Search

Methylmercury (MeHg) is an organometal with strong neurotoxic action on the central nervous system (CNS). Human contamination by MeHg is mostly due to the consumption of fish, seafood or contaminated water. In the CNS, MeHg can cause neuroinflammation and increased oxidative stress, inducing the death of neurons in the hippocampus. Many studies have documented the harmful effect of MeHg in the hippocampus, but the low-grade and chronic neurotoxicity of MeHg has not yet been evaluated in adult mice with a focus on neurotransmitters, inflammation, oxidative stress in the hippocampus and memory. In this work, adult C57BL6J mice intoxicated with 2mg MeHg / L in drinking water for 30 days and controls were used. Serum concentrations of endotoxin (LPS), TNF-α and myeloperoxidase (MPO) were evaluated as markers of systemic inflammation and total cholesterol and triglycerides to assess dyslipidemia. Hippocampal tissue concentrations of neurotransmitters (glutamate, tyrosine, taurine, gamma-amino butyric acid (GABA) and glycine), acetylcholinesterase activity, gene expression of inflammatory markers (IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-6 and IL-10), malondialdehyde (MDA), oxidative stress, MPO and brain-derived growth factor (BDNF). Behavioral tests were carried out in order to assess motor impairment and exploratory behavior (open field), working memory (Y-maze), spatial memory and long-term memory (Barnes maze). The animals' weight was monitored weekly. Intoxicated animals had a greater weight gain. The intoxicated group also had higher serum concentrations of triacylglycerols and total cholesterol (p

Methylmercury (MeHg) is highly toxic to the human brain. Although much is known about the neurotoxic effects of MeHg, the effects of MeHg on brain neurotransmitters are still little explored. In this study, we evaluated the effects of MeHg poisoning on hippocampus oxidative stress, neuroinflammation biomarkers and neurotransmitter levels in C57BL6J mice. Male rats at 6 weeks of age were used. The mice were housed in microinsulating cages and received water and food ad libitum. Intoxicated mice received MeHg in drinking water (20 mg/L) for twenty days. All protocols were approved by CEUA / UNIFOR (protocol no. 015 / 2015). Hippocampus samples were collected and frozen rapidly to evaluate the levels of myeloperoxidase (MPO), glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA) (μmol/mg protein) by ELISA. Hippocampal monoamines (dopamine and metabolites) and amino acid neurotransmitters (taurine, glutamate, gamma aminobutyric acid-GABA, tyrosine and glycine) were evaluated by HPLC. The unpaired Student's T-test was used to confirm significant data. P

Mercury (Hg) is a global pollutant with toxic action on several organs, both in animals and in humans. Recently, the increase in exposure to Hg may have occurred in environmental disasters in Brazil involving the collapse of dams, containing tailings with high concentrations of metals. The objective of this work was to evaluate the effect of MeHg intoxication in the duodenum of C57BL/6J mice subjected to the standard or western diet, on oxidative stress and inflammatory parameters. No study has been conducted evaluating the effects of MeHg on the duodenum after a high-fat diet. Male C57BL/6J mice, after weaning, with 21 days of age and weighing between 8-11 g were used. The animals were randomly divided into four experimental groups according to the type of diet and exposure to MeHg. For the induction of hyperlipidemia, the animals received a western diet (42% of lipids), during 21 to 61 days of age. The intoxicated groups received a MeHg chloride solution in their drinking water (20 mg/L) in the last 21 days after starting the diets. The experimental groups were: normonourished control group (CT), receiving a standard diet; hyperlipidic group (HF), receiving a western diet; normonourished group intoxicated with MeHg (Hg) and a hyperlipidic group intoxicated with MeHg (HFHg). The animals were weighed twice a week, after starting the diets. Mice were euthanized after completing 40 days of diet. Samples of duodenum, blood and hair were collected. The hair was harvested on the dorsal region of the animal by trichotomy to analyze the Hg concentration. The serum was obtained to analyze the levels of total cholesterol and triglycerides (mg/dL). For morphometric