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This short communication examines the question whether the experimental data presented in a study by Merrick et al. are of clinical relevance. These authors found that cannabidiol (CBD), a major cannabinoid of the cannabis plant devoid of psychotropic effects and of great interest for therapeutic use in several medical conditions, may be converted in gastric fluid into the psychoactive cannabinoids delta-8-THC and delta-9-THC to a relevant degree. They concluded that "the acidic environment during normal gastrointestinal transit can expose orally CBD-treated patients to levels of THC and other psychoactive cannabinoids that may exceed the threshold for a positive physiological response." They issued a warning concerning oral use of CBD and recommend the development of other delivery methods. However, the available clinical data do not support this conclusion and recommendation, since even high doses of oral CBD do not cause psychological, psychomotor, cognitive, or physical effects that are characteristic for THC or cannabis rich in THC. On the contrary, in the past decades and by several groups, high doses of oral CBD were consistently shown to cause opposite effects to those of THC in clinical studies. In addition, administration of CBD did not result in detectable THC blood concentrations. Thus, there is no reason to avoid oral use of CBD, which has been demonstrated to be a safe means of administration of CBD, even at very high doses.

The dorsal hippocampus (DH) is involved in the modulation of the cardiac baroreflex function. There is a wide expression of the NMDA and AMPA/Kainate receptors within the DH. Glutamate administration into the DH triggers both tachycardia and pressor responses. Moreover, GABAergic interneurons and endocannabinoid system play an important role in modulation of the activity of glutamatergic neurons within the DH. Therefore, the present work aimed to evaluate the involvement of the glutamatergic, GABAergic, and endocannabinoid neurotransmissions within the DH in cardiac baroreflex function in rats. We have used the technique of vasoactive drugs infusion to build both sigmoidal curves and linear regressions to analyze the cardiac baroreflex function. Bilateral injection into the DH of DL-AP7, a NMDA receptor antagonist (10 or 50 nmol/500 nL), or NBQX, an AMPA/Kainate antagonist (100 nmol/ 500 nL), reduced the cardiac baroreflex function. On the other hand, bilateral injection of Bicuculline, a GABAA receptor antagonist (1 nmol/500 nL), or AM251, a CB1 receptor antagonist (10 or 100 pmol/500 nL), increased the cardiac baroreflex function. Furthermore, 1 nmol/500 nL of the NMDA receptor antagonist, when administrated alone, was ineffective to change baroreflex function, but it was able to inhibit the alteration in the cardiac baroreflex function elicited by the dose of 100 pmol/500 nL of the CB1 receptor antagonist. Taken together, these findings suggest that glutamatergic, GABAergic, and endocannabinoid neurotransmissions interact each other within the DH to modulate the cardiac baroreflex function.

This study reports a fast, sensitive, and selective column switching ultrahigh-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS) method to determine the endocannabinoids (eCBs), anandamide (AEA), and 2-arachidonoylglycerol (2-AG) in plasma samples. This bidimensional system used a restricted access media column (RP-8 ADS, 25 mm × 4 mm × 25 μM) in the first dimension and a core-shell Kinetex C18 (100 mm × 2, 1.7 mm × 1 μM) column in the second dimension, followed by detection in a mass spectrometer triple quadrupole (multiple reactions monitoring mode) operating in the positive mode. RP-8 ADS was used for trace enrichment of eCBs (reverse phase partitioning) and macromolecular matrix size exclusion; the core-shell column was used for the chromatographic separation. The column switching UHPLC-MS/MS method presented a linear range spanning from 0.1 ng mL−1 (LOQ) to 6 ng mL−1 for AEA and from 0.04 ng mL−1 (LOQ) to 10 ng mL−1 for 2-AG. Excluding the LLOQ values, the precision assays provided coefficients of variation lower than 8% and accuracy with relative standard error values lower than 14%. Neither carryover nor matrix effects were detected. This high-throughput column switching method compared to conventional methods is time saving as it involves fewer steps, consumes less solvent, and presents lower LLOQ. The column switching UHPLC-MS/MS method was successfully applied to determine AEA and 2-AG in plasma samples obtained from Alzheimer’s disease patients.

Os canabinoides são substâncias químicas encontradas exclusivamente na Cannabis sativa L. (canábis). Possuem grande relevância farmacológica e toxicológica, sendo a canábis e seus produtos derivados as drogas de abuso mais consumidas mundialmente. O procedimento adotado por órgãos periciais brasileiros para caracterização de amostras de canábis consiste na detecção de Δ9- tetraidrocanabinol (THC), o canabinoide ao qual são atribuídos os efeitos psicotomiméticos. Entretanto, a identificação de outros canabinoides fortalece a caracterização de amostras, além de possibilitar estudos sobre o perfil de drogas de apreensão, que podem ser aplicados com fins criminalísticos na investigação da origem e distribuição desses produtos. Nesse trabalho, foi realizada uma avaliação do perfil qualitativo de canabinoides presentes em material vegetal de amostras compartilhadas pela Polícia Federal Brasileira. As amostras eram provenientes de material compactado comercializado ilegalmente, operações de erradicação de plantações clandestinas e do cultivo indoor de sementes apreendidas. Para identificação simultânea de oito canabinoides majoritariamente presentes em amostras de canábis, foram desenvolvidos métodos de cromatografia líquida acoplada a espectroscopia no ultravioleta (HPLC-UV) e espectrometria de massas sequencial por injeção de fluxo (FIA-MS/MS). A composição das amostras avaliadas nas análises de HPLC-UV vai ao encontro das tendências descritas para drogas de abuso consumidas atualmente, sendo o THC o canabinoide mais presente. O perfil de fragmentação do THC e de outros canabinoides foi avaliado por FIA-MS/MS com ionização por eletrospray nos modos positivo e negativo (ESI(±)). Foi possível distinguir espécies isômeras de canabinoides aplicando ESI(-), devido a diferenças nos perfis de fragmentação. Adicionalmente, com auxílio de ferramentas quimiométricas, foram elaborados modelos de classificação de amostras a partir dos dados obtidos por FIA-ESI(-) MS/MS, que se mostraram aplicáveis para distinção dos diferentes tipos de amostras avaliadas. Cannabinoids are chemical substances found exclusively in Cannabis sativa L. They are of great pharmacological and toxicological relevance since cannabis and its derived products are the most widely consumed drugs of abuse in the world today. The detection of Δ9-tetrahydrocannabinol (THC), the cannabinoid to which psychotomimetic effects are attributed, is the procedure adopted by Brazilian forensics for the characterization of cannabis samples. However, the identification of other cannabinoids could lead to a more robust sample characterization and enable studies on seized drugs profile as well, which could be both applied for forensic purposes in the investigation of the origin and distribution of illegal cannabis. This work presents an evaluation of the qualitative profile of cannabinoids present in plant material from samples shared by the Brazilian Federal Police. The samples came from compacted material traded illegally, operations to eradicate clandestine plantations and indoor cultivation of seized seeds. Liquid chromatography coupled with ultraviolet spectroscopy (HPLC-UV) and flow injection analysis tandem mass spectrometry (FIA-MS/MS) methods were developed to simultaneously identification of eight major cannabinoids in cannabis samples. The cannabinoid profile evaluated in the HPLC-UV analyzes meets the trends described for this kind of drug, with THC being the most present cannabinoid. The mass fragmentation profile of THC and other cannabinoids were evaluated by FIA-MS/MS with electrospray ionization operating in positive and negative modes (ESI(±)). It was possible to distinguish isomeric cannabinoids by applying ESI(-) due to differences in fragmentation profiles. Additionally, using chemometric tools, sample classification models were elaborated from the data obtained by FIA-ESI(-) MS/MS, which proved to be suitable to distinguish the different types of samples evaluated.

Submitted by Igor Pereira (igor.spereira@uniceub.br) on 2021-01-28T12:28:21Z No. of bitstreams: 1 TCC Final Beatriz.pdf: 903480 bytes, checksum: d725c0ab18f593d26769fe4ec8df7f41 (MD5) Approved for entry into archive by Heres Pires (heres.pires@uniceub.br) on 2021-04-29T13:07:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TCC Final Beatriz.pdf: 903480 bytes, checksum: d725c0ab18f593d26769fe4ec8df7f41 (MD5) Made available in DSpace on 2021-04-29T13:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TCC Final Beatriz.pdf: 903480 bytes, checksum: d725c0ab18f593d26769fe4ec8df7f41 (MD5) Previous issue date: 2021-01-28 A Cannabis é um gênero de plantas medicinais mais antigas do mundo e possui cerca de 60 canabinóides, sendo os principais: delta-9-tetrahidrocanabinol e o canabidiol. Os canabinóides receberam esse nome devido ao fato de se ligarem nos receptores presentes no sistema endocanabinóide. Diversos estudos demonstram o potencial terapêutico dos canabinóides no tratamento de várias patologias, inclusive no Alzheimer. O Alzheimer é a doença neurodegenerativa mais comum na população idosa e não tem cura, os tratamentos atuais visam apenas estabilizar os sintomas e não combatem as causas da doença. Diversos estudos têm mostrado que os canabinóides conferem neuroproteção, atuando de forma direta e indireta sobre as causas e consequências da neurodegeneração e neuroinflamação, desta forma o presente trabalho tem por objetivo ressaltar as propriedades medicinais da Cannabis, esclarecer o funcionamento do sistema endocanabinóide, descrever a fisiopatologia do Alzheimer e, por fim, relacionar o uso dos canabinóides com o tratamento desta doença

Orientadora: Profa. Dra. Janaína Menezes Zanoveli Coorientadora: Profa. Dra. Joice Maria da Cunha Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 20/02/2020 Inclui referências: p. 62-75 Resumo: Várias evidências indicam um papel importante da substância cinzenta periaquedutal (SCP) nas respostas defensivas e no controle da dor. A ativação dos receptores canabinoides tipo 1 (CB1) ou mu-opioides (MOR) na região dorsal dessa estrutura (SCPd) inibe o medo e facilita a antinocicepção induzida por diferentes estímulos ou situações que elicem tal emoção. No entanto, ainda não se sabe se esses dois receptores podem funcionar cooperativamente para alcançar essas ações inibitórias. O presente estudo investiga uma possível interação funcional entre os receptores CB1 e MOR localizados na SCPd na regulação da resposta de medo e da antinocicepção evocada pela estimulação química da SCPd com o aminoácido excitatório N-metil-D-aspartato (NMDA). Assim, ratos Wistar machos foram submetidos a cirurgia estereotáxica para implante de uma cânula guia na SCPd. Esses animais foram estimulados quimicamente com NMDA microinjetado nesta região encefálica e foram testados quanto à expressão de uma resposta de medo, o congelamento, e a nocicepção, por avaliar a latência do tempo de retirada da cauda no analgesímetro térmico. No experimento 1, antes da administração deste aminoácido excitatório, os animais foram tratados intra-SCPd com o agonista CB1 ACEA (0,5 pmol) e com o antagonista do receptor CB1 AM251 (100 pmol). No experimento 2, antes da administração do NMDA, os animais foram tratados intra- SCPd com o agonista MOR DAMGO (0,5 nmol) e com o antagonista do receptor MOR CTOP (1 nmol). No experimento 3, para investigar a interação funcional entre os receptores MOR e CB1, a microinjeção de CTOP foi combinada com ACEA, enquanto a de AM251 foi combinada com DAMGO. Nossos resultados mostraram que a injeção de ACEA ou DAMGO na SCPd inibiu a expressão de congelamento induzida por NMDA, contudo, apenas o agonista MOR DAMGO aumentou a antinocicepção medida pelo teste de retirada da cauda. Mais importante, o efeito inibitório de ACEA ou DAMGO no congelamento foi bloqueado por CTOP e AM251, respectivamente, indicando uma interação funcional entre esses dois receptores na mediação de comportamentos defensivos relacionados ao medo. No entanto, essa interação cooperativa não foi observada na antinocicepção induzida por NMDA. Nossos achados apoiam a hipótese de que uma ação cooperativa entre os dois receptores, MOR e CB1, ocorre na SCPd e está envolvida na mediação da resposta defensiva induzida por NMDA, mas não na antinocicepção induzida por NMDA. Além disso, nossos achados destacam que, nessas condições experimentais, os receptores MOR, mas não os CB1, expressos na SCPd, estão envolvidos na modulação do efeito antinociceptivo que segue as reações de defesa semelhantes ao medo induzidas pela estimulação química da SCPd com NMDA. Palavras-chave: medo, congelamento, opioide, endocanabinoide, antinocicepção. Abstract: A wealth of evidence indicates an important role of periaqueductal gray matter (PAG) in defensive responses and pain control. Activation of cannabinoid type-1 (CB1) or mu-opioid (MOR) receptors in the dorsal region of this structure (dPAG) inhibit fear and facilitate antinociception induced by different fear stimuli or situations. However, it is still unknown whether these two receptors can work cooperatively to achieve these inhibitory actions. This study investigates a possible functional interaction between CB1 and MOR receptors localized in the dPAG in the regulation of fear-like defensive response and antinociception evoked by the dPAG chemical stimulation with N-methyl-D-aspartate (NMDA). Male Wistar rats implanted with a guide-cannula aimed at the dPAG were tested for freezing expression and tailflick latency after local microinjection of NMDA. In experiment 1, before the administration of this excitatory amino acid, animals were intra-dPAG injected with the CB1 agonist ACEA (0.5 pmol). Also, CB1 receptor antagonist AM251 (100 pmol) was administrated. In experiment 2, before the administration of this excitatory amino acid, animals were intra-dPAG injected with the MOR agonist DAMGO (0.5 pmol). Additionally, MOR antagonist CTOP (1 nmol) was combined with DAMGO. In experiment 3, to investigate the functional interaction between MOR and CB1 receptors, microinjection of CTOP was combined with ACEA, whereas of AM251 was combined with DAMGO. Our results showed that ACEA or DAMGO injection in the dPAG inhibited NMDA-induced freezing expression, only the later drug increased antinociception measured by the tail-flick test. More importantly, the inhibitory effect of ACEA or DAMGO on freezing was blocked by CTOP and AM251, respectively, indicating a functional interaction between these two receptors in the mediation of defensive behaviors. However, this cooperative interaction was not observed on NMDA-induced antinociception. Our findings support the hypothesis that a cooperative action between both receptors, MOR and CB1 receptors, into dPAG occurs and it is involved with the mediation of NMDA-induced defensive response, but not with NMDA-induced antinociception that follows this defensive reaction. Moreover, our findings highlight that MOR, but not CB1 receptors, expressed in dPAG is involved in the modulation of antinociceptive effect that follows the fear-like defense-reactions induced by dPAG chemical stimulation with NMDA. Keywords: fear, freezing, opioid, endocannabionoids, antinociception

Submitted by Ana Moreira (anadsmoreira@ufp.pt) on 2020-06-29T12:38:02Z No. of bitstreams: 1 PPG_31436.pdf: 696618 bytes, checksum: c558e67fb4a07cb4f424facbe566de16 (MD5) Approved for entry into archive by azevedo@ufp.pt (azevedo@ufp.pt) on 2020-07-02T16:07:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PPG_31436.pdf: 696618 bytes, checksum: c558e67fb4a07cb4f424facbe566de16 (MD5) Made available in DSpace on 2020-07-02T16:07:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PPG_31436.pdf: 696618 bytes, checksum: c558e67fb4a07cb4f424facbe566de16 (MD5) Previous issue date: 2019-12-17

