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As infecções fúngicas tornaram-se um problema global de saúde pública, em virtude do aumento no número de pacientes imunocomprometidos, aliado aos relatos frequentes de resistência ao arsenal limitado de antifúngicos disponíveis. Esse cenário estimula a pesquisa por novas opções terapêuticas, tanto para micoses superficiais, quanto sistêmicas. Há um interesse científico crescente pela prospecção de uma nova classe de moléculas antifúngicas, para confrontar o panorama atual das infecções fúngicas. Nesse sentido, esse estudo investigou o potencial antifúngico de uma nova classe de moléculas, conhecida como 3-Selenocianatos-indólicos, frente Candida spp. e fungos dermatófitos do gênero Trichophyton, Microsporum e Nannizzia. O screening de um conjunto de moléculas da classe dos 3-Selenocianatos-indólicos foi realizado de acordo com os protocolos M27-A3 e M38-A2 (CLSI, 2008), para determinar a concentração inibitória mínima dos compostos (CIM). Dois compostos destacaram-se, o 4a e 4b, que apresentaram média geométrica de CIM de 4,1 e 6,0 μg/mL contra Candida spp. e 1,2 e 2,2 μg/mL contra os dermatófitos, respectivamente, sendo o composto 4a fungicida para C. albicans e T. rubrum. Os ensaios toxicológicos revelaram que estes compostos não são citotóxicos e nem mutagênicos e, foram classificados como não irritantes pelo teste HET-CAM. Foi verificado um potencial genotóxico dos compostos em concentrações elevadas, observado pelo ensaio cometa, que pode ser sugestivo de um mecanismo de ação direcionado para o núcleo das células fúngicas. Nesse estudo também foi padronizado um modelo ex vivo de onicomicose utilizando cascos suínos, para avaliar o desempenho pré-clínico de formulações tópicas. Por esse modelo foi possível verificar a atividade antifúngica do composto 4a e da terbinafina, ambos incorporados em uma base de esmalte comercial, que inibiram completamente o crescimento de T. rubrum, fungo prevalente em onicomicoses. Com esses resultados pré-clínicos, concluímos que a classe dos 3-Selenocianatos-indólicos é promissora e atrativa para o desenvolvimento de novos fármacos antifúngicos, pela sua ação de amplo espectro, para o tratamento de micoses sistêmicas e superficiais. Fungal infections have become a global public health problem due to the increase in the number of immunocompromised patients, combined with frequent reports of resistance to the limited arsenal of available antifungals. This scenario encourages the search for new therapeutic options, both for superficial and systemic mycoses. There has been an increasing scientific interest in prospecting a new class of antifungal molecules, to confront the current panorama of fungal infections. In this sense, this study investigated the antifungal potential of a new class of molecules, known as indole 3-Selenocyanate-indoles, against Candida spp. and dermatophyte fungi of the genus Trichophyton, Microsporum and Nannizzya. The screening of a set of 3-Selenocyanate-indoles molecules was performed according to protocols M27-A3 and M38-A2 (CLSI, 2008), to determine the minimum inhibitory concentration of the compounds (MIC). Two compounds stood out, 4a and 4b, which presented geometric mean MIC of 4.1 and 6.0 μg/mL against Candida spp. and 1.2 and 2.2 μg/ml against dermatophytes, respectively, being the 4a fungicide for C. albicans and T. rubrum. Toxicological tests revealed that these compounds are neither cytotoxic nor mutagenic and were classified as non-irritating by the HET-CAM test. A genotoxic potential of the compounds at high concentrations was verified, observed by the comet assay, which may be suggestive of a mechanism of action directed to the fungal cell nucleus. In this study, an ex vivo model of onychomycosis using porcine hoofs was also standardized to assess the preclinical performance of topical formulations. Through this model, it was possible to verify the antifungal activity of compound 4a and terbinafine, both incorporated in a commercial enamel base, which completely inhibited the growth of T. rubrum, a fungus prevalent in onychomycosis. With these preclinical results, we conclude that the 3-selenocyanate-indoles class is promising and attractive for the development of new antifungal drugs, due to its broad spectrum action, for the treatment of systemic and superficial mycoses.

Fungal infections have emerged as a current serious global public health problem. The main problem involving these infections is the expansion of multidrug resistance. Therefore, the prospection of new compounds with efficacy antifungal becomes necessary. Thus, this study evaluated the antifungal profile and toxicological parameters of quinolines derivatives against Candida spp. and dermatophyte strains. As a result, a selective anti-dermatophytic action was demonstrated by compound 5 (geometric means (GM = 19.14 μg ml−1)). However, compounds 2 (GM = 50 μg ml−1) and 3 (GM = 47.19 μg ml−1) have presented only anti-Candida action. Compounds 3 and 5 did not present cytotoxic action. Compound 5 did not produce dermal and mucosal toxicity. In addition, this compound showed the absence of genotoxic potential, suggesting safety for topical and systemic use. Quinolines demonstrated a potent anti-dermatophytic and anti-yeast action. Moreover, compound 5 presented an excellent toxicological profile, acting as a strong candidate for the development of a new effective and safe compound against dermatophytosis of difficult treatment. Electronic supplementary material The online version of this article (10.1007/s42770-020-00348-4) contains supplementary material, which is available to authorized users.

