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Submitted by R??mulo Paix??o (romulo.veiga.paixao@gmail.com) on 2022-12-12T18:15:22Z No. of bitstreams: 2 Tese vers??o final - R??mulo Veiga Paix??o.pdf: 13478142 bytes, checksum: 386e4a88019f4893aa97d9f7fb8260cd (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTAC??A??O.pdf: 119680 bytes, checksum: 66db43d34fdfece70936850a99086ae2 (MD5) Approved for entry into archive by Ci??ncia Animal e Recursos Pesqueiros PPGCARP (ppgcarpsecretaria@ufam.edu.br) on 2023-01-12T19:19:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese vers??o final - R??mulo Veiga Paix??o.pdf: 13478142 bytes, checksum: 386e4a88019f4893aa97d9f7fb8260cd (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTAC??A??O.pdf: 119680 bytes, checksum: 66db43d34fdfece70936850a99086ae2 (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2023-01-18T21:24:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese vers??o final - R??mulo Veiga Paix??o.pdf: 13478142 bytes, checksum: 386e4a88019f4893aa97d9f7fb8260cd (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTAC??A??O.pdf: 119680 bytes, checksum: 66db43d34fdfece70936850a99086ae2 (MD5) Made available in DSpace on 2023-01-18T21:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese vers??o final - R??mulo Veiga Paix??o.pdf: 13478142 bytes, checksum: 386e4a88019f4893aa97d9f7fb8260cd (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTAC??A??O.pdf: 119680 bytes, checksum: 66db43d34fdfece70936850a99086ae2 (MD5) Previous issue date: 2022-03-28 FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas CAPES - Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior Fish exhibit a wide variety of mechanisms of sex determination and sexual differentiation, which are topics of great scientific interest and also relevant to the fish industry, specifically when the exploitation of one sex is more advantageous in species of economic importance. The tambaqui Colossoma macropomum is a prominent neotropical species in Brazilian aquaculture. Still, the mechanism of sex determination of tambaqui has not yet been properly identified and characterized, despite efforts using omic technologies such as sequencing the genome of males and females, and also juvenile transcriptomes during the sexually undifferentiated phase. Seeking to expand the scientific knowledge about the mechanisms involved in the tambaqui sexual differentiation process, this thesis had as main objective to identify and evaluate, by in silico and in vivo analyses, the molecular mechanisms involved in this process, mainly those related to steroid hormones and their precursors as well as fatty acids. In the Chapter 1, we show that fish diversity is not restricted to the top of the sex-determining cascade, but also to the different genetic, hormonal and molecular pathways necessary for the development of reproductive organs and the behavior of males and females of the species. Unexpected results about the expression of genes involved in the production of estradiol, such as cyp19a1a and cyp19a1b, and estradiol receptors, which have been recently reported in fish of the order Characiformes, indicate that estradiol possibly has a different role in this lineage, compared to classically established in the literature. Our results from chapter 2 suggest that the substantial variations in the function of gonadal and brain aromatase in tambaqui may be a consequence of the drastic changes in the cis and trans-regulatory region resulted from the rearrangements evidenced in the genomic sequence where these genes are located, when compared to species phylogenetically more distant species such as zebrafish, tilapia, medaka and arowana. Furthermore, the gene expression analysis of aromatase cyp19a1a and cyp19a1b during sexual differentiation and in adulthood, together with the unexpected lack of effect of endocrine disruptors on tambaqui sex ratio, reinforce that estradiol may have a less critical role in the ovarian development or it might be fundamental for the development and maintenance of the gonads in both sexes of this species. In chapter 3, the remarkable differential expression of genes belonging to the elovl family, more expressed in males in the pre-differentiation phase, suggests that fatty acid metabolism plays an important role in sex differentiation in tambaqui. Os peixes exibem uma grande variedade de mecanismos de determina????o sexual e diferencia????o sexual, que s??o t??picos de grande interesse cient??fico e tamb??m relev??ncia para o setor produtivo, quando a explora????o de um sexo ?? mais vantajosa em esp??cies de import??ncia econ??mica. O tambaqui Colossoma macropomum ?? uma esp??cie neotropical de destaque na aquicultura nativa brasileira, e seu mecanismo gen??tico de determina????o sexual ainda n??o foi propriamente identificado e caracterizado, apesar dos esfor??os utilizando-se de tecnologias ??micas como sequenciamento do genoma de machos e f??meas, e tamb??m transcriptomas de juvenis durante a fase sexualmente indiferenciada. Buscando ampliar os conhecimentos cient??ficos sobre os mecanismos envolvidos no processo de diferencia????o sexual do tambaqui, esta tese teve como principal objetivo identificar e avaliar, por an??lises in silico e in vivo, os mecanismos moleculares envolvidos neste processo, principalmente os relacionados a horm??nios ester??ides e seus precursores, bem como os ??cidos graxos. No cap??tulo 1, mostramos que a diversidade de peixes n??o se restringe ao topo da cascata determinante do sexo, mas tamb??m nas diferentes vias genicas, hormonais e moleculares necess??rias para a desenvolvimento de ??rg??os reprodutivos e comportamento de machos e f??meas da esp??cie. Resultados inesperados acerca da express??o de genes envolvidos na produ????o e a????o do estradiol, como cyp19a1a e cyp19a1b, e receptores de estradiol, que t??m sido recentemente reportados em peixes da ordem Characiformes, indicam que o estradiol possivelmente tenha um papel diferenciado nessa linhagem, se comparado ao classicamente estabelecido na literatura. Nossos resultados do cap??tulo 2 sugerem que as varia????es substanciais na fun????o das aromatases gonadal e cerebral em tambaqui podem ser reflexo das dr??sticas modifica????es na regi??o cis e trans-regulat??rias provenientes dos rearranjos evidenciados na sequ??ncia gen??mica onde estes genes se econtram localizados, quando comparados com esp??cies filogeneticamente mais distantes como zebrafish, til??pia, medaka e aruan??. Al??m disso, as an??lises de express??o g??nica das aromatases cyp19a1a e cyp19a1b durante a diferencia????o sexual e na fase adulta, em conjunto com a inesperada falta de efeito dos disruptores end??crinos na raz??o sexual do tambaqui, refor??am que o estradiol possa ter um papel menos cr??tico no desenvolvimento ovariano ou ainda que seja fundamental para o desenvolvimento gonadal e manuten????o dos ??rg??os sexuais em ambos os sexos desta esp??cie. No cap??tulo 3, a not??vel express??o diferencial dos genes pertencentes ?? fam??lia elovl, mais expressos nos machos em fase de pr??-diferencia????o sexual, sugere que o metabolismo dos ??cidos graxos tenha um papel importante na diferencia????o sexual em tambaqui.

