had a similar effect on sperm protection, and were superior for motility, kinetics and membrane integrity compared to the other treatments (p<0.05). CEY was superior for progressive motility (p<0.05). The cryoprotective action of LDL was similar to TLDL for motility and kinetics, SMI, SV, and AM (p<0.05). Inclusion of PEY and T resulted in the lowest semen quality (p<0.05). The use of T resulted in a reduction in FMI and SMI (p<0.05). No differences in AM between treatments were found (p>0.05). Conclusions: Egg yolk can be replaced by centrifuged egg yolk or low-density lipoproteins in the freezing extender used for bovine semen used in artificial insemination. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

A crioconservação é uma técnica avançada que envolve estruturas de congelação a temperaturas muito baixas (- 196) para o propósito de preservação por muitos anos, as células ou tecidos. O princípio básico e simples do processo é a remoção de água das células antes da congelação-los a fim de evitar a formação de cristais. Os agentes crioprotectores podem ser classificados em penetrante (glicerol, DMSO, etileno-glicol e 1,2 propanodiol) e não penetrante (sacarose, trealose e rafinose, polímeros, proteínas e lipoproteínas). Neste texto se descrevem técnicas para a criopreservação de oócitos e embriões a partir das características e factores que afectam cada um dos métodos.

Synthetic surfactants have shown positive effects upon the integrity of the cell membrane of cryopreserved sperm without affecting their motility. As pulmonary extracts have surfactant substances, they are expected to produce a positive effect on the boar sperm fertility after cryopreservation. In order to have preliminary evidence regarding the absence / presence of toxicity of pulmonary extracts on semen, ejaculates from two boars, aged between 24 and 30 months, were used. Each ejaculate was divided into two groups. One of them was diluted with a middle-term commercial medium (Control group) and the other with the same medium plus the addition of: 2.5, 5 or 10% of pig pulmonary extract (Treatment group). As indicators of the treatment effect on semen quality, the live-dead ratio, the host test and the acro- some integrity were determined. Samples were evaluated after 0, 24 and 48 hours of incubation at 17 ° C and 36 ° C. The experiment was repeated in three ejaculates of each one of the boars, in order to determine interaction between the components of the preservation medium and the pulmonary extracts, and the quality of the porcine sperm. The results show that there are no differences in the parameters observed between the different evaluation moments, nor in the different extract variations, as well as no difference between individuals. It is concluded that pulmonary extracts do not present toxic effects on porcine sperm. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Prochilodus mariae is an endemic species from Orinoco River, of great ecological, cultural and economic importance, whose seminal cryopreservation protocol has not yet been established. The aim of this work was to evaluate the effect of use and exclusion of egg yolk in the cryopreservation diluent, on the seminal quality of P. mariae. Thus, fresh semen of five healthy and sexually mature males was diluted (1:6), packed in 0,5 mL straws, frozen and stored in liquid nitrogen. Two treatments were used: diluent with egg yolk (YH) and diluent without egg yolk (SYH). Motility, motility duration, morphology, plasma membrane integrity and fertility of thawed semen were evaluated, using fresh semen as control. The data were treated with descriptive and parametric statistics, with a confidence level of 95%. The results showed that exclusion of egg yolk significantly improved motility and motility duration, although it did not have a statistically significant influence on plasma membrane integrity, morphological abnormality and fertility. The addition of the egg yolk to the cryopreservation diluent did not present the expected cryoprotective effect. It's necessary to evaluate different concentrations of egg yolk and its interactions with other components of the diluent. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objective: To answer the question if the freeze-all strategy and subsequent frozen embryo transfer is preferable to fresh embryo transfer for patients with normal response to ovarian stimulation (4 to 15 oocytes recovered) during in vitro fertilization treatments. Methods: A retrospective cohort from two human reproduction centers between 2013 and 2017. A total of 471 frozen embryo transfers from freeze-all cycles, and 3,208 fresh transfers were included. Results: After propensity score matching adjustment for age and number of eggs, 467 freeze-all cycles and 934 fresh cycles were analyzed, revealing no statistically significant difference between groups in relation to clinical pregnancy rate (32.5% in the Freeze-all Group and 32.3% in the Fresh Group, p=0.936). For women aged 40 years and older, we observed a statistically significant higher clinical pregnancy rate when freeze-all strategy was used (29.3% in the Freeze-all Group and 19.8% in the Fresh Group, p=0.04). Conclusion: Freeze-all strategy was not superior to fresh transfer for all patients with normal response to ovarian stimulation. However, women aged 40 years and older could benefit from this strategy. This deserves further investigation in future research, preferable in a prospective randomized study. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

