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Orientador : Athanase Billis Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A graduação histológica do adenocarcinoma da próstata, de indiscutível relevãncia no prognóstico deste tumor, apresenta um carãter subjetivo que nos propusemos a estudar, testando a reprodutibilidade intra-observadorde três dos sistemas de diferenciação tumoral mais empregados no mo mento: MOSTOFI, GLEASON e BOCKING. Foram selecionadas 139 neoplasias e subdivididas em grupos de acordo com o tipo de procedimento cirúrgico adotado na sua exérese (ressecção trans-u retraI ou prostatectomia aberta) e segundo o número de fragmentos acometidos pelo tumor...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: In carcinoma of the prostate, histological grade is a significant prognostic marker and may inf1uence treatment p1anning. The main prob1em appears tobethat grading is subjective. In the current investigation, intraobserver variation of the three most emp10yed grading systems -MOSTOFI, GLEASON and BOCKING is examined....Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations Doutorado Doutor em Medicina

Agradecimentos: The equipment used for the development of this work was purchased with the help of Fapesp (the São Paulo Research Foundation; 08/57906-3) and CNPq (the National Council for Scientific and Technological Development; 573913/2008-0). We reviewed the content of the manuscript, followed by Ms Diane Ellis, B.A. in education. Biostatistician Cleide Aparecida Moreira Silva, Research Committee, Biostatistics Division, Medical Sciences School, Unicamp, provided statistical consultation Abstract: Solid tumors typically contain high levels of fibrillar collagen. The increased stromal collagen deposition usually promotes cancer progression since biochemical and biophysical cues from tumor-associated collagen fibers stimulate neoplastic cells. Few studies have investigated the relationship between Merkel cell carcinoma (MCC) and the extracellular matrix (ECM), but there are no works evaluating collagen. This is an observational, analytical, retrospective study including 11 patients with MCC. Primary tumor-stained sections were evaluated by second harmonic generation microscopy and texture analysis. Peritumoral texture features (area fraction, mean gray value, entropy, and contrast) showed much lower values than normal skin (P < .0001) revealing extensively altered structure of peritumoral collagen fibers. These differences were not significant between tumors with unfavorable and favorable known prognostic factors. Profound changes in collagen fibers present in the stroma accompanying primary MCC may contribute to the aggressive behavior of this tumor. Our results indicate that whatever MCC histological subtype, size or anatomical location, MCC promotes the same type of ECM for its development. As an outlook, therapies using ECM macromolecules or fibroblasts (the architects of ECM remodeling) as target could be useful in the treatment of MCC FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ Aberto

Agradecimentos: This work was supported by grant # 07/59319-5 Sao Paulo Research Foundation - Fapesp - http://www.fapesp.br/en/ - NBM; grant # 015/2014 - Fundo de Apoio a Dermatologia do Estado de Sao Paulo "Sebastiao Sampaio" - Funadersp - http://www.sbd-sp.org.br/funadersp.php - PENFV; grant #043/2016 - Fundo de Apoio a Dermatologia do Estado de Sao Paulo "Sebastiao Sampaio" - Funadersp - http://www.sbd-sp.org.br/funadersp.php - PENFV; grant # 01P-04520-2013 - Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior - Capes - http://www.capes.gov.br/ - BGL; Fundo de Apoio ao Ensino, a Pesquisa e Extensao, Universidade Estadual de Campinas (0044/17). The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript Abstract: The use of medicinal plants and their derivatives is increasing, and approximately one-third of all traditional herbal medicines are intended for wound treatment. Natural products used in these treatments include vegetable oils, which are rich in essential fatty acids. Once in contact with an ulcerative surface, the oil reaches the blood and lymphatic vessels, thus eliciting systemic effects. Objective This study evaluated the local and possible systemic effects of essential fatty acids (sunflower oil) applied topically to rat wounds. Methods Cutaneous punch wounds (6 mm) were produced on the dorsa of 30 rats. Saline (SS), mineral oil (MO) or essential fatty acid (EFA) solutions were applied topically. Healing was evaluated after 2, 4 and 10 days (n = 5 per group) by visual and histological/morphometric examination, second harmonic generation (SHG) microscopy, and cytokine and growth factor quantification in the scar tissue (real-time PCR) and in serum (ELISA). Results MO/EFA-treated animals had higher IGF-1, leptin, IL-6 and IFN-gamma mRNA expression and lower serum IL-6 levels than the control (SS/MO) animals. SHG analysis showed no difference in collagen density between the animals treated with MO and EFA. Conclusion EFA treatment induces topical (observed by local IGF-1, leptin, IL-6 and IFN-gamma production) and systemic effects, lowering IL-6 levels in the serum. As the oil is widely used to shorten ulcer healing time, studies are needed to evaluate the treatment safety and possible undesired effects FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP COORDENAÇÃO DE APERFEIÇOAMENTO DE PESSOAL DE NÍVEL SUPERIOR - CAPES Aberto

Agradecimentos: This study was funded by the São Paulo Research Foundation (08/57906–3), the National Council for Scientific and Technological Development (573913/2008–0), and the Biologia das Doenças Neoplásicas da Medula Óssea (FAPESP grant 11/51959-0) project with fellowship support from CNPq (310518/2015-6) Abstract: Background: The diagnosis of idiopathic atrophoderma of Pasini and Pierini (IAPP) relies on typical clinical features, particularly distinctive pigmented ovular/round depressed plaques. Histologic examination often reveals no obvious changes, but patterns of collagen distribution, using multiphoton imaging and second harmonic generation can help track hidden details of tissue organization contributing to atrophy. Objective: To identify histologic features that distinguish IAPP from unaffected skin. Methods: Eleven patients were included for conventional analyses. Masson trichromee and Unna-Tanzer orcein-stained sections were evaluated using automated morphometry. Hematoxylin-eosinestained sections were analyzed by multiphoton imaging using 2-photon excited fluorescence and second harmonic generation. Results: No abnormalities were found under light microscopy or by automated quantification. Multiphoton imaging revealed no difference in optical density of either collagen or elastic fibers in lesioned and unaffected skin; however, horizontal collagen fiber organization in lesion specimens increased toward the lower dermis, whereas elastic fibers featured greater disorganization within the upper dermis. Limitations: The low number of patients evaluated. Conclusion: The atrophic appearance of IAPP lesions reflects changes in organization, but not in collagen and elastic tissue content. Minute organizational differences that are imperceptible to the experienced pathologist and undetectable by automated analyses were revealed by multiphoton analyses, particularly second harmonic generation, in association with texture analyses FUNDAÇÃO DE AMPARO À PESQUISA DO ESTADO DE SÃO PAULO - FAPESP CONSELHO NACIONAL DE DESENVOLVIMENTO CIENTÍFICO E TECNOLÓGICO - CNPQ Fechado

Paracoccidioidomycosis (PCM) is the most important systemic mycoses in Latin America. We describe a severe case of paracoccidioidomycosis in a 14-year-old boy, with a rapid disease progression. The fungal strain was isolated and inoculated into a T and/or B cell immunocompromised mice, which revealed a highly virulent strain. The case report presented herein emphasizes the importance of considering PCM in the differential diagnosis of patients with other infectious diseases in endemic areas and highlights a novel isolate Fechado

Bartonella henselae is a causative agent of anemia, cat scratch disease, bacillary angiomatosis, recurrent fever, hepatitis, endocarditis, chronic lymphadenopathy, joint and neurological disorders. B. henselae are intra-erythrocytic bacteria. The goal of this study was to visualize the B. henselae invasion into enucleated human red blood cells in real time using bacterium endogenous fluorescence. We took advantage of the unique fluorescence emission spectral profile of the bacteria. We used a linear unmixing approach to separate the fluorescence emission spectra of human erythrocytes from native B. henselae when excited at 488nm. Human blood samples were inoculated with B. henselae and incubated for 60 hours. 3-D live images were captured at select intervals using multi-photon laser scanning microscopy. Uninfected blood samples were also analyzed. This study revealed bacteria entering mature erythrocytes over a 60 hour time period Aberto

Orientador: Maria Letícia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: apenas 5% a 25% dos pacientes com lúpus eritematoso cutâneo (LEC) irão progredir para lúpus eritematoso sistêmico (LES). Para investigar se a tendência para esta progressão pode ser suspeitada a partir de achados histológicos, comparamos achados imunoistoquímicos de biópsias de pele de pacientes com e sem envolvimento sistêmico. Métodos: imunomarcadores de resposta citotóxica (CD8, CD56, granzima A, granzima B, perforina e granulisina), inflamatória (CD4, ICAM-1, IL-6, IL-1?, IL-17, IL-18 e TNF-?) e anti-inflamatória (CD25, Fox-P3 e IL-10) e métodos morfométricos foram avaliados em biópsias de pele de 59 pacientes com lúpus discoide, subagudo e túmido. Para o diagnóstico de LES, os pacientes foram classificados pelos critérios do Colégio Americano de Reumatologia (ACR-82) e pelo sistema do Systemic Lupus International Collaborating Clinics (SLICC-12). Resultados: biópsias de pele de pacientes com LES apresentaram maior expressão de IL-1? (ARC-82: p = 0.024; SLICC-12: p = 0.0143), enquanto naqueles sem envolvimento sistêmico observou-se maior expressão de IL-17 (ARC-82: p = 0.0003; SLICC-12: p = 0.0351). Em relação aos marcadores de citotoxicidade, pacientes com doença sistêmica apresentaram correlação positiva entre Granzima B e perforina (ARC: p = 0.0097; SLICC-12: p = 0.0148); já em pacientes com lúpus exclusivamente cutâneo observou-se correlação entre Granzima A e Fox-P3 (ARC-82: p = 0.0257; SLICC-12: p = 0.0285), Granzima A e células CD8+ (ARC-82: p = 0.0075; SLICC-12: p = 0.0102) e Granulisina e células CD8+ (ARC-82: p = 0.0024; SLICC-12: p = 0.0116). Conclusões: em nosso estudo, os achados imunoistoquímicos sugerem que pacientes com tendência a doença sistêmica apresentam uma forte reatividade a IL-1?, enquanto aqueles com doença exclusivamente cutânea expressam IL-17 de forma mais intensa. Este achado, associado a dados clínicos, pode ajudar a identificar pacientes com maior risco de envolvimento sistêmico pelo lúpus Abstract: Introduction: Only 5 to 25% of patients with cutaneous lupus erythematosus (CLE) will eventually progress towards systemic disease (SLE). To investigate whether a tendency to progression to SLE can be histologically suspected, we compared immunohistochemical results in skin biopsies of CLE patients with- and without systemic involvement. Methods: Immunohistochemical markers for cytotoxic (CD8, CD56, granzyme A, granzyme B, perforin and granulysin), inflammatory (CD4, ICAM-1, IL-6, IL-1?, IL-17, IL-18 and TNF-?) and anti-inflammatory responses (CD25, Fox-P3 and IL-10) and morphometric methods were applied to routine paraffin sections of skin biopsies, taken from lesions of 59 patients with discoid lupus, subacute lupus and lupus tumidus. For the diagnosis of SLE, patients were classified by both the American College of Rheumatology (ACR-82) and the Systemic Lupus International Collaborating Clinics (SLICC-12) systems. Results: Skin samples from patients with SLE presented higher expression of IL-1? (ARC-82: p = 0.024; SLICC-12: p = 0.0143), while those without systemic disease had higher expression of IL-17 (ARC-82: p = 0.0003; SLICC-12: p = 0.0351). Regarding cytotoxicity markers, patients with SLE presented a positive correlation between granzyme B and perforin (ARC: p = 0.0097; SLICC-12: p = 0.0148); in patients with purely cutaneous lupus a positive correlation was observed between granzyme A and both Fox-P (ARC-82: p = 0.0257; SLICC-12: p = 0.0285) and CD8+ cells (ARC-82: p = 0.0075; SLICC- 12: p=0.0102) and between granulysin and CD8+ cells (ARC-82: p=0.0024; SLICC-12: p=0.0116). Conclusions: In this cohort, immunohistochemical findings suggested that lesions from patients prone to systemic disease will show a strong reactivity to IL-1?, while those with purely cutaneous involvement will tend to express IL-17 more intensely. This finding can help, together with clinical data, to identify patients with a more serious evolution Mestrado Anatomia Patologica Mestra em Ciências FAPESP 11/50037-2; 2016/153362

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: o lúpus eritematoso cutâneo (LEC) é uma doença crônica autoimune, que acomete predominantemente áreas fotoexpostas. O lúpus eritematoso cutâneo discoide (LECD) é a forma mais comum de apresentação da doença. A forma hipertrófica (LEH) pode ocorrer sobre lesões discoides ou se desenvolver "de novo". Fatores pró- e anti-apoptóticos, atividade citotóxica de linfócitos TCD8+ e constituintes de seus grânulos atuam no desenvolvimento da lesão lúpica. A atuação da resposta anti-inflamatória mediada por células T regulatórias ainda não está totalmente elucidado. Este estudo teve como objetivos avaliar, comparativamente, o papel de marcadores apoptóticos e de resposta inflamatória nas formas discoide e hipertrófica do LEC, bem como predizer a de maior risco para cancerização da doença. Métodos: foram estudados 32 casos de LEC crônico (17 discoides e 15 hipertróficos), no período de 1993 a 2012. As amostras de pele dos pacientes selecionados foram imunomarcadas para p53, COX-2, CD8, perforina, granzimas A e B, granulisina, CD4 e FOX-P3, e a densidade das células coradas foi contabilizada. Dados clínicos e epidemiológicos foram extraídos dos registros de prontuário dos pacientes. Resultados: a idade dos pacientes variou de 13 a 72 anos e os grupos foram similares quanto à idade, sexo, cor da pele e tempo de doença. Vários dos ceratinócitos das amostras de ambos os grupos de LEC apresentaram-se p53+, porém, a sua densidade foi significantemente maior no grupo LEH. Também a granzima B foi mais expressa no grupo LEH. Não houve diferença entre os grupos quanto à densidade dos demais marcadores. Três lesões de LEH evoluíram para carcinoma espinocelular. Nenhum paciente apresentou a forma sistêmica da doença, durante o tempo de observação do estudo. Conclusão: mecanismos apoptóticos e de dano celular citotóxico atuam na gênese das lesões do LEC. Os marcadores granzima B, COX-2 e p53 podem estar associados ao tipo de lesão (discoide ou hipertrófico), evolução para malignidade e local do acometimento cutâneo. A avaliação imuno-histoquímica das biopsias de pele dos pacientes com LEC pode se tornar uma ferramenta que ajude a prever que lesões têm maior risco de cancerização Abstract: Background: Cutaneous lupus erythematosus (CLE) is a chronic autoimmune disease that predominantly affects photoexposed areas. Cutaneous discoid lupus erythematosus (DLE) is the most common form of disease presentation. The hypertrophic form (HLE) can develop over discoid or present as "de novo" lesions. Pro- and anti-apoptotic factors, cytotoxic activity of TCD8+ lymphocytes and constituents of their granules act in the development of lupus lesion. The role of the anti-inflammatory response mediated by regulatory T cells is not yet fully elucidated. This study aimed to comparatively study the apoptotic and inflammatory response markers in the discoid and hypertrophic forms of CLE, as well as to predict which has the higher risk for cancerization of the disease. Methods: 32 cases of chronic CLE were studied (17 discoid and 15 hypertrophic), from 1993 to 2012. Skin samples from selected patients were immunostained for p53, COX-2, CD8, perforin, granzymes A and B, granulysin, CD4 and FOX-P3, and the density of stained cells was recorded. Clinical and epidemiological data were extracted from the patients' medical records. Results: the age of the patients ranged from 13 to 72 years and the groups were similar in terms of age, sex, skin color and disease duration. Several of the keratinocytes in the samples from both LEC groups were p53+, however, its density was significantly higher in the LHE group. Granzyme B was also more expressed in the LEH group. There was no difference regarding the density of the other markers between the groups. Three LEH lesions progressed to squamous cell carcinoma. No patient presented the systemic form of the disease during the observation period of the study. Conclusion: apoptotic and cytotoxic cell damage mechanisms act in the genesis of CLE lesions. Granzyme B, COX-2 and p53 markers may be associated with the type of lesion (discoid or hypertrophic), progression to malignancy and skin involvement site. The immunohistochemical evaluation of skin biopsies from patients with LEC can become a tool that helps to predict which lesions are at greater risk of cancerization Mestrado Anatomia Patologica Mestra em Ciências FAPESP 11/50037-2 CAPES 001