Submitted by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2022-04-05T02:47:55Z No. of bitstreams: 2 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 41233 bytes, checksum: 9e144ed5c45b7a8945758a7e420acada (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2022-04-05T02:50:03Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 41233 bytes, checksum: 9e144ed5c45b7a8945758a7e420acada (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2022-04-05T02:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Reprodu????o N??o Autorizada.pdf: 41233 bytes, checksum: 9e144ed5c45b7a8945758a7e420acada (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2022-01-31 CAPES - Coordena????o de Aperfei??oamento de Pessoal de N??vel Superior FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas Embrapa - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecu??ria The commercial production of tambaqui Colossoma macropomum can be considered a livestock activity in development in Brazil and South America. For this reason, it still presents challenges to overcome, inherent to the consolidation of any incipient zootechnical industry, in its constant search for high productivity with sustainability. Among the challenges, stands the search for commercial products to be used in the reproduction of the species, ensuring the supply of the entire production chain. This is because since its domestication, the production of tambaqui has been based on the use of crude carp pituitary extract (CPE), a biological product that represents a risk of spreading disease, and which, for this and other reasons, is being condemned by the regulatory organs of livestock products. The great challenge today, and which has been the subject of several studies in different Brazilian native species, is to identify a synthetic product (and therefore without biological risk) with the same efficacy as CPE, whose efficiency in inducing the final maturation of oocytes and ovulation in rheophilic fish is unquestionable. This theme underlies the relevance of this thesis. The objective of this work was to test different commercially available synthetic analogues of gonadotropin releasing hormone (GnRHa) in tambaqui reproduction, to verify their effects on the qualitative and quantitative indexes of strip- spawning, sex steroid production, gonadotCorophin synthesis in the pituitary of mature males and females, and finally, to assess the costs of their use as reproductive inducers for tambaqui. The results point to these compounds as alternatives hormones for the artificial reproduction of tambaqui, since the spawning and embryonic survival rates, as well as the investigated plasma hormones were similar in females treated with these compounds (in single doses) and treated with the tradicional CPE (two doses 12 hours apart). However, not all females treated with GnRHa spawned, unlike females that were induced with CPE. A single dose of gonadorelin (mGnRHa) upregulates lh?? expression while reducing fsh?? transcription. The analysis of the costs of tambaqui larval production indicates that buserelin is very economic, however it provoked the lowest spawning index. As the analogues tested here promoted increased Lh expression, stimulated spawning with high quality and quantity of eggs, further studies are needed to optimize their dosages in order to achieve high spawning rates, at the same time as the costs involved in this practice must be considered, so that new technologies are viable for the industry, the main beneficiary of these researches. A produ????o comercial de tambaqui Colossoma macropomum pode ser considerada uma atividade pecu??ria em desenvolvimento no Brasil e Am??rica do Sul. E por esta raz??o, apresenta ainda desafios a serem superados, inerentes ?? consolida????o de qualquer ind??stria zoot??cnica incipiente, em sua constante busca por alta produtividade com sustentabilidade. Dentre os desafios, figura a busca por produtos comerciais a serem utilizados na reprodu????o da esp??cie, garantindo o suprimento de todo o ciclo de engorda em cativeiro. Isto porque desde sua domestica????o, a produ????o de tambaqui sempre se baseou no uso de extrato bruto de hip??fise de carpa (EBHC), um produto biol??gico artesanal que representa um risco de veicula????o de doen??as, e que, por este e outros motivos est?? sendo cada vez mais condenado pelo ??rg??os reguladores de produtos pecu??rios. O grande obst??culo hoje, e que tem sido alvo de