A Cannabis Sativa L. é uma das plantas mais antigas a serem cultivadas pela espécie humana, e estudos revelaram que plantas do gênero Radula, único gênero da família Radulaceae, como Radula complanata, apresentam uma substância variante do THC psicoativo, o Perrotinolene. O presente trabalho teve o objetivo de identificar aplicações farmacológicas deste gênero através de uma revisão de literatura. O Perrotinolene demonstrou uma grande potência de ação anestésica, antipirética e sedativa, no entanto fica evidenciada a necessidade de novos estudos com a substância.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A Cannabis sativa L, vulgarmente conhecida como maconha, é uma planta constituída por cerca de 400 compostos diferentes, dos quais 70 são considerados psicoativos, os chamados canabinoides. Destes, pelo menos seis destacam-se por suas propriedades terapêuticas, exploradas há milênios por diferentes civilizações e estudadas e comprovadas pela Ciência ocidental pelo menos desde a década de 1960. No entanto, a maconha e seus compostos são classificados, pela legislação internacional – e, até pouco tempo, pelo ordenamento pátrio – como drogas ilícitas dotadas de características particularmente perigosas e daninhas, tendo, portanto, sua produção, distribuição e consumo proibidos. Porém, no Brasil, a partir de 2014, quando um grupo de pacientes e seus familiares passaram a reivindicar o direito ao tratamento com medicamentos à base de canabinoides, com destaque para o canabidiol (CBD), tem havido uma série de alterações nas normas da Anvisa, que, atualmente, autorizam a importação do CBD, em caráter excepcional. Ao mesmo tempo, a Lei 11.343/2006, ao proibir o cultivo e o uso de drogas, excepciona sua utilização para fins científicos e medicinais, embora tal disposição nunca tenha sido regulamentada. Assim, o objetivo do presente trabalho é investigar como tal omissão do Estado na regulamentação do uso medicinal da maconha, bem como a restrição na regulamentação da Anvisa – que autoriza aquisição somente via importação e em caráter excepcional – violam o direito fundamental à saúde. Para tanto, foi feita revisão bibliográfica e documental de textos jurídicos e historiográficos que tratam da criminalização das drogas, no geral, e da maconha, em específico, bem como pesquisa documental acerca do processo da estigmatização da cannabis, que, durante o século XX, passou de substância medicinal amplamente utilizada à condição de droga de alta periculosidade que deveria ter seu uso erradicado. Também foi elaborado levantamento da jurisprudência do TJMG e do TRF-1 quanto aos processos que julgam temas concernentes à utilização medicinal da maconha. Os resultados apontam que a criminalização da maconha sofreu fortes influências econômicas, moralistas, religiosas e, no caso do Brasil, com intenso viés racista, tendo sido pouco embasada em argumentos científicos. Já o levantamento nos tribunais demonstra a demanda crescente pelo uso medicinal dos canabinoides, apontados, em várias ações, como condição de sobrevivência de enfermos de todas as idades, sobretudo de crianças. Todas essas as apurações demonstram as dificuldades em custear a importação do medicamento na forma como ela é autorizada pela Anvisa. A conclusão, assim, é que a regulamentação do uso medicinal da maconha, da forma como se encontra na atualidade, exclui de seu pálio pacientes e familiares que não possuem condições financeiras de arcar com a importação do medicamento e que, portanto, viola o direito fundamental à saúde – de acesso universal e gratuito – devendo, por isso, ser ampliada, de modo a abranger os titulares do direito à saúde em sua totalidade. La Cannabis sativa L, conocida vulgarmente como marihuana, es una planta constituida por alrededor de 400 compuestos distintos, de los cuales 70 son considerados psicoactivos, los canabinoides. De estos, al menos seis se destacan por sus propiedades terapéuticas, explotadas hace milenios por diferentes civilizaciones; estudiadas y comprobadas por la Ciencia occidental desde la década de 1960. Sin embargo, la marihuana y sus compuestos son clasificadas, por la legislación internacional – y, hasta recientemente, por el derecho brasileño – como drogas ilegales dotadas de características peligrosas, razón por la que su producción, distribución y consumo se encuentran prohibidos. Pero, en Brasil, en 2014, cuando un grupo de pacientes y sus familiares empezaron a reclamar el derecho al tratamiento con medicamentos hechos con cannabinoides, con énfasis para el cannabidiol (CBD), lo cual derivó en una serie de cambios en las normas de la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria (Anvisa), que, actualmente, pasó a autorizar la importación del CBD, en carácter excepcional. Mientras esto, la Ley de Drogas, al prohibir el cultivo y el consumo de drogas, excepciona su utilización para fines científicos o medicinales, aunque tal disposición nunca haya sido reglamentada. Así, el objetivo del presente trabajo es investigar cómo tal omisión del Estado en la reglamentación del uso medicinal de la marihuana, así como la restricción hecha en la reglamentación de la Anvisa – la cual autoriza la adquisición solamente por medio de importación y en carácter excepcional – violan el derecho fundamental a la salud. Para ello, ha sido hecha una revisión bibliográfica y documental de textos jurídicos e historiográficos que versan de la criminalización de las drogas en general y de la marihuana, en específico, así como una pesquisa documental sobre el proceso de estigmatización de la cannabis, que, durante el siglo XX, ha pasado de sustancia medicinal ampliamente usada a la condición de droga peligrosa que debería tener su uso erradicado. También se realizó un análisis sobre la jurisprudencia del Tribunal de Justicia del Estado de Minas Gerais y del Tribunal Regional Federal de la Primera Región sobre las acciones que juzgaron temas relativos a la utilización medicinal de la marihuana. Los resultados han indicado que la criminalización de la cannabis sufrió fuertes influencias economías, moralistas, religiosas y, en el caso de Brasil, racistas, que han sido poco fundamentadas en argumentos científicos. Ya el análisis de los tribunales ha mostrado la demanda creciente por el uso medicinal de los cannabinoides, apuntados, en numerosas acciones, como condición de sobrevivencia de enfermos de todas las edades, sobretodo de niños. Todas estas investigaciones muestran las dificultades en costear la importación del medicamento en la forma como ella es autorizada por la Anvisa. La conclusión, así, es que la reglamentación del uso medicinal de la marihuana, como es hecha actualmente, excluye de su protección pacientes y familiares que no poseen las suficientes condiciones financieras para la importación de los cannabinoides y que, por ende, vulnera el derecho fundamental a la salud – de acceso universal y gratuito – y debe, por ello, ser ampliada, con fines de abarcar los titulares del derecho a la salud en su totalidad. Le Cannabis sativa L est une plante constituée par plus ou moins 400 composés différents, lesquels 70 sont considérés psychoactifs, les cannabinoïdes. Parmi ces substances, six ont propriétés médicinales connues et explorées il y a milliers d'années et confirmées par la Science occidentale depuis la décennie des années soixante. Cependant, le cannabis avec ses composés sont classifiées par le droit international – et, jusque récemment, par le droit brésilien – comme drogues illicites considérées dangereuses et, pour cette raison, sa production, distribution et consume sont prohibés. Mais, au Brésil, à partir de 2014, quand un groupe de patients et sa famille ont commencé à réclamer le droit au traitement avec médicaments à base de cannabinoïdes, surtout le canabidiol (CBD), il y a eu une série de transformations dans les normes de l'Agence de Veille Sanitaire (en portugais, « Anvisa »), laquelle, actuellement, autorise l'importation de CBD, mais juste de forme exceptionnelle. En même temps, la Loi de Drogues, quand interdit la culture et l'use de drogues, fait une exception concernent à son utilisation avec objectifs scientifiques et médicinales, cependant cette disposition n'a jamais été réglementée. Ainsi, l'objectif de ce travail est de rechercher comment l'omission de l’État en question qui concerne à la réglementation de l'utilisation médicinale du cannabis, comme la restriction dans la réglementation de l'Anvisa – laquelle autorise l'acquisition seulement par importation et de forme exceptionnelle – violent le droit fondamental à la santé. Pour cela, ce a été élaboré une révision bibliographique et documentaire des articles juridiques et historiographique qui traitent de la criminalisation des drogues en général et du cannabis en particulier, ainsi que ce a été élaborée une recherche documentaire sur le procès de stigmatisation du cannabis, lequel, pendant le siècle XX, avant considéré une substance médicinal très utilisée, c'est devenu une drogue dangereuse qu'il faut éradiquer. De plus, c'est a été fait une recherche sur la jurisprudence du Tribunal de l'État de Minas Gerais et du Tribunal Régional Fédéral de la Première Région concernant aux procès qui jugent les affaires d'utilisation médicinal du cannabis. Les résultats montrent que la criminalisation du cannabis est fruit des influences économiques, moralistes, religieuses et même raciste, dans le cas du Brésil, en plus de peu fondée sur des arguments scientifiques. À propos de la recherche dans les tribunaux, elle montre la croissante demande par l'utilisation médicinale des cannabinoïdes, indiqués comme condition de survie des malades avec tous les âges, surtout les enfants. Toutes ces recherches démontrent les difficultés pour financier l'importation du médicament comme elle est autorisée par l'Anvisa. Ainsi, la conclusion est que la réglementation de l'usage médicinal du cannabis, comme elle est faite actuellement, exclut les patients et sa famille qui n'ont pas conditions de couvrir les coûtes avec l'importation du médicament et, pour cette raison, l'État viole le droit fondamental à la santé – d'accès universel et gratuit – et, par conséquent, cette réglementation doit être élargie, pour englober les titulaires du droit à la santé dans leur intégralité. Dissertação (Mestrado)

Resumen: Introducción: los productos de Cannabis sativa L poseen una eficacia terapéutica conocida desde la Antigüedad, aunque su tipificación farmacológica data de mediados del siglo XX. Recientemente se regularizó su uso en Uruguay. Objetivo: analizar una experiencia clínico terapéutica preliminar con cannabis medicinal (CM) con alto contenido en cannabidiol (CBD). Método: estudio epidemiológico observacional y retrospectivo de una cohorte de 355 pacientes que concurrieron a consultar espontáneamente sobre CM en una clínica privada entre agosto de 2016 y diciembre de 2017. Durante la primera entrevista se recogieron datos demográficos, historia clínica, farmacológica, expectativas y experiencia previa con cannabis. Se indicó mayoritariamente cannabis con alto contenido en CBD (5,25% de CBD y 0,2% de tetrahidrocannabinol (THC)). En consultas siguientes, se investigó el acceso al CM y se valoró su respuesta y efectos adversos mediante escalas analógicas. Se utilizó estadística descriptiva. Resultados: en la cohorte estudiada predominaron mujeres con edad promedio de 67 años, de nivel educativo terciario. Las patologías de consulta fueron neurológicas (38%), enfermedades reumáticas o artro-degenerativas (37%), neoplasias (13%), psiquiátricas (4%) y misceláneas (8%). La mayoría de estos casos (60,6%) refirió mejoría de sus síntomas y solo 16,3% de la población estudiada presentó efectos adversos de grado leve. Los altos costos y la gestión dificultosa para conseguir el CM fueron causas para no iniciar o abandonar el tratamiento. Conclusiones: nuestro estudio preliminar refleja una respuesta terapéutica positiva y sin efectos adversos significativos al CM con alto contenido de CBD. El 60,6% de los pacientes tratados refirió mejoría de sus síntomas. Los factores decisivos para un tratamiento exitoso orientan a facilitar el acceso al CM, mejorando la gestión para su obtención y disminuyendo los costos para una mayor accesibilidad. Abstract: Introduction: Cannabis Sativa L. products are known to be therapeutically effective since ancient times, despite its pharmacological typification was made in the mid-20th century. Its use was recently regulated in Uruguay. Objective: to analyse a preliminary clinical-therapeutic experience with MC with high content of cannabidiol (CBD). Method: epidemiological, observational and retrospective study of a 355 patient cohort who spontaneously consulted to learn about CM at a private clinic, between August 2016 and December 2017. Demographic data, medical records, expectation and previous experience with cannabis were collected in the first interview. In most cases, cannabis with high content of CBD was prescribed (5,25 % CBD and 0,2% THC). In subsequent consultations, access to access to MC was invesrtigated and both response to it and adverse effects were studied by means of analogue scales. The study used descriptive statistics. Results: in the cohort studied, women with an average age of 67 years old and university studies prevailed. The following conditions motivated consultations: neurological (38%), rheumatic or bone degenerative diseases (37%), neoplasms (13%), psychiatric diseases (4%) and miscelánea (8%). In most cases (60,6%) patients stated symptoms improved and only 16,3% of the populaiton studied presented mild adverse effects. High costs and difficulties in accessing MC were the reasons for not starting or abandoning treatment. Conclusions: our preliminary study reflects the positive therapeutic response and non significant adverse effects to MC with high content of CBD. 60,6% of patients treated referred improvement in their symptoms. Decisive factors for a successful treatment point at the need to make access to MC easier by improving management to obtain it and reducing costs for a greater accessibility. Resumo: Introdução: A eficácia terapêutica dos produtos de Cannabis Sativa L. é conhecida desde a antiguidade, embora sua tipificação farmacológica tenha sido feita a meados do século XX. Seu uso no Uruguai foi regularizado recentemente. Objetivo: Analisar uma experiencia clínico-tera-pêutica preliminar com CM com alto teor de Cannabidiol (CBD). Métodos: Estudo epidemiológico observacional e retrospectivo de uma coorte de 355 pacientes que consultaram espontaneamente sobre CM em uma clínica privada no período agosto de 2016 - dezembro de 2017. Durante a primeira entrevista foram coletados dados demográficos, clínicos, farmacológicos, expectativas e experiencia previa com cannabis. Na maioria dos casos indicou-se cannabis com alto teor em CBD (5,25 % de CBD e 0,2 % de THC). Nas consultas seguintes, coletou-se informação sobre o acesso a CM e realizou-se uma avaliação da resposta e dos efeitos adversos utilizando escalas analógicas. Foram utilizados métodos de estadística descritiva. Resultados: Na coorte estudada predominaram mulheres com idade média de 67 anos, de nível educativo terciário. As razõoes de consulta foram patologias neurológicas (38%), enfermidades reumáticas ou artro-degenerativas (37%), neoplasias (13%), doenças psiquiátricas (4%) e outras (8%). A maioria dos casos (60.6 %) informou melhoria dos sintomas e somente 16.3 % da população estudada apresentou efeitos adversos leves. As causas para não iniciar ou abandonar o tratamento foram os altos custos e as dificuldades para a obtenção da CM. Conclusões: Este estudo preliminar mostra uma resposta terapêutica positiva e sem efeitos adversos significativos ao CM com alto teor de CBD. 60.6% dos pacientes tratados informou melhoria de sintomas. Os fatores decisivos para um tratamento exitoso mostram a necessidade de facilitar o acesso a CM melhorando a gestão para sua obtenção e diminuindo os custos para aumentar o acesso.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019 Made available in DSpace on 2020-05-04T22:58:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2019-12-30 Hospital São Francisco Xavier e Farmácia Higiénica

Social anxiety disorder (SAD), or social phobia, is one of the most common types of anxiety disorder, with a lifetime prevalence that can reach 15%. Pharmacological treatments for SAD have moderate efficacy and are associated with significant adverse reactions. Therefore, recent studies have focused on searching for new treatments for this disorder. Preclinical studies and preliminary evidence in humans suggest that the phytocannabinoid cannabidiol and the neuropeptide oxytocin have anxiolytic effects. In the present text, we review this evidence and its implications for pharmacological treatment. We conclude that although current available studies show promising results regarding both the safety and efficacy of cannabidiol and oxytocin for the treatment of SAD, most studies were performed using single or few doses of these compounds, with small sample sizes. Therefore, future studies should explore the anxiolytic potential of these compounds using long-term, placebo-controlled designs with larger samples to elucidate the possible use of these compounds in the treatment of SAD.

