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Organophosphorus pesticides bring significant improvements in agriculture, but their toxicity causes environmental and health negative impacts. The aim of this work was the development of robust biocatalysts to be applied in bioremediation. Four fungi were evaluated as hydrolase sources capable of degrading organophosphorus pesticides: Aspergillus niger, Fusarium sp., Penicillium chrysogenum, and Penicillium nalgiovense. The hydrolysis rates of methyl paraoxon obtained under acidic conditions were in the range of 10 to 21 mg L

To evaluate in silico and at the serological level the antigenic potential of the recombinant extracellular domain of the lipopolysaccharide assembly protein - D (LptD) of Bartonella bacilliformis (dexr_LptD).Through in silico analysis, we selected a B. bacilliformis protein with antigenic and immunogenic potential. The selected protein gene was cloned into Escherichia coli TOP10 and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. Recombinant protein was expressed using isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) and induction conditions were optimized. Finally, it was purified with Ni-IDA resin (His60 Ni Superflow) and a Western Blot assay was conducted.In silico, the selected protein was LptD because it is located in the outer membrane and is antigenic and immunogenic. Optimized conditions for dexr_LptD induction were 0.5 mM IPTG, 16 hours, TB (Terrific Broth) medium, 3% (v/v) ethanol, 28 ºC, OD600: 1-1.5 and 200 rpm. Purification was carried out under denaturating conditions on a small scale and we obtained 2.6 μg/mL of partially purified dexr_LptD. The Western Blot assay showed a positive reaction between the sera from patients with Carrión's Disease and dexr_LptD, which shows the antigenicity of dexr_LptD.The dexr_LptD shows antigenicity both in silico and at the serological level, these results are the basis for further studies on vaccine candidates against Carrion's Disease.Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD).Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una proteína de B. bacilliformis con potencial antigénico e inmunogénico. El gen de la proteína seleccionada se clonó en Escherichia coli TOP10 y se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. La proteína recombinante fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se optimizaron las condiciones de inducción. Por último, se purificó con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) y se realizó un ensayo de Western Blot.In silico, la proteína seleccionada fue LptD por estar localizada en la membrana externa y ser antigénica e inmunogénica. Las condiciones optimizadas para la inducción del dexr_LptD fueron 0,5 mM IPTG, 16 h, medio TB (Terrific Broth), etanol al 3% (v/v), 28 ºC, OD600: 1-1,5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes a pequeña escala y se obtuvo 2,6 µg/mL de dexr_LptD parcialmente purificada. El ensayo de Western Blot mostró una reacción positiva entre los sueros provenientes de pacientes con la enfermedad de Carrión y dexr_LptD, ello evidencia la antigenicidad del dexr_LptD.El dexr_LptD muestra antigenicidad in silico y a nivel serológico, estos resultados son base para posteriores estudios sobre candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión.

Objetivos. Diseñar y evaluar una proteína multiepítope como candidato a vacuna contra la enfermedad de Carrión. Materiales y métodos. Mediante herramientas bioinformáticas se seleccionó epítopes de proteínas de membrana externa y se diseñó una proteína multiepítope. El gen de la proteína multiepítope fue subclonado en el plásmido de expresión pET28b y transformado en E. coli BL21 pLys. La proteína multiepítope fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido y purificada usando resina. Esta proteína purificada fue utilizada para inmunizar ratones BALB/c y se obtuvo anticuerpos policlonales. Se realizaron ensayos de invasión in vitro usando una cepa de Bartonella bacilliformis (B. bacilliformis) a eritrocitos humanos. Resultados. La proteína multiepítope M1 presenta epítopes conservados entre aislamientos de B. bacilliformis, no tóxicos, no homólogos a proteínas humanas y superficiales. Los ratones inmunizados presentaron niveles de anticuerpos IgG capaces de reducir in vitro la tasa de invasión de B. bacilliformis a eritrocitos humanos. Conclusiones. La proteína multiepítope M1 podría servir como candidato a vacuna contra la enfermedad de Carrión; sin embargo, se requiere de más estudios para caracterizar el uso de este antígeno como vacuna.