v??rios estudos em diferentes esp??cies nativas brasileiras, ?? identificar um produto sint??tico (e portanto sem risco biol??gico) com a mesma efic??cia que o EBHC, cuja efici??ncia em induzir a matura????o final dos o??citos e ovula????o em peixes reof??licos ?? inquestion??vel. Esta tem??tica fundamenta a relev??ncia desta tese. O objetivo deste trabalho foi testar diferentes an??logos sint??ticos do horm??nio liberador de gonadotrofinas (GnRHa), dispon??veis comercialmente, na indu????o de tambaqui, verificar seus efeitos nos ??ndices qualitativos e quantitativos da desovas das f??meas, na produ????o de esteroides sexuais, na s??ntese de gonadotrofinas em hip??fises de machos e f??meas maduras, e, por fim avaliar seus custos no uso como indutores reprodutivos para tambaqui. Os resultados apontam estes compostos como alternativos para indu????o reprodutiva de tambaqui, uma vez que os ??ndices de desova e sobreviv??ncia embrion??ria, bem como os horm??nios plasm??ticos investigados foram semelhantes em f??meas tratadas com estes compostos (em doses ??nicas) e tratadas com EBHC (duas doses intervaladas de 12 horas). No entanto, nem todas as f??meas tratadas com GnRHa desovaram, ao contr??rio das f??meas que foram induzidas com EBHC. Uma ??nica dose de gonadorelina (GnRHa) induz ao aumento na express??o de lh??, ao mesmo tempo em que reduz a transcri????o de fsh??. A an??lise dos custos na produ????o larval de tambaqui indica que a buserelina ?? o tratamento mais acess??vel, por??m, o que resulta em ??ndice de desova mais baixo. Como os an??logos aqui testados promoveram o aumento da express??o de Lh, estimulando desovas com alta qualidade e quantidade de ovos, mais estudos se fazem necess??rios na otimiza????o de suas dosagens com objetivo de alcan??ar altos ??ndices de desova, ao mesmo tempo em que os custos envolvidos nesta pr??tica devem ser sempre considerados, para que as novas tecnologias sejam vi??veis ao setor produtivo, maior benefici??rio dessas pesquisas.

Submitted by Carolina Estephanele Sentineli (cestephanele@yahoo.com) on 2021-11-24T14:21:39Z No. of bitstreams: 4 Disserta????o Carolina - Vers??o Final.pdf: 1012206 bytes, checksum: b7425657cfdc93f4dab3702c5d28fafd (MD5) FolhaAprovacao-Carolina Sentineli.pdf: 122922 bytes, checksum: a5de1032940b035904811aa8817e9cfa (MD5) Ata_Defesa_Carolina Sentineli.pdf: 266148 bytes, checksum: 289f11324a04f2e59b6c52f62c63e754 (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTA????O.pdf: 150927 bytes, checksum: bbaa3bf4bd7c6172c9faff926493df7f (MD5) Approved for entry into archive by Ci??ncia Animal e Recursos Pesqueiros PPGCARP (ppgcarpsecretaria@ufam.edu.br) on 2021-11-25T15:14:13Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Disserta????o Carolina - Vers??o Final.pdf: 1012206 bytes, checksum: b7425657cfdc93f4dab3702c5d28fafd (MD5) FolhaAprovacao-Carolina Sentineli.pdf: 122922 bytes, checksum: a5de1032940b035904811aa8817e9cfa (MD5) Ata_Defesa_Carolina Sentineli.pdf: 266148 bytes, checksum: 289f11324a04f2e59b6c52f62c63e754 (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTA????O.pdf: 150927 bytes, checksum: bbaa3bf4bd7c6172c9faff926493df7f (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2021-11-25T20:40:48Z (GMT) No. of bitstreams: 4 Disserta????o Carolina - Vers??o Final.pdf: 1012206 bytes, checksum: b7425657cfdc93f4dab3702c5d28fafd (MD5) FolhaAprovacao-Carolina Sentineli.pdf: 122922 bytes, checksum: a5de1032940b035904811aa8817e9cfa (MD5) Ata_Defesa_Carolina Sentineli.pdf: 266148 bytes, checksum: 289f11324a04f2e59b6c52f62c63e754 (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTA????O.pdf: 150927 bytes, checksum: bbaa3bf4bd7c6172c9faff926493df7f (MD5) Made available in DSpace on 2021-11-25T20:40:48Z (GMT). No. of bitstreams: 4 Disserta????o Carolina - Vers??o Final.pdf: 1012206 bytes, checksum: b7425657cfdc93f4dab3702c5d28fafd (MD5) FolhaAprovacao-Carolina Sentineli.pdf: 122922 bytes, checksum: a5de1032940b035904811aa8817e9cfa (MD5) Ata_Defesa_Carolina Sentineli.pdf: 266148 bytes, checksum: 289f11324a04f2e59b6c52f62c63e754 (MD5) CartaEncaminhamentoTCC-TESE-DISSERTA????O.pdf: 150927 bytes, checksum: bbaa3bf4bd7c6172c9faff926493df7f (MD5) Previous issue date: 2021-10-27 FAPEAM - Funda????o de Amparo ?? Pesquisa do Estado do Amazonas Instituto Federal do Amazonas (IFAM) - Campus Presidente Figueiredo The tambaqui Colossoma macropomum is the main native species in fish farming in Brazil, with an estimated annual production