Search

El cadmio (Cd) es un metal no esencial que se encuentra usualmente en la naturaleza como mineral en combinación con otros elementos en forma de óxido de cadmio (CdO), sulfato de cadmio (CdSO4) y cloruro de cadmio (CdCl2). Además se ha catalogado dentro de las 20 substancias más tóxicas de las cuales se ha incrementado su distribución en el medio ambiente por ser ampliamente utilizado en la manufactura de pilas, fertilizantes, cerámicas y plásticos, es de esta manera que el ser humano está expuesto a este metal y como consecuencia afecta varios órganos y tejidos, incluyendo el riñón, el pulmón, el páncreas y la próstata, sin embargo su órgano blanco es el hígado, donde basicame se acumula y se sintetiza una proteína de bajo peso molecular (6 kDa) metalotioneína (MT) que contiene grupos sulfhídrilos a los que el Cd se une como un mecanismo de defensa. A nivel celular existen evidencias que el Cd induce la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) en parte vía NADPH oxidasa. Se ha reportado a las ERO como mediadoras en vías de señalización en respuesta al Cd, llevando a la activación del factor de transcripción Stat-3, cuyo mecanismo de señalización se ha relacionado con MAPK y la transactivación mediada por la cinasa Src y el receptor de crecimiento epidermal (EGFR), al ser sensibles a ERO. Sin embargo a pesar de que el organismo trata de inducir una respuesta de defensa, se ha reportado que el Cd es capaz de llevar a las células a apoptosis. Es por ello el interés de estudiar el mecanismo de respuesta del hepatocito ante el Cd implicando la activación del factor de transcripción Stat-3 abordando la participación de la NADPH oxidasa y Src-EGFR así como su relación con la producción de MT-II y la apoptosis. Los hepatocitos fueron tratados con diferentes tiempos y concentraciones de Cd para evaluar la viabilidad celular mediante el ensayo de violeta cristal así como activación de Src, STAT3 , ERK1/2, MT-II, p53 y Bax por Western blot. La participación de las ERO en la activación del factor de transcripción Stat-3 y de la cinasa Src se evaluó pre tratando los hepatocitos con un antioxidante Catalasa pegilada (pCAT) por 30 min. Para evaluar la generación de ERO se utilizó el método fluorométrico con DCFH-DA y se realizó un barrido de tiempo (0, 2, 2.5, 5, 10, 15, 30, 45, 60 y 90 min), además para determinar la fuente de ERO los hepatocitos se pre trataron con el inhibidor de NADPH oxidasa (AEBSF) seguidos de 5 M de CdCl2 utilizando los tiempos del barrido. La actividad de la NADPH oxidasa se obtuvo midiendo el consumo de la NADPH inhibido por DPI empleando los mismos tiempos de incubación de la generación de ERO. El papel de NADPH oxidasa, Src y el EGFR en la fosforilación de Stat3, transactivación del EGFR, activación de ERK1/2 y producción de MT-II se evaluó pre tratando con los inhibidores: AEBSF, SU6656 para Src y AG1478 para el EGFR. La apoptosis se midió con la tinción del kit de Annexin-V-fluos por citometría de flujo. Los resultados demuestran un incremento significativo en la activación del factor a nivel de tirosina a partir de los 5 min e incrementándose con respecto al tiempo de incubación con el Cd. Por otra parte la fosforilación a nivel de serina presentó un incremento a partir de la hora. Con el antioxidante (pCAT) se encontró disminuida la activación en ambos sitos de fosforilación de Stat-3 así como la activación de Src. En la generación de ERO por Cd se observó una máxima producción de ERO a los 2.5 min declinando a los 5 min sin dejar ser significativa y por lo tanto sin llegar a niveles del control. La NADPH oxidasa participó en la formación de ERO, porque al pre tratar con su inhibidor (AEBSF) las ERO se abatieron de manera significativa con respecto a los hepatocitos tratados con sólo Cd. La actividad de la NADPH oxidasa mostró un comportamiento semejante al de la formación de ERO porque a los 2.5 min se encontró la máxima actividad de esta oxidasa. Al realizar las inmunoprecipitaciones de Src-EGFR, Stat3-Src y EGFR-Stat3 encontramos una interacción directa entre las proteínas estudiadas. En cuanto a la expresión de MT-II como proteína de respuesta final, esta comenzó a ser significativa a partir de las 2 h encontrando una máxima expresión de 60 veces más que el control a las 4 h. También se encontró que al pre-tratar con los inhibidores de NADPH oxidasa, Src y EGFR la expresión de la MT se disminuyen de manera significativa con respecto a los hepatocitos tratados con Cd. Finalmente a pesar de que el hepatocito trata de responder ante el Cd, lo lleva a apoptosis activando a p53 y Bax a las 12 h de tratamiento. Estos resultados sugieren que el Cd activa al factor de transcripción Stat3 a través de la participación de las ERO generadas por la NADPH oxidasa llevando a la fosforilación de Src, transactivación del EGFR y fosforilación de ERK1/2, dando como respuesta celular la expresión de la MT-II, pero finalmente los hepatocitos mueren por apoptosis implicando a p53 y Bax en el proceso. Cadmium (Cd) is a metal which is non-essential in nature and usually in combination with other mineral elements in the form of cadmium oxide (CdO), cadmium sulphate (CdSO4) and cadmium chloride (CdCl2). It has further been listed in the most toxic substances 20 which has an increased distribution in the environment to be widely used in the manufacture of batteries, fertilizers, ceramics and plastics, is in this manner that the human being is exposed to This metal and consequently affects various organs and tissues, including the kidney, lung, pancreas and prostate, but its target organ is the liver, where it is accumulates and synthesize a low molecular weight protein (6 kDa) metallothionein (MT) containing the sulfhydryl groups that Cd binds as a defense mechanism. At the cellular level there is evidence that induces the production of reactive oxygen species (ROS) in part via NADPH oxidase. It has been reported as a ROS signaling pathways mediating defense response to Cd, leading to activation of the transcription factor Stat-3, the signaling mechanism is related MAPK mediated transactivation and Src kinase receptor epidermal growth (EGFR), to be sensitive to ROS. But even though the body tries to induce a defense response, it has been reported that Cd can cause cells to apoptosis. It is therefore of interest to study the mechanism of response of hepatocyte against Cd involving the activation of the transcription factor Stat3 addressing involving NADPH oxidase and Src-EGFR and its relationship with the production of MT-II and apoptosis . Hepatocytes were treated with different concentrations of Cd times and assessing cell viability using the crystal violet assay as activation of Src, Stat3, ERK1/2, MT-II, p53 and Bax by Western blot. The involvement of ROS in the activation of the transcription factor Stat-3 and the Src kinase was assessed pre treating hepatocytes with an antioxidant catalase pegylated (pCAT) for 30 min. To evaluate the generation of ROS fluorometric method was used with DCFH-DA and performed a sweep time (0, 2, 2.5, 5, 10, 15, 30, 45, 60 and 90 min), and to determine the source ROS pre hepatocytes are treated with the inhibitor of NADPH oxidase (AEBSF) followed by 5 M CdCl2  using scanning times. The NADPH oxidase activity was obtained by measuring the NADPH consumption DPI inhibited by using the same incubation times of the generation of ROS. The role of NADPH oxidase in Src and EGFR phosphorylation of Stat-3, EGFR transactivation, activation of ERK1/2 and MT-I production was assessed pre treated with inhibitors: AEBSF, SU6656 for Src and AG1478 for EGFR. Apoptosis was measured by staining kit Annexin-V-Fluos by flow cytometry. The results demonstrate a significant increase in activation of the tyrosine level factor from the 5 min and increasing with respect to time of incubation with the Cd Moreover phosphorylation at serine showed an increase from the time.With the antioxidant (pCAT) activation was decreased in both sites of phosphorylation of Stat-3 activation and Src. In the generation of ROS by Cd was observed maximum ROS production declining by 2.5 min at 5 min while being significant and therefore did not reach levels of control. The NADPH oxidase involved in the formation of ROS, because the pre treat with its inhibitor (AEBSF) ROS were brought down significantly compared to hepatocytes treated with Cd only behavior of NADPH oxidase activity showed a similar behavior the formation of ROS for the 2.5 min peak was found for this oxidase. When performing immunoprecipitations of Src-EGFR, Stat-3-Src and EGFR-Stat-3 found a direct interaction between each pair of proteins studied. As for the expression of MT-II protein as final response, it began to be significantly after 2 h finding the maximum expression 60 times more than the control at 4 h. We also found that by pretreating with NADPH oxidase inhibitors, Src EGFR expression and the MT are reduced significantly with respect to hepatocytes treated with Cd Finally Cd that the hepatocyte is accountable to the Cd, leads to apoptosis activating p53 and Bax at 12 h of treatment. These results suggest that the active Cd transcription factor Stat-3 through the involvement of ROS generated by NADPH oxidase leading to the phosphorylation of Src EGFR transactivation and phosphorylation of ERK1/2, leading to the expression cell response MT-II, but eventually die due to apoptosis of hepatocytes involving p53 and Bax in the process.

