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Purpose: As a class of psychostimulant drugs, amphetamines are widely abused for their stimulant, euphoric, and hallucinogenic properties. Many of these effects result from acute increases in dopamine and serotonin neurotransmission. Following the onset of these effects, 3,4 methylenedioxymethamphetamine produces persistent damage to dopamine and serotonin nerve terminals, resulting in long-lasting neurotoxicity. The purpose of this investigation was to assess the effects of treatment with low dose of methylenedioxymethamphetamine on retinal function of C57BL/6 mice and its underlying mechanisms. Methods: C57BL/6 mice were divided randomly into two groups (n=10): one group was treated with phosphate buffered saline by intraperitoneal injection daily; the other group was treated with 1 mg/kg methylenedioxymethamphetamine by intraperitoneal injection daily for three months. Electroretinography was used to test retinal function every month. H&E staining and terminal deoxynucleotidyl transferase assay were used to evaluate the retinal morphology and histology. Enzyme-linked immunosorbent assay assays were used to measure markers of oxidative stress and inflammatory factors. Gene and protein expression was detected by real-time PCR and western blot. Results: Three-month treatment with methylenedioxymethamphetamine induced significant retinal dysfunction via photoreceptor cell apoptosis by oxidative stress and inflammatory responses. Conclusions: These results suggest that long-term treatment with methylenedioxymethamphetamine increases inflammatory responses in photoreceptor cells resulting in retinal dysfunction in C57BL/6 mice. Thus, this investigation provides preclinical rationale for the retina damage caused by the methylenedioxymethamphetamine abuse. RESUMO Objetivos: Como uma classe de drogas psicoesti mulantes, as anfetaminas são amplamente usadas por suas propriedades estimulantes, eufóricas e alucinógenas. Muitos desses efeitos resultam de aumentos agudos na neurotransmissão da dopamina e da serotonina. Após o início desses efeitos, a 3,4-metilenedioximetanfetamina produz danos persistentes nos terminais nervosos de dopamina e serotonina, resultando em neurotoxicidade duradoura. O objetivo desta investigação foi avaliar os efeitos do tratamento baixa dose de metilenedioximetanfetamina na função da retina em camundongos C57BL/6 e seus mecanismos subjacentes. Métodos: Camundongos C57BL/6 foram divididos aleatoriamente em dois grupos (n=10): um grupo foi tratado com solução salina tamponada de fosfato por injeção intraperitoneal diária; o outro grupo foi tratado com 1 mg/kg de metilenedioximetanfetamina por injeção intraperitoneal diária durante 3 meses. Eletroretinografia foi utilizada para testar a função da retina a cada mês. A coloração H&E e análise com deoxinucleotidil terminal transferase foram utilizados para avaliar a morfologia e histologia da retina. Testes de imunoabsorção enzimática foram utilizados para medir marcadores de estresse oxidativo e fatores inflamatórios. A expressão de genes e proteínas foi detectada por PCR em tempo real e western blot. Resultados: O tratamento de três meses com metilenedioximetanfetamina induziu disfunção de retina significativa por apoptose de células fotorreceptoras por estresse oxidativo e resposta inflamatória. Conclusões: Estes resultados sugerem que o tratamento a longo prazo com metilenedioximetanfetamina aumenta as respostas inflamatórias em células fotorreceptoras, resultando em disfunção de retina em camundongos C57BL/6. Assim, a investigação foence uma justificação pré-clínica para os danos na retina causados pelo abuso de metilenedioximetanfetamina.

Submitted by DHARA CARLESSO ZAMPIVA (dhara.zampiva@univates.br) on 2019-11-27T18:07:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2019EvandrodaSilvaBarros.pdf: 990805 bytes, checksum: 9a565666068433a95e904b5870afe516 (MD5) Approved for entry into archive by Ana Paula Lisboa Monteiro (monteiro@univates.br) on 2019-12-27T19:36:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 2019EvandrodaSilvaBarros.pdf: 990805 bytes, checksum: 9a565666068433a95e904b5870afe516 (MD5) Made available in DSpace on 2019-12-27T19:36:57Z (GMT). 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Assim, esta dissertação teve objetivo de avaliar os efeitos toxicológicos no sistema reprodutivo de camundongos machos expostos de forma crônica (30 dias) a esse tipo de efluente. Para isso, foram utilizados 40 (quarenta) camundongos Balb/c distribuídos em 04 (quatro) grupos experimentais conforme o grau de contaminação da água de beber, a saber: 0% (controle), 0,1%, 0,5% e 5%. A exposição às diferentes concentrações do efluente ocorreu durante 30 (trinta) dias. Após este período, os machos foram pareados com fêmeas para avaliação de parâmetros de fertilidade. Em seguida, foram eutanasiados para avaliações morfológicas, celulares e moleculares nos tecidos reprodutivos. Para tanto, foram avaliados parâmetros de qualidade seminal. Em relação aos parâmetros físico-químicos avaliados no efluente, ficaram evidentes as altas concentrações de cromo total, disruptor endócrino com potencial de provocar danos à saúde. Os dados obtidos demonstram que os machos expostos a 0,5% e 5% do efluente tiveram alterações morfológicas nos espermetazóides, apresentando principalmente defeitos de cabeça. Os machos do grupos 5% tiveram aumento expressivo na massa corpórea. As fêmeas pareadas com os machos dos respectivos grupos apresentaram redução significativa no peso da placenta. Dessa forma, essa pesquisa demonstra que mesmo em baixas concentrações a exposição a efluentes de curtume pode causar efeitos negativos no sistema reprodutivo de camundongos machos. Isso permite compreender o quanto esse tipo de efluente pode impactar negativamente uma população inteira de mamíferos que dependa de corpos d’água contaminados. Effluents from tanneries have a high polluting load, usually containing substances capable of causing significant changes in the dynamics of small mammal populations, as well as drastic changes in the health of humans that may have contact with this type of waste. Despite restrict legislation, discharges of inadequate standards into water bodies are often discarded. It has recently been shown that contact with tannery effluents in a concentration greater than 5% causes testicular degeneration in rats. These data are an important indicator of the reproductive toxicity of this contaminant, however it is important to define whether even lower concentrations closer to environmental reality have the same effect. Thus, this dissertation aimed to evaluate the toxicological effects on the reproductive system of male mice chronic (30 days) exposed to this type of effluent. For this, 40 (fourteen) Balb / c mice were distributed in 04 (four) experimental groups according to the degree of drinking water contamination, namely: 0% (control), 0.1%, 0.5% and 5% Exposure to different effluent concentrations occurred for 30 (thirty) days. After this period, males were paired with females to evaluate fertility parameters. They were then euthanized for morphological, cellular and molecular evaluations in reproductive tissues. For this, seminal quality parameters were evaluated. Regarding the physicochemical parameters evaluated in the effluent, it was evident the high concentrations of total chromium, endocrine disruptor with potential to cause health damage. The data show that males exposed to 0.5% and 5% of the effluent had morphological changes in spermetazoids, presenting mainly head defects. Males in the 5% group had a significant increase in body mass. Females paired with males of the respective groups showed significant reduction in placental weight. Thus, this research demonstrates that even at low concentrations exposure to tannery effluents can have negative effects on the reproductive system of male mice. This allows us to understand how much this type of effluent can negatively impact an entire mammalian population that depends on contaminated bodies of water.