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências. Orientador: Prof. Dr. Francisney Pinto Nascimento Coorientador: Prof. Dr. Elton Gomes da Silva Submitted by ANA CAROLINA MARTINS GOMES (anagomes_28@hotmail.com) on 2019-08-28T18:13:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Ana_Gomes_2019.pdf: 3045957 bytes, checksum: 22ebba2ab8d4436bcb334abe8becdc6b (MD5) Made available in DSpace on 2019-08-28T18:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Ana_Gomes_2019.pdf: 3045957 bytes, checksum: 22ebba2ab8d4436bcb334abe8becdc6b (MD5) Previous issue date: 2019-08-28 Diversos estudios sugieren que el uso de canabinoides puede ser útil para mejorar los síntomas motores refractarios al tratamiento convencional en la enfermedad de Parkinson, así como en los niveles de dolor. Actualmente, las terapias disponibles se basan en la reposición dopaminérgica y promueven diversos efectos adversos que perjudican la calidad de vida de los pacientes. En este contexto, este estudio consistió en una serie de casos y evaluó el efecto terapéutico de dos dosis bajas de extracto de canabinoides sobre la sintomatología motora, funcional y el dolor en pacientes portadores de enfermedad de Parkinson idiopática. Para ello, se administraron dos dosis diferentes de canabinoides a cuatro pacientes previamente diagnosticados, en tratamiento estable con levodopa, con estadificación Hohen y Yahr entre 3 y 4. Dos pacientes recibieron una dosis diaria de extracto que contenía 250 μg de tetrahidrocannabinol y 28 μg de cannabidiol durante 60 días, administrado como un aceite oral, y los otros dos pacientes recibieron una dosis diaria de extracto que contenía 1000 μg de tetrahidrocannabiol y 112μg de cannabidiol durante 60 días, administrado como un aceite oral. Se realizó una evaluación basal y 15, 30 y 60 días después de la intervención. Las evaluaciones incluyeron análisis de la capacidad motora y dolor con el uso del BioFeed®, la Escala Unificada de Evaluación de la Enfermedad de Parkinson y el cuestionario de dolor McGill. El conjunto de datos obtenidos indicó, en general, potencial de los canabinoides en promover un incremento de la capacidad motora y funcional del paciente con Enfermedad de Parkinson, demostrados en conjunto por las dos herramientas motoras utilizadas, así como por relatos de los pacientes. Se demostró una mejora de los scores de la Escala Unificada de Evaluación de la Enfermedad de Parkinson para los pacientes en los que el síntoma de rigidez era más prominente, así como se obtuvo una mejora en la ejecución de movimientos evaluados por BioFeed®, sin presentar ningún efecto psicoactivo. Sin embargo, el rango de dosis utilizado no promovió mejora de los niveles de dolor en ningún caso. Considerando que los tratamientos actuales no tienen eficacia a largo plazo, los resultados obtenidos en estos casos son prometedores y deben ser explorados en nuevos estudios para comprobar eficacia y explorar mayores rangos de dosis Several studies has been shown that the use of cannabinoids may be a useful tool for improving motor symptoms refractory to conventional treatment in Parkinson's paitents. Also, cannabinoids can reduce the pain, a non-motor symptom very common in these patients. Currently available therapies are based on dopaminergic replacement and promote various adverse effects that reduce patients' quality of life. In this context, this study is a series of cases that evaluated the therapeutic effect of two low doses of cannabinoid extract on motor, functional and pain symptoms in patients with idiophatic Parkinson’s Disease. Two different doses of cannabinoids were administered to four patients previously diagnosed and in stable treatment with levodopa, with Hohen and Yahr stage between 3 and 4. Two patients received a daily dose of 250 μg of tetrahydrocannabinol and 28 μg of cannabidiol for 60 days, administered as an oil orally. Other two patients received a daily dose of extract containing 1000μg of tetrahydrocannabinol and 112μg of cannabidiol for 60 days, administered as an oil orally. A baseline evaluation was performed and after 15, 30 and 60 days of intervention. Assessments included motor ability and pain analysis using BioFeed®, the Unified Parkinson's Disease Assessment Scale, and the McGill Pain Questionnaire. The results showed that cannabinoids generally promoted an improvement on motor and functional capacity of the Parkinson’s disease patient, taking account both motor tools used. The patients' reports agreed with the motor evaluation tools results. Improvement of symptoms were higher in patients that had presented high level of stiffness. Both doses did not cause any psychoative effect in any patient. However, the dose range used did not improve pain levels in any case. Considering that current treatments do not have long-term efficacy, the results obtained in this study have potential to be a new treatment, but new studies are necessary to extend and to improve the treatment approach Estudos sugerem que o uso de canabinoides pode ser um alvo útil para melhorar os sintomas motores refratários ao tratamento convencional na Doença de Parkinson, bem como dos níveis de dor. Atualmente, as terapias disponíveis baseiam-se na reposição dopaminérgica e promovem diversos efeitos adversos que prejudicam a qualidade de vida dos pacientes. Neste contexto, este estudo consistiu em uma série de casos e avaliou o efeito terapêutico de duas doses baixas de extrato de canabinoides sob a sintomatologia motora, funcional e dor em pacientes portadores de Doença de Parkison idiopática. Para isso, foram administrados duas doses diferentes de canabinoides à quatro pacientes previamente diagnosticados, em tratamento estável com levodopa, com estadiamento Hohen e Yahr entre 3 e 4. Dois pacientes receberam uma dose diária de extrato contendo 250μg de tetrahidrocanabinol e 28μg de canabidiol durante 60 dias administrado na forma de óleo por via oral, e os outros dois pacientes receberam uma dose diária de extrato contendo 1000μg de tetrahidrocanabinol e 112μg de canabidiol durante 60 dias, administrado na forma de óleo por via oral. Foi realizada uma avaliação basal e após 15, 30 e 60 dias de intervenção. As avaliações incluíram análise da capacidade motora e dor com o uso da ferramenta BioFeed®, a Escala Unificada de Avaliação da Doença de Parkinson e o questionário de dor McGill. O conjunto de dados obtidos indicou, de modo geral, potencial dos canabinoides em promover incremento da capacidade motora e funcional do paciente com Doença de Parkinson, demonstrados em conjunto pelas duas ferramentas motoras utilizadas, bem como relatos dos pacientes. Foi demonstrado melhora dos escores da Escala Unificada de Avaliação da Doença de Parkinson para os pacientes nos quais o sintoma de rigidez eram mais proeminentes, bem como obteve-se melhora ne execução de movimentos avaliados pelo BioFeed®, sem apresentar qualquer efeito psicoativo. Entretanto, a faixa de dose utilizada não promoveu melhora dos níveis de dor em nenhum caso. Considerando que os tratamentos atuais não possuem eficácia a longo prazo, os resultados obtidos nestes casos são promissores para as duas doses testadas, em especial a menor dose, e devem ser explorados em novos estudos para comprovar eficácia e explorar maiores faixas de doses.

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências. Orientador: Prof. Dr. Francisney Pinto do Nascimento e Coorientador: Prof. Dr. Elton Gomes da Silva Submitted by ANA CAROLINA MARTINS GOMES (anagomes_28@hotmail.com) on 2019-08-27T18:50:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Ana_Gomes_2019.pdf: 3045957 bytes, checksum: 22ebba2ab8d4436bcb334abe8becdc6b (MD5) Made available in DSpace on 2019-08-27T18:50:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Ana_Gomes_2019.pdf: 3045957 bytes, checksum: 22ebba2ab8d4436bcb334abe8becdc6b (MD5) Previous issue date: 2019-08-27 Diversos estudios sugieren que el uso de canabinoides puede ser útil para mejorar los síntomas motores refractarios al tratamiento convencional en la enfermedad de Parkinson, así como en los niveles de dolor. Actualmente, las terapias disponibles se basan en la reposición dopaminérgica y promueven diversos efectos adversos que perjudican la calidad de vida de los pacientes. En este contexto, este estudio consistió en una serie de casos y evaluó el efecto terapéutico de dos dosis bajas de extracto de canabinoides sobre la sintomatología motora, funcional y el dolor en pacientes portadores de enfermedad de Parkinson idiopática. Para ello, se administraron dos dosis diferentes de canabinoides a cuatro pacientes previamente diagnosticados, en tratamiento estable con levodopa, con estadificación Hohen y Yahr entre 3 y 4. Dos pacientes recibieron una dosis diaria de extracto que contenía 250 μg de tetrahidrocannabinol y 28 μg de cannabidiol durante 60 días, administrado como un aceite oral, y los otros dos pacientes recibieron una dosis diaria de extracto que contenía 1000 μg de tetrahidrocannabiol y 112μg de cannabidiol durante 60 días, administrado como un aceite oral. Se realizó una evaluación basal y 15, 30 y 60 días después de la intervención. Las evaluaciones incluyeron análisis de la capacidad motora y dolor con el uso del BioFeed®, la Escala Unificada de Evaluación de la Enfermedad de Parkinson y el cuestionario de dolor McGill. El conjunto de datos obtenidos indicó, en general, potencial de los canabinoides en promover un incremento de la capacidad motora y funcional del paciente con Enfermedad de Parkinson, demostrados en conjunto por las dos herramientas motoras utilizadas, así como por relatos de los pacientes. Se demostró una mejora de los scores de la Escala Unificada de Evaluación de la Enfermedad de Parkinson para los pacientes en los que el síntoma de rigidez era más prominente, así como se obtuvo una mejora en la ejecución de movimientos evaluados por BioFeed®, sin presentar ningún efecto psicoactivo. Sin embargo, el rango de dosis utilizado no promovió mejora de los niveles de dolor en ningún caso. Considerando que los tratamientos actuales no tienen eficacia a largo plazo, los resultados obtenidos en estos casos son prometedores y deben ser explorados en nuevos estudios para comprobar eficacia y explorar mayores rangos de dosis Several studies has been shown that the use of cannabinoids may be a useful tool for improving motor symptoms refractory to conventional treatment in Parkinson's paitents. Also, cannabinoids can reduce the pain, a non-motor symptom very common in these patients. Currently available therapies are based on dopaminergic replacement and promote various adverse effects that reduce patients' quality of life. In this context, this study is a series of cases that evaluated the therapeutic effect of two low doses of cannabinoid extract on motor, functional and pain symptoms in patients with idiophatic Parkinson’s Disease. Two different doses of cannabinoids were administered to four patients previously diagnosed and in stable treatment with levodopa, with Hohen and Yahr stage between 3 and 4. Two patients received a daily dose of 250 μg of tetrahydrocannabinol and 28 μg of cannabidiol for 60 days, administered as an oil orally. Other two patients received a daily dose of extract containing 1000μg of tetrahydrocannabinol and 112μg of cannabidiol for 60 days, administered as an oil orally. A baseline evaluation was performed and after 15, 30 and 60 days of intervention. Assessments included motor ability and pain analysis using BioFeed®, the Unified Parkinson's Disease Assessment Scale, and the McGill Pain Questionnaire. The results showed that cannabinoids generally promoted an improvement on motor and functional capacity of the Parkinson’s disease patient, taking account both motor tools used. The patients' reports agreed with the motor evaluation tools results. Improvement of symptoms were higher in patients that had presented high level of stiffness. Both doses did not cause any psychoative effect in any patient. However, the dose range used did not improve pain levels in any case. Considering that current treatments do not have long-term efficacy, the results obtained in this study have potential to be a new treatment, but new studies are necessary to extend and to improve the treatment approach Estudos sugerem que o uso de canabinoides pode ser um alvo útil para melhorar os sintomas motores refratários ao tratamento convencional na Doença de Parkinson, bem como dos níveis de dor. Atualmente, as terapias disponíveis baseiam-se na reposição dopaminérgica e promovem diversos efeitos adversos que prejudicam a qualidade de vida dos pacientes. Neste contexto, este estudo consistiu em uma série de casos e avaliou o efeito terapêutico de duas doses baixas de extrato de canabinoides sob a sintomatologia motora, funcional e dor em pacientes portadores de Doença de Parkison idiopática. Para isso, foram administrados duas doses diferentes de canabinoides à quatro pacientes previamente diagnosticados, em tratamento estável com levodopa, com estadiamento Hohen e Yahr entre 3 e 4. Dois pacientes receberam uma dose diária de extrato contendo 250μg de tetrahidrocanabinol e 28μg de canabidiol durante 60 dias administrado na forma de óleo por via oral, e os outros dois pacientes receberam uma dose diária de extrato contendo 1000μg de tetrahidrocanabinol e 112μg de canabidiol durante 60 dias, administrado na forma de óleo por via oral. Foi realizada uma avaliação basal e após 15, 30 e 60 dias de intervenção. As avaliações incluíram análise da capacidade motora e dor com o uso da ferramenta BioFeed®, a Escala Unificada de Avaliação da Doença de Parkinson e o questionário de dor McGill. O conjunto de dados obtidos indicou, de modo geral, potencial dos canabinoides em promover incremento da capacidade motora e funcional do paciente com Doença de Parkinson, demonstrados em conjunto pelas duas ferramentas motoras utilizadas, bem como relatos dos pacientes. Foi demonstrado melhora dos escores da Escala Unificada de Avaliação da Doença de Parkinson para os pacientes nos quais o sintoma de rigidez eram mais proeminentes, bem como obteve-se melhora ne execução de movimentos avaliados pelo BioFeed®, sem apresentar qualquer efeito psicoativo. Entretanto, a faixa de dose utilizada não promoveu melhora dos níveis de dor em nenhum caso. Considerando que os tratamentos atuais não possuem eficácia a longo prazo, os resultados obtidos nestes casos são promissores para as duas doses testadas, em especial a menor dose, e devem ser explorados em novos estudos para comprovar eficácia e explorar maiores faixas de doses.

Tese de mestrado, Neurociências, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2019 Submitted by Lucília Mateus (luciliamateus@fm.ul.pt) on 2019-07-09T13:36:50Z No. of bitstreams: 1 12007_Tese.pdf: 3027194 bytes, checksum: 0c85e79aaf277b47d384caa38f9a63eb (MD5) Made available in DSpace on 2019-07-17T11:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 12007_Tese.pdf: 3027194 bytes, checksum: 0c85e79aaf277b47d384caa38f9a63eb (MD5) Previous issue date: 2019-02-25

Este trabalho teve seu enfoque na síntese de análogos racionalmente planejados, inspirados na estrutura do canabidiol (CBD), tendo as R- e S-carvonas como materiais de partida. Foram sintetizadas, caracterizadas e avaliadas por estudos in silico e farmacológicos 8 substâncias denominadas PQM-242 a PQM-249 com padrão estrutural inédito. A análise da atividade sequestrante de radicais DPPH mostrou que as substâncias apresentaram propriedades antioxidantes semelhantes à quercetina e ao ácido ascórbico, com destaque para PQM-247, com CI50= 4,76μM e um bom perfil quelante de metais, especialmente para Zn2+. O estudo in silico das propriedades ADME sugeriu que PQM-244, PQM-245, PQM-248 e PQM-249 têm a possibilidade de ultrapassar a barreira hematoencefálica, gerando uma melhor atividade no SNC, enquanto que o docking molecular mostrou que os compostos-alvo possuem uma boa afinidade com os receptores canabinoides, especialmente com o receptor CB1, para o qual a PQM-249 exibiu uma afinidade discretamente maior que o CBD. A avaliação farmacológica in vitro mostrou que as substâncias não são citotóxicas, à exceção de PQM-244 e PQM-247 que apresentaram valores de CC50 de 2,92 e 7,95μM, respectivamente. Nos modelos de atividade tipo-antidepressiva (teste de nado forçado e teste de suspensão pela cauda) e tipo-ansiolítica (teste de campo aberto e teste claro-escuro), as substâncias não demonstraram efeito ansiolítico. Entretanto, os resultados indicaram que elas atuam como antidepressivos na dose de 100μM (10mg/Kg para o CBD) com destaque para PQM-249 que mostrou efeito antidepressivo em ambos os ensaios. This work focused on the synthesis of rationally drug designed, inspired by the structure of canabidiol (CBD), with R and S-carvone as starting materials. Eight substances named PQM-242 to PQM-249, with novel structural pattern, were synthesized, characterized and evaluated by in silico and pharmacological models. The analysis of the scavenging activity of DPPH radicals showed their antioxidant properties similar to quercetin and ascorbic acid, especially for PQM-247 with IC50 of 4.76μM and a good metal chelating activity, especially for Zn2+. The in silico study suggested that PQM-244, PQM-245, PQM-248 and PQM-249 have adequate ability for overcoming the blood brain barrier, leading to better CNS activity, whereas molecular docking studies showed that the target-compounds have good affinities for cannabinoid receptors, especially for CB1, for which PQM-249 exhibited an affinity slightly greater than CBD. In vitro pharmacological evaluation showed that the target-substances are not cytotoxic, except for PQM-244 and PQM-247, which exhibited CC50 values of 2.92 and 7.95 μM, respectively. In the antidepressive-type models (forced swimming test and tail suspension test) and anxiolytic-type models (open field test and light-dark test), the substances did not show an anxiolytic effect. However, they have been shown to act as antidepressants in the dose of 100μM (10mg/kg for CBD), highlighting compound PQM-249 that showed antidepressant effect in both tests. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

The therapeutic properties of Cannabis have been described since antiquity and are of great relevance for the Egyptian, Chinese, Indian, Arab and Latin people. Cannabis-based medicines show several therapeutic purposes, mainly to treat disorders as constipation, some types of pain, epilepsy, anxiety and among others. In addition, the genus Cannabis exhibits great clinical relevance due to its Central Nervous System activities attributed to some phytochemicals compounds, as cannabidiol and Δ9-tetrahydrocannabinol. The interest in the pharmacological properties of Cannabis is growing and several new studies are being carried out to prove its pharmacotherapeutic use which are important to design of novel drugs with different routes of administration and for multiple pathologies resistant to the conventional treatments. In this context, there is a pressure on countries to review the laws that still limit the research development related to medicinal Cannabis purposes. Herein, our aim is to perform an overview about the plant, endocannabinoid system, Cannabis-based medicines and clinical uses, regulatory aspects of Cannabis sp and its chemical compounds of therapeutic interest. Las propiedades terapéuticas del Cannabis se han descrito desde la antigüedad y son de gran relevancia para los pueblos egipcio, chino, indio, árabe y latino. Los medicamentos a base de Cannabis tienen varias finalidades terapéuticas, principalmente para tratar trastornos como el estreñimiento, algunos tipos de dolor, la epilepsia, la ansiedad, entre otros. Además, el género Cannabis tiene una gran relevancia clínica debido a su efecto sobre el Sistema Nervioso Central atribuido a algunos compuestos fitoquímicos, como el cannabidiol y el Δ9-tetrahidrocannabinol. Crece el interés por las propiedades farmacológicas del Cannabis y se están realizando varios nuevos estudios para comprobar su uso farmacoterapéutico, estudios que son importantes para la planificación de nuevos fármacos con diferentes vías de administración y para múltiples patologías resistentes a los tratamientos convencionales. En este contexto, se ejerce presión sobre los países para que revisen la legislación que aún limita el desarrollo de la investigación relacionada con los fines medicinales del Cannabis. Aquí, nuestro objetivo es proporcionar una descripción general de la planta, el sistema endocannabinoide, los medicamentos a base de Cannabis y los usos clínicos, los aspectos regulatorios de Cannabis sp y sus compuestos químicos de interés terapéutico. As propriedades terapêuticas da Cannabis são descritas desde a antiguidade e são de grande relevância para os povos egípcios, chineses, indianos, árabes e latinos. Os medicamentos à base de Cannabis apresentam vários fins terapêuticos, principalmente para tratar distúrbios como a constipação, alguns tipos de dor, epilepsia, ansiedade, entre outros. Além disso, o gênero Cannabis apresenta grande relevância clínica devido seu efeito sobre o Sistema Nervoso Central atribuído a alguns compostos fitoquímicos, como o canabidiol e o Δ9-tetrahidrocanabinol. O interesse pelas propriedades farmacológicas da Cannabis é crescente e vários novos estudos estão sendo realizados para comprovar seu uso farmacoterapêutico, estudos que são importantes para o planejamento de novos fármacos com diferentes vias de administração e para múltiplas patologias resistentes aos tratamentos convencionais. Nesse contexto, há uma pressão sobre os países para que revisem as legislações que ainda limitam o desenvolvimento de pesquisas relacionadas aos fins medicinais da Cannabis. Aqui, nosso objetivo é realizar uma visão geral sobre a planta, sistema endocanabinoide, medicamentos à base de Cannabis e usos clínicos, aspectos regulatórios da Cannabis sp e seus compostos químicos de interesse terapêutico.

