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We report the first case of vancomycin-resistant Enterococcus faecalis with VanA phenotype and vanA genotype isolated from a surgical patient in a general Hospital in Uberlândia, state of Minas Gerais, Brazil.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Introduction: Ventilator-associated pneumonia (VAP) is associated with significant morbidity and mortality, adding considerable costs to hospital care, aspects even more significant when related to multiresistant microorganisms. Objectives: To conduct an epidemiological study of classical and molecular VAP caused by Acinetobacter baumannii, evaluate risk factors associated with these infections versus those by Pseudomonas aeruginosa, detect contamination of surfaces near patients with VAP by A. baumannii before and after cleaning, and to characterize the mechanisms of resistance to carbapenems and the clonal spread of this microorganism recovered from clinical specimen and surface. Methods: We conducted a prospective cohort study to assess the potential risk factors associated with PAVs by A. baumannii vs. P. aeruginosa in an adult intensive care unit of the Uberlandia Federal University-Hospital Clinic (UFU-HC), from April 2011 to June 2012. Clinical and epidemiological data were obtained from patient charts and evaluated by univariate and multivariate statistical analyzes. Only clinical isolates of A. baumannii were obtained from cultures of endotracheal aspirate and patients identified as having VAP by this microorganism were selected for environmental sampling. The antimicrobial susceptibility testing was performed using the automated system VITEK® 2 or by disk diffusion method and the phenotypic detection of oxacilinases through the modified Hodge test. Multiplex polymerase chain reaction was used to detect blaOXA genes and pulsed-field gel electrophoresis was performed for molecular typing. The research was approved by the ethics committee of UFU. Results: Overall, we detected 30 patients with VAP by A. baumannii and 30 by P. aeruginosa during the study period and after multiple logistic regression analysis, only trauma admission diagnosis (OR 7.2122, 95% CI 1.62 - 32.10, p = 0.0095) and inappropriate antimicrobial therapy (OR 17.2911, 95% CI 2.61 - 114.50, p = 0.0031) remained as an independent variables associated with the development of A. baumannii VAP. The hospital mortality rate (30 days) was higher, but not significant (p> 0.05) in the group with VAP by P. aeruginosa (36.67%) than by A. baumannii (29.63%). The majority (56.7%) of clinical isolates were resistant to imipenem and all those, clinical or of surface, with resistance to this antibiotic, presented the gene encoding OXA-23. Environmental contamination was more expressive in the bed rail independent of the time of collection. Overall, eight genotypes were identified, four of them with 80% similarity, with genotypes A (n = 9, 52.9%, clinical isolates) and H (n = 4, 66.6%, isolates of surface) predominating. Conclusions: Trauma as admission diagnosis and inappropriate antimicrobial therapy were the only independent risk factors associated with cases of A. baumannii VAP. Most isolates of clinical cases of A. baumannii were resistant to imipenem and presented the blaOXA-23 gene, including those recovered from surface, and were identified the coexistence of several pulsotypes in the unit, with a higher prevalence of two distinct clones A and H, respectively, in the cases of VAP and on surface. Introdução: Pneumonia associada à ventilação mecânica (PAV) está associada com taxas significativas de mortalidade e morbidade, adicionando consideráveis custos hospitalares, aspectos ainda mais significativos quando relacionados com microrganismos multirresistentes. Objetivos: Realizar estudo epidemiológico clássico e molecular de PAV causada por Acinetobacter baumannii, avaliar os fatores de risco associados a essas infecções versus aquelas por Pseudomonas aeruginosa, detectar a contaminação de superfícies próximas a pacientes com PAV por A. baumannii antes e após a limpeza, bem como caracterizar os mecanismos de resistência aos carbapenêmicos e a disseminação clonal desse microrganismo recuperado de espécime clínico e de superfície. Material e métodos: Foi realizado estudo de coorte prospectivo a fim de avaliar os potenciais fatores de risco associados às PAVs por A. baumannii vs. P. aeruginosa, na Unidade de Terapia Intensiva de Adultos do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU), no período de abril de 2011 a junho de 2012. Os dados clínicos e epidemiológicos foram obtidos dos prontuários dos pacientes e avaliados por análises estatísticas uni e multivariada. Apenas amostras clínicas de A. baumannii foram obtidas de culturas de aspirado traqueal e os pacientes identificados com PAV por esse microrganismo foram selecionados para amostragem ambiental. Os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos foram realizados através do sistema automatizado VITEK® 2 ou através do método de disco difusão e a detecção fenotípica de oxacilinases através do teste de Hodge modificado. Foram utilizadas as técnicas de multiplex PCR para identificar a presença dos genes blaOXA e a de Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) para tipagem molecular. A investigação foi aprovada pelo comitê de ética da UFU. Resultados: No total, foram detectados 30 pacientes com PAV por A. baumannii e 30 por P. aeruginosa no período investigado e, após análise de regressão logística múltipla, apenas o diagnóstico de admissão trauma (OR 7.2122, 95% IC 1.62 - 32.10, p=0.0095) e terapia antimicrobiana inapropriada (OR 17.2911, 95% IC 2.61 - 114.50, p=0.0031) permaneceram como variáveis independentes associadas com o desenvolvimento de PAV por A. baumannii. A taxa de mortalidade hospitalar em 30 dias foi mais elevada, mas não significativa (p > 0,05), no grupo com PAV por P. aeruginosa (36,67%) do que por A. baumannii (29,63%). A maioria (56,7%) das amostras clínicas foi resistente ao imipenem e todas aquelas, clínicas ou de superfície, com resistência a este antibiótico, apresentaram o gene que codifica a OXA-23. A contaminação ambiental foi mais expressiva na grade da cama independente do momento da coleta. No total, oito genótipos foram identificados, quatro deles com 80% de similaridade, com os genótipos A (n=9; 52,9%, amostras clínicas) e H (n=4; 66,6%, amostras de superfície) predominando. Conclusões: O diagnóstico de admissão trauma e a terapia antimicrobiana inapropriada foram os únicos fatores de risco independentes associados aos casos de PAV por A. baumannii. A maioria das amostras de A. baumannii de casos clínicos foi resistente ao imipenem e apresentaram o gene blaOXA-23, incluindo aquelas recuperadas de superfície, e identificou-se a coexistência de vários pulsotipos na unidade, com maior prevalência de dois clones distintos A e H, respectivamente, nos casos de PAV e na superfície. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O linfoma de Hodgkin (LH) possui uma composição celular única, representada por células neoplásicas conhecidas como células de Hodgkin e Reed Sternberg (HRS), as quais estão dispostas em fundo inflamatório. O LH é considerado uma das neoplasias mais frequentes nas populações de adultos jovens. O Linfoma de Hodgkin Clássico (LHc) corresponde aproximadamente a 90% de todos os casos de LH. O tratamento desse linfoma é realizado com ciclos de quimioterapia e/ou radioterapia, a depender das características clínicas do paciente e da doença. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi analisar o perfil sociodemográfico e clínico dos pacientes acometidos pelo LHc e tratados no setor de Oncologia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU), e verificar a associação com a sobrevida, resposta terapêutica e mortalidade, desses indivíduos. Foram incluídos neste estudo duzentos e quarenta e seis (246) pacientes com diagnóstico confirmado de LHc atendidos no setor de Oncologia do HC-UFU de janeiro de 2003 a janeiro de 2021. As associações entre as variáveis foram analisadas por meio de testes de regressão logística simples e múltipla e as projeções de sobrevidas foram estimadas por meio de curvas de Kaplan-Meier e o modelo de riscos proporcionais de Cox. Dos 246 pacientes, 139 (56,5%) eram do sexo masculino e a média de idade encontrada foi de 35 anos. Observou-se que os pacientes hipertensos apresentaram 6,2 vezes (OR: 6,191; p

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: Existe falta de estudos multicêntricos reconhecendo a importância das infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) nas unidades de terapia intensiva (UTIs) brasileiras. Essas infecções graves correspondem ao evento adverso mais recorrente em hospitais de todo o mundo e representam um importante problema de saúde pública. Neste estudo, nós descrevemos o peso das pneumonias nosocomiais e de infecções de corrente sanguínea (ICSs), as tendências das infecções associadas a dispositivos invasivos, bem como a prevalência e etiologia das infecções polimicrobianas nesse cenário. Objetivos: Fornecer um quadro atualizado de prevalência de IRAS, infecções associadas a dispositivos invasivos e infecções polimicrobianas, bem como identificar variáveis associadas ao risco de desenvolvimento dessas infecções graves. Metodologia: Inquéritos de prevalência pontual de um dia foram realizados por meio de protocolos padronizados em 35 UTIs de adultos (médico-cirúrgicas e coronarianas) de 8 mesorregiões do estado de Minas Gerais, Brasil. Os prontuários médicos de pacientes internados elegíveis foram revisados no dia da pesquisa para coletar dados sobre características demográficas, taxas de IRAS presentes no momento da pesquisa, uso de dispositivos invasivos, o tempo de internação de 374 pacientes e os perfis bacterianos, além de todos os dados relevantes associados com epidemiologia dessas infecções. Um estudo pareado de caso-controle foi realizado em um total de 66 pares para ICS e 115 pares para pneumonia de acordo com os critérios de seleção desenvolvidos, e os dados sobre infecções associadas a dispositivos invasivos foram analisados para revelar os padrões de uso de dispositivos invasivos associados a essas infecções. Resultados: No total, 171 pacientes (45,7%) tiveram pelo menos uma IRAS, sendo a maioria (78,4%) adquirida na UTI. Esses pacientes apresentaram um total de 240 infecções; incluindo 123 pneumonia (51,3%) e 66 ICS (27,5%), e 78,9% e 80,3%, respectivamente, foram adquiridas na UTI. A etiologia dessas infecções foi predominada por bactérias Gram-negativas versus bactérias Gram-positivas (48,9% versus 43,3%), com destaque para Acinetobacter baumannii (13,7%) e Pseudomonas aeruginosa (12,8%). Entre as infecções associadas a dispositivos invasivos (42,5%), houve 78,8% de infecções de corrente sanguínea associadas a cateter (ICSAC), 71,5% de pneumonias associadas à ventilação (PAVs) e 54,2% de infecções do trato urinário associadas a cateteres (ITUAC). As frequências de uso dos dispositivos invasivos foram 70,1% para cateter venoso central (CVC), 48,9% para ventilação mecânica (VM) e 64,4% para cateter vesical de demora (CVD). Os patógenos mais frequentes associados as infecções associadas a dispositivos invasivos foram Pseudomonas aeruginosa (14,7%) e Acinetobacter baumanni (15,7%). Conclusão: Nós podemos confirmar uma alta carga de IRAS graves adquiridas em UTIs, bem como altas frequências de uso de dispositivos invasivos em UTIs adultas brasileiras, em comparação com os achados de outros países de baixa e média renda. E infelizmente, uma frequência de 23.8% de infecções foram polimicrobianas com 41.2% sendo por bacilos Gram-negativos. Esses dados podem ser utilizados para um melhor planejamento dos programas de vigilância de infecção hospitalar em nossos hospitais. Introduction: There is a lack of multi-centre reports acknowledging the importance of healthcare-associated infections (HAIs) in Brazilian intensive care units (ICUs). These severe infections correspond to the most recurrent adverse event in hospitals worldwide and represent an important public health problem. In this study we described the burden of nosocomial pneumonias and bloodstream infection (BSIs), the trends in device-associated healthcare-associated infections (DA-HAIs), as well as the prevalence and etiology of polymicrobial infections in this scenario. Aim: To provide an up-to-date picture of the burden of HAIs, DA-HAIs, and polymicrobial infections, as well as to identify variables associated with the risk of development of these severe infections. Methodology: 24-hour point-prevalence surveys were conducted using standardized protocols in 35 adult (medical-surgical and coronary) ICUs from 8 mesoregions of Minas Gerais State, Brazil. Medical records of eligible inpatients were reviewed on the survey day to collect data regarding demographic characteristics, HAI rates present at the time of the survey, device use, length of stay from 374 patients and bacterial profiles, and all relevant data associated with the epidemiology of these infections. A matched-pairs case-control study was performed on a total of 66 pairs for BSI and 115 pairs for pneumonia according to the selection criteria developed, and the data regarding DA-HAIs were analyzed to disclose patterns of invasive device use associated with these infections. Results: Overall 171 patients (45.7%) had at least one HAI, with most (78.4%) acquired in the ICU. These patients presented a total of 240 infections; including 123 pneumonia (51.3%) and 66 BSI (27.5%), and 78.9% and 80.3%, respectively, were acquired in the ICU. The etiology of them was predominated by Gram-negative bacteria versus Gram-positive bacteria (48.9% versus 43.3%), highlighting Acinetobacter baumannii (13.7%) and Pseudomonas aeruginosa (12.8%). Among the DA-HAIs (42.5%), there were 78.8% of central line-associated bloodstream infections (CLABSIs), 71.5% of ventilator-associated pneumonias (VAPs) and 54.2% of catheter-associated urinary tract infections (CAUTIs). The invasive devices frequencies were 70.1% for central venous catheter (CVC), 48.9% for mechanical ventilation (MV) and 64.4% for indwelling urinary catheters (IUC). The most frequent pathogens associated with DA-HAIs were Pseudomonas aeruginosa (14.7%) and Acinetobacter baumanni (15.7%). Conclusion: We can endorse a high severe ICU-acquired HAIs burden as well as high frequencies of medical invasive device use in Brazilian adult ICUs when compared with findings from other low- and middle-income countries. And unfortunately, polymicrobial infections presented a frequency of 23.8%, with 41.2% caused by Gram-negative bacilli. These data can be utilized for better planning of nosocomial infection surveillance programs in our hospitals. Dissertação (Mestrado) 2023-09-27

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introduction: Has been observed the global spread of different variants of P. aeruginosa that is often associated with increased virulence or the emergence of new antimicrobial resistance genotypes. There are few studies describing the association of the Type III Secretion System (TTSS) with antibiotic resistance and outcome of patients with pneumonia and bacteremia. Objectives: Determine the relation among resistance to carbapenems and fluoroquinolones and the Type III Secretion System (TTSS) effector genotype and its association with the poor prognostic in patients with ventilator-associated pneumonia (VAP) and bacteremia, identify mutations in the Quinolone Resistance Determining Regions (QRDRs), Metallo-β-Lactamase genes (MβL), virulence genes (algD, lasB e toxA) and clonal spread of isolates producing MβL. Material and Methods: A retrospective cohort was conducted to determine the risk factors for 30-day mortality in patients with the first episode of bacteremia (157 patients) and VAP (60 patients) caused by P. aeruginosa. Genes blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM and blaSPM, TTSS genes (exoT, exoS, exoY, exoU ) and virulence genes (lasB, algD, toxA) were detected by PCR; the sequencing was conducted for QRDR genes (gyrA e parC) on fluoroquinolone-resistant strains and the Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) for molecular typing of positive strains for the MβL genes Results: The multivariate analysis showed that predictors independently associated with death in patients with bacteremia were inappropriate therapy and cancer. Carbapenem resistance was more frequent among strains of VAP (53.3%), however with the detection of MβL genes in one isolate (blaIMP), unlike blood, where the frequency of these genes was 16.1%, being 10.7% blaSPM genotype and 5.4% blaVIM genotype. The exoS gene was found in all blood and lung isolates and the exoU gene only in 9.4%. Substitution of threonine to isoleucine at position 83 in gyrA was the most frequent mutation among fluoroquinolone-resistant strains. It was detected a mutation at position 91 in parC gene (Glu91Lys) associated with mutation in gyrA (Thre83Ile) in a strain of extensively drug-resistant P. aeruginosa, exoT+exoS+exoU+ genotype, isolate from lung, not described in Brazil yet. Among the strains that harboring the TTSS virulence genes it was observed high resistance to gentamicin (93.7%) and low for amikacin (37.5%). The evaluation of the clonal relationship between isolates producing blaSPM, blaVIM and blaIMP genes showed similarity (more than 80%) among the blaSPM strains, which was not observed for those producing blaVIM gene. Conclusions: Our results confirm previous findings regarding the spread of blaSPM clone, with indirect evidence of its cross-spread in our hospital and polyclonal those containing the blaVIM gene. Inappropriate therapy is significant factor for poor prognosis among patients with bacteremia caused by multidrug-resistant P. aeruginosa , independent of the virulence TTSS genotype associated. Introdução: Vem sendo observado a disseminação global de diferentes variantes de P. aeruginosa que está frequentemente associada a maior virulência ou a emergência de novos genótipos de resistência aos antimicrobianos. Há poucos estudos descrevendo a associação do Sistema de Secreção Tipo III (TTSS) com resistência aos antibióticos e evolução dos pacientes com pneumonia e bacteremia. Objetivos: Determinar a relação entre resistência a fluorquinolonas e carbapenêmicos e a virulência de Pseudomonas aeruginosa pelo Sistema de Secreção Tipo III e sua associação com pior prognóstico em pacientes com Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica (PAV) e bacteremia, identificar mutações na Região Determinante de Resistência as Quinolonas (QRDR), genes para Metalo-β-Lactamase (MβL), genes de virulência (algD, lasB e toxA) e disseminação clonal das amostras produtoras de MβL. Material e Métodos: Foi realizada uma coorte retrospectiva para determinar os fatores de risco para mortalidade em 30 dias em pacientes com primeiro episódio de bacteremia (157 pacientes) e PAV (60 pacientes) por P. aeruginosa. Os genes blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM e blaSPM, os genes do TTSS (exoT, exoS, exoY, exoU ) e os genes de virulência (lasB, algD, toxA) foram detectados por PCR; o sequenciamento foi realizado para os genes do QRDR (gyrA e parC) nas cepas resistentes a fluorquinolonas e o Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) para tipagem molecular das amostras positivas para o gene produtor de MβL. Resultados: A análise multivariada mostrou que os preditores independentemente associados com mortalidade nos pacientes com bacteremia foram terapia antimicrobiana inapropriada e câncer. A resistência aos carbapenêmicos foi maior entre as amostras de PAV (53,3%), porém com a detecção dos genes que codificam MβL em apenas um isolado (blaIMP), ao contrário do sangue, onde a frequência desses genes foi de 16,1%, sendo 10,7% blaSPM e 5,4% blaVIM. O gene exoS foi encontrado em todas as amostras avaliadas de sangue e pulmão e o gene exoU em apenas 9,4% das mesmas. A substituição de uma treonina por isoleucina na posição 83 no gene gyrA foi a mais frequente entre as cepas resistentes a fluorquinolonas. Foi detectada uma mutação na posição 91 no gene parC (Glu91Lys) associada com a mutação em gyrA (Thre83Ile) em uma amostra de P. aeruginosa ,isolada do pulmão, extensivamente resistente, do genótipo exoT+exoS+exoU+ , ainda não descrita no Brasil. Entre as amostras que carreavam os genes de virulência TTSS observou-se alta resistência a gentamicina (93,7%) e baixa para amicacina (37,5%). A avaliação da relação clonal entre as amostras contendo os genes blaSPM, blaVIM e blaIMP , apresentou alta similaridade (maior que 80%), naquelas contendo blaSPM, o que não foi observado para as amostras contendo o gene blaVIM. Conclusões: Nossos resultados confirmam achados prévios com relação a disseminação do clone blaSPM, com evidências indiretas da sua disseminação cruzada no nosso hospital e policlonal daquelas contendo o gene blaVIM. A terapia inapropriada é fator significativo para pior prognóstico entre os pacientes com bacteremia por P. aeruginosa multirresistente, independente do genótipo de virulência TTSS associado. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Nocomial bloodstream infections (BSI) are most frequent infection in neonatal intensive care units (NICU), increasing considerably the length of stay in the unit and hospital costs besides contributing to poor prognosis, manly in hospitals developing countries settings. The aims of the study were to assess the impact of a care bundle for managment of Central Venous Catheter (CVC) to reduce nosocomial bloodstream infection, and to describe the pathogenesis and molecular epidemiology of infections due to S. epidermidis in a NICU of a Brazilian university hospital. The study included newborns admitted to the unit of Clinical Hospital of Federal University of Uberlândia from October / 2010 to August / 2012. Epidemiological surveillance used to follow BSI was the \"National Healthcare Safety Network\" (NHSN), and an insertion protocol for insetion and maintenance of central venous catheter based on Center for Disease Control (CDC) guidelines was adopted in unit. For the study of the pathogenesis of these infections due to S. epidermidis, cultures of the skin in the insertion site and CVC hub, as well as the nasal and intestinal mucosa of neonates were performed from 48 hrs to 14 days using the invasive procedure, or positive hemoculture, and the tip of the CVC after its withdrawal. The study was approved by the ethics committee in research of the UFU (protocol 464/10). A total of 112 infants developed BSI (20.3%) totaling 178 episodes (32.3%), 139 (25.2%) defined as hospital acquired. Incidence rates of BSI during the sudy research were 16.1 /1000 patient-days and 23.0/1000 CVC-days, but with significant variations during the investigation period, with increasing rates (59.6 / 1000 patient-days) in January 2011 and 2012 when compared with the rates of other months (16.6/1000 patient-days; IRR 3.59; P

