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Saponins are glycosides regularly found in plants, and they are frequently analyzed by means of electrospray ion sources and tandem mass spectrometry (ESI/MSn), not only to obtain an overall molecular weight through the high sensitivity of mass spectrometry but also to obtain their structural information. The use of modern analytic techniques (such as ESI/MSn) aids the discovery and quality control assessment of new molecules found in botanicals; however, some rearrangements have been described for oligosaccharides that produce an incorrect elucidation of the molecules. For the first time, evidence for an internal sugar loss on the protonated fragmentation of a-hederin has been reported. This phenomenon can be avoided by using alkali metal ion adducts, such as lithium and sodium cations, to confirm the real sugar sequence when a structural identification is performed. In this study, the structural characterization of alpha-hederin and hederacoside C is conducted by comparing positive and negative modes. Different fragmentation patterns occur, and such patterns are useful in the structural analysis of saponins when they are present on different matrixes.

RESUMEN: La chalcona 1-(4-metil-fenil)-3-(2,3-dimetoxifenil)-2-propenona presentó actividad inhibitoria de tipo competitivo frente a la enzima ß-lactamasa P99 de Enterobacter cloacae. Tipo IV, la comparación de los parámetros cinéticos permitió comprobar el potencial inhibitorio del compuesto y la aplicación de la técnica de cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas (HPLC/ESI/IT/MS), permitió la determinación de la masa molecular de la enzima ß-lactamasa que es de 40096 Da, la masa molecular del complejo de inhibición ß-lactamasa/tazobactam de 40207.0 Da y la masa molecular de 40392.7 Da correspondiente al complejo de inhibición ß-lactamasa/chalcona. En el análisis del producto de la digestión con tripsina de la enzima se identificaron 12 fragmentos péptidicos, entre ellos el fragmento que contiene la serina catalítica con una masa molecular de 2300 Da. La masa molecular de este péptido se modificó debido a la unión covalente con el inhibidor de referencia tazobactam, registrándose aumentos de 322 y 300 Da, posterior a la formación del complejo de inhibición ß-lactamasa/tazobactam, se presentaron reacciones posteriores de deshidroxilación, descarboxilación y eliminación del tazobactam, las cuales generaron aumentos en la masa molecular del péptido del sitio activo, correspondientes a 284, 256, 232 Da y no habían sido previamente reportadas, finalmente se detectó un aumento de 52 Da, debido a la formación del fragmento propiolilado que coincide con el fragmento de inhibición en el mecanismo de reacción del tazobactam

A sensitive and selective liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) method for determination of ibudilast in rabbit plasma was developed and validated. After addition of estazolam as internal standard (IS), protein precipitation by acetonitrile was used as sample preparation, and chromatography involved Agilent SB-C18 column (2.1 mm x 50 mm, 3.5 μm) using 0.1 % formic acid in water and acetonitrile as a mobile phase with gradient elution. Detection involved positive ion mode electrospray ionization (ESI), and selective ion monitoring (SIM) mode was used for quantification of target fragment ions m/z 230.7 for ibudilast and m/z 294.7 for estazolam (internal standard, IS). The assay was linear over the range of 20-2000 ng/mL for ibudilast, with a lower limit of quantitation (LLOQ) of 20 ng/mL for ibudilast. Intra- and inter-day precisions were less than 15 % and the accuracies were in the range of 90.78 %- 105.60 % for ibudilast. This developed method was successfully applied for the determination of ibudilast in rabbit plasma for pharmacokinetic study, Colegio de Farmacéuticos de la Provincia de Buenos Aires

Carbohydrate-binding proteins of non-immunological origin -lectins- have been recognized over the last decades as decisive players in numerous biological processes, ranging from cellcell communication, fertilization, pathogen-cell adhesion to metastasis. Consequently, there is an increasing interest in finding powerful and nanosized tools to screen for these molecules and to study their carbohydrate interactions in detail. Here, two complementary approaches are described to characterize lectin-carbohydrate interactions with high sensitivity, low sample consumption, and without the need for sample labelling: SPR and CREDEX-MS. In SPR, we have developed an approach where the sugar is immobilized onto a sensor surface through a tailor-made peptide module that allows (1) to capture the lectin, (2) to characterize the interaction through kinetic and thermodynamic parameters, and (3) to identify the interacted protein by mass spectrometry. In CREDEX-MS, based on proteolytic excision of proteincarbohydrate complexes and mass spectrometric analysis, the peptides comforming the carbohydrate binding domain are identified., Las lectinas (proteínas de origen no inmune capaces de reconocer azúcares) se han revelado en las últimas décadas como participantes cruciales en multitud de procesos biológicos, tales como la comunicación célula-célula, la fertilización, la adhesión del patógeno a la célula y la metástasis, entre muchos otros. Por lo tanto, existe un gran interés en el desarrollo de técnicas analíticas potentes para el estudio de las interacciones lectina-carbohidrato. En este trabajo, se describen dos aproximaciones complementarias mediante las cuales se pueden caracterizar las interacciones lectinas-azúcar con gran sensibilidad, poca utilización de muestra y sin la necesitad de ningún marcaje. En la técnica basada en resonancia de plasmón superficial (SPR), el azúcar es inmovilizado sobre una superficie a través de un módulo peptídico, lo cual permite (1) capturar la lectina, (2) caracterizar su interacción mediante parámetros cinéticos y termodinámicos y (3) identificar posteriormente la proteína mediante espectrometría de masas. Complementariamente, la técnica CREDEX-MS, basada en la excisión proteolítica del complejo proteína-azúcar y posterior análisis por espectrometría de masas, nos permite identificar los péptidos que forman parte del dominio de unión al azúcar.

Se estudió la formación de r,2',5'-trimetilespiro[pirrolidin-2,4'-piperidinasJ a partir de sus correspondientes l,2,5-trimetil-4-alil-4-aminopiperidinas en condiciones de la reacción de aminomercuración. Los productos formados se aislaron por cromatografía en columna sobre alúmina (ALO,) y sus estructuras se establecieron por medio del análisis espectroscópico ( IR, RMN 'H y espectrometría de masas).

