Search

Abordagens para o teste genético pré-implantacional não-invasivo para aneuploidias (non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies, niPGT-A, em inglês) com o objetivo de avaliar o DNA embrionário livre são promissoras, especialmente porque estas podem reverter as menores taxas de implantação causadas por inadequada biópsia de trofectoderma (TE). Nesse contexto, nosso centro é parte do maior estudo atual que avalia as taxas de concordância entre PGT-A convencional e niPGT-A, e relatamos aqui o nascimento do primeiro bebê brasileiro após niPGT-A. Os pais do bebê foram admitidos no nosso centro em 2018. Eles não apresentavam histórico de infertilidade, e estavam interessados em utilizar os tratamentos de fertilização in vitro (FIV) e PGT-A para evitar anomalias congênitas na progênie. Um total de 11 blastocistos expandidos (3 do dia-5 e 8 do dia-6) foram submetidos a biópsia, e os meios de cultivo condicionados (cultivo do dia-4 ao dia-6) de 8 blastocistos do dia-6 foram coletados para niPGT-A. No total, resultados informativos para as amostras de TE e dos meios foram obtidos para sete embriões. Entre os embriões com resultado informativo, 5 apresentaram diagnóstico concordante entre PGT-A convencional e niPGT-A, e 2 apresentaram diagnóstico discordante (1 falso positivo e 1 falso negativo). O Blastocisto 4, diagnosticado como 46, XY por ambos niPGT-A e PGT-A convencional, foi desvitrificado e transferido, o que resultou no nascimento de um menino saudável, que pesava 3,8 kg, em fevereiro de 2020. Com base em nossos resultados e literatura contemporânea, acreditamos que a aplicação atual mais segura do niPGT-A seria como método de seleção embrionária para pacientes sem indicação ao PGT-A convencional. A confiabilidade aproximada de 80% do niPGT-A para determinação da ploidia ainda é superior àquela obtida com abordagens não invasivas, como seleção morfológica ou morfocinética. Non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies (niPGT-A) aiming to assess cell-free embryonic DNA in spent culture media is promising, especially because it might overcome the diminished rates of implantation caused by the inadequate performance of trophectoderm (TE) biopsy. Our center is part of the largest study to date assessing the concordance between conventional PGT-A and niPGT-A, and we report here the delivery of the first baby born in Brazil using niPGT-A. The parents of the baby were admitted to our center in 2018. hey did not present history of infertility, and they were interested in using in vitro fertilization (IVF) and PGT-A in order to avoid congenital anomalies in the offspring. A total of 11 (3 day-5 and 8 day-6) expanded blastocysts were biopsied, and the spent culture media (culture from day-4 to day-6) from 8 day-6 blastocysts were collected for niPGT-A. Overall, 7 embryos yielded informative results for trophectoderm (TE) and media samples. Among the embryos with informative results, 5 presented concordant diagnosis between conventional PGT-A and niPGT-A, and 2 presented discordant diagnosis (1 false-positive and one false-negative). The Blastocyst 4, diagnosed as 46, XY by both niPGT-A and conventional PGT-A, was warmed up and transferred, resulting in the birth of a healthy 3.8 kg boy in February 2020. Based on our results and the recent literature, we believe that the safest current application of niPGT-A would be as a method of embryo selection for patients without an indication for conventional PGT-A. The approximate 80% of reliability of niPGT-A in the diagnosis of ploidy is superior to predictions provided by other non-invasive approaches like morphology and morphokinetics selection.

RESUMEN La fecundación consiste en la fusión de los gametos masculino y femenino en el tercio externo de la trompa uterina para constituir el cigoto, que inicia su división celular, viaja al útero, se implanta como blastocito en el endometrio a los siete días y comienzan los procesos de embriogénesis y morfogénesis. Concepción es la acción o efecto de quedar embarazada una mujer. En el tema de los derechos establecidos al concebido, el inicio de la vida humana plantea amplia discusión entre las definiciones que plantea la ciencia frente a las de grupos de la sociedad civil. No siendo el cigoto una persona humana, de acuerdo con la Corte Interamericana de Derechos Humanos (CIDH) y otros no sería sujeto de los derechos establecidos para la persona, los cuales estarían íntimamente relacionados a los derechos de la mujer embarazada. La concepción ocurriría cuando el embrión se implanta en el útero y no aplicaría el artículo 4 de la CIDH. La doctrina, la legislación y la jurisprudencia peruana establecen amplia tutela jurídica a favor del concebido e instauran el inicio de la vida a partir de la fecundación. La Sentencia de la CIDH para el caso Artavia Murillo contra Costa Rica introduce la figura española del preembrión, al cual no se le otorga tutela jurídica hasta los 14 días, momento en que la ciencia médica establece la implantación del embrión en el endometrio materno. Para consideraciones éticas actuales, el embarazo humano empieza con la implantación del blastocisto en el endometrio y no existe sustento para aceptar el derecho del concebido desde el momento de la fecundación como si fuera una persona. Empero se señala que la vida humana posee una continuidad ininterrumpida desde su concepción hasta su fin natural, la muerte. El cigoto es vida que se inicia con dotación genética propia diferente a la de sus progenitores. El embrión preimplantatorio solo podrá originar un ser humano que se gesta y desarrolla dentro del cuerpo de otra persona, con propia dinámica vital. ABSTRACT Fertilization consists of the fusion of the male and female gametes in the outer third of the uterine tube to form the zygote, which begins its cell division, travels to the uterus, implants as a blastocyst in the endometrium after seven days and begins the processes of embryogenesis and morphogenesis. Conception is the action or effect of a woman becoming pregnant. About the rights established for the conceived, the beginning of human life raises a wide discussion between the definitions proposed by science and those of civil society groups. Not being the zygote a human person, according to the Inter-American Court of Human Rights (IACHR) and others, it would not be subject to the rights established for the person, which would be closely related to the rights of the pregnant woman. Conception would occur when the embryo implants in the uterus and Article 4 of the IACHR would not apply. Peruvian doctrine, legislation and jurisprudence establish broad legal protection in favor of the conceived and indicate the beginning of life from the moment of fertilization. The Judgment of the IACHR in the case of Artavia Murillo v. Costa Rica introduces the Spanish figure of the pre-embryo, which is not granted legal protection until 14 days, when medical science establishes the implantation of the embryo in the maternal endometrium. For current ethical considerations, human pregnancy begins with the implantation of the blastocyst in the endometrium and there is no basis for accepting the right of the conceived from the moment of fertilization as if it were a person. However, it is pointed out that human life has an uninterrupted continuity from conception to its natural end, death. The zygote is life that begins with its own genetic endowment different from that of its progenitors. The preimplantation embryo can only give rise to a human being that is gestated and develops within the body of another person, with its own vital dynamics.