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: A disseminação de Acinetobacter baumannii associada à emergência de genótipos de resistência aos carbapenêmicos, é de grande preocupação no mundo todo. Objetivos: Compreender a epidemiologia hospitalar bem como a atual disseminação de clones de alto risco em cepas clínicas de A. baumannii resistentes aos carbapenêmicos. Materiais e métodos: O estudo foi conduzido em duas etapas. Primeiramente, foi realizado estudo epidemiológico através de uma coorte de 489 pacientes internados no Hospital de Clínicas (HC-UFU), com infecção por A. baumannii resistente aos carbapenêmicos no período de 2013 a 2017, considerando o primeiro episódio. Em segundo, foi realizado um estudo molecular de amostras recuperadas do HC-UFU, juntamente com isolados de A. baumannii recuperados de outros hospitais de Minas Gerais (MG), os quais foram selecionados para serem tipadas pela técnica de sequenciamento de MLST (Multilocus Sequence Typing, esquema Pasteur) e, destas, uma amostra foi selecionada para o sequenciamento de genoma completo a partir da plataforma NextSeq 500 (Illumina) utilizando leituras paired-end de 150 pb. Todas as cepas foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção dos genes de oxacilinases (blaOXA-51, blaOXA-23, blaOXA-24, blaOXA-58 e blaOXA-143) e outras carbapenemases (blaNDM-1, blaKPC, blaIMP-1, blaVIM-1, blaTEM). Resultados: No estudo epidemiológico, foi encontrada incidência de infeção por A. baumannii resistente aos carbapenêmicos de 0,7/1000 pacientes-dia, com a maioria dos pacientes com infecção de trato respiratório (54,7%), predominantemente internados na unidade de terapia intensiva (UTI). Em novembro de 2014 os índices de infecção ultrapassaram os limites estabelecidos, confirmando um surto de infecção por A. baumannii multirresistente. A frequência de mortalidade foi elevada (39%) e a análise multivariada mostrou que os fatores de risco relacionados foram presença de sepse e antibioticoterapia definitiva inapropriada. Foi verificado que 93,9% dos pacientes tiveram infecções por isolados multirresistentes (MDR) e 41,5% por isolados extensivamente resistente (XDR). 94,5% das 107 cepas recuperadas e testadas, recuperadas do HC-UFU, foi positiva para o gene blaOXA-23. Na etapa molecular, foram selecionadas 10 amostras clínicas de A. baumannii, obtidas de diferentes hospitais do estado de MG. Sete amostras (58,3%) foram positivas para o gene blaOXA-23 e uma (8,3%) foi positiva para o gene blaNDM-1. Estas 10 amostras, juntamente com duas amostras selecionadas do HC-UFU, foram tipadas por MLST, e observou-se disseminação clonal de sete STs e quatro complexos clonais (CC), com predominância do ST/CC79 bem como a identificação de dois STs novos, ST1465/CC216, e ST1466/CC79. Foi realizado o sequenciamento de genoma completo da cepa positiva para o gene blaNDM-1, o qual era carreado por um plasmídeo incomum (pAb17), cujo transposon Tn125 sofreu perda de genes. Além disso, a amostra possuía no cromossomo gene blaOXA-106, variante de blaOXA-51, além do gene blaADC-25 com ISAba1 upstream. Conclusões: O estudo evidenciou endemicidade de A. baumannii MDR no HC-UFU, com elevada frequência do gene blaOXA-23 nos isolados recuperados, além de maior risco de evolução para óbito em pacientes com infecções graves recebendo antibioticoterapia definitiva inapropriada. Também mostrou disseminação de diferentes STs de A. baumannii MDR no estado de Minas Gerais, com predominância do ST/CC79 e a identificação de dois novos STs, além da emergência do gene blaNDM-1 em A. baumannii em nosso estado. Introduction: The spread of Acinetobacter baumannii associated with the emergence of resistance genotypes to carbapenems is of great concern worldwide. Aims: To understand hospital epidemiology as well as the current dissemination of high-risk clones in clinical strains of A. baumannii resistant to carbapenems. Materials and methods: The study was conducted in two stages. First, an epidemiological study was conducted using a cohort of 489 patients with carbapenem-resistant A. baumannii infection from 2013 to 2017 hospitalized at Hospital de Clínicas (HC-UFU), considering the first episode. Secondly, a molecular study of samples recovered from HC-UFU was carried out, along with isolates of A. baumannii recovered from other hospitals in Minas Gerais (MG) state, were selected to be typed by the MLST sequencing technique (Multilocus Sequence Typing, Pasteur scheme) and, of these, the whole-genome of one strain was sequenced using an Illumina Next-Seq 500 paired-end reads (150 bp). Polymerase chain reaction (PCR) were used to detect the oxacillinase genes (blaOXA-51, blaOXA-23, blaOXA-24, blaOXA-58 e blaOXA-143) and other carbapenemases (blaNDM-1, blaKPC, blaIMP-1, blaVIM-1, blaTEM). Results: In the epidemiological study, an incidence of carbapenem-resistant A. baumannii infection of 0.7/1000 patient-days were found, with most patients with respiratory tract infections (54.7%), predominantly hospitalized in the intensive care (ICU). In November 2014, the infection rates exceeded the established limits, confirming an outbreak of multi-resistant A. baumannii infection. The frequency of mortality was high (39%) and the multivariate analysis showed that the related risk factors were the presence of sepsis and antimicrobial inappropriate therapy. It was found that 93.9% of the patients had infections with the multidrug resistant microorganism (MDR) and 41.5% with the extensively resistant microorganism (XDR). 94.5% of the 107 strains recovered and tested, recovered from the HC-UFU, were positive for the blaOXA-23 gene. On the molecular stage, 12 clinical strains of A. baumannii, obtained from different hospitals of MG state were selected. Seven strains (58.3%) were positive for the blaOXA-23 gene and one (8.3%) was positive for the blaNDM-1 gene. These 12 strains, along with two selected isolates from the HC-UFU, were typed by MLST, the result showed clonal dissemination of seven STs and four clonal complexes (CC), with predominance of ST/CC79 as well as the identification of two new STs, ST1465/CC216, and ST1466/CC79. Whole-genome sequencing of the positive sample for the blaNDM-1 gene was carried out, which was carried by an unusual plasmid (pAb17), in which some genes of the Tn125 transposon were lost. Besides, on the chromosome, the strain reported here presented blaOXA-106 gene, a variant of blaOXA-51 gene, and blaADC-25 with ISAba1 upstream. Conclusions: The study showed endemicity of A. baumannii MDR at HC-UFU, with a high frequency of the blaOXA-23 gene in recovered isolates, in addition to a higher risk of death in patients with severe infections receiving antimicrobial inappropriate definitive therapy. It also showed dissemination of different STs of A. baumannii MDR in the state of Minas Gerais, the predominance of ST/CC79, the identification of two new STs, in addition to the emergence of the blaNDM-1 gene in A. baumannii in MG. Tese (Doutorado)

Introdução: Pseudomonas aeruginosa está frequentemente envolvida com infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) no Brasil, altas taxas de mortalidade e possui uma grande capacidade de desenvolver ou adquirir resistência aos antimicrobianos. Objetivos: Este estudo investigou o impacto da terapia antimicrobiana inapropriada na evolução de pacientes com infecção por P. aeruginosa resistentes aos carbapenêmicos e sua associação com genes responsáveis por codificarem as metalo-β-lactamases (blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM, blaSPM, blaNDM) e exotoxinas do Sistema de Secreção Tipo III (T3SS III) - exoS, exoT, exoU e exoY. Material e Métodos: Foi realizada uma coorte retrospectiva para determinar os fatores de risco para mortalidade em 30 dias e o impacto da terapia empírica inapropriada em pacientes com primeiro episódio infeccioso por P. aeruginosa (262 pacientes). Os genes blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM e blaSPM, os genes do T3SS III (exoT, exoS, exoY, exoU) foram detectados por PCR. Resultados: Os resultados obtidos foram assustadores quando se trata da taxa de mortalidade. Observou-se que 17.9% dos pacientes com infecção morreram em até 5 dias do diagnóstico e a taxa de terapia empírica inapropriada foi de 52,7% e esteve associada ao pior prognóstico. A maioria dos pacientes incluídos no estudo apresentou infecção por P. aeruginosa multirresistente (59,5%). Além disso, pacientes com comorbidades que desenvolveram infecções por P. aeruginosa apresentaram maiores chances de receberem terapia empírica inapropriada e a taxa de mortalidade foi significativamente maior nesse grupo (75,5%). Além da Terapia empírica inapropriada, o tempo de hospitalização prolongado; a presença de comorbidades como: neoplasia, nefropatia e cardiopatia; uso de dispositivos invasivos, foram fatores independentes para a mortalidade precoce. Os resultados são ainda mais significativos considerando que 64.5% dos isolados apresentaram gene T3SS, sendo a exoT o gene mais comum. Apesar do gene exoU ter sido encontrado em menos de 20% dos isolados avaliados, esse genótipo foi significativamente mais frequente entre amostras multirresistentes (80%) e associado com pior prognóstico em 46,7% dos casos. Conclusões: Estes resultados demonstram que P. aeruginosa continua sendo um dos patógenos mais importantes no ambiente hospitalar, acometendo na sua maioria pacientes críticos. Aqui, percebemos que a terapia antimicrobiana inapropriada está intimamente relacionada com o pior prognóstico dos pacientes principalmente naqueles com infecções mais graves como bacteremia e pneumonia. Nossos resultados sugerem também que a multirresistência associada com virulência (T3SS III) deve ser adicionada à lista de fatores responsáveis para o aumento das taxas de mortalidade nesses pacientes. Independentemente, da baixa detecção de genes associados à resistência aos carbapenêmicos na nossa coorte, a importância da combinação de mecanismos que levam a resistência deve ser considerada e estudada. Este estudo torna-se fundamental para que, em um futuro próximo, novas estratégias possam ser formuladas e implementadas a fim de diminuir a taxa de infecção por P. aeruginosa multirresistente, a prescrição de terapia empírica inapropriada e, consequentemente, reduzir de forma significativa as taxas de mortalidade. Introduction: Pseudomonas aeruginosa is frequently involved with healthcare-related infections (HAIs) in Brazil, high mortality rates and has a great capacity to develop or acquire resistance to antimicrobials. Objectives: This study investigated the impact of inappropriate antimicrobial therapy on the evolution of patients with carbapenem-resistant P. aeruginosa infection and its association with genes responsible for encoding metallo-β-lactamases (blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM, blaSPM, blaNDM) and exotoxins of the Type III Secretion System (T3SS III) - exoS, exoT, exoU and exoY. Material and methods: A retrospective cohort was performed to determine risk factors for mortality within 30 days and the impact of inappropriate empirical therapy on patients with a first infectious episode due to P. aeruginosa (262 patients). The blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM and blaSPM genes, the T3SS genes (exoT, exoS, exoY, exoU) were detected by PCR. Results: The results obtained were frightening when it comes to the mortality rate. It was observed that 17.9% of patients with infection died within 5 days of diagnosis and the rate of inappropriate empirical therapy was 52.7% and was associated with a worse prognosis. Most of the patients included in the study had multidrug-resistant P. aeruginosa infection (59.5%). Also, patients with comorbidities who developed P. aeruginosa infections were more likely to receive inappropriate empirical therapy and the mortality rate was significantly higher in this group (75.5%). In addition to inappropriate empirical therapy, prolonged hospital stays; the presence of comorbidities such as neoplasia, nephropathy and heart disease; the use of invasive devices, were independent factors for early mortality. The results are even more significant considering that 64.5% of the isolates had a T3SS gene, exoT being the most common gene. Although the exoU gene was found in less than 20% of the isolates evaluated, this genotype was significantly more frequent among multiresistant samples (80%) and associated with a worse prognosis in 46.7% of cases. Conclusions: These results demonstrate that P. aeruginosa remains one of the most important pathogens in the hospital environment, affecting mostly critical patients. Here, we realize that inappropriate antimicrobial therapy is closely related to the worst prognosis for patients, especially those with more serious infections such as bacteremia and pneumonia. Our results also suggest that multi resistance associated with virulence (T3SS) should be added to the list of factors responsible for increased mortality rates in these patients. Regardless of the low detection of genes associated with resistance to carbapenems in our cohort, the importance of combining mechanisms that lead to resistance must be considered and studied. This study becomes essential so that, shortly, new strategies can be formulated and implemented to decrease the rate of infection by multidrug-resistant P. aeruginosa, the prescription of inappropriate empirical therapy and, consequently, significantly reduce the rates of mortality. Tese (Doutorado) 2022-12-09

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Introdução - As infecções de corrente sanguínea (ICS) estão entre as infecções hospitalares mais frequentes, particularmente em pacientes críticos, com indicadores epidemiológicos de morbidade, mortalidade e custos elevados. O impacto da etiologia das ICS por bacilos Gram-negativos (BGN) multirresistentes (MDR) e sua relação com a terapêutica antibiótica empírica inicial inapropriada (TAEII) e com a mortalidade são pouco conhecidos no Brasil pela escassez de dados. Objetivos - Determinar os fatores de risco e o prognóstico, bem como o impacto da TAEII no tratamento e na evolução de pacientes com ICS por BGN MDR. Material e método - Foi realizado um estudo observacional, retrospectivo com pacientes internados numa unidade de terapia intensiva (UTI) de adultos, clínico-cirúrgica, em um hospital terciário, no período de janeiro/2012 a dezembro/2018, o que resultou numa coorte de 270 pacientes, com o primeiro episódio dessa infecção, com hemocultura positiva por BGN. A busca de dados demográficos, clínicos e microbiológicos, incluindo o perfil de resistência aos antimicrobianos, foi realizada através de pesquisa nas fichas do Serviço de Controle de Infecção Hospitalar e prontuários de pacientes. Foram realizadas análises estatísticas uni- e multivariada para avaliação dos preditores de mortalidade quando de ICS por microrganismos MDR e de TAEII. Resultados – No total, 145 (53,7%) dos 270 pacientes incluídos no estudo não sobreviveram à hospitalização na unidade. Nesse grupo sobressaíram, em relação aos que tiveram alta hospitalar, os mais velhos (58,8 anos vs. 46,9 anos) e mais gravemente enfermos (100,0% vs. 93,6%, p ≥ 0,05), mas sem diferenças estatísticas. Por outro lado, mostraram como preditores de mortalidade: choque séptico (OR= 2,5; IC= 1,3-4,9; p= 0,0051), imunocomprometimento (OR= 2,6; IC= 1,3-5,2; p= 0,0066) e utilização de ventilação mecânica (OR= 28,0; IC= 6,3-123,6; p=