Many natural compounds that possess chemopreventive or chemoprotective properties are of vital importance in the management of diseases with an inflammatory component. These properties are attributed to its antioxidant or antiinflammatory activity. Glycine has chemoprotective activity because it strongly reduces serum levels of proinflammatory cytokines and increased inflammatory cytokine levels in 3T3-L1 cells. Significantly reduces the percentage of glycated hemoglobin (A1c), proinflammatory stimuli sensitivity and increases the expression of interleukin 10 (IL-10) in monocytes. A diet supplemented with glycine reduces oxidative stress and increases antioxidant enzymes activity in rats subjected to hemorrhagic shock. Recently, it was demonstrated that glycine reduces the expression and secretion of proinflammatory adipokines in monosodium glutamateinduced obese mice (MSG/Ob). It has been postulated that these effects can be explained by a reduction in the activation of nuclear factor kappa B (NF-κB). NF-κB is a transcription factor essential for inflammatory response. Hasegawa et al. (2011) reported a reduction of NF-κB by employing glycine. In this sense, this research focused on studying the influence of glycine on the pathway of NF-κB in cultured fibroblasts differentiated into adipocytes. The effects of glycine in activation of NF-κB, on the inhibitors of this transcription factor (IκB's) and its subunits, as well as in the expression of adipokines, were evaluated in cells treated with TNF- 5 ng/mL during 30 min (positive control), 10 mM glycine (30 min, 1 h and 2 h), followed by addition of TNF- 5 (ng/mL, 30 min), either alone or with pretreatment with 10 mM glycine (30 min, 1 h, 2 h) without further stimulation. Glycine and TNF- were dissolved in DMEM. Control cells were treated with the same volume of solvent. Nuclear and cytosolic proteins were quantified by EMSA assays, Western blot and Oxy-blotting, whereas the expression of cytokines was measured by RT-PCR in real time. The results show that pretreatment with glycine interferes with activation of NF-κB, that is stimulated by tumor necrosis factor alpha (TNF-). The glycine alone stimulates the activation of NF-κB in an unusual way, where degradation κB- inhibitor (IκB-) is more important than κB- inhibitor (IκB-). Pretreatment with glycine for 60 minutes, followed by TNF-, suppresses the expression of TNF- and Interleukin 6 (IL-6). However, treatment with glycine alone without stimulation of TNF- did not change expression levels of any adipokine. These results support the idea that the glycine may be used in alternative treatment of chronic inflammation that is characterized by a high production of proinflammatory cytokines, which is a characteristic of obesity and other comorbidities. Numerosos compuestos naturales que poseen propiedades quimiopreventivas o quimioprotectoras son de importancia vital en el manejo de patologías con un componente inflamatorio. Dichas propiedades suelen atribuirse a su actividad antioxidante o antiinflamatoria. La glicina posee actividad quimioprotectora debido a que reduce eficazmente los niveles séricos de citocinas proinflamatorias y aumenta los niveles de citocinas antiinflamatorias en células 3T3-L1. Disminuye significativamente el porcentaje de hemoglobina glicada (A1c), la sensibilidad a estímulos proinflamatorios e incrementa la expresión de interleucina 10 (IL-10) en monocitos. Una dieta suplementada con glicina disminuye el estrés oxidativo y aumenta la actividad de enzimas antioxidantes en ratas sometidas a shock hemorrágico. Recientemente, se ha demostrado que la glicina disminuye la expresión y secreción de adipocinas proinflamatorias en ratones obesos inducidos con glutamato monosódico (GMS/Ob). Se ha postulado que estos efectos pueden ser explicados por una reducción en la activación del factor nuclear kappa B (NF-κB). NF-κB es un factor de transcripción esencial para la respuesta inflamatoria. Hasegawa et al. (2011) reportaron una reducción de NF-κB por empleo de la glicina. En este sentido, la presente investigación se centró en estudiar la influencia de la glicina sobre la vía del NF-κB en cultivos de fibroblastos diferenciados a adipocitos. Para evaluar el efecto de la glicina en la activación del NF-κB, sobre los inhibidores de este factor de transcripción (IκB’s), sus subunidades y la expresión de adipocinas, las células fueron tratadas con TNF- 5 ng/mL durante 30 min (control positivo) con glicina 10 mM (30 min, 1 h y 2 h), seguido de la adición de 5 ng/mL de TNF- (30 min), o bien sólo el pretratamiento con glicina 10 mM (30 min, 1 h, 2 sin ningún otro estímulo. La glicina y el TNF- se disolvieron en DMEM. Las células control fueron tratadas con el mismo volumen del disolvente. Las proteínas nucleares y citosólicas fueron cuantificadas a través de ensayos de EMSA, Western Blot y Oxy-Blot, mientras que la expresión de citocinas se midió por RT-PCR en tiempo real. Los resultados muestran que el pretratamiento con glicina interfiere con la activación de NF-κB, que es estimulada por el factor de necrosis tumoral alfa (TNF- ). La glicina sola estimula la activación de NF-κB de una manera inusual, donde la degradación del inhibidor κB- (IκB-) es más importante que la de inhibidor κB- (IκB-). El pretratamiento durante 60 minutos con glicina, seguido por TNF-, suprime la expresión de TNF- e interleucina 6 (IL-6). Sin embargo, el tratamiento con glicina sin estimulación de TNF-, no modificó los niveles de expresión de ninguna adipocina. Estos resultados apoyan la idea de que la glicina podría ser utilizada en el tratamiento alternativo de la inflamación crónica que se caracteriza por una elevada producción de citocinas proinflamatorias, que es una característica de la obesidad y otras comorbilidades.

Background: The cytomeglovirus infection is among the most feared complications in patients with immunological immaturity (preterm) and immunosuppressed (patients with bone marrow transplantation). The antigenemia or the polymerase chain reaction (PCR) tests have been routinely used for the detection of CMV in immunosuppressed patients. However, using these techniques for the diagnosis of active CMV infection in preterm infants has been limited because the vascular access is difficult. For this reason, it has turned to alternative samples such as blood collection in filter paper cards (Guthrie card). Furthermore, it has been proposed that the characterization of the surface proteins, such as gB is necessary because, apparently the presence of a particular genotype and the presence of genotype mixtures, in the same patient can affect the development of the syndrome caused by CMV. Objective: The aim of this work was to identify and characterize active CMV infection in preterm patients and pediatric patients with bone marrow transplantation. Methods: It was evaluated 271 samples of saliva and 2171 preserved blood in Guthrie cards of preterm infants (RNP) obtained from the Hospital de la Mujer of Mexico City. Real time PCR (PCR-TR) and n-PCR was performed in DNA extracted from Guthrie cards, besides of n-PCR of saliva, and as a gold standard infection with CMV in cell culture. It was used also a nested multiplex PCR to determine the distribution of CMV genotypes in 30 mexican patients who underwent bone marrow transplantation from the Hospital Infantil de México Federico Gómez and Centro Médico Nacional La Raza, IMSS from Mexico City. Results: We evaluated 271 blood samples from Guthrie cards and 271 saliva samples for the presence of CMV. Only 3.69% were positive in culture of saliva, 4.05% were positive by n-PCR in Guthrie cards, 4.05% were positive by RT-PCR in Guthrie cards and 1.10% were positive by n-PCR in saliva. The sensitivity (S) of n-PCR and RT-PCR on Guthrie Cards were 100%, specificity (E) 99%, positive predictive value (PPV) of 90% and negative predictive value (NPV) 100%. The results in n-PCR in saliva were: S of 30%, E 99%, PPV 75% and NPV 97%. Congenital infection with CMV in RNP does not represent a risk to the RNP as none of the RNP detected with congenital CMV infection presented symptoms; the presence of infection in these RNP did not influence their anthropometric characteristics and initial evaluation. The genotypes found in the patients with bone marrow transplantation were: gB1, 9/30 (30%); gB2, 8/30 (27%); gB3, 4/30 (13%), y gB4, 1/30 (3%); mixed genotypes were found in 8/30 patients (27%). Conclusions: The sensitivity in PCR or RT-PCR Guthrie cards was 100%. No relationship was found between viral load and symptoms since no subject had symptomatic infection. The predominant genotypes in our population were gB2 and GB1. It was found a high proportion of mixed genotypes. La infección por Citomegalovirus (CMV) es una de las patologías de mayor riesgo en los pacientes con inmadurez inmunológica (recién nacidos prematuros) e inmunosuprimidos (pacientes con trasplante de médula ósea). La glicoproteína B de superficie (gB), y la presencia de uno o más genotipos, puede influir en el desarrollo de la enfermedad. La antigenemia o reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de sangre, se ha usado rutinariamente para la detección de CMV en pacientes inmunosuprimidos. El uso de estas técnicas para diagnosticar CMV en recién nacidos prematuros ha sido limitado debido al difícil acceso vascular. El empleo de sangre absorbida en tarjetas de papel filtro (tarjeta de Guthrie) es una buena alternativa por la cantidad de muestra que se utiliza. Objetivo: Identificar y caracterizar la infección activa por CMV en pacientes recién nacidos prematuros y pacientes pediátricos con trasplante de medula ósea. Material y Métodos: Se tomaron 271 muestras de saliva y 271 de sangre conservadas en tarjetas Guthrie, de 271 recién nacidos prematuros del Hospital de la Mujer, en la Ciudad de México D.F. Se realizó n-PCR y PCR en tiempo real (PCRTR) en ADN extraído de tarjetas Guthrie, además de n-PCR de saliva, y como estándar de oro, infección en cultivos celulares para detección de CMV. Se utilizó un PCR multiplex anidado para determinar los genotipos de la glicoproteína de CMV gB en 30 pacientes pediátricos mexicanos con trasplante de médula ósea del Hospital Infantil de México Federico Gómez, del Centro Médico Nacional La Raza, y del IMSS, en la Ciudad de México. Resultados: Se evaluaron 271 muestras de sangre en tarjetas Guthrie y 271 muestras de saliva para la presencia de CMV. El 3.69% de éstas, resultó positivo al cultivo de saliva, el 4.05% positivas en n-PCR en tarjetas Guthrie, 4.05% positivas para PCR-TR en tarjetas de Guthrie y 1.10% positivas para n-PCR en saliva. La sensibilidad (S) de n-PCR y PCR-TR en tarjetas Guthrie fue de 100%, la especificidad (E) 99%, el valor predictivo positivo (VPP) de 90% y valor predictivo negativo (VPN) 100%. En la n-PCR en saliva, S del 30%, E del 99%, VPP del 75% y VPN del 97%. Ninguno presentó infección sintomática. Los genotipos en los pacientes trasplantados con medula ósea fueron: gB1, 9/30 (30%); gB2, 8/30 (27%); gB3, 4/30 (13%), y gB4, 1/30 (3%); se encontraron genotipos mezclados en 8/30 pacientes (27%). Conclusiones: La sensibilidad en PCR o PCR-TR de las tarjetas Guthrie fue de 100%. No se determinó relación entre la carga viral y sintomatología ya que ningún paciente presentó infección sintomática. Los genotipos predominantes en nuestra población fueron gB2 y gB1. Se encontró una alta proporción de genotipos mezclados.