231 Pag., Tabl., Fig. Esta Tesis Doctoral ha sido escrita en la modalidad de compendio de trabajos previamente publicados o aceptados para su publicación y consta de las siguientes publicaciones: 1. Orera Irene, Abadía Javier, Abadía Anunciación, Álvarez-Fernández Ana. Analytical technologies to study the biological and environmental implications of iron-fertilisation using synthetic ferric chelates: the case of Fe(III)-EDDHA – a review. Journal of Horticultural Science and Biotechnology (2009) 84(1): 7-12. 2. Álvarez-Fernández Ana*, Orera Irene*, Abadía Javier, Abadía Anunciación. Determination of synthetic ferric chelates used as fertilizers by liquid Chromatography- Electrospray/Mass Spectrometry in agricultural matrices. Journal of the American Society for Mass Spectrometry (2007) 18: 37-47. 3. Orera Irene, Abadía Anuciación, Abadía Javier, Álvarez-Fernández Ana. Determination of o,oEDDHA -a xenobiotic chelating agent used in Fe-fertilizers- in plant tissues by liquid chromatography-electrospray mass spectrometry: overcoming matrix effects. Rapid Communications in Mass Spectrometry (2009) 23:1694-1702. DOI:10.1002/rcm.4056. 4. Orera Irene, Orduna Jesús, Abadía Javier, Álvarez-Fernández Ana. Electrospraycollision- induced dissociation mass spectrometry: a tool to characterize synthetic polyaminocarboxylate ferric chelates used as fertilizers. Rapid Communications in Mass Spectrometry (2010) 24(1):109-119. DOI: 10.1002/rcm.4361. 5. Orera Irene, Rodríguez-Castrillón Jose Ángel, Moldovan Mariella, García-Alonso Jose Ignacio, Abadía Anunciación, Abadía Javier, Álvarez-Fernández Ana. Using a dualstable isotope tracer method to study the uptake, xylem transport and distribution of Fe and its chelating agent from stereoisomers of a xenobiotic Fe(III)-chelate used as fertilizer in Fe-deficient Strategy I plants. Metallomics (enviado)., Los fertilizantes a base de quelatos férricos sintéticos son xenobióticos de elevado precio comúnmente utilizados para corregir o prevenir uno de los desórdenes nutricionales más habituales de las plantas, la deficiencia de Fe. De todos los quelatos férricos sintéticos que se comercializan en el mercado, aquellos basados en el quelato Fe(III)-o,oEDDHA son los más utilizados, sobre todo en cultivos de alto valor añadido crecidos sobre suelos calizos como los de Aragón. El uso de quelatos sintéticos con fines agrícolas o industriales está siendo cuestionado en la actualidad, ya que son difícilmente degradables, muy persistentes en el medio ambiente y pueden alterar el equilibrio natural de los metales (nutrientes o tóxicos) en el suelo. Los estudios sobre el efecto de los quelatos férricos sintéticos en el medio ambiente y su mecanismo de acción son aún escasos, debido a la falta de metodologías analíticas capaces de determinar concentraciones muy bajas de estos compuestos en matrices tan complejas como el sistema suelo-planta. Los equipos de espectrometría de masas ofrecen alta sensibilidad, selectividad y versatilidad en el análisis de compuestos químicos tanto a nivel atómico como molecular. Por este motivo, en esta Tesis Doctoral hemos apostado por esta técnica para desarrollar y validar un método analítico que permita determinar de manera directa y simultánea los principales quelatos férricos sintéticos usados como fertilizantes. Este método además permite cuantificar los quelatos en fertilizantes comerciales y matrices agrícolas líquidas como la solución del suelo, solución nutritiva, agua de riego y savia de xilema. Igualmente, se ha desarrollado otro método analítico de espectrometría de masas para determinar dos agentes quelantes de Fe(III), racémico y meso o,oEDDHA, en distintos tejidos (raíces, hojas, savia de xilema y fruto) y especies vegetales (tomate, remolacha y melocotonero) con muy alta selectividad y sensibilidad. La elección del estándar interno ha sido un factor crítico en el desarrollo de este método. Los quelatos marcados con isótopos estables de Fe no han resultado ser adecuados como estándares internos para esta aplicación, sin embargo, un análogo estructural, el compuesto metilado del o,oEDDHA, ha resultado satisfactorio., Los patrones de fragmentación de la mayoría de los quelatos férricos sintéticos utilizados como fertilizantes han sido descritos en esta Tesis Doctoral utilizando la técnica de espectrometría de masas en tándem. En general, los iones producto más intensos correspondieron a descarboxilaciones, a excepción de los quelatos Fe(III)-CDTA, Fe(III)-o,pEDDHA, Fe(III)-EDDCHA y Fe(III)-EDDHSA, en los que correspondieron a pérdidas en el anillo. Cuando los espectros se obtuvieron con un analizador de masas QTOF, se consiguió diferenciar entre isómeros posicionales como el Fe(III)-o,oEDDHA y el Fe(III)-o,pEDDHA. La espectrometría de masas en tándem ha sido utilizada también para proponer las identidades de dos compuestos de Fe desconocidos presentes en un fertilizante comercial a base del quelato férrico Fe(III)-EDDHA. Estos compuestos han resultado ser también quelatos férricos con una estructura similar a la del Fe(III)-EDDHA, derivados, probablemente, de impurezas de los reactivos de partida en la síntesis del agente quelante. Por último el marcaje diferencial con dos isótopos estables de Fe (54Fe y 57Fe) de los dos fertilizantes, racémico y meso Fe(III)-o,oEDDHA, ha resultado ser una herramienta de gran utilidad para estudios de nutrición de hierro en plantas, incluyendo absorción, transporte y distribución del Fe aportado. Los resultados de este trabajo muestran que el fertilizante meso Fe(III)-o,oEDDHA es dos veces más eficiente suministrando Fe que el racémico Fe(III)-o,oEDDHA en plantas de remolacha deficientes en Fe crecidas en hidroponía. Este hecho puede ser explicado por la mayor eficiencia de la enzima quelato reductasa en la reducción del meso Fe(III)-o,oEDDHA, que fue dos veces superior a la mostrada con el racémico Fe(III)-o,oEDDHA. Los agentes quelantes racémico y meso o,oEDDHA son rápidamente absorbidos por las plantas de remolacha deficientes en Fe, encontrándose cantidades significativas en todos los tejidos después de sólo 3 horas de tratamiento. Además, ambos agentes quelantes son absorbidos y distribuidos en una relación 1:1 en plantas de remolacha deficientes en Fe, siendo la cantidad de los mismos un orden de magnitud menor que la de Fe en todos los tejidos analizados. Este hecho indica que, aunque la mayoría del Fe se absorbe a través de un mecanismo que implica la disociación del quelato férrico, una pequeña parte puede ser tomado mediante mecanismos que no incluyen disociación., Esta tesis ha sido financiada por los proyectos de investigación AGL2006-1416 y AGL2007-61948 del Ministerio de Ciencia en Innovación (MICINN) y el proyecto ISAFRUIT No.FP6-FOOD-CT-2006-016279 de la Comunidad Europea. Irene Orera Utrilla ha sido financiada por una beca predoctoral CONAID-DGA del Gobierno de Aragón. Las estancias en centros de investigación fuera de Aragón han sido financiadas por el Programa Europa de la Caja de Ahorros de la Inmaculada.