One of the biggest challenges during the pandemic has been obtaining and maintaining critical material to conduct the increasing demand for molecular tests. Sometimes, the lack of suppliers and the global shortage of these reagents, a consequence of the high demand, make it difficult to detect and diagnose patients with suspected SARS-CoV-2 infection, negatively impacting the control of virus spread. Many alternatives have enabled the continuous processing of samples and have presented a decrease in time and cost. These measures thus allow broad testing of the population and should be ideal for controlling the disease. In this sense, we compared the SARS-CoV-2 molecular detection effectiveness by Real time RT-PCR using two different protocols for RNA extraction. The experiments were conducted in the National Institute of Health (INS) from Peru. We compared Ct values average (experimental triplicate) results from two different targets, a viral and internal control. All samples were extracted in parallel using a commercial kit and our alternative protocol–samples submitted to proteinase K treatment (3 μg/μL, 56°C for 10 minutes) followed by thermal shock (98°C for 5 minutes followed by 4°C for 2 minutes); the agreement between results was 100% in the samples tested. In addition, we compared the COVID-19 positivity between six epidemiological weeks: the initial two in that the Real time RT-PCR reactions were conducted using RNA extracted by commercial kit, followed by two other using RNA obtained by our kit-free method, and the last two using kit once again; they did not differ significantly. We concluded that our in-house method is an easy, fast, and cost-effective alternative method for extracting RNA and conducing molecular diagnosis of COVID-19.

To design and assess a multiepitopic protein as a candidate for a vaccine against Carrion disease.Using bioinformatics tools, epitopes of external membrane proteins were selected and a multiepitopic protein was designed. The multiepitopic protein gene was subcloned into the expression plasmid pET28b and transformed into E. coli BL21 pLys. The multiepitopic protein was expressed using isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside and purified using resin. This purified protein was used to immunize BALB/c mice obtaining polyclonal antibodies. In vitro invasion assays were conducted using a strain of Bartonella bacilliformis (B. bacilliformis) in human red blood cells.The multiepitopic protein M1 presents preserved epitopes between isolates of B. bacilliformis with are non-toxic, and not homologous to human and surface proteins. Immunized mice presented IgG antibody levels capable of reducing in vitro the rate of invasion of B. bacilliformis into human red blood cells.Multiepitopic protein M1 may serve as a candidate for a Carrion disease vaccine; however, more studies are needed to characterize the use of this antigen as a vaccine.Diseñar y evaluar una proteína multiepítope como candidato a vacuna contra la enfermedad de Carrión.Mediante herramientas bioinformáticas se seleccionó epítopes de proteínas de membrana externa y se diseñó una proteína multiepítope. El gen de la proteína multiepítope fue subclonado en el plásmido de expresión pET28b y transformado en E. coli BL21 pLys. La proteína multiepítope fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido y purificada usando resina. Esta proteína purificada fue utilizada para inmunizar ratones BALB/c y se obtuvo anticuerpos policlonales. Se realizaron ensayos de invasión in vitro usando una cepa de Bartonella bacilliformis (B. bacilliformis) a eritrocitos humanos.La proteína multiepítope M1 presenta epítopes conservados entre aislamientos de B. bacilliformis, no tóxicos, no homólogos a proteínas humanas y superficiales. Los ratones inmunizados presentaron niveles de anticuerpos IgG capaces de reducir in vitro la tasa de invasión de B. bacilliformis a eritrocitos humanos.La proteína multiepítope M1 podría servir como candidato a vacuna contra la enfermedad de Carrión; sin embargo, se requiere de más estudios para caracterizar el uso de este antígeno como vacuna.

A Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) method was developed to detect Zika. The primers were designed based on the NS5 region of 64 complete genomes. Lyophilized LAMP reagent was used. Initially, seven different arboviruses were tested and only Zika samples tested positive. Additionally, serial dilutions of one of Zika's RNA were compared using RT-LAMP and qRT-PCR, demonstrating that RT-LAMP is 1,000 times more sensitive. We also evaluated 300 serum samples with RT-LAMP comparing the results with standard qRT-PCR methods, and we obtained a 99.3% sensitivity, 100% specificity, 100% positive predictive value, and 99.3% negative predictive value. In conclusion, this method provides a low-cost, high-performance, viable, and reliable alternative for the rapid diagnosis of Zika in primary health-care facilities.Se desarrolló un método de amplificación isotérmica mediada en lazo de transcriptasa inversa (RT-LAMP) para detectar Zika. Los primers se diseñaron basándose en la región NS5 de 64 genomas completos. Se usó reactivo LAMP liofilizado. Inicialmente, se probaron siete arbovirus diferentes y solo las muestras de Zika resultaron positivas. Además, las diluciones seriadas de una de los ARN de Zika se compararon mediante RT-LAMP y qRT-PCR, demostrando que RTLAMP es 1000 veces más sensible. También se evaluó 300 muestras de suero usando RT-LAMP y los resultados se compararon con los métodos de qRT-PCR estándar y obtuvimos un 99,3% (IC95%: 97,7 - 100,0) de sensibilidad, 100% (IC95%: 99,7 - 100,0) de especificidad, 100% (IC95%: 99,7 -100,0) de valor predictivo positivo y 99,3% (IC95%: 97,7 - 100,0) de valor predictivo negativo. En conclusión, este método brinda una alternativa de bajo costo, alto rendimiento, viabilidad y confiabilidad para el diagnóstico rápido de Zika en instalaciones de atención primaria de salud.