of 278,671 tons in 2020. Several technological factors are needed to leverage the production of native fish, including the supply of juveniles with genetic quality, good zootechnical performance, in addition to an affordable price. Therefore, producing feed management protocols for breeders from genetic improvement are necessary. The present study evaluated the impact of diet on the reproductive success of tambaqui, aiming to implement management protocols for juvenile production stations in the Amazon. One hundred fish from the AquaBrasil program, aged 5 years, were used. Four tanks of 600m2 T1- daily feed with 28% of crude protein (CP) were used; T2 ??? daily feeding with 32% CP; T3 ??? feeding 3 times a week with 28% CP and T4 ??? feeding 3 times a week with 32% CP, in which 25 fish per tank (15 males and 10 females) were stocked. The sampling unit was the induced female, identified with a pittag microchip. Reproductive indices were compared using descriptive statistics and measures of central tendency. Statistical analyzes were performed using the statistical program R. ANOVA and ANCOVA tests were applied, at a 5% confidence level, to identify significant differences between treatments. The variables, hatching rate and survival rate did not present the necessary assumptions of homogeneity of variance to perform the statistical analyses, being then submitted to descriptive analysis of the data obtained. There was no significant difference between treatments. The animals showed satisfactory results for the species in all treatments evaluated, demonstrating that even in the absence of statistical differentiation, the performance of the animals did not suffer any loss. Based on the evaluated data, it is possible to assume that fish farming stations that work with tambaqui breeding can adopt a fish feeding regime with 28% crude protein, being administered three times a week, without harming the quality performance of the breeders of oocytes and larvae. O tambaqui Colossoma macropomum ?? a principal esp??cie nativa nos cultivos de peixes no Brasil, com uma produ????o anual estimada de 278.671 toneladas no ano de 2020. Diversos fatores tecnol??gicos s??o necess??rios para alavancar a produ????o de peixes nativos, entre a oferta de juvenis com qualidade gen??tica, bom desempenho zoot??cnico, al??m de pre??o acess??vel. Sendo assim, produzir protocolos de manejo alimentar para reprodutores oriundos de melhoramento gen??tico se fazem necess??rios. O presente estudo avaliou o impacto do regime alimentar no sucesso reprodutivo de tambaqui, visando a implanta????o de protocolos de gest??o de esta????es de produ????o de juvenis na Amaz??nia. Foram utilizados 100 peixes oriundos do programa AquaBrasil, com idade de 5 anos. Foram usados quatro tanques de 600m2 T1- alimenta????o di??ria com 28% de prote??na bruta (PB); T2 ??? alimenta????o a di??ria com 32% de PB; T3 ??? alimenta????o 3 vezes na semana com 28% PB e T4 ??? alimenta????o 3 vezes na semana com 32% PB, nos quais foram estocados 25 peixes por tanque (15 machos e 10 f??meas). A unidade amostral foi a f??mea induzida, identificada com microchip pittag. Os ??ndices reprodutivos foram comparados por estat??stica descritiva e medidas de tend??ncia central. An??lises estat??sticas foram realizadas no programa estat??stico R. Foram aplicados os testes ANOVA e ANCOVA, ao n??vel de 5% de confian??a, para identifica????o das diferen??as significativas entre os tratamentos. As vari??veis, taxa de eclos??o e taxa de sobreviv??ncia n??o apresentaram os pressupostos de homogeneidade de vari??ncia necess??rios para execu????o das an??lises estat??sticas, sendo ent??o submetidas a an??lises descritivas dos dados obtidos. N??o houve diferen??a significativa entre os tratamentos avaliados. Os animais apresentaram resultados satisfat??rios para a esp??cie em todos os tratamentos avaliados, demostrando que mesmo perante a aus??ncia de diferencia????o estat??stica, o desempenho dos animais n??o sofreu nenhum dem??rito. Com base nos dados avaliados, ?? poss??vel assumir que as esta????es de piscicultura que atuam com reprodu????o de tambaqui podem adotar um regime de alimenta????o de peixes com 28% de prote??na bruta, sendo administrada tr??s vezes por semana, sem prejudicar o desempenho dos reprodutores na qualidade dos ov??citos e larvas. Trabalho realizado no munic??pio de Presidente Figueiredo, em parceria com a SEPA/SEPROR e o IFAM- Campus Presidente Figueiredo.