[cat] La presència de contaminants en el medi ambient i en els aliments és un tema d’important interès social que ha adquirit relevància en els últims anys. Entre els compostos que han suscitat més interès cal citar els que poden interferir amb el sistema endocrí dels éssers vius i que es coneixen amb el nom d’alteradors endocrins (endocrine disruptors, EDs). El motiu de preocupació es deu a l’observació d’efectes adversos en els éssers vius com són l’augment en la incidència de certes malalties en humans i alteracions en el sistema reproductor d’animals. Entre aquests compostos hom pot citar entre d’altres alguns pesticides i herbicides, els productes de degradació dels alquilfenols polietoxilats, certs productes farmacèutics i plastificants. La majoria d’aquests contaminants no estan encara regulats però són considerats contaminants emergents candidats a formar part en el futur de les llistes de compostos legislats. La seva inclusió en aquestes llistes depèn dels resultats dels estudis toxicològics i del seu potencial efecte sobre la salut. D’entre els alteradors endocrins en aquesta memòria s’ha estudiat el Bisfenol A (BPA) compost àmpliament utilitzat a la industria plàstica. L’elevada producció i utilització d’aquest compost fa que es trobi en el medi ambient i de fet, ha estat un compost força estudiat en els darrers anys. Atès que avui dia aquest compost comença a ser substituit per altres bisfenols (BPs) d’estructures similars és important desenvolupar metodologia anàlitica per a l’anàlisi d’aquests nous compostos. Un aspecte de la contaminació alimentària a la qual s’ha prestat relativament poca atenció és a la presència de contaminants que provenen de materials susceptibles d’entrar en contacte amb els aliments, com són els envasos, els utensilis de cuina, la maquinària emprada a la industria alimentària o els contenidors industrials. A la industria alimentaria s’utilitzen un seguit de materials com plàstics, cel•lulosa regenerada, paper i cartró (P&C), vidre, materials ceràmics, elastòmers, metalls, fusta, ceres, etc, i encara que aquests materials es formulen de manera que presentin unes propiètats físico-químiques adequades per protegir els aliments de canvis ambientals, químics i físics, petites quantitats dels constituents d’aquests materials poden migrar als aliments degut al contacte directe. Exemples de compostos que poden migrar cap als aliments són el propi bisfenol A així com els altres bisfenols i compostos relacionats emprats en la síntesi de les resines epoxi utilitzades per exemple en els recubriments de les llaunes de conserva. A més de la migració de contaminants deguda al contacte directe entre l’aliment i el material que els conté també es poden trobar als aliments altres components dels materials. Entre aquests compostos es poden citar els utilitzats en les tintes d’impressió dels empaquetaments. En aquesta memòria s’estudien els fotoiniciadors utilitzats en les tintes UV. En aquesta Tesi s’ha desenvolupat metodologia analítica basada en la cromatografia de líquids acoblada a l’espectrometria de masses en tàndem (LC-MS/MS) per a l’anàlisi de compostos àmpliament utilitzats en la fabricació d’envasos per a la industria alimentària com són el bisfenol A i compostos relacionats que s’utilitzen com a material de partida en la producció de plàstics i resines epoxi i els fotoiniciadors addicionats les tintes UV utilitzades en la impressió dels envasos., [eng] Food matrices are complex mixtures consisting of naturally found compounds, such as carbohydrates, lipids, proteins, vitamins, phenolic compounds and organic acids. On the other hand, compounds such as pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons, chlorinated and brominated compounds, veterinary drugs, toxins, migrants from containers, metals and inorganic compounds may also be present and need to be monitored. Strict regulations apply for many of these compounds, expressed by maximum residues levels (MRLs) and specific migration levels (SMLs). In order to comply with these regulations, highly selective and sensitive analytical methods are required to identify, confirm and quantify the targeted compounds. On the other hand, special attention may be taken into account on food packaging materials although the amount of material migrating from food packaging into food may well be 100 times higher than the pesticides or environmental pollutants contribution. Moreover, it is difficult to compare the toxicity (primarily acute) of well-controlled pesticides with the potential (primarily chronic) toxicity of frequently not even identified compounds entering food from packaging materials. Despite the efforts on food legislation and regulation, food safety incidents occasionally occur and can originate from different sources such as both microbial and chemical contaminants. On the last decade, some food safety incidents have been directly related to packaging materials such as the alert for food contamination by UV ink photoinitiators on November 2005 in Europe. The Italian Food Control Authority detected that the photoinitiator 2-isopropylthioxanthone (2-ITX) migrated into baby milk at concentrations ranging from 120 to 300 µg L-1, resulting in the withdrawal from the market of more than 30 million liters of milk. In order to protect the consumer from potential food risk hazards risk analysis are mandatory, and for that purpose hazard identification, hazard characterization, exposure assessment and risk characterization are necessary. For these reasons in this thesis different analytical methods based in liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS) have been developed for the analysis of packaged food. The studied compounds have been bisphenol A and related compounds used in canned foods and polycarbonate plastics, as well as some UV ink photoinitiators such as ITX, BP, EHDAB, DEAB, HCPK, PBZ,… The increasing need in food and environmental applications to cope with a growing number of analyses in very complex matrices demands new analytical procedures sensitive and fast enough but maintaining high resolution within an acceptable total analysis time. The purpose of this review is to describe new trends on current methodologies based on fast liquid chromatography for food and environmental analysis. It includes different column technologies, such as monolithic columns, sub-2 µm particle size columns, porous shell particles columns, as well as different stationary phases such as reversed phase (C8 and C18), hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) and fluorinated ones. Additionally, recent sample treatments methodologies applied to reduce sample manipulation and total analysis time in food and environmental analysis - QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged and Safe), on line solid phase extraction coupled to ultra-performance liquid chromatography (on line SPE – UHPLC), turbo-flow chromatography (TFC) and molecular imprinted polimers (MIP), were also addressed. Some advantages but also drawbacks of many of these approaches focused in developing sensitive and fast chromatographic methods for food and environmental analysis and the way some authors solve them will also be discussed by means of some relevant applications. mention food packaging materials although the amount of material migrating from food packaging into food may well be 100 times higher than the pesticides or environmental pollutants contribution. Moreover, it is difficult to compare the toxicity (primarily acute) of well-controlled pesticides with the potential (primarily chronic) toxicity of frequently not even identified compounds entering food from packaging materials. Despite the efforts on food legislation and regulation, food safety incidents occasionally occur and can originate from different sources such as both microbial and chemical contaminants. On the last decade, some food safety incidents have been directly related to packaging materials such as the alert for food contamination by UV ink photoinitiators on November 2005 in Europe [3]. The Italian Food Control Authority detected that the photoinitiator 2-isopropylthioxanthone (2-ITX) migrated into baby milk at concentrations ranging from 120 to 300 µg L-1, resulting in the withdrawal from the market of more than 30 million liters of milk. In order to protect the consumer from potential food risk hazards risk analysis are mandatory, and for that purpose hazard identification, hazard characterization, exposure assessment and risk characterization are necessary. A very important prerequisite for performing risk assessment adequately is the presence of data generated by reliable and fit-for-purpose analytical methods to estimate the level of exposure and intake of the consumer to contaminants and residues. Focusing on contaminants coming from packaging materials regulation must also be coherent.