A inflamação e a angiogênese atuam concomitantimente em diversas doenças crônicas. A maior parte destes processos são mediados através da interação entre a matriz extracelular e os receptores de integrina. A Alternagina-C (ALT-C) é uma proteína tipo desintegrina, derivada do veneno da serpente Bothrops alternatus. Estudos com a ALT-C mostraram efeitos na adesão celular mediada por colágeno tipo I e a capacidade de modular via integrina α2β1 diversos fatores de crescimento. Nosso objetivo foi investigar os efeitos da ALT-C em componentes chaves da angiogênese inflamatória induzida pelo modelo de implantes sintéticos de esponja em camundongos. O tratamento com ALT-C inibiu os principais componentes do tecido fibrovascular (inflamação e angiogênese) induzido pelos implantes sintéticos subcutâneos, e aumentou a fibrogênese. Efeitos anti-inflamatórios foram observados através da inibição de mastócitos e de NAG (atividade de macrófagos), e também pela inibição da citocina TNF-α e das quimiocinas MCP-1 e CXCL-1. A redução do conteúdo de hemoglobina, número de vasos e das concentrações das citocinas VEGF e FGF mostraram que a ALT-C é também anti-angiogênica. Todos essse fatores revelam que a ALT-C é uma forte candidata no desenvolvimento de terapias anti-inflamatórias e antiangiogênicas em processos inflamatórios crônicos. Inflammation and angiogenesis act concomitantly in several chronic diseases. Most of steps of these processes are mediated by integration between extracellular matrix and integrin receptors. Alternagin-C (ALT-C), is a disintegrin-like derived from the venom of Bothrops alternatus. Studies with ALT-C have showed effects in cell adhesion mediated by collagen type I and ability of modulate growth factors associated integrin α2β1. Our aim was to investigate the effects of ALT-C on key components of inflammatory angiogenesis in the murine sponge model. Polyester-polyurethane sponges, used as framework for fibrovascular tissue growth, were implanted in Balb/c mice. Treatment with ALT-C inhibited the main components keys fibrovascular tissue (inflammation and angiogenesis) induced by synthetic subcutaneous implants and also changing the fibrogenic component. Anti-inflammatory effects were observed by inhibition of mast cell and NAG (macrophage activity), and also by the inhibition of cytokines TNF-α and MCP-1 and chemokine CXCL-1. The reduction in hemoglobin content, number of vessels and the concentrations of VEGF and FGF cytokines, have shown that ALT-C is also anti-angiogenic. All these factors show that Alt-C is a strong candidate for the development of anti-inflammatory and anti-angiogenic therapies Dissertação (Mestrado)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Several studies indicate that anxiety and depression may be accompanied by symptoms of severe pain with no precise location or apparent lesions. Several evidences demonstrate that some antidepressive drugs used in the treatment of these emotional disorders are also effective in the relief of pain. The interaction between emotional and sensorial responses is of high relevance for the survival of the species. Several studies have shown that exposure to threatening situations results in behavioral and physiological defense reactions that be accompanied by inhibition of pain. The amygdala, a subcortical nucleus complex, has been shown to be involved in the mechanism of fear-induced antinociception. And it being a complex of interface between the sensorial and emotional stimuli. Evidences have shown that stimulation of this structure can induce fear or anxiety reactions, accompanied by analgesia, thus suggesting its participation in the defense system and nociception modulation.The elevated plus maze (EPM) is an apparatus used to assess rodent anxiety and it is sensitive to anxiolytic and anxiogenic effect of drugs. In this sense, EPM is used to study the neurobiology of antinociception induced by the aversive potential of the open arms experiment. Thus, considering evidences of the antiaversive role of serotonin in the amygdala, observed with chronic treatment with serotonin reuptake inhibitors, this study aimed to evaluate the role of amygdala 5-HT1A and 5-HT2C serotonin receptor subtypes on nociception and antinociception effects of mice exposed to the EPM in this context. For this, 5-HT1A (8-OH-DPAT) and 5-HT2C (MK-212) receptor agonists were microinjected intra-amygdala associated with chronic systemic treatment of fluoxetine in mice. The animals were confined in the enclosed or open arm of the EPM and the number of abdominal writings after the intraperitoneal (i.p.) injection of acetic acid solution was counted. Intra-amygdala treatment with 8-OH-DPAT produced an increase in the number of writhes in both mice that were confined in the open arm and those that were confined in the enclosed arm. However, treatment fluoxetine + 8-OH-DPAT blocked the effect of intra-amygdala injection only for the mice confined in the open arm. Intra-amygdala treatment with MK-212 produced a decrease in the number of writhes only in mice that were confined to the open arm, and the fluoxetine + MK-212 treatment impaired this effect. These results suggest that chronic treatment with fluoxetine reversed the effects produced by the activation of the 5-HT1A and 5-HT2C receptors in the amygdala of mice confined to the EPM. Estudos apontam que quadros de ansiedade e depressão podem ser acompanhados por sintomas de dor intensa sem localização precisa ou lesões aparentes, e diversas evidências demonstram que alguns fármacos antidepressivos utilizados no tratamento destes transtornos emocionais também são eficazes no alívio da dor. Sendo a interação entre estas respostas emocionais e sensoriais de alta relevância para a sobrevivência das espécies, diversos trabalhos têm demonstrado que a exposição a situações ameaçadoras, resulta em reações comportamentais e fisiológicas de defesa que são acompanhadas por inibição da dor. A amídala, um complexo subcortical de núcleos, tem se mostrado envolvida no mecanismo da antinocicepção induzida pelo medo, além de ser um complexo de interface entre os estímulos sensoriais e emocionais, e evidências tem demonstrado que a estimulação desta estrutura pode induzir reações de medo ou ansiedade, acompanhada por analgesia, sugerindo assim sua participação no sistema de defesa e na modulação da nocicepção. Neste sentido, o labirinto em cruz elevado (LCE), um aparato utilizado para avaliar ansiedade em roedores, sensível ao efeito ansiolítico e ansiogênico de drogas, é também utilizado ao estudo da neurobiologia da antinocicepção induzida pelo potencial aversivo da experiência nos braços abertos. Assim, considerando evidências do papel antiaversivo da serotonina na amídala, observado com o tratamento crônico com inibidores da recaptação de serotonina, este estudo teve por objetivo avaliar o papel dos subtipos de receptores serotonérgicos 5-HT1A e 5-HT2C da amídala sobre a nocicepção e antinocicepção de camundongos expostos ao LCE. Para isso, utilizamos administração intra-amídala de agonistas dos receptores 5HT1A (8-OH-DPAT) e 5HT2C (MK-212), após o tratamento sistêmico crônico, de fluoxetina em camundongos. Os animais foram confinados no braço fechado ou aberto do LCE e foi avaliado o número de contorções abdominais após a injeção intraperitonial (i.p.) de solução de acido acético. O tratamento intra-amídala com 8-OH-DPAT produziu um aumento no número de contorções tanto nos camundongos que foram confinados no braço aberto quanto nos que foram confinados no braço fechado. Entretanto, o tratamento fluoxetina+8-OH-DPAT bloqueou esse efeito da injeção intra-amídala somente para os camundongos confinados no braço aberto. O tratamento intra-amídala com MK-212 produziu uma diminuição no número de contorções somente nos camundongos que foram confinados no braço aberto, e o tratamento fluoxetina+MK-212 prejudicou esse efeito. Diante destes resultados, é possível sugerir que o tratamento crônico com a fluoxetina reverte os efeitos produzidos pela ativação dos receptores 5-HT1A e 5-HT2C da amidala de camundongos confinados ao LCE. CAPES: Código de Financiamento 001

C3H/HeJ (C3H) mice are deficient of type I deiodinase (D1), an enzyme that activates thyroid hormone (TH), converting thyroxine (T4) to triiodothyronine (T3). Nevertheless, C3H mice present normal serum T3 and a gross euthyroid phenotype. To investigate if a global D1 deficiency interferes in the TH effects on bone, we compared bone growth, bone mass accrual and bone strength of C3H and C57BL/6J (B6) mice under abnormal TH status. Four-week-old female mice of both strains were grouped as Euthyroid, Hypothyroid (pharmacologically-induced), 1xT4 and 10xT4 (hypothyroid animals receiving 1- or 10-fold the physiological dose of T4 /day/16 weeks). Hypothyroidism and TH excess similarly impaired body weight (BW) gain and body growth in both mice strains. In contrast, whereas hypothyroidism only slightly impaired bone mineral density (BMD) accrual in B6 mice, it severely impaired BMD accrual in C3H mice. No differences were observed in serum and bone concentrations of T3 between hypothyroid animals of both strains. Interestingly, treatment with 10xT4 was less deleterious to BMD accrual in C3H than in B6 mice and resulted in less elevated T3 serum levels in B6 than in C3H mice, which is probably explained by the lower D1 activity in C3H mice. In addition, hypothyroidism decreased bone strength only in C3H but not in B6 mice, while TH excess decreased this parameter in both strains. These findings indicate that D1 deficiency contributes to the TH excess-induced differences in bone mass accrual in C3H vs. B6 mice and suggest that deiodinase-unrelated genetic factors might account for the different skeleton responses to hypothyroidism between strains.

Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) prevails in obesity and is linked to several health complications including dyslipidemia and atherosclerosis. How exactly NAFLD induces atherogenic dyslipidemia to promote cardiovascular diseases is still elusive. Here, we identify Tsukushi (TSK) as a hepatokine induced in response to NAFLD. We show that both endoplasmic reticulum stress and inflammation promote the expression and release of TSK in mice. In humans, hepatic TSK expression is also associated with steatosis, and its circulating levels are markedly increased in patients suffering from acetaminophen-induced acute liver failure (ALF), a condition linked to severe hepatic inflammation. In these patients, elevated blood TSK levels were associated with decreased transplant-free survival at hospital discharge, suggesting that TSK could have a prognostic significance. Gain- and loss-of-function studies in mice revealed that TSK impacts systemic cholesterol homeostasis. TSK reduces circulating HDL cholesterol, lowers cholesterol efflux capacity, and decreases cholesterol-to-bile acid conversion in the liver. Our data identify the hepatokine TSK as a blood biomarker of liver stress that could link NAFLD to the development of atherogenic dyslipidemia and atherosclerosis.

Background: Obesity can be characterized by low-grade chronic inflammation and is associated with an excesso production of reactive oxygen species, factors that contribute to coronary heart disease and other cardiomyopathies. Objective: To verify the effects of resistance exercise training on oxidative stress and inflammatory parameters on mice with obesity induced by a high-fat diet (HFD). Methods: 24 Swiss mice were divided into 4 groups: standard diet (SD), SD + resistance exercise (SD + RE), diet-induced obesity (DIO), DIO + RE. The animals were fed SD or HFD for 26 weeks and performed resistance exercises in the last 8 weeks of the study. The insulin tolerance test (ITT) and body weight monitoring were performed to assess the clinical parameters. Oxidative stress and inflammation parameters were evaluated in the cardiac tissue. Data were expressed by mean and standard deviation (p < 0.05). Results: The DIO group had a significant increase in reactive oxygen species levels and lipid peroxidation with reduction after exercise. Superoxide dismutase and the glutathione system showed no significant changes in DIO animals, with an increase in SD + RE. Only catalase activity decreased with both diet and exercise influence. There was an increase in tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) in the DIO group, characterizing a possible inflammatory condition, with a decrease when exposed to resistance training (DIO+RE). Conclusion: The DIO resulted in a redox imbalance in cardiac tissue, but the RE was able to modulate these parameters, as well as to control the increase in TNF-α levels. Resumo Fundamento: A obesidade pode ser caracterizada por uma inflamação crônica de baixo grau e está associada à produção excessiva de espécies reativas de oxigênio, fatores que contribuem para doenças coronarianas e outras cardiomiopatias. Objetivo: Verificar os efeitos do treinamento resistido sobre os parâmetros de estresse oxidativo e parâmetro inflamatório em camundongos com obesidade induzida por dieta hiperlipídica (DIO). Métodos: 24 camundongos Swiss foram divididos em 4 grupos: dieta padrão (DP), DP + exercício resistido (DP+ER), obesidade induzida por DIO, DIO + ER. Os animais foram alimentados por 26 semanas com DP ou hiperlipídica realizando treinamento resistido nas 8 semanas finais do estudo. Para avaliar parâmetros clínicos foi realizado o teste de tolerância à insulina (TTI) e monitoramento do peso corporal. No tecido cardíaco foram avaliados parâmetros de estresse oxidativo e inflamação. Dados expressos por média e desvio padrão (p < 0,05). Resultados: O grupo DIO teve um aumento significativo nos níveis espécies reativas e peroxidação lipídica com redução após o exercício. A superóxido dismutase e o sistema glutationa não demonstraram alterações importantes nos animais DIO, com elevação perante DP+ER. Somente a atividade da catalase reduziu tanto com influência da dieta como do exercício. Ocorreu um aumento do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α) no grupo DIO, caracterizando um possível quadro inflamatório, com redução quando expostos ao treino resistido (DIO+ER). Conclusão: A DIO ocasionou um desequilíbrio redox no tecido cardíaco, porém o ER foi capaz de modular estes parâmetros, bem como controlar o aumento do TNF-α.

Introduction: Nuocytes play an important role in Type 2 immunity. However, the contribution of ILC2s to allergic rhinitis remains to be clearly elucidated. Objective: To evaluate the role of nuocytes from mesenteric lymph node on allergic responses in mice. Methods: After intraperitoneal administration of interleukin IL-25 and IL-33 to wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- double-deficient mice, nuocytes were purified from the the nasal-associated lymphoid tissue and mesenteric lymph nodes. Then, we assessed productions of IL-5 and IL-13 in nuocytes’ cultures. Finally, we adoptively transferred the mesenteric lymph node-derived nuocytes from wild-type and Il17br-/-Il1rl1-/- mice to the murine model of allergic rhinitis to evaluate their roles in nasal allergic responses. Results: We showed that nuocytes in the mesenteric lymph nodes of wild-type mice were upregulated after application of IL-25 and IL-33, and were induced to produce IL-5 and IL-13. Numbers of sneezing and nasal rubbing as well as eosinophils were all enhanced after the adoptive transfer of wild-type nuocytes. Concentrations of IL-5, IL-13, IL-25 and IL-33 in nasal lavage fluid of allergic mice were also increased. However, nuocytes fromIl17br-/-Il1rl1-/- mice did not increase sneezing and nasal rubbing and eosinophilia, and upregulate the above cytokines in the nasal lavage fluid. Conclusion: The findings demonstrate that nuocytes from the mesenteric lymph nodes of wildtype mice promote allergic responses in a mouse model. Resumo Introdução: Os nuócitos desempenham um papel importante na imunidade do tipo 2. No entanto, a contribuição das interleucinas ILC2s na rinite alérgica ainda precisa ser elucidada. Objetivo: Avaliar o papel dos nuócitos de linfonodos mesentéricos nas respostas alérgicas em camundongos. Método: Após a administração intraperitoneal de interleucina (IL)-25 e IL-33 em camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- com deficiência dupla, os nuócitos foram purificados do tecido linfoide associado a mucosa nasal e linfonodos mesentéricos. Em seguida, avaliamos as produções de IL-5 e IL-13 em culturas de nuócitos. Finalmente, transferimos adotivamente os nuócitos derivados de linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem e camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- para o modelo murino de rinite alérgica para avaliar seu papel nas respostas alérgicas nasais. Resultados: Mostramos que os nuócitos nos linfonodos mesentéricos de camundongos do tipo selvagem estavam up-regulados após a aplicação de IL-25 e IL-33 e foram induzidos a produzir IL-5 e IL-13. Os espirros e friçcão nasal, bem como os eosinófilos, aumentaram após a transferência adotiva de nuócitos do tipo selvagem. As concentrações de IL-5, IL-13, IL-25 e IL-33 no líquido da lavagem nasal de camundongos alérgicos também estavam aumentadas. Entretanto, os nuócitos de camundongos Il17br-/-Il1rl1-/- não aumentaram os espirros e a friçcão nasal ou eosinofilia e up-regularam as citocinas acima no líquido de lavagem nasal. Conclusão: Os achados demonstram que os nuócitos dos linfonodos mesentéricos de camundongos selvagens promovem respostas alérgicas em um modelo de camundongo.