Cucurbita ficifolia Bouché es una planta que se cultiva en México por sus frutos comestibles, a los cuales se les ha atribuido potencial terapéutico en el control de la diabetes. Un extracto acuoso de este fruto se ha reportado como hipoglucemiante, antioxidante y antiinflamatorio in vivo. Este extracto contiene Dquiroinositol (DQI) como el componente principal, pero aún no es clara su participación en los efectos biológicos mencionados. En el presente trabajo se investigó el efecto del extracto acuoso (estandarizado con base en su contenido de DQI) y del DQI sintético sobre parámetros de estrés oxidativo e inflamación, dos anormalidades presentes en obesidad y diabetes tipo 2 (DT2), así como en la activación de la proteína cinasa B (PKB), en adipocitos 3T3-L1. Los tratamientos con el extracto de Cucurbita ficifolia y el DQI sintético, disminuyeron la relación GSH/GSSG y H2O2, y aumentaron la actividad de la glutatión peroxidasa. Además, DQI disminuyó la expresión del RNAm y la proteína de TNF-α, IL-6 y resistina, mientras Cucurbita ficifolia disminuyó resistina e incrementó IL-6. Y ambos tratamientos no modificaron los niveles de adiponectina. Por otra parte, el DQI activó PKB en ausencia de insulina como evidencia de su efecto insulinomimético, contrario a lo observado con el extracto acuoso de Cucurbita ficifolia. Por lo tanto, el efecto antioxidante y antiinflamatorio del extracto de Cucurbita ficifolia puede deberse, en parte, a su contenido de DQI. Debido a que incrementó la actividad de la glutatión peroxidasa, la cual participa en la regulación del estado redox (GSH/GSSG) con disminución del H2O2, evitando la activación de la vía inflamatoria. Ambos tratamientos pueden reducir los daños causados por el estrés oxidativo en obesidad y DT2. El efecto antiiinflamatorio del DQI, conjuntamente con su efecto insulinomimético, podrían coadyuvar al tratamiento de estas dos patologías.

El aumento en la expectativa de vida ha tenido implicaciones importantes para los sistemas de salud en el ámbito mundial. Con ello se han incrementado las enfermedades asociadas con la edad, entre las que el deterioro cognitivo representa una condición que afecta de manera directa la calidad de vida de la población adulta de la tercera edad. Adicionalmente, el deterioro cognitivo sin demencia constituye una condición de alto riesgo para la aparición de demencias, como la enfermedad de Alzheimer. Asimismo, algunas enfermedades crónicas como la diabetes mellitus, han mostrado una fuerte relación con el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer, por sus efectos directos o indirectos en el cerebro. La funcionalidad de ciertas enzimas puede verse afectada bajo condiciones patologícas, tal como sucede en la enfermedad de Alzheimer y en la diabetes mellitus. Este es el caso de las colinesterasas. Así, por ejemplo, se ha detectado una elevada actividad colinesterásica en las placas neuríticas y en las marañas neurofibrilares características de pacientes con la enfermedad de Alzheimer, que podrían relacionarse con la agregación amiloide. Se ha reportado que la actividad de las colinesterasas, también aumenta en pacientes diabéticos, en cuyo caso, estas enzimas podrían participar modificando factores de riesgo como la resistencia a la insulina. Además, se han postulado una gran variedad de mecanismos que pueden tener un papel fisiopatogénico común en el desarrollo de desórdenes metabólicos y trastornos cognitivos, pudiendo ser las colinesterasas un vínculo entre ambas condiciones. El objetivo de este trabajo fue establecer la asociación entre el déficit colinérgico, las disfunciones de la memoria y el metabolismo energético, generando un modelo que simulara deterioro cognitivo. Los animales de estudio fueron alimentados con una dieta normal o alta en grasas, según el caso, y se evalúo la capacidad cognitiva, parámetros bioquímicos tales como el perfil lipídico y la actividad de transaminasas, así como la actividad y glicosilación de las colinesterasas. Los resultados obtenidos evidencian que la lesión colinérgica generada en el hipocampo de ratas, por administración de la colinotoxina AF64A, modifica el metabolismo de la glucosa, induce un deterioro en el aprendizaje y la memoria y es capaz de alterar la actividad y glicosilación de las colinesterasas. Asimismo, el consumo de una dieta alta en grasas acelera el deterioro cognitivo y afecta los patrones de glicosilación de AChE y BChE.

Los fitoestrógenos son un grupo de moléculas polifenólicos muy similares a los estrógenos. Sus efectos son en órganos y tejidos cuya función es dependiente de estrógeno. La síntesis y algunos efectos del estradiol en el macho, se lleva a cabo en el testículo de manera local, por lo que los fitoestrógenos tienen su efecto en el testículo mediante su unión a ER, tanto α como β de forma similar a la que lo hacen los estrógenos endógenos. En los últimos años se ha observado que el uso de tales moléculas induce trastornos de la reproducción en un gran número de mamíferos, incluido el hombre. Es importante comprender los mecanismos moleculares asociados con el consumo de fitoestrógenos. Material y métodos En un modelo de ratón macho CD - 1, se probaron tres diferentes fitoestrógenos (coumestrol, genisteína y zearalonona) a diferentes concentraciones. Los animales fueron tratados durante 28 días. Después del tratamiento, los animales fueron sacrificados, y el análisis histológico se realizó en un testículo mientras que el otro fue utilizado para estudios de expresión génica relativa particularmente de CYP19A1, ERα y ERβ, que responden a los estrógenos. Resultados El tratamiento oral de los tres diferentes fitoestrógenos genera una disminución en el diámetro de los túbulos seminíferos. A nivel molecular, la transcripción de los productos génicos de CYP19A1 gen de la aromatasa del ratón aumentó en los animales tratados con coumestrol, mientras que los del gen de ERα disminuye de manera significativa, en particular en dosis bajas y altas. Los tratamientos con zearalonona inducen transcripción del gen ERβ en las concentraciones probadas más altas y bajas. Discusión y conclusión A nivel general, los fitoestrógenos inducen alteraciones en el histo-arquitectura de los testículos, así como alteraciones en la expresión de los genes blanco, especialmente en los que tienen papeles importantes en la fisiología de la reproducción como es el caso de CYP19A1 y ambos ER.