[EN] The development of artificial intelligence in embryology through the application of timelapse imaging technology is making a transition to individualized culture since it provides the ability to select the most suitable embryo to be transferred. Nevertheless, one of the current doubts of the scientific community is that in vitro culture in human is carried out individually, given that most of the studies carried out indicate that the results of group culture seem to be more advantageous in terms of embryo development and quality. Most studies have been based on tests in the murine model, despite its not being the most suitable animal model for embryology and reproductive biology studies. There are models more similar to human reproduction from which results can be extrapolated, such as the rabbit, however, to our knowledge, in vitro culture has not yet been studied individually on this model. The objective of this work has been to evaluate the effect of in vitro embryo culture, individually or in groups, on in vitro development and on the capacity for implantation and birth using the rabbit model. For this, 10 nulliparous females were used as donors, obtaining 409 embryos. The embryos were placed in culture conditions, in groups (n=10) or individually (n=1), and maintained for 72 hours. After this period, development was evaluated and those that had reached the blastocyst stage (n=200) were transferred to 10 recipient females by laparoscopy. The assessment of embryonic implantation was performed by laparoscopy at day 12 of gestation. Finally, after birth, the number of animals born was determined. The individually in vitro culture presented significant differences when compared to group culture. Specifically, the blastulation rate of embryos cultured individually was higher (+12.6%) than that of group cultured (P= 0.03). Regarding in vivo development, no significant differences were observed (P= 0.881) neither in the implantation rate (33% vs 34%, for individual and in group, respectively) nor in the birth rate (20% vs 25%, for individual and in group, respectively) of both experimental groups. For all these reasons, our results indicate that the rabbit model is ideal for carrying out studies that require the use of individualized in vitro culture for early embryos, since these do not present any difference in development neither in vitro nor in vivo., [ES] Los métodos de cultivo de embriones han evolucionado notablemente en los últimos 30 años. No obstante, los estudios indican que los embriones cultivados en un sistema de cultivo en grupo (25-200 embriones en volúmenes variables entre 50-400 μl) tienen una mayor capacidad de desarrollo que los embriones cultivados individualmente o en pequeños grupos. Sin embargo, en humano el cultivo de embriones se lleva a cabo de forma individual, ya que esto permite una valoración más detallada. Por ello, para un uso adecuado de modelos animales sería necesario llevar a cabo experimentos en busca del modelo más adecuado para la extrapolación de resultados a humano. El modelo animal más empleado es el ratón, si bien, este no es el más idóneo para los estudios reproductivos. En este trabajo se pretende comparar el desarrollo de embriones tempranos de conejo en dos situaciones; (i) cultivados en grupo y (ii) cultivados de forma individualizada. Para ello, se emplearán alrededor de 10 conejas, de los que se obtendrán un mínimo 100 embriones por grupo. Para reducir el uso de animales, se empleará un tratamiento de superovulación (FSH-recombinante similar al empleado en humano). A las 72 horas se inseminarán artificialmente con machos de probada fertilidad. A las 24 horas se obtendrán los embriones en estadio de 2 células, y serán divididos de forma aleatoria en los dos grupos experimentales: (i) cultivados en grupos de 10 en un volumen de 300 μl del medio SAGE 1-STEP (Origio), y (ii) cultivados de forma individualizada en 30 μl, en condiciones estándar (38ºC, 5%CO2 en humedad saturada). A las 72 horas de cultivo se evaluará el porcentaje de embriones que alcancen el estadio de blastocisto.

El contenido de ácido desoxirribonucleico (ADN) mitocondrial (ADNmt) por célula como marcador de viabilidad embrionaria se propuso como una estrategia muy innovadora para la priorización en la selección de embriones humanos en los tratamientos reproducción asistida, siendo los embriones con menor contenido mitocondrial por célula los candidatos a ser transferidos. La hipótesis de partida se basaba en que dichos embriones presentarían un estado metabólico más apropiado y un menor estrés celular, los cuales se traducirían en una mayor probabilidad de implantación. La elevada expectación inicialmente generada alrededor de este marcador, vino acompañada de publicaciones con resultados contradictorios en cuanto a su relación con distintos parámetros de éxito clínico, lo que ha desembocado en una falta de consenso sobre la relevancia clínica de su uso. Una hipótesis posible, que explique esta falta de consenso, podría ser que el abordaje del uso del contenido de ADNmt se ha realizado sin conocimientos suficientes sobre aspectos clave como son el significado del contenido del ADNmt durante el desarrollo embrionario o la asociación entre el contenido de ADNmt y el contenido y estado de actividad mitocondrial. El presente trabajo de tesis doctoral trata de profundizar, mediante el análisis del contenido y del estado mitocondrial en el blastocisto, sobre los aspectos moleculares en los que se sustenta esta hipótesis. Este estudio se realizará para determinar si existen factores que expliquen la disparidad de resultados difundidos sobre este tema. Para ello, se establecieron tres objetivos específicos con el fin de abordar el análisis mitocondrial mediante distintas aproximaciones: Objetivo específico 1. Caracterizar el contenido y el patrón de distribución del ADN mitocondrial durante el desarrollo embrionario humano preimplantacional. Objetivo específico 2. Describir el contenido de ADN mitocondrial y el estado mitocondrial en embriones humanos bajo condiciones de estrés. Objetivo específico 3. Identificar la relación existente entre el contenido de ADN mitocondrial por célula y la masa y la actividad mitocondrial en el blastocisto humano. Gracias a la consecución de estos objetivos se ha llegado a la conclusión de que el contenido de ADNmt por célula es capaz de verse modulado en cuestión de pocas horas en situaciones de estrés respecto al cultivo in-vitro normal, y no es representativo del contenido de mitocondrias y de la actividad mitocondrial en un momento que sería cercano a la transferencia embrionaria. No obstante, se ha demostrado una importante relación entre los valores altos de contenido de ADNmt y el estrés celular. Estos hallazgos pueden explicar, en parte, la falta de consenso que existe en cuanto al uso del contenido de ADNmt por célula como marcador de competencia embrionaria, y pueden ser útiles para establecer la base molecular necesaria que respalde, en un futuro, su uso como un indicador adicional para la priorización de la transferencia embrionaria.