evaluation in the duodenum, the villus length, crypt depth and villus:crypt ratio in hematoxylin and eosin (H&E)-stained slides and PAS goblet cell count in Schiff periodic acid-stained slides were analyzed. To assess oxidative stress, the levels of malondialdehyde (MDA), glutathione peroxidase (GPx), glutathione (GSH) and NO2/NO3 ratio were analyzed. In addition, Nrf2 gene expression by qRT-PCR was evaluated. For the evaluation of inflammatory parameters, the levels of myeloperoxidase (MPO) were analyzed by ELISA and the transcription of IL-6, IL-10 and TNF-α by qRT-PCR. The expression of the pro-apoptotic and anti-apoptotic proteins Bax and Bcl2 was also analyzed by qRT-PCR. The western diet induced an obesogenic effect in the animals. Mercurial intoxication reduced weight gain in animals when compared to controls, regardless of diet. The intoxicated groups showed higher concentrations of MeHg in the hair 11 compared to the controls. The high-fat diet significantly increased serum levels of cholesterol and triglycerides. The HFHg group showed significant reductions in villus height, crypt depth and villus/crypt ratio and fewer PAS positive cells. The hyperlipidic diet significantly increased the levels of NO2/NO3 and MDA in the duodenum, regardless of intoxication. Exposure to MeHg was able to decrease GPx levels and increase NO2/NO3, MDA and GSH. The HFHg group showed a reduction in Nrf2 transcription. The levels of IL-10 and IL-6 and Bcl-2 mRNA were lower in the HF group when compared to controls. MeHg intoxication did not alter the transcriptional levels of IL-10, IL-6 and TNF-α. The HFHg group had lower levels of MPO compared to the other experimental groups. The results of this study suggest that MeHg intoxication caused oxidative stress in the duodenum without altering inflammatory markers. The hyperlipidic diet had an anti-inflammatory effect with increased oxidative stress, in addition to reducing the transcription of Bcl-2. The hyperlipidic (western) diet was able to influence the toxicity of MeHg in the duodenum by reducing the levels of NO2/NO3 and GSH. However, more studies need to be carried out to better understand the mechanisms involved in MeHg toxicity and modulation of the western diet in the small intestine. O mercúrio (Hg) é um poluente global com ação tóxica em diversos órgãos, tanto em animais quanto em seres humanos. Recentemente, o aumento da exposição ao Hg pode ter ocorrido em desastres ambientais no Brasil envolvendo desmoronamento de barragens, contendo rejeitos com altas concentrações de metais. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da intoxicação do MeHg no duodeno de camundongos C57BL/6J submetidos à dieta padrão ou dieta ocidental, no estresse oxidativo e em parâmetros inflamatórios. Nenhum estudo foi realizado avaliando os efeitos do MeHg no duodeno após dieta hiperlipídica. Foram utilizados camundongos machos C57BL/6J, após desmame, com 21 dias de idade e peso entre 8-11 g. Os animais foram aleatoriamente divididos em quatro grupos experimentais de acordo com o tipo de dieta e exposição ao MeHg. Para a indução de hiperlipidemia, os animais receberam uma dieta ocidental (42% de lipídeos), durante os dias 21 a 61 de idade. Os grupos intoxicados receberam uma solução de cloreto de MeHg na água de beber (20 mg/L) nos últimos 21 dias após início das dietas. Os grupos experimentais foram: grupo normonutrido controle (CT), recebendo dieta padrão; grupo hiperlipídico (HF), recebendo dieta ocidental; grupo normonutrido intoxicado com MeHg (Hg) e um grupo hiperlipídico intoxicado com MeHg (HFHg). Os animais foram pesados 2 vezes por semana, após o início das dietas. Os animais foram eutanasiados ao completar 40 dias de dieta. Foram coletadas amostras de duodeno, sangue e pelo. O pelo foi colhido na região dorsal do animal por tricotomia para análise da concentração de Hg. O soro foi obtido para análise dos níveis de colesterol total e triglicerídeos (mg/dL). Para avaliação morfométrica no duodeno foram analisados o comprimento de vilo, profundidade de cripta e razão vilo:cripta em lâminas coradas em hematoxilina e eosina (H&E) e contagem de células caliciformes PAS positivas em lâminas coradas pelo ácido periódico de Schiff. Para avaliação do estresse oxidativo, os níveis de malondialdeído (MDA), glutationa peroxidase (GPx), glutationa (GSH) e razão NO2/NO3 foram