El hígado no solo juega un papel único como centro metabólico del cuerpo, sino que también lleva a cabo otras funciones importantes como la biotransformación y destoxificación de fármacos y xenobióticos. El lipopolisacárido (LPS) se localiza en la pared celular de las bacterias gram-negativas y es un inmunógeno que induce la respuesta inflamatoria, asociada a un incremento en los niveles de especies reactivas de oxígeno (ERO). La respuesta de defensa del huésped al LPS incluye la expresión de una variedad de citocinas pro-inflamatorias. Cuando este proceso es excesivo o prolongado, se presenta un daño local sistémico hacia los tejidos del huésped, resultando en la pérdida de las funciones normales fisiológicas como consecuencia de este daño. Sin embargo, el hígado responde contrarrestando el daño celular en el tejido. Durante este proceso se activan diferentes factores que regulan la expresión de genes y la síntesis de proteínas para contrarrestar el daño por la exposición al LPS. Se ha observado que la capacidad de reparación del hígado disminuye con la edad. Por lo que, en este trabajo se estudiaron algunos de los factores que están regulando el proceso celular cuando se genera un daño hepático en ratas jóvenes y adultas. Se desarrolló un modelo de daño hepático al administrar LPS (0.5 mg/kg) a diferentes tiempos 12, 24, 48, 72 y 96 h en ratas de la cepa Wistar, jóvenes (4 meses) y adultas de (12 meses). Se determinó la concentración plasmática de citocinas pro-inflamatorias como IL-6 y TNF-α como respuesta a la administración de LPS, los resultados mostraron un incremento significativo a las 12 h en ambas edades pero con mayor concentración en las ratas adultas, sin embargo, no se observaron cambios significativos en los otros tratamientos. Se encontró un incremento en los marcadores de daño hepático ALT, AST desde las 24 h posteriores al tratamiento, que al igual que la expresión de citocinas inflamatorias, no cambió con respecto a las no tratadas en los otros tiempos evaluados. También se determinó el incremento al daño oxidante en el DNA, y se observo que la administración de LPS aumentó dicho daño en adultos y jóvenes, aunque en los organismos adultos el tiempo de reparación fue más prolongado. Un mecanismo de proliferación que se presenta preferentemente en organismos jóvenes es la vía de señalización de Delta-Like 4 (DLL4) Notch4, que corroboramos al evaluar los niveles de expresión de estas proteínas y en donde se observó que se encuentra más activa en jóvenes que en adultos. Por otro lado la muerte celular generada en respuesta al LPS fue principalmente por apoptosis, de acuerdo a la evaluación de proteínas apoptóticas como caspasa 3 (casp-3) y Bax. Se analizó la participación de p53 en la modulación de la respuesta al daño celular en donde se observó que la respuesta en la expresión es más tardía en jóvenes que en adultos. Sin embargo, aún resta por determinar los mecanismos de reparación activados por la vía de señalización Notch4-Dll4.

El cáncer es una de las enfermedades que anualmente reporta una alta tasa de mortalidad. Se ha reportado que la prevalencia del carcinoma hepatocelular ha incrementando en los últimos años debido a la capacidad de desarrollar mecanismos moleculares de resistencia que generan protección y sobrevivencia en las células de cáncer hepáticas al tratamiento con agentes quimioterapéuticos. Por ello resulta de gran interés estudiar estos mecanismo de resistencia con el fin de analizarlos y aportar información sobre nuevas estrategias terapéuticas. En las líneas celulares hepáticas de hepatoblastoma y cancerosas, HepG2 y Huh7, se analizó el efecto citotóxico del fármaco antineoplásico cisplatino. Los resultados mostraron tolerancia al efecto citotóxico en ambas líneas celulares a concentraciones menores de 30 M de cisplatino durante 24 hs de exposición. Por lo que se decidió utilizar estas concentraciones para analizar a nivel molecular el efecto citoprotectory su relación con el ciclo celular. Dado que ambas líneas celulares mostraron un comportamiento similar, se consideró estudiar el mecanismo en la línea celular HepG2 ya que la línea Huh7 presenta mutaciones en p53. Se analizó por Western blot la expresión de proteínas involucradas en la regulación del ciclo celular de la línea HepG2, se observó un incremento en la expresión de la proteína p21 y una disminución de la proteína cdk2, con las concentraciones de 2.5 y 5 M de cisplatino a 24 hs de exposición, sugiriendo este resultado un efecto citoestático. Posteriormente, se analizó el comportamiento del ciclo celular en la línea HepG2 por medio de citometría de flujo con las concentraciones de 2.5, 5, 10, 15 y 20 M de cisplatino a 48 y 72 hs de exposición. Los resultados mostraron la presencia de arresto del ciclo celular con las concentraciones de 2.5 y 5 M a partir de 48 hs de exposición que se mantuvo hasta las 72 hs, mientras que a concentraciones mayores de 10 M se observó la presencia de muerte celular. Estos datos son acordes con los resultados obtenidos en la proliferación celular. Con el fin de evaluar la respuesta quimirresistente al agente quimioterapéutico cisplatino se analizó la localización celular y la expresión del factor de transcripción Nrf2 y de sus genes blancos los cuales participan en los procesos antioxidantes y destoxificantes generados por agentes citotóxicos. Los resultados mostraron translocación al nucleo de Nrf2 por microscopia confocal, así como un incremento en la expresión de la proteína Nrf2 y de las proteínas NQO1, HO1 y - GCS., además de un incremento en la expresión de los genes transportadores ATP7B, MRP2, MPR3 y CTR1 con las concentraciones de 2.5 y 5 M de cisplatino durante 24 hs de exposición. Estos resultados mostraron que el tratamiento con cisplatino induce proteínas antioxidantes, así como un incremento de moléculas transportadoras que disminuyen la concentración del agente quimioterapéutico ocasionando un efecto quimiorresistente a nivel celular.

La enfermedad de Parkinson (PD) es la segunda enfermedad neurodegenerativa más común y es el desorden de movimiento más frecuente, está caracterizada por el déficit de dopamina. La falta de dopamina se debe a la muerte de neuronas dopaminérgicas principalmente en la sustancia nigra. La PD es progresiva y no tiene cura, el tratamiento farmacológico no detiene el progreso de la enfermedad sólo disminuye los síntomas clínicos. La terapia celular es una alternativa terapéutica que tiene como propósito detener la progresión de la enfermedad restiyuyendo a la población de células pérdidas por nuevas, y ha sido utilizada desde los años 80´s para tratar la PD. Tanto en ensayos clínicos en pacientes con PD en etapas avanzadas como en modelos animales de la PD se han utilizado implantes de neuronas como la principal fuente celular y estos han mostrado una mejoría de los síntomas motores con distinto grado de recuperación. Recientemente se han desarrollado algunos protocolos de trasplante en los que se han utilizado otros tipos celulares pertenecientes a las células gliales ya que juegan un importante papel en la regulación funcional de las neuronas, actualmente no hay trabajos que reporten el efecto del trasplante de neuronas y células gliales a un modelo de la PD. Este trabajo propone evaluar el trasplante de neuronas y células gliales obtenidos de ratas adultas sanas a un modelo en rata Wistar de la PD. Se utilizaron ratas macho de la cepa Wistar de 250 a 300 g. Se realizó el modelo de la PD (n=15) utilizando a la neurotoxina 6-OHDA administrada por cirugía estereotáxica de forma unilateral, posteriormente se evaluó la conducta motora a través de las tres pruebas siguientes: elevación corporal, cilindro y campo abierto. Cuatro semanas después, los animales lesionados recibieron el trasplante de neuronas y células gliales (n=10) dentro del área lesionada previamente y durante las 2 semanas posteriores se hizo la evaluación de la conducta motora, utilizando las pruebas anteriormente mencionadas. Finalmente los animales fueron sacrificados y fijados por riego intravascular con paraformaldehído al 4%. Los cerebros fueron procesados para microscopía de luz y las tinciones empleadas fueron: HematoxilinaEosina y Kluver- Barrera, el material se analizó con un microscopio Axioskop 2 adaptado a una cámara AxioCamMRc5 y software Axiovision 4.8. Los resultados sugieren la supervivencia de las células trasplantadas obtenidas de ratas adultas sanas y la mejoría conductual del modelo animal de la PD, por lo tanto el trasplante de neuronas y células gliales puede ser una alternativa terapéutica prometedora.

Para el análisis y conversión de pixeles/µm2 a intensidad de la señal en cada registro, se utilizó el programa GenArise para los filtrados pertinentes. Después de la normalización y eliminación de señales de fondo, delimitación de la señal bruta y específica, los diferentes genes se agruparon en niveles de expresión en base al índice Z. Aquellos genes que tuvieron variaciones (índice Z) superiores a ± 2, se sometieron al programa MAGNET para el análisis de sistemas, basado en GEO. A cada una de las perras, a las que se extrajeron los ovarios se les deteminó la etapa del ciclo estral, uno de los fragmentos ováricos tratados se tiñó con la técnica tricrómica de Masson, y se evaluó la citología vaginal exfoliativa. Los datos obtenidos de diámetro y porcentaje folicular concuerdan con otros estudios realizados, y no se encontraron diferencias en la histoarquitectura después de la incubación con Coumestrol con ninguna de las concentraciones utilizadas La determinación del ciclo estral por citología vaginal exfoliativa, nos permitió saber que el 80% de las perras se encontraban en estro, por lo que se debe tomar en cuenta la inducción de genes en la fisiología reproductiva en el momento de la extracción ovárica. Hubo expresión génica diferencial ya que ningún gen inducido se encontró reprimido al mismo tiempo, 38 genes se encontraron inducidos, y 31 genes reprimidos en común a todos tratamientos. En conjunto, estos resultados sugieren que las vías metabólicas inducidas fueron las de mecanotransducción, (ILK, Notch,), síntesis de colesterol, y las vías reprimidas principalmente fueron las vías involucradas con ubiquitacion, regulación del ciclo celular, y de adhesión focal. Se observó una correlación entre el aumento de la concentración de coumestrol con un aumento en la expresión génica tanto inducida como reprimida proponemos que el coumestrol, induce de novo, la síntesis de colesterol en nuestro modelo experimental. La sobrepoblación canina es un riesgo potencial para la salud humana. Se han utilizado varias estrategias de control reproductivo en perras como la esterilización quirúrgica, tratamiento con hormonas, inmunoconcepción y recientemente el uso de compuestos de origen vegetal con estructura parecida al estradiol (fitoestrógenos) que tienen actividad estrogénica y que alteran la fisiología reproductiva. Hasta el momento se desconocen los mecanismos moleculares involucrados en la acción de los fitoestrógenos como el Coumestrol a nivel ovárico. En el presente estudio se utilizaron microarreglos de ADN para identificar las alteraciones en la expresión de potenciales genes blanco con el fin de conocer los posibles mecanismos de acción por los que actua el Coumestrol. Los ovarios de cinco perras, se obtuvieron asépticamente y se transportaron al laboratorio. Después de remover la porción medular, fragmentos de 30 mg de la porción cortical se incluyeron en microcapsulas de alginato de Calcio con cuatro concentraciones de Coumestrol (0,1, 2, 4 y 8 ng/ml) y se incubaron a 37°C, 5% CO₂ en aire por 4 h. Se extrajo el ARN por el método de Trizol ®, se cuantificó en Nanodrop® y evaluó su integridad por electroforesis en gel reductor de agarosa. Se marcó el cADN por incorporación de ddUTP-Alexa555 para el control y ddUTP-Alexa647 para las muestras experimentales durante la síntesis de cADN, el cual se utilizó para la hibridación de los microarreglos supervisados (M22K_08_31, al 34). La hibridación se realizó primeramente en el control, se registró la fluorescencia de los 22000 puntos de los que consta el microarreglo para después de remover los oligos unidos, se hibridizaron los cADN experimentales y se registró nuevamente la fluorescencia de los puntos del microarreglo.