Objective To establish a relationship between serum progesterone values on the day of frozen blastocyst transfer in hormone-replaced cycles with the probability of pregnancy, miscarriage or delivery. Methods This was an ambispective observational study including all frozen-thawed embryo transfer cycles performed at our department following in vitro fecundation from May 2018 to June 2019. The outcomes evaluated were β human chorionic gonadotropin (β-hCG)-positive pregnancy and delivery. Groups were compared according to the level of serum progesterone on the day of embryo transfer: the 1st quartile of progesterone was compared against the other quartiles and then the 2nd and 3rd quartiles against the 4th quartile. Results A total of 140 transfers were included in the analysis: 87 with β-HCG>10 IU/L (62%), of which 50 (36%) delivered and 37 had a miscarriage (42%).Women with lower progesterone levels (< 10.7ng/mL) had a trend toward higher β-HCG-positive (72 versus 59%; p>0.05), lower delivery (26 versus 39%; p>0.05) and higher miscarriage rates (64 versus 33%; p0.05), although there was a trend toward a higher number of deliveries (43 versus 31%; p>0.05) and a lower number of miscarriages (28 versus 45%; p>0.05). These differences were not statistically significant. Conclusion There were no differences in pregnancy and delivery rates related with the progesterone level when measured in the transfer day. The miscarriage rate was higher in the 1st quartile group. Resumo Objetivo Avaliar se existe alguma relação entre os valores plasmáticos de progesterona no dia da transferência de um blastocisto desvitrificado em ciclos hormonalmente substituídos e a taxa de gravidez, aborto ou nascido vivo. Métodos Estudo observacional, ambispectivo, incluindo todos os ciclos de transferência de blastocistos congelados no nosso departamento, entre maio de 2018 e junho de 2019. Avaliou-se a taxa de gravidez e de nascidos vivos após 24 semanas de gestação. Os grupos foram comparados de acordo com os valores de progesterona plasmáticos dosados no dia da transferência do blastocisto: comparou-se o 1° quartil com os outros e depois os 2° e 3° quartis com o 4°. Resultados Avaliaram-se 140 transferências: 87 com β gonadotrofina coriônica humana (β-HCG)>10 IU/L (62%), 50 das quais terminaram em nascido vivo (36% do total), enquanto 37 tiveram um aborto (42% das gravidezes). Verificou-se uma tendência para menor número de recém-nascidos nas transferências com níveis de progesterona no 1° quartil (0.05) e ummaior número de abortos (64 versus 33%; p0.05), houve uma tendência para uma maior taxa de nascidos vivos (43 versus 31%; p>0.05) emenor número de abortos (28 versus 45%; p>0.05) abaixo do percentil 75. Estas diferenças não foram estatisticamente significativas. Conclusão Não se verificaram diferenças estatisticamente significativas para taxa de gravidez e de nascido vivo. A taxa de aborto foi maior no primeiro quartil.

Non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies (niPGT-A) aiming to assess cell-free embryonic DNA in spent culturemedia is promising, especially because it might overcome the diminished rates of implantation caused by the inadequate performance of trophectoderm (TE) biopsy. Our center is part of the largest study to date assessing the concordance between conventional PGT-A and niPGT-A, and we report here the delivery of the first baby born in Brazil using niPGT-A. The parents of the baby were admitted to our center in 2018. They did not present history of infertility, and they were interested in using in vitro fertilization (IVF) and PGT-A in order to avoid congenital anomalies in the offspring. A total of 11 (3 day-5 and 8 day-6) expanded blastocysts were biopsied, and the spent culture media (culture from day-4 to day-6) from 8 day-6 blastocysts were collected for niPGT-A. Overall, 7 embryos yielded informative results for trophectoderm (TE) and media samples. Among the embryos with informative results, 5 presented concordant diagnosis between conventional PGTA and niPGT-A, and 2 presented discordant diagnosis (1 false-positive and one falsenegative). The Blastocyst 4, diagnosed as 46, XY by both niPGT-A and conventional PGTA, was warmed up and transferred, resulting in the birth of a healthy 3.8 kg boy in February 2020. Based on our results and the recent literature, we believe that the safest current application of niPGT-A would be as a method of embryo selection for patients without an indication for conventional PGT-A. The approximate 80% of reliability of niPGT-A in the diagnosis of ploidy is superior to predictions provided by other noninvasive approaches like morphology and morphokinetics selection. Resumo Abordagens para o teste genético pré-implantacional não-invasivo para aneuploidias (non-invasive preimplantation genetic testing for aneuploidies, niPGT-A, em inglês) com o objetivo de avaliar o DNA embrionário livre são promissoras, especialmente porque estas podem reverter as menores taxas de implantação causadas por inadequada biópsia de trofectoderma (TE). Nesse contexto, nosso centro é parte do maior estudo atual que avalia as taxas de concordância entre PGT-A convencional e niPGT-A, e relatamos aqui o nascimento do primeiro bebê brasileiro após niPGT-A. Os pais do bebê foram admitidos no nosso centro em 2018. Eles não apresentavam histórico de infertilidade, e estavam interessados em utilizar os tratamentos de fertilização in vitro (FIV) e PGT-A para evitar anomalias congênitas na progênie.Umtotal de 11 blastocistos expandidos (3 do dia-5 e 8 do dia-6) foram submetidos a biópsia, e os meios de cultivo condicionados (cultivo do dia-4 ao dia-6) de 8 blastocistos do dia-6 foram coletados para niPGT-A. No total, resultados informativos para as amostras de TE e dos meios foram obtidos para sete embriões. Entre os embriões com resultado informativo, 5 apresentaram diagnóstico concordante entre PGT-A convencional e niPGT-A, e 2 apresentaram diagnóstico discordante (1 falso positivo e 1 falso negativo). O Blastocisto 4, diagnosticado como 46, XY por ambos niPGT-A e PGT-A convencional, foi desvitrificado e transferido, o que resultou no nascimento de ummenino saudável, que pesava 3,8 kg, em fevereiro de 2020. Com base em nossos resultados e literatura contemporânea, acreditamos que a aplicação atualmais segura do niPGT-A seria como método de seleção embrionária para pacientes sem indicação ao PGT-A convencional. A confiabilidade aproximada de 80% do niPGT-A para determinação da ploidia ainda é superior àquela obtida com abordagens não invasivas, como seleção morfológica ou morfocinética.

Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2021. A transferência intrafolicular de ovócitos imaturos (TIFOI) é uma técnica alternativa para produção de embriões bovinos, na qual ovócitos imaturos, são injetados em um folículo dominante e são maturados, fecundados e tem o desenvolvimento inicial in vivo. Apesar de seu potencial de aplicação, a TIFOI ainda apresenta uma baixa taxa de recuperação embrionária no dia 7 (D7) após a injeção. Sendo assim, muitos aspectos do processo ainda precisam ser esclarecidos para que a sua eficiência possa ser melhorada.. O objetivo deste trabalho foi tentar identificar fatores que possam afetar os resultados da técnica. Para isso avaliou-se (1) a cinética de maturação nuclear de ovócitos submetidos à TIFOI; (2) se o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo é suficiente para que ocorra a maturação completa; (3) o número de ovócitos mais adequado a serem injetados no folículo préovulatório no momento da TIFOI; (4) se o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo após a injeção afeta a taxa de recuperação embrionária; (5) diferentes momentos para realizar a injeção após a remoção do implante de progesterona (P4); e, (6) se o momento da indução da ovulação e a adequação de um protocolo de sincronização das ovuladoras afeta a taxa de recuperação embrionária. Para isso, foram realizados 4 estudos: (1) ovócitos imaturos obtidos de ovários de abatedouro, foram injetados no folículo pré-ovulatório de vacas ovuladoras (TIFOI) e mantidos no folículo por 8, 12 ou 16 h, ou foram maturados in vitro (MIV) por 0, 8, 12 ou 16 h. Para a avaliação da capacidade de desenvolvimento embrionário, os ovócitos injetados no folículo préovulatório foram recuperados por OPU 12 h após a TIFOI e submetidos à fecundação in vitro (FIV) imediatamente após a OPU ou foram maturados in vitro por 4 h adicionais ou 10 h após a OPU. Os ovócitos do grupo controle foram maturados in vitro por 12, 16 e 22 h, antes de serem submetidos à FIV. (2) avaliou-se a taxa de recuperação embrionária após a injeção de 10, 25 ou 50 complexos cumulus ovócitos (CCOs) durante a TIFOI; (3) ovócitos imaturos foram injetados, 24, 36 e 52 h após a remoção do implante de progesterona e 8 dias depois realizou-se a coleta de embriões; (4) ovócitos imaturos foram injetados 30 (TIFOI 30h) ou 36 (TIFOI D9,5) h após a remoção do implante de progesterona e a indução da ovulação foi realizada 24 h após a remoção de P4 (TIFOI D30h), 40 h após a remoção de P4 ou 52 h remoção de P4, e 8 dias depois realizou-se a coleta de embriões. No estudo 1, os ovócitos maturados por TIFOI apresentaram maturação nuclear semelhantes àqueles maturados in vitro; e o tempo durante o qual os ovócitos permaneceram dentro do folículo após a TIFOI não afetou a taxa de recuperação e sua capacidade de serem fecundados e se desenvolverem em embriões; No estudo 2, o número de ovócitos injetados no folículo não afetou a taxa de recuperação embrionária; No estudo 3, o tempo em que os ovócitos permanecem no folículo após a TIFOI ser realizada em diferentes momentos afetou a taxa de recuperação embrionária. Finalmente, no estudo 4, o momento em que a indução da ovulação é realizada interfere na taxa de recuperação embrionária. Conclui-se que apesar de esclarecer alguns fatores importantes para o desenvolvimento da TIFOI, a taxa de recuperação embrionária ainda não foi melhorada. Intrafollicular transfer of immature oocytes (IFOT) is an alternative technique for the production of bovine embryos, in which immature oocytes, recovered by ovum pick-up (OPU), are injected into a dominant follicle, and they are matured, fertilized and underwent initial development in vivo. Despite its application potential, IFOT still results in a low rate of embryonic recovery on day 7 (D7) after injection. Therefore, many aspects of the process still need clarification so that its efficiency can be improved. The aim of this study was to identify factors that may affect the results of the technique, and contribute to its development. Therefore, we evaluated (1) if the nuclear maturation kinetics of oocytes submitted to IFIOT were evaluated; (2) whether the time in which the oocytes remain in the follicle would be sufficient to mature, be fertilized and develop into embryos; (3) the number of oocytes to be injected into the preovulatory follicle at the time of IFOT; (4) whether the time that the oocytes remain in the follicle after the injection would affect the embryonic recovery rate; (5) different moments to perform the injection after the removal of the progesterone implant; (6) whether the timing of ovulation induction and the adequacy of an ovulation synchronization protocol would affect embryo recovery rate. For this, 4 experiments were carried out: (1) immature oocytes, obtained from slaughterhouse ovaries, were injected into the ovulatory cows pre-ovulatory follicle (IFIOT) and kept in the follicle for 8, 12 or 16 h or were in vitro matured (IVM) for 0, 8, 12 or 16 h. In addition, for the evaluation of embryonic developmental capacity, oocytes were recovered by OPU at 12 h after IFIOT and submitted to in vitro fertilization (IVF) immediately after OPU or were in vitro matured for an additional 4 h or 10 h after OPU. Control oocytes were matured in vitro for 12, 16 or 22 h, before being submitted to IVF; (2) the embryo recovery rate after the injection of 10, 25 or 50 cumulus oophorus (COCs) complexes during IFIOT was evaluated; (3) immature oocytes were injected 24, 36 or 52 h after the removal of the progesterone implant and 8 days later, embryo collection was performed; (4) immature oocytes were injected 30 (IFIOT 30h) and 36 (IFIOT D9.5) h after removal of the progesterone implant and ovulation induction was performed 24 h after removal of P4 (IFIOT D30h), 40 h after P4 removal or 52 h P4 removal, and 8 days later, embryo collection was performed. In study 1, oocytes matured by IFIOT showed nuclear maturation similar to those matured in vitro; and the time during which the oocytes remained within the follicle after TIFOI did not affect the recovery rate and its ability to be fertilized and to develop in embryos; In study 2, the number of oocytes injected into the follicle did not affect the rate of embryonic recovery; In experiment 3, the time that the oocytes remain in the follicle after IFIOT is performed at different times affected the rate of embryonic recovery. Finally, in experiment 4, the time when ovulation induction is performed interferes with the rate of embryonic recovery. In conclusion, despite some important factors for the development of IFIOT were explained, the embryonic recovery rate was not improved.