analisados. Além disso, a expressão gênica de Nrf2 por qRT-PCR foi avaliada. Para avaliação dos parâmetros inflamatórios, os níveis de mieloperoxidade (MPO) foram analisados por ELISA e a transcrição de IL-6, IL-10 e TNF-α por qRT-PCR. A expressão das proteínas pró-apoptótica e anti-apoptótica Bax e Bcl2 também foi analisada por qRT-PCR. A dieta ocidental induziu efeito 9 obesogênico nos animais. A intoxicação mercurial reduziu o ganho de peso nos animais quando comparado aos controles, independente da dieta. Os grupos intoxicados apresentaram maiores concentrações de MeHg no pelo em relação aos controles. A dieta hiperlipídica aumentou significativamente os níveis séricos de colesterol e triglicerídeos. O grupo HFHg apresentou reduções significativas na altura dos vilos, profundidade das criptas e na razão vilo/cripta e menor número de células PAS positivas. A dieta hiperlipídica aumentou significativamente os níveis de NO2/NO3 e MDA no duodeno, independente da intoxicação. A exposição ao MeHg foi capaz de diminuir os níveis de GPx e aumentar níveis de NO2/NO3, MDA e GSH. O grupo HFHg apresentou redução na transcrição de Nrf2. Os níveis de RNAm da IL-10 e IL-6 e de Bcl-2 foram menores no grupo HF quando comparado com os controles. A intoxicação com MeHg não alterou os níveis transcripcionais de IL-10, IL-6 e TNF-α. O grupo HFHg apresentou menores níveis de MPO em relação aos demais grupos experimentais. Os resultados desse estudo sugerem que a intoxicação por MeHg causou estresse oxidativo no duodeno, porém sem alterar os marcadores inflamatórios. A dieta hiperlipídica apresentou efeito anti-inflamatório com aumento de estresse oxidativo, além de reduzir a transcrição de Bcl-2. A dieta hiperlipídica (ocidental) foi capaz de influenciar a toxicidade do MeHg no duodeno com a redução dos níveis de NO2/NO3 e GSH. Porém, mais estudos precisam ser realizados para entender melhor os mecanismos envolvidos na toxicidade do MeHg e modulação da dieta ocidental no intestino delgado.

Human exposure to mercury is a serious problem of public health in Amazon. As in other vulnerable populations throughout the world, Amazonian riverine populations are chronically exposed to this metal and some symptoms of mercury intoxication were already detected in these populations. However, studies on the genetic susceptibility to mercury toxicity in the Amazon are scarce, and they tested a limited number of individuals. In this context, apolipoprotein E gene (APOE) is a key element with a well-established association among their alleles and the neurodegenerative consequences of mercury intoxication. However, no studies have addressed APOE genotyping in Amazonian exposed populations. Additionally, epidemiological studies with APOE genotyping in Amazon have been restricted to indigenous populations. Therefore, this work analyzed for the first time the genotypic and allelic profiles of APOE in Amazonian riverine populations chronically exposed to mercury. Eight hundred and twenty three individuals were enrolled in our study donating blood (794) and/or hair (757). APOE genotyping was analyzed by real-time PCR. Total mercury and mercury species were quantified by ICP-MS and GC-pyro-AFS, respectively. Genomic ancestry markers were evaluated by multiplex-PCR reaction, separated by capillary electrophoresis on the ABI 3130 Genetic Analyzer instrument and analyzed on GeneMapper ID v3.2. The 3 and 3/3 were the most frequent allele and genotype, respectively, followed by 4 allele and 3/4 genotype. Only 2/2 genotype was not found, suggesting that the absence of this genotype is a generalized phenomenon in Amazon. Also, our data supported an association between the presence of APOE4 and the Amerindian origin in these populations. Fifty-nine individuals were identified at maximum risk with levels of mercury above 10 μg/g and the presence of APOE4. Interestingly, among individuals with high mercury content, APOE4-carriers had high mercury levels than APOE2-carriers, pointing to a different heavy metal accumulation according to the APOE allele. These data suggest that APOE4, in addition to a possible pharmacodynamic effect, may influence pharmacokinetically the mercury exposure causing its higher accumulation and leading to worse deleterious consequences. Our results may aid in the development of prevention strategies and health policy decision-making regarding these