El ATRA ha sido utilizado como agente anti-neoplásico por su capacidad de inducir diferenciación, principalmente en leucemias, mientras que en otros tipos de cáncer es capaz de promover la inhibición de la proliferación; sin embargo, en pacientes con cáncer de pulmón el efecto inhibitorio de proliferación no se puede apreciar en todos los casos y no se sabe a qué se debe esta resistencia al tratamiento con ATRA. Por otro lado, las vías de señalización PI3K-Akt y ERK se encuentran constitutivamente activas en células cancerosas promoviendo sobrevivencia, proliferación e invasión celular, sugiriendo su participación en la resistencia al tratamiento con ATRA en cáncer de pulmón. En este trabajo demostramos que el ATRA es capaz de activar a las vías de señalización PI3K-Akt y ERK por un mecanismo independiente de la transcripción y que, la activación de Akt y ERK está relacionada con el mecanismo de resistencia a ATRA, provocando efectos desfavorables, ya que promueve sobrevivencia y migración en células de cáncer de pulmón. La inhibición de estas vías de señalización restaura el efecto benéfico del ATRA, disminuyendo la proliferación, aumentando la apoptosis y evitando el proceso de migración celular. Por lo tanto, este trabajo propone el uso del ATRA en combinación con inhibidores de PI3K y ERK como posible tratamiento para ser evaluado en estudios clínicos para que, en un futuro, pueda ser usado como terapia en pacientes con cáncer de pulmón que son resistentes al tratamiento con ATRA.

Objetivo general: determinar si el punto de acción de la glicina en la vía de activación de NF-κB por TNF-α es a nivel de la IKK-α, inhibiendo su actividad y regulando la liberación de citocinas proinflamatorias en adipocitos. Material y métodos: para evaluar el efecto de la glicina en adipocitos se utilizó la línea celular 3T3-L1 (fibroblastos de ratón diferenciados a adipocitos); las células fueron incubadas con TNF-α (5 ng/mL) durante 30 min (control positivo), BAY (3-[(4- metilfenil)sulfonil]-(2E)-propenonitrilo) (10µM, un inhibidor de NF-κB) durante 30 min (control negativo) y pretratamientos con glicina (10 mM) a los 15, 30, 45 min, 1, 2 y 4 h, seguidos de un estímulo de TNF-α (5 ng/mL durante 30 min). Se realizó la extracción de proteína nuclear y citoplasmática para su cuantificación y análisis. Se aplicó la técnica del Western Blot para la detección de la proteína IKK-α. Por el método de ELISA se midió la secreción de TNF-α y leptina. Se realizó EMSA para medir la activación de NF-κB. Los datos se analizaron mediante un análisis de varianza seguido de la prueba de Tukey-Kramer, con un nivel de significancia del 95%. Resultados: la proteína IKK-α está regulada por la acción de glicina, generando un efecto transitorio al elevar y disminuir la activación de NF-κB a diferentes tiempos. El pretratamiento con glicina (de 15 min hasta la 2 h) redujo la secreción de TNF-α. Sin embargo, a las 4 h aumenta la secreción de TNF-α como un efecto secundario, pero que no genera mayor actividad de NF-κB. De igual manera, se observó que el pretratamiento con glicina (a 15, 30, 45 min y 2 h) redujo la secreción de leptina y a 1 y 4 h se elevó significativamente hasta llegar a un estado basal parecido al control. Conclusión: la glicina inhibe la activación de NF-κB inducida por TNF-α, por una cascada de fosforilaciones que implican la activación de IKK-α e IκB-α, regulando la expresión y secreción de moléculas con carácter proinflamatorio, como TNF-α y leptina. Estos resultados apoyan la idea de que la glicina podría estar regulando el proceso inflamatorio crónico característico de la obesidad a través de un mecanismo que involucra la participación de estos mediadores. Introducción: la obesidad ha aumentado de forma significativa en los últimos años y se considera uno de los principales problemas de salud pública a nivel mundial. Durante su desarrollo se presenta una respuesta inflamatoria crónica de bajo grado que genera la activación del factor nuclear kappa B (NF-κB) y la transcripción de genes que codifican para citocinas proinflamatorias, factores de crecimiento y proteínas de fase aguda. Recientemente se ha demostrado que la glicina, un nutriente antioxidante, y protector celular, bloquea el proceso inflamatorio generado por la actividad de macrófagos y adipocitos, los que liberan potentes mediadores proinflamatorios, como factor de necrosis tumoral alfa TNF-α, Interleucina 6 (IL-6) y leptina. Además la glicina posee actividad quimioprotectora debido a que reduce eficazmente los niveles séricos de citocinas proinflamatorias y aumenta los niveles de citocinas antiinflamatorias en células 3T3-L1. También se ha demostrado que el tratamiento con glicina disminuye la expresión y secreción de adipocinas proinflamatorias en ratones obesos inducidos con glutamato monosódico (GMS/Ob). Recientemente se ha postulado que estos efectos están relacionados con la reducción en la activación del NF-κB, este factor de transcripción es esencial para la respuesta inflamatoria. Blancas y col. (2012) reportaron que la glicina inhibe la activación de NF-κB, inducida por el TNF-α, mediante un mecanismo que implica un aumento parcial de IκB-α. En estas condiciones, la glicina suprimió también la expresión de TNF-α e IL-6. En este sentido, la presente investigación se enfoca en estudiar cuál es el nivel de regulación de la glicina sobre la vía de señalización canoníca de TNF-α que activa NF-κB y su asociación con la modulación en la secreción de citocinas.