O uso de sêmen resfriado em operações de inseminação artificial resulta em taxas de prenhez mais altas do que o uso de sêmen congelado. Esse resultado parece estar relacionado aos danos mais severos desencadeados pelo processo de congelação, quando comparado com o de refrigeração. Devido à sua capacidade de se ligar às proteínas ligadoras de espermatozoides e íons cálcio, o caseinato de sódio foi estudado quanto a sua capacidade de prevenir a capacitação espermática precoce, uma causa significativa de diminuição da taxa de prenhez com o uso de sêmen congelado. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar se um diluidor comercial a base de gema de ovo, destinado à congelação de sêmen bovino, poderia ser usado para a criopreservação de sêmen bubalino; o segundo objetivo foi investigar o efeito da adição do caseinato de sódio ao diluidor estudado durante os procedimentos de criopreservação de espermatozoides bubalinos. Foram empregadas a citometria de fluxo e a análise computadorizada do movimento espermático como métodos de avaliação seminal. Na primeira fase do estudo, comparando-se os resultados da cinética espermática e da integridade das membranas plasmática e acrossomal, observou-se que o processo de congelação promoveu mais danos celulares que o processo de resfriamento. Na segunda fase do estudo, não foram observados efeitos benéficos da adição de caseinato de sódio ao diluente empregado. A partir dos resultados do presente estudo, foi possível concluir que o diluente à base de gema de ovo foi adequado para a criopreservação do sêmen de bubalino e que a adição do caseinato de sódio não diminuiu os efeitos deletérios desencadeados pelo processo de criopreservação seminal.

A recuperação e criopreservação dos espermatozoides epidídimários é uma ferramenta promissora no resgate e/ou prevenção da perda de material genético de machos valiosos ou estimados, ou mesmo, de animais em risco de extinção. A conservação destes espermatozoides na espécie felina doméstica ainda apresenta resultados conflitantes, dificultando a aplicação da biotécnica na área comercial, para animais de padrão racial desejado. Contudo, inúmeras pesquisas investigam as peculiaridades fisiológicas dos espermatozoides felinos, com o intuído de desenvolver protocolos e meios de criopreservação promissores. Assim, alguns trabalhos já reportaram sucesso na congelação dos espermatozoides epididimários de gatos, bem como, no emprego destas células em técnicas de reprodução assistida (inseminação artificial e fecundação in vitro). Portanto, o presente artigo tem como finalidade explanar os principais avanços na área da recuperação e conservação dos espermatozoides epididimários para os gatos domésticos e, enfatizar as perspectivas futuras destes trabalhos na conservação do germoplasma felino.

Este estudo foi realizado para determinar o efeito de hidroxitolueno butilado (BHT) sobre a qualidade do sêmen canino congelado e descongelado, utilizando o diluidor à base de água de coco em pó (ACP-106c). Para tanto, foram realizadas quinze coletas de sêmen provenientes de cinco cães. O sêmen obtido foi diluído em ACP-106c acrescido de glicerol e gema de ovo. As amostras foram então transferidas para tubos contendo diferentes concentrações de BHT (0; 0,5; 1,0 e 2,0 mM). Em seguida, as amostras foram envasadas, congeladas e armazenadas em nitrogênio líquido. O sêmen coletado foi avaliado in natura quanto aos seguintes parâmetros: coloração, volume da fração espermática, motilidade total, vigor, concentração, morfologia e funcionalidade de membrana espermática. Após uma semana, as amostras foram descongeladas e avaliadas por meio de análise computadorizada, como também foram realizadas análises da funcionalidade de membrana e da morfologia espermática. A motilidade progressiva no grupo BHT 2,0 mM foi significativamente superior (P < 0,05) do que a do grupo BHT 0 mM (27,6 ± 11,7% vs. 19,0 ± 9,5%, respectivamente). Em todos os demais parâmetros avaliados, não houve diferença entre os grupos testados. Portanto, conclui-se que a adição do BHT ao diluidor ACP-106c não afetou a qualidade do sêmen canino pós-descongelação.