at-risk vulnerable populations. A exposição humana ao mercúrio é um grave problema de saúde pública na Amazônia. Assim como em outras populações vulneráveis ​​em todo o mundo, populações ribeirinhas amazônicas estão cronicamente expostas a esse metal e alguns sintomas de intoxicação por mercúrio já foram detectados nessas populações. No entanto, estudos sobre a suscetibilidade genética à toxicidade do mercúrio na Amazônia são escassos e testaram um número limitado de indivíduos. Nesse contexto, o gene da apolipoproteína E (APOE) é um elemento chave com uma associação bem estabelecida entre seus alelos e as consequências neurodegenerativas da intoxicação por mercúrio. No entanto, nenhum estudo abordou a genotipagem da APOE em populações expostas na Amazônia. Além disso, estudos epidemiológicos com genotipagem APOE na Amazônia têm sido restritos a populações indígenas. Portanto, este trabalho analisou pela primeira vez os perfis genotípicos e alélicos de APOE em populações ribeirinhas amazônicas expostas cronicamente ao mercúrio. Oitocentos e vinte e três indivíduos foram incluídos em nosso estudo doando sangue (794) e/ou cabelo (757). A genotipagem da APOE foi analisada por PCR em tempo real. O mercúrio total e as espécies de mercúrio foram quantificados por ICP-MS e GC-piro-AFS, respectivamente. Os marcadores de ancestralidade genômica foram avaliados por reação multiplex-PCR, separados por eletroforese capilar no instrumento ABI 3130 Genetic Analyzer e analisados ​​no GeneMapper ID v3.2. O 3 e 3/3 foram os alelos e genótipos mais frequentes, respetivamente, seguidos do alelo 4 e do genótipo 3/4. Apenas o genótipo 2/2 não foi encontrado, sugerindo que a ausência desse genótipo é um fenômeno generalizado na Amazônia. Além disso, nossos dados apoiaram uma associação entre a presença de APOE4 e a origem ameríndia nessas populações. Cinquenta e nove indivíduos foram identificados em risco máximo com níveis de mercúrio acima de 10 μg/ge presença de APOE4. Curiosamente, entre os indivíduos com alto teor de mercúrio, os portadores de APOE4 apresentaram níveis de mercúrio mais elevados do que os portadores de APOE2, apontando para um acúmulo diferente de metais pesados ​​de acordo com o alelo APOE. Esses dados sugerem que a APOE4, além de um possível efeito farmacodinâmico, pode influenciar farmacocinéticamente a exposição ao mercúrio causando seu maior acúmulo e levando a piores consequências deletérias. Nossos resultados podem auxiliar no desenvolvimento de estratégias de prevenção e tomada de decisão de políticas de saúde em relação a essas populações vulneráveis ​​em risco.

A intoxicação por metilmercúrio (MeHg) ganhou destaque após desastres de repercussão global como o relatado na Baía de Minamata, Japão. A intoxicação mercurial pode ter ocorrido após desastres ambientais e despejo ilegal de resíduos em mananciais hídricos no Brasil. Apesar dos efeitos neurotóxicos do MeHg serem bem conhecidos na literatura, poucos estudos têm explorado o impacto da exposição do MeHg no hipocampo, cerebelo e fígado em camundongos lactentes. Este trabalho teve como escopo avaliar o impacto da intoxicação por MeHg (20mg/L) em camundongos C57BL6J lactentes, do 4º ao 18º dia pós-natal, sendo administrado às matrizes e transferido aos lactentes (MeHg) pelo leite materno e comparar seus efeitos com filhotes cujas matrizes não foram intoxicadas (GC). Foram coletadas amostras de pelo dos lactentes para quantificar a intoxicação pelo MeHg. O delta do peso e o perfil metabólico dos animais foram avaliados, incluindo análises séricas de glicemia, colesterol total e triglicerídeos. O efeito do MeHg no estresse oxidativo no hipocampo, cerebelo e fígado foi avaliado analisando a atividade das enzimas antioxidantes catalase, glutationa peroxidase (GPx), glutationa (GSH), superóxido dismutase (SOD) e peroxidação lipídica (MDA/ TBARS). O efeito neuroinflamatório do MeHg foi avaliado medindo os níveis de IL-1β, IFN-γ, TNF- e KC no hipocampo e cerebelo. Os valores de concentração de mercúrio nas amostras de pelo do grupo MeHg mostraram-se 3x mais elevados que em GC, confirmando intoxicação (p