This research was funded by Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado de S?o Paulo, Brazil (Grant number No. 13/14929-1, and Scholarships No. 12/24150-9; 15/05778-5; 17/13981-0; 16/01414-1; 08/06411-4; 11/06810-9; 11/22663-6; 16/02568-2). PRM was supported by the Medical Research Council of the United Kingdom (Grant MC_UU_120/14/9). University of S?o Paulo. Ribeir?o Preto Medical School. Virology Research Center. Ribeir?o Preto, SP, Brazil / MRC-University of Glasgow Centre for Virus Research. Glasgow, UK / University of Campinas. Institute of Biology. Department of Genetics, Evolution and Bioagents. Campinas, SP, Brazil. University of S?o Paulo. Ribeir?o Preto Medical School. Virology Research Center. Ribeir?o Preto, SP, Brazil. University of S?o Paulo. Ribeir?o Preto Medical School. Virology Research Center. Ribeir?o Preto, SP, Brazil University of S?o Paulo. Ribeir?o Preto Medical School. Virology Research Center. Ribeir?o Preto, SP, Brazil / University of S?o Paulo. Institute of Biomedical Sciences. S?o Paulo, SP, Brazil. MRC-University of Glasgow Centre for Virus Research. Glasgow, UK. Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Centro de Inova??es Tecnol?gicas.Ananindeua, PA, Brasil. MRC-University of Glasgow Centre for Virus Research. Glasgow, UK. University of S?o Paulo. Ribeir?o Preto Medical School. Virology Research Center. Ribeir?o Preto, SP, Brazil. The Hepacivirus genus comprises single-stranded positive-sense RNA viruses within the family Flaviviridae. Several hepaciviruses have been identified in different mammals, including multiple rodent species in Africa, Asia, Europe, and North America. To date, no rodent hepacivirus has been identified in the South American continent. Here, we describe an unknown hepacivirus discovered during a metagenomic screen in Akodon montensis, Calomys tener, Oligoryzomys nigripes, Necromys lasiurus, and Mus musculus from S?o Paulo State, Brazil. Molecular detection of this novel hepacivirus by RT-PCR showed a frequency of 11.11% (2/18) in Oligoryzomys nigripes. This is the first identification of hepavivirus in sigmondonine rodents and in rodents from South America. In sum, our results expand the host range, viral diversity, and geographical distribution of the Hepacivirus genus.

Submitted by Loyane Almeida Gama Sales (loyane.gama@unesp.br) on 2019-04-24T01:44:19Z No. of bitstreams: 1 Tese_FINAL_LoyaneGamaSales.pdf: 1665707 bytes, checksum: e1e28b1caf11290301ac28a1447a464c (MD5) Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2019-04-25T18:24:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sales_lag_dr_bot_par.pdf: 684475 bytes, checksum: 674c67ef34a0ff1c6a9b5be1da26e173 (MD5) Made available in DSpace on 2019-04-25T18:24:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sales_lag_dr_bot_par.pdf: 684475 bytes, checksum: 674c67ef34a0ff1c6a9b5be1da26e173 (MD5) Previous issue date: 2019-02-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A contratilidade do músculo liso e o trânsito gastrintestinal (GI) são importantes parâmetros da motilidade, cujas alterações podem comprometer a absorção de nutrientes e a biodisponibilidade de fármacos. Diversos fármacos apresentam efeitos adversos associados ao trato GI e, mesmo aqueles utilizados para controlar esses efeitos, podem provocar alterações importantes na motilidade ainda pouco conhecidas. Camundongos das linhagens C57BL/6 e BALB/c são amplamente utilizados nas pesquisas biomédicas, entretanto poucos estudos consideram os parâmetros motores GI. Diante de métodos escassos para avaliar a motilidade in vivo e da importância de conhecer a fisiologia básica dos camundongos, bem como o efeito de fármacos sobre o trato GI, objetivou-se: 1) desenvolver protocolo para avaliação da contratilidade duodenal e trânsito gastrintestinal por meio da Biosusceptometria de Corrente Alternada (BAC), e avaliar comparativamente a morfologia e função gastrintestinal de camundongos das linhagens BALB/c e C57BL/6J e, 2) avaliar o efeito GI do tratamento com cisplatina e a influência da dexametasona como antiemético. A partir deste trabalho foi possível implementar um protocolo experimental inédito, por meio da BAC, para avaliar a contratilidade duodenal e o trânsito gastrintestinal em camundongos. Após prévia implantação de marcador magnético no duodeno de camundongos, observou-se uma alta e uma baixa frequência de contração, expressas em ciclos por minuto (cpm). BALB/c e C57BL/6J apresentaram uma alta frequência de 40 cpm, enquanto a baixa frequência em BALB/c foi de 29 cpm e de 23 cpm no C57BL/6J. A amplitude de contração média não foi alterada em nenhuma frequência ou linhagem. Para determinar o trânsito GI, os camundongos ingeriram ração magneticamente marcada e tiveram as fezes monitoradas durante 10 horas. BALB/c eliminaram 87% do material magnético, enquanto C57BL/6J retiveram a maior parte no lúmen GI durante a avaliação. Parâmetros relacionados aos tempos de trânsito foram lentificados na linhagem C57BL/6J comparados a BALB/c. Animais BALB/c apresentaram camada muscular gástrica mais espessa, embora a mucosa apresente tamanho similar entre as linhagens. A muscular duodenal não diferiu entre as linhagens, porém BALB/c apresentaram maior profundidade de cripta e menor altura de vilosidades. Na segunda parte deste estudo, ambas as linhagens de camundongo com implante prévio de marcador magnético na serosa gástrica apresentaram contratilidade gástrica (frequência e amplitude) similares em condições controle. Os grupos BALB/c e C57BL/6J tratados com 7,5 mg/Kg de cisplatina apresentaram redução do consumo de ração e da frequência de contrações gástricas. A amplitude de contrações aumentou significativamente em BALB/c, os quais também tiveram diminuição das camadas muscular e mucosa devido à cisplatina. Após a administração de 2,0 mg/Kg de dexametasona previamente ao tratamento com cisplatina, animais BALB/c apresentaram melhora na frequência gástrica e a mucosa foi restabelecida. Entretanto, o uso dos dois fármacos diminuiu a frequência, aumentou a amplitude de contrações e comprometeu a morfologia gástrica em animais C57BL/6J. Sintetizando, há diferenças importantes na fisiologia GI e nas respostas aos tratamentos farmacológicos entre as linhagens, fatos que devem ser considerados na seleção do modelo experimental de qualquer estudo. The smooth muscle contractility and gastrointestinal (GI) transit are important parameters of motility, whose alterations may compromise nutrient absorption and bioavailability of drugs. Several drugs have side effects associated with the GI tract and, even those used to control these effects may cause significant changes in motility that are still poorly understood. Mice C57BL/6 and BALB/c strains are widely used in biomedical research, but a few studies consider the GI motor parameters. In front of scarce methods to evaluate the in vivo motility and the importance of knowing the basic physiology of the mice, as well as the effect of drugs on the GI tract. Then, the objectives of this study were 1) to develop protocol for the evaluation of duodenal contractility and gastrointestinal transit through Alternating Current Biosusceptometry (ACB), and comparing the morphology and gastrointestinal function of BALB/c and C57BL/6J mice, and 2) to evaluate the GI effect of cisplatin treatment and the influence of dexamethasone as an antiemetic. From this work, it was possible to implement an original experimental protocol, through the BAC, to evaluate the duodenal contractility and the gastrointestinal transit in mice. After the previous implantation of a magnetic marker in the duodenum of mice, a high and low frequency of contraction, expressed in cycles per minute (cpm), was observed. BALB/c and C57BL/6J presented a high frequency of 40 cpm, while the low frequency in BALB/c was 29 cpm and 23 cpm in C57BL/6J. The mean contraction amplitude was not altered at any frequency or strain. To determine the GI transit, the mice ingested magnetically labeled chow and had the feces monitored for 10-hours. BALB/c excreted 87% of the magnetic material, while C57BL/6J retained most of the GI lumen during the evaluation. Parameters related to transit times were slowed in the C57BL/6J strain compared to BALB/c. BALB/c animals presented thicker gastric muscle layer, although the mucosa presented a similar size between the strains. The duodenal muscle did not differ between the strains, but BALB/c presented greater crypt depth and decreased villus height. In the second part of this study, both mouse strains with previous magnetic marker implantation in the gastric serosa had similar gastric contractility (frequency and amplitude) under control conditions. BALB/c and C57BL/6J groups treated with 7.5 mg/kg of cisplatin had a reduction in the food intake and the frequency of gastric contractions. The amplitude of contractions increased significantly in BALB/c, which also had decreased muscle and mucosal layers due to cisplatin. After administration of 2.0 mg/kg dexamethasone prior to treatment with cisplatin, BALB/c animals showed an improvement in gastric frequency and the mucosa was reestablished. However, the use of the two drugs decreased the frequency, increased the contractions amplitude and compromised gastric morphology in C57BL/6J animals. In conclusion, there are important differences in GI physiology and responses to pharmacological treatments among the strains, which should be considered in the selection of the experimental model of any study.