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Oslei Paes de Almeida Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Piracicaba Resumo: O líquen plano (LP) é uma doença mucocutânea crônica, de causa desconhecida, que freqüentemente afeta a mucosa oral. Histologicamente, o LP apresenta diferentes graus de acantose e atrofia, com desorganização da camada basal e infiltrado inflamatório subepitelial em banda, composto principalmente de linfócitos T. Lesões semelhantes ao líquen plano, chamadas reações liquenóides, podem acometer a mucosa oral. As reações liquenóides podem estar associadas à desordens sistêmicas, como na doença do enxerto contra o hospedeiro crônica (GVHDc). Os achados histológicos da reação liquenóide associada à GVHDc são semelhantes aos encontrados no LP. O objetivo deste trabalho foi comparar as características microscópicas do LP e da GVHDc em boca. As alterações epiteliais e no tecido conjuntivo foram avaliadas em 40 casos de LP e 31 de GVHDc, assim como a presença de mastócitos, macrófagos e células de Langerhans (CL). As maiores diferenças entre as lesões foram observadas na região da junção epitélio tecido conjuntivo. No LP, o infiltrado inflamatório foi mais intenso, porém a desorganização e vacuolização das células da camada basal foram menos evidentes. Os mastócitos foram mais numerosos no LP, e apresentaram menor quantidade de grânulos quando observados no infiltrado inflamatório. As CL foram mais freqüentes no LP, e os macrófagos na GVHDc. A expressão de laminina foi similar nos dois grupos. Estes resultados mostram que a lesão liquenóide associada a GVHDc difere do LP, particularmente na junção epitélio-tecido conjuntivo. No LP, o infiltrado inflamatório é mais intenso, mas a expressão antigênica, possivelmente menor, gera alterações epiteliais mais discretas Abstract: Lichen planus (LP) is a chronic mucocutaneous disease of unknown etiology, that frequently affects the oral mucosa. Microscopically, LP is characterized by areas of epithelial acantosis and atrophy, with disorganization of the basal layer, and by a subepithelial band-like mononuclear inflammatory infiltrate. Lichenoid lesion are diseases that present a similar pattern to LP, that can affect the mouth and skin, as Lichenoid lesions may be associated with chronic Graft versus Host Disease (cGVHD). The objective of this work was to compare the microscopic characteristics of LP and those of cGVHD in the oral mucosa. Epithelial and connective tissue alterations were evaluated in 40 cases of LP and in 31 cases of cGVHD, as well as the presence of mast cells, Langerhans cells (CL) and macrophages. The main differences found between the two diseases were at dermal-epithelial junction area. In LP the inflammatory infiltrate was more intense, but disorganization and vacuolization of the epithelial basal cells were less evident. Mast cells were more numerous in lichen planus, and showed less granules when observed in the inflammatory infiltrated. LC were more numerous in lichen planus and macrophages in cGVHD. The laminin expression was similar in both groups. From these observations it was concluded that lichenoid lesions of cGVHD of the oral mucosa differs from LP, particularly at the dermal-epithelial junction region. In LP the inflammatory infiltrate is more intense, but the antigenic expression possibly is less than in cGVHD, causing a more discrete epithelial cells alterations Mestrado Estomatologia Mestre em Estomatopatologia

Orientadores: Paulo Eduardo Neves Ferreira Velho, Maria Letícia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: o processo de cicatrização é longo e complexo, dura meses nos humanos, e depende de diversos fatores locais e gerais. Ele pode ser divido em três fases: inflamatória, proliferativa e de remodelação. Para que ocorra, é necessária uma cascata de eventos e a participação de diversos tipos de células, bem como de substâncias por elas secretadas. Entre estas destacam-se as substâncias pró-cicatriciais, como a leptina, IL-2, IL-4, IL-6 e o IGF-1, as anti-cicatriciais, como a adiponectina, IL-12, o IFN-?, o IFN-? e, finalmente, o TNF-?, que possui ação variável, de acordo com a concentração circulante desta substância. Muito há para se pesquisar nesse campo, e o desenvolvimento de produtos, com princípios ativos que estimulam a cicatrização, mas de baixo custo, que aproveite matérias-primas encontradas na região, poderia beneficiar um número grande de indivíduos. Foi demonstrado que o uso do óleo do farelo de arroz induz a proliferação de linfócitos, a síntese de citocinas, o aumento da hematopoese e a atividade fagocítica de macrófagos. Objetivos: testar a efetividade do óleo de arroz na cicatrização de feridas cutâneas, e avaliar, tanto no tecido lesado, como no sangue, a sua ação em fatores que atuam na cicatrização. Material e métodos: sobre feridas cirúrgicas circulares produzidas pela exérese da pele, com bisturi, no dorso de ratos, (45 animais, divididos em três grupos) foi aplicado um produto à base de óleo de arroz (patente BR 10 2012 008718 9). O processo de cicatrização foi avaliado por meio do estudo histológico e da quantificação tissular (por meio da PCR real time) e sérica (por meio da técnica Elisa), de fatores que atuam na cicatrização: leptina, IL-2, IL-4, IL-6, IGF-1, adiponectina, IL-12, IFN-?, IFN- ? e TNF- ?. Resultados e conclusões: comparativamente com o controle, foi encontrada diferença significante na celularidade das feridas e detectada ação sistêmica do produto, face ao aumento dos níveis séricos de adiponectina, leptina, IL-2, IL-6, TNF-? e IFN-?. Os resultados deste trabalho poderão ser úteis para a indústria farmacêutica e cosmecêutica brasileira ou internacional Abstract: The wound healing process is long and complex, lasts months and depends on many local and general factors. It can be divided into three phases: inflammatory, proliferative and remodeling. For that to occur, it is necessary a cascade of events involving several cell types, as well as substances secreted by them. Among these we highlight the pro-healing substances such as leptin, IL-2, IL-4, IL-6 and IGF-1, anti-scarring such as IL-12, IFN-?, IFN- ? and, finally, TNF-?, which possesses variable action, according to the circulating concentration of this substance. More research is needed in this field, and the development of products with active ingredients that stimulate healing, but of low cost, which uses raw materials found in the region, could benefit a large number of individuals. It has been shown that the use of rice bran oil induces lymphocyte proliferation, cytokine synthesis, increased hematopoiesis and phagocytic activity of macrophages. The objectives of this study were to test the effectiveness of rice oil topical use and assess both the injured tissue and blood to evaluate its action on factors that act in healing. Methods: Circular surgical wounds were produced by excision of skin with a scalpel in the back of rats (45, divided into three groups), then applied saline solution or essentials fatty acids or rice bran oil (patent BR 10 2012 0087 18 9). The healing process was evaluated by histological examination and quantification of tissue (by real time PCR) and serum (by ELISA technique), factors that act in healing, namely leptin, IL-2, IL -4, IL-6, IGF-1, adiponectin, IL-12, IFN-?, IFN-? and TNF-?. Compared with control, there was significant difference in the cellularity of the wound healing area and systemic action of the product detected by the increases in serum levels of adiponectin, leptin, IL-2, IL-6, TNF-? and IFN -?. The results of this study may be useful to the Brazilian or international pharmaceutical and cosmeceutical industry Mestrado Clínica Médica Mestre em Clínica Médica

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Elemir Macedo de Souza Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Fotodano tem sido bastante estudado em humanos, mas pouco nos gatos. O propósito deste estudo foi o de investigar a evolução clínica e características histomorfométricas dos efeitos da exposição solar crônica na pele do gato (dermatose solar: DS). Pele da orelha de 34 gatos domésticos, sem raça definida, cronicamente exposta ao sol foi classificada, com base clínica, em: grupo 0: normal (n= 13); grupo 1: estágio inicial de DS (n= 10); grupo 2: estágio avançado de DS (n= 11). Sexo e idade do gato, assim como a cor da orelha que foi selecionada para biopsia foi anotada. Secções histológicas foram coradas com hematoxilina-eosina e as características microscópicas foram examinadas às cegas e independentemente por dois pesquisadores em 10 campos seqüenciais lineares. A celularidade dérmica foi estudada através do uso de uma gratícula morfométrica de ciclóides posicionada em 10 campos seqüenciais. Espessura da epiderme e área relativa de anexos foi obtida através de imagens digitalizadas, com ajuda de um fotomicroscópio Axiophot (Carl Zeiss - KS300 system). Os resultados foram avaliados através dos seguintes métodos estatísticos: ANOVA, Kruskall Wallis, correlação Spearman, Análise de Variância com pós-teste de Duncan, e Análise Discriminante Linear. Idade mais avançada, orelha de cor branca, edema dérmico, esclerose, telangiectasia, redução da área de anexos e escamotização das células epidérmicas basais foram significantemente associados com o estágio avançado da dermatose solar. Os animais desenvolveram espessamento da epiderme desde a fase inicial. Nossos resultados indicam um alto nível de hipersensibilidade ao sol da pele de gatos, cujas características são comparáveis aos efeitos da radiação crônica em humanos Abstract: Photodamage has been extensively studied in man but little is known about it in the cat. The purpose of the present study was to investigate the evolutionary clinical and histomorphometric features of chronic solar exposure effects in the cat skin (solar dermatosis: SD). Ear skin of 34 domestic shorthair cats that were chronically exposed to sun were classified, on clinical basis, as follows: group 0: normal (n= 13); group 1: initial stage of SD (n= 10); group 2: advanced stage of SD (n= 11). Sex and age of the cat, as well as the colour of the ear that was submitted to biopsy were recorded. Histological sections were stained with haematoxylin-eosin and microscopic features were blindly and separately recorded by 2 examiners in 10 sequential linear high power fields (HPF). Dermal cellularity was studied through a cycloid morphometric grid positioned in ten sequential HPF. An objective assessment of the epidermal thickness and relative adnexal unit area was obtained in digitalized images, with the aid of an Axiophot photomicroscope (Carl Zeiss - KS300 system). Results were evaluated through the following statistical methods: ANOVA, Kruskall Wallis, Spearman correlation, Variance analysis with post test of Duncan, and Linear Disciminant Analysis. Older age, white-colour ear, dermal oedema, sclerosis, telangiectases, reduced adnexal area and squamotization of epidermal basal cells were significantly associated to advanced stage of sun dermatosis. The animals developed thickening of epidermis since the initial phase. Our results indicate a high level of skin hypersensibility to sun rays in cats whose characteristics are comparable to human chronic radiation effects Doutorado Anatomia Patologica Doutor em Ciências Médicas

Orientadores : Jose Vassallo, Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: As infiltrações linfocitárias inespecíficas constituem grande desafio na prática diagnóstica diária de patologistas, pois não existem sinais morfológicos patognomônicos para o diagnóstico diferencial entre infiltrações benignas e malignas. Foi realizado estudo retrospectivo em material de arquivo com seleção de 28 casos que se apresentaram como infiltrações linfocitárias. Dezoito variáveis histológicas e o perfil imuno-fenotípico para os marcadores linfóides CD4, CD8, CD3, CD30 e CD20 foram analisados e comparados à evolução clínica observada no seguimento. Os diagnósticos mais comuns entre os casos selecionados foram: micose fungóide (8 casos) e farmacodermia (5 casos). Nenhuma variável morfológica isolada foi capaz de discriminar os grupos benigno e linfoma, exceto pela presença dos microabscessos de Pautrier-Darier, presentes, apenas, em 37,5% dos pacientes portadores de micose fungóide (p=O,O15).O padrão de infiltração superficial e profunda (p=O,O37)bem como a presença de eosinófilos proeminentes no infiltrado (p=O,O21)foram menos freqüentes em pacientes portadores de micose fungóide. A subtipagem imuno-histoquímica de linfócitos T aplicada a material emblocado em parafina também não foi capaz de discriminar os grupos. Informação clínica e seguimento permanecem os parâmetros mais fidedignos para predição do comportamento clínico das infiltrações linfocitárias cutâneas iniciais Abstract: Non-specific lymphoid infiltrates of the skin pose difticulties on daily practice of general pathologists and dermatopathologists as pathognomonic morphologic signs for the differential diagnosis between benign and malignant infiltrates are still lacking. Methods: A retrospective study was performed on 28 difficult cases selected ITomfiles presenting as lymphoid infiltrates. Eighteen histologic variables and the immunophenotypic profile using CD4, CD8, CD3, CD20, CD30 lymphoid markers were assessed and compared to subsequent follow-up. Results: Most common diagnosis in the selected group were: mycosis fungoides - initial (8 cases) and drug reactions (5 cases). Isolated morphologic variables did not discriminate benign and malignant infiltrates except for the presence ofPautrier's microabscesses, which were found only in mycosis fungoides (p=O.O15).The pattem of superficial and deep infiltration (p=O.O37)as well as the presence of eosinophils (p=O.O21) were more ITequent in benign lymphoid infiltrates. Immunohistochemical profile of T-cell subsets was used on archival tissue, but was not able to discriminate between benign and malignant processes either. Conclusion: Clinical information and follow-up remain the most reliable factors on evaluating outcome of initial dermallymphoid infiltrates Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências Médicas