We assessed in vivo the anti-inflammatory activity of two Cat's claw bark extracts, by comparing a spray-dried hydroalcoholic extract against an aqueous freeze-dried extract, to determine which extract was more effective. We used the carrageenan-induced paw edema model in mice. In addition, to assess the molecular mechanism of action, we determined the inhibition of NF-kappa B through the Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) and the effects on cycloxygenase-1 and -2. Results showed that the anti-inflammatory activity was significantly higher using the hydroalcoholic compared with the aqueous extract (P

The highly conserved untranslated regions of the hepatitis C virus (HCV) play a fundamental role in viral translation and replication and are therefore attractive targets for drug development. A set of modified DNAzymes carrying (2′R)-, (2′S)-2′-deoxy-2′-C-methyl- and -2′-O-methylnucleosides at various positions of the catalytic core were assayed against the 5′-internal ribosome entry site element (5′-IRES) region of HCV. Intracellular stability studies showed that the highest stabilization effects were obtained when the DNAzymes′ cores were jointly modified with 2′-C-methyl- and 2′-O-methylnucleosides, yielding an increase by up to fivefold in the total DNAzyme accumulation within the cell milieu within 48 h of transfection. Different regions of the HCV IRES were explored with unmodified 10–23 DNAzymes for accessibility. A subset of these positions was tested for DNAzyme activity using an HCV IRES-firefly luciferase translation-dependent RNA (IRES-FLuc) transcript, in the rabbit reticulocyte lysate system and in the Huh-7 human hepatocarcinoma cell line. Inhibition of IRES-dependent translation by up to 65 % was observed for DNAzymes targeting its 285 position, and it was also shown that the modified DNAzymes are as active as the unmodified one. Fil: Robaldo, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina Fil: Berzal Herranz, Alfredo. Instituto de Parasitología y Biomedicina “López-Neyra”; España Fil: Montserrat, Javier Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina. Universidad Nacional de General Sarmiento. Instituto de Ciencias; Argentina Fil: Iribarren, Adolfo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Area Química. Laboratorio de Biotransformaciones; Argentina

El presente texto tiene como propósito dar cuenta de las voces, actitudes y percepciones manifestadas durante el desarrollo de una actividad previa a la maratón de lectura realizada en el colegio durante el mes de septiembre de 2011. La propuesta consistió en disponer en los pasillos de la escuela de una mesa de lectura. Sobre la mesa se colocaron textos literarios diversos con el fin de que los alumnos los eligieran y se los llevaran a sus casas para leerlos. Resulta interesante señalar que, si bien la actividad fue positiva, fueron las palabras, los silencios y las acciones de la comunidad escolar frente a los objetos libros y al espacio en sí mismo lo que me motivó al registro de esta experiencia que quisiera compartir., Sección: La gambeta didáctica. Propuesta de enseñanza., Departamento de Letras

E. coli BL21 synthesized purine nucleosides from pyrimidine ones. A 94% yield of adenosine from uridine was reached within 1 h. Fil: Lewkowicz, Elizabeth Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Martínez, Natalia. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Rogert, María C.. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Porro, Silvia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Iribarren, Adolfo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina

This work contains the first description of a guanidino kinase in a flagellar unicellular parasite. The enzyme phosphorylates L-arginine and was characterized in preparations from Trypanosoma cruzi, the ethiological agent of Chagas' disease. The activity requires ATP and a divalent cation. Under Standard assay conditions (1 mM L-arginine), the presence of 5-fold higher concentrations of canavanine or histidine produced a greater than 50% enzyme inhibition. The base sequence of this enzyme revealed an open reading frame of 357 amino acids and a molecular weight of 40,201. The amino acid sequence shows all of the characteristic consensus blocks of the ATP:guanidino phosphotransferase family and a putative 'actinin-type' actin-binding domain. The highest amino acid identities of the T. cruzi sequence, about 70%, were with arginine kinases from Arthropoda. Southern and chromosome blots revealed that the kinase is encoded by a single-copy gene. Moreover, Northern blot analysis showed an mRNA subpopulation of about 2.0 kilobases, and Western blotting of T. cruzi-soluble polypeptides revealed a 40-kDa band. The finding in the parasite of a phosphagen and its biosynthetic pathway, which are totally different from those in mammalian host tissues, points out this arginine kinase as a possible chemotherapy target for Chagas' disease. Fil: Pereira, Claudio Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina Fil: Alonso, Guillermo Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Paveto, Maria Cristina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Iribarren, Adolfo Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Cabanas, María Laura. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Torres, Hector Norberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Flawia, Mirtha Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

Lipase-catalysed alcoholysis and hydrolysis of 2',3',5-tri-O- acetyluridine (1a) and 2',3',5'-tri-O-acetyl-2'-C-methyluridine (1b) were studied. Conditions for full and regioselective deacetylation of 1a and 1b are shown in the present work. New compound 2',3'-di-O-acetyl-2'-C- methyluridine (3b) was prepared by regioselective lipase-catalysed deacetylation. Fil: Iglesias, Luis Emilio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Zinni, Maria Alejandra. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina Fil: Gallo, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina Fil: Iribarren, Adolfo Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes; Argentina

El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los componentes orgánicos de Bauhinia candicans Benth. (Familia: Legwmlnosae). Esta planta argentina es ampliamente conocida en la medicina popular ya que se le atribuyen propiedades antidiabéticas. En la presente tesis se desarrollan los siguientes temas: 1°) Introducción a la familia Leguminosae teniendo en cuenta los aspectos botánicos y fitoquímicos de ésta describiéndose, particularmente, el género Bauhinia. 2°) Análisis de los espectros de masas de los 3-cetoesteroides mono-y di-insaturados, remarcando las fragmentaciones diagnóstico que permiten determinar la ubicación de la/s insaturacion/es. Se analizan, además, en forma genérica los espectros de masas, 1H-RMN y 13C-RMN que son de utilidad para la elucidación estructural de los glicósidos de esteroles. Lo desarrollado en el punto 2° contribuye al esclarecimiento de los temas principales tratados en la discusión de los resultados obtenidos en esta tesis. 3°) Acción hipoglucemiante; se realiza una breve introducción sobre las causas y consecuencias de la diabetes, asi como también sobre los medios disponibles para contrarrestar sus efectos. Se incluye, también, una corta reseña histórica sobre productos naturales hipoglucemiantes. 4°) Discusión de los resultados obtenidos en esta tesis, comprendiendola identificación de los componentesde los extractos de éter de petróleo y etanólico de la especie vegetal antes mencionada. Se indican las técnicas separativas utilizadas en las etapas de aislamiento y purificación, analizándose en cada caso los espectros UV, IR, EM, 1H-RMN y 13C-RMN y/o los métodos químicos que condujeron a la determinación estructural de: a) triacontanol I b) alcoholes lineales de C26H540 a C31H64O c) estigmasta-1,3,5—trieno II d) estigmasta-3,5-dieno III e) campesterol IV f) estigmasterol V g) sitosterol VI h) estigmast-4-en-3-ona VII i) estigmasta-4,6-dien-3-ona VIII j) estigmasta-3,5-dien-7-ona IX k) hidrocarburos lineales de C21H44 a C33H68 l) sitosterol-3-O-β—D-xilopiranósido X m) sitosterol-3-O-α-D-riburonofuranósido XI n) sitosterol-3-O-β-D-glucopiranósido XII ñ) canferol-3-O-β-rutinósido XIII o) canferol-3-O-β-rutinósido-7-0-α-L-ramnopiranósido XIV p) colina XV q) trigonelina XVI r) los aminoánidos: ácido aspártico XVII, treonina XVIII, serina XIX, ácido glutámico XX, prolina XXI;, glicina XXII, alanina XXIII, valina XXIV, metionina XXV, isoleucina XXVI, leucina XXVII, tirosina XXVIII, fenilalanina XXIX e histidina XXX. Los glicósidos de esteroles X y XI no habian sido desCriptos previamente,y del cetoesteroide VIII; se conocen sólo dos informes previos a este trabajo. Se realizó, además, el estudio conformacional del azúcar del glicósido Xb (X acetilado). En el extracto etanólico de flores de Bauhinia candicans, además de los glicósidos de flavonoles XIII y XIV, se identificó a: s) D-inositol-3-metiléter XXXI;. Se realizó, también, un estudio quimico comparativo entre las especies B. candicans, B. variegata y B. forficata, observándose gran similitud entre las mismas. Además, de los compuestos mencionados anteriormente, este estudio quimico permitió caracterizar a: t) colesterol XXXII u) brasicasterol XXXIII Por último se describen los ensayos realizados para determinar la acción antimicrobiana de los extractos de éter de petróleo y etanólico de B. candicans. Se analiza además, la actividad hipoglucémica e hipocolesterolémica del extracto acuoso, cuyo componente trigonelina (XVI) demostró ser responsable de estos efectos. 5°) Parte experimental del trabajo realizado, que incluye los datos numéricos de los espectros de cada uno de los componentes identificados. Fil: Iribarren, Adolfo Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Carpeta 603, inéditos SEGEMAR Fil: Mezzetti, Adolfo Marcelo. Ministerio de Economía. Secretaría de Industria y Minería. Dirección Nacional de Geología y Minería; Argentina.