Devido a falta de informação não disponibilisada por algumas revistas de periódicos e/ou por nem todas as referências serem de artigos de pesquisa publicados, não são todas as referências que irão conter o DOI CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: A pneumonia associada à ventilação (PAV) é uma das infecções hospitalares mais comuns em unidades de terapia intensiva (UTIs), contribuindo para aumento na incidência de infecções, mortalidade e custos. Os bacilos Gram-negativos (BGN) são os patógenos mais comuns nessas infecções, mas as altas frequências de micro-organismos resistentes aos antibióticos agravaram ainda mais o prognóstico, assim como o aumento de gastos com a saúde em países de poucos recursos. Objetivo: Avaliar o risco da terapêutica antibiótica inapropriada na evolução de infecções bacterianas por BGNs resistentes e multirresistentes (MR) aos carbapenêmicos e cefalosporinas de amplo espectro em pacientes clínicos críticos acometidos com PAV. Métodos: Foi realizado inquérito de prevalência de infecções hospitalares em pacientes internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU) no período de 2012-2014; as infecções foram definidas de acordo com critérios clínicos e microbiológicos e foram considerados os seguintes fenótipos de resistência: não-fermentadores resistentes aos carbapenêmicos e Enterobacteriaceae resistentes às cefalosporinas de 3ª e 4ª geração, segundo resultados “in vitro”. Foram avaliados os fatores de risco intrínsecos e extrínsecos dos pacientes com PAV causadas por BGN através de análises estatísticas univariada e multivariada. A curva de sobrevivência e a curva endêmica foram construídas. Resultados: Nos três anos de investigação foram identificados 2168 pacientes internados na UTI e 210 pacientes com PAV por BGN submetidos ao estudo epidemiológico segundo o modelo de coorte retrospectiva. A incidência de infecção em pacientes novos foi de 55,1% e no total (novos e antigos) de 91,2%; a maioria das infecções foram adquiridas na UTI (81,2%) e o restante (18,8%) foram adquiridas em outras unidades. No total 558 pacientes tiveram PAV, 210 deles foram causadas por BGN no primeiro episódio de infecção e a análise multivariada identificou que a terapia definitiva inapropriada e o score de comorbidade de Charlson ≥ 3 foram fatores de risco independentes para a mortalidade em 30 dias. Conclusão: Os casos observados de PAVs foram assim causados por BGNs resistentes/MR associado a indicadores de infecção muito elevados, dado as opções terapêuticas antibióticas disponíveis limitadas para tratamento dessas infecções e sua associação com o risco de mortalidade. Introduction: Ventilator-associated pneumonia (VAP) is one of the most common hospital-acquired infections in intensive care units (ICUs), contributing to an increased incidence of infections, mortality, and costs. Gram-negative bacilli (GNB) are the most common pathogens in these infections, but high frequencies of antibiotic-resistant microorganisms further aggravate the prognosis, as well as increased health spending in resource-poor countries. Aim: Evaluating the risk of inappropriate antibiotic therapy in the evolution of bacterial infections by resistant and multi-resistant GNBs to carbapenems and wide-spectrum cephalosporins in critical clinical patients affected with VAP. Methods: A prevalence survey of hospital infections was carried out in patients hospitalized at Clinic’s Hospital of the Federal University of Uberlândia (HC-UFU) in the period 2012-2014; the infections were defined according to clinical and microbiological criteria and the following resistance phenotypes were considered: non-fermenters (NF) resistant to carbapenems and Enterobacteriaceae resistant to 3rd and 4th generation of cephalosporins, according to "in vitro" results. The intrinsic and extrinsic risk factors of patients with VAP caused by GNB were evaluated through univariate and multivariate statistical analyses. The survival and the endemic curves were constructed. Results: In the three years of investigation, 2168 patients hospitalized in the ICU and 210 patients with VAP by GNB who were submitted to the epidemiological study according to the retrospective cohort model were identified. The incidence of infection in new patients was 55.1% and in total (new and old) of 91.2%; most of the infections were acquired in the ICU (81.2%) and the rest (18.8%) were acquired in other units. A total of 558 patients had VAP, 210 of them were caused by GNB in the first episode of infection, and the multivariate analysis identified that the inappropriate definitive therapy and the Charlson comorbidity score ≥ 3 were independent risk factors for 30-day mortality. Conclusion: VAPs were thus caused by resistant/multi-resistant BGNs associated with very high infection rates, given the limited available antibiotic therapeutic options for treatment of these infections and their association with mortality risk. Dissertação (Mestrado)

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Introdução- As infecções do trato urinário (ITU) são frequentes em pacientes críticos, geralmente associadas ao uso de cateter urinários de demora (CVD) levando a uma morbidade significativa. Objetivo- Avaliar a epidemiologia, etiologia, fatores de risco e evolução de infecções do trato urinário em pacientes adultos críticos. Material e métodos- O estudo incluiu vigilância retrospectiva (2012-2018) da incidência do primeiro episódio de ITU em pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de Adultos de um hospital terciário de referência no Brasil. Por meio de triagem sistemática dos prontuários dos pacientes, uma ficha individual, com dados epidemiológicos, demográficos, clínicos e microbiológicos foi preenchida. Foram avaliados fatores de risco intrínsecos e extrínsecos, utilizando-se análises estatísticas univariada e multivariada. Adicionalmente, foi calculado a densidade de uso dos seguintes antimicrobianos: cefepime, ceftriaxona, imipenem, meropenem, polimixina B e tigeciclina. O espectro de resistência in vitro foi determinado pelo Laboratório de Microbiologia do Hospital. Resultados- Nos 7 anos de investigação foram identificados 363 pacientes (252 com bacteriúria, 109 com candidúria e 2 episódios por Trichosporon spp.) com primeiro episódio de ITU adquirida na Unidade, com base em critérios microbiológicos. A incidência dessas infecções foi de 7,2/1000 pacientes-dia (3.5/1000 pacientes-dia para bacteriúrias e 2,1/1000 pacientes-dia para candidúrias). De modo geral, a maioria dos pacientes foram do sexo feminino (58,6%), com média de idade relativamente baixa de 55,9 anos. Apresentaram escores de doença aguda (ASIS ≥4) e de comorbidades (CHARLSON ≥3) elevados, com 74,6% e 54,5%, respectivamente. O tempo médio de internação total e após o diagnóstico foram prolongados, correspondendo respectivamente a 15 dias (DP±13,29) e 11 dias (DP±12,52). As infecções foram na maioria monocrobianas (97,2%), com apenas 2,7% de etiologia polimicrobianas. No total, dos 373 microrganismos houve predominância para os bacilos Gram-negativos (50,9%) identificados nas seguintes espécies pela ordem: Escherichia coli (36,0%), Klebsiella pneumoniae (23,6%) e Acinetobacter baumannii (10,0%). As leveduras foram responsáveis por 30,7% das amostras isoladas, com destaque para Candida albicans (57,0%). A maioria das amostras foram caracterizadas como multirresistentes (62,4%). Observou-se correlação positiva entre o uso de polimixina B (P=

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: O foco principal de todos os esforços para controlar e prevenir infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) é a necessidade inerente de medir a magnitude dessas infecções bem como os riscos e custos associados. Objetivos: Este estudo objetivou mapear a prevalência de IRAS causadas por patógenos epidemiologicamente importantes no ambiente hospitalar, bem como avaliar os custos diretos frente aos valores de reembolso por parte do governo associados a pacientes críticos, em um hospital de referência no Brasil. Adicionalmente, foi realizado o diagnóstico de infraestrutura hospitalar para controle das IRAS, principalmente as relacionadas à higienização das mãos (HM). Métodos: Em 2017 foi realizado inquérito de prevalência pontual em todas as clínicas do hospital, por meio de triagem sistemática dos prontuários dos pacientes e visitas nas clínicas. Foi realizado estudo caso (paciente com IRAS presente no momento do inquérito de prevalência) versus controle (pacientes que ainda não haviam adquirido IRAS no "dia correspondente") pareado para avaliação de fatores de risco, mortalidade total e custos de hospitalização. Casos e controles foram pareados quanto à clínica de internação, idade, sexo e tempo de risco. Para o cálculo do reembolso, o valor total da cobrança de cada hospitalização ao Sistema Único de Saúde (SUS) foi obtido através do Setor de Faturamento do Hospital e para o cálculo dos custos diretos, foram incluídos aqueles relacionados somente à assistência na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de adultos por meio de uma pesquisa anual (2018). Realizou-se simulação de Monte Carlo, com 50.000 simulações, do custo direto anual de pacientes com IRAS internados nas UTI de adultos em 50 hospitais universitários federais no Brasil, abrangendo três cenários de prevalência. O diagnóstico de infraestrutura do Hospital foi focada em 4 áreas essenciais: serviço de controle de infecção hospitalar, serviço de esterilização, laboratório de microbiologia e principalmente, nos recursos para HM. Resultados: Foram incluídos 423 pacientes, em que a prevalência total de pacientes com IRAS foi de 19,6%, sendo especialmente alta na UTI de adultos (50,0%). As prevalências de infecção de corrente sanguínea (ICS), pneumonia (PNM) e infecção do trato urinário (ITU) foram, respectivamente, 32,6%, 22,4% e 21,4%, causadas principalmente por Enterobacteriaceae, bacilos Gram-negativos (BGN) não fermentadores e Escherichia coli naquelas com comprovação microbiológica (60,2%), respectivamente. O uso de dispositivos invasivos foi fator de risco independente para IRAS. Observou-se que a presença de cateter venoso central, ventilação mecânica e cateter urinário aumentam o risco para ICS, PNM e ITU em 9,5; 16,0 e 9,5 vezes, respectivamente. Além disso, a presença do paciente na UTI adulto foi fortemente relacionada ao desenvolvimento de pneumonia (OR: 4,2408). No total, 45,6% dos pacientes receberam pelo menos um antimicrobiano. De todos os antimicrobianos utilizados para tratar infecção, apenas em 48,6% dos pacientes foram com base em resultados microbiológicos. Esse estudo demonstrou proporção média de número de pacientes por pia de 3,42 ± 2,33, com índice de conformidade (IC) de 91% e número de pacientes por dispensador de preparação alcoólica de 1,61 ± 1,12 paciente/dispensador (IC = 86%). Todavia, avaliando o desempenho da higiene das mãos por metodologia indireta, a taxa de adesão à prática de HM foi de 10% e 15% nas UTIs e nas demais clínicas, respectivamente. Este estudo revelou que o custo de reembolso por hospitalização de pacientes com IRAS foi 75% maior que os pacientes sem IRAS, ainda maior entre os pacientes com infecção por fenótipos resistentes. Foi destinado aos pacientes com IRAS 41% do valor total de reembolso referente a hospitalização de todos os pacientes incluídos no estudo, todavia o número de pacientes com IRAS correspondeu a 19,6% do total. A avaliação do custo direto demonstrou valores extremamente elevados quando a mesma comparação foi feita, sendo que o custo direto foi 111,5% maior que o valor do reembolso (US$ 11776 x US$ 5569, respectivamente) para o paciente com IRAS. A partir da simulação de Monte Carlo, observou-se custo direto adicional de US$2.824.817 a cada 1% de aumento na prevalência de IRAS. Conclusão: Este estudo fornece dados alarmantes de IRAS bem como de custos, com altas taxas de infecções que apresentam pior prognóstico (sepse e pneumonia), causadas principalmente por BGN multirresistentes, significativamente associado à presença do paciente na UTI, bem como uso de ventilação mecânica e cateteres venosos centrais. Apesar do hospital avaliado possuir infraestrutura e recursos adequados para a higienização das mãos, o desempenho à prática da HM foi extremamente baixo. Background: The principal focus of all efforts to control and prevent healthcare-associated infections (HAIs) is the inherent necessity to measure the burden of these infections as well as the risks and costs associated. Objectives: This study aimed to map the prevalence of HAIs caused by epidemiologically important pathogens in the hospital environment, as well as to evaluate the direct costs and reimbursement by the Brazilian government associated with critical patients, in a Tertiary Referral Hospital in Brazil. Additionally, the Hospital's infrastructure diagnosis for HAI control was performed, mainly related to hand hygiene. Methods: In 2017, a point prevalence survey was carried out in all clinics at the hospital, through systematic screening of patients' medical records and visits to clinics. A case study (patient with HAI present at the time of the prevalence survey) versus control (patients who had not yet acquired HAI on the "corresponding day") was paired to assess risk factors, total mortality and hospitalization costs. Cases and controls were matched for hospitalization clinic, age, sex and time of risk. For the calculation of reimbursement, the total amount charged for each hospitalization to the Unified Health System (SUS) was obtained through the Hospital Billing Sector and for the calculation of direct costs, those related only to the adult ICU care were included, through an annual survey (2018). A Monte Carlo simulation was carried out, with 50,000 simulations, of the direct annual cost of patients with HAI admitted to the adult ICUs in 50 federal university hospitals in Brazil, covering three prevalence scenarios. The diagnosis of the hospital's infrastructure was focused on 4 essential areas: hospital infection control service, sterilization service, microbiology laboratory and, mainly, on resources for hand hygiene. Results: 423 patients were included, in which the total prevalence of patients with HAI was 19.6%, being especially high in the adult ICU (50.0%). The prevalences of bloodstream infections (BSI), pneumonia (PNM) and urinary tract infection (UTI) were 32.6%, 22.4% and 21.4%, respectively, mainly caused by Enterobacteriaceae, Gram-negative bacilli (BGN) non-fermenters and E. coli in those with microbiological evidence (60.2%), respectively. The use of invasive devices was an independent risk factor for HAI. It was observed that the presence of central venous catheter, mechanical ventilation and urinary catheter increases the risk for BSI, PNM and UTI by 9.5; 16.0 and 9.5 times, respectively. In addition, the patient's presence in the adult ICU was strongly related to the development of pneumonia (OR: 4.2408). In total, 45.6% of the patients received at least one antimicrobial. Of all antimicrobials used to treat infection, only 48.6% of patients were based on microbiological results. This study demonstrated an average proportion of the number of patients per sink of 3.42 ± 2.33, with a compliance rate (CI) of 91% and the number of patients per alcoholic dispenser of 1.61 ± 1.12 patient / dispenser (CI = 86%). However, evaluating the performance of hand hygiene by indirect methodology, the rate of adherence to the practice of hand hygiene was 10% and 15% in the ICUs and other clinics, respectively. This study revealed that the cost of reimbursement for hospitalization of patients with HAIs was 75% higher than patients without HAIs, even higher among patients with infection by resistant phenotypes. 41% of the total reimbursement amount for hospitalization of all patients included in the study was allocated to patients with HAI, however the number of patients with HAI corresponded to 19.6% of the total. When the direct cost was assessed, extremely high values were observed when the same comparison was made, with the direct cost being 111.5% higher than the reimbursement value (US $ 11776 x US $ 5569, respectively) for the patient with HAI. From the Monte Carlo simulation, an additional direct cost of US $ 2,824,817 was observed for each 1% increase in the prevalence of HAIs. Conclusion: This study provides alarming data on HAIs as well as the costs involved, with high rates of infections that have a worse prognosis (sepsis and pneumonia), caused mainly by multidrug-resistant BGN, significantly associated with the patient's presence in the ICU, as well as the use of mechanical ventilation and central venous catheters. Although the hospital evaluated has adequate infrastructure and resources for hand hygiene, performance in the practice of hand hygiene was extremely low. Tese (Doutorado) 2022-03-18

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Introdução: As infecções de corrente sanguínea (ICS) representam uma grande ameaça para os pacientes de Unidade de Terapia Intensiva (UTI) além de um desafio em hospitais de países de baixa e média renda como o Brasil, principalmente pela participação expressiva de microrganismos resistentes aos antimicrobianos com destaque para os bacilos Gram-negativos (BGN). Objetivo: Avaliar os fatores de risco associados a mortalidade e terapêutica inapropriada em casos de primeiro episódio de ICS causados por microrganismos Gram-negativos multirresistentes ou susceptíveis aos antimicrobianos. Metodologia: Trata-se de um estudo observacional, do tipo coorte, realizado na Unidade de Terapia Intensiva do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, no período de janeiro de 2012 a dezembro de 2014. Resultados: Foi obtido através da consulta de prontuários, um número de 238 pacientes que apresentaram primeiro episódio de ICS na UTI, sendo que 110 (42,6%) destes eram causadas por BGN. Dos 110 pacientes que desenvolveram primeiro episódio de ICS na UTI, a maioria era do gênero masculino (74,6%), com uma média de idade de 55,5 anos e com um tempo médio de internação de 15,78 dias. 70,0% destes pacientes eram imunossuprimidos e 36,7% desenvolveram choque séptico. A maioria dos pacientes incluídos na coorte faziam uso de procedimentos invasivos e de antimicrobianos (98,2% e 95,4% respectivamente). Quanto a topografia da infecção, 70,9% das ICS foram classificadas como secundárias, sendo que a principal origem foi o trato respiratório. Os principais microrganismos envolvidos com a etiologia destas infecções foi Klebsiella pneumoniae (20,9%), Acinetobacter baumannii (20,0%) e Pseudomonas aeruginosa (19,1%). Quanto as taxas de resistências, 51,3% dos isolados foram resistentes a cefalosporinas de 3ª e 4ª geração, 23,5% resistentes a carbapenêmicos e 48,7% do total de microrganismos isolados foram classificados como multirresistentes. Quanto aos fatores de risco, o desenvolvimento de choque séptico foi estatisticamente significante como preditor independente de morte. Em relação aos fatores de risco associados com o envolvimento de ICS por BGN multirresistentes, o uso prévio de antimicrobianos, principalmente de carbapenêmicos, bem como uma terapia antimicrobiana inadequada foram estatisticamente significantes. Conclusão: Nossos dados apontam a importância das ICS no tocante da evolução para o óbito independente do tempo de internação refletindo na gravidade dos pacientes internados na unidade. Introduction: Bloodstream infections (BSI) represent a major threat for Intensive Care Unit (ICU) patients and a challenge in hospitals in low- and middle-income countries such as Brazil, especially due to the expressive participation of antimicrobial resistant microorganisms, Gram-negative bacilli (GNB). Objective: In this context, the aim of this study was determine the risk factors associated with mortality and the identification of first-episode cases of BSI due to multi-resistant or antimicrobial susceptible Gram-negative microorganisms. Methods: The study consisted in an observational, cohort-type study conducted at the Intensive Care Unit of the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia, from January 2012 to December 2014. Results: A total of 238 patients presented their first BSI episode in the ICU, and 110 (42.6%) were caused by GNB. Of the 110 patients who developed a first BSI episode in the ICU, most were male (74.6%), with a mean age of 55.5 years and an average hospitalization time of 15.78 days. A total of 70.0% of these patients were immunosuppressed and 36.7% developed septic shock. Most of the patients included in the cohort underwent invasive procedures and antimicrobial therapy (98,2% and 95,4% respectively). Regarding topography, 70.9% os BSI cases were classified as secondary, located mostly in the respiratory tract. The main detected microorganisms were Klebsiella pneumoniae (20.9%), Acinetobacter baumannii (20.0%) and Pseudomonas aeruginosa (19.1%). Regarding resistance rates, 51.3% were resistant to 3rd and 4th generation cephalosporins, 23.5% displayed resistance to carbapenems and 48.7% of all microorganisms were classified as multiresistant. Regarding risk factors, septic shock was statistically significant as an independent death predictor. Regarding risk factors associated to the use of antimicrobials in BSI, antimicrobial therapy, mainly carbapenems are indicated as inappropriate, due to a statistically significant association. Conclusions: These findings point to the importance of BSI in relation to death evolution, regardless of the length of hospital stay and the severity of hospitalized patients. Dissertação (Mestrado)