Variability in the production of bovine blastocysts per session of ultrasound-guided follicularaspiration(OPU) is still an obstacle in commercial production.Thus, the objective of the current work was to verify factors that influence in vitro embryo production (PIVE), using data from a commercial laboratory.Data from 2014 to 2016 were analyzed, referring to 799 OPU sessions of adult bovine females of the breeds: Nelore (n=83), Girolando (n=73), Brangus (n=49), HPB (n=20), and Senepol (n=10).The influence of five variables was analyzed: breed, genetic group, frequency of aspiration, type of semen (sexed/conventional), and seasonality (spring/summer vs. autumn/winter) on the rate of viable oocytes, cleavage, and blastocyst production (bl).The protocols for the in vitroproduction of embryos (IVP) followed the routine established by the partner laboratory of the present study. The statistical analysis of the data was performed using SAS, with the Chi-square test.The Girolando and Nelore breeds had a higher (p=0.0001) number of blastocysts/OPU session, as well as the Bos indicus blood group.Blastocyst production was higher (p=0.0059) with sexed semen compared to conventional semen (6.6 x 5.2 bl/OPU session); a higher frequency of aspirations also increased (p=0.005) the number of bl/OPU session (7.7 x 5.9).We conclude that the in vitro production of bovine embryos is influenced by the analyzed factors and knowledge of these variables could guide the commercial use of OPU-PIVE. La variabilidad en la producción de blastocistos bovinos por sesión de aspiración folicular guiada por ultrasonido (OPU) sigue siendo un obstáculo en la producción comercial. Así, el objetivo fue verificar los factores que influyen en la producción de embriones in vitro (PIVE), utilizando datos de un laboratorio comercial. Se analizaron datos del año 2014 al 2016, referidos a 799 sesiones de OPU de hembras bovinas adultas de las razas: Nellore (n = 83), Girolando (n = 73), Brangus (n = 49), HPB (n = 20) y Senepol (n = 10). Se analizó la influencia de cinco variables: raza, grupo genético, frecuencia de aspiración, tipo de semen (sexado / convencional) y estacionalidad (primavera / verano vs otoño / invierno) sobre la tasa de ovocitos viables, clivaje y producción de blastocistos (licenciado en Derecho). Los protocolos para la producción de embriones in vitro (PIV) siguieron la rutina establecida por el laboratorio socio del presente estudio. El análisis estadístico de los datos se realizó mediante el SAS, mediante la prueba de Chi-cuadrado. Las razas Girolando y Nelore tuvieron un mayor número (p = 0,0001) de sesiones de blastocistos / OPU, así como el grupo sanguíneo Bos indicus. La producción de blastocistos fue mayor (p = 0,0059) con semen sexado en comparación con el semen convencional (6,6 x 5,2 bl / sesión de OPU); la mayor frecuencia de aspiraciones también aumentó (p = 0,005) el número de sesiones bl / OPU (7,7 x 5,9). Concluimos que la producción in vitro de embriones bovinos está influenciada por los factores analizados y conocer estas variables puede orientar el uso comercial de OPU-PIVE. A variabilidade na produção de blastocisto bovinos por sessão de aspiração folicular guiada por ultrassom (OPU) ainda é um entrave na produção comercial. Assim,objetivou-se verificar os fatores que influenciam a produção de embrião in vitro(PIVE), utilizando dados de um laboratório comercial. Foram analisados dados do ano de 2014 a 2016, referentes a 799 sessões de OPU de fêmeas bovinas adultas das raças: Nelore (n=83), Girolando (n=73), Brangus (n=49), HPB (n=20) e Senepol (n=10). Analisou-se a influência de cinco variáveis: raça, grupamento genético, frequência de aspiração, tipo de sêmen (sexado/convencional) e sazonalidade (primavera/verão vs outono/inverno) sobre a taxa de oócitos viáveis, clivagem e produção de blastocisto (bl). Os protocolos para a produção de embriões in vitro (PIV)seguiram a rotina estabelecida pelo laboratório parceiro do presente estudo. A análise estatística dos dados foi realizada utilizado o SAS, empregando-se o Teste Qui-quadrado. As raças Girolando e Nelore apresentaram maior (p=0,0001) número de blastocisto/sessão de OPU, assim como o grupamento sanguíneo Bosindicus. A produção de blastocisto foimaior (p=0,0059) com sêmen sexado em relação ao convencional (6,6 x 5,2 bl/sessão OPU); a frequência maior de aspirações também elevou (p=0,005) o número de bl/sessão OPU (7,7 x 5,9). Concluímos que a produção in vitro de embriões bovinos é influenciada pelos fatores analisados e conhecer estas variáveis pode nortear o emprego comercial da OPU-PIVE.