Orientadores : Elemir Macedo de Souza, Maria Leticia Cintra Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: Fotoenvelhecimento e fotodano são temas desafiadores e inesgotáveis. A maioria dos estudos enfatiza os aspectos epidérmicos, enquanto outros os dérmicos. Todavia, há poucos trabalhos referentes à íntima correlação entre estes dois compartimentos, que devem ser considerados como um todo: a unidade dermoepidérmica. o estudo foi baseado em 61 trabalhadores com mais de dez anos de fotoexposição, acima de 45 anos, que apresentavam dois padrões básicos de fotodano cutâneo: atrofia e elastose, dentro dos mesmos fototipos de pele I, 11 e m, segundo Fitzpatrick. Biópsias com "punch" de 5mm foram realizadas nas áreas livres de tumor ou de outras lesões na área exposta (1/3 proximal do antebraço), parcialmente exposta (1/3 médio interno do braço) e não-exposta (raiz lateral da coxa). Medidas da área da epiderme e derme foram avaliadas mediante análise de imagem computadorizada, com desenho à mão livre. O estudo estereológico da derme foi feito por meio da retícula de ciclóides (para fibras elásticas) e retícula segmentada (para fibras colágenas). A membrana basal foi estudada por imunoistoquímica. Foram avaliados os seguintes aspectos: espessura e área da epiderme e da derme, quantidade de tecido elastótico, quantidade de fibras colágenas, número de queratinócitos melanizados, número de camadas de células granulosas, espessura e continuidade da membrana basal e avaliação da faixa subepidérmica. Resultados: Na amostra examinada de indivíduos caucasóides crônica e intensamente expostos ao sol, a análise estatística revelou correlação significante entre: a) padrão clínico e fototipo: quanto menor o fototipo, maior a atrofia da pele; b) sexo e queratinócitos melanizados na área exposta: a pele cronicamente exposta ao sol apresenta pigmentação de distribuição irregular, significativamente mais acentuada nos indivíduos do sexo masculino; c) presença de neoplasias e idade: a fteqüência das neoplasias cutâneas é progressiva com a idade; o efeito deletério solar é cumulativo nos caucasóides de qualquer fototipo e de qualquer padrão clínico de fotodano; d) idade e espessura da epiderme: confon ne já está bem documentado, ad epiderme cronicamente exposta ao sol é mais espessa que a semi-exposta ou a coberta;i porém, foi observada correlação negativa entre a idade e a sua espessura na região cronicamente exposta ao sol. Ou seja, mesmo na área fotodanificada, ocorre atrofia epidérmica progressiva com a idade; e) área da epiderme e área da derme: a área total epidennodérmica da pele do braço mostrou-se menor do que a do antebraço e esta menor do que a da coxa, sendo a medida da epidenne inversamente proporcional à da denne. Ou seja: nos locais em que a derme é mais espessa, a epidenne é mais delgada; f) padrão clínico e colágeno na área não exposta: na pele coberta, o número de fibras colágenas da denne reticular é significativamente menor nos indivíduos de padrão atrófico, relativamente aqueles de padrão elastótico; g) idade e área dérmica na porção interna do braço: quanto maior a idade, menor a área da denne, ou seja, nesta região anatômica, ocorre atrofia progressiva da derme, com o avançar da idade. Não foi observada correlação entre: a) o padrão clínico (atrófico ou elastótico) e: 1- a idade; 2- o sexo; 3- quaisquer das contagens ou medidas epidérmicas ou dérmicas: uma vez que as diferenças entre os padrões (atrófico ou elastótico), tão aparentes à clínica, não se embasaram nem na espessura ou área da epidenne ou denne e nem no teor de fibras colágenas ou elásticas, pode-se cogitar que haja uma diferença na configuração espacial da pele elastótica, que seria, eventualmente, mais ondulada que a atrófica; b) o fototipo (I, fi, 111)e: 1- a idade; 2- o sexo; 3- quaisquer das contagens ou medidas epidérmicas ou dérmicas; c) presença de neoplasias e fototipo ou padrão clínico: não houve diferença significativa entre a presença ou a ausência de tumor e: 1- fototipo (1, lI, IlI); 2- padrão clínico (atrófico ou elastótico); d) medida da zona da membrana basal e fotoexposição: não foi encontrada diferença significativa entre a espessura da zona da membrana basal na pele das áreas exposta, semi-exposta e coberta. Todos os demais achados estão conformes ao que está descrito na literatura. Conclusão: Na amostra estudada (pele crônica e intensamente exposta ao sol), foi observado que: a) indivíduos caucasóides apresentam propensão crescente a desenvolver neoplasias cutâneas, à medida que o tempo de exposição se prolonga e não há diferença significativa de risco entre os diferentes fototipos (I, li, lil) e padrões clínicos (elastótico ou atrófico); b) a pele fotodanificada apresenta modificações de espessura e textura dos seus vários elementos, que não diferem, significativamente, entre os diferentes fototipos e padrões clínicos Abstract: Photoaging and photodamage are chalIenging and endless themes. Most of the studies focus on the epidermal features while, others, emphasizes the dermis. However, there have been few studies concerning the intimate correlation between these compartments, which should be considered as a whole: the dermal-epidermal unit, as welI as its relation to skin malignancy. The purpose of the present study was to investigate the association between clinical and histological features of the dermal-epidermal unit on the exposed skin, comparatively to the unexposed skin of the same individuaIs with Milian's citrine skin or its atrophic variant, within Fitzpatrick's phototypes I, lI, and III. The study was based on outdoor workers, who presented two basic clinical patterns of skin photodamage, atrophic and elastotic, with phototypes varying ttom I to Ill. There were 61 volunteers over 45 years , and alI signed an informed consent. Five-mm punch biopsies of tumor-ttee exposed (dorsal aspect of the forearm), partially exposed (the inner aspect of the arm), and non-exposed (upper thigh) skin were performed. The subjects were screened, and divided into groups, according to their phototypes, clinical features of their sun damaged skin (atrophic or elastotic), and the presence or absence of skin tumors on any other skin site. Measurement of the epidermal and dermal areas were evaluated by means of a computer-assisted image analysis (KS 300, Carl Zeiss Inc). Stereological study ofthe dermis was made through a cyc1oidreticulum (for elastic fibers) and a segmented reticulum (for colIagen fibers), settled on a lOx Zeiss ocular lens. The basement membrane zone was studied through PAS and immunohistochemical stain (collagen IV) . The folIowing aspects were evaluated: epidermal thickness and area, dermal area, elastic tissue amount, collagen fiber amount, melanin-rich keratinocyte number, granular layer cell number, and basement membrane thickness and continuity. The variables analized were: clinical pattem (trend to elastosis or to atrophy), age, seXophototype, and presence or absence of skin tumors. Results: On the subset of caucasoid individuaIs examined, which were chronically and intensely sun-exposed, the statistic analisys revealed significant correlation between: a) clinical pattern and phototype: the smaller the phototype, the higher the intensity of skin atrophy; b) sex and melanin-enriched keratinocytes at the exposed area: thechronically sun-exposed skin presents irregular distribution of pigmentation, significantly enhanced among male individuaIs; c) presence of neoplasias and age: the ftequence of cutaneous neoplasias is progressive with ageing; the deleterial effect of the sun is cumulative among caucasoids of any phototype and any clinical pattem of photodamage; d) age and skin thickness: in conformity with what is already well documented, the chronically sun-exposed epidermis is thicker than the partially-exposed or the unexposed one; however, there was a negative correlation between age and its thickness at the chronically sun-exposed region. In other words, even at the photodamaged area, progressive epidermal atrophy occurs with age; e) epidermal area and dermal area: the total epidermal-dermal area of the arm's skin was smaller than the area ofthe forearm, and this one smaller than the thigh's, and the epidermal measures were inversely proportional to the dermis. In other way, in areas where the dermis is thicker, the epidermis is slimmer; 1) clinical pattern and collagen content at the unexposed area: at the covered skin, the number of collagen fibers ofthe reticular dermis is significant1ysmaller at the individuaIs with atrophic pattern, relatively to the elastotic ones; g) age and dermal area at the inner portion of the arm: the older the age, the smaller the dermal area; in other words, at this anatomic site, progressive dermal atrophy occurs with ageing. There was no correlation between: a) clinical pattern (atrophic or elastotic) and : 1- age; 2- sex; 3- any other counting or dermal and epidermal measures: once the differences between the patterns (atrophic or elastotic), so clinically apparent, did not have thickness or dermal or epidemial areas' embasement , neither at the coUagen, nor at the elastic content, one can suppose that there is a dilference at the spatial configuration of the elastotic skin, which would have, eventually, a wavier aspect than the atrophic skin; b) the phototype (1,11,111)and: 1- age; 2- sex; 3- any other countings or dermal or epidermal measures; c) the presence of neoplasias and phototype or clinical pattern: there was no significant difference between the presence or absence of tumor and: 1- phototype (I,II,III); 2- clinical pattem (atrophic or elastotic); d) basement membrane zone measures and photoexposion: there was no significant dilference between the basement membrane zone' s thickness at the exposed, partially-exposed and unexposed skin areas. AlI ofthe other findings are in conformity with the descriptions in the literature. Conclusion: On the studied subset (chronic and intensely sun-exposed skin), it was observed that: a) caucasoid individuaIs present increasing propension to develop cutaneous tumors as time exposion lengthens and there is no significant risk among the dilferent phototypes (I,II,fi) and clinical patterns (atrophic or elastotic); b) the photodamaged skin shows thickness modifications and textureof its various elements, which do not differ, significantly, among the different phototypes and c1inicalpatterns Doutorado Anatomia Patologica Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: A cinomose canina (CC) é uma doença viral sistêmica de carnívoros, cujo diagnóstico é embasado em sinais neurológicos e extra-neurais. A desmielinização que ocorre nesta doença assemelha-se à das doenças desmielinizantes humanas, o que a torna um modelo animal para estudo de doenças neurodegenerativas humanas. Lesões iniciais do SNC caracterizam-se por desmielinização sem considerável inflamação e lesões tardias por um processo inflamatório crônico. Vários métodos são empregados para o diagnóstico da CC, destacando-se a RT-PCR como precisa e sensível. Estudar, prospectivamente, os achados clínicos e histopatológicos do cérebro de 49 cães com cinomose diagnosticada clinicamente, e confrontá-los com os resultados da RT-PCR foi o nosso objetivo. A presença de sinais neurológicos foi significante para o diagnóstico da doença, especialmente a mioclonia e ataxia. O comprometimento inflamatório era significante no cerebelo, hipocampo e diencéfalo sendo que a reação inflamatória era maior no diencéfalo. Quanto maior o peso cerebral, menor era a desmielinização. Nos animais na fase clínica aguda, a freqüência de desmielinização cerebelar foi maior. Foi significante a localização linização, mas, também, havia forte comprometimento cortical, embasando os comemorativos clínicos. A pesquisa do vírus da CC pela RT-PCR foi negativa em 34% dos animais doentes; 88% deles encontravam-se na fase crônica, onde o vírus esta praticamente ausente. Em todos os cães sadios, a RT-PCR resultou positiva, provavelmente por vacinação ou doença prévia. Nossos achados ressaltam a importância da avaliação clínica para o diagnóstico da CC e dos achados anatomopatológicos respaldando a clínica Abstract: Introduction: canine distemper (CD) is a carnivores viral systemic disease whose clinical diagnosis is based on neurological and extra neural signs. The CD demyelination resembles those of human demyelinating diseases; therefore it becomes an animal model for human neurodegenerative diseases study. Central nervous system (CNS) initial lesions are characterized by demyelination with no considerable inflammation and late lesions by a chronic inflammatory process. Several methods are used for the diagnosis of CD; and RT-PCR stands out for being precise and sensitive. Purpose: to study, prospectively, clinical and histopathologic signs of 49 dogs' brains with distemper clinically diagnosed, and compare them to RT-PCR results. Results and Conclusions: the presence of neurological signs was significant for the diagnosis of the disease, especially myoclonus and ataxia. The inflammatory reaction was significant in the cerebellum, the hippocampus and the diencephalons; the inflammatory reaction was larger in the diencephalon. The higher the cerebral weight the lowest the demyelination. In animals on the acute clinical form, the demyelination frequency in the cerebellum was higher. Cerebellum and diencephalons localization in the demyelination was significant, but there was also strong cortical compromising, embasing clinical observations. RT-PCR for CD virus tested negative in 34% of the sick animals; 88% of them were in the chronic phase, in which the virus is practically non-existent. In all healthy dogs, RT-PCR resulted positive, probably due to vaccination or previous disease. Our findings stress the importance of clinical evaluation for CD diagnosis and histopathological examination supporting clinical findings Mestrado Ciências Biomédicas Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O líquen plano oral (LPO) e o acometimento oral da doença do enxerto contra o hospedeiro crônica (DECHc) apresentam características clínicas e histológicas semelhantes, apesar da etiologia distinta. A apoptose, induzida por linfócitos T citotóxicos, tem sido proposta como o tipo de morte dos ceratinocitos, em ambas as doenças. A citotoxidade celular é mediada, dentre outros mecanismos, por grânulos contendo granzima B e perforina. Poucos trabalhos foram desenvolvidos demonstrando o papel destas moléculas no líquen plano; dentre estes, alguns estudaram a interação das células que expressam estas moléculas com os demais componentes do infiltrado. Contudo, há raros estudos sobre este tema na DECHc. Considerando que as características em comum podem refletir similaridades nos mecanismos imunológicos, o objetivo do nosso estudo foi correlacionar os achados morfológicos e imuno-histoquímicos do LPO e da DECHc oral, na tentativa de compreender melhor a patogênese destas doenças. Foram analisadas 29 amostras de LPO e 27 de DECHc oral, coletadas no período de 1994 a 2007, de pacientes atendidos no Hospital das Clínicas e na Unidade de Transplante de Medula Óssea da UNICAMP. Novos cortes foram corados por H&E e pela técnica imuno-histoquímica para CD4, CD8, MAC 387, ICAM-1, granzima B e perforina. O número de células CD4-positivas foi estatisticamente maior no LPO do que na DECHc (p