Submitted by Thiago Henrique Lemes (lemes_th@outlook.com) on 2019-06-26T16:12:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação final.pdf: 2066841 bytes, checksum: 1518388f3d14518fb67a1dc43c3028da (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Problema 01) Nos agradecimentos, segundo a Portaria nº 206, de 4 de setembro de 2018, todos os trabalhos que tiveram financiamento CAPES deve constar nos agradecimentos a expressão exata: "O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001 Problema 02) A paginação deve ser sequencial, iniciando a contagem na folha de rosto e mostrando o número a partir da introdução, a ficha catalográfica ficará após a folha de rosto e não deverá ser contada. Problema 03) Na margem esquerda do capítulo 2 foi colocada uma numeração/marcação, isto é realmente necessário ? Pois as normas de trabalho acadêmico não preveem este tipo de marcação. Problema 04) Sugerimos adequar a sua dissertação conforme as normas do trabalho científico: OBS:-Estamos encaminhando e-mail o template/modelo para que você possa fazer as correções, sugerimos que siga este modelo pois ele contempla as normas da ABNT. Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2019-06-26T17:50:04Z (GMT) Submitted by Thiago Henrique Lemes (lemes_th@outlook.com) on 2019-06-26T21:02:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação final.pdf: 2066841 bytes, checksum: 1518388f3d14518fb67a1dc43c3028da (MD5) Dissertação final.pdf: 2128496 bytes, checksum: 9b8465cafa89a9fd75a3f20242698d5d (MD5) Rejected by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: Problema 01) Sugerimos adequar o sumário de sua dissertação conforme as normas do trabalho científico ABNT NBR 6027: Ex: CAPÍTULO 2 - ARTIGO .....................................................…...........…............. 28 6. In vitro antifungal activity of Candida spp. extracts against Trichophytonrubrum and Trichophyton mentagrophytes ........................………….........….................29 CAPÍTULO 3 ....................................................................................…............ 54 7.CONCLUSÕES ..........................................................................…....…........... 55 REFERÊNCIAS ........................................................................…....................57 Problema 02) A data da defesa na FOLHA DE APROVAÇÃO deve ser colocada no rodapé, abaixo da cidade de defesa. São José do Rio Preto 25 de junho de 2019 Lembramos que o arquivo depositado no repositório deve ser igual ao impresso, o rigor com o padrão da Universidade se deve ao fato de que o seu trabalho passará a ser visível mundialmente. Agradecemos a compreensão. on 2019-06-27T13:38:27Z (GMT) Submitted by Thiago Henrique Lemes (lemes_th@outlook.com) on 2019-06-27T13:59:01Z No. of bitstreams: 3 Dissertação final.pdf: 2066841 bytes, checksum: 1518388f3d14518fb67a1dc43c3028da (MD5) Dissertação final.pdf: 2128496 bytes, checksum: 9b8465cafa89a9fd75a3f20242698d5d (MD5) Dissertação final.pdf: 2128692 bytes, checksum: ba14ec74191b2151614bcaa683736552 (MD5) Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2019-06-27T14:24:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 lemes_th_me_sjrp_par.pdf: 500571 bytes, checksum: b01a13a6e24553dd11b20d2c03a41a02 (MD5) Made available in DSpace on 2019-06-27T14:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 lemes_th_me_sjrp_par.pdf: 500571 bytes, checksum: b01a13a6e24553dd11b20d2c03a41a02 (MD5) Previous issue date: 2019-06-25 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Onicomicoses são infecções de unhas causadas principalmente por fungos dermatófitos, seguidos de leveduras e fungos filamentosos não dermatófitos (FFNDs). Caracterizam-se por serem infecções persistentes, de terapêutica prolongada com altas taxas de recorrência, falhas no seu diagnóstico e tratamento podem causar danos irreversíveis à placa ungueal. Na prática clínica é comum o achado de dois ou mais organismos responsáveis pela etiologia de onicomicoses. Nestes eventos, as interações interespécies conduzem respostas fisiológicas dos microrganismos com produção de moléculas difusíveis, denominadas moléculas de quorum sensing (QSMs), fundamentais para a sobrevivência microbiana em ambientes competitivos. De fato, nos últimos anos, novas QSMs fúngicas têm sido estudadas e descritas como potenciais agentes antimicrobianos. O presente estudo avaliou a atividade antifúngica dos extratos obtidos de cultura de Candida albicans e C. parapsilosis contra linhagens de dermatófitos, tal como seu efeito sinérgico com fluconazol e toxicidade. As culturas foram submetidas à filtração em sistema fechado, seguido por extração líquido-líquido, utilizando acetato de etila. A atividade antifúngica, in vitro, foi avaliada por microdiluição, obtendo-se a Concentração Inibitória Mínima (CIM) de cada extrato contra linhagens clínicas de Trichophtyton rubrum e T. mentagrophytes, além dos efeitos associados com fluconazol, por ensaio Checkerboard. Para avaliação de toxicidade, utilizou-se modelo invertebrado de Galleria mellonella. Os extratos de C. albicans e C. parapsilosis apresentaram CIM entre 250-2000 µg/mL contra as linhagens de dermatófitos, com efeito potencializado quando associado ao fluconazol, confirmando sinergismo. Os extratos apresentaram baixa toxicidade nas concentrações inibitórias mínimas. Futuramente, o isolamento e identificação dos compostos dos extratos possibilitarão novas abordagens terapêuticas no controle de infecções fúngicas. Onychomycosis are nail infections caused primarily by dermatophyte fungi, followed by yeasts and non-dermatophyte filamentous fungi. They are characterized by being persistent infections, by the prolonged therapy with high recurrence episodes, failures in the diagnosis and treatment; wich can cause irreversible damage to the nail plate. In clinical practice, it is common for two or more organisms to be involved with onychomycosis. The interspecies interactions in infections of mixed etiology are mediated by small diffusible molecules called quorum sensing molecules (QSMs) and are fundamental for the survival of these microorganisms in competitive environments. In recent years, new fungal QSMs have been studied and described as potential antimicrobial agents. The present study evaluated the antifungal activity of the extracts obtained from the culture of Candida albicans and C. parapsilosis against strains of dermatophytes. To obtain the fungal extracts, the cultures were subjected to closed-loop filtration, followed by liquid-liquid extraction using ethyl acetate. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) of each extract was evaluated by the microdilution technique against clinical strains of Trichophtyton rubrum and T. mentagrophytes and in association with fluconazole, by the Checkerboard assay. To evaluate the toxicity of the extracts, an invertebrate model of Galleria mellonella was used. The extracts of C. albicans and C. parapsilosis showed MICs ranging from 250 to 2000 μg/mL. When associated with fluconazole, they expressed results showing a predominantly synergistic effect in all the evaluated combinations. Toxicity assays with G. mellonella demonstrated low toxicity of the extracts. In the future, the isolation and identification of the extract compounds will allow new therapeutic approaches in the control of fungal infections.