Cannabidiol (CBD) is a non-psychotomimetic phytocannabinoid derived from Cannabis sativa. It has possible therapeutic effects over a broad range of neuropsychiatric disorders. CBD attenuates brain damage associated with neurodegenerative and/or ischemic conditions. It also has positive effects on attenuating psychotic-, anxiety- and depressive-like behaviors. Moreover, CBD affects synaptic plasticity and facilitates neurogenesis. The mechanisms of these effects are still not entirely clear but seem to involve multiple pharmacological targets. In the present review, we summarized the main biochemical and molecular mechanisms that have been associated with the therapeutic effects of CBD, focusing on their relevance to brain function, neuroprotection and neuropsychiatric disorders.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2019. O presente trabalho representa a primeira etapa do desenvolvimento deum protótipo terapêutico para aplicação em neurodegeneração. Osesquiterpeno ß-cariofileno (BCP) foi selecionado por ser umcanabinoide estruturalmente singular e se ligar seletivamente ao receptorCB2, que além de ser expresso no SNC, está intrinsicamente ligado aosistema imunológico e é ausente de psicoatividade. Foi realizada ananoencapsulação do BCP para permitir liberação controlada dofármaco no SNC e otimização para administração intranasal. Aformulação foi otimizada quanto a sua composição, definindo umpolímero, surfactante, emulsificante e suas respectivas concentraçõespara ajustar os parâmetros físico-químicos desejados. A formulação foianalisada quanto ao tamanho de partícula, potencial zeta, morfologia,pH, osmolaridade, estabilidade, cinética de liberação in vitro e ligaçãocom proteínas plasmáticas ex vivo. A composição final da formulação denanopartículas de BCP é composta na sua fase orgânica (FO) por Tween20 (0,25%), BCP (0,1%) e PEG 400 (5%) e na sua fase aquosa (FA)composta por água ultrapura e poloxamer P188 (0,25%). A formulação éadequada à administração intranasal, apresentando pH 6,5 eosmolaridade de 150 mmol/kg. O diâmetro médio das partículas foi de147,2 nm, PDI 0,052 e potencial zeta de -24,5. O ensaio de estabilidadeacelerada evidenciou a estabilidade das nanopartículas até 1 mês,seguida do efeito de creaming reversível, porém com reduzidaacumulação de partículas e distribuição homogênea destas. A cinética deliberação das nanopartículas de BCP se mostrou de liberação rápida emmeio fisiológico (60 min) e a cápsula polimérica apresentou elevadaafinidade com elementos sanguíneos, decrescendo ao longo do tempo epermitindo a detecção do ativo livre no plasma sanguíneo. Nestetrabalho, uma formulação contendo nanopartículas de ß-cariofileno aptapara administração fisiológica e testes pré-clínicos foi desenvolvida comsucesso. Abstract : The present work is the first stage in the development of a therapeuticprototype applied to neurodegeneration. The sesquiterpene ß-caryophyllene (BCP) was selected due to being a structurally singularcannabinoid and a selective agonist of the CB2 receptor, which inaddition to being expressed in the CNS, is intrinsically expressed withinthe immune system and lacks psychoactivity. Nanoencapsulation of BCPwas performed to allow controlled release of the drug into the CNS andoptimized intranasal administration. The formulation was optimizedregarding its composition, defining a polymer, surfactant, emulsifier, andtheir respective concentrations, in order to adjust the desired physicochemicalparameters. The formulation was assessed regardingnanoparticle size, zeta potential, morphology, pH, osmolarity, stability,drug release kinetics in vitro, and binding to plasma proteins ex vivo.The final composition of the BCP nanoparticles presented in its organicphase (FO) Tween 20 (0.25%), BCP (0.1%), and PEG 400 (5%) and inits aqueous phase (AF) ultrapure water and poloxamer P188 (0.25%).The formulation is suitable for intranasal administration, presenting pH6.5 and osmolality of 150 mmol/kg. The mean particle diameter was147.2 nm, PDI 0.052, and zeta potential of -24.5. The acceleratedstability test shows that the particle is stable for up to 1 month, then thereversible creaming effect occurs. The rate of particle accumulationshowed to be low and the particle size distribution remained unchanged.The release kinetics of BCP nanoparticles were shown to be promptlyreleased in physiological medium (up to 60 min). The polymeric capsulerevealed high affinity for the blood elements, decreasing over time,allowing linear detection of the free drug in the blood plasma. In thiswork, a formulation containing ß-caryophyllene nanoparticles suitablefor physiological administration and preclinical tests was successfullydeveloped.

Inflammatory bowel diseases (IBD) are characterized by a chronic and recurrent gastrointestinal condition, including mainly ulcerative colitis (UC) and Crohn’s disease (CD). Cannabis sativa (CS) is widely used for medicinal, recreational, and religious purposes. The most studied compound of CS is tetrahydrocannabinol (THC) and cannabidiol (CBD). Besides many relevant therapeutic roles such as anti-inflammatory and antioxidant properties, there is still much controversy about the consumption of this plant since the misuse can lead to serious health problems. Because of these reasons, the aim of this review is to investigate the effects of CS on the treatment of UC and CD. The literature search was performed in PubMed/Medline, PMC, EMBASE, and Cochrane databases. The use of CS leads to the improvement of UC and CD scores and quality of life. The medical use of CS is on the rise. Although the literature shows relevant antioxidant and anti-inflammatory effects that could improve UC and CD scores, it is still not possible to establish a treatment criterion since the studies have no standardization regarding the variety and part of the plant that is used, route of administration and doses. Therefore, we suggest caution in the use of CS in the therapeutic approach of IBD until clinical trials with standardization and a relevant number of patients are performed.

Konoplja je višenamjenska biljka. Ona je među prvim ako ne i prva biljka koja se kultivirala u svijetu. Nagađa se da je bila zastupljena prije 10 000 godina, te da se od nje može napraviti oko 25 000 različitih proizvoda. Koristi od industrijske konoplje su višestruke. Njezin uzgoj je lagan i ne zahtijeva mnogo rada, a omjer uloženog i vraćenog višestruko je veći nego kod većine ostalih kultura koje se uzgajaju. Posebno je na cijeni ulje konoplje za kojim vlada velika potražnja na tržištu i koje dostiže visoke cijene, a konoplja se koristi i u proizvodnji maslaca, kruha, čajeva, krema, sapuna i šampona, pa čak i goriva (dizel) ali je to vrlo skup i zahtjevan proces koji se lokalnim poljoprivrednicima ne isplati. Konoplja se također može koristiti u građevinarstvu (umjesto konvencionalnih građevinskih materijala), za izradu odjeće i obuće, namještaja, bojila i mnogih drugih proizvoda. Poljoprivredno stanje u Osječko baranjskoj županiji nije najbolje zbog više razloga. Kao jedan od potencijala i mogućnosti oživljavanja i slobodno se može reći, procvata poljoprivrede na području Osječko-baranjske županije, očituje se u razvoju industrijske konoplje. Postoje velike potrebe za proizvodima od industrijske konoplje, pogotovo za ljude koji boluje od nekih težih oboljenja ( karcinom). Na koje načine se može iskoristiti potencijal industrijske konoplje, pokazali su na primjeru sajma u okviru Centra za poduzetništvo (Osječko-baranjska županija) čija je voditeljica Ljiljana Olujić Belt koje ujedno bila i voditeljica projekta Ecorural u okviru kojeg se održao sajam. Cilj tog sajma (2011.) je razmjena iskustava i prekogranično povezivanje proizvođača. Projekt Ecorural financirala je Europska Unija kroz program IPA Prekogranična suradnja Hrvatska-Srbija. Zakonom je dozvoljena sadnja industrijske konoplje ali prema Pravilniku o uzgoju konoplje, moguća je sadnja jedino certificiranim sjemenom. To sjeme je moguće kupiti unutar Europske Unije. U Republici Hrvatskoj nema autotohnog sjemena konoplje. Sigurno da tako nešto postoji, javila bi se velika potražnja na tržištu sjemena ne samo u Hrvatskoj, već i izvan Hrvatske. Sortna lista Europske Unije za sjeme svaki dan postaje sve duža. Trenutno se na njoj nalazi 50-ak vrsta. To su sorte za dobivanje vlakna, za kvalitetno sjeme, cvijet ili list. Iz tog razloga naglašava se potreba da se pokrene neka sorta koji bi se proizvodila u Hrvatskoj. Na taj način, proizvođači konoplje u Osječko-baranjskoj županiji ne bi, niti, u jednom trenutku, ovisili o vanjskom tržištu. Otvaranje tržišta za autohtono sjeme industrijske konoplje, pa čak i autohtone proizvode od industrijske konoplje uvelike bi pomogle napaćenom hrvatskom gospodarstvu. Većina zemalja potiče uzgoj industrijske konoplje dok ga naše ministarstvo otežava zakonima. Rješenje problema se nazire u povoljnijim zakonima i kvalitetnim inputima što za sobom kao posljedicu vuče veću razvijenost istočne Hrvatske., Hemp is considered as a multifunctional plant. It is among the first plant that has planted in the world. It is thought to have been represented 10,000 years ago, and that it can make about 25,000 different products out of it. The use of industrial hemp is multiple. Its breeding is easy and does not require much work, and the proportion invested and returned is multiple times higher than most other cultures that are grown. The hemp oil is especially priced because of the high market demand and high prices, and hemp is used in butter, bread, teas, cream, soap and shampoo, and even diesel (diesel) but this is very expensive a demanding process that does not pay to local farmers. Hemp can also be used in construction (instead of conventional building materials), for clothing and footwear, furniture, dyes and many other products. The agricultural situation in Osijek Baranja County is not the best for many reasons.. As one of the potentials and possibilities of revival and, one can say freely, the growth of agriculture in the area of the Osijek-Baranja County is seen in the development of industrial hemp. There is a great need for products from industrial hemp, especially for people suffering from some more serious diseases (cancer). The ways in which the potholes of industrial hemp can be utilized have been demonstrated in the example of a fair within the Center for Entrepreneurship (Osječko-baranjska County), whose leader was Ljiljana Olujić Belt, who was also the head of the Ecorural project in which the fair was held. The aim of this fair (2011) is to exchange experiences and to cross-connect manufacturers. The Ecorural project was funded by the European Union through the IPA cross-border cooperation program Croatia-Serbia.The law permits the planting of industrial hemp but under the Ordinance on hemp breeding. It is possible to plant only certified seed. This seed can be purchased within the European Union. In the Republic of Croatia there is no caraway seed of hemp. Surely if there is something like this, it will have a great demand on the seeds market not only in Croatia, but outside Croatia. The European Union's seed list every day is getting longer. Currently, there are 50 kinds of fiber sorts, for quality seed, flower or leaf. For this reason, the need to launch some kind of variety that would be produced in Croatia is emphasized. In this way, hemp producers in the Osijek-Baranja County would not, at any moment, depend on the external market. The opening up of the market for indigenous seed of industrial hemp and even indigenous industrial hemp products would greatly help the pounded Croatian economy. Most countries are encouraging the cultivation of industrial hemp while our ministry is making it difficult for legislation. Solving the problem would be better laws and quality inputs, which as consequence has greater development in eastern Croatia.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência O transplante de medula óssea (TMO) é uma terapia curativa para diversas enfermidades de origem hematológica, tumores e cânceres, bem como para algumas doenças de origem autoimune. A principal preocupação em relação ao TMO é que pacientes que recebem transplante alogênico ou semialogênico podem desenvolver a doença do enxerto-contra-hospedeiro (Graft versus host disease – GVHD), em que as células da medula transplantada reconhecem diferenças antigênicas entre o doador e o receptor iniciando uma resposta efetora contra o organismo do receptor. A incidência de GVHD em humanos é de 30-60% (Martin et al., 2015) e, dentre aqueles que desenvolvem a doença, há uma taxa de 50% de mortalidade (Barton-Burke, 2008). Atualmente, o principal tratamento de GVHD é o uso ininterrupto de altas doses de corticoides, que levam à imunodepressão e aumentam as chances de recidiva tumoral. Desta forma, nosso objetivo foi avaliar se o Canabidiol (CBD), um potente anti-inflamatório e principal constituinte não psicoativo da Cannabis sativa, seria capaz de reduzir os danos causados pela GVHD. As ações do CBD foram avaliadas em modelo murino de GVHD, induzida através do transplante de medula (1x107 células) e esplenócitos (3x107 células) de camundongos C57BL/6j para Balb/C. Os animais receptores foram tratados diariamente com CBD (30mg/Kg) ou veículo (5% Tween80) por sete dias, sendo então eutanasiados e os tecidos coletados para análises histopatológicas, ELISA e citometria de fluxo. CBD não apenas gerou aumento da sobrevida, como também reduziu os níveis de TNF-α, IFN-γ, CCL2, CCL3 e CCL5 no intestino e aumento do número de linfócitos FoxP3+ neste mesmo órgão. Entretanto, no fígado, o tratamento com CBD levou à redução de IFN-γ e CCL3, mas não alterou o número de linfócitos FoxP3+. Além disso, CBD também não alterou efeito citotóxico do enxerto-contra-tumor e, em estudo. com antagonistas CB1 e CB2, se mostrou parcialmente dependente deste receptor canabinoide para exercer seu efeito na sobrevida dos camundongos com GVHD, mas não de CB1. De acordo com nossos dados, CBD se apresenta como um tratamento em potencial para a GVHD devido a seus efeitos imuno-regulatórios e ao aumento de sobrevida, relacionado ao receptor CB2. Bone-marrow transplant (BMT) is a curative therapy for several hematological diseases, tumors, cancers and even some autoimmune diseases. However the main concern about BMT is that patients that undergo allogenic or semi-alogenic transplants might develop a secondary disease know as Graft versus host disease (GVHD), in with the bone marrow transplanted cells recognize antigenic disparities between donor and host, leading to an active immune response against the host organism. The incidence of GVHD in humans ranges from 30 to 60% (Martin et al., 2015) and, among those who develop this disease, the mortality rate is up to 50% (Barton-Burke, 2008). Currrently, the main treatment for GVHD is the permanent and unceasing usage of high doses of corticosteroids, that lead to immune suppression and increases the chances of tumor reoccurrence. Therefore, our goal was to evaluate the actions of CBD, a potent anti-inflammatory drug and main non-psychoactive component of Cannabis sativa, in a murine model of GVHD, induced by the transplant of bone marrow cells (1x107) and splenocytes (3x107), from C67BL-6j to Balb-c mice. The mice host were daily treated with CBD (30mg/Kg) or vehicle (5% Tween80) for seven days, starting on the day of the transplant, the mice were then euthanized and their tissues were collected for histopathological, ELISA and flow cytometry analyses. CBD not only lead to an increase in survival rates, but also reduced the levels of TNF-α, IFN-γ, CCL2, CCL3 and CCL5 in the intestines, also increasing the number of FoxP3+ lymphocytes. However, in the liver, the treatment with CBD lead to the reduction only of IFNγ and CCL3, but the number of FoxP3+ lymphocytes were not altered. Besides, CBD also did not affect the cytotoxic effect against tumor or graft-versus-tumor effect (GVL) and, in a study with CB1 and CB2 antagonists, CBD demonstrated to be partially dependent of CB2, but not CB1 cannabinoid receptor to promote an increased survival. Therefore, according to this data, CBD is a potential treatment for GVHD due to its immunomodulatory and the increased survival, related to CB2 cannabinoid receptor.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O transplante de medula óssea (TMO) é uma terapia curativa para diversas enfermidades de origem hematológica, tumores e cânceres, bem como para algumas doenças de origem autoimune. A principal preocupação em relação ao TMO é que pacientes que recebem transplante alogênico ou semialogênico podem desenvolver a doença do enxerto-contra-hospedeiro (Graft versus host disease – GVHD), em que as células da medula transplantada reconhecem diferenças antigênicas entre o doador e o receptor iniciando uma resposta efetora contra o organismo do receptor. A incidência de GVHD em humanos é de 30-60% (Martin et al., 2015) e, dentre aqueles que desenvolvem a doença, há uma taxa de 50% de mortalidade (Barton-Burke, 2008). Atualmente, o principal tratamento de GVHD é o uso ininterrupto de altas doses de corticoides, que levam à imunodepressão e aumentam as chances de recidiva tumoral. Desta forma, nosso objetivo foi avaliar se o Canabidiol (CBD), um potente anti-inflamatório e principal constituinte não psicoativo da Cannabis sativa, seria capaz de reduzir os danos causados pela GVHD. As ações do CBD foram avaliadas em modelo murino de GVHD, induzida através do transplante de medula (1x107 células) e esplenócitos (3x107 células) de camundongos C57BL/6j para Balb/C. Os animais receptores foram tratados diariamente com CBD (30mg/Kg) ou veículo (5% Tween80) por sete dias, sendo então eutanasiados e os tecidos coletados para análises histopatológicas, ELISA e citometria de fluxo. CBD não apenas gerou aumento da sobrevida, como também reduziu os níveis de TNF-α, IFN-γ, CCL2, CCL3 e CCL5 no intestino e aumento do número de linfócitos FoxP3+ neste mesmo órgão. Entretanto, no fígado, o tratamento com CBD levou à redução de IFN-γ e CCL3, mas não alterou o número de linfócitos FoxP3+. Além disso, CBD também não alterou efeito citotóxico do enxerto-contra-tumor e, em estudo. com antagonistas CB1 e CB2, se mostrou parcialmente dependente deste receptor canabinoide para exercer seu efeito na sobrevida dos camundongos com GVHD, mas não de CB1. De acordo com nossos dados, CBD se apresenta como um tratamento em potencial para a GVHD devido a seus efeitos imuno-regulatórios e ao aumento de sobrevida, relacionado ao receptor CB2. Bone-marrow transplant (BMT) is a curative therapy for several hematological diseases, tumors, cancers and even some autoimmune diseases. However, the main concern about BMT is that patients that undergo allogenic or semi-alogenic transplants might develop a secondary disease know as Graft versus host disease (GVHD), in with the bone marrow transplanted cells recognize antigenic disparities between donor and host, leading to an active immune response against the host organism. The incidence of GVHD in humans ranges from 30 to 60% (Martin et al., 2015) and, among those who develop this disease, the mortality rate is up to 50% (Barton-Burke, 2008). Currrently, the main treatment for GVHD is the permanent and unceasing usage of high doses of corticosteroids, that lead to immune suppression and increases the chances of tumor reoccurrence. Therefore, our goal was to evaluate the actions of CBD, a potent anti-inflammatory drug and main non-psychoactive component of Cannabis sativa, in a murine model of GVHD, induced by the transplant of bone marrow cells (1x107) and splenocytes (3x107), from C67BL-6j to Balb-c mice. The mice host were daily treated with CBD (30mg/Kg) or vehicle (5% Tween80) for seven days, starting on the day of the transplant, the mice were then euthanized and their tissues were collected for histopathological, ELISA and flow cytometry analyses. CBD not only lead to an increase in survival rates, but also reduced the levels of TNF-α, IFN-γ, CCL2, CCL3 and CCL5 in the intestines, also increasing the number of FoxP3+ lymphocytes. However, in the liver, the treatment with CBD lead to the reduction only of IFNγ and CCL3, but the number of FoxP3+ lymphocytes were not altered. Besides, CBD also did not affect the cytotoxic effect against tumor or graft-versus-tumor effect (GVL) and, in a study with CB1 and CB2 antagonists, CBD demonstrated to be partially dependent of CB2, but not CB1 cannabinoid receptor to promote an increased survival. Therefore, according to this data, CBD is a potential treatment for GVHD due to its immunomodulatory and the increased survival, related to CB2 cannabinoid receptor.