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O metilmercúrio (MeHg) é a forma mais tóxica do mercúrio. A exposição ao MeHg gera estresse oxidativo, podendo afetar a retina, pois esta possui alta vulnerabilidade em função do seu elevado conteúdo de ácidos graxos poliinsaturados e consumo de oxigênio. Nesse contexto, a administração de antioxidantes exógenos obtidos pela dieta, como os presentes na Euterpe oleracea (açaí), poderia ser uma forma de prevenir esse desequilíbrio e suas consequências. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o possível efeito protetor da Euterpe oleracea nas alterações eletrofisiológicas causadas pelo MeHg na retina. Para tal, foi realizada gavagem com MeHgCl (5 mg/Kg) ou solução salina (NaCl 0,9%) durante 7 dias e pré-tratamento com ração enriquecida com polpa de açaí (10%) por 28 dias. Foram utilizados ratos Wistar divididos em 4 grupos: Grupo MeHg (recebeu ração padrão e MeHgCl); MeHg+Açaí (ração enriquecida com açaí e MeHgCl); Açaí (ração enriquecida com açaí e NaCl); Veículo (ração padrão e NaCl). Um dia após a última gavagem os animais foram submetidos ao eletrorretinograma de campo total (ffERG) para obtenção da resposta escotópica (de bastonetes, mista 1 e mista 2) e fotópica (de cones e de flicker em 12; 18; 24 e 30Hz). No dia seguinte ao ffERG foi aplicado o teste campo aberto para avaliar a atividade locomotora dos animais. Posteriormente, foi feita medição de peroxidação lipídica no tecido retiniano pelo método TBARS. A análise estatística foi feita pelo teste ANOVA de uma via com pós-teste de Tukey, considerando significativo p

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A exposição a compostos mercuriais resulta em danos oxidativos, afetando gravemente o sistema nervoso central, como observado em humanos e em modelos experimentais. Este trabalho utilizou ratos Wistar em diferentes períodos do neuro-desenvolvimento a fim de investigar possíveis efeitos protetores do selênio (selenito de sódio) em um modelo in vivo de exposição ao metilmercúrio (MeHg). Os sujeitos (grupos de idades P1 e P21) receberam por amamentação ou via oral: veículo, Selênio (5ppm), MeHg (10ppm) ou Selênio (5ppm) mais MeHg (10ppm) durante 20 e 10 dias respectivamente (n = 8 por grupo). Após o tratamento, os ratos foram submetidos aos testes de campo aberto e labirinto aquático a fim de analisar déficits motores e de memória/aprendizagem, respectivamente. Para fins de análise histológica, foi realizada perfusão e imunohistoquimica para Neu-N. Com o objetivo de aferir possíveis efeitos deletérios sobre populações neuronais, foi feita contagem estereológica dos neurônios do hipocampo (camada polimórfica do giro denteado). Como resultado, foi observada redução significativa na atividade locomotora de neonatos (P1) mediante exposição ao MeHg. Além disso, nos grupos expostos ao MeHg (isoladamente ou associado ao selênio) verificou-se déficits de aprendizagem e memória. Já os animais P21 expostos ao MeHg apresentaram aumento na atividade locomotora, efeito abolido pela administração concomitante de selênio. Quando submetidos ao labirinto aquático, observou-se redução do tempo de latência apenas no grupo controle e naqueles animais expostos ao selênio. Como resultado das contagens estereológicas, observou-se diminuição do número de neurônios no hipocampo somente nos animais P21 expostos ao mercúrio. Os resultados obtidos sob estas condições experimentais mostraram que a exposição ao MeHg resultou em efeitos comportamentais diversos dependentes da idade dos sujeitos. A administração de selênio só foi capaz de interferir positivamente nos déficits locomotores observados em animais mais velhos. Além disso, foi observado que a administração de selênio não interferiu nos distúrbios comportamentais de memória/aprendizagem, tampouco na morte neuronal induzida por MeHg. Possíveis mecanismos associados a este padrão de proteção parcial por selênio, especialmente em estágios mais avançados de desenvolvimento neural ainda necessitam ser elucidados. Exposure to mercury compounds results in oxidative damages, seriously affecting the central nervous system both in humans and in experimental models. We used Wistar rats at different stages of neuro-development in order to investigate potential protective effects of selenium (sodium selenite) in an in vivo model of exposure to methylmercury (MeHg). Subjects (age groups P1 and P21) were given lactational and orally, respectively: vehicle, Selenium (5ppm), MeHg (10 ppm) or selenium (5 ppm) plus MeHg (10 ppm) for 20 and 10 days respectively (n = 8 per group). After treatment, the rats were submitted to the following