Nas últimas décadas, as infecções fúngicas tornaram-se um problema de saúde pública global, afetando milhões de pessoas anualmente. O aumento do número de pacientes imunodeprimidos associado à expansão da seleção de resistência fúngica e ao limitado arsenal terapêutico disponível têm contribuído para este cenário. Apesar dos investimentos realizados, existem poucos estudos envolvendo o desenvolvimento de novas terapias antifúngicas, visto que, as infecções fúngicas são negligenciadas. Nesse sentido, a prospecção por novas entidades químicas que apresentem eficácia antifúngica vem sendo uma das principais estratégias adotadas na tentativa de contrapor esse paronorama atual. Assim, este estudo investigou o potencial de derivados de cloroacetamidas e quinolínicos frente a diferentes gêneros fúngicos e a sua aplicabilidade como possíveis novas alternativas para a terapia clínica de infecções fúngicas. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) dos compostos seguiu o proposto pelos documentos M27-A3 e M28-A2 (CLSI, 2008). Os compostos foram submetidos a diferentes metodologias para avaliação de parâmetros toxicológicos em nível tópico e sistêmico. A eficácia e a aplicabilidade dos compostos foram avaliadas em diferentes formulações farmacêuticas. Como resultado, ambas as classes de compostos foram ativas frente aos organismos testados, destacando a eficácia do composto N-(4-bromofenil)-2-cloroacetamida frente a espécies de dermatófitos (CIM 6,25 - 25 μg/mL) e de Fusarium (12,5 - 50 μg/mL), e do composto 2-metil-4-fenil-quinolina frente a dermatófitos (CIM 12,5 - 25 μg/mL). Ambos os compostos não provocaram alergenicidadade e toxicidade dérmica, sugerindo sua segurança para uso tópico. Esses compostos apresentaram ação fungicida sobre as espécies avaliadas, provocando dano e alterações morfológicas nas células fúngicas. Além disso, a incorporação do composto N-(4-bromofenil)-2-cloroacetamida a um anfissoma, o qual foi adicionado a um sistema formador de filme (SFF) antecipou o efeito fungicida deste derivado, indicando ser um bom veículo carreador para o mesmo. A análise de parâmetros de toxicidade sugere que o composto 2-metil-4-fenil-quinolina é seguro para uso sistêmico. Além disso, quando incorporado a um esmalte, o composto reduziu significativamente a infecção por T. rubrum em um modelo de onicomicose ex vivo. Assim, podemos concluir que ambos os compostos são fortes canditados para o possível desenvolvimento de novas formulações eficazes para o tratamento de infecções fúngicas cutâneas. In recent decades, fungal infections have become a global public health problem, affecting millions of people annually. The increase in the number of immunocompromised patients associated with the expansion of selection of fungal resistance and the limited therapeutic arsenal available have contributed to this scenario. Despite the investments made, there are few studies involving the development of new antifungal therapies, since fungal infections are neglected. Thus, the prospection for new chemical entities that present antifungal efficacy has been one of the main strategies adopted in the attempt to counterpose this current paronorama. Thus, this study investigated the potential of chloroacetamide and quinoline derivatives against different fungal genera and their applicability as possible new alternatives for the clinical therapy of fungal infections. The determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of the compounds followed the proposed by documents M27-A3 and M28-A2 (CLSI, 2008). The compounds were submitted to different methodologies for evaluation of toxicological parameters at the topical and systemic level. The efficacy and applicability of the compounds were evaluated in different pharmaceutical formulations. As a result, both classes of compounds were active against the organisms tested, highlighting the efficacy of N-(4-bromophenyl)-2-chloroacetamide against dermatophyte (MIC 6.25 - 25 μg/mL) and Fusarium species (MIC 12.5 - 50 μg/mL), and of 2-methyl-4-pheny-lquinoline (MIC 12.5 - 25 μg/mL) against dermatophytes. Both compounds did not cause allergy and dermal toxicity, suggesting their safety for topical use. These compounds presented fungicidal action on species evaluated, causing damage and morphological changes in the fungal cells. In addition, the incorporation of N-(4-bromophenyl)-2-chloroacetamide to an anfisome, which was added to a film forming system (FFS) anticipated the fungicidal effect of this derivative, indicating be a good carrier vehicle for it. Analysis of toxicity parameters suggests that 2-methyl-4-phenyl-quinoline is safe for systemic use. In addition, when incorporated into a lacquer, the compound significantly reduced T. rubrum infection in an ex vivo onychomycosis model. Thus, we can conclude that both compounds are strong candidates for the possible development of new and effective formulations for the treatment of cutaneous fungal infections.