A população brasileira com mais de 60 anos de idade tem aumentado, assim como as doenças crônicas relacionadas ao envelhecimento. Dentre elas, o acidente vascular encefálico (AVE), uma das principais causas de internações e mortalidade; causando na maioria dos pacientes algum tipo de deficiência para a execução das atividades de vida diária. Entender como o processo de reabilitação ocorre, como por exemplo a remodelação dos mapas e vias motoras, é de extrema importância. O estudo deste fenômeno pode levar a otimização do processo de reabilitação e ao melhor entendimento da ação de fármacos para restaurar a função cerebral após o AVE. Além disto, o tipo e a gravidade da lesão parecem ser determinantes para o nível de acometimento motor após o AVE. Resultados preliminares obtidos pelo grupo de pesquisa do PhD Numa Dancause e PhD Dale Corbett indicaram que quando a lesão atinge o estriado a representação motora é extremamente prejudicada. Então, nós hipotetizamos que o estriado dorsal tenha um papel determinante na constituição e possível remodelação dos mapas corticais durante o (re)aprendizado motor. Além disto, que estruturas subcorticais podem estar aumentando a sua atividade e assumindo um papel mais ativo na expressão do comportamento motor. Nesta tese nós desenvolvemos uma nova metodologia para quantificar e melhor entender as alterações de movimento após o AVE em roedores (ratos: Artigo 1; camundongos: Artigo 2). Revisamos as principais vias e mecanismos envolvidos no (re)aprendizado motor compensatório (Artigo 3). Finalmente, o artigo principal da presente tese demonstra como a reabilitação intensiva promove a remodelação dos mapas motores (Artigo 4). A reabilitação intensiva induziu a expansão da representação motora relacionada aos movimentos do membro parético; e o aumento da atividade usodependente em regiões encefálicas compensatórias, como por exemplo o córtex contralesional e o núcleo rúbro. Propomos um mecanismo entrelaçado para a recuperação após o AVC severo, envolvendo interações bilaterais e bi-hemisféricas. Em suma, esta tese corrobora que a reabilitação promove a expansão das representações motoras corticais; e avança o conhecimento sobre a recuperação compensatória após o AVE severo. Over the past decades, Brazilian population over 60 years of age has increased, as well as chronic diseases related to aging. Among these, stroke, one of the main causes of hospitalizations and mortality in Brazil; causing some type of disability to perform activities of daily living to the majority of patients. Understanding how the rehabilitation process occurs, such as the remodeling of motor maps and motor pathways is of utmost importance. The study of this phenomenon can lead to optimization of rehabilitation and to a better understanding of how drugs can act to restore brain function following stroke. In addition, lesion location and severity are determinant for the level of motor impairment following the insult. Preliminary results obtained by PhD Numa Dancause and PhD Dale Corbett research teams indicated that when the lesion encompass the dorsal striatum, motor representations are extremely impaired. Therefore, it was hypothesized that the dorsal striatum has a determining role in the constitution and possible remodeling of the cortical maps during motor relearning. In addition, subcortical structures may increase activity and assume a more active role in the expression of motor behavior. In this thesis we develop a new methodology to quantify and better understand changes of upper limb movement following stroke in rodents (rats: Article 1; mice: Article 2). Next, we review the main pathways and mechanisms involved in motor relearning following stroke (Article 3). Finally, the main article of this thesis demonstrates how intensive rehabilitation promotes cortical motor map plasticity (Article 4). Intensive rehabilitation led to motor map expansion, increased kinematic movement of the paretic limb, and increased use-dependent activity of compensatory brain regions, such as the contralesional cortex and red nucleus. Here, we propose an intertwined mechanism for severe stroke recovery, which involves bilateral and bi-hemispheric interactions. In short, this thesis corroborates that rehabilitation promotes expansion of cortical motor representations; and advances the knowledge about compensatory recovery following severe stroke in rats.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Experimental evidence suggests the participation of the cerebellum in motor and non-motor functions. Since recent results demonstrate the participation of the histaminergic cerebellar system in the consolidation of memory, this study investigated the effect and the understanding of the molecular bases of the histaminergic H4 agonist (VUF-8430) microinjection in the consolidation of emotional memory in mice submitted to the elevated plus maze (EPM) and the inhibitory avoidance task (IAT) as well as in motor control in mice submitted to the rotarod test. On the fourth day after surgical recovery from the procedure to implant a cannula, the animals received saline (SAL) or VUF (0.15 nmol; 0.49 nmol; e 1.48 nmol/0.1 μl) administered post-exposure. Experiments 1, 2 and 3 were performed on two consecutive days: Exposure and 24h after, the re-exposure. Experiment 1: was held in the EPM and immediately post-T1, the pharmacologic treatment occurred; in T2, there were only re-exposure to EPM. The decrease in activity in the open arms (OAE and OAT) between T1 and T2, inferred the emotional memory. Experiment 2: was held in the IAT and the pharmacological treatment was post-D1; in D2, the animals were only re-exposed to the IAT. The increase or decrease of latencies in D2 compared to D1 inferred the emotional memory. Experiment 3: was held in the rotarod and the animals received the drug treatment post-R1; in R2, the animals were only re-exposed, featuring motor learning. The increase or decrease in R2 latencies compared to R1, inferred the motor learning. Experiment 4: VUF-8430 was I.P. injected at a dose of 500 ng/kg to investigate protein expression by phosphorylation of the CREB transcription factor, using the Western blotting technique, in the cerebellar vermis and in classic structures linked to emotional memory (prefrontal cortex, amygdala and hippocampus). Results: in Experiment 1, VUF (0.49 nmol and 1.48 nmol) impaired the consolidation of emotional memory in the EPM; in Experiment 2, VUF (1.48 nmol) impaired the consolidation of emotional memory in the IAT; in Experiment 3, VUF (0.49 nmol and 1.48 nmol) impaired the consolidation of motor learning in the rotarod; in Experiment 4, there was a decrease in protein expression (CREB and pCREB) in the cerebellar vermis and prefrontal cortex in mice. Conclusions: the highest dose of VUF-8430 (1.48 nmol), microinjected in the cerebellar vermis in mice, induced deficit in learning and memory consolidation in the models used in the present study (EPM, IAT and rotarod). In addition, the decrease in the protein expression in the cerebellar vermis verified by CREB and pCREB levels when injected I.P. the highest dose of the H4 receptor agonist (VUF-8430) can corroborate these deficits. Evidências experimentais sugerem a participação do cerebelo em funções motoras e não motoras. Visto que recentes resultados demonstram a participação do sistema cerebelar histaminérgico na consolidação da memória, este trabalho investigou o efeito de microinjeções e o entendimento das bases moleculares do agonista histaminérgico H4 (VUF-8430) na consolidação da memória emocional em camundongos submetidos ao labirinto em cruz elevado (LCE), um modelo voltado à ansiedade (Experimento 1); à caixa de esquiva inibitória (EI), um modelo voltado ao medo (Experimento 2); no controle motor e na aprendizagem motora em camundongos submetidos ao rotarod (Experimento 3); e, na expressão proteica dos níveis séricos de CREB e CREB fosforilado através da técnica de Western blotting (Experimento 4). No quarto dia após a cirurgia de implantação da cânula-guia, para a realização dos Experimentos 1, 2 e 3, os animais receberam microinjeções intra-vérmis de salina ou VUF (0,15, 0,49 e 1,48 nmol/0,1 μl) pós-exposição. Esses experimentos foram realizados em dois dias consecutivos. Experimento 1: foi realizado no LCE e, imediatamente após a exposição (T1), houve o tratamento farmacológico; no segundo dia de teste (T2), ocorreu apenas a reexposição ao LCE. A diminuição da atividade nos braços abertos (EBA e TBA) em T2 comparada à T1, permitiu inferir a aprendizagem e consolidação da memória emocional. Experimento 2: foi realizado na EI e o tratamento farmacológico ocorreu após o primeiro dia de teste (D1); no segundo dia de teste (D2), os animais foram apenas reexpostos à EI. O aumento ou a diminuição das latências de D2 comparado à D1, permitiu inferir a facilitação ou o déficit na aprendizagem e consolidação da memória emocional. Experimento 3: foi realizado no rotarod e os animais receberam o tratamento farmacológico imediatamente após a exposição (R1); no segundo dia de teste (R2), os animais foram apenas reexpostos ao aparato, caracterizando a aprendizagem motora. O aumento ou a diminuição das latências de R2 comparado à R1 permitiu inferir a facilitação ou déficit na consolidação da aprendizagem motora. Experimento 4: foi realizada a injeção sistêmica intraperitoneal (I.P.) do VUF-8430, na dose de 500 ng/kg, para investigar a expressão proteica através da fosforilação do fator de transcrição CREB, utilizando a técnica de Western blotting, no vérmis cerebelar e em estruturas clássicas vinculadas à memória emocional (córtex pré-frontal, amídala e hipocampo). Resultados: no Experimento 1, o VUF (0,49 nmol e 1,48 nmol) prejudicou a consolidação da memória emocional no LCE; no Experimento 2, o VUF (1,48 nmol) prejudicou a consolidação da memória emocional na EI; no Experimento 3, o VUF (0,49 nmol e 1,48 nmol) prejudicou a consolidação da aprendizagem motora no rotarod; e, no Experimento 4, houve uma diminuição da expressão proteica (CREB e pCREB) no vérmis cerebelar e no córtex pré-frontal de camundongos. Conclusões: a maior dose do VUF-8430 (1,48 nmol), microinjetada no vérmis cerebelar de camundongos, induziu um déficit na aprendizagem e consolidação da memória nos modelos utilizados no presente estudo. Além disso, a diminuição da expressão proteica no vérmis cerebelar verificada pelos níveis de CREB e pCREB, pode corroborar os déficits encontrados. CNPq: 303088/2014-1 CAPES: Código de Financiamento 001 FAPESP: 2015/22309-9 FAPESP: 2015/15342-0