Ilustraciones, tablas Las hojas de Moringa oleifera tienen compuestos como vitaminas, minerales y metabolitos secundarios que le confieren propiedades antioxidantes. Sin embargo, el extracto de esta planta no ha sido estudiado como suplemento en los medios de cultivo en la producción in vitro de embriones bovinos. Por tanto, el objetivo fue evaluar si el medio de maduración in vitro con extracto de Moringa oleifera mejora la competencia del oocito y la calidad del blastocisto, a través de la tasa de maduración nuclear, tasa de blastocistos totales, niveles de especies reactivas de oxígeno (EROs), niveles de glutatión (GSH) intracelular y número de células totales. La extracción fitoquímica se realizó a partir de hojas maduras de Moringa oleifera. Los oocitos provenientes de ovarios de una planta de beneficio (1446) se maduraron en medio TCM 199 suplementado con 0 (control- , C), 50, 100 y 150 μg mL1 de extracto de Moringa oleifera y 50 μg mL-1 de ácido ascórbico (Control+ , AA). Pasadas 24 horas, se fertilizaron y cultivaron de acuerdo con el procedimiento estándar. Los datos obtenidos fueron analizados con la prueba Kruskal-Wallis. No se observaron diferencias significativas entre tratamientos (P>0,05), a excepción de los niveles de GSH y EROs, que se redujeron un 59% y 57%, respectivamente, con el uso de 150 μg mL-1 de extracto. En conclusión, el extracto de Moringa oleifera redujo las EROs, sin embargo las concentraciones de GSH intracelular también se redujeron y no hubo un efecto significativo en la maduración in vitro de oocitos bovinos ni en el desarrollo embrionario temprano. (Texto tomado de la fuente) Moringa oleifera leaves have compounds such as vitamins, minerals and secondary metabolites that give it antioxidant properties. However, the extract of this plant has not been studied as a supplement in culture media in the in vitro production of bovine embryos. Therefore, the objective was to evaluate whether the in vitro maturation medium with Moringa oleifera extract improves oocyte competence and blastocyst quality, through the nuclear maturation rate, total blastocyst rate, levels of reactive oxygen species. (ROS), intracellular glutathione (GSH) levels and total cell number. The phytochemical extraction was carried out from mature leaves of Moringa oleifera. The oocytes from ovaries of a beneficiation plant (1446) were matured in TCM 199 medium supplemented with 0 (control- , C), 50, 100 and 150 μg mL-1 of Moringa oleifera extract and 50 μg mL-1 of ascorbic acid (Control + , AA). After 24 hours, they were fertilized and cultivated according to the standard procedure. The data obtained were analyzed with the Kruskal-Wallis test. No significant differences were observed between treatments (P> 0.05), with the exception of GSH and ROS levels, which were reduced by 59% and 57%, respectively, with the use of 150 μg mL-1 of extract. In conclusion, Moringa oleifera extract reduced ROS, however intracellular GSH concentrations were also reduced and there was no significant effect on in vitro maturation of bovine oocytes or early embryonic development Maestría Magíster en Ciencias Agrarias 1. Obtención del extracto de hojas de Moringa oleifera 2. Fraccionamiento del extracto 3. Análisis fitoquímico preliminar 4. Determinación colorimétrica a microescala de compuestos fenólicos 5. Contenido total de fenoles (CTF) 6. Contenido de Flavonoides Totales (CFT) 7.Contenido total de catequinas (CTC) 8. Determinación de la actividad antioxidante (DPPH, FRAP, ABTS) 9. Recolección de ovarios 10. Aspiración folicular y obtención de oocitos 11. Maduración in vitro (MIV) 12. Fertilización in vitro (FIV) 13. Cultivo in vitro (CIV) 14. Evaluación de la maduración nuclear 15. Evaluación de los niveles de EROs y GSH intracelulares 16. Evaluación de la calidad embrionaria Producción animal tropical

Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-02T16:52:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-03T18:46:42Z (GMT) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-06T20:16:21Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-06T22:22:50Z (GMT) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-20T18:20:39Z No. of bitstreams: 1 ElisaPioltine_TESE_2020_repositório.pdf: 5693493 bytes, checksum: b3491f150c79b10b2811ceb4847e2c03 (MD5) Submitted by ELISA MARIANO PIOLTINE (elisapioltine@hotmail.com) on 2020-04-13T13:08:04Z No. of bitstreams: 1 Tese_ElisaMarianoPioltine_30_03_2020.pdf: 5536113 bytes, checksum: a12acef7c0560959d5e2ed75888374e1 (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Made available in DSpace on 2020-04-22T21:54:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pioltine_em_dr_bot_par.pdf: 1996952 bytes, checksum: 903b691c4491fd62549bd35c1c325aee (MD5) Previous issue date: 2020-02-20 Rejected by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: problema 1: capa Verifique nas normas do seu programa de pós se não é necessário incluir os símbolos da Universidade, da Faculdade e do seu programa de pós no alto da capa. Se sim, incluir. Se não, desconsidere essa observação. Problema 2: elementos pré-textuais -agradecimentos e epígrafe são colocados antes do resumo e abstract - o termo índice deve ser substituído por Sumário Problema 3: Financiamento CAPES No formulário de submissão consta a Capes como agência financiadora do seu projeto. No arquivo submetido não localizei uma agradecimento a esta. Isso é uma exigência das agências de fomento. E a Capes sugere que o agradecimento seja feito da seguinte maneira: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Assim que tiver efetuado as correções submeta o arquivo, em formato PDF, novamente. Agradecemos a compreensão. on 2020-04-15T14:30:53Z (GMT) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Embora estágios iniciais de embriões de mamíferos tenham aparentemente uma grande plasticidade, eles, assim como o oócito em maturação, são bastante sensíveis a estresses exógenos. Responder a esses estresses é uma parte vital da fisiologia celular. Cada vez mais é aparente que um dos principais mecanismos, para iniciar a resposta celular a uma variedade de estressores exógenos, reside no retículo endoplasmático (RE). O RE é uma importante organela responsável pela síntese, processamento e transporte de proteínas e lipídeos. No entanto e in vitro, a perturbação do microambiente do RE pode causar alterações na estrutura das proteínas levando ao acúmulo de proteínas com o incorreto dobramento, uma condição denominada estresse do RE. Dependendo da intensidade do estresse, o RE pode desencadear a apoptose pela Unfolded Protein Response. Em várias espécies, estudos observaram uma melhoria da competência do oócito e no desenvolvimento do embrião quando foram adicionados inibidores do estresse do RE no meio de maturação e/ou meio de cultivo in vitro (CIV). Dentre os inibidores do estresse do RE, o ácido tauroursodesoxicólico (TUDCA) se mostrou benéfico na produção in vitro de embriões. Entretanto, pouco é conhecido sobre o seu efeito na maturação oocitária e no desenvolvimento do embrião bovino in vitro. Portanto, os objetivos gerais desta Tese foram: Capítulo 1 - investigar o efeito da adição de TUDCA durante a maturação in vitro (MIV) sobre a competência do oócito e do embrião [maturação nuclear, atividade mitocondrial, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), formação de pro núcleo, formação de blastocisto e abundância de transcritos em oócitos e embriões] e Capítulo 2 - investigar o efeito da adição de TUDCA durante o CIV sobre a competência embrionária e a criotolerância do embrião (cinética de eclosão e abundância de transcritos de embriões antes e após a vitrificação). A adição de TUDCA na MIV não melhorou a competência oocitária. Entretanto, a adição de 200 µM de TUDCA pareceu aliviar o estresse do RE reduzindo a produção de ERO no oócito e aumentando a abundância de transcritos relacionados positivamente com a defesa antioxidante do oócito e do embrião. Contrariamente, a adição de 1.000 µM de TUDCA na MIV pareceu ser tóxica para o oócito e diminuiu a taxa de maturação nuclear