O surgimento de cepas de Klebsiella pneumoniae resistentes aos carbapenêmicos e polimixinas é uma ameaça ao tratamento antimicrobiano. Neste estudo, nós investigamos as bases moleculares da resistência a colistina em 23 cepas de Klebsiella pneumoniae produtoras de carbapenemase do tipo KPC (KP-KPC), de colonização e infecção, provenientes de um surto ocorrido em um hospital público de ensino no Brasil. Utilizou-se a análise do sequenciamento completo do genoma para determinar os mecanismos de resistência a colistina, em uma cepa representante de cada clone, determinado a partir da técnica de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Adicionalmente, foram realizadas análises genotípicas a partir da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para os seguintes genes de resistência (blaKPC, blaCTX-M, blaNDM, blaIMP, blaVIM, mcr-1) e virulência (fimH, fimA, wabG, iucC, Khe, ecpA, entB, iutA, mrkD, rmpA, kfU, ybtS, allS) e experimentos fenotípicos para avaliar a capacidade de formação de biofilme (ensaio de adesão, quantificação de células viáveis e formação de biofilme) e a característica de hipermucoviscosidade (string test). O estudo evidenciou dados preocupantes quanto ao consumo de antibióticos, principalmente de cefalosporinas de amplo espectro, carbapenêmicos e polimixinas o que pode estar relacionado com a emergência de cepas de KP-KPC resistentes a colistina. No total, foram identificados cinco padrões de perfis clonais com a maioria das cepas pertencentes ao clone A (82,6%). O estudo de clonalidade evidenciou também que a maioria das infecções recorrentes foram causadas pela mesma cepa que estava previamente colonizando ou infectando, e demonstrou-se a capacidade de múltiplos clones coexistir no mesmo paciente. Entre as amostras sequenciadas (N = 4, clones A, B, C e D), foram observados diferentes sequence types (STs: ST11, ST37, ST340 e ST1484). Foi possível observar um resistoma complexo com frequências elevadas de genes de resistência e virulência, e juntamente com testes fenotípicos foi documentada a presença de cepas altamente virulentas, sendo uma também hipermucoviscosa. De modo geral, elas foram produtoras de biofilme, independentemente da resistência a colistina, perfil clonal e o sítio de isolamento, aumentando a sua persistência e dificultando a erradicação. Pela primeira vez no Brasil, foi identificado um fragmento de 3.055 pares de base inserido no gene mgrB, composto pela sequência de inserção ISEcp1 e o gene blaCTX-M-15 na cepa 40KPC (representativa do clone dominante A) o que resultou em resistência adquirida concomitantemente as cefalosporinas de amplo espectro e colistina. O sequenciamento do genoma permitiu a identificação de uma espécie caracterizada como Klebsiella quasipneumoniae subsp. similipneumoniae, altamente virulenta, hipermucoviscosa e resistente a colistina, que pode ser outro importante reservatório de genes de resistência. Os aspectos apresentados aqui, reforçam K. pneumoniae como um patógeno bem-sucedido em causar infecções, resultando na sua rápida expansão e persistência em ambientes hospitalares. A detecção rápida de amostras resistentes aos carbapenêmicos e colistina, aliados a implementação de medidas mais eficazes de controle de infecção, são de importância crucial para evitar a disseminação de clones de alto risco de KP-KPC resistentes a colistina, como evidenciados nesse estudo. The emergence of Klebsiella pneumoniae strains resistant to carbapenems and polymyxins (polymyxin B and colistin) is a threat to antimicrobial treatment. In this study, we investigated the molecular basis of colistin resistance in 23 Klebsiella pneumoniae KPC-producing strains (KPC-KP), of colonization and infection, from an outbreak that occurred in a public teaching hospital in Brazil. Whole genome sequencing (WGS) analysis was used to determine the mechanisms of resistance to colistin in a representative strain of each clone determined from the Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) technique. In addition, genotype analyzes were performed from the Polymerase Chain Reaction (PCR) for the following resistance genes (blaKPC, blaCTX-M, blaNDM, blaIMP, blaVIM and mcr-1) and virulence (fimH, fimA, wabG, khe, ecpA, entB, iutA, mrkD, rmpA, kfu, ybtS and allS) and phenotypic experiments to evaluate the biofilm formation capacity (adhesion assay, viable cell quantification and biofilm formation) and the hypermucoviscosity (string test). This study evidenced concerns regarding the use of antibiotics, mainly broad-spectrum cephalosporins, carbapenems and polymyxins, which may be related to the emergence of colistin-resistant KPC-KP strains. In total, five patterns of clonal profiles were identified with most strains belonging to clone A (82.6%). The clonality study also showed that most recurrent infections were caused by the same strain that was previously colonizing or infecting, and was demonstrated the ability of multiple clones to coexist in the same patient. Among the sequenced strains (N = 4, clones A, B, C and D) different sequence types were observed, (STs: ST11, ST37, ST 340 and ST 1484). It was possible to observe a complex resistome with high frequencies of resistance and virulence genes , and together with phenotypic tests was documented the presence of highly virulent strains, being one also hypermucoviscous. In general, the strains were biofilm producers, regardless of colistin resistance, clonal profile and isolation site, increasing their persistence and making difficult eradication. For the first time in Brazil, a fragment of 3,055 base pairs inserted in the mgrB gene, composed of the insertion sequence ISEcp1 and the gene blaCTX-M-15 in the 40KPC strain (representative of the dominant clone A) was identified, which resulted in acquired resistance concomitantly with broad-spectrum cephalosporins and colistin. The WGS allowed the identification of a species characterized as Klebsiella quasipneumoniae subsp. similipneumoniae, highly virulent, hypermucoviscous and colistin-resistant, which may be another important reservoir of resistance genes. The aspects presented here reinforce K. pneumoniae as a successful pathogen in causing infections, resulting in its rapid expansion and persistence in hospital settings. Rapid detection of carbapenem and colistin-resistant strains, together with the implementation of effective infection control measures, are crucial important in preventing the dissemination of high-risk clones of KP-KPC resistant to colistin, as evidenced in this study. Tese (Doutorado)

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A preocupação com a rápida emergência e disseminação do gene blaKPC-2 é crescente no Brasil e no mundo pois, cepas produtoras de KPC são resistentes a maioria das classes de antimicrobianos. Desta maneira, as opções terapêuticas clinicamente disponíveis para o tratamento destas infecções são limitadas, resultando em altas taxas de mortalidade. A epidemiologia e o controle das infecções causadas por bactérias que disseminam genes de resistência aos carbapenêmicos podem ser favorecidas pela análise de genomas a partir do sequenciamento de nova geração. Assim, este trabalho utilizou essa e outras ferramentas para tentar elucidar alguns aspectos da virulência, produção de biofilmes, multirresistência e elementos genéticos móveis de cepas de Klebsiella pneumoniae produtoras de Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) no Brasil. Os resultados obtidos foram assustadores, uma vez que foi possível identificar um resistoma extremamente complexo em cepas de K. pneumoniae produtora de KPC pertencentes a clones de alto risco (CG258), também produtoras de biofilmes (90,9%), hipermucoviscosas e altamente virulentas, complicando ainda mais o tratamento clínico. Os resultados são ainda mais significativos considerando a descrição de uma nova variante do Tn4401 (Tn4401i) e de um plasmídeo IncX3 atípico (12.757 pb) em uma linhagem de alto risco de K. pneumoniae ST11/CG258, carreando o gene blaKPC-2 em um elemento genético não-Tn4401 (NTEKPC-Ic). Aspecto ainda mais negativo foi observar que essas linhagens apresentaram alta frequência (70%) de genes blaCTX-M coexistindo com o gene blaKPC-2. Os dados contribuem “a priori” com o entendimento de aspectos genéticos de adaptação, resistência e virulência de clones endêmicos produtores de KPC-2. Este estudo torna-se fundamental para que, em um futuro próximo, novas estratégias possam ser formuladas e implementadas a fim de controlar a expansão de K. pneumoniae produtoras de KPC-2 no Brasil. Concern with the rapid emergence and spread of the blaKPC-2 gene is increasing in Brazil and worldwide, as KPC-producing strains are resistant to most classes of antimicrobials. In this way, the clinically available therapeutic options for the treatment of these infections are limited, resulting in high mortality rates. The epidemiology and control of infections caused by bacteria that disseminate carbapenem resistance genes may be favored by genomic analysis from next-generation sequencing. Thus, this work has used this and other tool to try to elucidate some aspects of virulence, biofilm production, multiresistance and mobile genetic elements in Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC)-producing Klebsiella pneumoniae strains in Brazil. The results obtained were frightening, since it was possible to identify a very complex resistome in KPC-producing K. pneumoniae strains belonging to high-risk clones (CG258), also producing biofilms (90.9%), extremely hypermucoviscous and highly virulent, further complicating clinical treatment. The results are even more significant considering the description of a new variant of Tn4401 (Tn4401i) and an atypical IncX3 plasmid (12.757 bp) in a high-risk lineage of K. pneumoniae ST11/CG258, carrying the blaKPC-2 gene into an element non-Tn4401 (NTEKPC-Ic). Further negative aspect was observed that these lineages present high frequency (70%) of blaCTX-M genes coexisting with the gene blaKPC-2. The data contribute "a priori" to the understanding of genetic aspects of adaptation, resistance and virulence of endemic clones producing KPC-2. This study becomes essential so that soon, new strategies can be formulated and implemented to control the expansion of KPC-2-producing K. pneumoniae in Brazil. Tese (Doutorado)

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: As infecções de corrente sanguínea (ICS) hospitalares são responsáveis por frequências significativas de morbidade e mortalidade em Unidades de Terapia Intensiva Neonatal (UTIN), resultando em hospitalização prolongada e aumento nos custos hospitalares, principalmente em neonatos de baixo peso. Objetivos: O presente estudo propôs determinar a patogênese de infecções de corrente sanguínea relacionada ao cateter (ICS-RC) causadas por Staphylococcus epidermidis utilizando a técnica de PFGE (“Pulsed Field Gel Electrophoresis”) bem como avaliar os fatores de risco para mortalidade entre os neonatos com pesos ≤ 1500 gramas e >1500 gramas. Adicionalmente, foram determinados os fatores de risco para desenvolvimento de ICS causadas por S. epidermidis utilizando estudo caso x controles pareados. Material e métodos: O estudo incluiu neonatos da UTI do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia durante o período de Outubro de 2010 a agosto de 2012. Para o estudo da patogênese foram utilizadas amostras de S. epidermidis recuperadas do sangue, pele no sítio de inserção, canhão do cateter, assim como das mucosas da narina e intestino, a partir de 48 horas até 14 dias da utilização do Cateter ou até obtenção de cultura positiva para S. epidermidis e da ponta do cateter obtidas após sua remoção. Foi verificado a presença dos genes mecA e o ACME (Arginine Catabolic Mobile Element) por reação em cadeia da polimerase (PCR), em S. epidermidis. Resultados: No total, 125 neonatos desenvolveram ICS (27,0%), com 98 (78,4%) definidos como de natureza hospitalar, totalizando 124 episódios. A sepse precoce acometeu 20% dos neonatos com ICS com 48% de mortalidade, principalmente entre os neonatos com peso ≤ 1500 gramas. A presença de ventilação mecânica e sepse clínica foram os fatores associados com mortalidade entre os neonatos de maior peso. No estudo caso x controle pareados, todas as variáveis analisadas [Tempo de hospitalização (P 1500 grams. Methods: The study included neonates from the ICU of Hospital de Federal University of Uberlândia during the period from October 2010 to August 2012. For the study of the pathogenesis, were used samples of S. epidermidis recovered from blood, skin at the insertion site, hub, as well as the mucosa of the nostril and gut, from 48 hours to 14 days after the use of the Catheter or until obtaining a positive culture for S. epidermidis and catheter tip obtained after removal. In addition, were determined the risk factors for the development of BSI caused by S. epidermidis using case study x paired control. In addition to verifying the presence of mecA genes and ACME (Arginine Catabolic Mobile Element) by polymerase chain reaction (PCR), in S.epidermidis. Results: In total, 125 neonates developed BSI (27.0%), with 98 (78.4%) defined as hospital-type, totaling 124 episodes. Sepsis preterm affected 20% of newborns with BSI with 48% mortality, mainly in neonates weighing ≤ 1500 grams. The presence of mechanical ventilation and clinical sepsis were the factors associated with mortality among the heaviest neonates. In the case study x paired control, all variables analyzed [Hospitalization time (P

Introdução: As infecções relacionadas à assistência à saúde (IRAS) bem como o elevado uso de antibióticos representam um desafio à saúde pública, principalmente em países com poucos recursos como o Brasil, que abrigam desigualdades sociais e variações importantes na complexidade dos cuidados de saúde e desenvolvimento regional. Objetivos: Fornecer dados quanto às diferenças na prevalência e distribuição anatômica das IRAS, sua etiologia, perfil de resistência e uso de antimicrobianos em pacientes internados em Unidades de Terapia Intensiva (UTIs) de Adultos em hospitais de diferentes portes das regiões de planejamento de Minas Gerais, utilizando pesquisa de prevalência pontual. Métodos: Em 2016, foi realizado inquérito de prevalência pontual em 35 UTIs de Adultos, sendo 28 UTIs clínico-cirúrgicas e sete UTIs coronarianas, em hospitais das 10 regiões de planejamento do Estado de Minas Gerais (Alto Paranaíba; Central; Centro-Oeste de Minas; Jequitinhonha/Mucuri; Mata; Noroeste de Minas; Norte de Minas; Rio Doce; Sul de Minas e Triângulo), localizadas na região Sudeste do Brasil. Os hospitais foram classificados como hospitais universitários ou não universitários e hospitais com ≤ 200 leitos, 201-400 leitos e > 400 leitos. Todos os pacientes internados nas UTIs foram incluídos no estudo no momento da pesquisa. Resultados: Foram incluídos 303 pacientes internados nas UTIs de Adultos clínico-cirúrgicas, dos quais 155 (51,2%) estavam infectados e 123 pacientes apresentavam pelo menos uma infecção adquirida na UTI (79,4%). As infecções mais frequentemente adquiridas nas UTIs foram pneumonia (53,0%) e infecção da corrente sanguínea (27,6%). No total, 119 amostras bacterianas foram observadas como causa de IRAS, com maior frequência de Acinetobacter baumannii (27,0%), Pseudomonas aeruginosa (27,0%) e Staphylococcus aureus (39,1%). A Pseudomonas aeruginosa (30,4%) foi o principal agente de pneumonia, Staphylococcus coagulase-negativo (23,4%) e micro-organismos da família Enterobacteriaceae (23,4%) foram o das infecções da corrente sanguínea, enquanto nas infecções do trato urinário os patógenos mais comuns foram Enterobacteriaceae (47,6%) e Candida spp. (38,1%). Nas UTIs de Adultos coronarianas foram avaliados 71 pacientes e a prevalência de IRAS foi de 22,5% (16/71) e aquelas adquiridas na UTI foi de 68,8% (11/16). As infecções mais frequentes nestas unidades também foram pneumonia (34,8%), seguida de infecção da corrente sanguínea (30,4%). Entre os 374 pacientes hospitalizados, 232 (62,0%) receberam pelo menos um antimicrobiano, a maioria sem a existência de cultura microbiológica, com frequência mais alta nos hospitais não universitários. Os resultados detectaram ainda um alto consumo de antibióticos de amplo espectro, principalmente de cefalosporinas, mais frequentes em hospitais não universitários (64,4%) e de polimixinas, mais frequente em hospitais universitários (65,0%). Conclusões: Este estudo multicêntrico revelou uma prevalência de infecções adquiridas em UTIs muito alta, quando comparado com a de UTIs na maioria dos países europeus e EUA. De modo geral, estas infecções são causadas principalmente por bactérias Gram-negativas associadas à pneumonia. Também foi observado uso de antimicrobianos na maioria dos pacientes, com prescrição empírica, destacando-se os de largo espectro, bem como de polimixinas, contribuindo, assim, como também justificando, para a frequência significativa de maior resistência/multirresistência nestas unidades. Nossos dados identificam a necessidade urgente de que as IRAS bem como o uso de antibióticos sejam uma prioridade na agenda de saúde pública do Brasil e que sejam introduzidos programas de vigilância, prevenção e controle no sentido de direcionar os indicadores epidemiológicos de morbidade, mortalidade e custos. Introduction: Healthcare-associated infections (HAIs) and high antibiotic use are a challenge to public health, especially in countries with few resources such as Brazil, where there are social inequalities and important variations in the complexity of health care and regional development. Objectives: To provide data on the differences in the prevalence and anatomical distribution of HAIs, their etiology, resistance profile and antimicrobial use in patients hospitalized in Adults Intensive Care Units (ICUs) at hospitals of different sizes in the planning regions of Minas Gerais, Brazil, using a point prevalence survey. Methods: In 2016, a one-day point prevalence survey was carried out on 35 Adults ICUs, including 28 clinical-surgical ICUs and seven coronary ICUs at hospitals in the 10 planning regions of the state of Minas Gerais (Alto Paranaíba, Central, Centro-Oeste de Minas, Jequitinhonha/Mucuri, Mata, Noroeste de Minas, Norte de Minas, Rio Doce, Sul de Minas and Triângulo), located in the Southeast region of Brazil. Hospitals were classified as university or non-university hospitals and hospitals with ≤ 200 beds, 201-400 beds and > 400 beds. All patients admitted to the ICUs during the period of the research were included in the study. Results: A total of 303 patients admitted to clinical-surgical ICUs were included, of which 155 (51.2%) were infected and 123 patients had acquired at least one infection in the ICU (79.4%). The infections most frequently acquired in the ICUs were pneumonia (53.0%) and bloodstream infection (27.6%). In total, 119 bacterial samples were observed as the HAIs' cause, with a higher frequency of Acinetobacter baumannii (27.0%), Pseudomonas aeruginosa (27.0%) and Staphylococcus aureus (39.1%). Pseudomonas aeruginosa (30.4%) was the main pneumonia agent; coagulase-negative Staphylococcus (23.4%) and micro-organisms of the Enterobacteriaceae family (23.4%) were responsible for bloodstream infections, whereas the most common pathogens in urinary tract infections were Enterobacteriaceae (47.6%) and Candida spp. (38.1%). In the coronary Adults ICUs, 71 patients were evaluated, and the prevalence of HAIs was 22.5% (16/71), and those acquired in the ICU were 68.8% (11/16). The most frequent infections in these units were also pneumonia (34.8%), followed by bloodstream infection (30.4%). Among the 374 hospitalized patients, 232 (62.0%) received at least one antimicrobial, most without microbiological culture, with a higher frequency in non-university hospitals. The results also detected a high consumption of broad-spectrum antibiotics, mainly cephalosporins, more frequent in non-university hospitals (64.4%), and polymyxins, more frequent in university hospitals (65.0%). Conclusions: This multi centric study revealed a very high prevalence of infections acquired in ICUs, when comparing Brazilian ICUs to ICUs in most European countries and in the US. In general, these infections are mainly caused by Gram-negative bacteria associated with pneumonia. Antimicrobial use was also observed in most of the patients, with empirical prescription and with an emphasis on the ones with broad-spectrum. The polymyxins use was also observed, thus contributing, as well as justifying, the significant frequency of higher resistance/multi-resistance in these units. Our data identify the urgent need for Brazil's public health agenda to prioritize HAIs as well as the use of antibiotics. They also identify the need to introduce surveillance, prevention and control programs to target epidemiological indicators of morbidity, mortality, and costs. Tese (Doutorado)