Made available in DSpace on 2019-03-11T12:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12350_Lilian Valadares Tose.pdf: 32715917 bytes, checksum: e8e59b6c8ac74241cd4b352c1fe268a3 (MD5) Previous issue date: 2018-08-16 A espectrometria de massas (MS) é uma técnica que consiste na ionização de moléculas simples até estruturas complexas, realizando de forma eficiente e dinâmica com ampla aplicação devido a sua sensibilidade e velocidade de análise. Embora seja um tema que desperte bastante interesse perante a sociedade científica, a aplicação de novas tecnologias da MS no campo das analises de matrizes complexas ainda constitui uma linha de pesquisa pouco explorada. Para analises de óleo bruto, parafina e padrões de aromáticos condensados, a atmospheric solids analysis probe mass spectrometry (ASAP-MS) é uma poderosa ferramenta na carcaterização de amostras na sua forma original. Inicialmente, duas metodologias foram usadas para determinar a composição química das amostras: (1) usando gradiente de temperatura variando de 150 a 600 ºC a uma taxa de aquecimento de 150 ºC.min-1 (Parafina) ou 50 ºC.min-1 (Óleo bruto); (2) com temperatura constate de aproximadamente de 350 ºC. O ASAP(+)-MS ionizou o óleo bruto e a parafina, mostrando um perfil de petróleo típico na faixa de m/z 200 - 1400 para ambas amostras. Esse desempenho, principalmente relacionado à detecção de compostos de alto peso molecular (> 1000 Da), é superior ao de outras fontes de ionização tradicionais, como ESI, APCI, DART e DESI. Além disso, os padrões de AC foram identificados em ambas as formas: radicais, [M]+ e cátions protonados, [M+H]+, com mínima fragmentação. Portanto, o ASAP foi eficiente por acessar a composição química de compostos polares e não polares. Para analises da planta Cannabis sativa L. foi empregada a cromatografia líquida de ultra eficiência acoplado a espectrometria de massas de mobilidade iônica por traveling wave (ultra-high performance liquid chromatography coupled to traveling wave ionic mass spectrometry - UPLC-TWIMS MS) usando a fonte de ionização por electrospray em ambos modos, ESI(±). Foram realizadas analises de haxixe, maconha e partes da planta Cannabis sativa L., flor e folha. A presença de uma mistura isomérica complexa dos canabinóides foram identificadas, principalmente Δ9-THC, canabidiol (CBN-C5 e Mw = 310 Da), ácido Δ9-tetrahidrocanabinólico A e B (Δ9-THCA-C5 A/B e Mw= 358 Da) e seus isômeros. Foram identificados três isômeros, m/z 315/313, 311, e 357 usando infusão direta por ESI-TWIMS MS, enquanto uma alta seletividade foi observada nos dados por UPLC-ESI-TOF MS, com separação isomérica de quatro a cinco compostos obtidos no modo único de aquisição de íons (SIM). Em outro estudo, avaliamos o uso de um analisador de mobilidade de alta resolução com acoplado a espectrometria de massa de ultra-alta resolução para caracterização molecular de matéria orgânica dissolvida. Os objetivos incluem o estudo da reprodutibilidade da trapped ion mobility spectrometry (TIMS), faixa de aplicabilidade e possíveis desafios durante a análise de rotina. O TIMS acoplado ao TOF MS e FTICR MS apresentou desempenho semelhante e alta reprodutibilidade. Para a análise de misturas complexas, ambos analisadores foram capazes de capturar as principais características. No entanto, à medida que a complexidade química aumenta a nível da massa nominal (m/z > 300-350), apenas o TIMS-FT-ICR MS foi capaz de resolver as tendências composicionais de menor abundância.

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As fraturas ?sseas bucofaciais de origem traum?tica possuem uma elevada incid?ncia na popula??o mundial. Estas podem ser tratadas de distintas formas, que variam desde m?todos conservadores at? procedimentos amplamente invasivos. Dentre as m?ltiplas possibilidades de tratamento deste tipo de enfermidade, est? a utiliza??o de fitoter?picos, onde insere-se o canabidiol (CBD). Esse ? o principal componente n?o-psicomim?tico da Cannabis sativa (Can-ns) e desempenha potentes efeitos anti-inflamat?rios, antioxidantes e analg?sicos em diversas condi??es patol?gicas. A presente disserta??o est? estruturada na forma de 2 artigos cient?ficos. No primeiro foi realizada uma revis?o de literatura, cujo objetivo foi avaliar os mecanismos de a??o do CBD que possam estar envolvidos no reparo ?sseo. Os resultados deste estudo sugerem que o CBD ? uma subst?ncia capaz de interferir no processo cicatricial de defeitos ?sseos a partir do seu potencial antiinflamat?rio. O segundo trata de um experimento desenvolvido em modelo animal, utilizando 64 ratos Wistar, divididos randomicamente em 2 grupos (teste com CBD e controle). Avaliou-se cl?nica e histologicamente o efeito da administra??o intraperitoneal do CBD, na dose de 10 mg/kg/dia, por duas, 4, 6 e 8 semanas, no processo cicatricial de defeitos ?sseos mecanicamente induzidos em calota craniana de ratos. Constatou-se que o CDB exerceu um efeito ben?fico na quarta semana p?s tratamento onde observou-se um aumento na m?dia de osso neoformado no interior do defeito. Contudo n?o foi observada diferen?a estatisticamente significativa no processo cicatricial dos defeitos ?sseos nos tempos analisados. Estes resultados sugerem a necessidade de aprofundar o tema, visando uma melhor compreens?o sobre poss?veis efeitos do uso do CBD no metabolismo e reparo ?sseo. Maxillofacial fractures of traumatic origin have a high incidence in the world population. These can be treated in different ways, ranging from conservative methods to widely invasive procedures. Among the multiple possibilities of treatment of this type of disease is the use of herbal medicines, where cannabidiol (CBD) is inserted. This is the main non-psychomimetic component of Cannabis sativa (Can-ns) and plays potent anti-inflammatory, antioxidant and analgesic effects in a variety of pathological conditions. The present dissertation is structured in the form of 2 scientific papers. The first one consists of a literature review, whose objective was to evaluate the mechanisms of action of CBD that may be involved in bone repair. The results of this study suggest that CBD is unable substance of interfering in the healing process of bone defects from its anti-inflammatory and antioxidant potential. The second is an experiment in an animal model, using 64 Wistar rats, divided into two groups (test with CBD and control). At the periods of two, four, six and eight weeks, they were evaluated clinically and histologically in the cicatricial process of mechanically induced bone defects in the skull cap of rats. It was found that the CBD exerted a beneficial effect in the fourth week after treatment where an increase in the mean of neoformed bone within the defect was observed, however, no statistically significant difference was observed in the healing process of the bone defects at the times analyzed. These results suggest the need to deepen the theme, aiming at a better understanding of the possible effects of CBD on bone metabolism and repair. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência A toxina PnTx2-6, isolada da peçonha da aranha Phoneutria nigriventer, é muito tóxica (DL50 = 0,7 μg/camundongo) e tem sido estudada como uma molécula potenciadora da função erétil. Entretanto, esta toxina induz hiperalgesia local e sistêmica em baixas doses (3 μg/animal). O peptídeo PnPP-19 representa um epitopo descontínuo da estrutura primária da toxina PnTx2-6. Este peptídeo, assim como a toxina nativa, potencia a função erétil de ratos e camundongos. O presente estudo propôs a investigação do peptídeo PnPP-19 na modulação da via nociceptiva, uma vez que a toxina que lhe deu origem, PnTx2-6, induz hiperalgesia. Os resultados deste trabalho demonstram que o peptídeo PnPP-19 tem atividade antinociceptiva central e periférica, dose e tempo-dependentes. Esta antinocicepção deve-se à ativação concomitante dos receptores μ- e δ-opioides, e dos receptores canabinoides do tipo CB1. O efeito anti-hiperalgésico do peptídeo parece também envolver a liberação de endocanabinoides, uma vez que a administração de doses não-analgésicas de inibidores da recaptação de endocanabinoides e da degradação da anandamida pontencializaram o efeito antinociceptivo de uma baixa dose do peptídeo. O aumento dos níveis de opioides endógenos também parece estar correlacionado com o efeito antinociceptivo de PnPP-19, uma vez que este pode atuar como inibidor da enzima neprilisina. Esta enzima é responsável por hidrolisar vários peptídeos no espaço extracelular, dentre eles o opioide endógeno encefalina. Além disso, a administração do peptídeo ativa a isoforma neuronial e endotelial da óxido nítrico sintase, aumentando os níveis de óxido nítrico nos tecidos. Ainda, a antinocicepção desencadeada por PnPP-19 parece depender dos níveis de GMPc e da ativação dos canais para potássio sensíveis ao ATP. PnPP-19 pode também atuar como um agonista de receptores μ-opioides e modular o influxo de cálcio em neurônios DRG pela ativação destes receptores. A ativação dos receptores μ-opioides desencadeada por PnPP- 19 parece não induzir o recrutamento de β-arrestina2. Este trabalho demonstrou o papel do peptídeo sintético PnPP-19 na via nociceptiva, detalhando seu mecanismo de ação. Sugere-se que o PnPP-19 possa ser utilizado como uma possível ferramenta para o desenvolvimento de novos fármacos analgésicos. The toxin PnTx2-6, isolated from the venom of the spider Phoneutria nigriventer, is very toxic (LD50 = 0.7 μg/mouse) and has been studied as a molecule that improves erectile function. Besides this effect, this toxin induces local and systemic hyperalgesia in low doses (3 μg/animal). The synthetic peptide PnPP-19 represents a discontinuous epitope of the primary structure of the spider toxin PnTx2-6. PnPP-19 improves erectile function of rats and mice. This effect is similar of what is observed for the native toxin PnTx2-6. The present study investigated the role of PnPP-19 in the nociceptive pathway, since the toxin, of which the peptide originates from, induces hyperalgesia. Our data demonstrate that PnPP-19 induces a dose and timedependent central and peripheral antinociception. This antinociception is mediated by activation of CB1 cannabinoid receptors and μ- and δ-opioid receptors. The antihyperalgesic effect of the peptide may also involve the release of endocannabinoids, since the administration of non-analgesic doses of inhibitors of endocannabinoid reuptake and anandamide degradation have potentialized the antinociceptive effect of a low dose of the peptide. Increased levels of endogenous opioids might also be correlated with the antinociceptive effect of PnPP-19. This peptide may act as an inhibitor of the enzyme neprilysin, which is responsible for hydrolyzing several peptides in the extracellular site, among them, the endogenous opioid enkephalin. In addition, PnPP-19 administration may activate the neuronal and endothelial isoform of nitric oxide synthase, which causes an increase of nitric oxide levels. Furthermore, the antinociception triggered by PnPP-19 seems to be depending on cGMP levels and on the activation of ATP sensitive potassium channels. PnPP-19 may also act as a μ-opioid receptor agonist and it might modulate the influx of calcium in DRG neurons by the activation of these receptors. Activation of μ-opioid receptors induced by PnPP-19 does not appear to stimulate β- arrestin recruitment. Our results have shown the role of the synthetic peptide PnPP-19 in the nociceptive pathway, demonstrating at least part of the mechanism of action by which the peptide induces antinociception. Taking into account all our data, we suggest that PnPP-19 might be a useful tool for the development of new drug cadidates for pain treatment.

As les?es ulceradas correspondem ?s enfermidades mais frequentes da mucosa bucal. O dano ? barreira epitelial resulta em desconforto, podendo interferir na higiene oral, mastiga??o, degluti??o e fala. O manejo dessas les?es objetiva basicamente otimizar e acelerar o reparo tecidual, al?m de diminuir a sintomatologia dolorosa. No entanto, n?o est? dispon?vel atualmente uma alternativa considerada o padr?o-ouro para o tratamento das ?lceras traum?ticas bucais. O canabidiol (CBD) ? o principal componente n?o-psicomim?tico da Cannabis sativa e desempenha potentes efeitos anti-inflamat?rios, antioxidantes e analg?sicos em diversas condi??es patol?gicas. A presente disserta??o est? estruturada na forma de 2 artigos cient?ficos. O primeiro consiste em uma revis?o de literatura, cujo objetivo foi avaliar os diferentes mecanismos de a??o do CBD que possam estar envolvidos no reparo de les?es ulceradas traum?ticas, sugerindo o car?ter promissor desta droga na terapia de dist?rbios inflamat?rios orais. O segundo trata de um estudo experimental desenvolvido em modelo animal, com objetivo de avaliar cl?nica e histologicamente o efeito da administra??o intraperitoneal do CBD, nas doses de 5 e 10 mg/kg, por 3 e 7 dias, no reparo de les?o ulcerada induzida no ventre lingual de 60 ratos Wistar. O tratamento com CBD foi capaz de diminuir os escores inflamat?rios das les?es ap?s 3 dias (p < 0,05), contudo n?o foi suficiente para interferir no tempo de cicatriza??o das ?lceras. Dessa forma, concluiu-se que o CBD ? capaz de modular o processo inflamat?rio em les?es ulceradas orais, podendo representar uma alternativa promissora no manejo dessa condi??o. Ulcerative lesions are some of the most common injuries of the oral mucosa. Damage to the epithelial barrier results in discomfort, which may interfere with oral hygiene, chewing, swallowing and speech. The management of these lesions basically aims to optimize and accelerate tissue repair, in addition to reducing its symptomatology. However, there is no option considered gold standard for the treatment of traumatic mouth ulcers. Cannabidiol (CBD) is the main non-psychomimetic component of Cannabis sativa. It exerts potent antiinflammatory, antioxidant and analgesic effects when tested in various pathological conditions. The present dissertation is structured in the form of 2 scientific papers. The first article consists of a literature review to evaluate the different mechanisms of action of CBD that may be involved in the repair of ulcerative lesions, suggesting that this drug is promising for the treatment of oral inflammatory disorders. The second article is a report of an experimental study conducted in an animal model, to assess the effect of 5 and 10 mg/kg CBD on the repair of an ulcerative lesion induced on the ventral tongue of 60 Wistar rats after 3 and 7 days. Treatment with CBD decreased inflammatory scores after 3 days (p < 0.05), but was unable to clinically influence the size of ulcerative lesions. Thus, it is concluded that CBD has an inflammation modulating effect and may represent a promising alternative in the management of oral wounds. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

