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Les syndromes myélodysplasiques (SMD) et les leucémies myélomonocytaires chroniques (LMMC) sont des hémopathies myéloïdes fréquemment associées à des manifestations auto-immunes et inflammatoires. L'anémie hémolytique auto-immune à anticorps chauds (wAHAI) est une maladie auto-immune rare, à la morbi-mortalité importante. À ce jour, il n'existe pas d'étude s'attachant à décrire les caractéristiques des patients présentant une wAHAI satellite d'un SMD/LMMC. On ne sait pas si les wAHAI satellites des SMD/LMMC ont un phénotype clinicobiologique particulier, ni si la réponse au traitement diffère de celles des wAHAI primaires. De même, l'impact pronostique de la survenue d'une wAHAI sur l'évolution de l'hémopathie myéloïde sous-jacente n'est pas connu (notamment en termes de progression du SMD, de transformation en LAM ou de décès). Nous avons réalisé une étude nationale multicentrique rétrospective au sein de 17 centres hospitaliers français. Les critères d'inclusion étaient : âge > 18 ans, une wAHAI (définie par une Hb < 12 g/dL + haptoglobine basse + TDA positif IgG ou IgG + C3d), un SMD/LMMC selon les critères OMS 2016 et un délai maximal de 5 ans entre les 2 diagnostics si l'AHAI précédait le SMD. Les critères d'exclusion étaient : AHAI autre qu'à Ac chauds, présence d'une autre cause d'AHAI secondaire, présence d'une autre cause d'hémolyse. Les syndromes d'Evans étaient acceptés si les critères précédents étaient respectés. Trente patients avec une wAHAI satellite d'un SMD/LMMC ont été inclus (âge moyen 76 ans, 47 % de femmes). L'AHAI était antérieure, synchrone et postérieure au SMD dans 17 %, 27 % et 56 % des cas respectivement. Les taux moyens d'Hb et de réticulocytes au diagnostic étaient de 7,3 g/dL (±1,4) et 216 G/L (±126), respectivement. Trente-sept pour cent des patients avaient un syndrome d'Evans. Les LMMC représentaient 20 % des hémopathies. Le score IPPS-R au diagnostic était ≤ 3,5 chez 80 % des patients. Des mutations myéloïdes somatiques ont été retrouvées chez 91 % des patients testés (VAF moyenne 41 %). La durée moyenne de suivi était de 35 mois. Cent pour cent des patients ont été traités par une corticothérapie en 1re ligne : 83 % des patients y ont répondu initialement ; parmi eux, 70 % étaient corticodépendants et 20 % ont rechuté. Soixante-treize pour cent ont reçu du rituximab : 95 % ont répondu initialement et 27 % ont rechuté. L'évolution a été marquée par 77 % d'infections sévères (antibiotiques IV ou hospitalisation ou décès), 25 % de thromboses, 2 transformations en LAM (6,6 %) et par plus d'un tiers de décès (11/30, 37 %). Les wAHAI satellites des SMD/LMMC ont une présentation clinique similaire aux wAHAI primitives, s'intègrent fréquemment (dans environ un tiers des cas) dans un syndrome d'Evans et accompagnent plutôt des SMD/LMMC de bas risque, qui semblent rarement évoluer vers la LAM. Les taux de réponses aux traitements de 1re et de 2e ligne sont superposables à ceux des wAHAI primitives. Enfin, elles sont associées à un risque important d'infections sévères et de décès toutes causes confondues. Une étude comparative avec des témoins appariés (AHAI primitives et SMD/LMMC seuls) est en cours ; ses résultats seront disponibles prochainement. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The spread of fungal clones is hard to detect in the daily routines in clinical laboratories, and there is a need for new tools that can facilitate clone detection within a set of strains. Currently, Matrix Assisted Laser Desorption-Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry is extensively used to identify microbial isolates at the species level. Since most of clinical laboratories are equipped with this technology, there is a question of whether this equipment can sort a particular clone from a population of various isolates of the same species. We performed an experiment in which 19 clonal isolates of Aspergillus flavus initially collected on contaminated surgical masks were included in a set of 55 A. flavus isolates of various origins. A simple convolutional neural network (CNN) was trained to detect the isolates belonging to the clone. In this experiment, the training and testing sets were totally independent, and different MALDI-TOF devices (Microflex) were used for the training and testing phases. The CNN was used to correctly sort a large portion of the isolates, with excellent (> 93%) accuracy for two of the three devices used and with less accuracy for the third device (69%), which was older and needed to have the laser replaced. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background: Immune-mediated thrombotic thrombocytopenic purpura (iTTP) is a rare life-threatening thrombotic microangiopathy requiring urgent therapeutic plasma exchange (TPE). However, the exact impact of a slight delay in TPE initiation on the subsequent patients' outcome is still controversial. Aim: We aimed to study the frequency, short-term neurological consequences, and determinants of diagnostic delay in iTTP. Methods: We conducted a retrospective monocentric study including patients with a first acute episode of iTTP (2005–2020) classified into 2 groups: delayed (>24h from first hospital visit, group 1) and immediate diagnosis (≤24h, group 2). Results: Among 42 evaluated patients, 38 were included. Eighteen cases (47%) had a delayed diagnosis (median: 5 days). The main misdiagnosis was immune thrombocytopenia (67%). The mortality rate was 5% (1 death in each group). Neurological events (stroke/TIA, seizure, altered mental status) occurred in 67% vs 30% patients in group 1 and 2, respectively (p = 0.04). Two patients in group 1 exhibited neurological sequelae. The hospital length of stay was longer in group 1 (p = 0.02). At the first hospital evaluation, potential alternative causes of thrombocytopenia were more prevalent in group 1 (33% vs 5%, p = 0.04). Anemia was less frequent in group 1 (67% vs 95%, p = 0.04). All patients had undetectable haptoglobin levels. By contrast, 26% of schistocytes counts were <1%, mostly in group 1 (62% vs 11%, p = 0.01). Conclusion: Diagnostic delay is highly prevalent in iTTP, with a significant impact on short-term neurological outcome. In patients with profound thrombocytopenia, the thorough search for signs of incipient organ dysfunction, systematic hemolysis workup, and proper interpretation of schistocytes count are the key elements of early diagnosis of TTP. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

In patients without ASCT, 45 patients (36%) relapsed <12 months after the end of front-line therapy, with a median OS of 26-3 vs 61 months ( I P i = 0-006). No survival improvement in patients with high-risk multiple myeloma harbouring del(17p) and/or t(4;14) over the two past decades The median OS of patients diagnosed in the period 2001-2010 was not significantly different from that of patients diagnosed in the period 2011-2019: 63-7 months [95% confidence interval (CI): 55-0-77-9] and 53-2 months (95% CI: 46-4-76-1) respectively ( I P i = 0-32; Fig 1A). In patients with ASCT, 26 patients (21%) presented early relapse with significant impact on median OS (34-7 vs 82-2 months; I P i < 0-001). [Extracted from the article]