Orientador: Maria Letícia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Erupções muco cutâneas causadas pelo vírus herpes simples (HSV) são comuns em todo o mundo. Podem se apresentar como pápulas eritematosas dolorosas típicas, vesículas, úlceras rasas ou até lesões atípicas. A manifestação tumoral do HSV tem sido relatada em pacientes imunocomprometidos, principalmente naqueles infectados pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV). Ela pode ser mal interpretada clinicamente como neoplasia ou afecção secundária a outros agentes infecciosos, induzindo a erros de diagnóstico e, assim, estratégia terapêutica equívoca. O objetivo foi revisar, na literatura, os trabalhos sobre lesões tumorais muco cutâneas do HSV (MCT HSV) e caracterizar o perfil clínico-epidemiológico de pacientes com MCT HSV em todo o mundo. Dois pesquisadores extraíram e revisaram, independentemente, os dados, por meio da ferramenta de busca na literatura PubMed / MEDLINE até outubro de 2018, enumerando os mais importantes aspectos clínicos, histopatológicos e terapêuticos e discutindo os possíveis mecanismos fisiopatológicos. Conclui-se que os médicos devem estar cientes das lesões tumorais MCT HSV, em pacientes imunossuprimidos, para evitar tratamentos desnecessariamente agressivos Abstract: Eruptions caused by herpes simplex virus (HSV) represents common mucocutaneous lesions worldwide. It can present with typical painful erythematous papules, vesicles, shallow ulcers, or atypical lesions. The tumoral manifestation of herpes simplex has been reported in immunocompromised patients, mainly on those infected by human immunodeficiency virus (HIV) and, could be misinterpreted clinically as neoplasms or secondary to others infectious agents, leading to misdiagnosis and equivocal therapeutic strategy. The goal was to review the reported cases of mucocutaneous tumoral HSV lesions in the literature and to characterize the clinical-epidemiological profile of patients with mucocutaneous tumoral HSV (MCT HSV) lesions across the world. Two researchers extracted and independently reviewed data from the literature search engine PubMed/MEDLINE through October, 2018. pointing out to its important clinical, histopathological and therapeutic aspects, and discussing the possible pathogenic mechanisms. Physicians should be aware of MCT HSV lesions in immunosuppressed patients to avoid unnecessarily aggressive treatments Mestrado Anatomia Patologica Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Atualmente, sabe-se que a progressão do câncer é influenciada pela interação entre as células neoplásicas e a matriz extracelular. A matriz extracelular associada a tumores sólidos geralmente contém altos níveis de colágeno fibrilar e a remodelação do colágeno no estroma tumoral pode promover a progressão neoplásica. Isto pois o colágeno ou mesmo produtos de degradação do colágeno ligam-se a receptores nas células neoplásicas e acionam múltiplas vias intracelulares envolvidas na estimulação do crescimento celular/motilidade e inibição da apoptose. Além disso, a rigidez da matriz extracelular é, em grande parte, mediada pela organização do colágeno. O aumento do crosslinking (ligações entre moléculas lineares produzindo polímeros tridimensionais) das fibras colágenas eleva a rigidez da matriz extracelular. Esta propriedade mecânica pode induzir a transição epitelial-mesenquimal, a qual estimula a migração celular. Desta forma, propriedades bioquímicas e biofísicas oriundas de fibras colágenas aumentadas em número e alteradas morfologicamente podem favorecer a progressão de células neoplásicas em tumores sólidos, mas não há, até a presente data, estudos avaliando as fibras colágenas no estroma associado ao carcinoma de células de Merkel. Pelo acima exposto, o objetivo deste trabalho foi avaliar as fibras colágenas associadas ao carcinoma de células de Merkel através de microscopia por geração de segundo harmônico. Esta técnica microscópica é única pois pode destacar fibra colágenas em tecidos biológicos. Este estudo retrospectivo incluiu 11 pacientes com tumores primários. Lâminas histológicas coradas por hematoxilina e eosina foram submetidas a microscopia por geração de segundo harmônico e análise textural. As variáveis texturais (fração de área, nível de cinza médio, entropia e contraste) mostraram valores substancialmente menores (p < 0,0001) no estroma intratumoral em comparação com a pele normal sugerindo que a estrutura e a distribuição das fibras colágenas estavam extensamente alteradas. Estas diferenças não foram significativas entre tumores com fatores de pior e melhor prognóstico. Este estudo demonstrou pela primeira vez que a microscopia por geração de segundo harmônico e a análise textural podem detectar alterações nas fibras colágenas presentes no estroma associado ao carcinoma de células de Merkel em comparação com a pele normal, as quais podem contribuir para o comportamento agressivo deste tumor. Por outro lado, estas alterações do colágeno não parecem ser relevantes para o potencial prognóstico Abstract: Currently, it is known that cancer progression is influenced by the interactions between cancer cells and the extracellular matrix. The extracellular matrix associated with solid tumors typically contains high levels of fibrillar collagen and collagen remodeling in the tumor stroma can promote cancer progression. This is because collagen or even collagen degradation products bind to neoplastic cell receptors and trigger multiple intracellular pathways involved in stimulation of cell growth/motility and inhibition of apoptosis. Furthermore, extracellular matrix stiffness is largely mediated by collagen organization. Increased crosslinking (connections between linear molecules producing three-dimensional polymers) of collagen fibers lead to stiffer matrix. This mechanical property can induce epithelial-mesenchymal transition stimulating migratory cell behavior. Therefore, biochemical and biophysical cues from increased and altered tumor-associated collagen fibers can favor the progression of neoplastic cells in solid tumors, however, to the best of our knowledge, there have been no studies to date evaluating collagen fibers in the stroma accompanying Merkel cell carcinoma. In light of this, the aim of this study was to evaluate collagen fibers in the stroma accompanying Merkel cell carcinoma using second harmonic generation microscopy. This microscopic technique is unique because it can highlight fibrillar collagen in biological tissues. This retrospective study included eleven patients with primary tumors. Hematoxylin and eosin stained sections were evaluated by second harmonic generation microscopy and texture analysis. Intratumoral texture features (area fraction, mean gray value, entropy and contrast) showed much lower values than normal skin (p < 0.0001) suggesting that the structure and distribution of intratumoral collagen fibers were extensively altered. These differences were not significant between tumors with unfavorable and favorable prognostic factors. This study has demonstrated for the first time that second harmonic generation microscopy and texture analysis can detect changes in collagen fibers present in the stroma accompanying Merkel cell carcinoma in comparison to normal skin, which may contribute to the aggressive behavior of this type of tumor. On the other hand, these collagen changes do not appear to be relevant to prognostic potential Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências CNPQ 573913/2008-0 FAPESP 08/57906-3 CAPES

Orientador: Maria Letícia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: O carcinoma basocelular (CBC) é a neoplasia maligna mais comum em humanos. Exposição à radiação ultravioleta (RUV) representa o principal fator de risco ambiental associado à sua gênese. No caso do CBC nas extremidades inferiores, a frequência é maior nas mulheres, provavelmente devido à maior exposição ao sol pelo estilo de roupas específico do gênero. Adicionalmente ao papel da RUV, a insuficiência venosa crônica (IVC), também mais comum em mulheres, poderia ser um fator predisponente para o desenvolvimento deste câncer na pele da perna. Objetivo: Estudar as características clínicas e histopatológicas do carcinoma basocelular da perna. Métodos: Realizou-se estudo retrospectivo de casos de CBC da perna, em um centro de referência terciário brasileiro, no período de 1993 a 2017. As informações clínicas foram coletadas dos prontuários. Em particular, foram consideradas algumas condições pré-existentes, possivelmente implicadas em seu desenvolvimento, como a estase venosa. As amostras histológicas foram recuperadas do arquivo do Departamento de Anatomia Patológica. Todas as informações coletadas foram registradas em ficha protocolar. À análise estatística, o nível de significância adotado foi de 5%. Resultados: 13238 pacientes foram diagnosticados com CBC no período estudado. Destes, 338 (2,5%) eram tumores localizados nos membros inferiores e 166 (1,2%) nas pernas. Dos pacientes com CBC localizado na perna, a idade variou de 40 a 95 anos (média = 71); 119/166 (71%) eram do sexo feminino; 98% foram classificados como brancos e 2% como pardos. O surgimento do CBC na perna das mulheres foi mais tardio (P < 0,0001), com média de idade de 74 anos, comparado ao dos homens (idade média de 64). Em 78/166 pacientes foi dado o diagnóstico clínico de IVC. Neles, o tamanho clínico do tumor foi maior (média de 26 mm), comparado ao de pacientes sem IVC (média de 18 mm) (P = 0,01) e, em 16/166 (9%), houve recidiva local da neoplasia. O tempo médio de recidiva foi de 47 meses (variação de 24-96). Os CBCs em pacientes com insuficiência venosa periférica apresentaram maior frequência de recidiva (P

Orientadores: Patricia Moriel; Maria Letícia Cintra Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Nos últimos anos a utilização da polimixina B no tratamento de infecções causadas por bactérias Gram-negativas apresentou considerável crescimento apesar de sua elevada e já conhecida toxicidade. Nefrotoxicidade e neurotoxicidade são reações adversas frequentemente associadas a este fármaco atualmente utilizado como um dos últimos recursos para o manejo de cepas multirresistentes que já não respondem aos demais tratamentos antimicrobianos disponíveis na prática clínica. Com a maior frequência no uso da polimixina B, uma nova reação adversa denominada como hiperpigmentação cutânea (HC) passou a ser observada dentre os pacientes em tratamento intravenoso com o antimicrobiano, e desta forma, associada a ele. Apesar do número crescente de relatos de pacientes acometidos pela reação pigmentar, pouco ainda é conhecido sobre a sua etiopatogenia, seus fatores associados e a existência de possível tratamento. Neste sentido, o presente trabalho objetivou avaliar duas reações adversas associadas ao uso intravenoso da polimixina B (HC e nefrotoxicidade), no sentido de conhecer sua incidência e o mecanismo de ação pelo qual se manifestam, além de verificar se há correlação entre os dois desfechos clínicos. Trata-se de um estudo prospectivo realizado no Hospital de Clínicas da Universidade Estadual de Campinas com o acompanhamento contínuo de pacientes em tratamento intravenoso com polimixina B. O impacto da utilização do fármaco na função renal foi avaliado por meio da taxa de filtração glomerular calculada em função da concentração sérica de creatinina. Já a hiperpigmentação cutânea foi avaliada por meio de escala colorimétrica, registros fotográficos, análises dermatoscópicas, histológicas e imunoistoquímicas. Os achados de tais análises suportam a HC como sendo um processo inflamatório com subsequente ativação dos melanócitos decorrente do uso intravenoso da polimixina B. A reação pigmentar foi observada em 8,0% dos pacientes estudados e se manifesta logo nos primeiros dias de tratamento com maior incidência em pacientes melanodérmicos (p=0,0002). Outros fatores como incidência de luz, interações medicamentosas, sítio de infecção, microrganismo tratado, doenças de base, sexo e idade não exercem influência sobre o desenvolvimento da reação. A nefrotoxicidade foi registrada em 40,5% da população e não parece estar associada com a HC. Outros desfechos clínicos do tratamento com a polimixina B também foram registrados. Importantes avanços foram obtidos com o presente estudo no sentido de quantificar, avaliar e divulgar os aspectos que tangem o desenvolvimento da HC. Desta forma, suportado por análises histopatológicas, o provável mecanismo pelo qual a HC se manifesta foi então proposto e poderá auxiliar não só no tratamento da reação pigmentar, mas também na sua prevenção Abstract: In recent years, the use of polymyxin B for the treatment of infections caused by Gram-negative bacteria has shown considerable growth despite its high and already known toxicity. Nephrotoxicity and neurotoxicity are frequent adverse reactions associated with this drug currently used as one of the last resources for the management of multidrug-resistant strains that no longer respond to other antimicrobial treatments available in clinical practice. Thus, with the increased frequency of use of polymyxin B, a new adverse reaction called skin hyperpigmentation (SH) has been observed among patients with antimicrobial intravenous treatment, and thus associated with it. Despite the increasing number of reports of patients affected by the pigmentary reaction, little is known about its aetiology, its associated factors, its aetiology, and the possibility of treatment. In this sense, the present study aimed to evaluate the adverse reactions associated with the intravenous use of polymyxin B (SH and nephrotoxicity) in order to gain knowledge regarding its incidence, aetiopathogeny and mechanism by which the SH manifested itself, in addition to verifying if there is a correlation between the two outcomes. This prospective study was carried out at the Hospital de Clínicas of the State University of Campinas with continuous follow-up of patients undergoing intravenous treatment with polymyxin B. The impact of drug use on renal function was assessed by calculating glomerular filtration rate through the measurement of daily serum creatinine concentrations. SH was evaluated by colourimetric scale, photographic records, dermatoscopic, histological and immunohistochemical analyzes. Findings obtained from such analyzes support SH as an inflammatory process with subsequent activation of melanocytes due to the intravenous use of polymyxin B. SH was observed in 8.0% of the study population with an onset on the first days of treatment with greater incidence in melanodermic patients (p=0,0002).. Other factors such as light incidence, drug-drug interactions, site of infection, microorganism involved, underlying diseases, sex and age did not influence the SH development. Nephrotoxicity was found in 40.5% of the population and does not appear to be associated with SH. Other clinical outcomes of treatment with polymyxin B have also been reported. Significant advances have been obtained with the present study in the sense of quantifying, evaluating and disseminating the aspects linked to SH development. Thus, supported by histopathological analysis, the probable mechanism by which the SH manifests itself was then proposed and could help not only the on the treatment of the pigmentation reaction but also on its prevention Doutorado Pesquisa Clínica Doutora em Ciências Médicas CAPES 01-P-3368/2017

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Lentigo Maligno ou melanoma in situ das áreas fotoexpostas é uma lesão cutânea que acomete indivíduos de pele de cor clara, preferencialmente na região da cabeça e pescoço. Quando invade a derme é chamado de lentigo maligno-melanoma. A sua delimitação histológica é controversa devido à subjetividade na interpretação dos achados microscópicos. A análise da vasculatura peritumoral pode ajudar a diferenciar áreas tumorais de áreas livres de tumor, já que a angiogênese induzida por neoplasia está bem estabelecida neste contexto, assim como o índice de proliferação dos melanócitos, uma vez que é conhecido que o mesmo geralmente é maior nos melanomas em comparação com o da pele sem tumor. O objetivo deste estudo foi comparar a vasculatura peritumoral e o índice de proliferação de melanócitos do lentigo maligno e lentigo maligno-melanoma com a pele adjacente não neoplásica e pele danificada pelo sol (controle). Quarenta e três casos de ressecção de lentigo maligno e lentigo maligno-melanoma (33 e 10, respectivamente) foram selecionados retrospectivamente. Foi realizada imuno-histoquímica com o anti-CD31 e anti-CD105 para avaliar a vascularização. A dupla marcação do índice de proliferação de melanócitos foi realizada utilizando-se o anti-Melan-A em conjunto com o anti-Ki-67. A grade óptica de Chalkley foi usada para a quantificação dos vasos. Células duplamente marcadas com anti-Melan-A e anti-Ki-67 foram contadas nos 1) tumores, 2) junto à margem livre e 3) peles controle. As variáveis categóricas foram comparadas usando os testes qui-quadrado, exato de Fisher ou McNemar. Variáveis numéricas foram comparadas pelos testes de Mann-Whitney, Kruskal Wallis e Spearman. A quantificação da microvasculatura sob os melanomas, por meio do CD31 e CD105, foi maior que nas margens dos mesmos espécimes e maior que na pele controle, com maior densidade para CD31 que para CD105. A média de melanócitos em proliferação, duplamente marcados, foi maior nos melanomas que na pele adjacente livre de tumor e nas peles-controle. As amostras de pele-controle mostraram, pelo CD31, o maior número de vasos na região da cabeça e pescoço, com uma correlação positiva entre o índice de proliferação melanocítica e a vasculatura. A presença de neovascularização (CD105) e melanócitos em proliferação (Ki67 + / MelanA +) são achados suspeitos para o lentigo maligno / lentigo maligno-melanoma, ajudando a delinear, diagnosticar e avaliar as margens do tumor. O diagnóstico diferencial entre hiperplasia melanocítica e melanoma e a avaliação das margens deste último deve levar em consideração todos os achados suspeitos. Sempre que possível, a pele danificada pelo sol e livre de lesões, do mesmo indivíduo, deve ser comparada para identificar o padrão de hiperplasia melanocítica, com o intuito de minimizar a sobreposição dos achados suspeitos de lentigo maligno com os da hiperplasia melanocítica da pele fotodanificada Abstract: Lentigo Maligna or melanoma in situ of photoexposed areas is a cutaneous lesion affecting light-colored skin individuals, preferably in the head and neck region. When it invades dermis it is called lentigo maligna melanoma. Their histological delimitation is controversial due to subjectivity. Analysis of peritumoral vasculature may help to differentiate tumor areas from tumor-free areas, as neoplasia-induced angiogenesis in such scenario is well established, as well as the proliferation index of melanocytes, since it is known that this index are generally higher in melanomas than in non-melanoma skin. The aim of this study was to compare the peritumoral vasculature and melanocyte proliferation index of the lentigo maligna and lentigo maligna melanoma with that of the adjacent non-neoplastic skin and sun-damaged skin (control). Forty-three resection cases of lentigo maligna and lentigo maligna melanoma (33 and 10, respectively) were selected retrospectively. Immunohistochemistry was performed for anti-CD31 and anti-CD105 to assess vascularization. Melanocytes proliferation index double labeling was performed using the anti-Melan-A and anti-Ki-67. The Chalkley optical grid was used to quantify blood vessel hotspots. Doubly labeled cells with anti-Melan-A and anti-Ki-67 were counted based on 1) tumor, 2) free margin and 3) control skin. Categorical variables were compared using Chi-square, Fisher¿s exact or McNemar¿s tests. Numerical variables were compared using Mann-Whitney, Kruskal Wallis and Spearman¿s tests. Microvasculature quantification under the melanomas, for both CD31 and CD105, was greater than at the margins of the same specimens and greater than control skin, with higher density for CD31 than CD105. The mean number of double-labeled proliferating melanocytes within the melanomas was greater than at the adjacent free skin and control skin. The control skin samples showed the highest CD31-positive vasculature in the head and neck region, with a positive correlation between melanocytic proliferation index and vasculature. The presence of neovascularization (CD105) and proliferating melanocytes (Ki67+/MelanA+) are suspicious findings for lentigo maligna / lentigo maligna melanoma, helping to outline, diagnose and evaluate tumor margins. The differential diagnosis with melanocytic hyperplasia and evaluation of margins should take into account all suspicious findings. Whenever possible, lesion-free sun-damaged skin from the same individual should be compared to identify melanocytic hyperplasia patterns, to minimize overlapping of suspicious lentigo maligna findings with those of melanocytic hyperplasia on sun-damaged skin. Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências

Orientadores: Maria Letícia Cintra, Gislaine Vieira Damiani Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Mais de 200.000 casos novos de hanseníase são detectados anualmente em todo o mundo. O Brasil é o segundo país com maior incidência, perdendo apenas para a Índia. Mesmo em locais endêmicos como o Brasil, o diagnóstico da hanseníase pode ser deveras desafiador, haja vista algumas regiões apresentarem um atraso médio de dois anos para que ele seja definido. Com o aumento progressivo dos fluxos migratórios, países não endêmicos também poderão enfretar esse desafio. Outrossim, os médicos comumente têm dificuldade em diferenciar a forma tuberculoide da hanseníase (HT) da manifestação cutânea da sarcoidose, doença esta multissistêmica e também de padrão inflamatório crônico granulomatoso. Classicamente, a histopatologia da HT é caracterizada por granulomas envoltos por rica orla linfocitária, enquanto a da sarcoidose por granulomas nus, ou seja, envoltos por raros linfócitos. Todavia, fato é que tais achados não estão sempre presentes na prática diária, o que torna essas duas doenças, muitas vezes, clínica- e histopatologicamente semelhantes. Neste trabalho, foram pesquisados critérios adicionais de auxílio à distinção destas doenças, seja por meio da microscopia óptica de luz, seja por ferramentas mais novas, como a geração de segundo harmônico - SHG (microscopia óptica não linear). Material e Métodos: Biopsias de pele de 33 pacientes com HT e 24 com sarcoidose foram revisadas, retrospectivamente, sob colorações de rotina - hematoxilina e eosina (H&E) e pela prata (técnica Gomori). Foram avaliados, de forma cega, 24 achados histomorfológicos (dentre eles, o tipo de granuloma, tipo de distribuição granulomatosa; presença de estruturas como Corpos de Schaumann, corpos asteroides, corpos de Hamazaki Wesenberg, células gigantes de Langhans, plasmócitos; presença de fibrose, necrose fibrinoide, necrose caseosa) à coloração pela H&E, por dois observadores distintos, com o intuito de verificar se algum desses achados mostraria valor diagnóstico preditivo significante para HT ou sarcoidose. Os espécimes corados pela prata foram fotografados e avaliados pela morfometria dos cicloides virtuais, com o objetivo de estimar o valor preditivo diagnóstico da densidade média das fibras reticulínicas nos granulomas. A partir das lâminas coradas pela H&E, as imagens do SHG foram obtidas e os dados da avaliação da densidade e textura do colágeno foram analisados. Resultados: Nove das 24 características histomorfológicas analisadas apresentaram valor preditivo significativo para o diagnóstico da HT (granuloma tuberculoide, distribuição peri-neural e peri-anexial, granulomas nos limites do glomérulo sudoríparo substituindo o nervo da região) ou sarcoidose (fibrose, distribuição dos granulomas de modo consecutivo, plasmócitos, elevado número de células gigantes de Langhans convencionais, elevado número de células gigantes bizarras, granulomas junto a resto de nervo). A média da densidade das fibras retinulínicas foi significativamente maior na sarcoidose do que na HT pelo teste de Mann-Whitney. No entanto, ao utilizarmos o método estatístico da regressão logística, essa variável não discriminou as duas doenças. Entre os quatro parâmetros avaliados nas imagens de SHG (densidade óptica, entropia, contraste e segundo momento angular), apenas o contraste demonstrou significância estatística, sendo maior na sarcoidose. Conclusões: as características hitomorfológicas, histomorfométricas, ou a análise de imagem pelo SHG podem ser insuficientes para diferenciar a HT da sarcoidose, se avaliadas isoladamente. Mas, quando combinadas, podem se tornar ferramentas muito úteis nesse intento. Os resultados desse trabalho reforçam a importância da morfometria para uma análise histológica mais objetiva das doenças, e abrem as portas para o estudo do colágeno cutâneo nas afecções granulomatosas Abstract: Background: More than 200,000 new cases of leprosy are detected, annually, around the world. Brazil is the second country in highest incidence, behind only India. Even in endemic places like Brazil, the diagnosis of leprosy can be very challenging, since in some regions there is an average delay of two years for it. With the progressive increase in migratory flows, non-endemic countries may also meet this challenge. Besides, not uncommonly, physicians have difficulty distinguishing tuberculoid form of leprosy (TL) from sarcoidosis' cutaneous manifestation. The latter is multisystemic and also manifests as a chronic granulomatous inflammation. Classically, the histopathology of TL is characterized by granulomas surrounded by evident lymphocytic rim, whereas that of sarcoidosis by naked granulomas, i.e., surrounded by rare lymphocytes. However, such findings are not always present in daily practice, which makes these two diseases often clinically and histopathologically similar. The present work aimed, therefore, investigate criteria that aid in their distinction, either through standard optical microscopy or through newer tools such as second harmonic generation - SHG (non-linear optical microscopy). Material and Methods: Skin biopsies from 33 patients with TL and 24 with sarcoidosis were reviewed in hematoxylin and eosin (H&E) and silver (Gomori technique) staining. Two distinct observers blindly evaluated twenty-four histomorphological findings on H&E staining, in order to verify if any of them had significant predictive diagnosis value to TL or sarcoidosis. The specimens stained by silver were photographed and evaluated through the morphometry of the virtual cycloids in order to estimate the predictive diagnosis value of the mean density of the reticulin fibers. From the H&E stained specimens, the SHG images were obtained and collagen features of density and texture were analyzed. Results: Nine of the 24 histomorphological characteristics analyzed presented significant predictive value for the diagnosis of HT or sarcoidosis. The mean density of reticulin fibers was significantly higher in sarcoidosis than in HT. However, using logistic regression, this variable did not discriminate the two diseases. Among the four characteristics evaluated in SHG images (optical density, entropy, contrast and second angular momentum), only contrast was useful, revealing significant predictive diagnosis value, being higher in sarcoidosis. Conclusions: Histomorphologic, histomorphometric, or SHG imaging may be insufficient to differentiate HT from sarcoidosis, if evaluated alone. However, when combined, they can become very useful tools in this endeavor. Our results reinforce the importance of morphometry for a more objective histological analysis of the diseases, and open the doors for the study of cutaneous collagen in the granulomatous disorders Doutorado Anatomia Patologica Doutora em Ciências FAPESP 2016/22927-7 CAPES 01-P-3368/2017

Orientadores: Maria Letícia Cintra, Aparecida Machado de Moraes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O eflúvio telógeno crônico (ETC), frequentemente confundido com a alopecia androgenética feminina inicial (AAGfi), é pouco estudado e é diagnóstico de exclusão. Ambos acometem a mesma faixa etária e, na AAGfi, a queda de cabelos pode ser difusa e episódica, como no ETC. A distinção requer associação dos achados clínicos e histológicos, sendo importante porque o prognóstico e o tratamento destas condições são diferentes. Um método não invasivo pode ser usado para diferenciá-los. Nele, são contados e medidos os fios que se desprendem à lavagem dos cabelos após 5 dias sem lavá-los. Na AAG há aumento do número de fios curtos (pseudo-velos), contando-se mais de 10% de fios ? 3 cm. Quando o número de fios desprendidos é ? 100 e mais de 90% é >3 cm, o diagnóstico é de ETC. A patogenia do ETC proposta é a de teloptose prematura e sincronização do ciclo folicular. A redução local do fluxo sanguíneo, causando transformação precoce do folículo anágeno em telógeno, poderia determinar a queda excessiva dos fios. O objetivo deste trabalho foi analisar os aspectos clínicos, laboratoriais, histológicos e imuno-histoquímicos do ETC, com vistas à caracterização da entidade e investigação da patogênese. Participaram do estudo 46 pacientes do sexo feminino, com diagnóstico clínico de ETC (N=20) e AAGfi (N=17), sendo, o grupo-controle, composto por 9 pacientes sem doenças do couro cabeludo. Todas responderam a um questionário-padrão e foram avaliadas clinicamente. Os exames laboratoriais foram solicitados e coletou-se biopsia do couro cabeludo. Adicionalmente, nos grupos com ETC e AAGfi foram contados os cabelos pelo método de lavagem. Nos espécimes histológicos foram feitas análises morfométricas dos folículos pilosos e imuno-histoquímicas, com o uso dos anticorpos anti- CD31, VEGF e MIB-1/Ki67. O resultado laboratorial que apresentou diferença estatística foi o do ferro sérico: maior número de pacientes com ETC apresentaram valores < 70 ?g/dL comparando-se com o grupo AAGfi. A contagem média dos cabelos foi de 438 (156 a 1239) no grupo ETC e, em todas as amostras, a porcentagem de fios pseudo-velos foi 10%. À histomorfometria observou-se miniaturização dos folículos no grupo AAGfi, mas não no ETC ou no controle. A análise imuno-histoquímica demonstrou correlação positiva entre o índice proliferativo e os achados histológicos indicativos de miniaturização folicular, no grupo AAGfi. Neste, os valores da densidade das áreas VEGF-positivas, eram significantemente maiores, seguindo-se os do ETC e, por último, os do controle. Nossos resultados ratificam o caráter singular do ETC, distinto da AAG desde o início. O método de lavagem mostrou-se útil para distinguir as entidades, podendo evitar a biopsia. Os níveis séricos de ferro apresentam-se como ferramenta diagnóstica adicional do ETC. Para o ETC, os achados dão suporte ao mecanismo proposto de liberação precoce do cabelo telógeno e sincronização do ciclo. Na AAG, os resultados se alinham ao mecanismo patogênico vigente de aceleração do ciclo, com elevados valores de Ki-67 e VEGF, menor tempo para a maturação folicular e consequente miniaturização folicular progressiva Abstract: Chronic telogen effluvium (CTE) is a diagnosis of exclusion; it is often confused with initial female androgenetic alopecia (ifAGA), and is little studied. Both involve the same age range and, in ifAGA, hair loss may be diffuse and episodic, as in the CTE. The distinction is important because prognosis and treatment of these conditions are different; it requires association between clinical and histological findings. A non-invasive method can be used to differentiate them. After five days without head washing, hair shafts that shed during shampooing, are counted and measured. In AGA there is an increase in the number of short ( 3 cm, the diagnosis is CTE. The putative pathogenesis of CTE is premature teloptose and synchronization of follicular cycle. The local reduction of blood flow, causing premature shift of anagen follicles in telogen, could determine excessive hair loss. The objective of this study was to analyze the clinical, laboratory, histological and immunohistochemical features of CTE, in order to characterize the entity and investigate its pathogenesis. The study included 46 female patients with a clinical diagnosis of CTE (N = 20) and ifAGA (N = 17), and the control group, consisting of 9 patients without scalp diseases. All answered a standardized questionnaire and were clinically evaluated. Laboratory tests were requested and a scalp biopsy was obtained. In addition, the hair samples of CTE and ifAGA patients were counted and measured, and the results analyzed by washing method. Histological specimens were studied through morphometry of hair follicles on HE- and CD31-, VEGF- and MIB-1 / Ki67- stained sections. The laboratory result showing significant differences was the serum iron: more patients with CTE presented values 10%. On histomorphometry, significant follicle miniaturization was observed within ifAGA group but not in CTE or control. In the immunohistochemical analysis a positive correlation was found between the proliferative index and the histological findings of follicular miniaturization in ifAGA group. The values of the density of VEGF-positive areas were significantly higher in ifAGA, followed by CTE-and, finally, the control group. Our results confirm CTE as a unique entity, distinct from AGA from the start. The washing method proved useful to distinguish the entities and may avoid biopsy. Serum iron levels present as an additional diagnostic tool for CTE. The findings support the proposed mechanism of early release of telogen hair and cycle synchronization for CTE. In ifAGA, the results align to the current pathogenic mechanism of follicles cycle acceleration with high values of Ki-67 and VEGF, progressive time shortening for maturation and consequent gradual miniaturization Doutorado Anatomia Patologica Doutora em Ciências Médicas FAPESP 2010/19678-9