bem como a atividade mitocondrial. Além disso, houve um aumento da abundância de transcritos pró-apoptóticos no oócito. Quando o TUDCA foi suplementado no CIV não houve melhora da competência embrionária. De forma semelhante que na MIV, a adição de 1.000 µM de TUDCA no CIV pareceu ser tóxica para o embrião e diminuiu a taxas de blastocisto eclodido. De modo complementar, houve um aumento da abundância de transcritos relatados negativamente com o estresse do RE, o estresse oxidativo, o metabolismo lipídico e a sobrevivência celular. Entretanto, a adição de 200 µM de TUDCA no CIV pareceu aliviar o estresse do RE em embriões submetidos à vitrificação. Com isso, houve o aumento da taxa de embrião eclodido após o aquecimento. Além disso, nos blastocistos eclodidos pós-aquecimento foi observada uma redução da abundância de transcritos relacionados negativamente com o estresse do RE e um aumento daqueles relacionados positivamente com o mecanismo antioxidante e o desenvolvimento embrionário. Although early stages of mammalian embryos appear to retain great plasticity, they and maturing oocytes are quite sensitive to exogenous stresses. Responding to those stresses is a vital part of cellular physiology, and it is increasingly apparent that one of the main mechanisms for initiating that response is based on the endoplasmic reticulum (ER). ER is an important organelle responsible for the synthesis, processing, folding and transport of proteins and lipids. However, in vitro, the disturbance of the ER microenvironment can cause changes in the structure and folding of proteins leading to the accumulation of misfolding proteins, a condition called ER stress. Depending on the intensity of the stress, the ER can trigger apoptosis by Unfolded Protein Response. In several species, studies have reported an improvement in oocyte and embryo competence when ER stress inhibitors have been added to the in vitro maturation (IVM) medium and/or in vitro culture (IVC) medium. Among the ER stress inhibitors, tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) has been shown to be beneficial in in vitro embryo production. However, little is known about TUDCA’s effect on oocyte maturation and the development of bovine embryo in vitro. Therefore, the main objectives of this Thesis were: Chapter 1 - to investigate the effect of adding different TUDCA concentrations during IVM on the oocyte and embryo competence [nuclear maturation, mitochondrial activity, reactive oxygen species (ROS) production, pronuclei formation, blastocyst formation and transcripts abundance in oocytes and embryos]; and Chapter 2 – to investigate the effect of adding different TUDCA concentrations during IVC on embryo competence and embryo cryotolerance (hatching kinetics and transcripts abundance in embryo before and after the vitrification). The TUDCA addition to the IVM did not improve oocyte competence. However, the 200 µM of TUDCA appeared to relieve ER stress and reduced the ROS production in the oocyte. Concomitantly, there was an increasing of the transcripts abundance positively reported to the antioxidant defense in the oocyte and embryo. In contrast, the 1,000 µM of TUDCA appeared to be toxic to the oocyte by decreasing the nuclear maturation rate and mitochondrial activity in the oocyte. Moreover, there was an increasing of the pro-apoptotic transcripts’ abundance in the oocyte. When TUDCA was supplemented in IVC there was no improvement in embryo competence. As in IVM, the 1,000 µM of TUDCA appeared to be toxic to the embryo - decreasing the hatched blastocyst rate and increasing the transcripts’ abundance negatively reported in ER stress, oxidative stress, lipid metabolism and cell survival. However, the 200 µM of TUDCA addition in the CIV seemed to relieve ER stress in the embryos subjected to vitrification, increasing the hatched embryo rate post-warming. In addition, in hatched blastocysts post-warming it was observed a reduction of the transcripts’ abundance negatively reported to the ER stress and an increasing of those positively reported to the antioxidant mechanism and the embryo development. CAPES: 001

A alta pressão gasosa (HGP, do inglês high gaseous pressure) tem sido descrita como um agente estressante capaz de induzir respostas ao estresse subletal, fornecendo proteção celular e estímulos positivos a desafios subsequentes, como a criopreservação, produção in vitro de embriões (PIVE) , entre outras biotécnicas da reprodução, embora os mecanismos celulares, a modulação epigenética e as modificações no padrão de expressão gênica envolvidos ainda não estejam totalmente elucidados. Este princípio foi investigado em gametas bovinos e embriões murinos no presente trabalho. Foram realizados dois experimentos independentes. No primeiro, avaliou-se o efeito da exposição de oócitos bovinos no estádio de vesículas germinativa à HGP na eficiência e cinética de desenvolvimento da PIVE por fecundação in vitro (FIV). Os resultados revelaram que oócitos expostos a HGP em temperatura ambiente apresentaram taxa de maturação in vitro (MIV) e cinética de desenvolvimento até o estádio de blastocisto semelhantes ao controle mantido em condições ideais durante o tratamento do grupo experimental, diferentemente do observado no grupo com CCOs mantidos em temperatura ambiente durante a exposição à HGP. Em um segundo experimento, observou-se as alterações no padrão de expressão gênica de blastocistos murinos expostos previamente à alta pressão gasosa no estádio de embrião de 8-células, bem como se este desafio alterava a taxa de sobrevivência destes blastocistos após serem submetidos ao processo de criopreservação. A análise do padrão de transcrição revelou que um gene associado ao estresse oxidativo (Sod2) teve sua expressão aumentada, enquanto genes de proliferação e desenvolvimento (Igf2 e Igf2R) tiveram sua expressão reduzida, quando comparados com os embriões no estádio de 8-células, embora a relação Igf2/Igf2R não demonstrou ser afetada. O tratamento por HGP mostrou-se eficiente no aumento da taxa de sobrevivência de blastocistos após a criopreservação. Os experimentos permitiram concluir que a resposta ao estresse subletal estimulada pela HGP é eficiente na melhora da performance de gametas femininos e embriões submetidos a novas situações estressantes. High gaseous pressure (HGP) has been described as stressor, providing cell protection and positive stimuli to subsequent challenges like cryopreservation, embryo in vitro production (IVP), among other reproduction biotechnologies, although cells mechanisms, epigenetic modulation and transcriptional modifications are not totally elucidated. This principle was investigated in bovine gametes and murine embryos in this report at two independent studies. First, the effect of bovine oocyte exposure to HGP in germinal vesicle stage was evaluated to efficiency and development kinect of IVP by in vitro fertilization (IVF). Results showed that oocytes exposed to HGP at room temperature had in vitro maturation (IVM) rate and developmental kinect to reach the blastocyst stage similar to control group kept in ideal conditions during experimental group treatment, differently that what was observed in the group with COCs just kept at room temperature during HGP exposure. In the second experiment, modifications in transcriptional response were observed in murine blastocysts previously exposed to HGP when embryo 8-cells stage, as well if this challenge modified survival rate of this blastocysts after cryopreservation procedures. The analysis of the transcriptional pattern revealed that a gene associated to oxidative stress (Sod2) was upregulated, while genes of proliferation and development (Igf2 and Igf2R) were downregulated, when compared with 8-cells embryos, even though the ratio Igf2/Igf2R appeared not be affected. HGP treatment showed to be efficient to improve blastocyst survival rate to cryopreservation. The experiments enable inferring that subletal response stimulated by HGP was efficient to enhance performance of female gametes and embryos exposed to new stressor situations.