Submitted by Regiane Linhares (linharesrm@outlook.com) on 2021-06-04T23:07:30Z No. of bitstreams: 3 Disserta????o Linhares.pdf: 2208162 bytes, checksum: 9c0a53793ee03149f86d93229e5938e3 (MD5) Carta Encaminhamento DISSERTAC??????O-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppgbiotecsecretaria@ufam.edu.br) on 2021-06-08T01:18:27Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Disserta????o Linhares.pdf: 2208162 bytes, checksum: 9c0a53793ee03149f86d93229e5938e3 (MD5) Carta Encaminhamento DISSERTAC??????O-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Rejected by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: A ficha catalogr??fica precisa de ajustes: 1. No campo sobrenome inserir apenas "Linhares", para que na ficha saia "Linhares, Regiane Monteiro"; 2.No campo quantidade de folhas inserir a numera????o do ??ltima folha numerada; 3. A ficha deve ser posicionada na parte inferior da folha; 4. N??o retirar as informa????es referentes ao sistema que gerou a ficha. Tutorial da Ficha: https://drive.google.com/file/d/1it-8jH28oaPIWwWxqzr8-guEV21q9t4G/view on 2021-06-08T03:01:13Z (GMT) Submitted by Regiane Linhares (linharesrm@outlook.com) on 2021-06-15T19:01:11Z No. of bitstreams: 3 Disserta????o Linhares.pdf: 2208162 bytes, checksum: 9c0a53793ee03149f86d93229e5938e3 (MD5) Carta Encaminhamento DISSERTAC??????O-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppgbiotecsecretaria@ufam.edu.br) on 2021-06-15T19:17:13Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Disserta????o Linhares.pdf: 2208162 bytes, checksum: 9c0a53793ee03149f86d93229e5938e3 (MD5) Carta Encaminhamento DISSERTAC??????O-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Rejected by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br), reason: Na parte superior da ficha catalogr??fica, inserir as informa????es relativas ?? cataloga????o (Ficha Catalogr??fica Ficha catalogr??fica elaborada automaticamente de acordo com os dados fornecidos pelo(a) autor(a). Na entrada de autoria, onde se l?? "Monteiro Linhares, Regiane", leia-se Linhares, Regiane Monteiro. Nas pistas, corrigir as palavras-chave: 2. Express??o intracelular. 3. Express??o heter??loga. 4. PGK. 5. Tambaqui. (a primeira letra deve constar em caixa alta). on 2021-06-15T20:14:40Z (GMT) Submitted by Regiane Linhares (linharesrm@outlook.com) on 2021-06-19T14:09:20Z No. of bitstreams: 4 SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Carta Encaminhamento-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) DISSERTA????O.REGIANE LINHARES.pdf: 2188945 bytes, checksum: b777169103cedae51ac0d93bfcf7bc69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by PPGBIOTEC Biotecnologia (ppgbiotecsecretaria@ufam.edu.br) on 2021-06-21T18:17:28Z (GMT) No. of bitstreams: 4 SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Carta Encaminhamento-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) DISSERTA????O.REGIANE LINHARES.pdf: 2188945 bytes, checksum: b777169103cedae51ac0d93bfcf7bc69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Approved for entry into archive by Divis??o de Documenta????o/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2021-06-21T18:50:17Z (GMT) No. of bitstreams: 4 SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Carta Encaminhamento-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) DISSERTA????O.REGIANE LINHARES.pdf: 2188945 bytes, checksum: b777169103cedae51ac0d93bfcf7bc69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Made available in DSpace on 2021-06-21T18:50:17Z (GMT). No. of bitstreams: 4 SEI_UFAM - 0513568 - Ata regiane Assinada.pdf: 190239 bytes, checksum: fe3f88668d0e6267c5f237e9f8d35d3a (MD5) Carta Encaminhamento-Regiane.pdf: 112206 bytes, checksum: e4294c90102a7242a9d2879e85456a1c (MD5) DISSERTA????O.REGIANE LINHARES.pdf: 2188945 bytes, checksum: b777169103cedae51ac0d93bfcf7bc69 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2021-04-22 CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient??fico e Tecnol??gico In the northern region, where there is the highest consumption of fish, tambaqui (Colossoma macropomum) is the most consumed fish. To enable increased production of tambaqui, it is necessary to understand the physiology, ecology, among other knowledge, for an optimization and standardization of technologies to be applied in the production of this fish. Recently, the cDNA of tambaqui growth hormone was built by chemical synthesis and expressed in P. pastoris under the control of the pAOX1 promoter of this yeast. Considering the toxicity of the inducer of this promoter, this work aims at the intracellular heterologous expression of tambaqui growth hormone (rtGH) in the yeast Pichia pastoris, using a constitutive promoter, pPGK1. Two vectors were constructed for rtGH expression, and these vectors were linearized and integrated into the genome of P. pastoris lineage M12 (auxotrophic for the amino acid leucine). The transforming clones were initially selected in the selective medium MD followed by a second selection by growth in MD medium with the antibiotic G418. To confirm the transforming colonies, the rtGH gene was identified by PCR, while the confirmation of intracellular expression of the protein was performed by immunodot and SDS-PAGE/Western Blotting. As the expression of tGH occurred at low levels, efforts should be made to identify the reason for low production, so that the expression of the hormone can be obtained at levels where recombinant yeast can be used for feed supplementation for fish. Na regi??o norte, onde h?? o maior consumo de pescado, o tambaqui (Colossoma macropomum) ?? o peixe mais consumido. Para possibilitar o aumento da produ????o do tambaqui, ?? necess??rio compreens??o sobre a fisiologia, ecologia, dentre outros conhecimentos, para uma otimiza????o e padroniza????o de tecnologias a serem aplicadas na produ????o desse peixe. Recentemente, o cDNA do horm??nio de crescimento de tambaqui foi constru??do por s??ntese qu??mica e expresso em P. pastoris sob o controle do promotor pAOX1 dessa levedura. Considerando a toxicidade do indutor deste promotor, este trabalho tem como principal objetivo a express??o heter??loga intracelular do horm??nio de crescimento de tambaqui (rtGH) na levedura Pichia pastoris, utilizando um promotor constitutivo, o pPGK1. Foram constru??dos dois vetores para express??o de rtGH, sendo que esses vetores foram linearizados e integrados no genoma de P. pastoris linhagem M12 (auxotr??fica para o amino??cido leucina). Os clones transformantes foram selecionados inicialmente no meio seletivo MD seguido de uma segunda sele????o por crescimento em meio MD com o antibi??tico G418. Para confirma????o das col??nias transformantes, foi realizado identifica????o do gene rtGH por meio de PCR, enquanto a confirma????o da express??o intracelular da prote??na foi realizada por imunodot e SDS-PAGE/Western Blotting. Como a express??o do tGH ocorreu em n??veis baixos, esfor??os dever??o ser realizados no sentido de se identificar a raz??o da baixa produ????o, para que se possa obter a express??o do horm??nio em n??veis em que se possa utilizar a levedura recombinante para suplementa????o de ra????o para peixes.