Objective: Temporal arteritis (TA) is a typical manifestation of giant cell arteritis (GCA). Antineutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)–associated vasculitides (AAVs) are rarely revealed by TA manifestations, leading to a risk of misdiagnosis of GCA and inappropriate treatments. This study was undertaken to describe the clinical, biologic, and histologic presentations and outcomes in cases of TA revealing AAV (TA‐AAV) compared to controls with classic GCA. Methods: In this retrospective case–control study, the characteristics of patients with TA‐AAV were compared to those of control subjects with classic GCA. Log‐rank test, with hazard ratios (HRs) and 95% confidence intervals (95% CIs), was used to assess the risk of treatment failure. Results: Fifty patients with TA‐AAV (median age 70 years) were included. Thirty‐three patients (66%) presented with atypical symptoms of GCA (ear, nose, and throat involvement in 32% of patients, and renal, pulmonary, and neurologic involvement in 26%, 20%, and 16% of patients, respectively). Blood samples were screened for ANCAs at the time of disease onset in 33 patients, and results were positive in 88%, leading to a diagnosis of early TA‐AAV in 20 patients. The diagnosis of AAV was delayed a median interval of 15 months in 30 patients. Compared to controls with GCA, patients with TA‐AAV were younger (median age 70 years versus 74 years), were more frequently men (48% versus 30%), and had high frequencies of atypical manifestations and higher C‐reactive protein levels (median 10.8 mg/dl versus 7.0 mg/dl). In patients with TA‐AAV, temporal artery biopsy (TAB) showed fibrinoid necrosis and small branch vasculitis in 23% of patients each, whereas neither of these characteristics was evident in controls with GCA. Treatment failure–free survival was comparable between early TA‐AAV cases and GCA controls, whereas those with delayed TA‐AAV had a significantly higher risk of treatment failure compared to controls (HR 3.85, 95% CI 1.97–7.51; P < 0.0001). Conclusion: TA‐AAV should be considered diagnostically in cases of atypical manifestations of GCA, refractoriness to glucocorticoid treatment, or early relapse. Analysis of TAB specimens for the detection of small branch vasculitis and/or fibrinoid necrosis could be useful. Detection of ANCAs should be performed in cases of suspected GCA with atypical clinical features and/or evidence of temporal artery abnormalities on TAB. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objective The randomized, controlled MAINRITSAN2 trial was designed to compare the capacity of an individually tailored therapy [randomization day 0 (D0)], with reinfusion only when CD19+ lymphocytes or ANCA had reappeared, or if the latter's titre rose markedly, with that of five fixed-schedule 500-mg rituximab infusions [D0 + D14, then months (M) 6, 12 and 18] to maintain ANCA-associated vasculitis (AAV) remissions. Relapse rates did not differ at M28. This ancillary study was undertaken to evaluate the effect of omitting the D14 rituximab infusion on AAV relapse rates at M12. Methods MAINRITSAN2 trial data were subjected to post-hoc analyses of M3, M6, M9 and M12 relapse-free survival rates in each arm as primary end points. Exploratory subgroup analyses were run according to CYC or rituximab induction and newly diagnosed or relapsing AAV. Results At M3, M6, M9 and M12, respectively, among the 161 patients included, 79/80 (98.8%), 76/80 (95%), 74/80 (92.5%) and 73/80 (91.3%) from D0, and 80/81 (98.8%), 78/81 (96.3%), 76/81 (93.8%) and 76/81 (93.8%) from D0+D14 groups were alive and relapse-free. No between-group differences were observed. Results were not affected by CYC or rituximab induction, or newly diagnosed or relapsing AAV. Conclusions We were not able to detect a difference between the relapse-free survival rates for up to M12 for the D0 and D0+D14 rituximab-infusion groups, which could suggest that omitting the D14 rituximab remission-maintenance dose did not modify the short-term relapse-free rate. Nevertheless, results at M12 may also have been influenced by the rituximab-infusion strategies for both groups. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background: Biannual rituximab infusions over 18 months effectively maintain remission after a "standard" remission induction regimen for patients with antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis (AAV).Objective: To evaluate the efficacy of prolonged rituximab therapy in preventing AAV relapses in patients with granulomatosis with polyangiitis (GPA) or microscopic polyangiitis (MPA) who have achieved complete remission after completing an 18-month maintenance regimen.Design: Randomized controlled trial. (ClinicalTrials.gov: NCT02433522).Setting: 39 clinical centers in France.Patients: 68 patients with GPA and 29 with MPA who achieved complete remission after the first phase of maintenance therapy.Intervention: Rituximab or placebo infusion every 6 months for 18 months (4 infusions).Measurements: The primary end point was relapse-free survival at month 28. Relapse was defined as new or reappearing symptoms or worsening disease, with a Birmingham Vasculitis Activity Score greater than 0.Results: From March 2015 to April 2016, 97 patients (mean age, 63.9 years; 35% women) were randomly assigned, 50 to the rituximab and 47 to the placebo group. Relapse-free survival estimates at month 28 were 96% (95% CI, 91% to 100%) and 74% (CI, 63% to 88%) in the rituximab and placebo groups, respectively, an absolute difference of 22% (CI, 9% to 36%) with a hazard ratio of 7.5 (CI, 1.67 to 33.7) (P = 0.008). Major relapse-free survival estimates at month 28 were 100% (CI, 93% to 100%) versus 87% (CI, 78% to 97%) (P = 0.009), respectively. At least 1 serious adverse event developed in 12 patients (24%) in the rituximab group (with 9 infectious serious adverse events occurring among 6 patients [12%]) versus 14 patients (30%) in the placebo group (with 6 infectious serious adverse events developing among 4 patients [9%]). No deaths occurred in either group.Limitation: Potential selection bias based on previous rituximab response and tolerance.Conclusion: Extended therapy with biannual rituximab infusions over 18 months was associated with a lower incidence of AAV relapse compared with standard maintenance therapy.Primary Funding Source: French Ministry of Health and Hoffmann-La Roche. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objective: To compare the effects of rituximab (RTX) and conventional immunosuppressants (CIs) on CD4+ T cells, Treg cells, and CD8+ T cells in antineutrophil cytoplasmic antibody–associated vasculitis (AAV). Methods: A thorough immunophenotype analysis of CD4+, Treg, and CD8+ cells from 51 patients with AAV was performed. The production of cytokines and chemokines by CD8+ T cells stimulated in vitro was assessed using a multiplex immunoassay. The impact of AAV B cells on CD8+ T cell response was assessed using autologous and heterologous cocultures. Results: CD4+ and Treg cell subsets were comparable among RTX‐treated and CI‐treated patients. In contrast, within the CD8+ T cell compartment, RTX, but not CIS, reduced CD45RA+CCR7– (TEMRA) cell frequency (from a median of 39% before RTX treatment to 10% after RTX treatment [P < 0.01]) and efficiently dampened cytokine/chemokine production (e.g., the median macrophage inflammatory protein 1α level was 815 pg/ml in patients treated with RTX versus 985 pg/ml in patients treated with CIs versus 970 pg/ml in those with active untreated AAV [P < 0.01]). CD8+ T cell subsets cocultured with autologous B cells produced more proinflammatory cytokines in AAV patients than in controls (e.g., for tumor necrosis factor–producing effector memory CD8+ T cells: 14% in AAV patients versus 9.2% in controls [P < 0.05]). In vitro disruption of AAV B cell–CD8+ T cell cross‐talk reduced CD8+ T cell cytokine production, mirroring the reduced CD8+ response observed ex vivo after RTX treatment. Conclusion: The disruption of a pathogenic B cell/CD8+ T cell axis may contribute to the efficacy of RTX in AAV. Further studies are needed to determine the value of CD8+ T cell immunomonitoring in B cell–targeted therapies. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objective The aim of the study was to describe the evolution of mortality and cause-specific mortality over time in patients with systemic necrotizing vasculitides (SNV), including polyarteritis nodosa (PAN), granulomatosis with polyangiitis (GPA), microscopic polyangiitis (MPA), and eosinophilic granulomatosis with polyangiitis (EGPA). Methods Patients with SNV from the French Vasculitis Study Group registry were divided into 5 groups according to the date of diagnosis: <1980, 1980–1989, 1990–1999, 2000–2010, and ≥ 2010. The causes of death were classified as vasculitis, infection, cardiovascular, malignancy, miscellaneous, or unknown. Results Among the 2217 patients included (PAN 16.1%, GPA 41.7%, EGPA 22.6%, MPA 19.6%), overall incidence of death was 2.26 per 100 person-years. The overall survival improved during each period considered. The 5-year survival rate increased from 72.2% (95% confidence interval [CI] 59.7–87.2) for patients diagnosed before 1980 to 94.5% (95% CI 90.4–98.8) after 2010 (p < 0.001). Periods of diagnosis, age, and male gender were independently associated with a poor survival with a non-significant difference between vasculitis. The incidence of mortality between the 1980s and after 2010 significantly decreased for vasculitis-related (p = 0.03) and cardiovascular-related deaths (p = 0.04). Incidence of death by infection remained stable between the 1980s and the 2000s but no death by infection occurred after 2010. The incidence of death by malignancy remained stable over time. Conclusion Overall survival of SNV patients has improved since the 1980s with the decrease of vasculitis- and cardiovascular-related deaths, but cancer-related mortality remained stable. These results highlight malignancy as the current target to improve the overall prognosis. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The benefit of radiotherapy (RT) after chemotherapy in limited-stage diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) remains controversial. We conducted a randomized trial in patients with nonbulky limited-stage DLBCL to evaluate the benefit of RT after rituximab plus cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone (R-CHOP). Patients were stratified according to the modified International Prognostic Index, including lactate dehydrogenase, Eastern Cooperative Oncology Group performance status, age, and disease stage. The patients received 4 or 6 consecutive cycles of R-CHOP delivered once every 2 weeks, followed or not by RT at 40 Gy delivered 4 weeks after the last R-CHOP cycle. All patients were evaluated by fluorodeoxyglucose-positron emission tomography scans performed at baseline, after 4 cycles of R-CHOP, and at the end of treatment. The primary objective of the trial was event-free survival (EFS) from randomization. The trial randomly assigned 165 patients in the R-CHOP arm and 169 in the R-CHOP plus RT arm. In an intent-to-treat analysis with a median follow-up of 64 months, 5-year EFS was not statistically significantly different between the 2 arms, with 89% ± 2.9% in the R-CHOP arm vs 92% ± 2.4% in the R-CHOP plus RT arm (hazard ratio, 0.61; 95% confidence interval [CI], 0.3-1.2; P = .18). Overall survival was also not different at 92% (95% CI, 89.5%-94.5%) for patients assigned to R-CHOP alone and 96% (95% CI, 94.3%-97.7%) for those assigned to R-CHOP plus RT (P = not significant). R-CHOP alone is not inferior to R-CHOP followed by RT in patients with nonbulky limited-stage DLBCL. This trial was registered at www.clinicaltrials.gov as #NCT00841945. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objective In most patients with nonsevere systemic necrotizing vasculitides ( SNVs), remission is achieved with glucocorticoids alone, but one-third experience a relapse within 2 years. This study was undertaken to determine whether the addition of azathioprine ( AZA) to glucocorticoids could achieve a higher sustained remission rate of newly diagnosed nonsevere eosinophilic granulomatosis with polyangiitis (Churg-Strauss) ( EGPA), microscopic polyangiitis ( MPA), or polyarteritis nodosa ( PAN). Methods All patients included in this double-blind trial received glucocorticoids, gradually tapered over 12 months, and were randomized to receive AZA or placebo for 12 months, with stratification according to SNV ( EGPA or MPA/ PAN). The primary end point was the combined rate of remission induction failures and minor or major relapses at month 24. Results Ninety-five patients (51 with EGPA, 25 with MPA, and 19 with PAN) met the inclusion criteria, were randomized, and received at least 1 dose of AZA (n = 46) or placebo (n = 49). At month 24, 47.8% of the patients receiving AZA versus 49% of the patients receiving placebo had remission induction failures or relapses ( P = 0.86). Secondary end points were comparable between the AZA and placebo arms. These included initial remission rate (95.7% versus 87.8%), total relapse rate (44.2% versus 40.5%), and glucocorticoid use. Two patients in the placebo arm died; 22 patients in the AZA arm (47.8%) and 23 patients in the placebo arm (46.9%) experienced ≥1 severe adverse event. For EGPA patients, the primary end point (48% in the AZA arm versus 46.2% in the placebo arm) and the percent of patients who experienced asthma/rhinosinusitis exacerbations (24% in the AZA arm versus 19.2% in the placebo arm) were comparable between treatment arms. Conclusion Addition of AZA to glucocorticoids for the induction of remission of nonsevere SNVs does not improve remission rates, lower relapse risk, spare steroids, or diminish the EGPA asthma/rhinosinusitis exacerbation rate. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background Systemic inflammatory and autoimmune diseases (SIADs) associated with myelodysplastic syndromes are often difficult to treat. Corticosteroids are efficient but only usually at high doses. The use of biologics needs to be specified. Methods In a French multicenter retrospective study, we analyzed the efficacy and safety of biologics (tumor necrosis factor-α [TNF-α] antagonists, tocilizumab, rituximab and anakinra) for SIADs associated with myelodysplastic syndromes (MDSs). Clinical, biological and overall treatment responses were evaluated. When several lines of treatment were used, data were analyzed before and at the end of each treatment line and were pooled to compare overall response among steroids, disease-modifying anti-rheumatic drugs (DMARDs) and biologics. Results We included 29 patients (median age 67 years [interquartile range 62–76], 83% males) with MDS-related SIADs treated with at least one biologic. The MDSs were predominantly refractory anemia with excess blasts 1 (38%) and refractory cytopenia with multilineage dysplasia (21%). The SIADs were mainly arthritis ( n = 6; 20%), relapsing polychondritis ( n = 8; 30%) and vasculitis ( n = 10; 34%). During a 3-year median follow-up (IQR 1.3–4.5), a total of 114 lines of treatments were used for all patients: steroids alone (22%), DMARDs (23%), TNF-α antagonists (14%), anakinra (10%), rituximab (10%), tocilizumab (7%) and azacytidine (9%). Considering all 114 lines, overall response (complete and partial) was shown in 54% cases. Overall response was more frequent with steroids (78%) and rituximab (66%) than DMARDs (45%) and other biologics (33%) ( p < 0.05). Rituximab had better response in vasculitis and TNF-α antagonists in arthritis. During follow-up, 20 patients (71%) presented at least one severe infection. Conclusion This nationwide study demonstrates the efficacy of steroids for SIAD-associated MDSs but a high frequency of steroid dependence. The response to biologics seems low, but rituximab and azacytidine seem promising. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Objectives. Granulomatosis with polyangiitis (GPA) mainly affects white Europeans, but rarely GPA may also affect non-Europeans. This study aimed to describe GPA clinical-biological presentation and outcome in black sub-Saharan Africans and Afro-Caribbeans and in North Africans. Methods. Among 914 GPA patients included in the French Vasculitis Study Group database, geographic origin and ethnicity were known for 760. Clinical-biological presentations and outcomes of white Europeans vs black sub-Saharans and Afro-Caribbeans and vs North Africans were analysed. Results. Among the 760 patients, 689 (91%) were white Europeans, 33 (4.3%) were North Africans and 22 (2.9%) were sub-Saharans (n = 8) or Afro-Caribbeans (French West Indies, n = 14). Black sub-Saharans and Afro-Caribbeans, compared with white Europeans, were significantly younger at GPA diagnosis (P = 0.003), had more frequent central nervous system involvement (P = 0.02), subglottic stenosis (P = 0.002) and pachymeningitis (P = 0.009), and tended to have more frequent chondritis and retroorbital tumour. Median serum creatinine levels and Birmingham Vasculitis Activity Score were significantly lower in sub-Saharans and Afro-Caribbeans (P = 0.002 and P = 0.003, respectively). In contrast, in comparison with white Europeans, North Africans had only less frequent arthralgias (P = 0.004). Time to relapse was shorter for black sub-Saharans and Afro-Caribbeans compared with white Europeans [adjusted HR= 1.96 (95% CI: 1.09, 3.51) (P = 0.02)], and did not differ for North Africans. In contrast, overall survival was not significantly different according to ethnicity. Conclusion. Our findings indicated different GPA clinical presentations in white Europeans and sub- Saharans and Afro-Caribbeans, with black patients having more frequent severe granulomatous manifestations. In addition, time to relapse was significantly shorter for black sub-Saharans and Afro-Caribbeans compared with white Europeans. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