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: As infecções de corrente sanguínea (ICS) em pacientes de Unidades de Terapia Intensiva (UTI) representam um desafio em hospitais de países em desenvolvimento, como o Brasil, principalmente pela participação expressiva de bactérias resistentes aos antimicrobianos. Objetivos: Analisar os indicadores de incidência de Infecções Relacionadas á Assisitência á Saúde-IRAS e ICS, sua etiologia, fenótipos resistentes aos antimicrobianos, fatores de risco, evolução e custos. Metodologia: Realizou-se revisão dos casos de IRAS e sepse, com bacteremia, em pacientes internados na UTI mista de Adultos, do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, no período de 2012-2014, através de busca ativa no Serviço de Controle de Infecção Hospitalar. Analisamos 254 pacientes em estudo de coorte retrospectivo, quanto aos fatores associados à mortalidade hospitalar e, um segundo estudo, caso 1 (pacientes com infecção por amostras resistentes) vs controles sem infecção; caso 2 (pacientes com infecção por amostras susceptíveis) vs controles sem infecção para analisar os fatores de risco e o tempo de internação na unidade (total e após o diagnóstico de infecção). A análise estatística uni e multivariada foi realizada em relação ao segundo modelo. Adicionalmente, os custos destas infecções foram calculados considerando-se o tempo (dias) extras de internação X a diária (US$, julho de 2017), utilizando-se valores disponíveis relativos aos hospitais do Brasil e dos EUA. Resultados: A porcentagem de pacientes infectados e de episódios de IRAS foram de 55,1% e 91,2%, respectivamente; e a de mortalidade total hospitalar foi 26,4%. No total de IRAs a proporção de ICS foi de 33,4% e o principal agente foi o Staphylococcus coagulase-negativa (SCoN 45,2%). OS BGNs responderam por 35,6% dos casos, com predomínio dos não fermentadores (42,8%). Verificamos elevada frequência de bactérias resistentes aos antimicrobianos, destacando-se Staphylococcus resistente a oxacilina (68,8 %), Bacilos Gram-negativos (BGNs) não fermentadores resistentes aos carbapenêmicos (46,9 %) e membros da família Enterobacteriaceae resistentes a cefalosporinas de amplo aspecto (50,3%). O estudo de coorte envolvendo 254 pacientes evidenciou mortalidade estatisticamente significativa em pacientes graves, (ASIS ≥ 4) e mais frequente quando de infecções por Bacilos Gram-negativos (BGNs), etiologia mista, patógenos resistentes e quando submetidos a terapêutica inapropriada. O segundo modelo evidenciou preditores comuns aos dois grupos de pacientes, trauma e mau prognóstico (morte). O tempo de internação extra de pacientes com ICS foi de 6,0 dias, sem diferença entre aqueles infectados por amostras resistentes ou susceptíveis. O custo financeiro total dos pacientes com IRAS foi de US$ 1,485.20 enquanto daqueles com ICS foi de US$ 2,782.40 (US$, valores de julho, 2017), valores definidos pelo Ministério da Saúde do Brasil. Conclusão: A investigação evidenciou alta frequência de ICS em pacientes da UTI-A do hospital, com indicadores epidemiológicos elevados em relação as infecções, agravados pela presença de bactérias resistentes. O traumatismo como preditor de ICS reflete a situação atual das UTIs dos hospitais nas grandes cidades do país. A implantação de práticas de prevenção e controle efetivos e o uso judicioso de antimicrobianos deve ser prioridade na agenda de saúde pública de países em desenvolvimento, considerando-se as taxas de morbidade, mortalidade e os custos evidenciados em nosso trabalho. Introduction: Bloodstream infections (BI) in the Intensive Care Unit (ICU) patients represent a challenge in developing countries’ hospitals, such as Brazil, mainly because of the significant participation of antimicrobials resistant bacteria.Objectives:To analyze the incidence indicators of Infections Related to Health Care (HCAI) and ICS, their etiology, antimicrobials resistant phenotypes, risk factors, evolution and costs. Methods: A review of IRAS and sepsis cases with bacteraemia, in patients hospitalized at an adults mixed ICU at Hospital de Clínicasa t Universidade Federal de Uberlândia, was performed, from 2012 to 2014, through an active search at the Hospital Infection Control Service.We analysed 254 patients in retrospective cohort study, regarding the factors related to the hospital mortality and, a second study, case 1 (patients with infection by resistant samples) vs controls without infection; case 2 (patients with susceptible sample infection) vs controls without infection to analyze risk factors and length of hospital stay in the unit (total period and the period after the infection diagnosis). An univariate and multivariate statistical analysis was performed in relation to the second model. Additionally, these infections costs were calculated considering the extra hospitalization time (days) X the daily rate (US$;July, 2017), using the rates related to Brazil and the USA hospitals. Results: The incidence rates of infected patients and HCAI episodes were 55.1% and 91.2%, respectively; and the rate of total hospital mortality was 26.4%. Of the total of IRAs the proportion of ICS was 33.4% and the principal agent was the Coagulase-negative Staphylococcus (SCoN) 45.2%. The Gram-negative bacillus (BGNs) were responsible for 35.6% of the cases, with non-fermenting predominance (42.8%). We noticed a high frequency of microbials resistant bacteria, most notably Staphylococcus oxacillin resistant (68.8%), non-fermenting GNBs resistant to carbapenems (46.9 %) and members of the family Enterobacteriaceae resistant to broad spectrum cephalosporins (50.3%). The cohort study involving 254 patients, evidenced statistically significant mortality in critically ill patients, (ASIS ≥ 4) and more frequent when infected by gram-negative bacillus (GNBs), mixed etiology, resistant pathogens and when submitted to inappropriate treatment. The second model evidenced common predictors to both patient groups, trauma and bad prognosis (death). The extra hospitalization time of patients with ICS was 6.0 days, with no difference between those infected by resistant or susceptible samples. The total financial cost of the patients with IRAS was US$1,485.20 while on those with ICS was US$2,782.40 (US$; rates from July, 2017); the rates were defined by the Brazilian Department of Health.Conclusion:The investigation evidenced a high frequency of ICS in patients of the hospital AICU, with high epidemiological indicators in relation to the infections, aggravated by the resistant bacteria presence.The trauma as ICS predictor reflects the current situation of the hospitals ICUs in the country big cities.The implementation of effective prevention and control practices and the judicious use of antimicrobials must be the priority in the public health agenda of developing countries, considering the morbidity and mortality rates, as well as the costs evidenced in the present study. Dissertação (Mestrado)

A emergência de infecções associadas a novos genótipos de Acinetobacter baumannii resistente aos antimicrobianos reflete um desafio de grandes proporções. Assim, a detecção e o conhecimento de suas características, tanto epidemiológicas quanto moleculares, é de fundamental importância para o desenvolvimento de estratégias de tratamento, prevenção e controle. Este trabalho teve como objetivos determinar a diversidade de mecanismos de resistência, avaliar a produção de biofilme através de técnicas fenotípicas e microscopia eletrônica de varredura (MEV) e investigar a disseminação clonal e os Sequence Types (STs) predominantes em amostras multirresistentes de A. baumannii de origem clínica (aspirado traqueal, n=17) e ambiental (superfície, n=6), isoladas na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) de Adultos do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU). Adicionalmente, uma amostra clínica (clone A) e uma ambiental (clone H) tiveram seu genoma completo sequenciado com análise parcial de seus resistomas. Todas as amostras foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção dos genes ISAba/ e sua associação ou não com as oxacilinases (OXA-51 e OXA-23), genes das proteínas de membrana externa (PME) carO e pme33-36 e genes que codificam a expressão das bombas de efluxo AdeABC (adeB), AdeFGH (adeG) e AdeIJK (adeJ). A confirmação da resistência à tigeciclina e aos carbapenêmicos foi feita pelo método do Etest®. A maioria das amostras foi caracterizada como extensivamente resistente (XDR) com concentrações inibitórias mínimas (CIMs) muito elevadas para tigeciclina e carbapenêmicos. A associação ISAba//OXA-51, ISAba//OXA-23 e a presença de carO e pme33-36 foram observadas em 91,3%, 52,2%, 82,6% e 100% das amostras, respectivamente. Quanto aos genes adeB, adeG e adeJ, sua presença foi constatada em todas as amostras analisadas. Avaliou-se também o consumo de Imipenem, Meropenem, Tigeciclina e Polimixina B/Colistina (DDD/1000 pacientes-dia), no período de janeiro de 2011 a dezembro de 2012. Observaram-se variações no consumo desses antimicrobianos, durante o período investigado. De acordo com os perfis clonais obtidos através da técnica de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) foram selecionadas dez amostras de A. baumannii para as análises por PCR em tempo real (qPCR), análise fenotípica da produção de biofilme e Multilocus Sequence Typing (MLST). Após avaliação por qPCR, somente o gene adeB foi considerado hiperexpresso. Os resultados do MLST demonstraram disseminação policlonal, identificando oito STs e cinco complexos clonais (CCs), com predominância dos CCs 113, 229 e 109. Todas as amostras de A. baumannii avaliadas aderiram à superfície de poliestireno não modificada e produziram biofilme, sem diferença significativa entre isolados clínicos e ambientais. As imagens de MEV confirmaram a capacidade de adesão e a presença de matriz extracelular visível. Nosso estudo encontrou uma ampla variedade de complexos clonais relacionados com A. baumannii XDR carreando o gene blaOXA-23 frequentemente associado com ISAba/ (Tn2008) como o principal mecanismo de resistência aos carbapenêmicos, além da hiperexpressão da bomba de efluxo AdeABC. A compreensão dos mecanismos de resistência e do potencial patogênico deste microorganismo ajuda a explicar sua persistência no ambiente hospitalar e pode fornecer ferramentas para melhorar o tratamento de infecções graves, assim como para aprimorar as medidas de controle e prevenção dessas infecções. The emergence of infections associated with new antimicrobial-resistant Acinetobacter baumannii genotypes represents a major challenge. Thus, the detection and knowledge of its epidemiological and molecular characteristics have fundamental importance for the development of treatment, prevention, and control strategies. This study aimed to determinate the diversity of resistance mechanisms, to evaluate the biofilm production through phenotypic techniques and scanning electron microscopy (SEM), and to investigate the clonal dissemination and the predominant Sequence Types (STs) in multiresistant strains of A. baumannii from clinical (tracheal aspirate, n=17) and environmental (surface, n=6) origin, isolated at the Adult Intensive Care Unit (ICU) of the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia (HC-UFU). Additionally, one clinical (clone A) and one environmental (clone H) strain had their complete genome sequenced with partial analysis of their resistomes. All strains were submitted to polymerase chain reaction (PCR) for the detection of ISAba/ genes and their association or not with oxacillinases (OXA-51 and OXA-23), genes of outer membrane proteins (OMPs) carO and pme33-36, and genes encoding AdeABC (adeB), AdeFGH (adeG) and AdeIJK (adeJ) efflux pumps. Confirmation of tigecycline and carbapenem resistance was done by the Etest®. Most of the strains were characterized as extensively drug-resistant (XDR) with very high minimal inhibitory concentrations (MICs) for tigecycline and carbapenems. The association of ISAba//OXA-51, ISAba//OXA-23 and the presences of carO and pme 33-36 were observed in 91.3%, 52.2%, 82.6% and 100% of the strains, respectively. The genes adeB, adeG and adeJ were observed in all strains analyzed. The consumption of Imipenem, Meropenem, Tigecycline and Polymyxin B/Colistin (DDD/1000 patients-day) was also evaluated in the period from January 2011 to December 2012. Changes in the consumption of these antimicrobials were observed during the period investigated. According to clonal profiles obtained by the Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) technique, ten A. baumannii strains were selected for analysis by real-time PCR (qPCR), phenotypic analysis of biofilm production and Multilocus Sequence Typing (MLST). Only adeB gene was considered hyper-expressed. MLST results demonstrated polyclonal dissemination, identifying eight STs and five clonal complexes (CCs), with predominance of CCs 113, 229 and 109. All A. baumannii evaluated strains adhered to the unmodified polystyrene surface and produced biofilm, with no significant difference between clinical and environmental isolates. SEM images confirmed the ability of adhesion and the presence of a visible extracellular matrix. Our study found a wide variety of clonal complexes related to XDR A. baumannii carrying the b/aOXA_23 gene frequently associated with ISAba/ (Tn2008) as the main mechanism of carbapenems resistance, in addition to the over expression of the AdeABC efflux pump. The understanding of the mechanisms of resistance and the pathogenic potential of this microorganism helps to explain its persistence in the hospital environment and can provide tools to improve the treatment of serious infections, as well as, the measures of control and prevention of these infections. Tese (Doutorado)

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Klebsiella pneumoniae é um agente etiológico frequente em infecções relacionadas à assistência à saúde no Brasil e possui uma grande capacidade de desenvolver ou adquirir resistência aos antimicrobianos. Este estudo investigou a disseminação clonal e os tipos de sequência (STs) predominantes em amostras clínicas de K. pneumoniae apresentando genes blaCTX-M e blaKPC, bem como a presença de genes para fatores de virulência e a capacidade de produção de biofilmes. Adicionalmente, também foi examinado o impacto das resistências aos carbapenêmicos e polimixina no fitness bacteriano de K. pneumoniae produtoras de carbapenemase (KPC). Para as avaliações epidemiológicas foram selecionadas randomicamente 60 amostras não-duplicadas de K. pneumoniae, sendo 30 amostras de infecção K. pneumoniae sensível aos carbapenêmicos (KpSC), 20 infecções e 10 colonizações por K. pneumoniae resistente aos carbapenêmicos (KpRC). As amostras foram selecionadas a partir de uma coleção recuperada de pacientes internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia (HC-UFU) no período de junho de 2009 a julho de 2015. Para investigação dos genes de resistência blaCTX-M e blaKPC e genes de virulência fimH, fimA, wabG, iucC, rmpA, ecpA, mrkD e khe, as amostras foram avaliadas por reação em cadeia da polimerase (PCR). A confirmação de blaKPC-2 foi realizada por sequenciamento genético. Os pulsotipos, STs e complexos clonais foram determinados por Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) e Multilocus Sequence Typing (MLST). A adesão inicial e a formação de biofilme foram examinadas por ensaios quantitativos, e os resultados confirmados por microscopia eletrônica de varredura. Para avaliação do fitness foram utilizados experimentos de competição em pares, in vitro, utilizando três amostras de K. pneumoniae: uma resistente aos carbapenêmicos, contendo 5 dos 8 genes de virulência avaliados, uma resistente aos carbapenêmicos e polimixina, menos virulenta, e a amostra ATCC 10031 multissensível. Diferenças importantes foram encontradas na caracterização dos grupos KpSC e KpRC, destacando-se o elevado uso prévio de β-lactâmicos (53%), carbapenêmicos (73,3%) e polimixina B (43,3%) naqueles infectados por amostras resistentes. A terapia inadequada embora tenha sido prevalente em 56,7% dos casos, foi bem maior (70%) entre pacientes com infecções por KpRC. No total, 75% das amostras foram caracterizadas como multirresistentes. Além disso, foi observado alto consumo em DDD de cefepime, ceftriaxona e carbapenêmicos, com tendência ascendente entre o início e o final do período estudado. Em relação à presença de genes de resistência, 80% das amostras apresentaram o gene blaCTX-M e 100% das amostras com resistência aos carbapenêmicos possuíam o gene blaKPC. Os genes de virulência foram detectados com frequências elevadas em ambos os grupos, sem relação com a resistência aos carbapenêmicos. Entretanto, entre as amostras de KpRC, os genes fimH, fimA e wabG foram predominantes (83%). Observou-se disseminação policlonal das amostras com predominância dos STs 11 e 340, pertencentes ao complexo clonal 258. Todas as amostras de K. pneumoniae avaliadas foram capazes de aderir a uma superfície de poliestireno não modificada. No entanto, a análise estatística evidenciou que três amostras apresentaram taxas de adesão notavelmente mais altas do que as demais (p