RESUMEN: Los azúcares son importantes moléculas que desempeñan funciones trascendentales de señalización celular en los organismos superiores. Su complejidad estructural, representada por sus isómeros, anómeros y diasterómeros, amerita la implementación de metodologías modernas, rápidas y sensibles para su iden tificación y diferenciación. La espectrometría de masas y su analizador de trampa de iones brinda nuevas alternativas de análisis que favorecen el control de las energías de fragmentación de los analitos. A pesar de que la diferenciación de estereoisómeros no ha sido el campo de aplicación principal de la espectrometría de masas, se ha implementado una metodología para diferenciar los monosácaridos β-D-galactosa y β-D glucosa y los disacáridos β-D-galactopiranosil-(1→4)-β-D-glucopiranósido (lactosa), α-D-glucopiranosil- (1→4)-β-D-glucopiranósido (maltosa) y β-D-fructofuranosil-(2↔1)-α-D-glucopiranósido (sacarosa) a través de sus aductos con amonio y litio por ESI-IT-MS/MS en infusión directa. Se emplean diferentes energías de fragmentación para asegurar la existencia de iones marcadores de la estereoquímica de los analitos. Se evidencia que controlar las energías de colisiones en el análisis estructural de moléculas provee una poderosa y moderna herramienta analítica para los laboratorios de análisis. ABSTRACT: Sugars are important molecules with remarkable cell signals pathway functions in higher organisms. The structural complexity of sugar represented by its isomeric, anomeric and diasteromeric configurations deserve the implementation of modern, rapid and sensitive methodologies for its identification and differen tiation. Mass spectrometry and its analyzer of ion trap provide new alternative techniques that encourage the control of the fragmentation energies supplied to molecules. Since stereoisomer differentiation is consider outside the mass spectrometry domain, a methodology has been applied in order to differentiate β-D-galactose, β-D-glucose and the disaccharides β-D-galactopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (lactose), α-D-glucopyranosyl-(1→4)-β-D-glucopyranoside (maltose) y β-D-fructofuranosyl-(2↔1)-α D-glucopyranoside (sacarose) trough its ammonium and lithium adducts by infusion on ESI-IT-MS/MS mass spectrometer. Different fragmentation energies have been used to ensure the ion marker occurrence in the analyte stereochemistry. It is evident that the collision energies control in structural analysis of molecules provides a powerful and modern analytical tool to be applied in control laboratories. COL0010359

The seed extracts of olive tree cultivars were analyzed by reverse phase HPLC with diode array detection and mass spectrometry. HPLC hyphenation with mass spectrometry (ESI source) in both polarity modes enabled the identification in olive seeds of nüzhenide and nüzhenide 11-methyl oleoside, among other 11-methyl oleosides, by means of MSn. The methods used allowed us to obtain olive seed profiles of phenolic components and to conclude that they are mainly secoiridoids. The quantification of detected phenolic secoiridoids was also achieved using ultraviolet detection (λ = 240 nm) which enabled comparison of the samples. Nüzhenide and nüzhenide 11-methyl oleoside were the major components detected in olive seeds of all the cultivars studied, but variations in individual components of olive seeds were verified among the cultivars. The results also support the existence of di and tri(11-methyl oleosides) of nüzhenide.Extractos de semillas de tres cultivos fueron analizados por HPLC en fase reversa con detector de diodos y espectrometría de masas. La unión del HPLC con la especrometría de masas (modo ESI) en ambas polaridades permitió la identificación de nuzenida y 11-metil oleósido de nuzenida entre otros 11-metil oleósidos. El método usado nos permitió obtener los perfiles de los compuestos fenólicos en las semillas de aceitunas y concluir que ellos son secoiridoides. La cuantificación de los secoiridoides fenólicos detectados fue también llevada a cabo usando detección por ultravioleta (λ = 240 nm) lo que permitió la comparación de las muestras. Nuzenida y el 11-metil oleósido de nuzenida fueron los principales componentes detectados en semillas de aceitunas en todos los cultivos estudiados, aunque variaciones en los componentes individuales de las semillas de aceitunas fueron verificados entre los cultivos. Los resultados también apoyan la existencia de di y tri(11-metil oleósidos) de nuzenida.

En la presente Tesis se pretende avanzar en el conocimiento del potencial que representa el acoplamiento cromatografía de gases-espectrometría de masas con analizadores de triple cuadrupolo y tiempo de vuelo como herramienta de avanzada en el análisis medioambiental y biológico. El trabajo se organiza en tres grandes bloques. En primer lugar, se investiga el uso de la técnica GC-MS/MS con analizador de triple cuadrupolo para el desarrollo de metodología analítica multirresidual que permita la cuantificación y confirmación de contaminantes orgánicos en aguas y en muestras de tejido adiposo mamario. En segundo lugar, se explora el potencial del acoplamiento GC-TOF MS para el desarrollo de métodos avanzados y rápidos de screening para un amplio rango de contaminantes. El trabajo se centra principalmente en aspectos cualitativos y de elucidación estructural, campos en donde la gran cantidad de información aportada por GC-TOF MS es fundamental, al permitir la correcta identificación de las especies detectadas. Por último, se combinan las técnicas GC-MS/MS y LC-MS/MS con triple cuadrupolo y tiempo de vuelo en estudios ambientales y toxicológicos In this Thesis the potential of coupling gas chromatography-mass spectrometry with triple quadrupole and time-of-flight analyzers is investigated as an advanced analytical technique in environmental and biological analysis.