A letter to the editor is presented regarding meningeal localization and exceptional dorsolumbar osseous of anti-neutrophil cytoplasmic antibody (ANCA)-associated granulomatosis vasculitis (AAGV).

In diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL), the number of circulating monocytes and neutrophils represents an independent prognostic factor. These cell subsets include monocytic and granulocytic myeloid-derived suppressor cells (M- and G-MDSCs) defined by their ability to suppress T-cell responses. MDSCs are a heterogeneous population described in inflammatory and infectious diseases and in numerous tumors including multiple myeloma, chronic lymphocytic leukemia, and DLBCL. However, their mechanisms of action remain unclear. We broadly assessed the presence and mechanisms of suppression of MDSC subsets in DLBCL. First, a myeloid suppressive signature was identified by gene expression profiling in DLBCL peripheral blood. Accordingly, we identified, in a cohort of 66 DLBCL patients, an increase in circulating G-MDSC (LinnegHLA-DRnegCD33posCD11bpos) and M-MDSC (CD14posHLA-DRlow) counts. Interestingly, only M-MDSC number was correlated with the International Prognostic Index, event-free survival, and number of circulating Tregs. Furthermore, T-cell proliferation was restored after monocyte depletion. Myeloid-dependent T-cell suppression was attributed to a release of interleukin-10 and S100A12 and increased PD-L1 expression. In summary, we identified expanded MDSC subsets in DLBCL, as well as new mechanisms of immunosuppression in DLBCL. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

L'utilisation d'un traitement d'entretien après induction de la rémission a permis de diminuer les rechutes et la mortalité des vascularites associées aux anticorps anti-cytoplasme des polynucléaires neutrophiles (ANCA). Les trois essais thérapeutiques MAINRITSAN ont placé le rituximab en traitement d'entretien de référence. Néanmoins, l'étude du suivi à long-terme de ces essais est nécessaire pour préciser le risque de rechutes tardives ainsi que les modalités d'administration et la durée optimales du rituximab. Les essais randomisés contrôlés MAINRITSAN ont comparé successivement le rituximab administré à doses fixes de 500 mg à J0, J14, M6, M12 et M18, à l'azathioprine (MAINRITSAN1); le rituximab administré à doses fixes de 500 mg à J0, J14, M6, M12 et M18 (bras systématique) à une administration « à la demande » c'est-à-dire lors de la réascension du titre d'ANCA et/ou réapparition de lymphocytes B CD19+ circulants (bras à la demande) (MAINRITSAN2); et le rituximab administré pendant 18 mois à un traitement prolongé avec des perfusions de 500 mg tous les 6 mois de RTX pendant 18 mois supplémentaires (MAINRITSAN3). L'ensemble des patients inclus dans ces essais ont été suivis prospectivement jusqu'en décembre 2020 et leurs données ont été poolées pour analyser les rechutes et évènements indésirables. Les données des trois essais ont été ajustées sur les variables identifiées comme associées à la rechute, afin rendre comparable les données issues de ces études. Deux cent soixante-dix-sept patients ont été analysés avec un suivi médian de 73 [51-115] mois. Deux cent-trois patients avaient une granulomatose avec polyangéite (GPA) (73,3 %), 196 (70,8 %) une vascularite nouvellement diagnostiquée, et 255 (92,0 %) des ANCA positifs, principalement anti-PR3 (n = 170, 61,3 %). Les facteurs associés à une augmentation du risque de rechute étaient la présence d'une atteinte ORL (hazard ratio 1,84; IC 95 % 1,22-2,77), l'inclusion sur rechute et non à la première poussée de la maladie (hazard ratio 1,64; IC 95 % 1,04-2,58), et une fonction rénale plus élevée (hazard ratio 1,12; IC 95 % 1,05-1,19). Après ajustement sur les caractéristiques des patients, le rituximab restait supérieur à l'azathioprine pour la prévention des rechutes à la fois globales (majeures et/ou mineures) et majeures (hazard ratio 0,29; IC 95 % 0,17-0,50 et 0,40; IC 95 % 0,22-0,71, respectivement). En revanche, l'administration du rituximab à la demande était associée à un risque accru de rechutes majeures par rapport à une administration systématique (HR 3,00; IC 95 % 1,44-6,27). Enfin, la prolongation du traitement par rituximab à 36 mois n'était pas associée à une diminution du risque de rechute globale ni majeure comparativement à l'administration systématique de rituximab pendant 18 mois sur cette actualisation de suivi prolongé (HR 0,77; IC 95 % 0,47-1,26 et 1,16; IC 95 % 0,63-2,15, respectivement). L'analyse de suivi à long terme de MAINRITSAN3 prenant en compte le bras de MAINRITSAN2 antérieurement reçu confirmait le risque accru de rechute chez les patients traités par RTX à la demande avec une moindre survie sans rechute majeure des patients traités par rituximab à la demande puis placebo par rapport aux patients traités par rituximab systématique puis placebo d'une part, et rituximab à la demande puis rituximab d'autre part, (survie sans rechute majeure 50 % (32-78), 92 % (82-100) et 93 % (80-100), respectivement). Soixante-huit patients présentaient des infections graves au cours du suivi (24,5 %), sans augmentation de ce taux avec la prolongation du traitement (hazard ratio 1,14; IC 95 % 0,59-2,23). Le rituximab est efficace dans la prévention des rechutes dans les vascularites associées aux ANCA, notamment avec une administration systématique tous les 6 mois pour une durée de 18 mois, et ce sans augmentation du risque d'infection grave. L'administration à la demande guidée par le taux d'ANCA et/ou de lymphocytes B CD19+ est associée à une augmentation du risque de rechute majeure. Enfin, la prolongation du traitement de 36 mois ne semblait pas associée à une diminution du risque de rechute comparativement l'administration systématique de rituximab pendant 18 mois après un suivi plus prolongé. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