La barrera hematoencefálica es un sistema constituido de células endoteliales, astrocitos, pericitos y microglia que mantienen la alostasis del sistema nervioso central. Todos los elementos de la barrera hematoencefálica son importantes para el funcionamiento del sistema pero las células endoteliales le confieren las propiedades físicas y químicas de barrera. Las células endoteliales no presentan fenestraciones y exhiben bajo tráfico de vesículas pinocíticas. Asimismo, el paso de moléculas solubles de la sangre hacia el cerebro por la vía paracelular está restringido debido a la presencia de uniones ocluyentes. La ruptura de la barrera hematoencefálica promueve la entrada masiva de moléculas potencialmente neurotóxicas de la sangre hacia el cerebro, las cuales pueden ocasionar muerte neuronal y subsecuentemente alteraciones cognoscitivas. Estudios previos mostraron que la restricción selectiva de sueño de movimientos oculares rápidos (MOR) durante 10 días incrementa la permeabilidad de la barrera hematoencefálica en todo el cerebro y, breves periodos de oportunidad para dormir (40-120min) restablecen la permeabilidad normal de la barrera en la mayoría de las regiones cerebrales. El hipocampo es una región cerebral que no recupera la permeabilidad normal de la barrera hematoencefálica después de los periodos de recuperación de sueño; sin embargo se desconoce el mecanismo por el qué la pérdida de sueño induce ruptura de la barrera hematoencefálica. Así, el objetivo del presente trabajo fue dilucidar los mecanismos inespecíficos por los cuales la restricción de sueño MOR incrementa la permeabilidad de la barrera hematoencefálica en el hipocampo de la rata. Se evaluó la ultraestructura de las células endoteliales del hipocampo por microscopia electrónica de transmisión y se determinó la expresión de proteínas de la unión ocluyente (Claudina-5, ocludina y ZO-1) por Western blot. La restricción de sueño MOR MOR incrementó el número de vesículas pinocíticas (3 veces más en comparación con los controles) y promovió que las uniones ocluyentes de las células endoteliales del hipocampo sean menos complejas con respecto a las uniones ocluyentes de los grupos control, incluso después de periodos de recuperación de sueño. Concomitante a la reducción de la complejidad de las uniones ocluyentes, la restricción de sueño MOR disminuyó la expresión de proteínas de la unión ocluyente, particularmente Claudina-5. La restricción de sueño MOR altera los mecanismos de transporte inespecífico promoviendo la ruptura de la barrera hematoencefálica. Los resultados sugieren que el sueño MOR es crucial para mantener la integridad de la barrera hematoencefálica. Las disfunciones asociadas a la pérdida de sueño pueden ser explicadas por cambios en la permeabilidad de la barrera hematoencefálica. The blood-brain barrier is a complex system that maintains central nervous system alostasis. Brain endothelial cells, pericytes, astrocytes, and microglia comprise the blood-brain barrier. All components are crucial for blood-brain barrier development and maintenance; however endothelial cells confer the physical and chemical barrier properties. Brain endothelial cells exhibit low pynocytotic trafficking and express tight junction proteins. Under pathological conditions, blood-brain barrier disruption promotes massive entrance of potential neurotoxic molecules from blood to brain, which may cause cognitive deficits. Recently, we reported that selective rapid eye movement (REM) sleep restriction during 10days increased blood-brain barrier permeability to an unspecific vital dye Evans blue in the whole brain, and that brief sleep periods (40-120min) restored normal blood-brain barrier permeability in almost all brain regions. Hippocampus is unable to recover the blood-brain barrier integrity after REM sleep restriction even with sleep opportunity periods, but the mechanism of blood-brain barrier breakdown is unknown. Therefore, the aim of this work was to elucidate the mechanism involved in the hippocampal hyperpermeability after REM sleep restriction and sleep opportunity periods. We evaluated the ultrastructure of endothelial cells by transmission electronic microscopy and tight junction protein expression (Claudin-5, occludin and ZO-1) by western blot. REM sleep restriction increases the pinocytotic vesicle number (3-fold higher than intact controls) and promotes reduction in tight junction complexity. Concomitant to tight junction complexity, REM sleep restriction diminishes tight junction protein expression, mainly Claudin-5. REM sleep restriction impairs unspecific transport systems, promoting blood-brain barrier disruption. Our data suggests that REM sleep is crucial to maintain the blood-brain barrier integrity. Impairments associated to sleep loss may be explained by bloodbrain barrier hiperpermeability

La diabetes es un grupo de alteraciones metabólicas caracterizadas por hiperglucemia crónica, como resultado de defectos en la secreción y/o acción de la insulina, afecta además al metabolismo de carbohidratos, lípidos y proteínas generando hiperlipidemia y glucotoxicidad. La hiperglucemia crónica se asocia con daño a largo plazo y disfunción de diferentes órganos, especialmente ojos, riñones, nervios, corazón y vasos sanguíneos, generando un importante problema de salud pública, pues es la principal causa de demanda de consulta externa en instituciones públicas y privadas, siendo uno de los principales motivos para la hospitalización. México ocupa el 6º lugar a nivel mundial en número de personas con diabetes (10.8 millones) y acorde a lo publicado por la Encuesta Nacional de Salud y Nutrición 2012, esta enfermedad se encuentra entre las primeras causas de muerte. Si bien la disposición de fármacos para el tratamiento y control de la diabetes es variado, el 80% de la población mundial utiliza las plantas como alternativa en el tratamiento de la diabetes. Una planta frecuentemente utilizada en los estados de Veracruz e Hidalgo (México) y en el norte de Luissiana (E.U.A), para curar los síntomas de la diabetes es Tillandsia usneoides Linneo, conocida comúnmente como heno, la cual se prepara en cocimiento y se administra por vía oral. Se ha demostrado que el extracto acuoso de Tillandsia usneoides tiene un efecto hipoglucemiante en ratones sanos a las 4 y 8 horas posteriores a su administración y se sugirió al ácido 3-hidroxi-3-metilglutárico (HMG), como el principio activo responsable de este efecto. Sin embargo, hasta ahora no se cuenta con estudios sobre su mecanismo de acción, que permitan establecer su grado de eficiencia así como su potencial efecto toxicológico, por lo que resulta de gran interés determinar si T. usneoides tiene efecto hipoglucémico, a través de un aumento en la síntesis y/o secreción de insulina en un cultivo in vitro de células β pancreáticas (RINm5F). La línea celular RINm5F fue tratada con diferentes concentraciones del extracto acuoso de T. usneoides con la finalidad de establecer si puede inducir la síntesis de insulina y favorecer su secreción mediante el aumento en la concentración intracelular de Ca2+. Los resultados mostraron que T. usnoides aumenta la expresión del ARNm de insulina sólo en condiciones hiperglucémicas (30 mM), pero no favorece el incremento del Ca2+ intracelular ni la secreción de insulina. Por lo anterior, se sugiere que el extracto acuoso de T. usneoides podría estar activando la transcripción del gen de insulina, de tal manera que se incremente la expresión del mismo, más no la secreción de insulina; por lo tanto su mecanismo de acción podría estar involucrado en la captación de glucosa a nivel periférico.

Malnutrition is a complex process that affects the entire body not just for weight loss but also for alterations that originate from the immune system (IS). The main function of IS is to defend our bodies against aggressions external. It has been shown that different types of cell have the ability to regulate immune response, one of the populations of T-cell help us contribute to this balance and establish control of the immune response are regulatory T cells (Treg). During infection by pathogens these cells reduce the magnitude of effector response, which limits the immune and therefore infection control response. Treg are a particular group of lymphocytes CD4+, which play a fundamental role in the maintenance of tolerance to antigens themselves, avoid the occurrence of autoimmune diseases, control the development of an excessive immune response to pathogens or against different allergens. It has been shown that Treg cells isolated from peripheral blood, suppress the proliferation and cytokine production by native T cells in vitro and memory. There are several studies that support the effect of malnutrition on immune function, even the possible mechanisms by which malnourished bodies show an inefficient immune response to infections has not been determined with clarity. As we consider essential to assess the proportion of Treg cells in thymus and peripheral blood of undernutrition (UN) and well-nourished (WN) rats during lactation, as well as measure the production of intracellular IL-10, to see if it is one of the possible causes of poor immune response associated with malnutrition. The average obtained from the percentage of Treg cells in thymus and peripheral blood of UN was significantly higher than WN rats. Regarding the production of intracellular IL-10 in rats UN also noted a marked increase compared with WN rats, considering significant value of p ≤ 0.05. Treg cells play a key role in the balance of practically all immune responses, it has been observed that the Treg may interfere with the immune response to infections by viruses, bacteria and parasites, performing a dual role, is, on the one hand can have a protective effect, and on the other hand they may suppress the immune response. This regulation is essential because, it can sometimes be excessive and affect the development of an adequate effector immune response. Therefore, in the malnutrition increase observed in Treg cells in UN rats compared with controls groups in terms of the proportion of the Treg cells indicates that these cells could affect the development of an efficient immune response, likewise in this study it was found that IL-10 production is significantly increased with respect to controls by it can be inferred that Treg cells increased and the increase in IL-10 could be the cause of immunosuppression in malnourished bodies, although it is worth mentioning that they are needed to clarify several points with respect to the suppressor mechanisms Treg cells in malnutrition. La desnutrición es un proceso complejo que afecta a todo el organismo no sólo por la pérdida de peso sino también por las alteraciones que se originan en el sistema inmunológico (SI). La función principal del SI es defender a nuestro organismo frente a las agresiones externas. Se ha demostrado que diferentes tipos celulares poseen la capacidad de regular la respuesta inmunológica, una de las poblaciones de células T que nos ayudan a contribuir en este equilibrio y establecer el control de la respuesta inmunológica son las células T reguladoras (Treg). Durante la infección por patógenos estas células reducen la magnitud de la respuesta efectora, lo cual limita la respuesta inmunológica y por lo tanto el control de la infección. Las células T reguladores constituyen un grupo particular de linfocitos TCD4+, que desempeñan un papel fundamental en el mantenimiento de la tolerancia a antígenos propios, evitan la aparición de enfermedades autoinmunes, controlan el desarrollo de una respuesta inmunológica excesiva frente a agentes patógenos o frente a distintos alérgenos. Se ha demostrado que las células Treg aisladas de sangre periférica suprimen la proliferación y la producción de citocinas en células T nativas y de memoria in vitro. Existen varios estudios que sustentan el efecto de la desnutrición sobre la función inmunológica, pero aun no se ha determinado con claridad los posibles mecanismos por los cuales los organismos desnutridos muestran una respuesta inmunológica ineficiente ante las infecciones. Por lo que consideramos esencial evaluar la proporción de las células Treg en timo y sangre de ratas desnutridas y bien nutridas durante la lactancia, así como medir la producción de IL-10 intracelular, para conocer si es una de las posibles causas de la deficiente respuesta inmunológica asociada con la desnutrición. El promedio obtenido del porcentaje de células Treg en timo y sangre de ratas Desnutridas (DN) fue significativamente mayor que en ratas Bien Nutridas (BN). En cuanto a la producción de IL-10 intracelular en ratas DN también se observó un marcado aumento comparado con las ratas BN. Se realizó la prueba estadística no paramétrica de U Mann Whitney, considerándose significativa una p < 0.05. Las células Treg juegan un papel clave en el equilibrio de prácticamente todas las respuestas inmunológicas, se ha observado que las Treg pueden interferir en la respuesta inmunológica frente a infecciones por virus, bacterias y parásitos, realizando un papel dual, es decir, por un lado pueden tener un efecto protector y por otro lado pueden suprimir la respuesta inmunológica. Esta regulación es indispensable ya que en ocasiones puede ser excesiva y afectar el desarrollo de una respuesta inmunológica efectora adecuada. Por tanto, en la desnutrición el aumento observado en las células Treg en ratas desnutridas comparadas con los controles en cuanto a la proporción de las Treg indica que estas células podrían afectar el desarrollo de una respuesta inmunológica eficiente, de igual forma en este estudio se encontró que la producción de IL-10 está significativamente aumentada respecto a los controles por lo se infiere que el aumento de las células Treg y el aumento de la IL-10 podrían ser la causa de la inmunosupresión en los organismos desnutridos, aunque cabe mencionar que se necesitan esclarecer varios puntos con respecto a los mecanismos supresores de las células Treg en la desnutrición.