Orientadores: Maria Letícia Cintra, Maria Heloísa de Souza Lima Blotta Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O lúpus eritematoso cutâneo (LEC) é classificado em agudo, subagudo, crônico e túmido. A sequência de eventos que deflagram a autoimunidade é pouco entendida. Neste trabalho foram estudados os aspectos histológicos, de imunofluorescência direta (IFD) e imuno-histoquímicos no LEC discoide (subtipo mais comum da forma crônica), subagudo e túmido, relacionando-os com a presença ou não de lúpus eritematoso sistêmico (LES) concomitante, visando compreender melhor a imunopatogênese destes subtipos e suas diferenças clínico-histopatológicas. Amostras cutâneas com LEC (discoide=21; subagudo=17; túmido=21) foram analisadas às colorações convencionais e imuno-histoquímicas (CD4, CD8, CD25, CD56, granzima A, granzima B, granulisina, perforina, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 e TNF-?), com o auxílio do programa Image J®. Os achados clínicos e de IFD foram obtidos dos prontuários. A densidade de células CD8+ foi menor que a das CD4+ em todos os espécimes, e menor no grupo subagudo em relação aos outros dois grupos, bem como nas amostras de pacientes com LEC e LES associado (LEC+/LES+). A densidade de células CD8+ era maior que a das células CD56+ em todos os grupos estudados. Nos três subtipos, as células inflamatórias expressavam granzima A e B, perforina e granulisina e a densidade não era diferente entre eles. Apenas no grupo túmido houve associação positiva entre o número das células marcadas pelos diferentes grânulos e também entre este e a densidade de células CD8+, sugerindo que o fenômeno citotóxico mediado por grânulos, neste grupo, seja promovido por linfócitos CD8+. Como o LEC túmido não cursa com dermatite de interface/apoptose, provavelmente, neste subtipo, os grânulos atuem de outra forma, como sustentando a inflamação. O número de células CD25+ e FOXP3+ foi inferior a 10% nos três subtipos de LEC, sinalizando para um distúrbio imunorregulatório periférico. A maior diversidade na imunomarcação das citocinas ocorreu no subtipo subagudo. A imunoexpressão de IL-10 e IL-6 foi semelhante entre os subtipos. No LEC subagudo, a expressão dérmica da IL-1?, IL-18 e TNF-? foi maior; a da IL-17 foi maior na epiderme e menor no interstício dérmico. Outrossim, as amostras de LEC+/LES+ apresentaram maior expressão de IL-1? nos ceratinócitos, maior número de células inflamatórias ICAM-1+ e menor expressão de IL-17 no interstício, quando comparadas às de pacientes sem LES. À IFD, nos três subtipos, encontraram-se depósitos granulares, na zona da membrana basal, de IgG, predominantemente, seguindo-se de IgM, C¿3, IgA e C1q, inclusive nos espécimes de LEC túmido com resultado positivo. Nas amostras de LEC subagudo, o C¿3 foi o mais frequente. Estes resultados acrescentam informação sobre a patogênese do LEC túmido, entidade ainda pouco estudada. A semelhança na imunoexpressão dos biomarcadores, nas amostras de LEC subagudo e LEC+/LES+, aponta para uma modificação do microambiente inflamatório quando há acometimento sistêmico. Adicionalmente, o conjunto dos achados destaca a forma subaguda pela biomarcação distinta da discoide e da túmida, e enfatiza a semelhança destes dois subtipos, no que concerne à expressão dos imunomarcadores desta pesquisa. O estudo continuado sobre mecanismos imunopatogênicos nos subtipos de LEC poderá acrescentar elementos às diferenças que os caracteriza, otimizando o tratamento Abstract: Cutaneous Lupus erythematosus (CLE) is classified in acute, subacute and tumidus. The mechanisms for the aberrant immunology response is not still elucidated. In this research we studied the histopathological, direct immunofluorescence (DIF) and immunohistochemical aspects of discoid CLE (the most common subtype of the chronic form of CLE), subacute and tumidus CLE, correlating them with the concurrent diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE), in order to comprehend the immunopathogenesis of the disease subtypes and the clinical and histopathological differences between them. Skin specimens with CLE (discoid = 21, subacute =17, tumidus =21) were analyzed through conventional and immunohistochemistry staining (CD4, CD8, CD25, CD56, granzyme A, granzyme B, granulysin, perforin, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 and TNF-?), using Image J® program analysis. Clinical and DIF data were obtained from the medical charts. The density of CD8+ cells were lower than CD4+ cells in all skin specimens, and lower in subacute group when compared with the other two groups. The same occurred with patients with CLE and SLE (CLE+/SLE+). The density of CD8+ cells was higher than CD56+ cells in all the groups studied. The three subtypes of CLE expressed granzyme A, B, granulysin and perforin, and the density was not different between them. The tumid group showed positive association between the number of cells staining for each granule and also between these granules and the density of CD8+ cells, suggesting that the granule-mediated cytotoxicity, in this group, is promoted by CD8+ lymphocytes. Because CLE tumidus does not present with interface dermatitis/apoptosis, the granules, in this subtype, might have other function, like maintaining inflammation. The number of CD25+ and FOXP3+ cells was inferior to 10% in the three subtypes of CLE, signalizing to a defect in peripheral immunoregulatory mechanisms. The major diversity of cytokine expression occurred with subacute subtype. The immunoexpression of IL-10 and IL-6 was similar to the other subtypes. Subacute CLE showed more expression of L-1?, IL-18 and TNF-?. IL-17 was more expressed in the epidermis and less in the dermal interstitium. CLE+/SLE+ skin specimens showed higher expression of IL-1? in the keratinocytes, more density of ICAM-1+ cells and less expression of IL-17 in the dermal interstitium, when compared with patients without SLE. The DIF findings were, in the 3 subtypes, granular deposits at the basement membrane zone, mostly IgG, followed by IgM, C3, IgA and C1q, even in specimens of CLE tumidus with positive DIF. In subacute skin specimens, C¿3 were the most frequent. These results improve the knowledge around CLE tumidus pathogenesis, an entity still poorly studied. The similar pattern of biomarkers staining between subacute patients and CLE+/SLE+ patients might indicate systemic factors influencing the skin inflammatory microenvironment. Additionally, the findings of this study distinguishes the subacute form from discoid and tumidus subtypes, and emphasizes the similarities between these two entities, concerning to the biomarkers expression found in this study. The continued progress in understanding CLE subtypes immunopathogenesis will clarify the reason for different aspects of the disease and target the correct treatment Doutorado Anatomia Patologica Doutora em Ciências Médicas FAPESP 2011/50037-2 CNPQ 122906/2013-6

Orientadores: Elemir Macedo de Souza, Maria Letícia Cintra Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As etapas cruciais da carcinogênese cutânea incluem disfunção da proteína supressora tumoral p53 e angiogênese. A contribuição de tais eventos, individual e sinergicamente, ainda não está bem estabelecida na cascata de fenômenos que resultam no carcinoma espinocelular cutâneo. Objetivou-se avaliar a expressão imuno-histoquímica da p53, o índice proliferativo e a angiogênese nos estádios evolutivos do carcinoma espinocelular cutâneo, e investigar a relação da expressão da p53 com as demais variáveis. Foram estimadas as porcentagens de células imunomarcadas para p53 e Ki-67 em três grupos de cânceres: 30 queratoses solares, 30 carcinomas espinocelulares superficialmente invasores e 30 carcinomas espinocelulares invasores. O método Chalkley foi utilizado para quantificar a área microvascular, empregando-se marcador de neoangiogênese (CD105) e pan-endotelial (CD34) em cada grupo. A área microvascular em amostras marcadas pelo CD105 aumentou, significantemente, com a progressão do carcinoma espinocelular cutâneo. O mesmo não ocorreu com o uso do CD34. Contudo, nos três grupos (queratose solar, carcinoma espinocelular superficialmente invasor e invasor) encontrou-se aumento significante da área microvascular, com ambos os marcadores (CD34 e CD105), em comparação à respectiva pele adjacente. Não houve diferença significante na taxa de células positivas para p53 e Ki-67 entre os grupos. Encontrou-se correlação positiva e significante entre a área microvascular marcada pelo CD105 e o índice de marcação para a p53 no carcinoma espinocelular superficialmente invasor, bem como entre o índice de marcação para p53 e para o Ki-67 no carcinoma espinocelular invasor. A conversão angiogênica é um evento precoce no carcinoma espinocelular cutâneo, e a neovascularização é paralela à progressão do tumor. O uso do CD105 permite avaliar a atividade angiogênica no tumores escamosos. A angiogênese no estádio inicial da invasão e a atividade proliferativa na fase francamente invasora estão associadas com a expressão imuno-histoquímica da proteína p53. A perda da função supressora tumoral da p53, em etapas progressivas, atua diretamente na carcinogênese cutânea Abstract: Multistep skin carcinogenesis crucially involves loss of function of p53 tumor suppressor protein and angiogenesis. The contribution of such events, individually and synergically, is not well established in the cascade of phenomena that results in cutaneous squamous cell carcinoma. We aimed to evaluate the immunohistochemical expression of p53, the proliferative index and angiogenesis in spectral stages of cutaneous squamous cell carcinoma, and investigate the relationship between p53 expression with the other variables. We estimated the percentages of immunostained cells for p53 and Ki-67 (proliferation marker) in three groups of cancer: 30 solar keratoses, 30 superficially invasive squamous cell carcinomas and 30 invasive squamous cell carcinomas. The Chalkley method was used to quantify the microvascular area by neoangiogenesis (CD105) and panendothelial (CD34) immunomarker in each group. The microvascular area in CD105-stained specimens significantly increased with cutaneous squamous cell carcinoma progression. However, no differences between groups were found in CD34 sections. Solar keratosis, superficially invasive squamous cell carcinoma and invasive squamous cell carcinoma samples showed significant increases in microvascular area for both CD34- and CD105-stained specimens compared with the respective adjacent skin. There was no significant difference for the rate of p53- and Ki-67-positive cells between the groups. Significant positive correlation was found between the CD105 microvascular area and the rate of p53 positive cells in superficially invasive squamous cell carcinoma as well as between the rate of p53- and Ki-67-positive cells in invasive squamous cell carcinoma. The angiogenic switch is an early event in cutaneous squamous cell carcinoma, and the rate of neovascularization is parallel to tumor progression. In contrast to panendothelial markers, CD105 use allows evaluating angiogenic activity in squamous tumors. Neovascularization in the initial stage of invasion and proliferative activity in the frankly invasive stage were both associated with p53 immunoexpression. Loss of p53 tumor suppressor function through progressive steps is directly involved in skin carcinogenesis Doutorado Clínica Médica Doutora em Ciências FAPESP 07/52603-0

Orientador: Maria Letícia Cintra Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O líquen plano (LP) pode afetar a pele e/ou as mucosas. Histologicamente apresenta infiltrado linfo-histiocitário na junção epitélio-tecido conjuntivo e apoptose de células epiteliais basais. No LP oral (LPO), ocorre erosão frequente pela maior intensidade da necrose. O LP cutâneo (LPC) e o LPO apresentam características histopatológicas similares, mas o curso clínico é diverso. O LPC costuma ter seu curso limitado, enquanto o LPO é frequentemente recidivante. A erupção liquenoide a droga (ELD) desenvolve-se após semanas da ingestão do medicamento e a resolução do quadro é lenta após a interrupção, dificultando o diagnóstico diferencial com o LP idiopático. Os achados clínicos e histológicos podem ser indistinguíveis daqueles do LP, mas a patogênese da ELD não é conhecida. Diferenças locais no sistema imune da mucosa oral e pele poderiam explicar a diversidade no comportamento clínico do LP. Quanto à ELD, há poucas publicações sobre as alterações imunes que atuam no seu desenvolvimento. A citotoxidade celular é mediada, dentre outros mecanismos, por grânulos contendo granzima B e perforina, produzidos por linfócitos T citotóxicos e células natural killers. Com o objetivo de estudar a citotoxicidade celular na patogênese destas doenças, foram analisadas 29 amostras de LPO, 16 de LPC e 6 de ELD. Os cortes foram corados pela H&E e técnica de imuno-histoquímica, para a demonstração de linfócitos CD4 e CD8, macrófagos HAM 56+ e MAC 387+, granzima B, perforina e ICAM-1. As amostras de LPO apresentaram maior densidade de células granzima B+ e perforina+, em comparação às do LPC. Nos dois grupos de doenças, quanto maior era o número de células perforina+, maior era o de células granzima B+. Maior número de células CD4-positivas foi encontrado nas lesões ativas, quando comparado com o das regressivas, no LPO, mas não no LPC. À comparação entre o LPC e a ELD, quanto maior o número de células CD8-positivas, maior era o número de células que expressavam a perforina no grupo LPC. Quanto maiores eram os valores da granzima B, maiores os da perforina, no grupo LPC. Quanto maiores eram os valores da granzima B, maiores os de células apoptóticas agregadas, no grupo da ELD. Nas amostras do LPC, quanto maiores os valores das células T, maiores os dos macrófagos HAM56-positivos e vice-versa. Nas amostras da ELD, foi encontrada correlação negativa entre o número de células T e o de histiocitos jovens (MAC 387+). Havia correlação positiva entre o número de células T e o de células CD8, no grupo da ELD. O mesmo não ocorreu, no grupo do LPC. Concluindo, a expressão aumentada dos grânulos citotóxicos no LPO pode estar associada à maior gravidade da doença na mucosa. Os resultados favorecem um papel mais importante da granzima B e linfócitos TCD8+, no mecanismo patogenético da ELD, comparativamente com o da perforina, de maior importância no LPC. É possível que a ação da granzima B esteja ligada ao número abundante de clusters encontrado na ELD. Embora o LPC e a ELD apresentem semelhanças clínicas e histológicas, a etiopatogênese parece ser distinta Abstract: Lichen planus (LP) can affect the skin and/or mucous membranes. Histologically it presents lymphohistiocytic infiltrate in the epithelium-connective tissue junction and apoptosis of basal epithelial cells. In oral LP (OLP), erosion occurs frequently by higher intensity of necrosis. Cutaneous LP (CLP) and OLP present similar histopathological features, but the clinical course is diverse. Spontaneous remission is common in CLP, but OLP follows a prolonged course, with periods of remission and relapse. Lichenoid drug eruption (LDE) develops after weeks of drug intake and the resolution of lesions is slow after drug discontinuation, hampering the differential diagnosis with (idiopathic) LP. Clinical and histological findings of LDE may be indistinguishable from those of LP, but LDE pathogenesis is poorly understood Local differences in the immune system of the skin and oral mucosa could explain the diversity in the clinical behavior of CLP and OLP. Regarding LDE, there are few publications on the immune changes that act in its development. Cellular cytotoxicity is mediated, among other mechanisms, by granules containing perforin and granzyme B, produced by cytotoxic T lymphocytes and NK cells. In order to study cellular cytotoxicity in the pathogenesis of these diseases, we analyzed 29 samples of OLP, 16 of CLP and 6 of LDE. The sections were stained for H&E and immunohistochemically targeted with CD4, CD8, HAM 56, MAC387, granzyme B, perforin and ICAM-1. OLP specimens exhibited higher density of cytotoxic granules (perforin and granzyme B) when compared with CLP. In both groups of diseases, the greater the number of perforin+ cells, the greater was the number of granzyme B+ cells. Increased number of CD4+ cells was found in active lesions as compared with the regressive ones in OLP but not in the CLP. The comparison between CLP and LDE revealed that the greater the number of CD8+ cells, the greater the number of cells expressing perforin in CLP group. The higher were the values of granzyme B, the higher the perforin values in the CLP group; the higher were the values of granzyme B, the higher the number of clusters of apoptotic cells in the LDE group. Within CLP group, the higher were the values of T cells, the greater the number of HAM56+ macrophages and vice versa. In LDE samples, negative correlation was found between the number of T cells and young histiocytes (MAC 387+). There was a positive correlation between the number of T cells and CD8 cells in LDE group, but not in CLP group. Concluding, increased expression of cytotoxic granules in OLP may be associated with greater mucosa severity. The results favor a greater role of granzyme B and CD8+ lymphocytes in the pathogenic mechanism of LDE, when compared with perforin, of greater importance in CLP. It is possible that the action of granzyme B is connected to the abundant number of clusters found in LDE. Although CLP and LDE present clinical and histological similarities, the etiopathogenesis appears to be distinct Doutorado Anatomia Patologica Doutora em Ciências Médicas