El abuso de la sustancia conocida como Basuco representa una problemática latinoamericana de los países donde se realiza la extracción y refinamiento de la cocaína. El basuco tiene actualmente la mayor tasa de abusadores y dependientes en nuestro país proporcionalmente hablando respecto a otras drogas. En el Laboratorio de Toxicología de la Facultad de Medicina Universidad Nacional de Colombia se desarrolló una metodología analítica para la cuantificación de Cocaína en muestras de basuco y la identificación de compuestos relacionados bajo las condiciones de estudio, utilizando la técnica de cromatografía de gases con detector de espectrometría de masas de trampa iónica. De las 109 muestras analizadas se encontró la concentración de cocaína como base entre 4 y 70% p/p, con una media de 37%p/p. El 73% de las muestras tiene una concentración entre el 20 y 50% p/p. Otros alcaloides de coca como tropacocaína, transcinamoilcocaína, norcocaína y ecgonina metil ester fueron identificados. Se identifico cafeína en el 57% de las muestras y fenacetina en el 2.8% como adulterantes presentes. Se analiza la importancia toxicológica de los resultados para los consumidores de basuco quienes son principalmente consumidores crónicos / Abstract: The abuse of the substance known as Basuco represents a Latin American problematic of the countries where the extraction and refinement of the cocaine it is realised. The basuco at the moment has the greater rate of abusing and dependent proportionally speaking with respect to other drugs in our country. In the Laboratory of Toxicology of the Medicine Faculty National University of Colombia it was developed the analytical methodology for the Cocaine quantification in basuco samples and the identification of related compounds under the conditions of study, using the technique of gas chromatography with ion trap mass spectrometry detector . Of the 109 analyzed samples was the cocaine concentration as it bases between 4 and 70% w/w, with an average of 37%w/w. 73% of the samples have a concentration between 20 and 50% w/w. Other cocaine alkaloids as tropacocaíne, transcinamoilcocaine, norcocaine and ecgonine methyl ester were identified. The adulterants Caffein has been found in 57% of the samples and phenacetine in the 2,8%. The toxicological implications of the results has been analyzed for the basuco consumers who are mainly chronic consumers. Maestría

282 páginas.-- Tesis Doctoral del Departamento de Tecnología de Alimentos de la Universidad Politécnica de Valencia (UPV) y del Instituto de Agroquímica y Tecnología de Alimentos (IATA-CSIC).-- Fecha de lectura: 15 de Febrero de 2010, [Español]: Durante la última década se ha puesto de manifiesto la importancia de desarrollar nuevos métodos rápidos de análisis con el fin de controlar el proceso de elaboración de los productos cárnicos de una forma segura y eficiente. Debido a este interés, parte de esta Tesis Doctoral se ha centrado en el desarrollo y la aplicación de nuevos métodos no destructivos y rápidos para controlar el proceso de producción, tanto del jamón cocido como del tradicional jamón curado. La participación de compuestos como la creatina y creatinina en el conjunto de las reacciones químicas y enzimáticas que tienen lugar en el músculo postmortem los convierten en buenos marcadores para conocer el tiempo de curado y/o cocción de productos cárnicos. En la presente Tesis Doctoral se ha desarrollado un nuevo método de análisis por HPLC sencillo y fiable basado en la cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) para la determinación simultánea de creatina y creatinina, así como de los dipéptidos carnosina, anserina y balenina, siendo una alternativa muy interesante a los métodos ya existentes para el análisis de este tipo de compuestos. Dado que la conversión de creatina en creatinina se ve influenciada por la temperatura, el tiempo, y por los cambios de pH, se ha empleado la ratio creatinina/creatina como índice para determinar el alcance del tratamiento térmico aplicado durante el procesado de jamón cocido, y también como valor para estimar el tiempo mínimo de curado del jamón. Además de los cambios en compuestos relacionados con el metabolismo energético del músculo, durante el proceso de curado de jamón tienen lugar una serie de reacciones bioquímicas entre las que destaca la intensa proteólisis de las proteínas musculares. A pesar de tener la evidencia de la presencia de oligopéptidos al final del proceso de curado, se sabe muy poco acerca de la secuencia específica de los mismos. A este respecto, en esta Tesis Doctoral se presenta por primera vez la identificación de fragmentos peptídicos generados a partir de la hidrólisis de proteínas miofibrilares como la cadena ligera de miosina I, la titina, y la troponina T, y sarcoplásmicas como la creatina quinasa, para lo cual se ha recurrido al uso de modernas técnicas de proteómica basadas en la espectrometría de masas., [English]: During the last decade it has been shown the importance of developing new rapid methods of analysis with the aim to control the elaboration process of meat products in a safety and efficient way. Due to this interest, part of this Thesis has been focused on the development and the application of new and fast nondestructive methods to control the processing of both cooked and dry-cured ham. The role of creatine and creatinine in the chemical and enzymatic reactions that take place during the postmortem period of skeletal muscle makes these compounds to be potential good markers in the cooked and dry-cured ham processes. In the present Thesis, a new, simple and reliable HPLC method based on hydrophilic interaction chromatography (HILIC) has been developed for the simultaneous determination of creatine and creatinine, together with the dipeptides carnosine, anserine and balenine. This method constitutes an interesting alternative to methods currently in use for the analysis of this type of compounds. Due to the fact that creatine conversion to creatinine is influenced by temperature, time, and pH changes, one of the main objectives of this work has been to use the creatinine/creatine ratio as an indicator to assess the effectiveness of the heat treatment in cooked ham processes and the minimum time of ripening of dry-cured hams. In addition to the changes occurred in compounds related to muscle metabolism, during the processing of dry-cured ham numerous physico-chemical and biochemical reactions, such as the intense proteolisis of the muscular proteins, take place. In relation to this, although there is evidence of the presence of oligopeptides at the end of dry-curing, the identity of these peptides still remained elusive. The present Thesis shows the identification for the first time of a large number of fragments generated from the hydrolysis of myofibrilar proteins like myosin light chain I, titin, and troponin T, and sarcoplasmic proteins like creatine kinase. Modern mass spectrometry-based proteomic approaches have been carried out to reach this objective., Beca FPU del Ministerio de Educación del Gobierno de España. Proyectos AGL-2004-05064-C02-01 y AGL-2007-65379-C02-01 del Ministerio de Ciencia e Innovación. Proyecto Agroalimed de la Consellería de Agricultura, Pesca, y Alimentación.

El principal desafío de la biología moderna es entender la expresión, función y regulación del conjunto completo de proteínas codificadas por un organismo, lo cual describe el objetivo del nuevo campo de la proteómica. Las proteínas son las efectoras del trabajo celular, por ello el estudio de sus perfiles globales de expresión y de sus cambios bajo determinadas condiciones fisiológicas o patológicas, permite entender la red compleja de interacciones en que se basa el funcionamiento de una célula. La electroforesis en dos dimensiones (2D-PAGE) es la técnica central de la proteómica. En la actualidad no existe otro método con la capacidad para resolver simultáneamente miles de proteínas en un solo procedimiento y para detectar modificaciones post y co-traduccionales imposibles de predecir a partir de la secuencia genómica. Sus aplicaciones incluyen el análisis de proteomas, señalización, detección de marcadores de enfermedades y cáncer. The main challenge of modern biology is to understand the expression, function and regulation of the whole set of proteins codified by an organism, which is the objective of the new field of proteomics. Proteins are the effectors of cellular work and the knowledge of their global expression profiles and changes under physiological and pathological conditions can help us to understand the complex network of interactions involved in cellular function. Two-dimensional electrophoresis (2-DE) is the central technology in proteomics. At present no other technique has the throughput and high resolution of 2-DE for the separation of thousands of proteins in one procedure and for the analysis of post-and co-translation modifications, not predictable from the genome sequence. The scope of applications extends from proteome analysis, to cell signaling, disease markers and cancer.