As dermatomicoses são infecções fúngicas da pele, ocasionadas principalmente por dermatófitos e Candida spp. As dermatofitoses, denominação específica para dermatomicoses de origem dermatofítica, são as doenças cutâneas mais prevalentes da atualidade, possuindo como agentes etiológicos fungos filamentosos dermatofíticos de três gêneros anamórficos: Microsporum, Trichophyton e Epidermophyton. A resistência dos dermatófitos à terapêutica convencional vem sendo cada vez mais relatada, contribuindo para as comuns recidivas da micose. Infecções (muco) cutâneas e também sistêmicas podem ser causadas por leveduras oportunistas do gênero Candida - C. albicans e espécies de C. não-albicans (CNA; tais como C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, C. dubliniensis e C. krusei). As espécies emergentes de CNA apresentam resistência mais pronunciada aos fármacos de escolha para o tratamento de candidíases, o que implica em falhas na terapia clínica e aumento considerável das taxas de morbimortalidade. Neste contexto, faz-se necessária a pesquisa por novos agentes antifúngicos com amplo espectro de ação e toxicidade seletiva para o patógeno, que superem as limitações da terapêutca atual. Assim, este trabalho teve como objetivo principal investigar, em uma ampla triagem, a atividade antifúngica de cento e oitenta e nove compostos sintéticos (de variadas classes químicas). Além disso, determinar as relações de estrutura-atividade, caracterizar o mecanismo de ação e perfil toxicológico das moléculas, a fim de prospectarem-se novas alternativas eficazes e seguras para o tratamento de infecções, primordialmente associadas a dermatófitos e Candida spp.. Em relação aos tiocianatos alílicos (TAs), 1ª classe investigada, o composto cloro-derivado apresentou um amplo espectro de atividade antifúngica e também atividade antiquimiotáxica, com 100% de redução da migração de leucócitos. A faixa de concentração inibitória mínima (CIM) dos compostos foi de 25 a 50 μg/mL, com mecanismo de ação relacionado à complexação com ergosterol fúngico. A nanoemulsão desenvolvida com o composto mais eficaz melhorou a atividade antifúngica in vitro, diminuindo os valores de CIM em até 64 vezes para dermatófitos e 4 vezes para Candida spp.. O composto cloro-derivado mais promissor não foi mutagênico, nem ocasionou inviabilidade celular em leucócitos humanos, embora tenha apresentado dano ao DNA dose-dependente. Além disso, não foi irritante (ensaio da membrana cório-alantoide - HET-CAM) e inibiu totalmente o crescimento fúngico em um modelo alternativo de dermatofitose. Para as δlactonas (δ-Ls), 2ª classe, nenhum dos compostos foi mutagênico, genotóxico ou irritante, quando avaliados em concentrações mais elevadas que a CIM. Dois dos compostos da série apresentaram os menores valores de CIM (25-50 μg/mL) e um espectro mais amplo de atividade antifúngica contra fungos filamentosos e leveduras. O mecanismo de ação foi relacionado ao dano na parede e membrana celular, com ação alvo específica dependente do tipo de halogênio presente na estrutura. O dano às células fúngicas foi corroborado por imagens de microscopia eletrônica de varredura, que destacaram células lisadas e completamente alteradas em sua morfologia, após tratamento in vitro com δ-Ls. Para os 1,4-benzenodióis 2-substituídos (1,4-BZs), 3ª classe – com síntese inédita, seis moléculas (2, 5, 6, 8, 11 e 12) apresentaram ação antimicrobiana de amplo espectro, incluindo efeito contra espécies resistentes e multirresistentes de dermatófitos (T. mentagrophytes), CNA e bactérias. As faixas de CIMs destes compostos para fungos e bactérias foram 25 a 50 μg/mL e 8 a 128 μg/mL, respectivamente, sendo o mecanismo de ação antifúngico relacionado à parede e membrana celular. O composto 8, mais promissor em relação ao efeito antifúngico, não ocasionou genotoxicidade e mutagenicidade em células leucocitárias humanas e nem hemólise. Complementarmente, os compostos não foram irritantes (HET-CAM). Por fim, para os derivados substituídos de 1,3-bisariloxipropano (1,3-BXPs), representando o último grupo de moléculas investigadas, encontrou-se o melhor perfil de atividade antifúngica/toxicidade, dentre todas as classes químicas analisadas neste estudo, com ênfase para o composto 2j (1,3-bis(3,4-diclorofenoxi)propan-2-amino-cloreto). 2j foi o fungicida mais ativo contra dermatófitos e Candida spp., em concentrações fungicidas mínimas (CFMs) muito baixas (0,39 - 3,12 μg/mL), incluindo ação contra isolados clínicos resistentes e multirresistentes. O perfil de toxicidade de 2j foi promissor, apresentando índice de seletividade > 10, em relação a linfócitos humanos. O composto foi classificado como não irritante pelo teste HET-CAM e não causou alterações histopatológicas na pele da orelha de porco, apresentando uma excelente perspectiva para aplicação tópica. 2j tem como alvo a parede celular fúngica, o que foi confirmado por imagens de microscopia eletrônica de varredura. O composto foi incorporado em um hidrogel com potencial bioadesivo. Os resultados da permeação cutânea humana mostraram que 2j permaneceu significativamente na epiderme, o que é o ideal para o tratamento de dermatomicoses. Adicionalmente, em relação à candidíase sistêmica em Drosophila melanogaster Toll-deficientes, 2j apresentou eficácia estatisticamente comparável ao fluconazol no controle do processo infeccioso. Portanto, o composto 2j demonstrou potencial para o desenvolvimento de fármacos antifúngicos, com um mecanismo de ação elucidado e já aplicado em uma formulação semissólida, visando uma nova opção terapêutica para infecções fúngicas da pele não responsivas ao tratamento convencional. Dermatomycoses are fungal infections of the skin, mainly caused by dermatophytes and Candida spp. Dermatophytoses, a specific name for dermatomycoses of dermatophytic origin, are the most prevalent skin diseases today, with dermatophytic filamentous fungi of three anamorphic genera as the etiological agents: Microsporum, Trichophyton and Epidermophyton. The resistance of dermatophytes to conventional therapy has been increasingly reported, contributing to the common recurrence of mycosis. (Mucus) cutaneous and also systemic infections may be caused by opportunistic yeasts of the genus Candida - C. albicans and species of non-albicans Candida (NAC; such as C. tropicalis, C. glabrata, C. parapsilosis, C. dubliniensis and C. krusei). Emerging NAC species show more pronounced resistance to the drugs of choice for the treatment of candidiasis, which implies failures in clinical therapy and a considerable increase in morbimortality rates. In this context, it is necessary to search for new antifungal agents with a broad spectrum of action and selective toxicity for the pathogen, which overcome the limitations of current therapy. Thus, the main objective of this work was to investigate, in a wide screening, the antifungal activity of one hundred and eighty-nine synthetic compounds (of various chemical classes). In addition, to determine the structure-activity relationships, characterize the mechanism of action and toxicological profile of the molecules, in order to prospect new effective and safe alternatives for the treatment of infections primarily associated with dermatophytes and Candida spp. In relation to allylic thiocyanates (ATs), 1st class investigated, the chloro-derivative presented a broad spectrum of antifungal activity and also antichemotactic activity, with a 100% reduction in leukocyte migration. The minimum inhibitory concentration (MIC) range of the compounds was 25 to 50 μg/mL, with a mechanism of action related to complexation with fungal ergosterol. The nanoemulsion developed with the most effective compound improved the in vitro antifungal activity, reducing MIC values by up to 64-fold for dermatophytes and 4-fold for Candida spp. The most promising chloro derivative was not mutagenic, nor did it cause cellular inviability of human leukocytes, although it did present dose-dependent damage to the DNA. In addition, it was not irritant (chorioallantoic membrane assay - HET-CAM) and totally inhibited fungal growth in an alternative model of dermatophytosis. For δ-lactones (δ-Ls), 2nd class, none of the compounds were mutagenic, genotoxic or irritant when evaluated at higher concentrations than MIC. Two of the compounds in the series had the lowest MIC values (25-50 μg/mL) and a broader spectrum of antifungal activity against filamentous fungi and yeasts. The mechanism of action was related to the damage in the cell wall and membrane, with specific target action dependent on the type of halogen present in the structure. Damage to fungal cells was corroborated by scanning electron microscopy images, which highlighted lysed cells and completely altered their morphology after in vitro treatment with δ-Ls. For the 2-substituted 1,4-benzenediols (1,4-BZs), six molecules (2, 5, 6, 8, 11 and 12) presented broad spectrum of antimicrobial action, including effect against resistant and multidrug-resistant species of dermatophytes (T. mentagrophytes), NAC and bacteria. The MIC ranges of these compounds for fungi and bacteria were 25 to 50 μg/mL and 8 to 128 μg/mL, respectively, and the mechanism of antifungal action was related to cell wall and membrane. Compound 8, which is more promising regarding the antifungal effect, did not cause genotoxicity and mutagenicity in human leukocyte cells nor hemolysis. In addition, the compounds were non-irritating (HET-CAM). Finally, for the substituted 1,3-bisaryloxypropane derivatives (1,3-BXPs), representing the last group of molecules investigated, the best profile of antifungal activity/toxicity was found among all the chemical classes analyzed in this study, with emphasis for the compound 2j (1,3-bis(3,4-dichlorophenoxy)propan-2-aminium chloride). 2j was the most active fungicide against dermatophytes and Candida spp., in very low minimal fungicidal concentrations (MFCs) (0.39 - 3.12 μg/mL), including action against resistant and multidrug-resistant clinical isolates. The toxicity profile of 2j was promising, with a selectivity index > 10, in relation to human lymphocytes. The compound was classified as non-irritant by the HET-CAM test and did not cause histopathological changes in pig ear skin, presenting an excellent perspective for topical application. 2j targets the fungal cell wall, which was confirmed by scanning electron microscopy images. The compound was incorporated into a hydrogel with bioadhesive potential. The results of human skin permeation showed that 2j remained significantly in the epidermis, ideally for the treatment of dermatomycosis. In addition, in relation to systemic candidiasis in Toll-deficient Drosophila melanogaster, 2j presented a statistically comparable efficacy to fluconazole in the control of the infectious process. Therefore, compound 2j has demonstrated potential for the development of antifungal drugs with a mechanism of action elucidated and already applied in a semi-solid formulation aimed at a new therapeutic option for fungal skin infections not responsive to conventional treatment.

Objetivos: Determinar la evolución epidemiológica de las dermatomicosis en pacientes de consultorio externo durante el periodo 1976-2005. Diseño: Estudio descriptivo, retrospectivo y analítico. Lugar: Instituto de Medicina Tropical ‘Daniel Alcides Carrión’, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Participantes: Pacientes positivos a dermatomicosis. Intervenciones: Se revisó las historias clínicas de 7 185 (55,3%) casos positivos a dermatomicosis. El instrumento de investigación empleado fue la ficha de levantamiento de información. Principales medidas de resultados: Agente etiológico, estación del año, sexo, edad y forma clínica. Resultados: El estudio demostró que los más afectados fueron del grupo etario de 16 a 30 años (42,7%) y sexo femenino (52,1%). La dermatomicosis más frecuente fue la onicomicosis (43,6%). Los agentes patógenos de mayor prevalencia fueron Trichophyton rubrum (33,2%), Cándida albicans (15,3%), Cándida no albicans (11,8%), Trichophyton mentagrophytes (9,4%), Malassezia spp (9,1%) y las infecciones mixtas (7,2%). Las micosis de cuero cabelludo muestran continuo aumento durante todo el estudio. El dermatofito Epidermophyton floccosum fue aislado por última vez en la década del 90. A partir de 1995 ha aumentado la prevalencia de Cándida no albicans y se encontró como especie re-emergente a la levadura Cándida tropicalis. Conclusiones: Entre los años 1976 y 2005 hubo importantes variaciones epidemiológicas en relación a las formas clínicas y a la etiología de las dermatomicosis., Objectives: To determine dermatomycoses epidemiological evolution in outpatients during the period 1976-2005. Design: Descriptive, retrospective, and analytical study. Setting: Daniel Alcides Carrion Institute of Tropical Medicine, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Participants: Patients positive to dermatomycoses. Interventions: Medical records of 7 185 (55.3%) dermatomycoses-positive patients were reviewed. Main outcome measures: Etiologic agent, season, gender, age, and clinical forms. Results: Females (52.1%) and the 16 to 30 year-old group (42.7%) were the most affected. Most frequent dermatomycoses was onychomycosis (43.6%). Most prevalent pathogens were Trichophyton rubrum (33.2%), Candida albicans (15.3%), Candida non albicans (11.8%), Trichophyton mentagrophytes (9.4%), Malassezia spp. (9.1%), and mixed infections (7.2%). The fungal scalp infection showed steady increase during the period studied. Epidermophyton floccosum dermatophyte was isolated for the last time in the 1990s. Since 1995 prevalence of Candida non albicans has increased and Candida tropicalis yeast species are re-emerging. Conclusions: Epidemiological changes in dermatomycoses clinical forms and etiology were found between 1976 and 2005.