La maladie de Still de l'adulte (MSA) est une maladie inflammatoire systémique rare. Le diagnostic peut être difficile, car la présentation de la maladie et l'évolution clinique sont très hétérogènes. Pour des raisons peu claires, quelques patients développent des complications potentiellement mortelles [1]. Notre objectif était de déterminer si ces cas résultaient d'un retard thérapeutique ou pouvaient représenter un sous-type particulier de MSA. Nous avons mené une étude rétrospective multicentrique portant sur 20 patients atteints de MSA présentant une défaillance d'organe nécessitant le recours aux soins intensifs et 41 patients témoins atteints de MSA sans défaillance d'organe. Les données clinicobiologiques à l'admission à l'hôpital ont été explorées à l'aide d'analyses supervisées et d'analyses de réduction dimensionnelle non supervisées (analyse factorielle de données mixtes, FAMD). La durée de la maladie avant l'admission était plus courte chez les patients atteints de MSA catastrophique (médiane : 10 vs 20 jours, p = 0,007). La durée de la maladie avant le début du traitement avait également tendance à être plus courte (médiane : 24 contre 32 jours, p = 0,068). Malgré cette durée plus courte de la maladie, la FAMD, le clustering hiérarchique et les analyses univariées montrent que ces patients présentent des caractéristiques distinctives lors de l'admission, notamment un âge plus jeune, une fréquence plus élevée de splénomégalie, une atteinte hépatique, cardiaque et/ou pulmonaire, des arthralgies moins fréquentes et un taux de ferritine plus élevé. En analyse multivariée, 3 paramètres prédisaient l'évolution « catastrophique » : absence d'arthralgie, âge plus jeune et délai plus court entre l'apparition de la fièvre et l'hospitalisation. Cette étude suggère que les complications potentiellement mortelles de la MSA surviennent très tôt, dans un sous-ensemble particulier, que nous proposons de nommer la maladie de Still de l'adulte Catastrophique. L'activation macrophagique joue d'évidence un rôle, mais la présentation clinicobiologique, peu ou pas cytopénique, n'est pas celle des autres syndromes hémophagocytaires secondaires de l'adulte. La fréquence de cette forme de MSA pourrait être sous-estimée et reste à clarifier à travers de larges cohortes multicentriques. D'autres études sont nécessaires pour identifier les signaux d'alarme et définir la stratégie thérapeutique optimale. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

L'analyse du suivi à long terme des trois essais thérapeutiques MAINRITSAN ont confirmé l'efficacité du rituximab (RTX) dans la prévention des rechutes dans les vascularites associées aux ANCA (VAA), notamment avec une administration systématique tous les 6 mois pour une durée de 18 mois. L'administration à la demande était quant à elle associée à une augmentation du risque de rechute majeure. Enfin, la prolongation du traitement de 36 mois ne semblait pas associée à une diminution du risque de rechute comparativement l'administration systématique de RTX pendant 18 mois après un suivi plus prolongé. La prolongation du traitement par RTX à l'issue des 18 premiers mois de traitement d'entretien peut cependant être nécessaire chez certains patients, mais nécessite de mettre en balance le risque infectieux. Dans cette étude, nous avons voulu analyser la performance de modèles de prédiction du risque de rechute et d'infection précédemment décrits, pour aider à guider la prise de décision concernant la prolongation du traitement d'entretien par RTX. Les essais MAINRITSAN ont comparé le RTX administré tous les 6 mois à doses fixes de 500 mg à l'azathioprine (MAINRITSAN1) ; le RTX administré tous les 6 mois à doses fixes de 500 mg (bras systématique) à une administration « à la demande » lors de la réascension du titre d'ANCA et/ou réapparition de lymphocytes B CD19+ circulants (bras à la demande) (MAINRITSAN2) ; et le RTX administré pendant 18 mois à un traitement prolongé avec des perfusions tous les 6 mois pendant 18 mois supplémentaires (MAINRITSAN3). Les données des patients inclus dans ces essais ont été poolées pour analyser les rechutes et évènements indésirables. Les données des essais ont été ajustées sur les variables identifiées comme associées à la rechute, afin rendre comparable les données issues de ces études. L'objectif de ce travail était de réaliser la validation externe de modèles de prédiction du risque de rechute et d'infection rapportés par McClure et al. Les patients inclus dans l'essai MAINRITSAN3 et randomisés dans le bras prolongation du RTX étaient censurés à l'inclusion dans l'essai. Le critère principal d'efficacité était le délai entre la fin du RTX et la première rechute. Le critère principal de sécurité était le délai entre la fin du RTX et la première infection sévère. Deux cent dix-sept patients traités par rituximab pendant 18 mois ont été inclus dans cette analyse, 56 patients de l'essai MAINRITSAN1 et 161 de l'essai MAINRITSAN2. Le suivi médian à partir de la dernière perfusion de rituximab était de 63 mois (IQR 16–80). Soixante-seize patients ont rechuté, dont 46 avec une rechute majeure, correspondant à une survie sans rechute globale à 72 mois de 55 % (IC95 % : 48–64) et sans rechute majeure de 74 % (67–81). Des infections sévères ont été observées chez 33 patients, correspondant à une incidence cumulée d'infection sévère à 72 mois de 20 %. Le modèle de prédiction de la rechute, reposant sur le sexe masculin, un âge > 60 ans, des ANCA positifs à la dernière perfusion de RTX, une maladie en rechute, l'atteinte ORL et la dose de prednisone à la dernière visite, tendait à être associé au risque de rechute globale (p = 0,096) et l'était significativement avec le risque de rechute majeure (p = 0,04). Il permettait de définir des patients à haut risque et des patients à faible risque de rechute, ceux à haut risque de rechute ayant une survie sans rechute globale plus courte que ceux à faible risque (HR : 1,47, IC95 % : 0,90–2,39, p = 0,12), différence plus marquée pour la survie sans rechute majeure (HR : 1,91, IC95 % : 0,97–3,76, p = 0,059). Le modèle de prédiction d'infection, reposant sur le sexe masculin, une maladie pulmonaire structurale, un diabète, la survenue d'infections durant le traitement d'entretien et le taux de gammaglobulines, permettait d'identifier des patients à haut risque et à faible risque d'infection sévère. Les patients du groupe à haut risque d'infection avaient une survie sans infection sévère plus courte que les patients à faible risque (HR : 2,93, IC95 % : 1,28–6,72, p = 0,011). Dans ce travail, nous avons validé des modèles de prédiction du risque de rechute et d'infection à la fin du traitement d'entretien par rituximab à 18 mois au cours des VAA, permettant d'identifier les patients à risque de rechute et/ou d'infection, et d'aider à la prise de décision concernant la prolongation ou non du traitement d'entretien par RTX. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

The article discusses a study which compared rituximab with azathiprine as maintenance medication for antineutrophil cytoplasm antibody (ANCA)-associated vasculitis. Topics covered include the methods used in comparing the drugs' safety and effectiveness, the frequencies of severe adverse events in both treatment groups, and the results which show that more patients experienced sustained remission at month 28 with rituximab than with azathioprine.