behavioral tests: open field and Morris water maze to examine motor deficits and memory/learning, respectively. After intracardiac perfusion we performed immunohistochemistry for Neu-N. In order to evaluate possible deleterious effects in neuronal populations, we counted neurons in the hippocampus (polymorphic layer). As a result, we found significant reduction in locomotor activity of neonates (P1) when exposed to MeHg. Besides, groups exposed to MeHg (alone or in association with selenium) showed learning/memory deficits. P21 animals treated with MeHg showed increase in locomotor activity, effect abolished by concomitant administration of selenium. When submitted to water maze, only subjects in the control and selenium groups showed reduction of the time latency. As assessed by stereological counting, we noticed reduction in the number of hippocampal neurons only in P21 animals exposed to MeHg. Combined, our results showed that MeHg exposure produces age-dependent behavioral effects. Also, despite other findings in the literature, under our experimental conditions administration of selenium was only able to interfere with motor deficits in older animals, besides not being able to interfere with memory/learning deficits nor the MeHg-induced neuronal death. Possible mechanisms associated with these partial protective properties of selenium in the later stages of neural development have yet to be elucidated.

FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas Este estudo teve como objetivo analisar os efeitos dos mecanismos de injúria celular que produzem lesão no coração do macaco Cebus apella expostos durante 120 dias consecutivos com doses diárias de 1,5 mg de metilHg, através de alterações detectadas no marcador bioquímico de lesão miocárdica CK-MB, nos achados histopatológicos assim como pela técnica de imuno-marcação de células apoptóticas. Para tanto foram relacionados os perfis séricos da CK-MB, CK total, AST, ALT, uréia, creatinina e bilirrubina total com os achados histopatológicos e imunohistoquímicos no processo de acometimento do músculo cardíaco durante a exposição ao metilHg, comparando com o grupo controle. O método utilizado para dosagem e análise das substâncias bioquímicas séricas e para a dosagem de mercúrio no sangue foi o cinético ultravioleta e espectrometria de absorção atômica, respectivamente; para análise histopatológica utilizou-se a técnica de Hematoxilina Eosina e para detecção dos perfis apoptóticos o método APOPTAG. Foram obtidas consideráveis informações que permitem correlacionar as alterações bioquímicas, histopatológicas e os perfis apoptóticos ao mecanismo do acometimento cardíaco nos três animais expostos ao metilHg comparando-os com o grupo controle. Verificou-se que de todas as substâncias bioquímicas analisadas, houve apenas acentuado aumento sérico da enzima CK-MB, enquanto que na histopatologia observou-se lesão celular reversível por acúmulo de água nos três órgãos analisados (coração, fígado e rim). Destaca-se também a observação de uma nítida marcação células apoptóticas no tecido cardíaco, hepático e renal dos animais expostos, evidenciando-se maior número de células positivas nas células dos túbulos renais, ressaltando que não se observou infiltrado inflamatório em torno destes elementos descritos em nenhum dos tecidos analisados e ausência das referidas lesões nos tecidos dos três animais controle. Concluiu-se que a enzima CK-MB, a degeneração hidrópica e o mecanismo de apoptose podem ser indicadores de lesão miocárdica na exposição aguda ao metilHg, cuja etiopatogenia pode estar relacionada a descompensação mitocondrial pelo comprometimento maciço na bomba de Na+ / K+ e Ca++. Fazendo-se necessário um maior aporte de estudos experimentais que venham esclarecer com precisão a etiopatogenia, o mecanismo de agressão e injúria celular em indivíduos expostos a doses tóxicas de metilHg. This study aimed to examine effects of the mechanisms of injury producing cellular damage in the heart of the monkey Cebus apella exposed for 120 consecutive days, with daily dose of 1.5 methyl Hg, by changes detected in biochemical markers of myocardial injury CK - MB, the histopathological findings as well as the technique of immunolabeling of apoptotic cells. For that, we related to the serum profiles of CK-MB, total CK, AST, ALT, urea, creatinine and total bilirubin with the