Fil: Mezzetti, A. M. Gobierno Argentino. Dirección General de Fabricaciones Militares. Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo; Argentina

Carpeta 585, inéditos SEGEMAR Fil: Reverberi, Oscar. Ministerio de Industria y Comercio. Secretaría de Minería. Dirección Nacional de Geología y Minería; Argentina. Fil: Mezzetti, Adolfo M. Ministerio de Industria y Comercio. Secretaría de Minería. Dirección Nacional de Geología y Minería; Argentina.

Fil: Mezzetti, A. Ministerio de Economía de la Nación. Secretaría de Estado de Industria y Minería. Subsecretaría de Minería; Argentina.

Fil: Mezzetti, A.M.; Argentina.

Fil: Mezzetti, Adolfo Marcelo. Ministerio de Defensa. Dirección General de Fabricaciones Militares; Argentina / Programa de las Naciones Unidas para el Desarrollo y Argentina

Fil: Mezzetti, A. M. Ministerio de Economía de la Nación. Secretaría de Estado de Industria y Minería. Subsecretaría de Minería. Instituto Nacional de Geología Minera; Argentina

Fil: Mezzetti, A.M. Ministerio de Economía de la Nación. Secretaría de Estado de Industria y Minería. Subsecretaría de Minería; Argentina

Fil: Mezzetti, A. M. Ministerio de Economía de la Nación. Secretaría de Estado de Industria y Minería. Subsecretaría de Minería; Argentina

Carpeta 593, inéditos SEGEMAR Fil: Mezzetti, Adolfo Marcelo. Ministerio de Economía. Secretaría de Industria y Minería. Dirección Nacional de Geología y Minería; Argentina.