Il reste controversé de classifier les vascularites associées aux ANCA selon la spécificité des ANCA ou selon le diagnostic phénotypique et de tenir compte de la spécificité des ANCA pour adapter le traitement. Une large cohorte française de patients atteints de granulomatose avec polyangéite (GPA, Wegener) a été analysée pour évaluer si l'absence d'ANCA ou la présence d'ANCA dirigés contre la myéloperoxydase (MPO) permettait de définir des GPA différentes de celles avec ANCA dirigés contre la protéinase 3 (PR3). Les données des patients du registre du Groupe français d'étude des vascularites (GFEV), avec un nouveau diagnostic de GPA selon les critères de l'ACR et/ou de la Conférence de Consensus révisée de Chapel Hill (CHCC), ont été analysées selon les résultats de l'immuno-essai de leur ANCA. Les caractéristiques démographiques, les manifestations de GPA au diagnostic et les données de suivi à long terme ont été extraites de la base de données. Les patients sans ANCA ou avec ANCA anti-MPO ont été comparés aux patients avec ANCA anti-PR3. Parmi les 727 patients avec GPA, 62 (8,5 %) avec un résultat négatif des ANCA et 119 (16,4 %) avec des ANCA anti-MPO ont été comparés à 546 (75,1 %) avec ANCA anti-PR3. Leur suivi médian global était de 3,5 ans. Les patients sans ANCA étaient caractérisés par une vascularite plus limitée que ceux avec ANCA anti-PR3 ou anti-MPO, avec davantage de forme limitée de GPA (17,7 % vs 5,7 % ou 6,7 % ; p = 0,001 et p = 0,04), moins souvent d'atteinte rénale (35,5 % vs 57,5 % ou 65,5 % ; p = 0,002 et p < 0,001) ou de neuropathie périphérique (8,1 % vs 20,7 % ou 21,0 % ; p = 0,03 et p = 0,04) et des indices d'activité BVAS plus faibles au diagnostic (13,3 vs 17,8 ou 18,2 ; p < 0,001 et p = 0,001) ; par contre, leurs taux de survie sans rechute (p = 0,14 et p = 0,93) et de survie globale (p = 0,55 et p = 0,16) étaient comparables. Les patients avec ANCA anti-MPO par rapport à ceux avec ANCA anti-PR3 étaient plus souvent de sexe féminin (52,9 % vs 41,8 %, p = 0,03), plus âgés (59,8 vs 51,6 ans ; p < 0,001), avec moins souvent d'arthralgies (34,5 % vs 56,4 % ; p < 0,001), de purpura (8,4 % vs 17,9 % ; p = 0,02) ou d'atteinte oculaire (18,5 % vs 28,2 % ; p = 0,04) ; le taux de survie sans rechute des patients avec ANCA anti-MPO n'était pas supérieur (p = 0,12) mais leur taux de survie globale était significativement inférieur (p = 0,001). Par comparaison aux patients sans ANCA et à ceux avec ANCA anti-MPO, les patients avec ANCA anti-PR3 avaient un moindre taux de survie sans rechute (p = 0,04) mais un meilleur taux de survie globale (p < 0,01). À partir d'une des plus larges cohortes rapportées à ce jour de patients avec GPA sans ANCA et avec ANCA anti-MPO, ceux sans ANCA avaient plus volontiers une vascularite limitée mais des taux de survie comparables. Les patients avec ANCA anti-PR3 avaient une probabilité de rechute supérieure mais un taux de survie plus élevé. Même si la CHCC considère le diagnostic phénotypique de GPA comme étant l'élément majeur, ces données renforcent l'idée que la spécificité des ANCA doit être ajoutée au phénotype et prise en compte dans la discussion et l'analyse des stratégies thérapeutiques. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Background Lymphoma occurring in patients aged 90 or older is not uncommon, and its incidence is expected to increase over time. Management of these patients is difficult given their underlying fragility and the lack of information regarding this population. Patients and methods We retrospectively analyzed 234 patients diagnosed with lymphoma at the age of 90 years or older (90+) between 1990 and 2012 to describe their characteristics, management, outcomes and prognostic factors. Results The median age was 92 years; 88% were B-cell lymphomas consisting mainly in diffuse large B-cell lymphoma. The median overall survival (OS) was 7.2 months (range, 0–92 months) for the 227 patients with non-Hodgkin Lymphoma (NHL), with a significant difference between aggressive and indolent NHL (5.2 months versus 19.4 months, respectively). We further analyzed 166 NHL patients for whom detailed characteristics were available. Among these patients, 63.5% received a treatment, either local (7.5%) or systemic (56%). Lymphoma was reported as the main cause of death (40%). Treatment administration was associated with improved OS in patients with aggressive (P < 0.001) but not indolent NHL (P = 0.96). In patients with aggressive NHL, hypoalbuminemia appeared as a strong and independent negative prognostic factor. Conclusions The median OS is short in 90+ patients diagnosed with lymphoma but some patients experience prolonged survival. Lymphoma represents the main cause of death in these patients. Treatment may improve survival of selected patients with aggressive but not indolent NHL. Management of these patients may be guided by prognostic factors identified in this study, notably serum albumin. [ABSTRACT FROM PUBLISHER]

Les résultats de l'essai MAINRITSAN [1] ont démontré une supériorité du rituximab sur l'azathioprine pour maintenir la rémission des vascularites associées aux ANCA (VAA). Au cours de cet essai, à 28 mois, 5 % des patients traités par rituximab avaient présenté une rechute majeure, mais à 60 mois de suivi, le taux de survie sans rechute majeure était seulement de 49,4 % [2]. L'essai MAINRITSAN3 (NCT02433522) visait à évaluer l'efficacité de l'administration à long terme du rituximab pour prévenir les rechutes de VAA chez les patients en rémission après une première phase du traitement d'entretien par rituximab. Pour être inclus, les patients devaient avoir participé à l'essai MAINRITSAN2 [3] : essai contrôlé randomisé comparant deux stratégies de perfusion de rituximab chez des patients atteints VAA en rémission complète après le traitement d'induction : les patients du bras « à la demande » avaient reçu une perfusion de 500 mg de rituximab lors de la randomisation, avec réinjection de rituximab uniquement après la réapparition de lymphocytes B CD19 + ou des ANCA ou lorsque le titre des ANCA avait nettement augmenté ; les patients du bras systématique recevaient des injections à j0, j14 puis aux mois 6, 12 et 18. Si les patients étaient en rémission complète à 28 mois, ils pouvaient être randomisés de nouveau pour recevoir 4 perfusions supplémentaires de rituximab ou de placebo, à l'inclusion et aux mois 34, 40 et 46. La prémédication pour tous les patients comprenait du paracétamol (1000 mg), de la méthylprednisolone (100 mg) et de la dexchlorphéniramine (5 mg). Le critère d'évaluation principal était la survie sans rechute à 56 mois. La rechute était définie comme un ou plusieurs nouveaux symptômes ou une aggravation de la maladie avec BVAS > 0 et a été évaluée par un comité d'adjudication indépendant. Entre mars 2015 et avril 2016, 97 patients ont été randomisés dans 45 centres en France : 50 dans le bras rituximab et 47 dans le bras placebo. L'âge moyen était de 63,9 ans, 35,1 % étaient des femmes, 68 (70,1 %) avaient une granulomatose avec polyangéite et 29 (29,9 %) une polyangéite microscopique et 50 % des patients avaient des ANCA à l'inclusion. Les taux de survie sans rechute des bras rituximab et placebo étaient respectivement de 96 % [intervalle de confiance (IC) à 95 %, 90,7–100 %] vs 74,3 % [62,8–88 %], hazard ratio : 7,5 [1,67–33,6 %] (p = 0,008) ; les taux de survie sans rechute majeure étaient de 100 % [100–100 %] vs 87,1 % [78–97,3 %] (p = 0,009). Douze (24 %) des patients sous rituximab vs 14 (29,8 %) des contrôles ont présenté au moins un événement indésirable grave (EIG) (p = 0,65). Aucun patient n'est décédé. Six (12 %) des patients sous rituximab ont présenté 9 effets indésirables graves d'origine infectieuse (2 chocs septiques, 2 infections d'origine urinaire ; 1 maladie de Lyme, 1 angiocholite, 1 neutropénie fébrile, 1 bronchite, 1 pneumonie) vs 4 (8,5 %) témoins avec 6 EIG (4 pneumonies, 1 grippe, 1 infection à Pneumocystis jiroveci chez un patient recevant du méthotrexate et des glucocorticoïdes après être sorti de l'étude). La prolongation du traitement d'entretien des VAA avec du rituximab a permis de réduire significativement le taux de rechute. Les effets indésirables graves n'étaient pas plus fréquents chez les patients traités par rituximab. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