Orientador: Aparecida Machado de Moraes Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A criocirurgia é uma técnica terapêutica muito eficaz no tratamento de diversas lesões cutâneas benignas e malignas. O principal mecanismo de ação desta técnica está relacionado aos seus efeitos vasculares no tecido tratado. Após o procedimento criocirúrgico ocorre a formação de um tecido de granulação exuberante no local da aplicação, provavelmente por estímulo angiogênico do criógeno e da resposta inflamatória, particularmente nas células endoteliais. Objetivos: avaliar e comparar os efeitos angiogênicos da criocirurgia, por método histopatológico (hematoxilina-eosina), na pele normal e previamente submetida a injúria experimental de ratos, utilizando-se o nitrogênio líquido como criógeno de escolha. Métodos: Foram realizadas duas feridas experimentais no dorso de 20 ratos, machos, linhagem Lewis, adultos jovens, com peso entre 180 e 220gramas, utilizando-se punch de 5mm, distantes 2 cm uma da outra. Após 3 dias, foi realizada criocirurgia com nitrogênio líquido em uma delas, utilizando-se a técnica do spray aberto por 15 segundos. Os animais foram divididos de forma aleatória em dois grupos de dez animais. Após 7 dias (grupo I) e 14 dias (grupo II), as amostras foram coletadas e encaminhadas para análise histológica, para avaliação da celularidade (angiogênese) local nos diferentes momentos e situações. Resultados: Foi possível comprovar que a criocirurgia, apesar de promover morte celular logo após sua aplicação e um processo inflamatório local acentuado, induz em um segundo momento, uma rápida proliferação celular e a manutenção desta taxa de celularidade, quando comparada ao mesmo fenômeno na cicatrização tecidual sem este procedimento. Conclusão: Estes achados, juntamente com o conhecimento de que existe uma relação direta entre as células mononucleares e neovascularização, e que há o desenvolvimento de um rico sistema de novos vasos em injúria causada pelo frio, sugerem que a criocirurgia, apesar de levar a uma cicatrização completa em um tempo mais prolongado, possuí estímulo angiogênico Abstract: Cryosurgery is a very efficient therapeutic technique to treat benign and malignant cutaneous diseases. The primary active mechanism of cryosurgery is related to vascular effects in treated tissue. After a cryosurgical procedure, exuberant granulation tissue is formed at the injection site, probably as a result of angiogenic stimulation of the cryogen and inflammatory response, particularly in endothelial cells. The objective of this study is to evaluate the angiogenic effects of freezing, as part of the phenomenon of healing rat skin subjected to previous injury. Methods: 20 young adult Lewis strain male rats were used, weighing between 180 and 220 grams. Each rat received two wounds that were administered 2 cm apart using a 5mm punch. After 3 days, cryosurgery with liquid nitrogen for 15 seconds, using the open spray technique, was done in one of them. These rats were divided randomly into two groups of 10 animals, group I (GI) and group II (GII). After 7 days (GI) and 14 days (GII), samples were collected cut and stained to realize histopathological examination, to assess the local angiogenesis in differents moments and situations. Results: It was possible to demonstrate that cryosurgery, in spite of promoting cell death and accentuated local inflammation soon after its application, induces a more rapid cell proliferation in the affected tissue and maintenance of this rate in a second phase, than in tissue healing without this procedure. Conclusion: These findings, together with the knowledge that there is a direct relationship between mononuclear cells and neovascularization (the development of a rich system of new vessels in injury caused by cold), suggest that cryosurgery possesses angiogenic stimulus, even if taking longer for complete healing to occur Mestrado Ciências Básicas Mestre em Clínica Médica

Orientador: Maria Leticia Cintra Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O Ceratoacantoma (CA) é um tumor cutâneo de grande interesse devido às suas características peculiares e relação controversa com o carcinoma espinocelular (CEC). Em razão das similaridades histológicas e da ausência de critérios definitivos, o diagnóstico diferencial entre estas entidades de comportamento biológico distinto é frequentemente problemático. Na tentativa de compreender melhor a patogênese destas neoplasias e com o objetivo de investigar se a avaliação da angiogênese poderia ser útil na distinção entre CA e CEC, nós estudamos, com o auxílio de programa de morfometria digital, a densidade microvascular (DMV) e a expressão da proteína p53 e do antígeno de proliferação celular Ki67 em biópsias incisionais de 40 lesões ceratoacantoma-símiles das quais o curso clínico foi monitorado. Não foram encontradas diferenças estatísticas entre CAs e CECs quanto à expressão de p53 e DMV. O índice proliferativo foi significativamente maior nos CECs, porém com sobreposição entre os grupos dificultando a aplicação deste critério na rotina diagnóstica. Em ambos os tumores, foi demonstrada correlação indireta entre a densidade de vasos neoformados (DMV-CD105) e a densidade de vasos pré-existentes. Para os CAs, foi observada correlação positiva entre DMV-CD105 e índice de Ki67 enquanto os CECs revelaram correlações positivas entre tamanho da lesão e idade e tamanho e p53. A DMV não se mostrou ferramenta útil no diagnóstico diferencial entre CAs e CECs. No entanto, apesar destas neoplasias apresentarem muitas similaridades, as diferentes formas de interação entre as variáveis estudadas indicam que, provavelmente, mecanismos distintos estão envolvidos em sua patogênese Abstract: Keratoacanthoma (KA) is a cutaneous tumor of great interest because of its unique characteristics and controversial relationship to squamous cell carcinoma (SCC). We hypothesized that differences in microvessel density (MVD), p53 expression and proliferation index could be related to the distinct behavior between KAs and SCCs and that their assessment could help distinguish between these entities. Immunohistochemical staining was performed with markers for vessels (CD34 and CD105), p53 oncoprotein and cell proliferation (Ki67). Microvessel densities and p53 and Ki67 quantifications were calculated using computer-assisted image analysis. There were no significant differences between KAs and SCCs regarding neither p53 expression nor microvessel density. The Ki67 proliferation index was significantly higher in SCCs, but there was considerable overlap between the groups. We found an indirect correlation between CD105-MVD and the density of pre-existing vessels in both tumors. For KAs we also observed a positive correlation between CD105-MVD and Ki67 index whereas SCCs demonstrated significant positive correlations between tumor size and age and tumor size and p53. MVD was not a useful tool in the distinction between KAs and SCCs. However, despite the fact that these neoplasms have more similarities than differences, there are probably distinct mechanisms involved in their pathogenesis Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Maria Elvira Pizzigatti Correa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O estabelecimento de critérios mínimos para o diagnóstico da doença do enxerto contra o hospedeiro crônica (DECHc), identificando aqueles com significância prognostica, bem como a padronização deste achados, pode adicionar subsídios para a conduta terapêutica, facilitar o trabalho de pesquisadores e aperfeiçoar a comunicação entre eles. O objetivo deste trabalho foi estudar dois sistemas de classificação histológica para DECHc em glândulas salivares menores (GSM), um proposto por Horn et al. em 1995 que tem sido empregado no Departamento de Anatomia Patológica, UNICAMP, e outro proposto por Shulman et al. em 2006. Este foi um trabalho retrospectivo que avaliou biópsias de GSM coletadas no momento do diagnóstico clínico de DECHc oral. As amostras de GSM foram obtidas de pacientes tratados por transplante de medula óssea (TMO) convencional, com enxerto HLA- idêntico de doadores aparentados entre 1994 e 2006. Do total de 154 pacientes com DECHc oral, 65 amostras de GSM de 65 pacientes foram selecionadas. A mediana de idade dos pacientes foi de 36 (12 - 59 anos), sendo 39 homens e 26 mulheres. As doenças de base foram LMC (n = 37), LMA (n = 11) LLA (n = 8), AA (n = 6), HPN (n = 1) e SMD (n = 2). As fontes de células tronco para os TMOs foram sangue periférico (n = 28) e medula óssea (n = 37). As biópsias foram avaliadas segundo os sistemas de classificação de Horn et al. e Shulman et al. de forma cega e independente por duas observadoras, e o resultado de consenso foi considerado para análise estatística. Foi encontrada uma significante correlação entre os diagnósticos histológicos propostos por Horn et al. e Shulman et al. (R = 87%, p = 0,0001). O critério "linfócitos periductais com exocitose nos ductos", da classificação de Shulman et al., mostrou correlação com a sobrevida global do paciente (p = 0,007). Assim, a migração de linfócitos através do epitélio ductal pode exercer influência negativa na evolução clínica dos pacientes. "Infiltrado linfocítico periductal" no sistema de graduação de Horn et al. Mostrou correlação significante com a forma clínica (localizada ou extensa) da DECHc (p = 0,04). Os resultados deste estudo apontam para a importância prognostica adversa dos critérios "infiltrado linfocítico periductal" e "linfócitos periductais com exocitose nos ductos" e podem auxiliar no entendimento da DECHc oral. Abstract: Establishing minimum criteria for cGVHD diagnosis, identifying those with prognostic significance, as well as standardizing these features, may add subsidies to conduct therapy, to facilitate the work of researchers and to improve communication between them. The goal of this work was to study two systems for cGVHD histological classification in minor salivary glands (MSG), one proposed by Horn in 1995 that has been used at the Pathology Department, UNICAMP, and another one proposed by Shulman et al., in 2006. It was a retrospective study including MSG biopsies collected at the diagnosis of oral cGVHD. The MSG samples were obtained from patients treated by conventional HSCT, from HLA matched- sibling donors between 1994 - 2006. Among 154 patients with oral cGVHD, 65 samples were selected from 65 patients. Patients median age was 36 (12 - 59 years), 39 males and 26 females. The underlying diseases were CML (n = 37), AML (n = 11), ALL (n = 8), SAA (n = 6), PNH (n = 1) and MDS (n = 2). The sources of HSCT used were bone marrow (n = 37) and peripheral blood (n = 28). The histopathological specimens were blindly and independently examined by two observers and consensus results were considered for statistical processing. A significant correlation was found between the histological grades proposed by Horn and Shulman (R = 87%, p = 0.0001). The criterium "Periductal lymphocytic infiltrate with exocytosis into duct", in Shulman's classification, was correlated with global survival (p = 0,007). "Peri-ductal lymphocyte infiltrate" in Horn's system showed significant correlation with the clinical cGVHD form (localized or extensive) of cGVHD (p = 0.04). The results suggested similarity between final diagnoses obtained either by Horn or Shulman's classification. The periductal lymphocytic infiltrate was the most important histological criterium for clinical form of cGVHD. The lymphocytes migration through ductal epithelium might exert negative influence in patient outcome. The findings point to the adverse prognostic significance of the following criteria: "periductal lymphocytic infiltrate" and "peri-ductal lymphocytic infiltrate with exocytosis into duct" and may improve the understanding of oral cGVHD. Mestrado Ciências Biomédicas Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Maria Leticia Cintra, Oslei Paes de Almeida Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: A Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro Crônica - DECH ( Graft-versus-host disease cronic- GVHDc) é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes submetidos a transplante de medula óssea. As alterações clínicas e histopatológicas na cavidade oral podem preceder as manifestações da GVHDc em outros órgãos. O objetivo deste estudo foi avaliar os possíveis fatores associados ao desenvolvimento da doença e as diferenças histopatológicas e imunoistoquímicas entre as alterações de condicionamento e GVHDc, bem como determinar o perfil imunofenotípico predominante das células inflamatórias na GVHDc presentes na mucosa oral e glândulas salivares menores. Foram selecionadas 25 amostras de mucosa labial de pacientes que desenvolveram GVHDc (grupo-experimental) e 16 de pacientes que não desenvolveram GVHDc (grupo controle) nos arquivos do Departamento de Anatomia-Patológica da Faculdade de Ciências Médicas da UNICAMP.As informações clínicas referentes à idade, gênero do receptor, doença de base, tipo de transplante, sexo do doador, compatibilidade do sistema HLA e ABO, presença de infeções virais, desenvolvimento de GVHDa, órgãos afetados na GVHDc, foram obtidas dos prontuários médicos. Foram realizados cortes histológicos do material parafinado, os quais foram corados para HE. Posteriormente, realizou-se estudo imunoistoquímico do infiltrado inflamatório com os seguintes anticorpos: CD68, CD45, CD 4, CD8 e CD20. Idade avançada dos pacientes, transplante de célulastronco-periféricas e presença de infecções virais demonstraram ser fatores de risco para GVHDc. Vacuolização da camada basal, infiltrado linfóide, exocitose, células acidófilas contraídas, divagem focal ou separação entre o epitélio e o conjuntivo são as alterações histológicas que mais diferenciam GVHDc de alterações do condicionamento na mucosa oral. As alterações histopatológicas mais comuns em glândulas salivares menores foram: infiltrado inflamatório linfocitário moderado, fibrose intersticial e diminuição do número de duetos e ácinos. As células predominantes na GVHDc foram linfócitos T citotóxicos, tanto no tecido epitelial, como no tecido conjuntivo e glândulas salivares. Esses resultados indicam que as principais células envolvidas na etiopatogenia da GVHOc na mucosa oral e glândulas salivares menores são os linfócitos T citotóxicos, mas macrófagos e linfócitos auxiliares também participam da patogenia da doença Abstract: The major cause of morbidity and mortality in patients undergoing allogeneic bone marrow transplantation is graft-versus-host disease (GVHD). The clinical and histological manifestation of oral mucosa can precede other organ involvement in the GVHDc. The aim of our study was to evaluate the predictive risk factors to GVHDc, the histological and immunohistochemical differences between patients with or without GVHDc, as well as to evaluate the immunophenotype of the inflammatory cells in oral mucosa and labial salivary gland. Twenty-five patients who had GVHDc (experimental-group) and 16 patients who had not GVHOc were seected. The data patient, gender, underlying disease, type of transplantation, donor gender, compatibility of the system ABO and HLA, infection diseases, previous GVHDa, organ involved in the GVHOc, were obtained frem the clinical records. The slides were firstly examined in H&E. Immunohistochemical analyses included the following antibodies CD68, CD45, CD4, CD8, CD20. The age of the patients (oldest), type of transplantation and infection disease were found risk factors to GVHDc Hydropic degeneration of the basal cells, apoptotic bodies, Iymphocytic infiltration, and focal or total clivage between epithelial and connective tissue were histological features that could be used to differentiate GVHDc frem chemotherapy effects on oral mucosa. In the labial salivary glands the Iymphocytic infiltration, acinar 1055and fibresis were the main alteration. The predominant cells in GVHDc were CD8 T cells in epithelium, connective tissue as much as in salivary glands Mestrado Patologia Mestre em Estomatopatologia