Las fosfotriesterasas son esterasas capaces de escindir el enlace P-O y han sido halladas en mamíferos, peces, aves, moluscos y bacterias. Estas enzimas demostraron ser biocatalizadores útiles en la degradación de compuestos organofosforados, siendo estos ampliamente utilizados en la actualidad como pesticidas en agricultura, en jardines y en la industria veterinaria. En particular, en nuestro país el organofosforado clorpirifós es el segundo pesticida más utilizado. Si bien estos pesticidas son muy eficientes, son también altamente tóxicos para mamíferos. Así, la intoxicación por organofosforados se ha convertido en un problema importante en todo el mundo. Considerando lo antes dicho, en el presente trabajo de tesis doctoral se propuso como primer objetivo el desarrollo de un sistema para la biorremediación de aguas contaminadas con pesticidas organofosforados empleando catalizadores con actividad fosfotriesterasa. Por otra parte y desde el punto de vista de la biocatálisis, como las enzimas no están limitadas a su actividad natural, es posible utilizarlas empleando una variedad de sustratos, pudiendo además catalizar las reacciones en ambas direcciones de su equilibrio termodinámico. Es por ello que las fosfotriesterasas pueden ser aplicadas en el sentido sintético para la obtención de fosfotriesteres, siendo de particular importancia los correspondientes derivados de nucleósidos y análogos. Estos compuestos, conocidos como pronucleótidos, son productos farmacológicamente útiles como antivirales y anticancerígenos ya que inhiben enzimas específicas (transcriptasa reversa, ARN replicasa, ADN polimerasa, IMP deshidrogenasa) o actúan como terminadores de cadena en la biosíntesis de ARN o ADN. En este marco, se propuso como segundo objetivo efectuar una primer aproximación a la síntesis de pronucleótidos a través de reacciones biocatalizadas. A continuación se hará un breve resumen de lo desarrollado a lo largo de cada capítulo del presente trabajo de tesis doctoral:En el capítulo 1, se presenta una introducción sobre biocatálisis y biorremediación. Ambas tecnologías tienen en común el empleo de sistemas biológicos para llevar a cabo una biotransformación. En este marco también se describen las fosfotriesterasas, enzimas de interés y objeto de estudio del presente trabajo, como así también los compuestos organofosforados (usos y tipos) y los análogos de nucleósidos. En el capítulo 2, se describen las metodologías desarrolladas para llevar a cabo la búsqueda, estudio e implementación en los procesos biocataliticos de fuentes microbianas con actividad fosfotriesterásica. Adicionalmente, se detallan los métodos de detección, análisis y cuantificación de los sustratos y productos de cada reacción biocatalizada estudiada.En el capítulo 3, se exponen los resultados obtenidos a partir del estudio de la actividad hidrolítica de seis fuentes bacterianas wild type frente a metil paraoxón. También se muestran los resultados de la optimización de las condiciones de reacción de dichos biocatalizadores, a partir de las cuales se evaluó la actividad fosfotriesterásica frente a diferentes sustratos, seleccionando un biocatalizador capaz de degradar cada uno de los compuestos organofosforados propuestos.En el capítulo 4, se presenta un trabajo realizado en colaboración con el laboratorio de LIGBCM-AVI de la Universidad Nacional de Quilmes que permitió la identificación de dos bacterias aisladas de suelo. Posteriormente, aplicando una metodología rápida y sencilla, se describe el estudio y la optimización de las condiciones de reacción, obteniéndose biocatalizadores capaces de degradar eficientemente sustratos más voluminosos como coroxón, cumafós y clorpirifós, para los que las fosfotriesterasas wild type reportadas suelen tener baja actividad hidrolítica.En el capítulo 5, se presentan los resultados del estudio de los extractos enzimáticos provenientes de los microorganismos estudiados en los capítulos 3 y 4. Adicionalmente tanto las células enteras como dichos extractos fueron inmovilizados por atrapamiento en perlas de alginato de calcio. Tras su ensayo en la hidrólisis de compuestos organofosforados, se seleccionó una forma de biocatalizador inmovilizado que fuera capaz de degradar con mayor eficiencia cada uno de dichos compuestos. Asimismo, se emplearon los biocatalizadores seleccionados para la degradación de paraoxón y clorpirifós en un biorreactor del tipo lecho empacado con los que se alcanzó la degradación completa de dichos compuestos en 56 y 17 h respectivamente. Se caracterizaron los biocatalizadores determinado la posible existencia de problemas de transferencia de masa, como así también su reutilización. En cuanto al biorreactor, se determinó la distribución de los tiempos de residencia y tipo de flujo.En el capítulo 6, con la finalidad de hallar nuevas fuentes de fosfotriesterasas, se presenta el estudio de cuatro hongos, los que fueron capaces de degradar metil paraoxón llevando a cabo la reacción en growing. Además, se determinó que las enzimas responsables de dicha hidrólisis eran extracelulares, por lo que se obtuvieron los respectivos extractos enzimáticos, que se concentraron y finalmente liofilizaron, analizándose su actividad. Se optimizaron también las condiciones de reacción en cuanto a la cantidad de biocatalizador y pH del medio. Finalmente, en el capítulo 7, se describe la búsqueda de alternativas para mejorar los rendimientos obtenidos previamente en nuestro laboratorio en la reacción de transesterificación para la síntesis de 5´-dimetilfosfato de inosina usando como biocatalizador la fosfotriesterasa de Brevundimonas diminuta. Se exploró la actividad sintética de Streptomyces setonii (microorganismo wild type) y de los microorganismos fúngicos estudiados en el capítulo 6, utilizando las condiciones puestas a punto en la reacción de hidrólisis. Fil: Santillan, Julia Yamila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. Universidad Nacional de Quilmes. Departamento de Ciencia y Tecnología. Área Química. Laboratorio de Biotransformaciones; Argentina