To describe characteristics and long-term outcomes of patients with microscopic polyangiitis (MPA), an antineutrophil cytoplasm antibody (ANCA)-associated small-vessel necrotizing vasculitis. MPA patients from the French Vasculitis Study Group Registry satisfying the European Medicines Agency algorithm were analyzed retrospectively. Characteristics at diagnosis, treatments, relapses and deaths were analyzed to identify factors predictive of death or relapse. Between 1966 and 2017, 378 MPA patients (median age 63.7 years) were diagnosed and followed for a mean of 5.5 years. At diagnosis, the main clinical manifestations included renal involvement (74%), arthralgias (45%), skin (41%), lung (40%) and mononeuritis multiplex (32%), with less frequent alveolar hemorrhage (16%), cardiomyopathy (5%) and severe gastrointestinal signs (4%); mean serum creatinine was 217 μmol/L. ANCA were detected in 298/347 (86%) patients by immunofluorescence and/or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Among the 293 patients with available ELISA specificities, 272 (92.8%) recognized myeloperoxidase and 13 (4.4%) proteinase-3. During follow-up, 131 (34.7%) patients relapsed and 78 (20.6%) died, mainly from infections. Respective 5-year overall and relapse-free survival rates were 84.2% and 60.4%. Multivariable analyses retained age >65 years, creatinine >130 μmol/L, severe gastrointestinal involvement and mononeuritis multiplex as independent risk factors for death. Renal impairment was associated with a lower risk of relapse. Non-renal manifestations and several risk factors for death or relapse were frequent in this nationwide cohort. While mortality was low, and mainly due to treatment-related complications, relapses remained frequent, suggesting that MPA management can be further improved. • This large cohort of MPA patients had a high prevalence of non-renal manifestations. • Age, renal insufficiency, gastrointestinal involvement and mononeuritis multiplex were risk factors for death. • Renal impairment was associated with a lower risk of relapse. • While mortality, mainly due to treatment-related complications, is rare, relapses remain frequent. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Le rituximab a démontré sa supériorité sur l'azathioprine dans le traitement de maintenance des vascularites associées aux ANCA (VAA) [1]. L'essai MAINRITSAN2 [2] a été conçu pour comparer un schéma de perfusion de rituximab « à la demande » au schéma de 5 perfusions de rituximab à dates fixes. Dans le bras « à la demande », les patients ont reçu une perfusion de 500 mg de rituximab lors de la randomisation, avec réinjection uniquement après la réapparition des lymphocytes CD19 ou des ANCA, ou une augmentation marquée du titre des ANCA, et ce tous les 3 mois jusqu'au 18e mois. Dans le bras « systématique », les patients ont reçu 500 mg de rituximab lors de la randomisation, puis à j14 et aux mois 6, 12 et 18. Les taux de rechute ne différaient pas significativement entre les 2 groupes à 28 mois. L'objectif de cette étude post-hoc était d'évaluer l'effet de l'abandon de la perfusion de 500 mg de rituximab à j14 sur les taux de rechutes précoces. Une analyse post-hoc des données de l'essai MAINRITSAN 2 a été réalisée. Les critères d'évaluation principaux étaient le taux de survie sans rechute aux mois 3, 6, 9 et 12 dans chaque bras de l'essai MAINRITSAN2. Les rechutes ont été définies comme une réapparition ou une aggravation des symptômes du VAA, c'est-à-dire un BVAS > 0. Nous avons effectué des analyses exploratoires en sous-groupes en fonction du traitement d'induction (cyclophosphamide ou rituximab) et du type de maladie (première poussée de VAA ou rechute). L'évolution des lymphocytes CD19 et des ANCA ont été analysées. Parmi les 161 patients inclus dans l'étude, le nombre de patients vivants sans rechute était 80/81 (99 %) à 3 mois, 78/81 (96 %) à 6 mois, 76/81 (94 %) à 9 mois et 76/81 (94 %) à 12 mois pour les patients recevant des perfusions de rituximab à j0 et j14 et 78/80 (98 %) à 3 mois, 75/80 (95 %) à 6 mois, 73/80 (91 %) à 9 mois, 72/80 (90 %) à 12 mois pour les patients recevant une seule perfusion à j0. Il n'y avait pas de différence entre les groupes. Que les patients aient reçu du cyclophosphamide ou du rituximab comme traitement d'induction ou le statut rechuteur ou non des patients n'ont pas modifié ces résultats. La déplétion lymphocytaire B était similaire dans les 2 bras. La suppression de la dose de 500 mg au jour 14 du traitement d'entretien de rémission n'a pas modifié le taux de survie sans récidive précoce, ce qui peut suggérer que cette perfusion puisse être supprimée. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Les données concernant l’efficacité et la tolérance des biothérapies (anti-TNFα, tocilizumab, rituximab et anakinra) chez des patients atteints de manifestations auto-immunes (MAI) et systémiques (S) associées aux syndromes myélodysplasiques (SMD) sont limitées. Patients et méthodes Étude rétrospective multicentrique française, ayant inclus 29 patients présentant une MAI et un SMD traités avec au moins une ligne de biothérapie. Les réponses (cliniques, biologiques et globales) ont été considérées comme complètes (amélioration complète des symptômes), partielles (> 50 % d’amélioration) ou absentes. Les données ont été recueillies avant et à la fin de chaque ligne des différents traitements, puis poolées et analysées en lignes de traitement pour comparer les réponses aux corticoïdes seuls, aux DMARDs et aux biothérapies. Résultats Vingt-neuf patients avec un âge médian de 66 ans (19–85) ont été inclus, 11 % de femmes. Les sous-types de SMD les plus fréquents étaient une LMMC (18 %), une AREB-1 (32 %), une CRDM (32 %), un syndrome 5q− (7 %). Le taux de blastes médullaires était 2 % (0–10), le caryotype était normal dans 12/24 (50 %) des cas avec un IPSS à 0,5 (0–1). Les MAI ou S associées étaient un rhumatisme inflammatoire (indifférencié et polyarthrite rhumatoïde dans 3 cas chacun [10 %]), une maladie de Behçet dans 2 cas (7 %), une vascularite cryoglobulinémique dans 2 cas (7 %), une artérite gigantocellulaire dans 1 cas (4 %), une polychondrite atrophiante dans 8 cas (30 %), un syndrome de Sweet dans 3 cas (10 %) et une vascularite inclassée dans 4 cas (14 %). Au cours du suivi médian de 3 ans (1,3–4,5), 116 lignes de traitements ont été utilisées : corticoïdes seuls 25 (24 %), DMARDs 30 (25 %), antagonistes du TNF-α 15 (15 %), anakinra 14 (14 %), rituximab 12 (10 %) et tocilizumab 9 (8 %). Le nombre médian de lignes était de 3 (1–9) et plus de 5 lignes ont été utilisées chez 13 (46 %) patients. Un traitement spécifique du SMD (azacytidine) a été utilisé pour des MAI chez 10 patients (9 %). La réponse globale (complète et partielle) était obtenue dans 54 cas (58 %). En comparant les traitements, la réponse globale a été notée dans 19/23 cas (78 %) sous corticoïdes, 8/12 cas (66 %) sous rituximab versus 8/21 (45 %) sous DMARD et 11/31 (33 %) sous anti-TNF-a, tocilizumab et anakinra. L’azacytidine a permis une réponse chez 4/6 patients évaluables. Une corticodépendance était notée chez 25 patients (86 %) avec une moyenne de 27 mg de prednisone/j (10–120). Les anti-TNF-α ont montré une efficacité sur les manifestations articulaires dans 4 cas sur 6. Au cours du suivi, 20 patients (71 %) ont présenté au moins une infection grave et 11 une réaction à la perfusion conduisant à l’arrêt du traitement dans 7 cas. Conclusion Cette étude nationale montre l’efficacité des corticoïdes dans les MAI associées aux SMD mais avec une corticodépendance fréquente. La réponse globale aux biothérapies est mauvaise, en dehors du rituximab. L’efficacité de l’azacytidine dans ces manifestations pourrait justifier son utilisation indépendamment des indications hématologiques. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction La corticothérapie permet la mise en rémission chez la plupart des patients atteints de vascularite nécrosante systémique sans facteur de mauvais pronostic selon le Five-Factor Score 1996 (FFS comprenant créatininémie >140 μmol/L, protéinurie >1 g/24 h, atteinte spécifique gastro-intestinale, cardiaque ou du système nerveux central). Cependant, plus d’un tiers d’entre eux rechute, essentiellement pendant les deux premières années d’évolution de la vascularité. L’objectif de cette étude était de déterminer si l’association d’azathioprine et de corticothérapie permettait d’augmenter le taux de mise en rémission et de diminuer le taux de rechute ultérieure, par rapport à une corticothérapie seule, chez des patients ayant une granulomatose éosinophilique avec polyangéite, une polyangéite microscopique ou une périartérite noueuse, nouvellement diagnostiquée et de bon pronostic, sans augmenter les effets indésirables. Patients et méthodes Dans cette étude prospective, multicentrique, randomisée en double aveugle, tous les patients ont reçu une corticothérapie initialement à 1 mg/kg/j, puis progressivement interrompue en 12 mois (les patients asthmatiques étaient autorisés à décroître la corticothérapie jusqu’à la posologie minimale nécessaire contrôlant les symptômes respiratoires) et ont été randomisés pour recevoir parallèlement 12 mois de placebo ou d’azathioprine per os (2 mg/kg/jour). Les patients ont été suivis pendant 12 mois supplémentaires. Le critère principal d’évaluation était le taux de mise en rémission sans rechute ultérieure (mineure ou majeure) à 24 mois. Les analyses ont été faites en intention de traiter modifiée et ajustées selon la vascularite. Résultats Parmi les 101 patients éligibles, 9 5 (51 atteints de granulomatose éosinophilique avec polyangéite, 25 de polyangéite microscopique, 19 de périartérite noueuse) remplissaient les critères d’inclusion et ont reçu au moins une dose d’ azathioprine ( n = 46) ou de placebo ( n = 49). Le critère principal de mise en rémission sans rechute ultérieure à M24 était atteint chez 24 patients (52,2 %) recevant le traitement contre 25 (51,0 %) patients ayant reçu le placebo ( odds ratio [OR] 0,93 ; [IC 95 %, 0,40–2,17]). Les critères secondaires d’évaluation étaient aussi comparables dans les deux groupes : taux de mise en rémission initiale (95,7 % contre 87,8 % ; OR 2,71 [0,44–16,71]) ou nombre de patients avec rechute mineure (30,2 % contre 28,5 %) ou majeure (11,6 % contre 11,9 %) (OR 1,28 [0,52–3,13]). Deux patients (4,1 %) du groupe recevant l’azathioprine sont décédés à M11 (1 mort subite en rémission complète, 1 insuffisance cardiaque à l’âge de 86 ans). La posologie moyenne ou cumulative et l’aire sous la courbe de la corticothérapie étaient également comparables entre les groupes. Au moins 1 effet secondaire sévère lié au traitement est survenu chez 8 (17,4 %) patients recevant le traitement par azathioprine contre 3 (6,1 %) ayant reçu le placebo (OR 3,23 [0,76–13,70]). Pour les patients atteints de granulomatose éosinophilique avec polyangéite, aucune différence n’a été mise en évidence entre les deux bras pour le critère principal d’évaluation et pour le nombre de patients ayant une exacerbation de l’asthme et/ou des manifestations rhino-sinusiennes. Conclusions L’adjonction d’azathioprine à la corticothérapie par rapport à une corticothérapie seule ne permet pas d’augmenter le taux de mise en rémission ou de diminuer le taux de rechute, n’a pas d’effet d’épargne cortisonée chez des patients avec une vascularite nécrosante systémique sans facteur de sévérité, et ne réduit pas les exacerbations d’asthme/rhino-sinusiennes au cours de la granulomatose éosinophilique avec polyangéite. Financement L’essai CHUSPAN2 a été financé par le ministère de la Santé (PHRC P060243) et promu par l’AP–HP ; ClinicalTrials.gov NCT00647166. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction L’efficacité du rituximab dans les vascularites associées aux ANCA (VAA) ne résulte probablement pas simplement de la suppression des cellules productrices d’auto-anticorps. Peu de données sont disponibles concernant l’effet du rituximab sur les cellules T dans ces maladies. Matériels et méthodes Nous avons analysé par cytométrie en flux polychromatique les compartiment T CD4, Treg et CD8 de 53 patients atteints de VAA afin de comparer l’effet du rituximab et des immunosuppresseurs. La production de cytokines/chemokines des cellules CD8 stimulées in vitro a été étudiée par dosage multiplex. Résultats Dans les CD4 nous n’avons pas observé de différences entre sujets sous immunosuppresseurs ou sous rituximab en termes de fréquence des sous-populations naïves/mémoires ou d’expression de marqueurs Th1 (CCR5), Th2 (CCR4) ou Th17 (CD161). De même, la fréquence des Treg et de leurs sous-populations CD161+, Helios+, naïves (CD45RA+) et mémoire (CD45RA-FoxP3++) était similaire dans les deux groupes. À l’inverse, les immunosuppresseurs et le rituximab avaient des effets opposés sur les cellules CD8 : le rituximab inhibe l’expansion des cellules CD8 hautement différentiées, dites TEMRA (CD45RA+CCR7−) alors que les immunosuppresseurs ont l’effet inverse. De plus, les CD8 de patients sous rituximab produisent moins de cytokines/chimiokines que ceux en poussée ou en rémission sous immunosuppresseurs. Conclusion Le rituximab a un impact net sur le compartiment CD8. Compte tenu des données récentes concernant la valeur pronostique du transcriptome des CD8 [1] ceci pose la question du lien entre cellules B et cellules CD8 dans l’entretien de la maladie. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Introduction Depuis les années 1990 les cellules T CD4 hautement différentiées (CD28- et/ou TEMRA) sont considérées comme des sources de cytokines pro-inflammatoires impliquées dans la physiopathologie des vascularites à ANCA, en particulier dans la GPA. Des données récentes montrent que ces cellules s’observent chez les patients CMV+ [1] . L’objectif de ce travail était d’étudier le lien éventuel entre le statu CMV et/ou l’expansion des TEMRA et la présentation clinico-biologique initiale des VAA, et d’autre part, d’évaluer l’influence du statu CMV sur le pronostic à long terme des patients (survie globale, taux de rechute, risque infectieux). Patients et méthodes Nous avons étudié de façon rétrospective la présentation clinique et l’évolution de patients atteints de VAA de type GPA ou MPA (classification EMA) en fonction du statu CMV. L’échec thérapeutique était défini comme une intensification thérapeutique survenant après plus de 4 semaines de corticothérapie d’une non réponse, d’une aggravation, ou d’une rechute. Les infections sévères étaient définies par la nécessité d’une hospitalisation avec antibiothérapie intraveineuse. Le phénotype T CD4 et CD8 a été étudié par cytométrie chez 20 patients en poussée vierges de tout traitement, dont 18 au diagnostic. Les TEMRA étaient définies comme CCR7-CD45RA+. Résultats Soixante-huit patients ont été étudiés. L’âge médian était de 65 ans. Quarante-cinq pour cent des patients présentaient une GPA et 55 % étaient séropositifs pour le CMV. De façon attendue les patients CMV+ étaient plus âgés (73 vs 61 ans, p = 0,005). Le phénotype clinico-biologique au diagnostic, le BVAS et la créatininémie maximale initiale étaient comparables dans les deux groupes. Chez les 20 patients en poussée sans traitement le taux de TEMRA était significativement plus élevé chez les patients CMV+ où il augmentait avec l’âge. Aucune corrélation n’était mise en évidence entre le taux de TEMRA et la gravité initiale de la maladie (BVAS, créatininémie). En analyse univariée les patients CMV+, plus âgés, avaient un risque de mortalité augmenté et un sur-risque infectieux dans le sous-groupe de patients traités par Endoxan puis traitement d’entretien conventionnel. Cependant, dans un modèle à risques compétitifs (Gray) et en analyse multivariée (Cox) le statu CMV n’avait pas d’impact pronostic indépendant sur la mortalité ou le taux de rechute. En analyse multivariée les deux principaux facteurs associés au risque infectieux était l’âge et l’évolution vers l’insuffisance rénale terminale. Conclusion Nos données confirment que l’infection latente par le CMV induit l’expansion de TEMRA chez certains patients atteints de VAA [1] . Cependant le statu CMV n’a pas d’impact net sur la présentation initiale ni sur le devenir des patients. Des études plus larges sont nécessaires afin de déterminer si le CMV a un effet chez les patients les plus âgés et/ou si le pronostic dépend des caractéristiques de la réponse anti-CMV et non de la simple séropositivité. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