histopathological and immunohistochemical findings in the involvement of the heart muscle during exposure to methyl Hg, and compared with a control group. The method used for determination and analysis of the serum and the determination of mercury in blood was the kinetic ultraviolet; atomic absorption spectroscopy, respectively; for histopathological analysis used the technique of Hematoxylin and Eosin; and for detection of apoptotic profiles the method APOPTAG. Was obtained information that correlate the biochemical changes, histopathologic profiles and apoptotic mechanism of cardiac involvement in three animals exposed to methyl Hg, when compared with control group. Among all substances of biochemical analysis were found that there was only marked increase of serum CK-MB enzyme, whereas, the histopathologic analysis showed reversible cell damage by accumulation of water in the three organs examined (heart, liver and kidney). It is also the observation of a clear labeling of apoptotic cells in heart, liver and kidney tissues of exposed animals, showing a higher number of positive cells in cells of renal tubules. Emphasizing that there was no inflammatory infiltrate around these tissues described and analyzed, and was there absence of such lesions in tissues of three control animals. It was concluded that the enzyme CK-MB, the hydropic degeneration and the mechanism of apoptosis may be indicators of myocardial injury in acute exposure to methyl Hg whose pathogenesis could be related to mitochondrial decompensation because massive commitment of the Na + / K + and Ca + + pumps. Requiring a greater intake of experimental studies that can clarify the exact pathogenesis, the mechanism of cellular injury and aggression in individuals exposed to toxic doses of methyl Hg.

IEC - Instituto Evandro Chagas O metilmercúrio (MeHg) é um composto comprovadamente neurotóxico cujos mecanismos degenerativos ainda não estão bem esclarecidos. No sistema nervoso central o MeHg é seqüestrado do interstício preferencialmente por astrócitos diminuindo a carga de exposição neuronal. Estudos in vitro demonstraram que a prolactina (PRL) possui efeitos mitogênicos sobre astrócitos, além de regular a expressão de citocinas pró-inflamatórias. Este estudo teve por objetivo investigar efeitos protetores da prolactina sobre distúrbios provocados por MeHg na viabilidade, morfologia, expressão de GFAP (glial fibrillary acidic protein), mitogênese e liberação de interleucina-1β (IL-1 β) em cultivo glial de córtex cerebral de ratos neonatos focalizando as células astrogliais. A exposição a diferentes concentrações de MeHg (0,1, 1, 5 e 10 μM) a diferentes intervalos de tempo (2, 4, 6, 18 e 24 h) ocorreu em cultivos com 10% de soro fetal bovino (SFB). Os resultados obtidos demonstraram diminuição progressiva de 20% e 62% da viabilidade celular após exposição às concentrações de 5 e 10 μM MeHg no tempo de 24 h, respectivamente, pelo método do 3-4,5-dimetiltiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazólio bromide (MTT) e distúrbios na expressão e distribuição de GFAP. Diferentes concentrações de prolactina (0.1, 1 e 10 nM) foram adicionadas em meio sem soro fetal bovino (FBS) para avaliar sua ação proliferativa isoladamente. Esta ação foi confirmada com indução de mitogênese em cerca de 4.5x em 18 h de observação na maior concentração (10 nM PRL). Nestas condições (sem SFB) foram analisados os efeitos da associação de 1 nM PRL + 5μM MeHg em teste de viabilidade, expressão de GFAP, morfologia celular, índice mitótico e liberação de IL-1β com o objetivo de estudar possíveis efeitos citoprotetores deste hormônio. A PRL atenuou os distúrbios provocados pelo MeHg, aumentando a viabilidade em 33%, a expressão de GFAP, proliferação celular (4x) e atenuando os distúrbios morfológicos, incluindo picnose nuclear e lise. Adicionalmente, a PRL induziu amplificação da liberação de IL1β quando associada ao MeHg. Estes achados confirmam a hipótese de que a PRL possa atuar como um agente citoprotetor em cultura primária de glia e particulamente em astrócitos, ação esta aditiva aos seus efeitos mitogênicos. Methylmercury (MeHg) is a compound highly neurotoxic and its degenerative mechanisms are not very clear yet. In Central Nervous System, MeHg is mostly uptake by astrocytes, decreasing neuronal exposition. Studies demonstrated that prolactin (PRL) has mitogenic