Objective To evaluate the effects of oxidative stress on insulin signaling in cardiac tissue of obese mice. Methods Thirty Swiss mice were equally divided (n=10) into three groups: Control Group, Obese Group, and Obese Group Treated with N-acetylcysteine. After obesity and insulin resistance were established, the obese mice were treated with N-acetylcysteine at a dose of 50mg/kg daily for 15 days via oral gavage. Results Higher blood glucose levels and nitrite and carbonyl contents, and lower protein levels of glutathione peroxidase and phosphorylated protein kinase B were observed in the obese group when compared with their respective control. On the other hand, treatment with N-acetylcysteine was effective in reducing blood glucose levels and nitrite and carbonyl contents, and significantly increased protein levels of glutathione peroxidase and phosphorylated protein kinase B compared to the Obese Group. Conclusion Obesity and/or a high-lipid diet may result in oxidative stress and insulin resistance in the heart tissue of obese mice, and the use of N-acetylcysteine as a methodological and therapeutic strategy suggested there is a relation between them. RESUMO Objetivo Avaliar os efeitos do estresse oxidativo sobre a sinalização da insulina em tecido cardíaco de camundongos obesos. Métodos Utilizaram-se 30 camundongos Swiss subdivididos igualmente (n=10) em três grupos: Grupo Controle, Grupo Obeso e Grupo Obeso Tratado com N-acetilcisteína. Após estabelecidas a obesidade e a resistência à insulina, os camundongos obesos foram tratados diariamente, durante 15 dias, via gavagem oral, com N-acetilcisteína na dose de 50mg/kg. Resultados Observaram-se maiores níveis de glicose sanguínea, conteúdos de nitrito e carbonil, e menores níveis proteicos de glutationa peroxidase e proteína quinase B fosforilada no Grupo Obeso quando comparado a seu respectivo controle. Por outro lado, o tratamento com N-acetilcisteína se mostrou eficiente em diminuir os níveis glicêmicos, os conteúdos de nitrito e carbonil, e aumentar significativamente os níveis proteicos de glutationa peroxidase e proteína quinase B fosforilada, quando comparados ao Grupo Obeso. Conclusão Obesidade e/ou dieta hiperlipídica levam a estresse oxidativo e à resistência à insulina no tecido cardíaco de camundongos obesos, e o uso da N-acetilcisteína como estratégia metodológica e terapêutica sugeriu haver relação entre ambos.

Recent analysis of clinical trials on estrogen therapy proposes the existence of a therapeutic window of opportunity for the cardiovascular benefits of estrogens, which depend on women&rsquo, s age and the onset of therapy initiation. In this study, we aimed to determine how vascular senescence and the onset of estrogen treatment influence the common carotid artery (CCA) function in senescent and non-senescent females. Ovariectomized female senescence-accelerated (SAMP8) or non-senescent (SAMR1) mice were treated with vehicle (OVX) or 17&beta, estradiol starting at the day of ovariectomy (early-onset, E2E) or 45 days after surgery (late-onset, E2L). In SAMR1, both treatments, E2E and E2L, reduced constriction to phenylephrine (Phe) in CCA [(AUC) OVX: 193.8 &plusmn, 15.5, E2E: 128.1 &plusmn, 11.6, E2L: 130.2 &plusmn, 15.8, p = 0.004] in association with positive regulation of NO/O2- ratio and increased prostacyclin production. In contrast, E2E treatment did not modify vasoconstrictor responses to Phe in OVX-SAMP8 and, yet, E2L increased Phe vasoconstriction [(AUC) OVX: 165.3 &plusmn, 10, E2E: 183.3 &plusmn, 11.1, E2L: 256.3 &plusmn, 30.4, p = 0.005]. Increased vasoconstriction in E2L-SAMP8 was associated with augmented thromboxane A2 and reduced NO production. Analysis of wild-type receptor alpha (ER&alpha, 66) expression and its variants revealed an increased expression of ER&alpha, 36 in E2L-SAMP8 in correlation with unfavorable effects of estrogen in those animals. In conclusion, estrogen exerts beneficial effects in non-senescent CCA, regardless of the initiation of the therapy. In senescent CCA, however, estrogen loses its beneficial action even when administered shortly after ovariectomy and may become detrimental when given late after ovariectomy. Aging and onset of estrogen treatment are two critical factors in the mechanism of action of this hormone in CCA.