Orientadora: Prof.a Dr.a Andrea Pinto de Oliveira Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química. Defesa : Curitiba, 27/07/2018 Inclui referências: p.85-96 Resumo: A Cannabis Sativa L. (maconha) apresenta mais de 500 substâncias químicas, das quais aproximadamente 100 delas se classificam na categoria dos canabinóides, de acordo com o Instituto Nacional de Saúde. Entre as quais se encontra o tetra-hidrocanabinol (?9-THC), o canabinóide mais conhecido e responsável pelos efeitos psicodélicos da maconha e o Canabidiol (CBD), outra espécie química que possui amplo espectro de ações com efeitos farmacológicos. Apesar dos inúmeros estudos relatados sobre as potencialidades medicinais do CBD e de sua interação com o THC não há na literatura, até o presente momento, trabalhos relacionados à análise elementar inorgânica desses extratos comumente utilizados para fins terapêuticos. Todavia, devido ao potencial efeito bioacumulador /fitorremediador da planta Cannabis Sativa, estudos que elucidam a composição química inorgânica nesses extratos utilizados como medicamentos e os seus efeitos ao organismo humano são de extrema importância. Neste contexto, esse trabalho caracterizou o perfil químico inorgânico dos extratos de CBD empregando a técnica de espectrometria de emissão óptica com plasma indutivamente acoplado, ICP OES, sendo as amostras previamente digeridas em meio ácido (HNO3 65% v/v e H2O2 30% m/v) por forno de micro-ondas. Os constituintes inorgânicos encontrados em diferentes extratos de CBD foram: Ni (3,0 ?g g-1), Zn (1,5 - 12,5 ?g g-1), Cu (0,3 - 1,7 ?g g-1), Mn (0,5 - 10,0 ?g g-1), Cr (3,0 - 5,0 ?g g-1), B (2,0 - 23,0 ?g g-1) e Ba (0,3 - 0,7 ?g g-1), todos abaixo dos limites máximos estabelecidos pela FDA e ANVISA. Este trabalho teve ainda como propósito o desenvolvimento e otimização de metodologias analíticas para a determinação de Pb, As e Cd empregando a espectrometria de absorção atômica com atomização eletrotérmica por forno de grafite, GF AAS. O reagente hidróxido de tetrametilamônio (TMAH), foi empregado visando à obtenção de uma suspensão representativa dos extratos de CBD que fosse compatível com a técnica GF AAS. Variáveis referentes ao preparo de amostras e aos parâmetros instrumentais foram otimizadas a fim de se obter condições reacionais e de análise adequadas à quantificação desses elementos nos extratos de CBD. Limites de detecção na ordem de 1,36 ?g L-1 para As, 0,23 ?g L-1 para Cd e 5,15 ?g L-1 para Pb foram obtidos, e valores satisfatórios de exatidão e precisão, (80-120%) e RSD (< 7%), respectivamente foram alcançados para os analitos investigados. Os extratos de CBD analisados apresentaram teores de As, Cd e Pb abaixo dos limites máximos estabelecidos pelas agências reguladoras FDA e ANVISA, isto é, 1,5 ?g g-1 para As, 0,5 ?g g-1 para Cd e 0,5 - 1,0 ?g g-1 para Pb. Somente duas amostras apresentaram teor de As acima do LOQ 0,0009 ± 5x10-5 e 0,0006 ± 8x10-5 ?g g-1. O método proposto se apresentou bastante robusto, com elevada precisão e exatidão alcançando os objetivos propostos. Palavras-Chave: Extratos de Canabidiol. TMAH. GF AAS. Arsênio. Cádmio. Chumbo. ICP OES. Abstract: Cannabis Sativa L. (marijuana) has more than 500 chemical substances, of which approximately 100 are classified as cannabinoids, according to the National Institute of Health. Among them are the tetrahydrocannabinol (?9-THC), the cannabinoid most known and responsible for the psychedelic effects of cannabis, and Cannabidiol (CBD), another chemical species with a broad spectrum of actions with pharmacological effects. In spite of the numerous studies reported on the medicinal potential of CBD and its interaction with THC, there are no studies in the literature, until this moment, related to elemental inorganic analysis of these extracts commonly used for therapeutic purposes. However, due to the potential bioaccumulator / phytoremediate effect of the Cannabis Sativa plant, studies that elucidate the inorganic chemical composition in these extracts used as medicines and their effects on the human organism are of extreme importance. In this context, this work has characterized the inorganic chemical profile of CBD extracts using inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES). The samples were previously digested in acid medium (HNO3 65% v/v and H2O2 30% m/v) by microwave oven. The inorganic constituents found in different CBD extracts were: Ni (3.0 ?g g-1), Zn (1.5-12.5 ?g g-1), Cu (0.3 - 1.7 ?g g-1), Mn (0.5 - 10.0 ?g g-1), Cr (3.0 - 5.0 ?g g-1), B , 0 - 23.0 ?g g-1) and Ba (0.3-0.7 ?g g-1), all below the maximum limits established by the FDA and ANVISA. The purpose of this work was the development and optimization of analytical methodologies for the determination of Pb, As and Cd using atomic absorption spectrometry with electrothermal atomization by graphite furnace, GF AAS. The tetramethylammonium hydroxide reagent (TMAH) was used to obtain a representative suspension of the extracts of CBD that were compatible with the GF AAS technique. Variables related to sample preparation and instrumental parameters were optimized in order to obtain reaction and analysis conditions suitable for the quantification of these elements in CBD extracts. Detection limits in the order of 1.36 ?g L-1 for As, 0.23 ?g L-1 for Cd and 5.15 ?g L-1 for Pb were obtained, and satisfactory values of accuracy and precision (80-120 %) and RSD (

Orientador: Prof. Dr. Aleksander Roberto Zampronio Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 30/11/2018 Inclui referências: p.78-95 Resumo: A sepse representa uma resposta imune desregulada à infecção, com altas taxas de mortalidade e pode progredir para choque séptico. Mostramos anteriormente que o tratamento por via oral com o antagonista do receptor canabinóide CB1, rimonabanto, reduziu as taxas de mortalidade em animais com sepse induzida por ligadura e punção do ceco (CLP). Essa melhora na taxa de sobrevida parece estar relacionada a um aumento nos níveis de arginina vasopressina (AVP) circulantes 12 h após a CLP. O presente estudo investigou os efeitos periféricos do tratamento com rimonabanto na disfunção de órgãos, parâmetros hematológicos e reatividade vascular em ratos Wistar machos com sepse induzida por CLP. Além disso, o presente estudo buscou compreender o efeito do bloqueio central do sistema endocanabinóide e do sistema endotelinérgico durante a sepse. Para este fim, avaliamos o efeito do bloqueio do receptor CB1 na taxa de sobrevida de ratos submetidos à sepse por CLP, o efeito do bloqueio do receptor CB1 e o bloqueio do receptor ETA na temperatura da cauda em ratos com sepse, o efeito da sepse nos níveis de anandamida (AEA) e 2 araquidonilglicerol (2-AG) no hipotálamo, o efeito do antagonista de receptor ETA BQ123, nos níveis de endocanabinóides (eCB) no hipotálamo em ratos sépticos e o efeito do bloqueio do receptor CB1, com AM 251 na variação da temperatura da cauda após a administração de AVP. Os resultados que avaliaram o efeito periférico do bloqueio dos receptores CB1, demonstraram que o tratamento com rimonabanto por via oral (10 mg/kg, 4 h após CLP) aboliu o aumento nos níveis plasmáticos de lactato, lactato desidrogenase (LDH), glicose e creatinina quinase MB (CK-MB) sem alterar os parâmetros hematológicos, como leucopenia e redução da contagem de plaquetas. O tratamento com rimonabanto também não alterou o aumento dos níveis de nitrato/nitrito (NOx) induzido pela sepse, mas reduziu a vasoconstrição induzida pela sepse na artéria da cauda. Ainda, o tratamento com rimonabanto também atenuou a hiperreatividade à AVP sem afetar a hiporresponsividade à fenilefrina em anéis aórticos. O bloqueio, no sistema nervoso central, dos receptores CB1 utilizando os antagonistas de receptor CB1, o rimonabanto e o AM 251 preveniram a mortalidade induzida por CLP em ratos. Além disso, a CLP promoveu uma diminuição na temperatura da cauda dos ratos, e esta diminuição foi abolida após a administração do antagonista de receptor CB1, AM251 e após a administração de antagonista de receptor ETA, BQ123. A sepse aumentou os níveis de AEA no hipotálamo 6 h após a cirurgia, mas não alterou os níveis de 2-AG, e a administração intracerebroventricular (i.c.v.) de BQ123, aboliu esse aumento. Além disso, a sepse induziu uma hiperresponsividade (vasoconstrição) da artéria caudal à injeção i.v. de AVP 24 h após a cirurgia que foi revertida pelo tratamento i.c.v. com AM 251 4 e 8 h após a CLP. Em conjunto, esses resultados sugerem que o rimonabanto reduz a disfunção de órgãos durante a sepse, e esse efeito pode estar relacionado à sinalização de AVP nos vasos sanguíneos. Este efeito pode ter contribuído para a maior taxa de sobrevida em animais sépticos tratados com agonista inverso/antagonista de receptor CB1. Além disso, é possível sugerir que o bloqueio dos receptores CB1 e ETA no sistema nervoso central (SNC), poderia ser benéfico durante a sepse e poderia representar um novo alvo para o tratamento da sepse. Palavras-chaves: Sepse. Endocanabinóides. Arginina-vasopressina. Endotelina- 1. Abstract: Sepsis is a life-threatening condition with high mortality rates that is caused by dysregulation of the host response to infection. We have previously reported that treatment by oral route with the cannabinoid CB1 receptor antagonist rimonabant reduced mortality rates in animals with sepsis that was induced by cecal ligation and puncture (CLP). This improvement in the survival rate appeared to be related to an increase in arginine vasopressin (AVP) circulating levels 12 h after CLP. The present study investigated the effects of rimonabant on organ dysfunction, hematologic parameters, and vascular reactivity in male Wistar rats with sepsis induced by CLP. In addition, the present study seeks to understand the effect of central blockade of the endocannabinoid system and endothelinergic system during sepsis. To this goal, we evaluated the effect of CB1 receptor blockade on the survival rate of rats submitted to CLP-induced sepsis, the effect of CB1 receptor blockade and ETA receptor blockade on skin temperature in rats with sepsis, the effect of sepsis in the anandamide (AEA) and 2- araquidonilglicerol (2-AG) levels of the hypothalamus and the effect of the administration of BQ123, an ETA receptor antagonist, at the levels of endocannabinoids (eCB) in the hypothalamus in septic rats and the effect of CB1 receptor antagonist, AM 251 on tail temperature variation after AVP administration. Results that evaluated the peripheral effect of CB1 receptor blockade demonstrated that the oral treatment with rimonabant (10 mg/kg, 4 h after CLP) abolished the increase in plasma levels of lactate, lactate dehydrogenase (LDH), glucose and creatinine kinase MB (CKMB) with no alterations in the hematological parameters, such as: leucopenia and reduction in platelet count. Treatment with rimonabant did not alter the increase in nitrate/ nitrite (NOx) levels induced by sepsis, but reduced vasoconstriction in the tail artery. In addition, treatment with rimonabant also attenuated hyperreactivity to AVP without affecting hyporesponsiveness to phenylephrine in aortic rings. The blockade of the CB1 receptors in the central nervous system, using the CB1 receptor antagonists rimonabant and AM 251 prevented CLPinduced mortality in rats. In addition, CLP promoted a decrease in rat skin temperature, and this decrease was abolished following administration of CB1 receptor antagonist, AM251 and following administration of ETA receptor antagonist, BQ123. Sepsis increased the levels of AEA in the hypothalamus 6 h after surgery but did not alter 2-AG levels, and intracerebroventricular (i.c.v) administration of BQ123 abolished this increase. In addition, sepsis induced hyperresponsiveness (vasoconstriction) of the tail artery to the i.v. injection of AVP 24 h after the surgery that was abolished by the i.c.v. treatment with AM 251 4 and 8 h after CLP. Taken together, these results suggest that rimonabant reduces organ dysfunction during sepsis, and this effect may be related to AVP signaling in blood vessels. This effect may have contributed to the higher survival rate in septic animals treated with CB1 receptor antagonist/inverse agonist. In addition, it is possible to suggest that the blockade of CB1 and ETA receptors in the central nervous system could be beneficial during sepsis and could represent a new target for the treatment of sepsis. Keywords: Sepsis. Endocannabinoids. Arginine vasopressin. Endotelin-1.

A via de sinalização retrógrada endocanabinoide é ubíqua no sistema nervoso central (SNC), onde modula as sinapses, entre outros processos. Os componentes do sistema endocanabinoide (SEC) - receptores canabinoides, endocanabinoides e enzimas de síntese/degradação - são expressos e funcionais desde os estágios iniciais de desenvolvimento embrionário até o final do desenvolvimento cortical na adolescência, regulando o destino das células progenitoras, a diferenciação neural, sua migração e sobrevivência. Esses fatores podem conferir maior vulnerabilidade aos efeitos adversos da exposição precoce aos canabinoides. O canabidiol (CBD) é um dos fitocanabinoides exógenos mais estudados, e tem sido usado no tratamento de crianças com epilepsia refratária. No entanto, não há evidências suficientes sobre potenciais consequências prejudiciais dos canabinoides a longo prazo no desenvolvimento do SNC. O CBD é capaz de atuar direta e indiretamente no SEC, podendo perturbar processos regulatórios mediados por este sistema. Nos últimos anos, análogos sintéticos do CBD foram desenvolvidos visando aumentar seus efeitos benéficos, mas reduzindo os efeitos colaterais. Neste estudo avaliamos os efeitos neuroprotetores/neurotóxicos e anticonvulsivantes do CBD e de alguns de seus derivados sintéticos durante e após fases do desenvolvimento neuronal, verificando o papel do SEC nesses efeitos. Para isso, foi utilizado um modelo animal com maior susceptibilidade a crises epilépticas, tratados com 10 mg/kg de CBD com 15 e 44 dias de vida e submetidos a crises epilépticas induzidas por ácido kaínico (KA). Neste modelo, o CBD foi capaz de aumentar os níveis hipocampais de endocanabinoides, associado a um aumento da susceptibilidade a crises epilépticas em animais de 15 dias. Animais com 44 dias não tiveram alterações nos níveis de endocanabinoides e apresentaram uma discreta redução na susceptibilidade a crises epilépticas após a administração de CBD. Esses resultados reforçam a hipótese de que o aumento da ativação endocanabinoide seria um dos mecanismos de ação do CBD. Para as análises in vitro, utilizamos células da linhagem de neuroblastoma humano SH-SY5Y diferenciadas em neurônio maduro – como um modelo de toxicidade em neurônios terminalmente diferenciados –, e durante a diferenciação – como um modelo de toxicidade durante o desenvolvimento neuronal. Nestes modelos, foi possível verificar efeitos neurotóxicos do CBD e de 3 de seus derivados sintéticos com ou sem o desafio com a neurotoxina redox-ativa 6-OHDA durante a diferenciação neuronal. Além disto, o cotratamento destas células com cada canabinoide e com um agonista e um antagonista de CB1, aumentou e reduziu, respectivamente, a viabilidade celular observada para cada canabinoide, evidenciando uma participação do sistema endocanabinoide nos efeitos observados. In vitro, todos os derivados sintéticos apresentaram neurotoxicidade em 2,5 μM. Os efeitos neurotóxicos observados podem ser atribuídos a um possível desequilíbrio redox causado em células tratadas durante a diferenciação com canabinoides tanto isoladamente quanto em desafios com a 6-OHDA. No entanto, como os co-tratamentos com agonista e antagonista CB1 interferiram nestes resultados, é provável que o SEC esteja envolvido nos mecanismos de neuroproteção/neurotoxicidade observados. Além disso, a afinidade destes canabinoides por CB1 predita in silico sugere que pode haver interação direta nas concentrações testadas. Os resultados obtidos nos modelos in vivo e in vitro corroboram entre si, pois animais neonatos e neurônios em diferenciação foram mais sensíveis aos canabinoides e reforçam a hipótese d o uso de canabinoides em indivíduos muito jovens, com cérebros imaturos, deve ser melhor avaliado. The endocannabinoid retrograde signaling pathway is ubiquitous in the central nervous system (CNS), where it modulates synapses, among other processes. The components of the endocannabinoid system (ECS) - cannabinoid receptors, endocannabinoids and its synthesis / degradation enzymes - are expressed and functional from the early stages of embryonic development until the end of cortical development in adolescence, regulating progenitor cells’ fate, neural differentiation, their migration and survival. These factors may confer greater vulnerability to the adverse effects of early exposure to cannabinoids. Cannabidiol (CBD) is one of the most widely studied exogenous phytocannabinoid and has been used in the treatment of children with refractory epilepsy. However, there is insufficient evidence on the potential long-term harmful effects of cannabinoids on CNS development. CBD is able to act directly and indirectly over the ECS and may disturb regulatory processes mediated by this system. In recent years, synthetic analogues of CBD have been developed to increase their beneficial outcomes but reduce side effects. In this study we evaluated the neuroprotective / neurotoxic and anticonvulsive effects of CBD and some of its synthetic derivatives during and after phases of neuronal development, verifying the role of the ECS in these effects. For this, an animal model with increased susceptibility to seizures, treated with 10 mg / kg of CBD at 15 and 44 days of life and submitted to kainic acid (KA)-induced seizures, was used. In this model, CBD was able to increase hippocampal levels of endocannabinoids, associated with increased susceptibility to epileptic seizures in animals of 15 days. Animals with 44 days had no alterations in endocannabinoid levels and presented a slight reduction in susceptibility to epileptic seizures after CBD administration. These results reinforce the hypothesis that increased endocannabinoid activation would be one of the mechanisms of action of CBD. For the in vitro analyzes, the human neuroblastoma SH-SY5Y cell line was used after differentiation into mature neurons - as a terminally differentiated neuronal toxicity model - and during differentiation - as a neuronal developmental toxicity model. In these models, it was possible to verify neurotoxic effects of CBD and of 3 of its synthetic derivatives with or without the challenge with the redox-active 6-OHDA neurotoxin during neuronal differentiation. In addition, the co-treatment of these cells with each cannabinoid and with an agonist and a CB1 antagonist, respectively, increased and reduced the cellular viability observed for each cannabinoid, evidencing a participation of the endocannabinoid system in the observed effects. In vitro, all synthetic derivatives showed neurotoxicity in 2.5 μM. The observed neurotoxic effects can be attributed to a possible redox imbalance caused in cells treated during differentiation with cannabinoids both alone and in challenges with 6-OHDA. However, as co-treatments with the CB1 agonist and antagonist alter these results, it is likely that ECS is involved in the neuroprotection / neurotoxicity mechanisms observed. In addition, both the effects of cannabinoids and the participation of ECS in these effects appear to be dose dependent and age related. Furthermore, the affinity of cannabinoids for CB1 predicted in silico suggests that there may be direct interaction between them at the concentrations tested. The results obtained in the in vivo and in vitro models corroborate to each other, since neonates and neurons treated during differentiation were more sensitive to cannabinoids and reinforce the hypothesis that the use of cannabinoids in very young individuals with immature brains should be better evaluated.