La diarrea es consecuencia de la disfunción en el transporte de agua y electrolitos a nivel del intestino. Como resultado de esta alteración se produce un aumento de la frecuencia, cantidad y volumen de las heces, además de cambio en la consistencia de éstas debido al incremento de agua y electrolitos. A nivel mundial la mortalidad reportada por diarrea en menores de cinco años es de 1.87 millones, que representa el 19% de la mortalidad total de la niñez. Esta situación se dispara en los países en desarrollo ya que en África y Asia Sudoriental las muertes por esta causa llegan a 78% y en otros 15 países en desarrollo, entre los que se encuentra México, dichas muertes representan el 73% (Boschi y col., 2008). En el presente trabajo se estudiaron dos plantas que son utilizadas como remedio en el control de trastornos digestivos en la medicina tradicional mexicana: Bidens odorata Cav. y Chrysactinia mexicana Gray. Del extracto clorofórmico de B. odorata se aisló la fracción con mayor actividad antidiarreica (F4), Inhibiendo la diarrea inducida con aceite de ricino. Por cromatografía de gases acoplada a espectroscopia de masas (CG-EM) se detectan como compuestos mayoritarios al ácido palmítico (15.3%), ácido esteárico (13.12%), ácido linoleico (9.24%) y oleico (3.34). De los ácidos grasos detectados en F4, de la mezcla de éstos y de F4 se estudió su actividad antidiarreica a diferentes dosis, se encontró que en la diarrea inducida con aceite de ricino el mayor efecto antidiarreico fue el observado con F4 a 100 mg/kg (90.1 ± 0.7%). Se determinó también que F4 no inhibe la diarrea inducida con prostaglandinas E2; en cambio, si inhibe la diarrea inducida con ácido araquidónico (72.9 ± 2.7%). Se puede sugerir que el mecanismo de inhibición de la diarrea por administración de F4 puede ser por el bloqueo la biosíntesis de ácido araquidónico a prostaglandinas. En relación con C. mexicana, se encontró que los extractos acuoso, clorofórmico y metanólico extractos tienen actividad antidiarreica (51.9 ± 6%, 48.2 ± 6% y 59.6 ± 3% respectivamente) en la diarrea inducida con aceite de ricino. Estos resultados permiten suponer que dicha actividad es producida por el aceite esencial de dicha planta (AECM), el cual inhibió la diarrea inducida con aceite de ricino a dosis de 100 mg/kg en un 63.6 ± 5.9%. En la determinación de su composición por CG-EM se encontraron 17 compuestos, de los cuales eucaliptol, α-Terpineol y piperitona representan 90.7% (28.68, 9.9 y 52.12%, respectivamente). El AECM no inhibió la diarrea inducida con prostaglandina E2, pero si inhibió la diarrea inducida con ácido araquidónico (79 ± 7.9%). Estos resultados permiten sugerir que el efecto antidiarreico del AECM podría involucrar la inhibición de la biotransformación del ácido araquidónico a prostaglandinas.

La enfermedad de Parkinson (EP) se caracteriza por un déficit progresivo en la función motora como resultado de la pérdida de neuronas dopaminérgicas en la sustancia nigra. Un pequeño porcentaje de la incidencia de la EP presenta un componente hereditario, pero la mayoría de los casos son esporádicos o relacionados con algún factor químico y/o ambiental. La 1-metil-4-fenil-1,2,3,6- tetrahidropiridina (MPTP) induce características histopatológicas similares a las de la EP en ratones, primates y humanos. En la actualidad, el tratamiento para la EP consiste en la administración de levodopa, sin embargo, esta terapia sólo es efectiva durante los primeros años del tratamiento, por lo que es necesario encontrar nuevas alternativas terapéuticas. La silimarina, un extracto estandarizado de las semillas y frutas de la planta Silybum marianum, contiene una mezcla de flavonoides con propiedades anti-oxidantes, anti-inflamatorias, citoprotectoras, anti-carcinogénicas y antivirales. En este trabajo se evaluó el efecto neuroprotector de la silimarina en un modelo murino de la EP con MPTP, para lo cual se determinó la concentración de dopamina en el estriado de ratones machos adultos intoxicados con MPTP y ratones intoxicados con MPTP tratados con la silimarina. Con estos resultados se estableció la dosis de 100 mg de silimarina /kg/día como la más efectiva. Por otra parte, la evaluación de la apoptosis así como la expresión de la enzima tirosina hidroxilasa (TH) mostró que la silimarina no tiene efecto alguno por sí sola, y brinda un grado de protección en los animales intoxicados con MPTP, ya que previene la muerte celular y preserva las neuronas presentes en el mesencéfalo que expresan TH, así como sus terminaciones nerviosas en el estriado. Además, se observó que la administración de silimarina eleva las concentraciones de malonaldialdehído (MDA) y que sólo ejerce su efecto antioxidante en los animales intoxicados con la MPTP. Nuestros datos muestran que la silimarina conserva los niveles de dopamina estriatal al disminuir la apoptosis previniendo la pérdida neuronal y reduciendo el estrés oxidante asociado a la intoxicación con MPTP.

El maíz es el principal cereal consumido en México y el tercero más importante a nivel mundial; sus granos están compuestos por el embrión, el escutelo y el endospermo, rodeados por el pericarpio. En diversas publicaciones se ha reportado la presencia de una estructura fibrosa ubicada entre el escutelo y el endospermo, y se ha determinado que está constituida por remanentes de paredes celulares colapsadas provenientes del endospermo almidonoso. Pese a que la presencia de esta estructura, denominada capa fibrosa, ha sido reportada para el maíz y otros cereales, hasta ahora no hay ningún reporte que profundice en su composición estructural y su función durante la germinación. Los objetivos de la presente investigación incluyeron 1) previo al inicio de la germinación, la caracterización histoquímica de los componentes estructurales de la capa fibrosa y la determinación de su permeabilidad mediante pruebas de difusión de colorantes. 2) Durante la germinación, la evaluación de cambios morfológicos de la capa fibrosa, asociando este proceso con la actividad de las enzimas peroxidasa de clase III (POD) y superóxido dismutasa (SOD). 3) La determinación de los cambios en la actividad de las enzimas POD y SOD durante el almacenamiento de granos de maíz en condiciones de humedad relativa y temperatura controladas, y cómo estas condiciones de almacenamiento alteran la estructura de la capa fibrosa. Se encontró que la capa fibrosa está compuesta por remanentes de paredes celulares que contienen lípidos, fenoles y glucanos β-1,3 tipo calosa. Debido a su composición, la capa fibrosa previene la difusión de componentes entre el escutelo y el endospermo al inicio de la germinación. Sin embargo, 24 horas después del inicio de la imbibición, la epidermis del escutelo presenta una serie de modificaciones que incluyen el crecimiento de las células, la perforación de algunas de sus paredes y la liberación de superóxido, peróxido de hidrógeno, fenoles y otros compuestos. Estas modificaciones, junto con la actividad de la enzima POD favorecen la transformación de la capa fibrosa, haciendo posible la comunicación entre el escutelo y el endospermo. Se estableció que la actividad de las enzimas SOD y POD, presentes en el escutelo, está relacionada con el mantenimiento del vigor y de la capacidad germinativa de granos de maíz almacenados bajo diferentes condiciones de humedad relativa y temperatura. Se confirmó que el almacenamiento con altos niveles de humedad genera un deterioro rápido o lento en función de la temperatura, y que el almacenamiento en baja humedad y temperatura favorece la conservación de los granos por periodos prolongados. Se concluye que la capa fibrosa representa una barrera física que impide el libre flujo entre el escutelo y el endospermo. Durante el inicio de la germinación esta compartimentación resulta benéfica para el embrión al impedir que los recursos presentes difundan hacia el endospermo, sin embargo, cuando los requerimientos nutricionales aumentan al tiempo que la raíz embrionaria empieza su alargamiento, se requiere la eliminación parcial de la capa fibrosa, para que este evento se realice, la epidermis del escutelo se modifica y correlaciona con cambios en la actividad de POD y generación o liberación de compuestos reductores como fenoles, O₂ .- y H₂O₂. La POD podría participar en el proceso de eliminación de la capa fibrosa en zonas puntuales o microambientes mediante la generación de ERO cuando es necesaria la comunicación del escutelo hacia el endospermo, o bien en una forma más amplia funcionando como una enzima antioxidante, que junto con la actividad de SOD, controlen las pozas de ERO para evitar daños y mantener la integridad y funcionalidad del escutelo durante procesos que generan estrés como el almacenamiento.