Orientadora: Profa Dra. Iris Hass Coorientadores: Profa Dra. Liliani Marilia Tiepolo, Profo Dr. James C. Russell Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa : Curitiba, 30/10/2019 Inclui referências Resumo: A invasão biológica por espécies exóticas é considerada uma das maiores ameaças ao bem-estar ecológico do planeta. Ratos e camundongos são os mamíferos invasores mais disseminados pelo mundo. A bioinvasão não é uma área consolidada de pesquisa no Brasil, e até 2013, apenas 16% dos trabalhos produzidos com espécies não nativas tinham mamíferos como objeto de estudo. Esta tese se propõe a dar continuidade aos primeiros estudos com roedores invasores no Brasil, e preencher algumas lacunas de informações através de uma abordagem ecológica e genética. No capítulo I foi realizada a modelagem de ocupação de duas espécies de roedores exóticos detectadas no Município de Paranaguá, Rattus norvegicus e Mus musculus. Neste trabalho, foi detectada uma relação negativa entre a probabilidade de ocupação dessas espécies e a porcentagem de cobertura florestal em um raio de 1000m. Esta análise permitiu propor que as fitofisionomias florestais do bioma Mata Atlântica servem como uma barreira de dispersão para as espécies estudadas. No capítulo II, foram utilizados marcadores de microssatélites para avaliar o fluxo gênico do roedor Rattus norvegicus ao longo de uma das principais vias de acesso ao porto de Paranaguá. Constatamos uma significativa frequência de dispersão mediada por humanos que aproxima geneticamente as duas populações mais afastadas geograficamente. E finalmente no capítulo III foram utilizadas amostras de Rattus rattus provenientes do arquipélago de Fernando de Noronha para se avaliar o fluxo gênico entre as populações da cadeia de ilhas a nordeste pertencentes ao arquipélago. Através do uso de microssatélites e sequenciamento da região mitocondrial d-loop os resultados indicaram ausência de fluxo gênico entre as ilhas, o que faz da ilha Rata a melhor candidata ao controle e a erradicação. Abstract: Biological invasion by exotic species is considered one of the greatest threats to the planet's ecological welfare. Rats and mice are the most widespread invasive mammals in the world. Bioinvasion is not a consolidated research area in Brazil, and until 2013, only 16% of the papers published with non-native species had mammals as their object of study. This thesis aims to continue the first studies with invasive rodents in Brazil, and fill some information gaps through an ecological and genetic approach. In chapter I, the occupancy modeling of two exotic rodent species detected in Paranaguá, Rattus norvegicus and Mus musculus, was performed. In this work, a negative relationship was detected between the probability of occupation of these species and the percentage of forest cover within a 1000m radius. This analysis allowed us to propose that the forest phytophysiognomies of the Atlantic Forest biome serve as a dispersal barrier for the studied species. In Chapter II, microsatellite markers were used to evaluate the gene flow of the Rattus norvegicus rodent along one of the main roads used to access to the port of Paranaguá. We found a significant frequency of human-mediated dispersion that genetically approximates the two geographically distant populations. Finally, in Chapter III, samples of Rattus rattus from the Fernando de Noronha archipelago were used to evaluate the gene flow among the populations of the northeastern island chain belonging to the archipelago. Using microsatellites and sequences of the mitochondrial d-loop region, the results indicated the absence of gene flow between the islands, which makes Rata Island a great candidate for control and eradication.

Obesity-derived inflammation and metabolic dysfunction has been related to the activity of the inducible nitric oxide synthase (iNOS). To understand the interrelation between metabolism, obesity and NO., we evaluated the effects of obesity-induced NO. signaling on liver mitochondrial function. We used mouse strains containing mitochondrial nicotinamide transhydrogenase activity, while prior studies involved a spontaneous mutant of this enzyme, and are, therefore, more prone to oxidative imbalance. Wild-type and iNOS knockout mice were fed a high fat diet for 2, 4 or 8 weeks. iNOS knockout did not protect against diet-induced metabolic changes. However, the diet decreased fatty-acid oxidation capacity in liver mitochondria at 4 weeks in both wild-type and knockout groups; this was recovered at 8 weeks. Interestingly, other mitochondrial functional parameters were unchanged, despite significant modifications in insulin resistance in wild type and iNOS knockout animals. Overall, we found two surprising features of obesity-induced metabolic dysfunction: (i) iNOS does not have an essential role in obesity-induced insulin resistance under all experimental conditions and (ii) liver mitochondria are resilient to functional changes in obesity-induced metabolic dysfunction.

Angiotensin II plays important functions in cardiovascular system mediating actions leading to inflammatory responses such as activation of VSMC in order to produce ROS, inflammatory cytokines, chemokines, and adhesion molecules. Changes in angiotensin II production could stimulate the recruitment and activation of myeloid cells initiating local inflammatory response without effect on BP. We aimed to verify if angiotensin II induces an inflammatory response in the aorta and if it correlates with variations in BP. C57Bl/6 mice treated with saline solution (0.9%, control group) or angiotensin II (30ng/kg, Ang II group) were used. BP and HR levels were measured. Immunohistochemistry for IL1-β, TGF-β, iNOS, CD45, andα-actin was performed in the aorta. BP and HR do not change. A biphasic response was observed both for IL1-βand TGF-βexpression and also for the presence of CD45 positive cells, with an acute increase (between 30 and 60 minutes) and a second increase, between 24 and 48 hours. Positive staining for iNOS increased in the earlier period (30 minutes) in perivascular adipose tissue and in a longer period (48 hours) in tunica adventitia. Immunoblotting toα-actin showed no alterations, suggesting that the applied dose of angiotensin II does not alter the aortic VSMCs phenotype. The results suggest that angiotensin II, even at doses that do not alter BP, induces the expression of inflammatory markers and migration of inflammatory cells into the aorta of normotensive mice. Thus, angiotensin II may increase the propensity to develop a cardiovascular injury, even in normotensive individuals.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2021-11-03T23:33:46Z No. of bitstreams: 1 Rodrigo Fernando da Silva.pdf: 5279890 bytes, checksum: 7299caacd408f48f5de5863585187b4f (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-03T23:33:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigo Fernando da Silva.pdf: 5279890 bytes, checksum: 7299caacd408f48f5de5863585187b4f (MD5) Previous issue date: 2018-11-28 The acute respiratory distress syndrome (ARDS) is characterized by rupture of the endothelium and alveolar injury resulting from an uncontrolled lung inflammatory response causing compromise in gas exchange. The main causes of ARDS, sepsis is highlighted, especially in hospital settings. Treatment of ARDS is still a clinical health problem, so new therapies are needed. Considering that an imbalance of oxidant and antioxidant species in the lung tissue as an important event for the development of ARDS with favoring of the oxidant pathway, thus modulating lung inflammation positively, we investigated in the present study the mechanisms involved in the antioxidant effects of the treatment with photobiomodulation and /or Viamin C. Adult male Balb/c mice were submitted to LPS injection (Salmonella abortus equi, ip) and irradiated or not with LED 2 and 6 h after LPS injection. Vitamin C treatments (150 mg / kg, ip) were performed 2 h after the induction of ARDS with LPS alone or concomitantly with LED treatment. Our preliminary results showed that both, LED or Vit C treatments, were able to attenuate acute lung inflammation induced by sepsis, but by different mechanisms. The LED seems to act by decreasing the release of important inflammatory mediators such as IL-17, while Vit C appears to increase the IL-10 anti- inflammatory mediator. In addition, VitC exerts important modulation in platelets, which in turn modulate the recruitment of neutrophils to the airways. On the other hand, the association of Vit C with LED so far did not seem to be an advantageous association, since in most parameters evaluated the effects of the isolated treatments were better than when associated. A síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA) é caracterizada por ruptura do endotélio e injúria alveolar decorrente de uma resposta inflamatória pulmonar descontrolada causando comprometimento na troca gasosa. Dentre os principais causadores da SDRA, destaca-se a sepse, sobretudo em ambientes hospitalares. O tratamento da SDRA ainda é um problema clínico de saúde, assim novas terapias são necessárias. Considerando que um desequilíbrio das espécies oxidantes e antioxidantes no tecido pulmonar é um evento importante para o desencadeamento da SDRA com favorecimento da via oxidante modulando assim positivamente a inflamação do pulmão, investigamos no presente estudo os mecanismos envolvidos nos efeitos antioxidantes do tratamento com fotobiomodulação e/ou da Viamina C. Para tanto, camundongos Balb/c machos adultos foram submetidos ou não à injeção de LPS (Salmonela abortus equi, ip) e irradiados ou não com LED 2 e 6 h após a injeção com LPS. Os tratamentos com vitamina C foram feitos 2 h após a indução de SDRA com LPS (150mg/kg, ip) isolada ou concomitante ao tratamento com LED. Nossos resultados mostraram que ambos os tratamentos com LED ou Vit C foram capazes de atenuar a inflamação pulmonar aguda induzida por sepse, mas por mecanismos diferentes. O LED parece atuar diminuindo a liberação de mediador inflamatório importante como a IL-17, enquanto que a Vit C parece aumentar o mediador antiinflamatório IL-10. Ainda, a Vit C exerce importante modulação em plaquetas, as quais por sua vez modulam recrutamento de neutrófilos para as vias aéreas. Em contrapartida, a associação da Vit C com o LED não pareceu ser uma associação vantajosa, já que na maioria dos parâmetros avaliados os efeitos dos tratamentos isolados foram melhores do que quando associados.