Orientador: Prof. Dr. Marcelo de Meira Santos Lima Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 07/12/2018 Inclui referências Resumo: A doença de Parkinson é uma doença neurodegenerativa caracterizada pela perda dos neurônios dopaminérgicos da substância negra pars compacta (SNpc), gerando os conhecidos sintomas motores, como tremor em repouso, bradicinesia, anormalidades de postura e de marcha, entre outros. Além disso, estão presentes os sintomas não-motores, como distúrbios do sono, déficits de memória, depressão, ansiedade e distúrbios olfatórios. Esses, apesar de menos conhecidos, podem aparecer anos ou décadas antes dos distúrbios motores, afetando drasticamente a qualidade de vida dos indivíduos com a doença de Parkinson. Dentre as causas dos distúrbios não-motores, está a própria degeneração inerente à doença. Nesse sentido, estudos investigam regiões e componentes importantes para, a longo prazo, desenvolver uma estratégia terapêutica eficaz. Recentemente, observou-se a presença de receptores canabinoides na via nigroestriatal, capazes de modular a neurotransmissão dopaminérgica. Além disso, diversos estudos demonstram efeitos de canabinoides na regulação do sono e na consolidação da memória em diferentes contextos. Considerando isso, o objetivo do presente estudo foi investigar o papel do sistema canabinoide na regulação do sono e na consolidação da memória no modelo animal de Parkinsonismo induzido por rotenona. Para isso, realizamos uma cirurgia estereotáxica em ratos Wistar machos, na qual administramos a neurotoxina rotenona diretamente na SNpc. Após sete dias de recuperação, os animais foram submetidos à fase de treino do teste de reconhecimento de objetos e, em seguida, houve a microinfusão estriatal de diferentes drogas moduladoras do sistema canabinoide. Foi realizado o registro de sono para, no dia seguinte, ser realizado o teste de reconhecimento de objetos e o teste do campo aberto. Ao final dos experimentos, os animais foram eutanasiados para coleta de amostras destinadas à imuno-histoquímica, western blot e PCR em tempo real. Observou-se uma diminuição no tempo despendido em sono NREM após a administração de rotenona. Interessantemente, o bloqueio dos receptores CB1 e CB2 reverteu o efeito induzido pela rotenona, parcialmente relacionado a um aumento compensatório nos níveis de mRNA do receptor CB1. Além disso, a administração de canabidiol (CBD) promoveu um aumento no tempo despendido em vigília, paralelamente a um aumento na expressão do receptor CB2, enquanto nenhum efeito foi observado após a administração do ?9-tetraidrocanabinol (THC). A rotenona também prejudicou a memória de reconhecimento de objetos. Nesse caso, tanto o bloqueio dos receptores CB1, quanto a ativação dos receptores CB2, foram capazes de reverter esse déficit. Diferentemente, tanto a administração de CBD quanto de THC promoveram um prejuízo para a memória. Em conclusão, os achados do presente estudo demonstram um envolvimento do sistema canabinoide tanto na regulação do sono quanto na consolidação da memória de reconhecimento de objetos no modelo animal de Parkinsonismo induzido por rotenona Abstract: Parkinson's disease is a neurodegenerative disorder characterized by the loss of the dopaminergic neurons within the substantia nigra pars compacta (SNpc), which leads to the well-known motor symptoms, such as resting tremor, bradykinesia, posture and gait abnormalities, among others. In addition, non-motor symptoms such as sleep disorders, memory deficits, depression, anxiety, and olfactory disorders are present. In fact, non-motor disturbances appear years or decades earlier than motor symptoms, drastically affecting the quality of life of individuals with Parkinson's Disease. The inherent degeneration of the disease is one of the leading factors for non-motors symptoms appearance. Regarding this, studies investigate important regions and components to develop an effective therapeutic strategy in the future. Recently, it was demonstrated the presence of cannabinoid receptors in the nigrostriatal pathway, modulating dopaminergic neurotransmission. In addition, several studies demonstrated the effects of cannabinoids on sleep regulation and memory consolidation in different contexts. Considering this, the objective of the present study was to investigate the role of the cannabinoid system in sleep regulation and memory consolidation in the animal model of Parkinsonism induced by rotenone. For this, we performed a stereotactic surgery in male Wistar rats, in which we administered the neurotoxin rotenone directly into the SNpc. After seven days, the animals were submitted to the training phase of the object recognition test and then we performed the striatal microinfusion of different drugs that modulate the cannabinoid system. The sleep was recorded and, in the next day, the animals performed the object recognition test and the open field test. At the end of the experiments, the animals were euthanized, and samples were collected for immunohistochemistry, western blot and real-time PCR analysis. A decrease in the time spent on NREM sleep was observed after administration of rotenone. Interestingly, CB1 and CB2 receptors blockade reversed the rotenone-induced effect, which was partially associated with a compensatory increase in CB1 receptor mRNA levels. In addition, cannabidiol administration increased the time spent awake, in parallel with an increase in CB2 receptor expression, while no effect was observed after ?9-tetrahydrocannabinol (THC) administration. Rotenone also impaired object recognition memory. In this case, both CB1 receptors blockade and CB2 receptors activation reversed the deficit. Differently, both cannabidiol and THC administration impaired recognition memory. In conclusion, our findings demonstrate an involvement of the cannabinoid system both in sleep regulation and in the consolidation of object recognition memory in the animal model of Parkinson's disease induced by rotenone

Repeated injections of cannabidiol (CBD), the major non-psychotomimetic compound present in the Cannabis sativa plant, attenuate the anxiogenic effects induced by Chronic Unpredictable Stress (CUS). The specific mechanisms remain to be fully understood but seem to involve adult hippocampal neurogenesis and recruitment of endocannabinoids. Here we investigated for the first time if the behavioral and pro-neurogenic effects of CBD administered concomitant the CUS procedure (14 days) are mediated by CB1, CB2 or 5HT1A receptors, as well as CBD effects on dendritic remodeling and on intracellular/synaptic signaling (fatty acid amide hydrolase - FAAH, Akt, GSK3β and the synaptic proteins Synapsin Ia/b, mGluR1 and PSD95). After 14 days, CBD injections (30 mg/kg) induced anxiolytic responses in stressed animals in the elevated plus-maze and novelty suppressed feeding tests, that were blocked by pre-treatment with a CB1 (AM251, 0.3 mg/kg) or CB2 (AM630, 0.3 mg/kg), but not by a 5HT1A (WAY100635, 0.05 mg/kg) receptor antagonist. Golgi staining and immunofluorescence revealed that these effects were associated with an increase in hippocampal neurogenesis and spine density in the dentate gyrus of the hippocampus. AM251 and AM630 abolished the effects of CBD on spines density. However, AM630 was more effective in attenuating the pro-neurogenic effects of CBD. CBD decreased FAAH and increased p-GSK3β expression in stressed animals, which was also attenuated by AM630. These results indicate that CBD prevents the behavioral effects caused by CUS probably due to a facilitation of endocannabinoid neurotransmission and consequent CB1/CB2 receptors activation, which could recruit intracellular/synaptic proteins involved in neurogenesis and dendritic remodeling.

Orientadora: Dra. Cristina Aparecida Jark Stern Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa : Curitiba, 30/05/2018 Inclui referências: p.71-90 Resumo: Entender os mecanismos que sustentam a consolidação das memórias de medo é importante porque esses estão envolvidos na generalização, uma característica proeminente de transtornos psiquiátricos como o Transtorno do Estresse Pós-Traumático (TEPT). Classicamente, é descrito que a janela temporal da consolidação da memória dura 6 horas. No entanto, não se sabe como, tanto no hipocampo dorsal (HD) - região importante para a consolidação das memórias de medo contextuais - como dentro da janela de consolidação, o canabidiol (CBD) prejudica a consolidação e generalização da memória do medo. Nesse contexto, o CBD teria o potencial de ser uma droga preventiva para o desenvolvimento do TEPT. Assim, o primeiro objetivo foi investigar o efeito do CBD, injetado no HD, durante a janela de consolidação da memória. Para isso, ratos Wistar machos, com cânulas-guia implantadas bilateralmente no HD, receberam CBD (10-30 pmol) imediatamente, 30 min, 1 hora e 3 horas após a aquisição de um condicionamento de medo forte ao contexto. Foi observado que apenas imediatamente e 1 hora depois o CBD foi capaz de interferir na consolidação e generalização da memória. Além disso, imediatamente após o condicionamento, o pré-tratamento com AM251 (antagonista CB1) e AM630 (antagonista CB2), mas não com WAY100635 (antagonista do receptor 5-HT1A) foi capaz de prevenir os efeitos do CBD. A inibição seletiva da FAAH pelo URB597 (10 pmol) no HD imediatamente após o condicionamento também foi capaz de prejudicar a generalização da memória. Entretanto, 1 hora após o condicionamento, nem o AM251 e o AM630 nem o WAY100635 preveniram os efeitos do CBD, sugerindo que um mecanismo diferente esteja envolvido nesse estágio da consolidação da memória. Por fim, foi investigado se o CBD alteraria a expressão de Arc (activity-regulated cytoskeleton-associated protein), uma proteína necessária para a consolidação da memória. Foi observado que em ambos, imediatamente e 1 hora após o condicionamento de medo, o CBD reduziu a expressão da proteína Arc no HD. Juntos, esses resultados fornecem mais evidências de que o CBD prejudica a consolidação e a generalização da memória, sugerindo que no HD os mecanismos que medeiam os efeitos, imediatamente e 1 hora após a aquisição, são distintos. No entanto, em ambos os momentos, o CBD leva a diminuição da expressão de Arc. Palavras-chave: Canabidiol, memória de medo, consolidação, generalização, hipocampo dorsal, proteína Arc Abstract: To understand the mechanisms underpinning fear memories consolidation is important because it is involved in generalization, a prominent feature of psychiatric disorders like Post-traumatic Stress Disorder (PTSD). Classically, it is described that memory consolidation time-window lasts 6 hours. However, it is not known how, in the dorsal hippocampus (HD) - a region important for the consolidation of contextual fear memories - and when during the consolidation time-window, cannabidiol (CBD) impairs the fear memory consolidation and generalization. In this context, CBD would have the potential to be a preventive drug for the development of PTSD. Thus, the first objective was to investigate the CBD effect, injected into the DH, during the consolidation time-window. Therefore, male Wistar rats, with guide cannulas bilaterally implanted in the DH, received CBD (10-30 pmol) immediately, 30 min, 1 h and 3 h after acquisition of a strong training. We observed that only immediately and 1 h later, CBD was able to interfere in memory consolidation and generalization. Moreover, immediately after fear conditioning, the pre-treatment with AM251 (CB1 receptor antagonist) and AM630 (CB2 receptor antagonist), but not WAY100635 (5-HT1A receptor antagonist) was able to prevent the CBD effects. Together, the FAAH selective inhibition by URB597 (10 pmol) in DH immediately after fear conditioning was also able to impair the generalization of memory. However, 1 hour after fear conditioning, neither the AM251 and AM630, nor the WAY100635 prevent the CBD effects, suggesting a further mechanism involved in this stage of memory consolidation. Lastly, we investigated whether CBD would change the expression of Arc (activityregulated cytoskeleton-associated protein), a necessary protein for memory consolidation. We observed that both, immediately and 1 hour after fear conditioning, CBD reduced the expression of Arc protein in the DH. Together, these results provide further evidence that CBD disrupts fear memory consolidation and generalization, suggesting that in the DH the mechanisms underlying these effects, immediately and 1h after acquisition, are distinct. However, at both moments, the CBD effects depend on the Arc expression. Key-words: Cannabidiol, Fear memory, Consolidation, Generalization, Dorsal Hippocampus, Arc protein

Cannabis misuse during pregnancy is associated with severe impacts on the mother and baby health, such as newborn low birth weight, growth restriction, pre-term birth, neurobehavioral and developmental deficits. In most of the cases, drug abuse is omitted or denied by the mothers. Thus, toxicological analyzes using maternal-fetal matrices takes place as a suitable tool to assess drug use. Herein, meconium was the chosen matrix to evaluate cannabis exposure through identification and quantification of 11-nor-Δ9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic (THCCOOH). Accelerated solvent extraction (ASE) was applied for sample preparation technique to simultaneously extract and hydrolyze conjugated THCCOOH from meconium, followed by a solid-phase extraction (SPE) procedure. The method was developed and validated for gas chromatography–mass spectrometry (GC–MS), reaching hydrolysis efficiency of 98%. Limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were, respectively, 5 and 10 ng/g. The range of linearity was LOQ to 500 ng/g. Inter and intra-batch coefficients of variation were

Orientador: Prof. Dr. Lúcio Cardozo Filho Coorientador: Prof. Dr. Ignacio Alberto Vieitez Osorio. Dissertação (mestrado em Engenharia Química) - Universidade Estadual de Maringá, 2018. As plantas do genero Cannabis possuem substancias especificas chamadas canabinoides. O canabidiol (CBD) e o ƒ'9-tetrahidrocanabinol (ƒ'9-THC) sao canabinoides que possuem importantes aplicabilidades medicinais. Altos teores de canabinoides sao encontrados na resina de flores de plantas femeas nao polinizadas. O CBD e o ƒ'9-THC estao em baixas concentracoes em flores recem-colhidas, mas sao potencializados com o aquecimento de uma amostra. O canhamo e uma variedade de Cannabis com baixos teores de canabinoides e suas sementes sao ricas em acidos graxos poli-insaturados. A obtencao destes principios ativos com alta pureza e livre de solventes sao amplamente requisitadas. Este trabalho tem como objetivo aplicar a tecnologia de fluidos pressurizados analisando a variacao de parametros para otimizar a obtencao de extratos com propriedades bioativas a partir de flores e sementes de Cannabis. Foram analisadas tres variedades de flores em parceria com a Universidade da Republica do Uruguai, utilizando um metodo cromatografico certificado. Foi avaliado o comportamento termico das amostras de flores a 90, 100 e 140 oC, a umidade, bem como a influencia do tamanho de particulas por microscopia eletronica de varredura (MEV). As extracoes de flores foram feitas com dioxido de carbono supercritico (CO2-SC) sendo comparadas as metodologias de pre-aquecimento das amostras, de uso de co-solvente e de extracao fracionada. Avaliou-se a atividade anti-tumoral dos extratos por um metodo quantitativo colorimetrico chamado MTT. Devido ao grande interesse medicinal no CBD foi analisado o equilibrio solido-fluido deste com o CO2-SC a fim de determinar condicoes favoraveis de manipulacao. Foi utilizado o metodo sintetico visual na faixa de temperatura e fracao molar de 45 a 65 oC e 2 a 3 (10-4), respectivamente. Paralelamente foi analisada a composicao centesimal de sementes descascadas de canhamo, bem como extracoes com CO2-SC e propano pressurizado, sendo ainda avaliada nos extratos a composicao de acidos graxos, tocoferois totais e ƒÒ-caroteno, bem como os indices de acidez e umidade. Os extratos de flores obtidos com co-solvente apresentaram maiores rendimentos, porem menores concentracoes de canabinoides. Por outro lado nos extratos com pre-aquecimento foi possivel obter elevadas e distintas concentracoes de CBD e ƒ'9-THC. A extracao fracionada para flores tambem se apresentou eficiente. Os melhores resultados de atividade anti-tumoral foram relacionados ao cancer de utero. As analises de equilibrio de fase apresentaram baixos desvios e bons ajustes. O propano pressurizado se demostrou uma alternativa interessante para a obtencao de oleo das sementes frente ao CO2-SC, visto que foi necessaria uma menor quantidade de solvente, obteve-se maiores teores de tocoferois totais e ƒÒ-caroteno, menores indices de umidade e acidez, bem como os mesmos elevados teores de acidos graxos poli-insaturados. Plants of the genus Cannabis have specific substances called cannabinoids. Cannabidiol (CBD) and ƒ'9-tetrahydrocannabinol (ƒ'9-THC) are cannabinoids that have important medicinal applications. High levels of cannabinoids are found in the flower resin of non-pollinated female plants. CBD and ƒ'9-THC are at low concentrations in freshly harvested flowers, but are potentiated by heating a sample. Hemp is a variety of Cannabis with low levels of cannabinoids and their seeds are rich in polyunsaturated fatty acids. Obtaining these active substances with high purity and solvent-free are widely required. This work aims to apply pressurized fluid technology analyzing the variation of parameters to optimize the obtaining of extracts with bioactive properties from Cannabis flowers and seeds. Three varieties of flowers were analyzed in partnership with the University of the Republic of Uruguay using a certified chromatographic method. The thermal behavior of flower samples at 90, 100 and 140 oC, moisture, as well as the influence of particle size by scanning electron microscopy (SEM) was evaluated. The flower extractions were made with supercritical carbon dioxide (SC-CO2), comparing the sample pre-heating, co-solvent and fractionation extraction methodologies. The antitumor activity of the extracts was evaluated by a quantitative colorimetric method called MTT. Due to the great medicinal interest in the CBD the solid-fluid equilibria of this with the SC-CO2 was analyzed in order to determine favorable conditions of manipulation. The visual synthetic method was used in the temperature and molar fraction range from 45 to 65 oC and 2 a 3 (10-4), respectively. In parallel, the centesimal composition of hulled hemp seeds was analyzed, as well as SC-CO2 and pressurized propane extractions. Compositions of fatty acids, total tocopherols and ƒÒ-carotene were evaluated in the extracts, as well as acidity and moisture indexes. The extracts of flowers obtained with co-solvent showed higher yields, but lower concentrations of cannabinoids. However in extracts with preheating it was possible to obtain high and different concentrations of CBD and ƒ'9-THC. The fractionated extraction for flowers was also efficient. The best results of anti-tumor activity were related to cervical cancer. The phase equilibrium analyzes showed low deviations and good adjustments. The pressurized propane showed an interesting alternative to obtain oil of the seeds compared to SC-CO2, since a smaller amount of solvent was required, higher contents of total tocopherols and ƒÒ-carotene, lower moisture and acidity indexes, as well as the same high levels of polyunsaturated fatty acids. 87 f. : il., color.