High-dose levofloxacin was explored in a clinical trial against multidrug-resistant tuberculosis and failed to show increased efficacy. In this study, we used a murine model to explore the efficacy of a dose increase in levofloxacin monotherapy beyond the maximum dose evaluated in humans. A total of 120 4-week-old female BALB/c mice were intravenously infected with 10 6 CFU of Mycobacterium tuberculosis H37Rv wild-type (WT) or isogenic H37Rv mutants harboring GyrA A90V or D94G substitutions; the MICs were 0.25, 4, and 6 µg/mL, respectively. Levofloxacin 250 and 500 mg/kg were given every 12 h (q12h) orally for 4 weeks. Pharmacokinetic parameters were determined after five doses. These two regimens decreased lung bacillary load in mice infected with H37Rv WT but not in mice infected with the A90V and D94G mutants. Levofloxacin 250 mg/kg q12h in mice generated pharmacokinetic parameters equivalent to 1,000 mg/d in humans, whereas 500 mg/kg q12h generated a twofold greater exposure than the highest equivalent dose tested in humans (1,500 mg/d). In our dose-response model, the effective concentration at 50% (EC 50 ) produced an AUC/MIC (AUC 0-24h /MIC) ratio of 167.9 ± 27.5, and at EC 80 it was 281.2 ± 97.3. Based on this model, high-dose levofloxacin regimens above 1,000 mg/d are not expected to cause a significant increase in bactericidal activity. This study suggests no benefit of high-dose levofloxacin above 1,000 mg/d in the treatment of fluoroquinolone-susceptible or -resistant tuberculosis., Competing Interests: The authors declare no conflict of interest.

Mycobacterium abscessus (MABS) displays differential subspecies susceptibility to macrolides. Thus, identifying MABS's subspecies (M. abscessus, M. bolletii and M. massiliense) is a clinical necessity for guiding treatment decisions. We aimed to assess the potential of Machine Learning (ML)-based classifiers coupled to Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight (MALDI-TOF) MS to identify MABS subspecies. Two spectral databases were created by using 40 confirmed MABS strains. Spectra were obtained by using MALDI-TOF MS from strains cultivated on solid (Columbia Blood Agar, CBA) or liquid (MGIT®) media for 1 to 13 days. Each database was divided into a dataset for ML-based pipeline development and a dataset to assess the performance. An in-house programme was developed to identify discriminant peaks specific to each subspecies. The peak-based approach successfully distinguished M. massiliense from the other subspecies for strains grown on CBA. The ML approach achieved 100% accuracy for subspecies identification on CBA, falling to 77.5% on MGIT®. This study validates the usefulness of ML, in particular the Random Forest algorithm, to discriminate MABS subspecies by MALDI-TOF MS. However, identification in MGIT®, a medium largely used in mycobacteriology laboratories, is not yet reliable and should be a development priority., (© 2024 The Author(s). Microbial Biotechnology published by John Wiley & Sons Ltd.)

Clostridioides difficile (CD) infections are defined by toxins A (TcdA) and B (TcdB) along with the binary toxin (CDT). The emergence of the 'hypervirulent' (Hv) strain PR 027, along with PR 176 and 181, two decades ago, reshaped CD infection epidemiology in Europe. This study assessed MALDI-TOF mass spectrometry (MALDI-TOF MS) combined with machine learning (ML) and Deep Learning (DL) to identify toxigenic strains (producing TcdA, TcdB with or without CDT) and Hv strains. In total, 201 CD strains were analysed, comprising 151 toxigenic (24 ToxA + B + CDT + , 22 ToxA + B + CDT + Hv + and 105 ToxA + B + CDT - ) and 50 non-toxigenic (ToxA - B - ) strains. The DL-based classifier exhibited a 0.95 negative predictive value for excluding ToxA - B - strains, showcasing accuracy in identifying this strain category. Sensitivity in correctly identifying ToxA + B + CDT - strains ranged from 0.68 to 0.91. Additionally, all classifiers consistently demonstrated high specificity (>0.96) in detecting ToxA + B + CDT + strains. The classifiers' performances for Hv strain detection were linked to high specificity (≥0.96). This study highlights MALDI-TOF MS enhanced by ML techniques as a rapid and cost-effective tool for identifying CD strain virulence factors. Our results brought a proof-of-concept concerning the ability of MALDI-TOF MS coupled with ML techniques to detect virulence factor and potentially improve the outbreak's management., (© 2024 The Authors. Microbial Biotechnology published by John Wiley & Sons Ltd.)

We describe a case of healthcare-associated bloodstream infection due to Mycobacterium fortuitum . Whole-genome sequencing showed that the same strain was isolated from the shared shower water of the unit. Nontuberculous mycobacteria frequently contaminate hospital water networks. Preventative actions are needed to reduce the exposure risk for immunocompromised patients.

Identifying fungal clones propagated during outbreaks in hospital settings is a problem that increasingly confronts biologists. Current tools based on DNA sequencing or microsatellite analysis require specific manipulations that are difficult to implement in the context of routine diagnosis. Using deep learning to classify the mass spectra obtained during the routine identification of fungi by MALDI-TOF mass spectrometry could be of interest to differentiate isolates belonging to epidemic clones from others. As part of the management of a nosocomial outbreak due to Candida parapsilosis in two Parisian hospitals, we studied the impact of the preparation of the spectra on the performance of a deep neural network. Our purpose was to differentiate 39 otherwise fluconazole-resistant isolates belonging to a clonal subset from 56 other isolates, most of which were fluconazole-susceptible, collected during the same period and not belonging to the clonal subset. Our study carried out on spectra obtained on four different machines from isolates cultured for 24 or 48 h on three different culture media showed that each of these parameters had a significant impact on the performance of the classifier. In particular, using different culture times between learning and testing steps could lead to a collapse in the accuracy of the predictions. On the other hand, including spectra obtained after 24 and 48 h of growth during the learning step restored the good results. Finally, we showed that the deleterious effect of the device variability used for learning and testing could be largely improved by including a spectra alignment step during preprocessing before submitting them to the neural network. Taken together, these experiments show the great potential of deep learning models to identify spectra of specific clones, providing that crucial parameters are controlled during both culture and preparation steps before submitting spectra to a classifier.