El principal desafío de la biología moderna es entender la expresión, función y regulación del conjunto completo de proteínas codificadas por un organismo, lo cual describe el objetivo del nuevo campo de la proteómica. Las proteínas son las efectoras del trabajo celular, por ello el estudio de sus perfiles globales de expresión y de sus cambios bajo determinadas condiciones fisiológicas o patológicas, permite entender la red compleja de interacciones en que se basa el funcionamiento de una célula. La electroforesis en dos dimensiones (2D-PAGE) es una de las técnicas empleadas con mayor frecuencia en proteómica, debido en gran medida a su alta reproducibilidad y capacidad para resolver simultáneamente miles de proteínas en un solo procedimiento y para detectar modificaciones post y co-traduccionales imposibles de predecir a partir de la secuencia genómica. Sus aplicaciones incluyen el análisis de proteomas, señalización, detección de marcadores de enfermedades y cáncer.

Introduction – The lack of pharmacopoeial methodologies for the quality control of plants used for therapeutic purposes is a huge problem that impacts directly upon public health. In the case of saponins, their great structural complexity, weak glycoside bonds and high polarity hinder their identification by conventional techniques. Objective – To apply high-performance liquid chromatography–electrospray tandem mass spectrometry (HPLC-ESI/MSn) to identify the O-glycoside sequence of saponins from the roots of Phytolacca bogotensis. Methodology – Saponins were isolated by preparative HPLC and characterised by NMR spectroscopic experiments. Collision-induced dissociation (CID) of isolated saponins was performed producing typical degradation reactions that can be associated with several glycosidic bonds as empirical criteria. A method using solid-phase extraction (SPE) and HPLC/ESI-MSn for the characterisation of saponins and identification of novel molecules is described. Results – Three saponins reported for the first time in P. bogotensis were isolated and characterised by NMR spectroscopy. Characteristic cross ring cleavage reactions have been used as empirical criteria for the characterisation of the glycosidic bonds most frequently reported for Phytolacca saponins. One new saponin was proposed on the basis of empirical criteria, and other five saponins were identified for the first time for P. bogotensis using HPLC-ESI/MSn. Conclusion – Electrospray ionisation in combination with tandem mass spectrometry has been established as a powerful tool for the profiling of saponins from roots of P. bogotensis. CID proved to be a useful tool for the characterisation and identification of known and novel saponins from the plant family Phytolaccaceae and can be used for quality control purposes of crude plant extracts. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.

"La detección de moléculas de patógenos (antígenos y material genético) y moléculas de respuesta de los hospederos ante la infección (anticuerpos) es el principio básico de las pruebas diagnósticas moleculares. Estas pruebas han hecho innecesaria la detección directa del microorganismo patógeno agresor. Los nuevos avances en biología molecular y el desarrollo de tecnología robótica y secuenciación genómica y proteica han permitido el desarrollo de nuevas pruebas diagnósticas altamente específicas y de gran rendimiento. La genómica y proteómica contribuyen a la identificación de biomarcadores y la biotecnología aporta métodos para producir reactivos de alta pureza. La identificación de genes codificantes de antígenos específicos, su clonación y producción recombinante y la producción de anticuerpos monoclonales, fragmentos de éstos y anticuerpos de una sola cadena han hecho posible el desarrollo de nuevas técnicas inmunológicas más seguras y de sensibilidad y especificidad elevadas. Nuevas moléculas de reconocimiento, incluidos los aptámeros, podrán pronto superar la necesidad de producir anticuerpos mediante inmunización. Para la detección de material genético se han desarrollado nuevas medidas metodológicas basadas en la hibridación y amplificación (PCR, de punto final y en tiempo real) en formatos multiplex y en microarreglos y para su detección se han diseñado moléculas reporteras que permiten su cuantificación. Aunque estos métodos requieren instrumentación compleja, puede ya anticiparse que pronto serán accesibles para su aplicación en salud pública."

RESUMEN: El desarrollo de las investigaciones en bioprospección marina requiere el fortalecimiento de los inventarios de organismos marinos, lo que implica una clasificación taxonómica exhaustiva de los mismos. La clasificación de las esponjas marinas es compleja desde el punto de vista morfológico y se facilita con el uso de información quimiotaxonómica basada en la composición de sus esteroles. El presente estudio describe la composición de esteroles libres de la esponja Mycale laevis, recolectada en la Bahía de Cispatá (Córdoba, Colombia). A partir del extracto metanólico de la esponja M. laevis, se obtiene el subextracto de diclorometano, que se fracciona mediante cromatografía en columna sobre sílica gel, eluyendo con mezclas de hexano-acetato de etilo con aumento gradual de la polaridad. La obtención de la fracción mayoritaria (Rf = 0.77, sílica gel/ hexano-acetato de etilo 1:1) y su análisis por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM), permite la identificación de 9 esteroles monohidroxilados con núcleos esteroidales Δ0, Δ5 y Δ7. Los estanoles (núcleo Δ0) son los más abundantes en la fracción esterólica, con el 71.7 % del total de compuestos presentes. Estos resultados contribuyen a los estudios quimiotaxonómicos de esponjas marinas pertenecientes a la familia Mycalidae. ABSTRACT: The development of marine bioprospection research requires to fortify of marine organisms inventories, which also implies their exhaustive taxonomic classification. From the morphological point of view, the classification of marine sponges is a complex procedure and it is facilitated with the use of chemotaxonomic information based on the composition of its sterols. This study describes the free sterols composition of the Mycale laevis sponge, collected in the Cispatá Bay (Córdoba, Colombia). The subextract of dichloromethane is obtained from the methanol extract of the sponge; this subextract is fractionated through chromatography in column on silica gel, using hexane-ethyl acetate mixtures with a gradual increase of the polarity as a mobile phase. The obtention of the majoritary fraction (Rf = 0.77, silica gel /hexane: ethyl acetate 1:1) and its analysis by means of gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), allows the identification of 9 monohydroxylated sterols with nuclei steroidal Δ0, Δ5 and Δ7 sterols. Stanols (nucleus Δ0 ) are the most abundant in the sterolic fraction with 71.7% of the total of the present compounds. These results contribute to chemotaxonomics studies marine sponges in the Mycalidae family. COL0015043

tesis que para obtener el grado de Doctor en Ciencias Biológicas, presenta María Blanca Espinosa Mancilla ; asesor Edgar Arturo Zenteno Galindo. 80, [42] páginas : ilustraciones. Doctorado en Ciencias Biológicas UNAM, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, 2009