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introdução: A produção de carbapenemases do tipo KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase) tem se tornado importante mecanismo de resistência aos carbapenêmicos entre os microrganismos da família Enterobacteriaceae. No Brasil, a enzima KPC já se encontra disseminada e sua incidência tem aumentado significativamente, diminuindo as opções de tratamento. A combinação perversa da redução do desenvolvimento de novos antibióticos, somado a emergência de cepas multirresistentes resultou na necessidade da utilização de drogas antigas, com maior toxicidade, como as polimixinas. Objetivos: Determinar a ocorrência de amostras produtoras de carbapenemases em representantes da família Enterobacteriaceae resistentes aos carbapenêmicos, isoladas de pacientes com infecção/colonização de natureza hospitalar, durante setembro de 2014 a agosto de 2015, além de determinar os fatores de risco associados a mortalidade e o impacto da terapia inapropriada. Material e métodos: Foi realizado estudo de coorte prospectiva com a avalição dos fatores de risco para mortalidade em 30 dias, considerando o primeiro episódio de infecção em 111 pacientes. Os genes de resistência blaKPC, blaIMP, blaVIM e blaNDM-1 foram detectados pela técnica de reação em cadeia da polimerase. A tipagem molecular das amostras foi realizada pela técnica eletroforese em campo pulsado. A resistência à colistina foi confirmada pelo método de microdiluição em caldo. Resultados: No total, 188 episódios de infecção/colonização por Enterobacteriaceae resistentes aos carbapenêmicos foram detectados, com 122 amostras recuperadas a partir do laboratório do hospital e, na maioria delas (74,59%), a presença do gene blaKPC foi confirmada. Não foram encontrados os genes blaIMP, blaVIM e blaNDM-1. K. pneumoniae foi o microrganismo mais frequente (77,13%), responsável principalmente por infecções do trato urinário (21,38%) e infecções em pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) (61,38%). A análise estatística multivariada mostrou como preditores independentemente associados com a mortalidade: hemodiálise e infecção de corrente sanguínea. A curva de Kaplan-Meier evidenciou uma menor probabilidade de sobrevivência no grupo de pacientes que recebeu terapia antimicrobiana inapropriada. O consumo de antimicrobianos na UTI de adultos variou durante o período de estudo, entretanto nenhuma correlação positiva entre o aumento na incidência amostras e o consumo foi observada. Nos meses de maio e julho de 2015, a ocorrência de infecção/colonização por Enterobacteriaceae resistentes aos carbapenêmicos e produtoras do gene blaKPC por 1000 pacientes-dia, foram mais altas do que o limite estabelecido, confirmando dois surtos, o primeiro por amostras de K. pneumoniae produtoras de KPC e susceptíveis a colistina, com perfil policlonal e o segundo por um clone dominante de K. pneumoniae produtora de KPC e resistente a colistina (≥ 32 μg/mL). A transmissão cruzada entre os pacientes ficou clara pelas relações temporal e espacial observada no segundo surto, já que vários pacientes ocuparam o mesmo leito, evidenciando problemas na adesão à higiene de mãos por parte dos profissionais de saúde e a inadequação da desinfecção terminal do ambiente. O surto só foi contido após o fechamento da unidade para novas admissões. Conclusões: A investigação evidenciou, a princípio, uma endemicidade de amostras de K. pneumoniae produtoras de KPC na UTI de adultos, com evolução para uma situação epidêmica com expansão monoclonal quando do segundo surto, resultante de problemas de consumo muito alto de antibióticos (carbapenêmicos e polimixinas) e facilitada por falhas nas práticas de prevenção e controle na unidade. Introduction: The production of KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase) has become an important mechanism of carbapenem-resistance among Enterobacteriaceae strains. In Brazil, KPC is already widespread and its incidence has increased significantly, reducing treatment options. The “perfect storm” combination of the absence of new drug developmentand the emergence of multidrug-resistant strains resulted in the need for the use of older drugs, with greater toxicity, such as polymyxins. Aims: To determine the occurrence of carbapenemase-producing strains in carbapenem-resistant Enterobacteriaceae isolated from patients with nosocomial infection/colonization during September/2014 to August/2015, to determine the risk factors associated with 30-day- mortality and the impact of inappropriate therapy. Materials and Methods: We performed a case control study to assess the risk factors (comorbidities, invasive procedures and inappropriate antimicrobial therapy) associated with 30-day-mortality, considering the first episode of infection in 111 patients. The resistance genes blaKPC, blaIMP, blaVIM and blaNDM-1 were detected by polymerase chain reaction technique. Molecular typing of the strains involved in the outbreak was performed by pulsed field gel electrophoresis technique. The polymyxin resistance was confirmed by the microdilution broth method. Results: 188 episodes of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae infections/colonizations were detected; of these, 122 strains were recovered from the hospital laboratory. The presence of blaKPC gene were confirmed in the majority (74.59%) of these isolates. It was not found the presence of blaIMP , blaVIM and blaNDM-1 genes. K. pneumoniae was the most frequent microorganism (77,13%), primarily responsible for urinary tract infections (21,38%) and infections from patients of the Intensive Care Unit (ICU) (61,38%). Multivariate statistical analysis showed as predictors independently associated with mortality: dialysis and bloodstream infection. The Kaplan-Meier curve showed a lower probability of survival in the group of patients receiving antibiotic therapy inappropriately. Antimicrobial use in adult ICU varied during the study period, but positive correlation between increased incidence of strains and the consumption was not observed. In May and July 2015, the occurrence rates of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae KPC-producing per 1000 patient-days were higher than the control limit established, confirming two outbreaks, the first caused by colistin-susceptible KPC-producing K. pneumoniae isolates, with a polyclonal profile and the second by a dominant clone of colistin-resistant (≥ 32 μg/mL) KPC-producing K. pneumoniae. The cross transmission between patients became clear by the temporal and spatial relationships observed in the second outbreak, since some patients occupied the same bed, showing problems in hand hygiene adherence among healthcare workers and inadequate terminal disinfection of environment. The outbreak was contained when the ICU was closed to new admissions. Conclusions: The study showed an endemicity of K. pneumoniae KPC-producing in adult ICU, progressing to an epidemic monoclonal expansion, resulted by a very high antibiotic consumption of carbapenems and polymyxins and facilitated by failures in control measures the unit. Dissertação (Mestrado)

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais The study conducted was comprehensive, including classical epidemiology and molecular aspects of infections by P. aeruginosa, K. pneumoniae and E. coli resistant to fluoroquinolones and/or carbapenems. Molecular analysis included determining the profile clonal, identification of genes of interest by PCR-based assays and sequencing of target gene. Case-control study was conducted to evaluate the prognostic and the impact of inappropriate therapy in patients with bacteremia and VAP (ventilator-associated pneumonia), as well as for the determination of the risk factors by multiresistant (MDR) P. aeruginosa infections. We observed a high rate of MDR P. aeruginosa isolates (40.7%), being 51.0% independently associated with inappropriate antibiotic therapy. In patients with VAP, significant rates were related to inappropriate therapy, especially by MDR and resistant to fluoroquinolones isolates. Besides, bacteremia was detected in 66.9% of patients, and prolonged hospital stay was expressive in those resistant to fluoroquinolone. Plasmid-mediated quinolone resistance genes (PMQR), were detected in two (5.3%) nosocomial isolates of P. aeruginosa (qnrS1 and aac(6 )Ib-cr), while those of K. pneumoniae and E. coli, from community or nosocomial origin, the presence of this gene was higher (55.3%; qnrA, qnrB, qnrD, qnrS and aac(6 )Ib-cr). In addition, we could verify the presence of the aac(6 )-Ib7 variant, with significant frequency to those of P. aeruginosa. Independently of the presence of PMQR genes, the minimum inhibitory concentration (MIC50 and MIC90) for ciprofloxacin were high, as well as, a high frequency of MDR isolates, and among those of the Enterobacteriaceae family were mainly community-acquired infection s agents (55.0%) and urinary tract (72.9%). Most isolates (90%) showed class 1 integron, but there is the necessity of further investigation to determine its relationship with PMQR genes. There was detection of genes encoding metallo-β-lactamase in 21.9% of the P. aeruginosa isolates, predominantly blaSPM gene and a polyclonal profile. Moreover, there was not a prevalent clone associated with the presence of PMQR determinants. Our data show for the first time the presence of PMQR determinants in clinical isolates of P. aeruginosa in Brazil, with a higher frequency of patients with inappropriate therapy; and multidrug-resistant K. pneumoniae and E. coli isolates with plasmid-mediated quinolone resistance. Although studies of classical and molecular epidemiology in hospitals are very important in the country, it is necessary that the infection control practices result in reducing these infections based on this data, considering the additional burden of participation of MDR micro-organism and its importance in terms of morbidity, mortality and cost. O estudo realizado foi abrangente incluindo aspectos de epidemiologia clássica e molecular de infecções por Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli resistentes às fluoroquinolonas e/ou carbapenêmicos. A análise molecular incluiu a determinação do perfil clonal, identificação de genes de interesse através de ensaios baseados em PCR e sequenciamento de genes alvo. Um estudo caso-controle foi realizado para avaliar o prognóstico e o impacto da terapia inapropriada nos pacientes com bacteremia e PAV (Pneumonia associada à ventilação mecânica), bem como para a determinação dos fatores de risco associados às infecções por P. aeruginosa multirresistente (MDR). Observou-se frequência elevada de amostras de P. aeruginosa MDR (40,7%), sendo 51,0% dos isolados independentemente associados com terapia antimicrobiana inapropriada. Em pacientes com PAV, frequências significantes foram relacionadas à terapia inapropriada, principalmente quando por amostras MDR e resistentes às fluoroquinolonas. Além disso, bacteremia foi detectada em 66,9% dos pacientes, e o tempo de internação hospitalar foi mais prolongado quando as infecções foram por amostras resistentes às fluoroquinolonas. Determinantes de resistência às quinolonas mediada por plasmídeo (PMQR) foram detectados em duas (5,3%) amostras hospitalares de P. aeruginosa (qnrS1 e aac(6 )Ib-cr), enquanto que naqueles de K. pneumoniae e E. coli hospitalares ou comunitários a presença desse gene foi mais alta (55,3%; qnrA, qnrB, qnrD, qnrS e aac(6 )Ib-cr). Adicionalmente, foi possível verificar a presença da variante aac(6 )-Ib7, com frequência expressiva para aqueles de P. aeruginosa. Independentemente da presença de genes PMQR as concentrações inibitórias mínimas (CIM50 e CIM90) para ciprofloxacina foram elevadas, assim como uma alta frequência de amostras MDR, e aqueles da família Enterobacteriaceae foram principalmente agentes de infecções comunitárias (55,0%) e do trato urinário (72,9%). A maioria das amostras (90%) apresentou integron de classe 1, mas há necessidade de mais investigações para determinar sua relação com genes PMQR. Houve a detecção de genes que codificam metalo-β-lactamases em P. aeruginosa em 21,9% das amostras, com predominância de blaSPM, e de um perfil policlonal. Além disso, não houve um clone prevalente associado à presença dos determinantes PMQR. Os nossos dados revelam pela primeira vez a presença de determinantes PMQR em amostras clínicas de P. aeruginosa no Brasil, e uma frequência elevada de pacientes com terapia inapropriada; e, de amostras de K. pneumoniae e E. coli multirresistentes, com resistência às fluoroquinolonas mediada por genes plasmidiais. Embora os estudos de epidemiologia clássica e molecular nos hospitais sejam de grande importância no país, é necessário que práticas de controle de infecção resultem na redução destas infecções com base nos mesmos considerando a carga adicional representada pela participação de micro-organismo MDR, e sua importância em termos de morbidade, mortalidade e custos. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais UFU - Universidade Federal de Uberlândia Fluidos de corte (FC) são misturas complexas de produtos químicos utilizados na indústria metal-mecânica para refrigeração e lubrificação de diferentes tipos de processos de usinagem. O seu desempenho pode afetar diretamente a produtividade desses processos. Este estudo teve como principais objetivos determinar o microbioma dominante em fluidos de corte miscíveis em água; analisar quantitativa e qualitativamente esse bioma; determinar os parâmetros físico-químicos; avaliar a influência de biocidas na contaminação dos FCs; dentre outros. No total, foram analisadas microbiologicamente 114 amostras de nove diferentes FCs utilizados em três indústrias metal-mecânicas brasileiras todas não automotivas. O monitoramento microbiano de bactérias e fungos foi realizado por contagem de viáveis em meios específicos. A investigação da contaminação microbiana e de biodegradação dos FCs foi realizada através de monitoramentos, aleatório (três indústrias) e contínuo (duas indústrias). Adicionalmente, foram selecionados dois FCs para estudo de contaminação artificial “in vitro”, por 70 dias, utilizando-se como inóculo, microrganismos mais prevalentes. Foram coletadas informações e documentos relativos as práticas de higiene e limpeza das indústrias, assim como de agravos a saúde e absenteísmos. Observou-se uma contaminação microbiológica elevada nos FCs analisados, com um microbioma comum, constituído de bacilos Gram-negativos (75,0%), com a predominância de bactérias de metabolismo oxidativo (55,0%) do gênero Pseudomonas, associado com baixo risco da doença “pulmão do operador da máquina”. No monitoramento contínuo dos fluidos, o FC de base mineral contendo biocida, de uma das indústrias, manteve-se descontaminado por 16 meses. Os FCs biodegradados por 70 dias, em procedimento de contaminação artificial “in vitro” apresentaram diminuição significativa (P < 0,05), no desempenho lubri-refrigerante, comparados aos respectivos fluidos novos/não contaminados, em ensaio de esclerometria pendular. As práticas de higiene e limpeza do ambiente de trabalho, variaram nas três indústrias e foram aquém do ideal, com sujidade aparente, e, observando-se uma inexistência de documentos por escrito sobre estes dois aspectos. Por outro lado, os gestores relataram a não ocorrência de doença profissional e insignificância no absenteísmo de funcionários. Medidas como: a utilização de FCs com biocidas mais efetivos, que sejam submetidos ao monitoramento microbiológico rotineiro, para uma resposta precoce quando da contaminação, numa indústria com boas práticas de produção, são necessárias para evitar a contaminação, multiplicação e formação de biofilme, além de garantir uma usinagem produtiva. Introduction: Cutting fluids (CF) are complex mixtures of chemicals used in the metalworking industry for cooling and lubricating of different types of machining processes, and their performance can directly affect the productivity of these processes. Objectives: i.) determine the dominant biome in miscible cutting fluids in water; ii.) analyze quantitatively and qualitatively this biome, including for the presence of M. immunogenum; iii.) determining the physic-chemical parameters such as pH, and others such as temperature and concentration of the fluid during biodegradation; iv.) evaluate the influence of biocides in the contamination of CFs; v.) determine the lubrication and cooling performance of two CFs after artificial contamination "in vitro" in two moments of biodegradation: when it reaches 105 CFU / mL (lag growth phase) and after 70 days of artificial biodegradation "in vitro" (last growth phase ), compared with new cutting fluids / uncontaminated and dry environment; and, vi.) to evaluate aspects of fluid management, as the use of prevention practices of accidents / health of employees, of injuries resulting in absenteeism and hygiene and cleanliness. Methods: In total, 114 samples were analyzed microbiologically of FCs three metal-mechanical industries located in the Brazilian Southeast (2) and South (1), all non-automotive. The microbial monitoring of bacteria and fungi was performed by viable count by specific means. The investigation of microbial contamination and degradation of CFs containing (7) or not biocide (2) was performed by monitoring, random (three industries) and continuous (two industries). Additionally, in one industry two CFs were selected for a study artificial contamination "in vitro" for a period of 70 days using as the most prevalent microorganism’s inoculum when the ongoing monitoring this industry. The test pendulum rebound hammer was used to evaluate the influence of microbial contamination in the performance of the properties of FCs as well as possible effects on the quality of the machined parts. Information and documents relating hygiene practices and cleaning industries, as well as health and absenteeism grievances were collected. Results: there was a high microbiological contamination in CFs analyzed, usually above 106 CFU / mL, regardless of the investigated industry with a common microbial biome consisting of Gram-negative bacilli (75.0%), with the prevalence of bacteria oxidative metabolism (55.0%) with Pseudomonas sp. as main representative, associated with low risk of the disease "lung machine operator". In most situations evaluated when the random monitoring the presence of high densities of microorganisms in CFs was not affected by the presence of biocides, but most CFs containing biocide (77.7%), bioconcept (11.1%), bioconcept + biocide (11.1%) and only one without this condom (11.1%), showing mean counts of viable, respectively, 3.7 x 107 CFU / mL 2.0 x 105 CFU / mL, 3.6 x 107 CFU / mL and 5.8 x107 CFU / mL. Similar results were also observed when the continuous monitoring of fluids, except for the mineral base containing biocide, with no contamination by 16 months of observation. The lubrication and cooling performance of two CFs, a mineral-based and vegetable-based, was determined by the energy consumed during scratching, in two moments of artificial biodegradation "in vitro" of these CF, after reaching 105 CFU / mL and 70 days, being significantly higher (P