Orientadores : Maria Leticia Cintra, Elemir Macedo de Souza Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo : No presente estudo tentou-se estabelecer, através de uma ampla revisão dos dados clínicos e espécimes anatomopatológicos, o diagnóstico etiológico das dermatites granulomatosas sem etiologia definida, diagnosticadas no departamento de Anatomia Patológica do Hospital das Clínicas da Unicamp, Campinas, Brasil, no período de 1988 a 1993. Esses casos, que haviam sido prévia e exaustivamente estudados na histopatologia, foram revisados no presente estudo, inicialmente em lâminas arquivadas e coradas pelo HE, Ziehl Neelsen e Grocott, e, posteriormente, foram padronizados cortes seriados, com aprofundamento do bloco de parafina para realização de colorações especiais e imunoistoquímica com anticorpos policlonais. Esse último exame foi realizado no Departamento de Patologia do Hospital das Clínicas (divisão de dermatologia) da Faculdade de Medicina da USP, São Paulo, Brasil. Um total de 41 pacientes foram avaliados e divididos em seis doenças: 19 pacientes com diagnóstico clínico de LTA, 10 pacientes com esporotricose, dois pacientes com Tbc, três pacientes com hanseníase tuberculóide, dois pacientes com sífilis secundária e cinco pacientes com diagnóstico de paracoccidioidomicose. No exame imunohistoquímico, observou-se 26,3% de positividade, com o achado de amastigotas em cinco casos de LTA, não sendo encontrados parasitas em nenhum dos fragmentos no exame histológico. Quanto ao resultado histológico, observou-se 14 (34,14%) com padrão B e 27 (65,85%) com padrão C. O tempo de duração das lesões de foi de 4,9 meses no padrão B e 7,5 meses no C. A celularidade da reação inflamatória granulomatosa mostrou-se predominantemente constituída por linfócitos, histiócitos, plasmócitos, células epitelióides e células gigantes. Os critérios morfológicos clássicos de relevância da LTA em relação às outras doenças estudadas foram a plasmocitose (p = 0,0013) e o padrão histológico C (p =0,009). Concluímos que apesar da contribuição da combinação de métodos diagnósticos, o que dará o diagnóstico final nas dermatites granulomatosas infecciosas sem etiologia defmida é o conjunto dos dados clínicos e a resposta ao teste terapêutico Abstract: The aim of this study was to make, through a large revision of clínical data and anatomopathological pieces, the correct diagnosis of granulomatous dermatitis of whith a unknown ethiology, evaluated at Pathological Anatomy Department, Hospital de Clínicas, UNICAMP, from 1988 to 1993. The cases were previously studied by histopathology. In the present study they were reviewed, initially ín slides glass, stored and staíned by hematoxylín and eosin, Ziehl-Neelsen, Grocott, and embedded paraffin tissue for special staining, imunohistochemical with policlonal antibodies. This last exam was performed at Pathology Department, dermatology divison, Hospital das Clínicas, Faculdade de Medicina, USP, São Paulo, BraziL There were 41 patients classitied among six diseases: 19 patients with clínical diagnosis of LTA, 10 patients with sporotrichosis, two patients with tuberculosis, three patients with Hansen' s disease and two patients with secondary syphilis. Imunohistochemical analysis showed 26,3% of positive results with amastigotes ín tive cases of LTA, where no parasites were found by histological analysis. As for the histological results, there were 14 (34,14%) cases ín the B pattem group and 27 (65,85%) in the C pattem group. The lesions were present during 4,9 months in B pattem and 7,5 months in C pattem. The cells most frequently found in the granulomatous inflamatory reaction were: lymphocytes, plasma cells, epithelioid cells and giant cells. Classical morphological criteria in LTA were plasmocitosis (p = 0,0013) and histological pattem (p = 0,009). The conclusion is that, despite the contribution of histopathological methods, the correct diagnosis of infectious granulomatous dermatitis of unknow ethiology can be given by clínical evolutive data and response to pharmacologycal therapy Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Konradin Metze Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A Doença do Enxerto contra o Hospedeiro representa uns dos fatores de maior morbidade e mortalidade pós transplante alogênico de medula óssea (TMO). Lesões na cavidade bucal e em glândulas salivares menores são achados comuns na GVHDc, manifestando-se através de xerostomia e lesões liquenóides. O objetivo deste trabalho foi estudar, prospectivamente, os aspectos clínicos e histopatológicos da mucosa bucal e glândulas salivares acessórias no dia +100 (coletados necessariamente, conforme protocolo) e no momento do diagnóstico da GVHDc feitao posteriormente ao dia 100 pós TMO, para: avaliar a especificidade e sensibilidade da análise histopatológica protocolar do dia +100; estudar a freqüência de acomentimento da pele, mucosa bucal e glândula salivar na GVHD crônica; determinar os parfun.etros clínicos associados à sobrevida pós transplante; determinar os parâmetros clínicos preditivos de GVHD crônica e detenninar o valor da análise da mucosa bucal e glândula salivar acessória na sobrevida pós transplante de medula óssea. Foram coletadas ao redor do dia +100, amostras de pele e mucosa bucal incluindo glândula salivar menor de 45 pacientes submetidos ao TMO alogênico HLA-idêntico. Uma segunda biópsia foi realizada em 25 pacientes que desenvolveram ou mantiveram sintomas sugestivos de GVHDc. As amostras foram analisadas e classificadas de acordo com o proposto por HORN (1995). Os resultados foram analisados estatisticamente pelo modelo tmivariado da regressão de azares proporcionais de COX Para avaliar as variáveis significativas em conjunto, foi utilizado o modelo multivariado de regressão de azares proporcionais de COX (regressão stepwise). Para análise de sobrevida foram construídas curvas de Kaplan-Meir. Do total de 63 transplantes realizados no Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hemocentro da Unicamp entre setembro de 1993 a maio de 199~, 45 pacientes entraram no estudo, por sobreviverem mais que 100 dias pós transplante. Todos os pacientes receberam transplante alogênico, HLA-idêntico. Desses 45 pacientes, 32 receberam enxertos coletados por aspiração da medula óssea (MO) e 13 por células progenitoras periféricas (CPP). Do grupo, 19 pacientes eram mulheres 26 homens, com idade mediana de 36 anos (4 - 57). Os resultados do exame histológico no dia 100 não demonstraram valores preditivos para o diagnóstico para o GVHDc. O tipo de transplante realizâdo, CPP (p=0,023), a presença anterior da GVHD aguda (p=O,OO16) e doadoras femininas para receptores masculinos (p=O,031) demonstraram ser fatores preditivos para a GVHD crônica. Em relação à sobrevida, o tipo de transplante, CPP (p=0,017), a antecedência da forma aguda da GVHD (p=0016) e o nível sérico maior de ciclosporina (p=O,0031) foram correlacionados a um pior prognóstico. A segunda biópsia foi realizada num intervalo entre 104 a 304 dias pós TMO (mediana de 195 dias). Dezoito pacientes apresentaram GVHDc extensa, 4 localizada e 3 não apresentaram GVHDc. Onze pacientes morreram depois da segunda avaliação, sendo que 7 por GVHDc, 3 por recaída da leucemia e um por causa não relativa ao TMO. Nesse período, os achados histológicos positivos para GVHDc em mucosa bucal e glândula salivar menor foram estatisticamente significativos em relação à sobrevida dos pacientes. Os achados foram classificados em 3 grupos de gravidade da GVHDc, de acordo com a classificação de Hom (Grau I, 11, III-IV). A mucosa bucal (p=O,02) e a glândula salivar menor (p=O,OO9) demonstraram ter valor preditivo para a sobrevida dos pacientes. Apesar do pequeno número de pacientes, nossos dados sugerem que as biópsias protocolares no dia + 1 00 não são adequadas ao diagnóstico de GVHDc. A glândula salivar revela com maior freqüência a agressão linfocitária da GVHDc que a pele ou mesmo a mucosa bucal. A presença da fase aguda da GVHD, assim como doadoras femininas e o tipo de transplante realizado demonstraram ser fatores importantes no prognóstico menor de sobrevida. A GVHD aguda, assim como o tipo de transplante (CPP), e o sexo do doador (feminino) demonstraram ser importantes fatores preditivos de desenvolvimento da GVHD crônica. Os achados histológicos positivos para GVHDc em glândula salivar juntamente com os de mucosa bucal podem refletir em pior prognóstico (sobrevida) Abstract: Chronic graft-vs-host disease (cGVHD) is an important cause of morbity and mortality after allogeneic bone marrow transplants. Lesions ofthe oral mucosa and salivary glands are common features of cGVHD, manifesting as xerostomia, lichenoid lesions or even severe mucositis. The biopsy of specimens of the oral mucosa, collected on day +100, is commonly used as a screening test for the diagnosis af cGVHD. The aim of our study was to evaluate the screening test for diagnosis of cGVHD on day +100 post BMT, the predictive factors of diagnosis for cGVHD, the incidence of skin and oral cGVHD manifestation and the use of findings of the histologycal specimens as a predictor of shorter survival in patients with cGVHD. Data were initially analyzed from 45 patients who had received unrnodified allogeneic marrow grafts in the Bone Marrow Transplantation Hospital Service / Hematology and Hemotherapy Center of the State University ofCampinas, UNICAMP, between September 1993 to May 1995 and who had survived for over 100 days. Ofthese 45 patients, 32 received grafts collected byaspiration (bone marrow - BM) and 13 peripheric bone progenitors cells (pBPC), from HLA-identical siblings. Biopsies of the skin and labial mucosa, including representative samples of minor salivary gland (MSG), were collected on day +100. A second biopsy was performed at a later time in 25 patients (BM=16, PBPC=9) who had developed or sustained signs or symptoms suggestive of cGVHD. All specimens were analised by 2 examiners (MEPC and MLC) separately for later comparison. Hom pathological staging score was used for the histological classification of the oral and salivary gland findings. Univariate and multivariate Cox proportional hazard regression models, and the Kaplan-Meir method were used to determine the overall survival. Sixty-three allogeneic BMT wesre performe~ between September 1993 and May 1995 in the Bone Marrow Service of the Hemocentro / Unicamp. Forty-five patients suvived for over 100 days and the histological findings were analised. Df these patients, 32 received bone marrow transplantation (BMT) and 13 received peripheral bane progenitor cells (PBPC). Nineteen patients were women and 26 men and the median age was 36 years (4 - 57 years old). The histological findings, obtained at the +100 day did not show any predictive value for cGVHD diagnosis. PBPC (p=0,023) transplant, acute GVHD,.sphO,0016) and female donors (p=0,031) were predictive factors for cGVHD on the 100 day post BMT. The PBPC (p=O,Ol7) transplant, acute GVHD (p=O,0016) and the leveI of cysclosporin (p=0,0031) were predictive factors for a worst prognostic of overall survival. The second time biopsies were performed from 104 to 304 days after BMT (median 195 days). Eighteen patients showed extensive cGVHD, 4 localized cGVHD and 3 no formof cGVHD. Eleven patients died after the second biopsy, 7 due to cGVHD, 3 due to leukemia relapse and one due to no transplant reason. The skin histological fmdings did not show any prognostic value. The results of histologicaloral mucosa and minor salivary gland fmdings showed statistical importance. We stratified patients into three groups of scale cGVHD severity, using the HORN pathological staging score (1, 11 and III-IV). For oral mucosa, the statistical value was p=0,02 for and the minor salivary gland it was p=0,009. Despite the small number of patients, our results suggest that severe histologic lesions in MSG specimens obtained beyond day +100 correlate with higher mortality in patients suffering from cGVHD. There is a greater frequency of lymphocyte infiltration in minor salivary gland than in the oral mucosa or skin. The histological findings on the 100 dayafter BMT, did not show any prognostic value for diagnosis of cGVHD. The female danors and the type oftransplantation showed important value in the prognostic for overall survival for BMT patients. The aGVHD, the BMT type and the sex of the donor were important factors for prognostic of cGVHD Mestrado Anatomia Patologica Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Leticia Cintra, Cassio Menezes Raposo do Amaral Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O gel dos implantes de silicona pode entrar em contacto direto com o organismo em decorrência do vazamento através da membrana elastomérica do implante ou devido à rotura desta membrana. Estudou-se os efeitos da silicona gellivre injetada no tecido subcutâneo de ratos. Analisou-se as características morfológicas dos gânglios linfáticos axilares e inguinais. Foram injetados 3 cm3 de silicona gel no tecido subcutâneo de 96 ratos Wistar. Os animais do grupo controle (96 ratos Wistar) receberam injeção subcutânea de água destilada. Oito animais tratados e oito animais controle foram sacrificados decorridos 1, 3, 7, 9, 15, 30, 60, 90, 120, 180, 270 e 365 dias da injeção. Não foram observadas alterações morfológicas nos gânglios linfáticos sugestivas de migração ou de resposta reacional à silicona gel. Pequenas quantidades não detectáveis de silicona poderiam migrar para os gânglios linfáticos e provocar hiperplasia daquelas estruturas. Para avaliar esta possibilidade fêz-se um estudo morfométrico auxiliado por computador, onde comparou-se a área dos cortes dos gânglios linfáticos dos animais tratados com os do grupo controle. A análise estatística não mostrou diferenças significativas entre o grupo tratado e o controle. Se ocorreu migração de silicona, não provocou manifestação morfológica de hiperplasia dos gânglios linfáticos Abstract: The gel of the silicone gel implants may bleed through the elastomeric envelope or may enter in contact with the organism due to a rupture of the implant. It was studied the effects of free silicone gel injected into the subcutaneous tis sue of rats. It was analysed the morphologic features of the axilar and inguinallymph nodes. Ninety six Wistar rats were injected in their subcutaneous space with 3 cm3 of silicone gel. The animaIs of control group, ninety six Wistar rats, were injected in their subcutaneous space with distilled water. The animaIs were sacrificed on days: 1, 3, 7, 9, 15, 30, 60, 90, 120, 180, 270 and 365 after the injection. There was no detectable silicone and no damage to the lymph nodes based on routine histopathological analysis. Little amounts of silicone that could migrate to lymph nodes could result in hyperplasia. In order to evaluate this possibility, a morphometric study based on a computer aided system compared the area of lymph node sections between treated and contraI animais. The statistical analysis didn't show any difference between treated and control groups. If silicone migration ocurred it did not provoke morphologic manifestation or hyperplasia of the lymph nodes Doutorado Anatomia Patologica Doutor em Ciências Médicas