effects on astrocytes and it can regulate pro-inflammatories cytokines expression. The aim of this work was to verify the protective effects of PRL on disturbs provoked by MeHg on cellular viability, morphology, GFAP (glial fibrillary acidic protein) expression, mitogenesis and release of interleukin-1β in glia primary culture of cerebral cortex of newborn rats, with astrocytes in focus. Glia primary culture were exposed to differents concentrations of MeHg (0,1, 1, 5 e 10 μM) in differents time intervals (2, 4, 6, 18 e 24 h) in medium with fetal bovine serum 10%. Results demonstrated progressive decreasing of 20% e 62% on cellular viability after exposed to 5 e 10 μM MeHg for 24 h, respectively, by MTT [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] assay and disturbs in the GFAP expression and distribution. Differents concentrations of PRL (0.1, 1 e 10 nM) were added in free serum medium to evaluate it proliferative action. This was confirmed by mitogenesis induction around 4.5x in 18h at 10 mM PRL. In this conditions (free serum) were evaluated the effects of co-treatment of 1 nM PRL + 5 μM MeHg on cellular viability, morphology, GFAP expression, mitotic index and release of IL-1β. PRL attenuated disturbs caused by MeHg, increasing viability in 33%, GFAP expression, cellular proliferation (4x), and attenuating morphologic alterations like nuclear picnosis and lisis. These findings prove that PRL can act like a cytoprotective agent in primary culture of glia, particularly in astrocytes, in addition to its mitogenic effects.

This review addresses the mechanisms of methylmercury (MeHg)-induced neurotoxicity, specifically examining the role of oxidative stress in mediating neuronal damage. A number of critical findings point to a central role for astrocytes in mediating MeHg-induced neurotoxicity as evidenced by the following observations: a) MeHg preferentially accumulates in astrocytes; b) MeHg specifically inhibits glutamate uptake in astrocytes; c) neuronal dysfunction is secondary to disturbances in astrocytes. The generation of reactive oxygen species (ROS) by MeHg has been observed in various experimental paradigms. For example, MeHg enhances ROS formation both in vivo (rodent cerebellum) and in vitro (isolated rat brain synaptosomes), as well as in neuronal and mixed reaggregating cell cultures. Antioxidants, including selenocompounds, can rescue astrocytes from MeHg-induced cytotoxicity by reducing ROS formation. We emphasize that oxidative stress plays a significant role in mediating MeHg-induced neurotoxic damage with active involvement of the mitochondria in this process. Furthermore, we provide a mechanistic overview on oxidative stress induced by MeHg that is triggered by a series of molecular events such as activation of various kinases, stress proteins and other immediate early genes culminating in cell damage.

To quantify the effects of methylmercury (MeHg) on amacrine and on ON-bipolar cells in the retina, experiments were performed in MeHg-exposed groups of adult trahiras (Hoplias malabaricus) at two dose levels (2 and 6 µg/g, ip). The retinas of test and control groups were processed by mouse anti-parvalbumin and rabbit anti-aprotein kinase C (aPKC) immunocytochemistry. Morphology and soma location in the inner nuclear layer were used to identify immunoreactive parvalbumin (PV-IR) and aPKC (aPKC-IR) in wholemount preparations. Cell density, topography and isodensity maps were estimated using confocal images. PV-IR was detected in amacrine cells in the inner nuclear layer and in displaced amacrine cells from the ganglion cell layer, and aPKC-IR was detected in ON-bipolar cells. The MeHg-treated group (6 µg/g) showed significant reduction of the ON-bipolar aPKC-IR cell density (mean density = 1306 ± 393 cells/mm2) compared to control (1886 ± 892 cells/mm2; P < 0.001). The mean densities found for amacrine PV-IR cells in MeHg-treated retinas were 1040 ± 56 cells/mm2 (2 µg/g) and 845 ± 82 cells/mm2 (6 µg/g), also lower than control (1312 ± 31 cells/mm2; P < 0.05), differently from the data observed in displaced PV-IR amacrine cells. These results show that MeHg changed the PV-IR amacrine cell density in a dose-dependent way, and reduced the density of aKC-IR bipolar cells at the dose of 6 µg/g. Further studies are needed to identify the physiological impact of these findings on visual function.