The increase of the world population generates the need to raise the production of food of vegetal and animal origin. In Brazil, livestock farming has evolved, demonstrating the important role of the country in the production of food. In this way, researchers of this productive chain have been looking for technologies related to production and reproduction, above all, to the use of reproduction biotechnologies, seeking to increase the production of different bovine breeds. Thus, the objective of this research was to investigate the efficacy of ovarian FSH super stimulation in bovine Wagyu oocyte donor females on follicular dynamics and in vitro embryo production. Twelve Wagyu animals, aged 12 to 24 months, randomly distributed in a crossover design were used in two groups: Group 1= animals not stimulated with FSH and Group 2= animals stimulated with FSH. The follicular, oocyte and embryonic variables were evaluated. It was observed that ovarian overstimulation in Wagyu oocyte donor cows with FSH improved the mean and large follicles but reduced the rate of oocyte recovery and, despite the best percentage of viable oocytes, there was no improvement in the amount of embryos produced in vitro. El aumento de la población mundial crea la necesidad de incrementar la producción de alimentos de origen vegetal y animal. En Brasil, la ganadería ha evolucionado, lo que demuestra el importante papel del país en la producción de alimentos. Así, los investigadores de esta cadena productiva han estado buscando tecnologías relacionadas con la producción y la reproducción, sobre todo, el uso de biotecnologías de reproducción, buscando incrementar la producción de diferentes razas bovinas. Por lo tanto, el objetivo de esta investigación fue investigar la eficacia de la superestimulación de la FSH en hembras bovinas donantes de ovocitos Wagyu sobre la dinámica folicular y la producción de embriones in vitro. Se utilizaron doce animales Wagyu, de edades comprendidas entre 12 y 24 meses, distribuidos aleatoriamente en un diseño cruzado en dos grupos: Grupo 1 = animales no estimulados con FSH y Grupo 2 = animales estimulados con FSH. Se evaluaron variables foliculares, ovocitarias y embrionarias. Se observó que la superestimulación ovárica con FSH en vacas Wagyu donantes de ovocitos aumentó el número de folículos medianos y grandes, pero redujo la tasa de recuperación de ovocitos y, a pesar del mejor porcentaje de ovocitos viables, no hubo mejoría en el número de embriones producidos in vitro. O aumento da população mundial gera a necessidade de elevar a produção de alimentos de origem vegetal e animal. No Brasil, a pecuária tem evoluído, demonstrando o importante papel do país na produção de alimentos. Dessa forma, pesquisadores dessa cadeia produtiva têm buscado tecnologias relacionadas à produção e reprodução, sobretudo, ao uso de biotecnologias de reprodução, buscando aumentar a produção de diferentes raças bovinas. Assim, o objetivo desta pesquisa foi investigar a eficácia da superestimulação com FSH em fêmeas bovinas doadoras de ovócitos da raça Wagyu sobre a dinâmica folicular e a produção de embriões in vitro. Doze animais Wagyu, com idades entre 12 e 24 meses, distribuídos aleatoriamente em delineamento crossover foram utilizados em dois grupos: Grupo 1= animais não estimulados com FSH e Grupo 2= animais estimulados com FSH. Foram avaliadas as variáveis foliculares, oocitárias e embrionárias. Observou-se que a superestimulação ovariana com FSH em vacas Wagyu doadoras de oócitos aumentou o número de folículos médios e grandes, mas reduziu a taxa de recuperação de oócitos e, apesar da melhor porcentagem de oócitos viáveis, não houve melhora na quantidade de embriões produzidos in vitro.

Durante el estrés hipotérmico los espermatozoides de cuy conservan sus patrones de capacitación espermática, hiperactivación, reacción del acrosoma y fecundación in vitro El piruvato, componente del medio de cultivo San Marcos (SM), sería la fuente energética preferencial para mantener la supervivencia espermática en estrés hipotérmico prolongado, a lo mejor, regulando el metabolismo oxidativo en el espermatozoide. De la misma manera se constituiría en el sustrato ideal de la piruvato deshidrogenasa para iniciar la capacitación e hiperactivación cuando los espermatozoides son incubados a 37°C. El imidazol provoca reacción acrosómica espontánea en los espermatozoides hiperactivos y permite que estos puedan interaccionar con ovocitos maduros, fecundarlos e iniciar el desarrollo embrionario temprano hasta blastocisto. La madurez ovocitaria se consiguió cultivando Complejos Ovocito-Cumulo (COCs) en el medio North Carolina State University 23 (NCSU-23), usado por primera vez para cuy En este trabajo se demuestra que la hipotermia prolongada a 5°C en un medio químicamente definido, SM, no afecta los procesos espermáticos fundamentales para la adquisición de la capacidad fértil del espermatozoide de cuy.