Orientadores: Marcos Nogueira Eberlin, José Luiz da Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química Resumo: Para atender ao interesse jurídico da necessidade de armazenamento de amostra, a aplicação de métodos de coleta que utilizam volumes pequenos de fluidos biológicos, em escala de microlitros, tem se tornado popular e tem sido explorado por laboratórios clínicos e forenses. Uma das técnicas mais exploradas neste contexto é a dried blood spots (DBS). De forma análoga ao sangue, é possível realizar análises toxicológicas de drogas de abuso em urina utilizando este tipo de amostragem, que passa a ser conhecido como dried urine spots (DUS) e, embora esta técnica ainda não tenha sido tão explorada, ela deve ser de interesse supondo que compartilhe das mesmas vantagens do DBS. Considerando as baixas concentrações que estas drogas são encontradas nas matrizes biológicas, técnicas que possuam grande detectabilidade e sensibilidade são necessárias. Para suprir estas necessidades, a cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC¿MS/MS) tem sido referenciada como padrão-ouro nos laboratórios de toxicologia analítica e é a técnica escolhida. Neste trabalho, o objetivo foi o desenvolvimento de métodos analíticos simples de amostragem por DUS com análise por LC¿MS/MS que pudessem ser aplicados em exames de confirmação e quantificação de duas das drogas de abuso mais utilizadas no mundo, a cocaína (COC) e o tetraidrocanabinol (THC) e seus principais metabólitos encontrados na urina... O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: In order to attend to the juridical necessity of sample storage, the use of collection devices which requires small amounts of biological fluids, in microliters scale, have become popular and explored in clinical and forensic laboratories. One of the most explored technique in this context is the dried blood spots (DBS). Similarly to blood, it is possible to perform toxicological analysis of drugs of abuse in urine using the same technique, known as dried urine spots (DUS) and, although this technique has not been explored as much, it should be of interest supposing that they share the same advantages as DBS. Considering the low concentration these drugs are found in the matrices, techniques that hold great detectability and sensitivity are needed. In order to fulfill these necessities, liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC¿MS/MS) has been heralded as "gold standard" in analytical toxicology laboratories and is the technique of choice. In this work, the goal was to develop simple analytical methods for DUS and LC-MS/MS that could be applied in the confirmation and quantification of two of the most abused drugs worldwide, cocaine (COC) and tetrahydrocannabinol (THC) and their main metabolites found in urine... The abstract is available with the full electronic document Mestrado Química Analítica Mestra em Química CAPES

mestrado em Bioquímica Submitted by Cristina Santos (cmaria@ua.pt) on 2018-03-13T11:52:29Z No. of bitstreams: 1 Tese_Final_LuísMidão.pdf: 2954613 bytes, checksum: 1c52cb9ca38900c06ff652eb760d7d36 (MD5) Made available in DSpace on 2018-03-13T11:52:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Final_LuísMidão.pdf: 2954613 bytes, checksum: 1c52cb9ca38900c06ff652eb760d7d36 (MD5) Previous issue date: 2017-12-22

Relatório de Estágio do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas apresentado à Faculdade de Farmácia Com o aumento da esperança média de vida, graças às evoluções e descobertas científicas, novas doenças, como as neurodegenerativas, predominam as preocupações na sociedade científica assim como no meio social e económico. O envelhecimento, assim como as mutações fazem parte natural do ciclo do ser humano, no entanto acarretam consequências irreversíveis que condicionam a qualidade de vida do Homem. A complexidade destas doenças ainda não permitiu perceber integralmente o mecanismo por elas desenvolvidas, porém inúmeros esforços estão a ser investidos no sentido de encontrar um caminho que direcione à uma terapêutica que possa impedir a progressão ou quiçá, curar as doenças neurodegenerativas. Vários medicamentos foram desenvolvidos para estas patologias, no entanto somente atuam sobre os sintomas, demostrando ainda bastantes efeitos adversos. Desde há muito que o ser humano aproveita a natureza, como por exemplo as plantas medicinais, para tratar as doenças. Os estudos que têm sido desenvolvidos para a determinação da composição, dos metabolitos secundários e da análise farmacológica desempenham, atualmente um papel bastante importante. Neste contexto a cannabis surge como um potencial agente terapêutico devido aos diversos compostos (canabinóides e não só) que possui, e pelas características neuroprotetoras que estes apresentam para as doenças neurodegenerativas. Esta multiplicidade de características tornou-se aliciante na perspetiva de haver opções promissoras opções de tratamento. O objetivo do presente trabalho é enquadrar a cannabis, as suas propriedades e toda a sua evolução de utilização nas doenças neurodegenerativas até ao momento, de modo a compreender os estudos já desenvolvidos e a perceber até onde se pode ir com a sua utilização. With the increase of the average life expectancy, thanks to the scientific evolution and discoveries, new diseases like the neurodegenerative diseases, certain concerns arise in the scientific as well as in the social and economic community. Aging as well as mutations are a natural part of the human cycle, nevertheless they carry irreversible consequences that conditions Man’s life quality. The complexity of these diseases has not yet allowed to understand the mechanisms they have developed, however uncountable efforts are being invested to find a way that directs therapy to prevent progress or maybe to cure neurodegenerative diseases. Various medicines have been developed to combat such pathologies, unfortunately acting on the symptoms and still demonstrating several adverse effects. For a long time humans have been harnessing nature, for example medicinal plants to treat diseases. The studies that have been developed to determine their composition, secondary metabolites and pharmaceutical analysis currently play a very important role. cannabis seems to be a potential therapeutic agent not only due to the various compounds like cannabinol and others it contains, but also because of its neuroprotective characteristics it contains to combat neurodegenerative diseases. This multiplicity of characteristics has become appealing in the perspective of promising treatment options. The goal of the present study is to generate a study framework to include cannabis, its properties and all its evolution so far regarding neurodegenerative diseases, in order to understand previous studies as well as how far we can go concerning this research topic considering its use.

Mestrado em Química Submitted by Cristina Santos (cmaria@ua.pt) on 2018-02-21T09:42:46Z No. of bitstreams: 1 Tese- final-ecadernamento-EB.pdf: 4651080 bytes, checksum: 1eb2c0a5872440bda10b61b5bf04720f (MD5) Made available in DSpace on 2018-02-21T09:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese- final-ecadernamento-EB.pdf: 4651080 bytes, checksum: 1eb2c0a5872440bda10b61b5bf04720f (MD5) Previous issue date: 2017-08-21

Relatório de Estágio do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas apresentado à Faculdade de Farmácia O estágio curricular permite-nos integrar e aplicar os conhecimentos adquiridos ao longo do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas. O meu estágio foi realizado no Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra e na Farmácia Figueiredo, em Coimbra, e os respetivos relatórios seguem o modelo de análise SWOT (Strengths, Weaknesses, Opportunities and Threats).A doença de Parkinson é uma patologia bastante comum a nível mundial, principalmente na população mais idosa, e resulta de uma degeneração neuronal e consequente perda de neurónios dopaminérgicos. As causas desta doença ainda são pouco conhecidas, mas já se sabe que tanto fatores genéticos como fatores ambientais podem contribuir para o aparecimento e desenvolvimento da mesma. Os tratamentos existentes atualmente têm como objetivo aumentar os níveis de dopamina, contudo mostram-se ineficazes relativamente à progressão da doença e alguns provocam efeitos colaterais prejudiciais para a qualidade de vida do doente, pelo que se torna necessário investigar e produzir novos fármacos capazes de impedir a evolução da doença de Parkinson e com efeitos adversos menos graves.É então que surge a oportunidade de apostar no desenvolvimento de novas terapêuticas anti-parkinsonianas, baseadas na administração de canabinóides ou seus análogos sintéticos. Isto porque o sistema endocanabinóide encontra-se implicado em diversos processos fisiológicos fundamentais na doença de Parkinson.Aparentemente, o sistema endocanabinóide apresenta importantes propriedades que serão úteis e benéficas no tratamento da doença de Parkinson, contudo, a cannabis bem como os canabinóides e todos os mecanismos envolvidos, são extremamente complexos, pelo que, apesar de todos os esforços para investigar o potencial terapêutico da planta de cannabis, ainda existem determinados tópicos menos conhecidos, que carecem de mais investigação. The internship allows us to integrate and apply the knowledge acquired during the master in pharmaceutical sciences. My internship was realized at the Hospital and University Centre of Coimbra and the pharmacy Figueiredo, in Coimbra, and the respective reports follow the model of SWOT analysis (Strengths, Weaknesses, Opportunities and Threats).Parkinson's disease is quite common worldwide, especially in the older population. This disease is the result of a neuronal degeneration and consequent loss of dopaminergic neurons. Its causes of this disease are still little known, but it is known that both genetic factors like environmental factors may contribute to the emergence and development of the same.Existing treatments currently aim to increase levels of dopamine, however, they are ineffective with regard to disease progression and some of them cause harmful side effects to the quality of life of the patient, making it necessary to investigate and produce new drugs able to prevent the development of Parkinson's disease and with less severe adverse effects.Then comes the opportunity to invest on the development of new therapeutics anti-Parkinson, based on administration of cannabinoids or their synthetic analogues. This is because the endocannabinoid system is involved in many physiological processes which are fundamental in Parkinson's disease.Apparently, the endocannabinoid system presents important properties that will be useful and beneficial in the treatment of Parkinson's disease, however, cannabis and the cannabinoids and all the mechanisms involved are extremely complex, so, despite all the efforts to investigate the therapeutic potential of cannabis plant, there are still certain lesser known topics that need more investigation.

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas (Neurociências), Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina, 2018 Submitted by Amelia Janeiro (ajaneiro@reitoria.ul.pt) on 2018-08-07T12:54:11Z No. of bitstreams: 1 ulsd731969_td_Francisco_Mouro.pdf: 8883701 bytes, checksum: d94e4ed834518032983703ab440cbd76 (MD5) Made available in DSpace on 2018-08-23T10:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ulsd731969_td_Francisco_Mouro.pdf: 8883701 bytes, checksum: d94e4ed834518032983703ab440cbd76 (MD5) Previous issue date: 2018

Orientadora: Prof. Beatriz Helena Lameiro de Noronha Sales Maia Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Exatas, Programa de Pós-Graduação em Química. Defesa : Curitiba, 25/10/2017 Inclui referências Área de concentração: Química Orgânica Resumo: O presente trabalho foi realizado parcialmente em parceria com a Universidad de La República, Montevidéu, onde foi executado o estudo de influência de alguns parâmetros de extração de canabinoides em amostras de flores. No Laboratório de Produtos Naturais e Ecologia Química da UFPR foram analisadas trinta e nove amostras de produtos à base de Cannabis sativa, importados e nacionais, em forma de extratos concentrados (EC) ou diluídos em diferentes veículos, como glicerina (G), ou azeites vegetais (AV) necessitando diferentes formas de extração para cada classe. Foi utilizada a técnica de cromatografia em fase gasosa com espectrômetro de massas (CG-EM), onde foi possível realizar a quantificação de três canabinoides, delta9-tetraidrocanabinol (delta9-THC), canabidiol (CBD) e canabinol (CBN), e a identificação de outros quatro compostos minoritários, canabicromeno (CBC), canabigerol (CBG), tetraidrocanabivarin (THCV) e delta8-tetraidronabinol (delta8-THC). Dentre as amostras importadas o CBD foi constatado como canabinoide majoritário, em concentrações entre 3,3 e 26,8%, sendo consideradas amostras de EC, G e AV. As amostras produzidas artesanalmente apresentaram principalmente delta9-THC, com exceção de quatro amostras onde CBD foi constatado como canabinoide majoritário, independentemente de sua concentração. As concentrações variaram entre 22,6 em EC a teores menores que 1% em amostras em glicerina. A técnica de cromatografia em fase gasosa se mostrou eficiente para a identificação de canabinoides neutros, visto que a ocorrência do processo de descarboxilação no injetor do equipamento. Os resultados demonstram a grande variedade de composição de canabinoides nas amostras de extratos de Cannabis, ratificando a necessidade do desenvolvimento de pesquisas para melhor controle de qualidade e da composição dos extratos de Cannabis utilizados no Brasil. Estudos para esclarecer uma possível variação da biodisponibilidade em função do veículo no qual os canabinoides estão dissolvidos, são de fundamental necessidade para melhor compreensão do uso da Cannabis para uso medicinal. Abstract: This work was partially carried out in partnership with the Universidad of La República, Montevideo, where the study of the influence of some parameters of cannabinoid extraction on flower samples was carried out. In the Laboratory of Natural Products and Chemical Ecology of UFPR, thirty-nine samples of Cannabis based products, imported and domestic, were analyzed as concentrated extracts (EC) or diluted in different vehicles, such as glycerin (G), or vegetable oils (AV) requiring different forms of extraction for each class. Using a gas chromatography with mass spectrometry (GC-MS) was possible to quantify three cannabinoids, delta9-tetrahydrocannabinol (delta9-THC), cannabidiol (CBD) and cannabinol (CBN), and it was possible to identify the presence of cannabichromene (CBC), cannabigerol (CBG), tetrahydrocannabivarin (THCV) and delta8-tetrahydronnabinol (delta8-THC). Among the imported samples, CBD was found to be the major cannabinoid, in concentrations between 3.3 and 26.8%, being considered EC, G and AV samples. The domestic samples presented mainly delta9-THC, with the exception of four samples where CBD was verified as the majority cannabinoid, independently of its concentration which remained in the range of 22.6% in EC to less than 1% in glycerol samples. The gas phase chromatography technique proved to be efficient for the identification of just neutral cannabinoids, since the occurrence of the decarboxylation process in the equipment injector. The results demonstrate the great variety of cannabinoids composition in the samples of Cannabis extracts, confirming the need to develop researches for better quality control and the composition of Cannabis extracts used in Brazil. Studies to clarify a possible variation of the bioavailability as a function of the vehicle in which the cannabinoids are dissolved are fundamentally necessary for a better understanding of the use of Cannabis for medicinal use.

Introduction: Neuropathic pain is an important condition whose treatment includes gabapentin (GABAP). The mechanism of analgesic action of GABAP is not fully elucidated. Objective: The present study investigated the contribution of peripheral (plantar) and central (spinal) cannabinoid receptors on the effect of GABAP on the partial sciatic nerve injury (PSNI) model. Methods: Swiss male mice weighing 25-35 g were housed under controlled conditions with free access to food and water and acclimated to the laboratory before testing. PSNI was induced in the anesthetized mice, followed by incision of the right hind limb for nerve exposure, followed by its ligation (1 / 3-1 / 2 of the medial portion) with 8-0 silk thread. In the control group, the nerve was exposed and not connected. The contribution of CB1 and CB2 receptors on the effect of GABAP was evaluated on day 14th after PSNI. Mice received AM281 or AM630 by i.t. (2 μg / 5 μl) or i.pl. (10 g / 20 L) and 15 min after GABAP (30 mg / kg, oral), being evaluated 1 hour after in relation to mechanical hyperalgesia. Data were evaluated by 1 or 2-way ANOVA (Tukey or Bonferroni, respectively, p