La salud pública en el nuevo milenio tiene como reto integrar los avances de la genómica al derecho fundamental de la salud de todos los seres humanos. La proteómica, entendida como la disciplina científica que estudia los proteomas, es de vital importancia en la investigación en salud, ya que el conocimiento de las proteínas y moléculas efectoras de la función celular permitirá un mejor entendimiento de la fisiología humana. En este trabajo se describen los antecedentes y los conocimientos básicos del análisis proteómico basado en la espectrometría de masas y se comentan los usos de la proteómica en la búsqueda de biomarcadores para el diagnóstico y pronóstico de diferentes enfermedades, los avances en la comprensión de los trastornos crónicos y algunas enfermedades infecciosas. De manera adicional, se delinean las ventajas de la espectrometría de masas en la genotipificación de patógenos y el estudio de los polimorfismos de una sola base (SNP, por sus siglas en inglés).

"Los recientes avances en tecnología han revolucionado la manera en que los sistemas biológicos se visualizan y se estudian. Los avances en espectrometría de masas (EM, MS en inglés) han permitido el análisis de proteínas celulares y metabolitos (proteoma y metaboloma respectivamente) en una escala inimaginable. El término metabolómica se refiere al estudio, identificación y cuantificación de compuestos de bajo peso molecular en células, tejidos o fluidos biológicos, producto de las reacciones metabólicas en los seres vivos, cuya cuantificación proporciona un amplio panorama del estatus bioquímico. La EM es una técnica analítica que permite la separación, identificación y cuantificación de múltiples metabolitos, en diferentes matrices biológicas, en un tiempo muy corto y de manera simultánea. En un principio, fue creada para la investigación, en la actualidad, la accesibilidad a esta tecnología ha abierto el camino al desarrollo de diversas aplicaciones por ejemplo, análisis de miles de compuestos presentes en nuestro organismo, el ambiente, los medicamentos, materiales manufacturados, alimentos, toxicología y medicina forense. Una de las aplicaciones más comunes de la EM es el tamiz neonatal, cuya rápida expansión ha dado pautas para nuevas aplicaciones en el campo de la metabolómica y representa un modelo para futuros estudios de tamiz en enfermedades que afectan tanto a neonatos como a adultos. El objetivo del presente trabajo es explicar los fundamentos de la EM, mencionar algunas aplicaciones clínicas y diagnósticas que la han convertido en la principal herramienta para el desarrollo de la metabolómica y dar un enfoque de éstas a la pediatría."

El desarrollo de las investigaciones en bioprospección marina requiere el fortalecimiento de los inventarios de organismos marinos, lo que implica una clasificación taxonómica exhaustiva de los mismos. La clasificación de las esponjas marinas es compleja desde el punto de vista morfológico y se facilita con el uso de información quimiotaxonómica basada en la composición de sus esteroles. El presente estudio describe la composición de esteroles libres de la esponja Mycale laevis, recolectada en la Bahía de Cispatá (Córdoba, Colombia). A partir del extracto metanólico de la esponja M. laevis, se obtiene el subextracto de diclorometano, que se fracciona mediante cromatografía en columna sobre sílica gel, eluyendo con mezclas de hexano-acetato de etilo con aumento gradual de la polaridad. La obtención de la fracción mayoritaria (Rf = 0.77, sílica gel/ hexano-acetato de etilo 1:1) y su análisis por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM), permite la identificación de 9 esteroles monohidroxilados con núcleos esteroidales Δ0, Δ5 y Δ7 . Los estanoles (núcleo Δ0) son los más abundantes en la fracción esterólica, con el 71.7 % del total de compuestos presentes. Estos resultados contribuyen a los estudios quimiotaxonómicos de esponjas marinas pertenecientes a la familia Mycalidae. The development of marine bioprospection research requires to fortify of marine organisms inventories, which also implies their exhaustive taxonomic classification. From the morphological point of view, the classification of marine sponges is a complex procedure and it is facilitated with the use of chemotaxonomic information based on the composition of its sterols. This study describes the free sterols composition of the Mycale laevis sponge, collected in the Cispatá Bay (Córdoba, Colombia). The subextract of dichloromethane is obtained from the methanol extract of the sponge; this subextract is fractionated through chromatography in column on silica gel, using hexane-ethyl acetate mixtures with a gradual increase of the polarity as a mobile phase. The obtention of the majoritary fraction (Rf = 0.77, silica gel /hexane: ethyl acetate 1:1) and its analysis by means of gas chromatography coupled to mass spectrometry (GC-MS), allows the identification of 9 monohydroxylated sterols with nuclei steroidal Δ0,Δ5 and Δ7 sterols. Stanols (nucleus Δ0) are the most abundant in the sterolic fraction with 71.7% of the total of the present compounds. These results contribute to chemotaxonomics studies marine sponges in the Mycalidae family.

La detección de moléculas de patógenos (antígenos y material genético) y moléculas de respuesta de los hospederos ante la infección (anticuerpos) es el principio básico de las pruebas diagnósticas moleculares. Estas pruebas han hecho innecesaria la detección directa del microorganismo patógeno agresor. Los nuevos avances en biología molecular y el desarrollo de tecnología robótica y secuenciación genómica y proteica han permitido el desarrollo de nuevas pruebas diagnósticas altamente específicas y de gran rendimiento. La genómica y proteómica contribuyen a la identificación de biomarcadores y la biotecnología aporta métodos para producir reactivos de alta pureza. La identificación de genes codificantes de antígenos específicos, su clonación y producción recombinante y la producción de anticuerpos monoclonales, fragmentos de éstos y anticuerpos de una sola cadena han hecho posible el desarrollo de nuevas técnicas inmunológicas más seguras y de sensibilidad y especificidad elevadas. Nuevas moléculas de reconocimiento, incluidos los aptámeros, podrán pronto superar la necesidad de producir anticuerpos mediante inmunización. Para la detección de material genético se han desarrollado nuevas medidas metodológicas basadas en la hibridación y amplificación (PCR, de punto final y en tiempo real) en formatos multiplex y en microarreglos y para su detección se han diseñado moléculas reporteras que permiten su cuantificación. Aunque estos métodos requieren instrumentación compleja, puede ya anticiparse que pronto serán accesibles para su aplicación en salud pública.The detection of molecules of pathogens (antigens and genetic material) and host molecules in response to infections (antibodies) is the basic principle involved in molecular diagnostic tests. These tests have avoided the need to detect the attacking pathogen. New advances in molecular biology and the development of robotic technology and genomic and protein sequencing have allowed for the development of new high performance and highly specific tests. Genomics and proteomics contribute to the identification of biomarkers and biotechnology provides methods to produce high purity reagents. The identification of coding genes of specific antigens, their cloning and recombinant production, the production of monoclonal antibodies, their fragments and single chain antibodies enabled new, safer, high sensitivity and specificity immunological techniques to develop. New recognition molecules, including aptamers, will soon replace the need to produce antibodies by immunization. For the detection of genetic material, new methodological strategies based on hybridization and amplification (PCR, end point and real time) in multiplex and microarray formats have been developed, and for their detection new reporter molecules have been designed that enable their quantification. Although these methods require sophisticated instrumentation, they will soon be accessible for application in public health.