Financiadora de Estudos e Projetos The cardiovascular system plays the fundamental role of supplying the needs of the animals bodily tissues. It both provides the cells with a variety of elements that are essential to their functioning and drains potentially harmful substances, such as metabolites. All of these items are transported through the blood, the propulsion of which is determined by the pressure gradient created by the heart. In addition to promoting circulation, blood pressure is also directly involved in the maintenance of many other physiological processes, making the preservation of this variable at satisfactory levels a prerequisite for an organism s vitality. In light of this need for ideal pressure levels, important mechanisms for blood pressure regulation have been selected during the evolutionary history of vertebrates, and the baroreflex serves as a clear example. These reflexes begin with the monitoring of arterial pressure by baroreceptors, which constantly inform the central nervous system (CNS) of the condition of this variable. The CNS is thus able to change heart rate and systemic vascular resistance in order to normalize arterial pressure when necessary. Though the operation of the baroreflex is already widely understood and though baroreceptors have been located in mammals, these issues are not elucidated and remain quite controversial when it comes to fishes. Thus, the objective of this work was to locate the baroreceptors and their afferences in a teleost, the Colossoma macropomum. To do so, the occurrence and efficiency of the baroreflex were analyzed when this mechanism was induced by pressure imbalancements in intact fish (IN), fish with the first pair of gill arches denervated (G1) and fish with all four pairs of gill arches denervated (G4). The pressure imbalancements were promoted by the administration of the α1-adrenergic agonist phenylephrine and the α1-adrenergic antagonist prazosin, and the baroreflex was assessed using an electrocardiogram that measured heart rate (bpm), relation between pre- and post-pharmacological manipulation heart rates (%), the time required to reach maximum chronotropic baroreflex response, and total heart rate variability (ms). The results revealed that the barostatic reflex was attenuated in the G1 group and nonexistent in G4 group indicating that baroreceptors may be exclusively located in the gill arches of teleosts. O sistema cardiovascular possui a fundamental função de suprir as necessidades dos tecidos corporais dos animais, fornecendo às células diversos elementos essenciais a seu funcionamento e drenando substâncias potencialmente nocivas (metabólitos). Todos esses fatores são transportados por meio do sangue, o qual tem sua propulsão determinada por um gradiente de pressão criado pelo coração. Além de promover a circulação, a pressão sanguínea também é diretamente relacionada à manutenção de vários outros processos fisiológicos, fazendo com que a preservação dessa variável em níveis satisfatórios seja pré-requisito para a vitalidade de um organismo. Frente a essa necessidade de valores pressóricos ideais, importantes mecanismos reguladores da pressão sanguínea foram selecionados durante a história evolutiva dos vertebrados, e como importante exemplo temos o barorreflexo. Tal reflexo se inicia com o monitoramento da pressão arterial pelos barorreceptores, os quais informam constantemente a condição dessa variável ao sistema nervoso central, o qual é capaz de alterar a frequência cardíaca e a resistência vascular sistêmica de modo a normalizar rapidamente a pressão arterial caso seja necessário. Enquanto o funcionamento do barorreflexo já foi amplamente entendido e os barorreceptores pontualmente localizados em mamíferos, essas questões encontram-se pouco elucidadas e controversas em peixes, originando o objetivo do presente trabalho: localizar os barorreceptores e suas aferências em um teleósteo, o Colossoma macropomum. Para isso, foram analisadas a ocorrência e a eficiência do barorreflexo induzido por desbalanceamentos pressóricos em peixes intactos (IN), com o primeiro par de arcos branquiais desnervados (G1) e com os quatro pares de arcos branquiais desnervados (G4). Os desbalanceamentos pressóricos foram promovidos por meio da administração do agonista α1-adrenérgico fenilefrina e do antagonista α1-adrenérgico prazosina, e o barorreflexo foi avaliado utilizando-se um eletrocardiograma que permitiu a derivação da frequência cardíaca (bpm), da relação entre a frequência cardíaca pré- e pósadministração farmacológica (%), do tempo decorrido até a resposta barorreflexa cronotrópica máxima (s) e da variabilidade total da frequência cardíaca (ms). Os resultados evidenciaram que o reflexo barostático encontrava-se atenuado no grupo G1, ao passo que inexistia no grupo G4 indicando que os barorreceptores localizam-se exclusivamente nos arcos branquiais dos tambaquis e estão distribuídos por todos eles.