Las micosis superficiales son muy comunes y por ello son motivo de consulta médica frecuente. El objetivo de este trabajo fue conocer la frecuencia de diagnóstico de las micosis superficiales en el Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” en Caracas, Venezuela, durante 14 años (2001-2014). Se realizó un estudio transversal y retrospectivo de revisión de historias micológicas de pacientes con diagnóstico presuntivo de micosis superficial. Las muestras procesadas fueron uñas, pelos y escamas epidérmicas. La identificación de los hongos se realizó mediante observación macro y microscópica de las colonias y pruebas de identificación bioquímicas y fisiológicas, según requerimiento del agente aislado. Para la investigación de Malassezia spp. solo se realizó examen directo. De las 3228 muestras procesadas, 1098 (34%) resultaron positivas y su distribución según el agente etiológico fue: 79,5% dermatofitos; 10,9% levaduras; 5,1% hongos no dermatofitos y 4,5% Malassezia spp. El dermatofito más aislado fue el Complejo Trichophyton rubrum (70,1%), seguido del Complejo T. mentagrophytes (15,1%), Microsporum canis (9,4%) y Epidermophyton floccosum (4%). Las tiñas más frecuentes fueron: Tinea unguium (66,8%), seguida de Tinea pedis (16,4%) y Tinea capitis (8,1%). En el grupo de levaduras el Complejo Candida parapsilosis (37,5%) fue el más aislado y entre los hongos no dermatofitos el más frecuente fue Fusarium spp. (53,6%), seguido de Aspergillus spp. (19,6%) y Acremonium spp. (10,7%). La identificación del agente etiológico es fundamental para orientar un tratamiento adecuado. Esta casuística constituye un aporte importante para el conocimiento de la epidemiología de las micosis superficiales en nuestro país. The superficial mycoses are very common infectious diseases and therefore are a frequent reason for medical consultation. The aim of this study was to determine the diagnostic frequency of superficial mycoses in the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” during 14 years (2001-2014). A retrospective cross-sectional study was performed to review the mycological records of patients with presumptive diagnosis of superficial mycosis. Nails, hairs and epidermal scales were the processed samples. The identification of fungi was performed by macro and microscopic observation of colonies and biochemical and physiological tests, as required of the isolated agent. For the investigation of Malassezia spp. only direct examination was performed. Of the 3 228 samples processed, 1 098 (34%) were positive and their distribution according to the etiological agent was: dermatophytes 79.5%; 10.9% yeasts; non-dermatophytes fungi 5.1% and 4.5% Malassezia spp. The most frequently isolated dermatophyte was Trichophyton rubrum Complex (70.1%), followed by T. mentagrophytes complex (15.1%), Microsporum canis (9.4%) and Epidermophyton floccosum (4%). The most frequent ringworms were: Tinea unguium (66.8%), followed by Tinea pedis (16.4%) and Tinea capitis (8.1%). Candida parapsilosis complex (37.5%) was the most frequently isolated yeast and Fusarium spp. (53.6%) was the most isolated among non-dermatophyte fungi, followed by Aspergillus spp. (19.6%) and Acremonium spp. (10.7%). The identification of the etiological agent is essential to guide appropriate treatment. This study constitutes an important contribution to the knowledge of the epidemiology of superficial mycoses in our country.

Objectives: To determine dermatomycoses epidemiological evolution in outpatients during the period 1976-2005. Design: Descriptive, retrospective, and analytical study. Setting: Daniel Alcides Carrion Institute of Tropical Medicine, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Peru. Participants: Patients positive to dermatomycoses. Interventions: Medical records of 7 185 (55.3%) dermatomycoses-positive patients were reviewed. Main outcome measures: Etiologic agent, season, gender, age, and clinical forms. Results: Females (52.1%) and the 16 to 30 year-old group (42.7%) were the most affected. Most frequent dermatomycoses was onychomycosis (43.6%). Most prevalent pathogens were Trichophyton rubrum (33.2%), Candida albicans (15.3%), Candida non albicans (11.8%), Trichophyton mentagrophytes (9.4%), Malassezia spp. (9.1%), and mixed infections (7.2%). The fungal scalp infection showed steady increase during the period studied. Epidermophyton floccosum dermatophyte was isolated for the last time in the 1990s. Since 1995 prevalence of Candida non albicans has increased and Candida tropicalis yeast species are re-emerging. Conclusions: Epidemiological changes in dermatomycoses clinical forms and etiology were found between 1976 and 2005. Objetivos: Determinar la evolución epidemiológica de las dermatomicosis en pacientes de consultorio externo durante el periodo 1976-2005. Diseño: Estudio descriptivo, retrospectivo y analítico. Lugar: Instituto de Medicina Tropical ‘Daniel Alcides Carrión’, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú. Participantes: Pacientes positivos a dermatomicosis. Intervenciones: Se revisó las historias clínicas de 7 185 (55,3%) casos positivos a dermatomicosis. El instrumento de investigación empleado fue la ficha de levantamiento de información. Principales medidas de resultados: Agente etiológico, estación del año, sexo, edad y forma clínica. Resultados: El estudio demostró que los más afectados fueron del grupo etario de 16 a 30 años (42,7%) y sexo femenino (52,1%). La dermatomicosis más frecuente fue la onicomicosis (43,6%). Los agentes patógenos de mayor prevalencia fueron Trichophyton rubrum (33,2%), Cándida albicans (15,3%), Cándida no albicans (11,8%), Trichophyton mentagrophytes (9,4%), Malassezia spp (9,1%) y las infecciones mixtas (7,2%). Las micosis de cuero cabelludo muestran continuo aumento durante todo el estudio. El dermatofito Epidermophyton floccosum fue aislado por última vez en la década del 90. A partir de 1995 ha aumentado la prevalencia de Cándida no albicans y se encontró como especie re-emergente a la levadura Cándida tropicalis. Conclusiones: Entre los años 1976 y 2005 hubo importantes variaciones epidemiológicas en relación a las formas clínicas y a la etiología de las dermatomicosis.