Introduction: Dental tissues are an accessible source of mesenchymal stem cells that can be useful for the treatment of various clinical diseases. Thus, the interest and the need to ensure an efficient way to preserve stem cells of dental origin for future applications led to the development of cryopreservation methods, a technique by which low temperatures are applied to reverse, in a reversible and controlled manner, biological functions of living cells and tissues. Objective: To perform a literature review about the cryopreservation of stem cells of dental origin, emphasizing characteristics, principles, existing protocols, and effects of this method on the biological properties of these cells. Methodology: This study consisted of a literature review based on information from 54 scientific articles published between 2005 and 2019 and consulted in online databases (PubMed, SciELO, and Google Scholar), using the following descriptors: Cryopreservation, Dental stem cells, and Dental cryopreservation. Results: Stem cells of dental origin seem to maintain their biological characteristics, such as viability rate, cell proliferation, and ample capacity for differentiation even after cryopreservation. Also, magnetic cryopreservation presents itself as a promising protocol for the conservation of dental stem cells. Conclusion: Cryopreservation is an effective technique for the long-term storage of stem cells derived from dental tissues. However, additional studies should be carried out to develop more standardized and safer cryopreservation protocols that do not affect the biological properties of dental stem cells. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders: TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 ?g mL-1, 5 ?g mL-1 or 10 ?g mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukey’s test at a significance of 5%. In the first experiment, the extender TES-TRIS showed better results for the various characteristics evaluated compared to ACP-112® and ACP-112®-Milk (P < 0.05), demonstrating greater protection of the buffalo sperm structures during cryopreservation. In the second experiment, the treatments with different concentrations of Lippia origanoides essential oil extract showed no differences among the assessed variables regarding the protection of sperm structures during cryopreservation (P > 0.05). Based on these data, we demonstrated the beneficial effects of TES-TRIS for post-thaw buffalo sperm quality; however, no protective effect was observed for buffalo sperm cryopreserved with the different tested concentrations of Lippia origanoides extract oil.

Contexto: atualmente o uso de biotécnicas relacionadas ao sêmen bovino tem crescido exponencialmente com o objetivo de suprir a demanda de produtos de origem animal. Com isto, é possível minimizar as perdas econômicas identificando ejaculados de baixa qualidade seminal. Propósito: desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do gradiente Equipure™ enquanto a viabilidade e congelabilidade do sêmen de touros para seleção espermática. Metodologia: para o estudo foram seguidas as recomendações do Conselho Nacional de Protocolo de Experimentação Animal (CONCEA) em cada etapa desse estudo, tendo sido aprovado pela Comissão Institucional de Ética no Uso de Animais (CEUA), sob protocolo nº 0243/2021. Para isso, 35 touros foram coletados e o sêmen foi avaliado quanto a cinética espermática, morfologia e integridade de membrana. A seguir, a amostra foi diluída e separada em 2 alíquotas, contendo 1 x 106 espermatozoides cada uma. Uma amostra foi depositada em Equipure™ e a outra mantida in natura. As alíquotas foram centrifugadas e posteriormente o pellet dos tubos foram recuperados e reavaliados. Após a análise das variáveis, os 10 touros com maior motilidade foram novamente coletados para congelação dos espermatozoides. A congelação foi conduzida após a avaliação e diluição (30 x 106 espermatozoides/mL) em meio comercial. Posteriormente, as amostras foram descongeladas e reavaliadas. Resultados: os resultados mostram que o uso de Equipure diminui a quantidade de células defeituosas após a centrifugação de sêmen fresco e após descongelação. Conclusão: com isto podemos inferir que o uso de Equipure™ em amostras de sêmen de touros com pobre qualidade espermática pode aumentar a taxa de células espermáticas morfologicamente normais até valores de referência, porém considerando que a taxa de recuperação espermática descende até valores mínimos quando comparados com sêmen fresco. Estudos que avaliem as características subjetivas da qualidade seminal, o tempo e força da centrifugação, tempo transcorrido entre os procedimentos e o uso de diluentes devem ser reavaliados [ABSTRACT FROM AUTHOR]

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For the development of in vitro produced (IVP) as well as in vivo produced bovine embryos, it is extremely important that their energy metabolism works properly because the embryo must be able to metabolize energy substrates that are necessary for producing energy. Lipids play an important role in early embryonic development, acting as source of energy for oocytes and embryos. However, it is known that oocytes and embryos, mainly IVP, accumulate large amounts of lipids in the cytoplasm. Although they are extremely important in embryonic development, lipids have been associated with the reduced survival of bovine embryos following cryopreservation. There is evidence that at least four different categories of lipids affect embryo survival after cryopreservation, including triglycerides (TAG), free fatty acids, cholesterol and phospholipids. Thus, many studies are being conducted to improve the resistance of IVP embryos to the cryopreservation process by reducing the concentration or removing the source of serum from the medium or by reducing oocyte/embryo lipids using mechanical or chemical means. Regarding the use of delipidating agents that reduce the uptake and synthesis of fatty acids (FA) by cells, substances such as phenazine ethosulfate (PES), forskolin, L-carnitine and isomers of conjugated linoleic acid (CLA) have been utilized. This review aims to address important issues related to embryonic energy metabolism, the importance of lipid metabolism and its relation to the cryopreservation of IVP bovine embryos by summarizing the latest research in this field.

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.

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