The analysis of sperm subpopulations is a relatively new approach that consists of evaluating the coexistence of different sperm grouped by similarity. This characterization allows us to explore the heterogeneity of existing sperm in a semen sample, so it is revealed your fertility potential. The aim of this study was to identify and characterize sperm subpopulations in semen tambaqui (C. macropomum) regarding the kinetics and evaluate its correlation with fertility, as well as analyzing the changes arising from the cryopreservation process in the distribution of sperm subpopulations. 59 767 sperm semen in natura and 50,680 of the thawed sperm of 61 fish through analysis in a computerized system (CASA) were evaluated. The kinetic data generated sperm were tabulated, analyzed, and evaluated relativized by the method of analysis of two-step cluster grouping. For correlation with fertilization, 15 animals with distinct sperm qualities were selected and evaluated for their performance in fertilization from seminal fresh samples. These procedures allowed the identification of three sperm subpopulations in semen in natura tambaqui, two of which are highly correlated with fertility. The first subpopulation corresponded to 28.81% of the total analyzed sperm and it was less abundant. Low values of curvilinear velocity - VCL: 58.92 mM / s, linearity - LIN: 23.15%, straightness - STR: 40.01% and beat cross frequency - BCF: 6.79 Hz characterized the sperm of this subpopulation as slow progressive non-linear and not, where no significant correlation was observed with fertility (r = 0.28). The second subpopulation represented 31.61% of the examined spermatozoa which were classified as rapid, non-linear, non-progressive and high beat cross frequency (LCV: 114.10 mM / s, LIN: 46.77% STR: BCF and 59.17%: 21.49 Hz), high positive correlation was observed with fertility (r = 0.93). Already a subpopulation 3, had a higher percentage of sperm analyzed (39.58%), characterized as fast, linear, progressive and high beat cross frequency (VCL: 134.11 mM / s, LIN: 81.41%, STR : BCF and 86.57%: 26.73 Hz), being also observed high positive correlation with fertility (r = 0.79). After thawing semen tambaqui, we could identify only two sperm subpopulations with distinct heterogeneity. The first subpopulation, representing 33.24% of the analyzed sperm which were characterized as slow, non-linear, non-progressive and low beat cross frequency (VCL: 52.96 mM / s, LIN: 20.70%, STR: and 41.70% BCF: 5,61Hz). The second subpopulation corresponded to 66.76% of the analyzed sperm which were characterized as fast, linear, progressive and high beat cross frequency (VCL: 121.57 mM / s, LIN: 69.02%, STR: 77, and 09% BCF: 26.00 Hz). It is concluded that semen tambaqui has three sperm subpopulations characterized by movement pattern, two of which are represented by rapid sperm directly related to fertility. The cryopreservation process reduces the number of sperm subpopulations and alters the pattern of linearity and progressivity of spermatozoa. A analise de subpopulacoes espermaticas e uma abordagem relativamente nova que consiste na avaliacao da coexistencia de diferentes espermatozoides agrupados por similaridade. Essa caracterizacao permite explorar a heterogeneidade dos espermatozoides existentes em uma amostra seminal, de forma que seja revelado o seu potencial de fertilidade. O objetivo do presente estudo foi identificar e caracterizar as subpopulacoes espermaticas no semen de tambaqui (C. macropomum) quanto a cinetica e avaliar sua correlacao com a fertilidade, bem como analisar as alteracoes decorrentes do processo de criopreservacao na distribuicao das subpopulacoes espermaticas. Foram avaliados 59.767 espermatozoides do semen in natura e 50.680 espermatozoides do semen descongelado de 61 peixes por meio da analise em sistema computadorizado (CASA). Os dados de cinetica espermatica gerados foram tabulados, analisados, relativizados e avaliados pelo metodo de analise de agrupamento two-step cluster. Para a correlacao com a fertilizacao, 15 animais com qualidades espermaticas distintas, foram selecionados e avaliados quanto ao seu desempenho na fertilizacao a partir de amostras seminais in natura. Esses procedimentos permitiram a identificacao de tres subpopulacoes espermaticas no semen in natura de tambaqui, sendo duas delas, altamente correlacionadas com a fertilidade. A subpopulacao 1 correspondeu a 28,81% do total de espermatozoides analisados e foi a menos abundante. Baixos valores de velocidade curvilinear . VCL: 58,92 Êm/s, linearidade . LIN: 23,15%, retilinearidade . STR: 40,01% e de frequencia de batimento flagelar . BCF: 6,79 Hz caracterizaram os espermatozoides desta subpopulacao como lentos, nao lineares e nao progressivos, onde nao foi observada correlacao significativa com a fertilidade (r= 0,28). A subpopulacao 2, representou 31,61% do total de espermatozoides analisados os quais foram classificados como rapidos, nao lineares, nao progressivos e com alta frequencia de batimento flagelar (VCL: 114,10 Êm/s, LIN: 46,77%, STR: 59,17% e BCF: 21,49 Hz), sendo observada alta correlacao positiva com a fertilidade (r= 0,93). Ja a subpopulacao 3, apresentou maior percentual de espermatozoides analisados (39,58%), caracterizados como rapidos, lineares, progressivos e com alta frequencia de batimento flagelar (VCL: 134,11 Êm/s, LIN: 81,41%, STR: 86,57% e BCF: 26,73 Hz), sendo observada tambem alta correlacao positiva com a fertilidade (r= 0,79). Apos o descongelamento do semen de tambaqui, foi possivel identificar apenas duas subpopulacoes espermaticas com homogeneidades distintas. A subpopulacao 1, representou 33,24% dos espermatozoides analisados os quais foram caracterizados como lentos, nao lineares, nao progressivos e com baixa frequencia de batimento flagelar (VCL: 52,96 Êm/s, LIN: 20,70%, STR: 41,70% e BCF: 5,61Hz). A subpopulacao 2 correspondeu a 66,76% dos espermatozoides analisados os quais foram caracterizados como rapidos, lineares, progressivos e com alta frequencia de batimento flagelar (VCL: 121,57 Êm/s, LIN: 69,02%, STR: 77,09% e BCF: 26,00 Hz). Conclui-se que o semen de tambaqui possui tres subpopulacoes espermaticas caracterizadas pelo padrao de movimento, sendo duas delas, representadas por espermatozoides rapidos, diretamente relacionados com a fertilidade. O processo de criopreservacao reduz o numero de subpopulacoes espermaticas e altera o padrao de linearidade e progressividade dos espermatozoides.