Compounds present in marine algae can play important biological functions, such as: antimicrobial activity, antifungal, cytotoxicity, larvicidal, molluscicidal, direct “in vivo” or indirectly, activating the defense mechanisms of the hosts. The objective of this study was to evaluate the biological activity of marine benthic algae extracts collected from a beach located on the north coast of Alagoas called Praia de Riacho Doce. Extracts and fractions obtained from algae: Dictyota dichotoma, Padina gymnospora, Digenea simplex, Hypnea musciformis, Sargassum vulgare, Ulva lactuca, Gracilaria caudata, Galaxaura rugosa and Gellidium pusillum were all tested. After collecting, sorting and identifying the dried and powdered seaweed (500g), they were submitted to an extraction with solvents: dichloromethane, chloroform, methanol, ethanol and water. The dichloromethane extracts of H. musciformis and P. gymnospora were selected for fractioning because they presented better yielding. A cytotoxicity evaluation was done facing the human cancerous cells: NCI-H292 - human lung cancer, HEp-2 - epidermoide carcinoma of human larynx, K562 - chronic myelocytic leukemia; facing the dermatophytic fungi: Trichophyton rubrum, T. tonsurans, T. mentagrophytes, Microsporum canis, M. gypseum, Epidermophyton flocossum - and four species of Candida (C. albicans, C. krusei, C. guilliermondii, C. parapsilosis) as well as the evaluation of larvicidal activity against Aedes aegipty, molluscicidal against Biomphalaria glabrata and toxic against Artemia salina. The cytotoxicity activity was done by colorimetric MTT-Methyl Tetrazolium Triazole according to the National Cancer Institute (NCI) protocol. For the fungicidal activity, the methodology outlined in document M27-A2 and M38A was used by the Clinical and Laboratory Standard Institute appropriate for dermatophytes and by M44A standards for Candida. In the bioassays for the control of Aedes aegipty, larvae from the fourth instar in two repetitions were used and extracts that had a mortality rate of less than 50% followed for the tests found. Toxicity assay against brine shrimp nauplii were performed according to the methodology given in literature with some modifications, to obtain mean lethal concentrations (LC50). We note that extracts with higher anticancer action are from species H.musciformis, D. simplex, P. gymnospora, S. vulgare, D. dichotoma, particularly the extracts dichloromethane, chloroform and chloroform fraction. The test results with A. saline showed a low toxicity of the crude extracts of marine algae tested, since, except the ethanolic extract of H. musciformis, all extracts showed LC50> 10-3. Regarding B. glabrata, only the chloroform fractions of the species H. musciformis and P. gymnospora showed molluscicidal activity. Regarding dermatophytes and Candida, dichloromethane and ethanol extracts were the best that have antifungal activity. The results showed that the algae from the coast of Alagoas have a potential that this was not explored until allowing a very promising future use. Compostos presentes em algas marinhas podem desempenhar importantes funções biológicas, entre elas: atividade antimicrobiana, antifungica, citotóxica, larvicida, moluscicida, de forma direta “in vivo” ou indireta, ativando mecanismos de defesa dos hospedeiros. O objetivo deste trabalho foi avaliar atividade biológica de extratos de algas marinhas bentônicas. Foram testados extratos brutos e frações obtidas de algas: Dictyota dichotoma, Padina gymnospora, Digenia simplex, Hypnea musciformis, Sargassum vulgare, Ulva lactuca, Gracilaria caudata, Galaxaura rugosa e Gellidium pusillum coletadas na Praia de Riacho Doce, litoral norte do Estado de Alagoas. Apos coleta, triagem e identificação, as algas secas (500g) e pulverizadas foram submetidas à extração com os solventes: diclorometano, clorofórmio, metanol, etanol e água. Os extratos em diclorometano de H. musciformis e P. gymnospora foram selecionados para fracionamento, por apresentaram melhores rendimentos. Foi realizada avaliação citotóxica frente a células cancerígenas humanas: NCI-H292 - câncer de pulmão humano, HEp-2-carcinoma epidermóide de laringe humana; K562 -leucemia mielocítica crônica; frente aos fungos dermatófitos: Trichophyton rubrum, T. tonsurans, T. mentagrophytes, Microsporum canis,M. gypseum, Epidermophyton flocossum- e quatro espécies de Candida(C. albicans;C. krusei;C. guilliermondi; C. parapsilosis) bem como, avaliação da atividade larvicida contra larvas de Aedes aegipty, moluscicida contra Biomphalaria glabrata e toxica contra Artemia salina. A avaliação da citotoxicidade foi realizada pelo método colorimétrico do MTT-Metil Triazol Tetrazolio de acordo com o Protocolo do National Câncer Institute (NCI). Para atividade fungicida empregou-se a metodologia descrita no documento M27-A2 e M38A pelo Clinical and Laboratory Standard Institute adequado para dermatófitos e pela norma M44A para Candida. Nos bioensaios para controle do Aedes aegipty, foram utilizadas larvas do quarto ínstar em duas repetições e os extratos que tiveram um percentual de mortalidade igual ou superior a 50% seguiram para estudo. Ensaio de toxicidade contra nauplius de Artemia salina foram realizados de acordo com a metodologia descrita na literatura com algumas modificações, para obtenção de concentrações letais médias (LC50). Verificamos que os extratos das espécies H.musciformis, D. simplex, P. gymnospora, S. vulgare, D. dichotoma possuem maior ação anticâncer sobretudo nos extratos obtidos com diclorometano, clorofórmio e fração clorofórmica. Os resultados obtidos no ensaio com A. salina indicaram uma baixa toxicidade dos extratos brutos de algas marinhas testados, uma vez que, excetuando-se o extrato etanolico de H. musciformis, todos os extratos apresentaram LC50> 103. Em relação a B. glabrata, apenas as frações em clorofórmio da espécie H. musciformis e P. gymnospora apresentaram atividade moluscicida. Em relação aos dermatófitos e Candida, os extratos diclorometano e etanol foram os que melhor apresentaram atividade antifúngica.Os resultados permitiram concluir que as algas do litoral alagoano possuem um potencial que até o presente momento não foi explorado sugerindo uma utilização futura bastante promissora.