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Introduction: The spread of Pseudomonas aeruginosa variants associated with the emergence of carbapenem resistance genotypes, is of great concern worldwide. Objectives: Molecular epidemiological study of carbapenem resistance in isolates of P. aeruginosa from blood. Material and Methods: We conducted a prospective observational study through active surveillance in the HC-UFU Microbiology Laboratory for detection of patients with P. aeruginosa bacteremia, from May/2009 to December/2012. The mechanisms of resistance to carbapenems were studied based on phenotypic methods, including Synergy Test with Double Disk and Hodge Test, and genotypic to detection of carnapenemase genes, including MBL genes (blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM e blaSPM) and OXA genes (blaOXA-51, blaOXA-23, blaOXA-40 e blaOXA-58) by multiplex PCR and gene blaKPC by end point PCR. The qRT-PCR technique was conducted to determine the intrinsic resistance mechanisms: overproduction of AmpC, overexpression of efflux pumps (MexABOprM, MexXY, MexCDOprJ, MexEFOprN) and loss of OprD porin. The PFGE was used to molecular typing of isolates presenting MBL genes. Results: 157 patients admitted to the HC-UFU with P. aeruginosa bacteremia were included. A total of 162 episodes/isolated bacteremia were observed, with the adult ICU presenting the highest rates of isolates resistant to carbapenems. A high consumption of ceftriaxone, cefepime and meropenem was observed, with an increasing trend until the end of the study period, and no positive correlation with carbapenems resistant isolates, however we observed an outbreak of these isolates in December 2010, predominantly in adult ICU. The mortality rate was high (43.3%) and the multivariate analysis showed that the predictors independently associated with death were patients with cancer and with inappropriate antimicrobial therapy, particularly from cefepime use. Risk factors associated with antimicrobial resistance were: hospital stay ≥ 30 days, ICU admission, prior use of antibiotics, and presence of invasive procedures, including tracheostomy, hemodialysis and urinary catheter. The mortality rates were higher among patients with resistant isolates. The inappropriate antibiotic therapy was a strong marker of worse prognostic. The MBL production was conducted in 56 isolated, with positivity of 21.4% by the phenotypic test, of which 75.0% presented amplicon consistent with MBL genes, being 66.7% of blaSPM-1 type and 33.3% of blaVIM. Of the 47 non-MBL carbapenems resistant isolates, none had another type of carbapenemase, and 14 were included in the study of resistance mechanisms from qRT-PCR, with rates of AmpC overproduction and OprD porin loss of 71,4%, for both. The rates of MexABOprM and MexXY overexpression were 57,1% and 64.3%, respectively. The evaluation of the clonal relationship among isolates with MBL genes, showed high similarity of those isolates presenting blaSPM, which was not observed for those containing the blaVIM gene. Conclusions: Our results showed that inappropriate therapy is a significant worse prognosis factor among patients with bacteremia resistant P. aeruginosa. In the absence of effective carbapenemase, P. aeruginosa isolates presented association of other resistance mechanisms. Furthermore, this study showed a cross spread of blaSPM clone and the first report of blaVIM at HC-UFU. Introdução: A disseminação de variantes de Pseudomonas aeruginosa associada à emergência de genótipos de resistência aos carbapenêmicos, é de grande preocupação no mundo todo. Objetivos: Realizar estudo epidemiológico-molecular da resistência aos carbapenêmicos em isolados de P. aeruginosa recuperados de sangue. Material e Métodos: Para avaliação epidemiológica, foi realizado um estudo observacional prospectivo por meio de vigilância ativa no Laboratório de Microbiologia do HC-UFU para detecção de pacientes com bacteremia por P. aeruginosa, no período de maio/2009 a dezembro/2012. A pesquisa dos mecanismos de resistência aos carbapenêmicos baseou-se em métodos fenotípicos, teste de sinergismo com duplo disco e teste de Hodge, e genotípicos para detecção de carbapenemases, incluindos genes MBL (blaIMP, blaVIM, blaSIM, blaGIM e blaSPM) e genes OXA (blaOXA-51, blaOXA-23, blaOXA-40 e blaOXA-58) por PCR multiplex e gene blaKPC por PCR end point. A técnica do qRT-PCR foi utilizada para detecção dos mecanismos de resistência intrínsecos: hiperprodução de AmpC, hiperexpressão de bombas de efluxo (MexABOprM, MexXY, MexCDOprJ, MexEFOprN) e perda de porina OprD. Através do PFGE foi realizada a tipagem molecular dos isolados positivos para genes MBL. Resultados: 157 pacientes internados no HC-UFU com bacteremia por P. aeruginosa foram incluídos no estudo. No total, 162 episódios/isolados de bacteremia foram observados, sendo a UTI de adultos, a unidade hospitalar com maiores taxas de isolados resistentes aos carbapenêmicos. Foi observado um alto consumo de ceftriaxone, cefepime e meropenem, com tendência ascendente até o final do período de estudo, sem correlação positiva com isolados resistentes aos carbapenêmicos, entretanto foi observado um surto desses isolados em dezembro de 2010, predominantemente na UTI de adultos. A taxa de mortalidade entre os pacientes foi elevada (43,3%) e a análise multivariada mostrou que os preditores independentemente associados com óbito foram câncer e terapia antimicrobiana inapropriada, particularmente pelo uso de cefepime. Os fatores de risco associados com resistência aos antimicrobianos foram: tempo de hospitalização ≥ 30 dias, admissão na UTI, uso prévio de antimicrobianos, e presença de procedimentos invasivos, incluindo traqueostomia, hemodiálise e cateter urinário. Pacientes com bacteremia por isolados resistentes aos antimicrobianos tiveram maiores taxas de mortalidade hospitalar, com a terapia antimicrobiana inapropriada sendo um forte marcador de prognóstico ruím. A pesquisa de produção de MBL foi realizada em 56 isolados, com positividade de 21,4% pelo teste fenotípico, dos quais 75,0% tiveram amplicon consistente com genes pesquisados, sendo 66,7% do tipo blaSPM-1 e 33,3% blaVIM. Dos 47 isolados resistentes aos carbapenêmicos e não-MBL, nenhum apresentou outro tipo de carbapenemase. 14 isolados foram incluídos na pesquisa de mecanismos de resistência através da técnica de qRT-PCR, com taxas de positividade de 71,4% para hiperprodução de AmpC e perda de porina OprD, e de 57,1% e 64,3% para hiperexpressão de MexABOprM e MexXY, respectivamente. A avaliação da relação clonal entre isolados contendo os genes MBL, apresentou alta similaridade naquelas contendo blaSPM, o que não foi observado para aqueles contendo o gene blaVIM. Conclusões: Ficou evidenciado que a terapia inapropriada é fator significativo para pior prognóstico entre os pacientes com bacteremia por P. aeruginosa resistente. Na ausência de carbapenemase efetiva, isolados de P. aeruginosa apresentam frequentemente associação de outros mecanismos de resistência. Além disso, foi evidenciado uma disseminação cruzada do clone blaSPM e o primeiro relato de blaVIM no HC-UFU. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is one of the major human pathogens worldwide and its epidemiology has been the focus of numerous single and multicenter surveillance studies over the past years. In this study, a phenotypic and genotypic approach were used to determine the factors that influence adherence and biofilm production of the most common MRSA SCCmec types, and its relationship with antimicrobial resistance, virulence genes and the genetic background of S. aureus isolates. The strains used in this study were selected from a collection of clinical MRSA strains recovered from patients hospitalized in the Teaching Hospital of the Federal University of Uberlandia, isolated from infections at various anatomical sites and evaluated for SCCmec type. Fifteen strains carrying different chromosomal cassettes were selected, five SCCmec II, five SCCmec III and five SCCmec IV, recovered predominantly from blood (67%), surgical site infections (27%) and pneumonia (6.0%). The SCCmec type, agr group and the presence of the virulence genes (bbp, clfA, icaA, icaD, fnbB, bap, sasC and IS256) were assessed by PCR. The genetic relationship between the isolates and a possible association with the ability to form biofilm were investigated by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). The initial adhesion and biofilm formation were examined by quantitative assays. To evaluate the association between the hydrophobicity and the ability of MRSA cell to adhere to an unmodified polystyrene surface, the surface tension and hydrophobicity of the strains were measured by contact angle technique. There were association among the values of the electron acceptor parameter, the degree of hydrophobicity and adhesion ability. SCCmec III and IV strains were less hydrophilic, showed higher values of the electron acceptor parameter and adhered better than SCCmec II strains. The analysis of biofilm production showed that SCCmec III strains were characterized as strong biofilm producers; with the average biomass of biofilm from 0.53 ± 0.12 compared with 0.04 ± 0.04 those non-producers/weak producers (SCCmec II e IV). The analysis of this study showed five major pulsotypes according to the PFGE (A-E) with a large genomic diversity observed by the number of subtypes in each pulsotype. However, biofilm production was related to the dissemination of one specific PFGE clone (Clone C). The presence of the genes agrI, fnbB and IS256 in clinical MRSA SCCmec III strains, were considered as genetic risk markers for strong biofilm-formation by an icaindependent biofilm pathway. This study contributes for the understanding of biofilm production as a virulence factor potentially involved in the persistence and severity of infections caused by Staphylococcus aureus belonging to this genotype. Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) é um dos principais patógenos humanos em todo o mundo e sua epidemiologia tem sido foco de numerosos estudos de vigilância unicêntricos e multicêntricos ao longo dos últimos anos. Neste estudo utilizamos abordagens fenotípicas e genotípicas para determinar os fatores que influenciam a adesão inicial e produção de biofilme em cepas clínicas de MRSA carreando os tipos de cassete cromossômico estafilocócico (SCCmec) mais frequentes nos hospitais brasileiros, e sua relação com resistência, genes de virulência e perfil clonal. As cepas de MRSA utilizadas neste estudo foram selecionadas a partir de uma coleção de amostras clínicas recuperadas de pacientes internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, isoladas de infecções em diversos sítios anatômicos. Foram selecionadas para o estudo quinze cepas carreando diferentes cassetes cromossômicos, cinco SCCmec II, cinco SCCmec III e cinco SCCmec IV, recuperadas predominantemente de sangue (67%), sítio cirúrgico (27%) e pneumonia (6,0%). O tipo de SCCmec, o grupo agr e a presença de genes de virulência (bbp, clfA, icaA, icaD, fnbB, bap, sasC e IS256) foram avaliados por PCR. A relação genética entre as amostras e a possível associação com a capacidade de formação de biofilme foram investigadas por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). A adesão inicial e a capacidade de formação de biofilme foram examinadas por ensaios quantitativos. Adicionalmente, a associação entre a hidrofobicidade e a capacidade da célula de MRSA aderir a uma superfície de poliestireno não modificada, foi avaliada através da medida dos ângulos de contato. Houve associação entre o grau de hidrofobicidade e a capacidade de adesão. Cepas clínicas de MRSA carreando SCCmec III e IV foram menos hidrofílicas, apresentaram valores mais altos de tensão interfacial do componente aceptor de elétrons e aderiram melhor do que as cepas SCCmecII. As análises da produção de biofilme mostraram que cepas carreando SCCmec III foram caracterizadas como fortemente produtoras de biofilme, com a média da biomassa do biofilme de 0,53 ± 0,12 em comparação com 0,04 ± 0,04 daquelas nãoprodutoras/ fraco produtoras (SCCmec II e SCCmec IV). A tipagem molecular por PFGE evidenciou cinco pulsotipos (A-E) com uma grande diversidade clonal observada pelo número de subtipos em cada pulsotipo. Entretanto, a produção de biofilme esteve relacionada a disseminação de um clone específico (Clone C). Os genes agrI, fnbB e IS256 em cepas clínicas de MRSA carreando SCCmec III, foram considerados marcadores genéticos de risco para forte produção de biofilme por uma via independente de ica. Nosso estudo contribui para a compreensão da produção de biofilme como um fator de virulência, potencialmente envolvido na severidade e persistência de infecções causadas por S. aureus pertencentes a este genótipo. Doutor em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

P21 protein was recently characterized, being secreted by all developmental forms of the parasite and plays a role during the invasion of non- phagocytic cells by metacyclic trypomastigotes and extracellular amastigotes. P21 can induce the polymerization of the actin cytoskeleton of the host cell. In addition, P21 has the ability to enhance the phagocytic capacity of macrophages by a mechanism dependent protein binding to the chemokine receptor CXCR4. Studies of genotype and phenotype of T. cruzi showed that this species is represented by a very heterogeneous population This diversity is related to their drug susceptibility, virulence, antigenicity, and variations in their molecular karyotype. In 2005 was completed the sequencing of clone CL Brener genome. In 2009, the genome was organized in 41 homologous pairs, with size between 78kb and 2.3 Mb, provisionally called chromosomes or TcChr. T. cruzi, in general, has a plastic genome size. Its chromosome may vary among different strains of the parasite, with bands of 450 kb to 3 Mb. Studies suggested the occurrence of rearrangements during the development of this parasite. The possibility for such rearrangements is the occurrence of several repeated regions of DNA of this parasite or the final chromosomal structure of its chromosomes, such as telomeric or subtelomeric regions. In the present study, we found that isolates of group Tc VI, Tc II and Tc I ( CL Brener , CL , Y and G ) kept its sequence syntenic, but with a region of rearrangements, but when observed its isolated location in group TcV ( strain 115), we verified that not only had cromossome 22 size reduction as well as its size corrected forming equal chromosomes. The present study showed that even clonal reproduction occurring in T. cruzi, it could not prevent variations ion its genome. These variations may promote gain or loss of genomic content. Thus, we can conclude that: P21 protein is unique to T. cruzi and it can be considered species-specific, so it could be used as a molecular marker for T. cruzi taxon. Genomic environment of P21 denoted an important and heterogeneous environment. The chromosome where P21 is located undergoes rearrangements as observed to the studied strains. A proteína P21 foi recentemente caracterizada, sendo secretada por todas as formas evolutivas do parasita e desempenha papel durante a invasão de células não fagocíticas por tripomastigotas metacíclicas e amastigotas extracelulares. A P21 pode induzir a polimerização do citoesqueleto de actina da célula hospedeira. Além disso, a P21 tem a capacidade de aumentar a capacidade fagocítica de macrófagos por um mecanismo dependente da ligação da proteína ao receptor de quimiocinas CXCR4. Estudos feitos com o genótipo e o fenótipo de T. cruzi mostraram que esta espécie é representada por uma população muito heterogênea. Essa diversidade está relacionada com sua suscetibilidade a drogas, virulência, antigenicidade e variações em seu cariótipo molecular. Em 2005 foi finalizado o sequenciamento do genoma do clone CL Brener. Suas sequências, em 2009, foram organizadas em 41 pares homólogos, com tamanho entre 78kb e 2.3 Mb, provisoriamente chamado de cromossomos ou TcChr. T. cruzi, em geral, possui um genoma plástico com o tamanho do seu cromossomo podendo variar entre as diferentes cepas do parasita, apresentando bandas cromossômicas de 450 kb a 3 Mb. Estudos sugerem a ocorrência de grandes rearranjos cromossômicos durante a evolução deste parasita. A hipótese para tais rearranjos é a ocorrência de várias regiões repetitivas no DNA desse parasita ou ainda a estrutura cromossômica final de seus cromossomos, como as regiões teloméricas ou subteloméricas. No presente estudo, vimos que nos isolados do grupo Tc VI, Tc II e Tc I (CL Brener e CL, Y e G) a sua sequência se mantem sintênica, mas com uma região de rearranjos, porém quando observado a sua localização no isolado do grupo Tc V (Cepa 115), vimos que o cromossomo22 não somente teve redução de tamanho como também o seu tamanho corrigido formando cromossomos iguais. O presente trabalho mostrou que mesmo ocorrendo reprodução clonal no T. cruzi, isso não impede que haja variações em seu genoma. Essas variações podem promover ganho ou perda de conteúdo genômico. Assim podemos concluir que: A proteína P21 é exclusiva de T. cruzi, e ela pode ser considerada espécie-específica, portanto, poderia ser utilizada como marcador molecular para o taxon T. cruzi. O ambiente genômico da P21 denota um ambiente muito heterogêneo, porém importante no percurso evolutivo do parasita, pois há a localização de genes de proteinas importantes para a vida do mesmo. O cromossomo em que a sequência da P21 está localizada sofre rearranjos cromossômicos de acordo com as cepas estudadas. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior In machining processes the main functions of cutting fluids (FC) are cooling and lubrication of the tribological system comprised of the workpiece, the chip and the cutting tool. When adequately chosen and correctly applyed they may raise tool lives, reduce machining forces and improve the surface finishing of the workpiece. However, during their use, research has demonstrated that water based cutting fluids (emulsions and solutions) become suceptible to microbiological contamination (by bacterias) that uses nutrients encountered in their composition to grow and reproduce. According to the specialised literature, the metabolic activities of these microorganisms degrade the cutting fluids, altering their chemical and phisycal properties. However, the study of this theme is limited and there is no research work that quantitatively indicates the influence of these contaminants in the machinability parameters. Therefore, the present work has the main objetctive of quantifying three machinability parameters (cutting force, surface roughness and tool life) when turning V304UF stainless steel using two water based cutting fluids (emulsion of vegetable base and semi-syntetic of mineral base). These two cutting fluids were intentionaly contaminated in an induced manner by periodic inoculations up to a mean contamination of 105 UFC/mL. With this procedure it was possible to compare the eficiency of new and contminated cutting fluids during the turning process. The results showed that the contaminated cutting fluids with 105 UFC/mL changed the pH, destabilized the emulsions and caused small changes in the machinability parameters (maching force, surface roughness and tool life), mainly under low cutting speeds and feed rates. Thus, the contamination of the cutting fluids, particularly the vegetable base ones, can promote small influences in important machinability parameters. Em processos de usinagem as principais funções dos fluidos de corte (FC) são refrigerar e lubrificar o sistema tribológico constituído pela peça, cavaco e ferramenta. Quando escolhidos e aplicados corretamente, eles podem aumentar a vida da ferramenta, diminuir as forças de usinagem e melhorar o acabamento da peça fabricada. No entanto ao longo de sua utilização, pesquisas apontam que os FC s à base de água (emulsões e soluções) tornam-se susceptíveis a contaminação microbiológica (bactérias) que usam nutrientes encontrados em sua composição para crescerem e se reproduzirem. Segundo a literatura especializada, as atividades metabólicas destes microrganismos degradam os FC s, alterando suas propriedades físicas e químicas. Entretanto, o estudo desse assunto é limitado, e não há trabalhos que indicam quantitativamente a influência desses fluidos contaminados nos parâmetros de usinagem. Deste modo, este trabalho teve como principal objetivo quantificar três índices de usinabilidade (forças de usinagem, acabamento superficial e vida da ferramenta) no processo de torneamento do Aço Inoxidável Austenítico V304UF, utilizando dois FC s aquosos (emulsionável de base vegetal e semissintético mineral). Esses FC s foram contaminados de forma induzida através de inoculações periódicas até alcançarem o nível de contaminação média igual a 105 UFC/mL. Deste modo, foi possível comparar a eficiência dos FC s novos com os contaminados no processo de torneamento. Os resultados mostraram que as contaminações dos FC s com 105 UFC/mL, alteraram o pH do meio, desestabilizaram as emulsões e causaram pequenas mudanças nos parâmetros de forças de usinagem, rugosidade e vida da ferramenta, principalmente nas condições com baixa velocidade de corte e taxas de avanço. Assim, para baixas velocidades de corte, os fluidos de corte contaminados, principalmente de base vegetal, podem causar pequenas influências em importantes parâmetros de usinabilidade do processo. Mestre em Engenharia Mecânica

Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais Globally the vancomycin-resistant enterococci (VRE) remains an important cause of infection related to health care. The study aimed to characterize samples of VRE isolated from patients hospitalized during the epidemic and endemic periods, determining the risk of colonized patients developing infection, its relationship with consumption antibiotics and the role of colonization pressure. Additionally, we investigated the presence of virulence determinants in samples recovered from colonization and infection. We conducted longitudinal cohort study of patients colonized and infected by Enterococcus faecium (VREfm) and E. faecalis (VREfc) resistant to vancomycin, by active search for the Microbiology Laboratory of the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia, during the period of January 2010 to June 2012. The identification and antimicrobial resistance were determined by automated system Vitek®2. A record following the model of NHSN (\"National Healthcare Safety Network\") was completed for each patient, considering clinical, demographic and epidemiological factors. The risk factors were evaluated by univariate analysis and multivariate logistic regression, and Pearson and Spearman tests were used to correlate two variables, the antimicrobial DDD per 1000 patient-days and the number of VRE per 1000 patient-days. Virulence genes asa1, gelE, esp and hyl, and vanA resistance were detected by polymerase chain reaction. Among the 171 patients evaluated, VRE was the most frequent micro-organism (92%). Twenty-two patients (12.9%) developed infection by VRE on average 14 days after colonization with the prevalence of urinary tract infections (72%). Among patients infected most used urinary catheter as the most frequent device (86%). The acquisition rate of VRE was 1.92/1000 patient-days in early August 2010 and the end of January 2011 there were no cases of VREfm, when it was observed the end of the outbreak and the begin of VREfm endemicity in the hospital (0.555 VRE/1000 patient-days). There was a relationship between the temporal and spatial infected patients with evidence of cross-transmission mainly in the Intensive Care Unit for Adults. Only the use of aminoglycosides has been previously considered an independent risk factor for VRE infection (P=0.0013), however, the use of glycopeptides was correlated with the presence of that micro-organism in a hospital (r=0.717, P=0.03). Although the colonization pressure with VRE was high with variations from 0.004 to 1.32% during the 30-month study was not statistically associated with the development of VRE infection. An association was observed between samples with high-level resistance to streptomycin and penicillin and ampicillin resistance in samples VREfm, however, for samples of VREfc, the high level of resistance to gentamicin was more frequently (77%) associated only with penicillin resistance. All samples VREfm carried the vanA gene and were resistant to teicoplanin, expressing high levels of resistance to vancomycin (MIC ≥ 256 μg/ml). The esp gene was the most frequent detected in 82.4% of samples colonization and 76.5% of the clinical samples. We showed high prevalence of VREfm in a tertiary hospital, independently associated with the previous use of aminoglycosides and glycopeptides consumption. Globalmente o Enterococo Resistente à Vancomicina (VRE) continua sendo uma causa importante de infecção relacionada à assistência à saúde. O trabalho teve como objetivo caracterizar amostras de VRE isoladas de pacientes hospitalizados durante os períodos epidêmico e endêmico, determinando o risco de pacientes colonizados desenvolver infecção, sua relação com o consumo de antibióticos e o papel da pressão de colonização. Adicionalmente, foi investigada a presença de determinantes de virulência em amostras recuperadas de colonização e infecção. Foi realizado estudo longitudinal de coorte de pacientes colonizados e infectados por Enterococcus faecium (VREfm) e E. faecalis (VREfc) resistentes à vancomicina, por busca ativa no Laboratório de Microbiologia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, durante o período de janeiro de 2010 a junho de 2012. A identificação e a resistência aos antimicrobianos foram determinadas pelo sistema automatizado Vitek®2. Uma ficha seguindo o modelo do NHSN ( National Healthcare Safety Network ) foi preenchida para cada paciente, considerando fatores demográficos, clínicos e epidemiológicos.Os fatores de risco foram avaliados por análise univariada e regressão logística multivariada, e os testes de Pearson e Spearman foram utilizados para correlacionar duas variáveis, DDD do antimicrobiano por 1000 pacientes-dia e o número de VRE por 1000 pacientes-dia. Os genes de virulência asa1, gelE, esp e hyl, e resistência vanA foram detectados por reação em cadeia da polimerase. Entre os 171 pacientes avaliados, VREfm foi o micro-organismo mais frequente (92%). Vinte e dois pacientes (12,9%) desenvolveram infecção pelo VRE, em média 14 dias após a colonização com a predominância das infecções urinárias (72%). Entre os pacientes infectados a maioria usou sonda vesical como procedimento invasivo mais frequente (86%). A taxa de aquisição do VREfm foi 1,92/1000 pacientes-dia no início de agosto de 2010 e no final de janeiro de 2011 não houve o isolamento de VREfm, quando foi observado o término do surto de VREfm e início da endemicidade no hospital (0,555 VRE/1000 pacientes-dia). Houve relação temporal e espacial entre os pacientes infectados com evidência de transmissão cruzada principalmente na Unidade de Terapia Intensiva de Adultos. Somente o uso prévio de aminoglicosídeos foi considerado fator de risco independente para infecção pelo VRE (P=0,0013); no entanto, o consumo de glicopeptídeos foi correlacionado com a presença desse micro-organismo no hospital (rs= 0,717, P=0,03). Apesar da pressão de colonização por VRE ter sido elevada com variações de 0,004 a 1,32% durante os 30 meses de estudo, não foi relacionada estatisticamente com o desenvolvimento de infecção pelo VRE. Foi observada associação entre as amostras com alto nível de resistência à estreptomicina e resistência à penicilina e ampicilina nas amostras de VREfm, entretanto, para as amostras de VREfc, o elevado nível de resistência à gentamicina foi mais frequente (77%) associado somente com a resistência à penicilina. Todas as amostras de VREfm carreavam o gene vanA e foram resistentes a teicoplanina, expressando elevados níveis de resistência à vancomicina (MIC ≥ 256 μg/ml). O gene esp foi o mais frequente, detectado em 82,4% das amostras de colonização e em 76,5% das amostras clínicas. Mostramos alta prevalência de VREfm em um hospital terciário, independentemente associado com o uso prévio de aminoglicosídeos e o consumo de glicopeptídeos. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

Toxoplasma gondii infection in susceptible C57BL/6 mice induces a strong Th1 immune response causing intense inflammation and lesions in ileum in response to microbial antigens and if controlled causes death of animals. The Th1 immune response is similar to that in patients with inflammatory bowel disease (IBD) such as Crohn\'s disease (CD) and ulcerative colitis (UC). Therefore find alternative treatments that have adjuvant effect of conventional treatments are of great interest. The use of probiotics is increasing due to several benefits found in inflammatory diseases. To verify the effects of probiotics Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus acidophilus and Lactococcus lactis NCDO 2118 in C57BL/6 mice, we treat one day before and 7 days after oral infection with 30 cysts of the ME-49 strain. We found that L. casei- and L. acidophilus-treatment mice decreased intestinal parasitism reducing the pathology in small intestine of C57BL/6 mice and prevent death. In addition, the microbiological culture of organs shows L. casei- and L. acidophilus-treatment mice prevent bacterial translocation from the intestinal lumen to organs such as liver, spleen, lung and blood, moreover the microbiological analysis of feces showed that there were fewer gram negative bacteria species in feces of probiotic treated mice. The NAG, MPO and EPO assay that are characteristic of macrophages, and eosinophils neutrophils respectively showed that there was a decrease in the activity of enzymes MPO and NAG and a small increase in activity and EPO. Finally, the qPCR analysis revealed that treatment with L. acidophilus decreased IFN-γ and TNF-α mRNA induced by infection with T. gondii and L.casei treatment increased the expression of Foxp3 and IL-10. Our results demonstrate the ability of probiotics to control the inflammation response and reduce mortality caused by ileitis. However, further studies are needed to find out what the precise mechanisms that probiotics L. casei and L. acidophilus modulate the host immune response. A infecção por Toxoplasma gondii em camundongos susceptíveis C57BL/6 com 30 cistos da cepa ME-49 induz uma forte resposta do sistema imune do tipo Th1 causando uma intensa inflamação com lesão no íleo em resposta a antígenos da microbiota e se não for controlada causa a morte dos animais. Essa resposta é semelhante à encontrada em pacientes com doenças inflamatórias intestinais (IBD) como a doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC). Portanto encontrar tratamentos alternativos que tenham efeito adjuvante aos tratamentos convencionais é de grande interesse. O uso de probióticos em produtos fermentados vem aumentando devido aos vários benefícios encontrados em pacientes com doenças inflamatórias que utilizam esses produtos. Com o objetivo de investigar o efeito da administração dos probióticos Lactobacillus casei Shirota, Lactobacillus acidophilus e Lactococcus lactis NCDO 2118 no intestino delgado, tratamos camundongos C57BL/6 um dia antes e 7 dias depois da infecção oral com 30 cistos da cepa ME-49 de T. gondii. O tratamento com L. casei ou L. acidophilus diminuiu o parasitismo intestinal, reduziu a patologia associada ao intestino delgado e evitou a morte dos animais. Além disso, a cultura microbiológica dos órgãos revelou que L. casei e L. acidophilus foi capaz de impedir a translocação de bactérias do lúmen intestinal para órgãos como fígado, baço, pulmão e também para o sangue. O cultivo microbiológico das fezes mostrou que houve menos espécies de bactérias gram negativas encontradas nas fezes dos animais tratados com probióticos. A análise das enzimas NAG, MPO e EPO que são características de macrófagos, neutr´filos e eosinófilos, respectivamente mostrou que houve diminuição na atividade das enzimas MPO e NAG e um pequeno aumento na atividade e EPO. Por último, a análise em qPCR revelou que o tratamento com L. acidophilus diminuiu a expressão de IFN-γ e TNF-α induzido pela infecção por T. gondii e o tratamento com L.casei aumentou a expressão de Foxp3 e IL-10. Esses resultados demonstram a capacidade dos probióticos em controlar a resposta inflamação e reduzir a mortalidade causada pela ileíte. Contudo, serão necessários mais estudos para descobrir quais os mecanismos precisos que os probióticos L. casei e L. acidophilus utilizam para modular a resposta imune em favor do hospedeiro. Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadas

All the objects present in the operating room, as well as the table of surgical instruments can be a source of contamination of the surgical site. Its fitting, following rules of asepsis, as well as the adequate sterilization of materials that will be exposed on the table, are key to reducing the rates of ISC. The use of fields of fabric covering the table surgical instrument reduces contamination of the material and consequently the ISC. But there is no work in the medical literature on the prior use of sterile plastic covering the table of surgical instruments in the field of sterile, routinely used in most surgical centers. The objective of this study was to analyze the use of field sterile plastic or friction of a solution of 70% alcohol and iodine to 1 %, used in tables of surgical instruments, as extrinsic factor to prevent contamination trans-operative surgical site. This was a randomized experiment, with collections of samples of the areas of tables of surgical instruments, before and after each procedure, with subsequent microbiological analysis for identification of microorganisms and its antimicrobial resistance. Results: In surgeries in which the sterilized plastic was used, the bacterial growth was 5.71 % before and 28.6 % after surgery while in disinfections with solution of 70% alcohol and iodine to 1 %, growth was 2.9 % before and 45.7 % after, without significant difference between the methods employed. To identify the microorganisms present in the tables of surgical instruments, we had prevalence of Micrococcus spp, and small percentage of Staphylococcus spp, they do not behave as multidrug-resistant front the classes of antimicrobial agents tested. As to the remaining factors evaluated, as surgery time, ASA classification of patient, use of antimicrobials, quantity of persons present in the operating room during the procedure, etc. , we noticed that the two groups were similar, it is not these determining factors of difference of contamination of tables of surgical instruments in two methods employed. Conclusions: the two methods have the power of similar protection, whereas the solution of 70% alcohol and iodine 1% does not generate solid waste. Todos os objetos presentes na sala de cirurgia, assim como a mesa de instrumentais cirúrgicos podem ser fonte de contaminação do sítio cirúrgico. Sua montagem, seguindo regras de assepsia, assim como a esterilização adequada de materiais que serão expostos sobre essa mesa, são fundamentais para redução das taxas de ISC. O uso de campos de tecido recobrindo a mesa de instrumentais cirúrgicos reduz a contaminação dos materiais e consequentemente a infecção de sítio cirúrgico. Porém não se verifica trabalhos na literatura médica sobre o uso prévio de plástico esterilizado recobrindo a mesa de instrumentais cirúrgicos sob o campo de tecido esterilizado, utilizado rotineiramente na maioria dos centros cirúrgicos. O objetivo deste estudo foi analisar o uso de campo plástico estéril ou de fricção de solução de álcool a 70% e iodo a 1%, utilizados em mesas de instrumentais cirúrgicos, como fator extrínseco para impedir a contaminação trans-operatória do sítio cirúrgico. Tratou-se de um experimento randomizado, com coletas de amostras das superfícies das mesas de instrumentais cirúrgicos, antes e depois de cada procedimento, com posterior análise microbiológica para identificação dos microrganismos e sua resistência antimicrobiana. Resultados: Nas cirurgias em que o plástico esterilizado foi utilizado, o crescimento bacteriano foi de 5,71% antes e 28,57% após a cirurgia enquanto que nas desinfecções com solução de álcool a 70% e iodo a 1%, o crescimento foi de 2,86% antes e 45,71% após, sem diferença significativa entre os métodos empregados. Ao identificarmos os microrganismos presentes nas mesas de instrumentais cirúrgicos, tivemos prevalência de Micrococcus spp, e pequena porcentagem de Staphylococcus spp, estes não se comportando como multirresistentes frente às classes de antimicrobianos testadas. Quanto aos demais fatores avaliados, como tempo de cirurgia, classificação ASA do paciente, uso de antimicrobiano, quantidade de pessoas presentes na sala operatória durante o procedimento, etc., notamos que os dois grupos foram semelhantes, não sendo estes fatores determinantes da diferença de contaminação das mesas de instrumentais cirúrgicos nos dois métodos empregados. Conclusões: os dois métodos têm poder de proteção semelhante, considerando que a solução de álcool a 70% e iodo a 1% não gera resíduos sólidos. Mestre em Ciências da Saúde

Healthcare-associated infections (HAI) represent a major cause of morbidity, mortality and costs, principally those caused by bacteria resistant and multiresistant to antibiotics. The present study evaluates the epidemiology and pathogenesis of HAI in the Pediatric Intensive Care Unit (PICU), as well as in patients with infections caused by S. aureus in a tertiary-care teaching hospital, focusing on incidence rates and epidemiological indicators, density of use of antibiotics, risk factors for development of these infections and associated mortality to Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). The study included National Helathycare Safety Network (NHSN) surveillance (prospective, longitudinal) of patients in PICU of Hospital de Clínicas of the Federal University of Uberlândia (HC-UFU), the samples were recovered from the microbiology laboratory of the hospital, and evaluation of risk factors was made through a case (patients with HAI) versus control (patients without infection) study, from August/2009 to August/2010. An individual form of surveillance, with epidemiological, clinical and microbiological data from patients with S. aureus infections was filed. We recovered 255 isolates of S. aureus obtained from 230 patients, identified by the microbiology laboratory of the HC-UFU, from January to December 2010. We conducted a case-control matched study to assess associated mortality rates by MRSA, considering only patients with bloodstream infection (BSI). The study was approved by the Research Ethics Committee of the University (no003/11). HAI were a significant cause of morbidity in patients in the PICU, with a rate of 26.7 nosocomial infections per 1000 patient-days. Sepsis (19.6/1000 patient-days) was the most common infection, and 44.1% of the patients with sepsis had primary sepsis, and the main source of these infection were CVC or unknown, while in the secondary sepsis, lung and urinary tract were more frequent sources (8.8% each). Univariate analysis of risk factors for HAI showed the following: use of CVC (p = 0.01), use of more than two antibiotics (p