The objective of monitoring the embryonic development of the tambaqui (Colossoma macropomum) through induced reproduction. Embryonic development presented the following sequence of events, (minutes after fertilization-MAF) when incubated at 28, 7 0C. The five MAF, the cytoplasm became more evident in the animal pole, forming a disc of cytoplasm, highlighting an increase in perivitelline space. The cleavagens occurred between 25 and 60 MAF. With 87 MAF, it was observed the morula stage, characterized by the presence of more than 64 blastomeres. Was observed with 140 MAF, the blastula stage, characterized by presenting dome above the mass of the yolk. At gastrula stage, can be viewed epibolia movement of embryonic cells, observed with 167 MAF, when approximately 30% of the yolk was covered. With 292 MAF had around 80 to 90% of epibolia and with 325 MAF, it was observed the end of the movement, which was completed with the formation of a portion called yolk plug. At the beginning of the Histogenesis and organogenesis, with 370 MAF, noted the development of cephalic regions, tail and development of the first somitos. The optic vesicle became more obvious MAF 440, occurring simultaneously with the increase in the number of somitos. The tail has been partially disengaged from the vitelline sac to 550 MAF. The embryo has swimming movement inside the chorionic membrane until the moment in which the larvae broke out and became free. Hatching of larvae occurred 774 MAF (12:54h), the equivalent for 360 hours-degree. Objetivou-se acompanhar o desenvolvimento embrionário do tambaqui (Colossoma macropomum) por meio da reprodução induzida. O desenvolvimento embrionário apresentou a seguinte sequência de eventos, (minutos após a fertilização - MAF), quando incubados a 28,70C. Aos cinco MAF, o citoplasma tornou mais evidente no polo animal, formando um disco de citoplasma, destacando um aumento do espaço perivitelínico. As clivagens ocorreram entre 25 e 60 MAF. Com 87 MAF, foi observado o estágio de mórula, caracterizada pela presença de mais de 64 blastômeros. Foi observado com 140 MAF, a fase de blástula, caracterizada por apresentar forma de cúpula acima da massa do vitelo. Na fase de gástrula, pode ser visualizado o movimento de epibolia das células embrionárias, observado com 167 MAF, quando aproximadamente 30% do vitelo foi recoberto. Com 292 MAF havia cerca de 80 a 90% de epibolia e com 325 MAF, foi observado o final do movimento, que se completou com a formação de uma porção denominada de tampão vitelínico. No início da fase de histogênese e organogênese, com 370 MAF, notou-se o desenvolvimento das regiões cefálica, caudal e desenvolvimento dos primeiros somitos. A vesícula óptica tornou se mais evidente 440 MAF, ocorrendo simultaneamente ao aumento no número de somitos. A cauda demonstrou-se parcialmente desprendida do saco vitelínico aos 550 MAF. O embrião apresentou movimento de natação dentro da membrana coriônica até o momento em que a larva eclodiu e tornou-se livre. A eclosão das larvas ocorreu 774 MAF (12h54min), o equivalente há 360 horas-grau.

The frequencies of micronuclei (MN) and morphological nuclear abnormalities (NA) in erythrocytes in the peripheral blood of tambaqui (Colossoma macropomum), treated with 2 mg.L -1 methylmercury (MeHg), were analyzed. Two groups (nine specimens in each) were exposed to MeHg for different periods (group A - 24 h; group B - 120 h). A third group served as negative control (group C, untreated; n = 9). Although, when compared to the control group there were no significant differences in MN frequency in the treated groups, for NA, the differences between the frequencies of group B (treated for 120 h) and the control group were extremely significant (p < 0.02), thus demonstrating the potentially adverse effects of MeHg on C. macropomum erythrocytes after prolonged exposure.