This study aimed to evaluate the contribution of Machine Learning (ML) approach in the interpretation of intercalating dye-based quantitative PCR (IDqPCR) signals applied to the diagnosis of mucormycosis. The ML-based classification approach was applied to 734 results of IDqPCR categorized as positive (n = 74) or negative (n = 660) for mucormycosis after combining "visual reading" of the amplification and denaturation curves with clinical, radiological and microbiological criteria. Fourteen features were calculated to characterize the curves and injected in several pipelines including four ML-algorithms. An initial subset (n = 345) was used for the conception of classifiers. The classifier predictions were combined with majority voting to estimate performances of 48 meta-classifiers on an external dataset (n = 389). The visual reading returned 57 (7.7%), 568 (77.4%) and 109 (14.8%) positive, negative and doubtful results respectively. The Kappa coefficients of all the meta-classifiers were greater than 0.83 for the classification of IDqPCR results on the external dataset. Among these meta-classifiers, 6 exhibited Kappa coefficients at 1. The proposed ML-based approach allows a rigorous interpretation of IDqPCR curves, making the diagnosis of mucormycosis available for non-specialists in molecular diagnosis. A free online application was developed to classify IDqPCR from the raw data of the thermal cycler output ( http://gepamy-sat.asso.st/ )., (© 2022. The Author(s).)

Background: Despite the fact that carbapenem-resistant Enterobacterales (CRE) mostly cause urinary tract infections (UTIs), only few studies have focused on the efficacity of mecillinam against these CRE., Objectives: To evaluate the mecillinam susceptibility of a huge collection of CRE, including carbapenemase-producing Enterobacterales (CPE) and non-CPE (ESBL and AmpC producers with decreased permeability of the outer membrane)., Methods: A total of 8310 non-duplicate clinical CRE, including 4042 OXA-48-like producers, 1094 NDM producers, 411 VIM producers, 174 KPC producers, 42 IMI producers, 153 multiple-carbapenemase producers and 45 isolates producing other types of carbapenemases (such as IMP-like enzymes or GES-5), were included in the study. WGS was performed on all CPE using Illumina technology. Categorization of susceptibility to mecillinam was performed using disc diffusion (mecillinam discs at 10 μg; I2A, France) according to EUCAST recommendations. The results were interpreted according to EUCAST guidelines (S ≥15 mm)., Results: Significantly higher susceptibility rates were observed for carbapenem-resistant Proteus spp. (85%) and carbapenem-resistant Escherichia coli (84%), which are the two most common species responsible for UTIs, than for Klebsiella pneumoniae (67%), Enterobacter cloacae complex (75%), Citrobacter spp. (65%), Serratia spp. (34%) and Morganella morganii (12%). Susceptibility rates were 84%, 71% and 91% for OXA-48-like, NDM and IMI producers and 70% for non-CPE CRE. Mecillinam was less active against VIM and KPC producers (14% and 0%, respectively)., Conclusions: Mecillinam might be an alternative for the treatment of infections due to CRE, particularly UTIs, except for VIM and KPC producers and for M. morganii and Serratia spp species., (© The Author(s) 2022. Published by Oxford University Press on behalf of British Society for Antimicrobial Chemotherapy.)

Meningitis/encephalitis (ME) syndromic diagnostic assays can be applied for the rapid one-step detection of the most common pathogens in cerebrospinal fluid (CSF). However, the comprehensive performance of multiplex assays is still under evaluation. In our multisite university hospital of eastern Paris, France, ME syndromic testing has been gradually implemented since 2017 for patients with neurological symptoms presenting to an adult or pediatric emergency unit. We analyzed the results from the BioFire FilmArray ME panel versus standard routine bacteriology and virology techniques, together with CSF cytology and clinical data, over a 2.5-year period to compare the diagnostic accuracy of the FilmArray ME panel to that of the reference methods. In total, 1,744 CSF samples from 1,334 pediatric and 336 adult patients were analyzed. False-positive (mostly bacterial) and false-negative (mostly viral) cases were deciphered with the help of clinical data. The performance of the FilmArray ME panel in our study was better for bacterial detection (specificity >99%, sensitivity 100%) than viral detection (specificity >99%, sensitivity 75% for herpes simplex virus 1 [HSV-1] and 89% for enterovirus), our study being one of the largest, to date, concerning enteroviruses. The use of a threshold of 10 leukocytes/mm 3 considerably increased the positive agreement between the results of the FilmArray ME panel and the clinical features, especially for bacterial pathogens, for which agreement increased from 58% to 87%, avoiding two-thirds of inappropriate testing. Based on this analysis, we propose an algorithm for the use of both syndromic and specific assays for the optimal management of suspected meningitis/encephalitis in adult and pediatric patients. IMPORTANCE Based on our comparative analysis of performances of the diagnostic assays, we propose an algorithm for the use of both syndromic and specific assays, for an optimal care of the meningitis/encephalitis threat in adult and pediatric patients.

PCR-based methods applied to various body fluids emerged in recent years as a promising approach for the diagnosis of mucormycosis. In this study, we set up and assess the value of a qPCR to detect a wide variety of Mucorales species in a single tube. A pair of degenerated primers targeting the rDNA operon was used in a qPCR utilizing an intercalating fluorescent dye. Analytical assessment, using a wide variety of both Mucorales strains (8 genera, 11 species) and non-Mucorales strains (9 genera, 14 species), showed 100% sensitivity and specificity rates with a limit of detection at 3 rDNA copy/qPCR reaction. Subsequently, 364 clinical specimens from 166 at-risk patients were prospectively tested with the assay. All the seven patients classified as proven/probable mucormycosis using the EORTC-MSG criteria had a positive qPCR as well as a patient with a proven uncharacterized invasive mold infection. In addition, three out of seven patients with possible mold invasive infections had at least one positive qPCR test. Sensitivity was calculated between 73.33 and 100% and specificity between 98.10 and 100%. The qPCR method proposed showed excellent performances and would be an important adjunctive tool for the difficult diagnosis of mucormycosis diagnosis., Lay Abstract: qPCR-based diagnosis is the most reliable approach for mucormycosis. We set up a pan-Mucorales qPCR able to detect in a single reaction not less than 11 different species. Both analytical and clinical performances support its use in the clinical setting., (© The Author(s) 2022. Published by Oxford University Press on behalf of The International Society for Human and Animal Mycology.)

Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is commonly used by clinical microbiology laboratories to identify pathogens, despite some limitations of the technique. The Enterobacter cloacae complex (ECC) taxonomy has recently been expanded, leading to uncertain identification of some species within the ECC when commercial MALDI-TOF MS is used. This technique is especially unsuited in the case of E. hormaechei , the main species responsible for infections and one of the most prone, within the ECC, to acquire antibiotic resistance. Hence, rapid and reliable identification at the species level could improve patient management. Here, we evaluated the performance of the Bruker Microflex MALDI-TOF MS instrument to identify ECC isolates using two databases and algorithms in comparison to the hsp60 gene sequencing reference method: the Bruker database included in the MALDI Biotyper software and an extensive online database coupled to an original Mass Spectrometric Identification (MSI) algorithm. Among a panel of 94 ECC isolates tested in triplicate, the online database coupled to MSI software allowed the highest rate of identification at the species level (92%) compared to the MALDI Biotyper database (25%), especially for the species E. hormaechei (97% versus 20%). We show that by creating a database of MALDI-TOF reference spectral profiles with a high number of representatives associated with the performant MSI software, we were able to substantially improve the identification of the E. cloacae complex members, with only 8% of isolates misidentified at the species level. This online database is available through a free online MSI application (https://msi.happy-dev.fr/). IMPORTANCE Creation of a database of MALDI-TOF reference spectral profiles with a high number of representatives associated with the performant MSI software enables substantial improvement in identification of E. cloacae complex members. Moreover, this online database is available through a free online MSI application (https://msi.happy-dev.fr/).

Background: The stability of biochemical analytes has already been investigated, but results strongly differ depending on parameters, methodologies, and sample storage times. We investigated the stability for many biochemical parameters after different storage times of both whole blood and plasma, in order to define acceptable pre- and postcentrifugation delays in hospital laboratories., Methods: Twenty-four analytes were measured (Modular® Roche analyzer) in plasma obtained from blood collected into lithium heparin gel tubes, after 2-6 hr of storage at room temperature either before (n = 28: stability in whole blood) or after (n = 21: stability in plasma) centrifugation. Variations in concentrations were expressed as mean bias from baseline, using the analytical change limit (ACL%) or the reference change value (RCV%) as acceptance limit., Results: In tubes stored before centrifugation, mean plasma concentrations significantly decreased after 3 hr for phosphorus (-6.1% [95% CI: -7.4 to -4.7%]; ACL 4.62%) and lactate dehydrogenase (LDH; -5.7% [95% CI: -7.4 to -4.1%]; ACL 5.17%), and slightly decreased after 6 hr for potassium (-2.9% [95% CI: -5.3 to -0.5%]; ACL 4.13%). In plasma stored after centrifugation, mean concentrations decreased after 6 hr for bicarbonates (-19.7% [95% CI: -22.9 to -16.5%]; ACL 15.4%), and moderately increased after 4 hr for LDH (+6.0% [95% CI: +4.3 to +7.6%]; ACL 5.17%). Based on RCV, all the analytes can be considered stable up to 6 hr, whether before or after centrifugation., Conclusion: This study proposes acceptable delays for most biochemical tests on lithium heparin gel tubes arriving at the laboratory or needing to be reanalyzed., (© 2016 Wiley Periodicals, Inc.)