[spa] El estudio de muestras de pintura persigue diferentes objetivos. Por un lado, identificar los materiales y técnica de la pintura de una época y por lo tanto el know-how de un período histórico. Por otra parte, estudiar la degradación y el envejecimiento de estos materiales con el fin de evitar su desaparición. Al mismo tiempo, se pretende también elegir y aplicar los materiales más adequados en los procesos de restauración y conservación, así como las mejores condiciones de exposición. Desde un punto de vista físico-químico, las pinturas son matrices complejas formadas por capas de una mezcla heterogénea de materiales orgánicos e inorgánicos, mezclados en proporciones desconocidas y dispuestos en capas micrométricas. Además, estos materiales experimentan interacciones entre ellos y un heterogéneo envejecimiento con el tiempo y a exposición a contaminantes, luz y condiciones de conservación, tales como humedad y temperatura. Como resultado, las pinturas no son objetos estáticos, sino sistemas complejos que constituyen una problemática difícil para el químico analítico. La naturaleza de las pinturas requiere, además, de un enfoque de cartografía 2D con el fin de poder, no sólo caracterizar e identificar los materiales presentes, sino también para obtener su distribución en la muestra. El objetivo general de esta tesis es el de rellenar algunas lagunas en el análisis y la caracterización de los sistemas pictóricos. Completar el conocimiento parcial obtenido anteriormente es el hilo conductor, aunque cada capítulo tiene una entidad propia. Con este finalidad se siguieron diferentes caminos contemporáneamente: el desarrollo de métodos de preparación de muestras y los procedimientos analíticos para el estudio de las muestras de pintura, y la caracterización de la composición de los materiales y de sus procesos de degradación mediante la aplicación de las metodologías analíticas desarrolladas. Los diferentes capítulos tratan las siguientes problemáticas: Synchrotron radiation based micro imaging FTIR to the study of painting cross-sections, Characterisation and distribution of oxalates in mural painting samples, MS and SR based techniques for the identification and distribution of painting materials in samples from works of art, GC/MS characterisation of saccharide materials in samples from works-of-art y GC/MS analytical procedure for the characterization of lipids, terpenoidresins, polysaccharide and proteinaceous materials in the presence of interfering inorganic pigments in the same micro sample. La tesis demuestra la capacidad de Radiación Sincrotrón para la obtención de imágenes FTIR en modo de transmisión y la capacidad de Cromatografía de gases/espectrometría de masas para el estudio de los materiales de la pintura y sus productos de degradación, haciendo especial atención a los materiales sacarídicos. La complementariedad de las técnicas ha sido destacada permetiendo una visión global del conjunto.

FT-ICR ("Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Spectroscopy") es una espectrometría de masas de muy alta resolución, basada en el efecto de un campo magnético intenso sobre la trayectoria de partículas de carga q y masa m. Su principal característica de confinar iones por largos periodos de tiempo permite estudiar la cinética y temodinámica de reacciones ión-molécula en fase gaseosa. Acoplada con fuentes de ionización “suave”, tales como MALDI o ESI, constituye una poderosa herramienta para la identificación y análisis estructural de macromoléculas (biomoléculas, polímeros, “clusters”, etc.). FT-ICR ("Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Spectroscopy") is a mass spectrometry with very high resolution. It is based on the effect of an intense magnetic field on the trajectories of charged particles of charge q and mass m. Its main feature of trapping ions for long periods of time allows to study the kinetics and thermodynamics of ion-molecule reactions in the gas phase. It coupled with “soft” ionization sources, such as MALDI or ESI, is a powerful tool for identification and structural analysis of macromolecules (biomolecules, polymers, clusters, etc.). Revisión por pares

This work describes the development of the analytical methodology for determining fipronil residues in honey and pollen samples by gas chromatography with two detecting systems: electron-capture detection (GC-ECD) and mass spectrometry (GC-MS). Fipronil was extracted from honey samples by solid-phase extraction, using alumina as adsorbent and hexane-ethyl acetate (1:1, v/v) as eluting solvent, and from pollen samples by matrix solid-phase dispersion with C18 and acetonitrile, assisted by sonication. The developed methods gave recovery results >90% with relative standard deviations, Este trabajo describe el desarrollo de la metodología analítica para determinar residuos de fipronil en muestras de miel y polen por cromatografía de gases con dos sistemas de detección: espectrometría de masas (GC-MS) y detector de captura de electrones (GC-ECD). El pesticida fipronil se extrajo de las muestras de miel mediante extracción en fase sólida, con alúmina como adsorbente y hexano-acetato de etilo (1:1, v/v) como disolvente de elución, y de las muestras de polen por medio de la dispersión de la matriz en fase sólida, C18, y extracción en baño de ultrasonidos con acetonitrilo. Los métodos desarrollados dieron recuperaciones >90% con desviaciones estándar relativas

This work describes the development of the analytical methodology for determining fipronil residues in honey and pollen samples by gas chromatography with two detecting systems: electron-capture detection (GC-ECD) and mass spectrometry (GC-MS). Fipronil was extracted from honey samples by solid-phase extraction, using alumina as adsorbent and hexane-ethyl acetate (1:1, v/v) as eluting solvent, and from pollen samples by matrix solid-phase dispersion with C18 and acetonitrile, assisted by sonication. The developed methods gave recovery results >90% with relative standard deviations Este trabajo describe el desarrollo de la metodología analítica para determinar residuos de fipronil en muestras de miel y polen por cromatografía de gases con dos sistemas de detección: espectrometría de masas (GC-MS) y detector de captura de electrones (GC-ECD). El pesticida fipronil se extrajo de las muestras de miel mediante extracción en fase sólida, con alúmina como adsorbente y hexano-acetato de etilo (1:1, v/v) como disolvente de elución, y de las muestras de polen por medio de la dispersión de la matriz en fase sólida, C18, y extracción en baño de ultrasonidos con acetonitrilo. Los métodos desarrollados dieron recuperaciones >90% con desviaciones estándar relativas