Objetivo. Determinar la prevalencia de las alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas clínicamente presuntivas de ser causadas por hongos y analizar demográficamente su presentación. Materiales y métodos. Se realizó un estudio retrospectivo en una clínica para pequeños animales en Bogotá; se revisaron historias clínicas de pacientes que consultaron por alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas durante 2009 y 2010. Resultados. En el período evaluado la prevalencia de las alteraciones dermatológicas en caninos fue de 7,8%, las óticas de 4,2% y las oftalmológicas de 3,3%. Dentro de las alteraciones dermatológicas, la sospecha etiológica principal por diagnóstico clínico fueron los dermatofitos con 86,9%, en las alteraciones óticas fue Malassezia con 86,5% y para las oftalmológicas fue Candida con 83,3%. El análisis estadístico de variables no mostró asociación con los síntomas ni con los agentes etiológicos diagnosticados clínicamente; sin embargo, la evaluación categorizada evidenció asociaciones entre razas y edades con las etiologías por diagnóstico clínico. El diagnóstico de las etiologías micóticas se estableció en la mayoría de los casos por hallazgos clínicos y con menor frecuencia por raspado de piel y citología ótica; en ninguno de los casos se realizó cultivo micológico. La población felina no presentó alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas clínicamente compatibles con etiología fúngica. Conclusión. En caninos, la prevalencia de las alteraciones dermatológicas clínicamente compatibles con dermatofitos fue de 86,9%, los procesos óticos asociados con Malassezia de 86,5% y los oftalmológicos sospechosos de Candida con 83,3%. Los diagnósticos definitivos se establecieron por hallazgos clínicos sin la realización de metodologías diagnósticas estándar como el cultivo. Objective. To determine the prevalence of dermatological, ear and ophthalmological alterations clinically presumptive to be caused by fungi and to analyze their occurrence demographically. Materials and methods. We carried out a retrospective study in a clinic in Bogota for small animals. We reviewed the medical histories of patients who requested medical appointments due to dermatological, ear and ophtalmological alterations in 2009 and 2010. Results. In the assessed period, the prevalence of dermatological alterations in dogs was of 7.8%, 4.2% of ear alterations and of 3.3% of ophtalmological alterations. The main etiological suspects through clinical diagnosis were: dermatophytes with an incidence of 86.9% among dermatological alterations, Malassezia with an 86.5% of incidence in ear alterations, and Candida with 83.3% of incidence in ophtalmological alterations. Statistical analysis of variables showed no association with symptoms or clinically diagnosed etiological agents, but the categorized evaluation showed associations of races and ages with the etiologies through clinical diagnosis. The diagnosis of fungal etiologies was accomplished in most cases by clinical findings and less frequently by skin scrapings and ear cytology; in none of the cases a mycological culture was done. The feline population showed no dermatological, ear or ophtalmological alterations compatible with a fungal etiology. Conclusion. In canines, the prevalence of dermatological alterations clinically compatible with dermatophytes was of 86.9%; ear alterations associated with Malassezia were of 86.5%; and ophtalmological alterations Candida-suspected were 83.3%. Final diagnoses were accomplished with the help of clinical findings without following standard diagnostic methodologies such as cultivation. Objetivo. Determinar a prevalência das alterações dérmicas, óticas e oftálmicas clinicamente presuntivo de serem causadas por fungos e analisar demograficamente sua apresentação. Materiais e métodos. Foi realizado um estudo retrospectivo numa clínica para pequenos animais em Bogotá; foram revisadas as histórias clínicas de pacientes com alterações dérmicas, óticas e oftalmicas em 2009 e 2010. Resultados. Durante o período de avaliação a prevalência das alterações dérmicas em cães foi de 7,8%, as óticas de 4,2% e as oftálmicas de 3,3%. Dentro das alterações dérmicas, a principal suspeita etiológica por diagnóstico clínico foram os dermatófitos com 86,9%, nas alterações óticas foi Malassezia com 86,5% e para as oftálmicas foi Candida com 83,3%. A análise estatística das variáveis não apresentou associação com os sintomas ou com os agentes etiológicos diagnosticados clínicamente; embora, a avaliação categorizada evidenciou associações entre raças e idades com as etiologias por diagnóstico clínico. O diagnóstico das etiologias micóticas foi estabelecido na maioria dos casos pelos achados clínicos e, menos freqüentemente por raspados de pele e citologia ótica, em nenhum dos casos foi realizada uma cultura micótica. A população felina não apresentou alterações dérmicas, óticas e oftálmicas clinicamente compatíveis com etiologia fúngica. Conclusão. Em cães, a prevalência das alterações dérmicas clinicamente compatíveis com dermatófitos foi de 86,9%, os processos óticos associados com Malassezia foi de 86,5% e os oftálmicos suspeitos de Candida foi de 83,3%. Os diagnósticos definitivos foram estabelecidos pelos achados clínicos sem a realização de métodos diagnósticos padroes, como o cultivo.