A estimulação transcraniana por corrente contínua (ETCC) é uma técnica terapêutica, não-farmacológica e não invasiva, que parte do princípio da aplicação de correntes elétricas de baixa intensidade aplicadas diretamente a cabeça humana com o intuito de evocar atividades neuronais excitatórias (estimulação anódica) e inibitórias (estimulação catódica). No mais, a ETCC vem sendo proposta como tratamento alternativo ou complementar para tratar diversas doenças neuropsiquiátricas e podendo também ser direcionada para o melhoramento humano em funções motoras e cognitivas. No entanto, apesar do aumento no numero de estudos em ETCC, seus mecanismos ainda são vastamente desconhecidos. Infelizmente, existem limitações que impedem investigações mais profundas dos efeitos de tDCS no cérebro humano. Sendo assim, o uso de modelos animais é de extrema importância. Neste trabalho, propomos um modelo animal cirúrgico de tDCS, de rápida e fácil execução, suportado por marcadores gênicos de eficiência e dados adicionais para a investigação dos mecanismos da ETCC. As análises de dados mostraram que o modelo proposto é viável, com execução de até 30 minutos, e resistente à longos períodos de estimulação (contato de qualidade do grupo de 5 dias – p=n.s., e do grupo de 10 dias – p=n.s.). No mais, estimulação anódica sobre as regiões M1 e M2 por 5 dias (1 sessão/di, 10 min. 350 µA), induziu o aumento significativo de BDNF (p=0.0081), um gene fortemente associado com desempenho cognitivo e de GFAP (p=0.0108) um marcador de astrócitos, nos animais estimulados (tDCS) em relação aos animais não-estimulados (Sham). Esses dados foram considerados específicos para este protocolo, pois, um aumento das sessões de estimulação e a interrupção de sessão não evocaram quaisquer alterações moleculares. Além disso, alterações de expressão gênica foram restritas a esses genes, uma vez que nenhum dos outros 8 genes neuronais foram modulados. Este modelo, também apresentou melhor desempenho de aprendizagem na tarefa Barnes Maze, com diminuição de erros (p=0.0463), tempo gasto (p=0.0409) e distância percorrida (p=0.0105) para executar a tarefa. Curiosamente, o aumento do desempenho foi atribuído a uma adaptação mais eficiente (direta e seriada p=0.0003) na estratégias adotada pelos animais estimulados. As concentrações de glutamato também foram avaliadas, mas não apresentaram diferenças significativas. Em geral, o modelo apresentado tem potecial de referência futura no desenvolvimento de modelos animais e podendo servir ainda para investigar e descrever mecanismos subjacentes adicionais de ETCC, trazendo luz ao seu real potencial da. Transcranial direct current stimulation (tDCS) is a non-pharmacological and non-invasive therapeutic technique which principals consist in delivering low intensity currents to the human scalp evoking neuronal excitation (anodal stimulation) or inhibition (cathodal stimulation). Furthermore, it has been proposed as an alternative or complementary treatment for psychiatric diseases. It has also been used as a human enhancement therapy, improving motor and cognitive tasks. Despite an increase in clinical studies, there is still much to be learned from its overall mechanisms. Unfortunately, there are limitations that hinders further investigation of tDCS effects in the human brain. Therefore, the use of animal-tDCS models are of utmost importance and may bring great insight. In this work we proposed an easy and fast to execute tDCS model, supported by efficiency markers (genetic expression alterations) and data related to further investigating tDCS mechanisms (molecular and behavioral profiles). Data showed a viable stimulation model, executable in up to 30 minutes and resistant to longer periods of stimulation (5-day contact quality, p=n.s., 10-day contact quality p=n.s.). Concurrently, anodal tDCS over cortex M1 and M2 of 5 days (1-session/day, 10 min. 350 µA) increased the expression of BDNF (p=0.0081), a strongly cognitive associated gene and GFAP (p=0.0108) an astrocyte marker, expression levels in stimulated (tDCS) vs. non-stimulated (Sham) mice. This data was found to be specific for this protocol, whereas increase stimulation sessions and session disruption did not evoke any molecular alterations. In addition, gene expression alterations were restricted to these genes, once none of the other 8 neuronal associated genes tested suffered modulation. This model also presented enhanced learning performance in the Barnes Maze task, with a decrease in errors (p=0.0463), time taken (p=0.0409) and distance traveled (p=0.0105) to execute the task. Interestingly, the increased performance was attributed to an adaptation in more efficient (direct and serial – p=0.0003) strategies by the stimulated animals. Glutamate concentrations were also assessed but did not present significant differences. Overall, the presented model should attend as a future reference in animal model development and serve to investigate and describe additional tDCS underlying mechanisms, bringing light to tDCS real potential.

Objective: to evaluate the effect of the Euphorbia tirucalli hydroalcoholic extract (ETHE) on the development of Ehrlich Tumor, in its ascitic form. Methods: we intraperitoneally inoculated 15 Swiss mice with 10.44 x 107 cells of Ehrlich Tumor and divided them in two groups one day after: ETHE Group (eight mice), treated with a dosage of 125 mg/kg/day of EHTE for five days; and Control Group (seven mice), treated only with 0.9% isotonic saline solution over the same period. The treatment was done by gavage. Ten days after inoculation, four mice from each group were sacrificed for quantification of tumor cell number, ascitic fluid volume and bone marrow cell number. The remaining animals were maintained to evaluate survival. Results: The ascitic fluid volume and the tumor cell number were decreased in the ETHE group when compared with the control group, but with no statistical significance. On the other hand, survival was higher in the ETHE group, as well as the number of bone marrow cells. Conclusion: Treatment with ETHE after inoculation of Ehrlich Tumor decreases its development and increases survival and the bone marrow cellularity, thus reducing the myelosuppression present in the Ehrlich Tumor bearing mice. Objetivo: avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico de Euphorbia tirucalli (ETHE) sobre o desenvolvimento do tumor de Ehrlich em sua forma ascítica. Métodos: quinze camundongos Swiss foram inoculados via intraperitoneal com 10,44x107 células do tumor de Ehrlich e um dia depois foram divididos em dois grupos: Grupo ETHE (oito camundongos), tratados com a dose de 125mg/kg/dia de ETHE por cinco dias e Grupo Controle (sete camundongos), tratado apenas com 0,9% de solução salina isotônica em relação ao mesmo período. O tratamento foi realizado por gavagem. Dez dias após a inoculação, quatro animais de cada grupo foram sacrificados para a quantificação do número de células de tumor, do volume de fluido ascítico e do número de células da medula óssea. Os demais animais foram mantidos, para avaliar a sobrevivência. Resultados : o volume de líquido ascítico e do número de células tumorais foram menores no grupo ETHE quando comparado ao grupo controle, porém sem significância estatística. Por outro lado, a sobrevivência dos animais foi maior no grupo de ETHE, bem como, a quantidade de células de medula óssea. Conclusão: o tratamento com ETHE, após a inoculação do tumor, diminuiu o seu desenvolvimento e aumentou sobrevida, bem como, a celularidade da medula óssea, reduzindo assim, a mielossupressão presente nos animais portadores de tumor de Ehrlich.