La obesidad y el sobrepeso se han incrementado de forma alarmante en el mundo durante las tres últimas décadas, lo que ocurre desde la infancia hasta la vejez, debido principalmente a los cambios en el estilo de vida. La obesidad es un factor crucial en el desarrollo de anormalidades metabólicas, tales como intolerancia a la glucosa, resistencia a la insulina e inflamación con estrés oxidante. Un panorama similar ocurre durante el proceso de envejecimiento, donde se observa alteración de la homeostasis del metabolismo energético y un estado de inflamación crónica sistémica de bajo grado. El estrés oxidante y un pobre funcionamiento físico llevan a un incremento del riesgo para desarrollar enfermedades metabólicas. A pesar de los diversos estudios que se han realizado sobre los efectos fisiopatológicos de la obesidad, su impacto asociado al género y a lo largo de la vida, en especial durante el envejecimiento, no ha recibido atención. El propósito de esta investigación fue determinar el estado metabólico general en un modelo de ratones obesos hembra y macho a lo largo de la vida desde los 4 hasta los 20 meses de edad. La obesidad se indujo mediante la administración neonatal de glutamato monosódico (GMS), y posteriormente se cuantificaron parámetros bioquímicos, perfil inflamatorio, tolerancia a la glucosa y sensibilidad a la insulina. Además, se evaluó el daño oxidante y la protección antioxidante en diferentes órganos. Los resultados muestran que el Índice Lee (IL), así como los niveles de colesterol y triglicéridos se incrementaron gradualmente en todos los grupos a través del tiempo. En general, los ratones obesos GMS mostraron los niveles más altos de colesterol en comparación de sus controles. Las hembras GMS mostraron niveles más altos en el contenido de triglicéridos que los machos obesos. Se evaluó la función hepática midiendo las actividades de las enzimas AST y ALT, y se encontró que ambas enzimas se incrementaron conforme aumentó la edad en todos los grupos, siendo las hembras quienes mostraron mayores niveles de ALT. Con relación con el perfil inflamatorio, se encontró que en el grupo de machos, particularmente los ratones obesos GMS, presentaron niveles elevados de TNF-α, IL10 e IL-6 a los 12 meses de edad, comparado con el grupo de hembras. Los niveles de adiponectina disminuyeron gradualmente a lo largo de la vida de los ratones obesos y en sus controles; los machos mostraron niveles bajos de adiponectina comparado con las hembras. También se encontraron alteraciones en la tolerancia a la glucosa y en la sensibilidad a la insulina, tanto en hembras como en machos obesos GMS desde etapas jóvenes, conservándose esta diferencia hasta el envejecimientos. Sin embargo, los ratones obesos machos mostraron los niveles más altos en estas alteraciones. De manera notoria, los aumentos en estos parámetros disminuyeron a los 20 meses de edad sin encontrarse diferencias estadísticas entre los 4 grupos. Los parámetros oxidantes y antioxidantes, tanto en plasma como en hígado, pulmón, corazón y riñón permitió conocer la influencia del daño oxidante por obesidad durante el proceso de envejecimiento y la respuesta antioxidante. Los ratones obesos GMS mostraron alteraciones metabólicas y susceptibilidad asociada al género a lo largo de la vida y durante el proceso de envejecimiento. El entendimiento de las diferencias metabólicas entre los géneros durante la vida, permitirá el descubrimiento de estrategias preventivas específicas para las enfermedades crónicas y contra la pérdida de la funcionalidad por envejecimiento.

Acetilcolinesterasa (AChE) y Butirilcolinesterasa (BChE) se han asociado con factores de riesgo para el síndrome metabólico (SM). Objetivo. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la nicotinamida (NAM) sobre las actividades, la expresión y el contenido de proteínas de las colinesterasas en un modelo de SM in vivo e in vitro. Métodos principales: Se indujo SM en ratas macho mediante la administración de fructosa al 40% en el agua de bebida durante 16 semanas. Posteriormente, a partir de la quinta semana en adelante, la solución de carbohidrato fue intercalada por solución de NAM, en diferentes concentraciones durante 5 h cada mañana durante las siguientes 12 semanas. En la semana 15, se realizó la prueba de tolerancia a la glucosa y se midió la presión arterial. Una vez concluido el período de tratamiento, se obtuvieron muestras para evaluar el perfil bioquímico; estrés oxidativo; marcadores proinflamatorios; y se evaluó la actividad, concentración y expresión de colinesterasas y se realizó un análisis de acoplamiento molecular. Hallazgos principales: El grupo de SM mostró alteraciones antropométricas, hemodinámicas y bioquímica; así como aumento de la actividad de las colinesterasas, marcadores de inflamación y estrés oxidativo. En el hígado, los niveles de actividad de colinesterasas y ARN mensajero, ácidos grasos libres, factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y sustancia reactiva al ácido tiobarbitúrico (TBARS) aumentaron, mientras que disminuyeron los niveles de glutatión reducido (GSH). NAM disminuyó parcial o totalmente los factores de riesgo de SM, marcadores de estrés e inflamación, y la actividad (suero e hígado) y expresión (hígado) de colinesterasas. El análisis de acoplamiento molecular mostró que NAM tiene una mayor afinidad por las colinesterasas que la acetilcolina (ACh), lo que sugiere que la NAM es un inhibidor de las colinesterasas. Conclusiones: La suplementación con 40% de fructosa induce SM, además de aumentar la actividad y expresión de colinesterasas, el estrés oxidativo y la inflamación. NAM atenuó estas alteraciones inducidas por SM y cambios en colinesterasas.

Las integrinas ligan la matriz extracelular con el citoesqueleto de actina a través de diversas proteínas involucradas con la formación de adhesiones focales, como resultado de esta interacción se forman complejos de adhesión focal y diferentes vías de señalización son activadas. A pesar de que los espermatozoides de los mamíferos expresan varias integrinas, es desconocido como estas proteínas funcionan en espermatozoides de los mamíferos. En este trabajo mostramos la presencia de proteínas de adhesión focal en espermatozoides de cobayo y exploramos su papel durante la capacitación y la reacción acrosomal. Primeramente, encontramos la presencia de las cadenas α5, α6, αν, β1 y β3 de las integrinas en los espermatozoides del cobayo, las cuales fueron localizadas en la región apical del acrosoma y el flagelo. Nuestros resultados sugieren la presencia de complejos de adhesión focal conformados por: integrina-β1, la cinasa de adhesión focal (FAK), paxilina, vinculina, talina y α-actinina en la región acrosomal. La inhibición de FAK durante la capacitación afectó la fosforilación de proteínas en residuos de tirosina (Tyr), la cual ocurre en los primeros minutos de la capacitación, causando que la reacción acrosomal se incrementara tempranamente y de manera dependiente de Ca2+. Adicionalmente, no permitió la polimerización de actina asociada a la capacitación. La integración de vinculina y talina a los complejos de adhesión focal sugiere que los complejos de adhesión focal se ensamblan durante la capacitación. Nosotros identificamos que durante la capacitación el citoesqueleto de actina fue remodelado, incrementando la interacción de vinculina y α-actinina a este, con lo que los complejos de adhesión focal se terminan de estructurar. Lo anterior indica que FAK contribuye a la integridad del acrosoma, probablemente regulando la polimerización de actina y remodelando el citoesqueleto de actina. Por otro lado, la interacción de los espermatozoides con proteínas de la matriz extracelular mostró que dependiendo del estado de las proteínas (soluble o en forma de matriz) los efectos sobre la fisiología del espermatozoide son diferentes. Inicialmente, determinamos que los espermatozoides solo se adhieren a matrices formadas por fibronectina (FN), pero no a las formadas por laminina o colágeno-I. Los espermatozoides solo se adhirieron a la matriz de FN cuando tienen un tiempo mínimo de capacitación (30 min). Los espermatozoides adheridos a la matriz incrementaron varias veces su expectativa de vida, ya que no experimentaron la reacción acrosomal después de varias horas de incubación. Sin embargo, cuando los espermatozoides fueron incubados con FN soluble, experimentaron rápidamente la reacción acrosomal alcanzando una vida media máxima de aproximadamente 2 horas. Estos resultados sugieren que la interacción de los espermatozoides a una matriz de FN incrementa su sobrevivencia.

El gestodeno (GSD) es una progestina sintética derivada de la 19- nortestosterona, que en diversas formulaciones farmacéuticas, ha sido utilizado por millones de mujeres como agente regulador de la fertilidad. A partir de los estudios epidemiológicos realizados por la Organización Mundial de la Salud, en los que se sugiere que existe una relación entre el uso de formulaciones anticonceptivas que contienen estrógenos y progestágenos con el incremento en el riesgo de cáncer de mama, aparecieron en la literatura un importante número de reportes contradictorios, ya que mientras algunos autores consideran que es el estrógeno el responsable del incremento de ese riesgo, otros se lo atribuyen a las progestinas. Aun cuando los efectos de los estrógenos sobre el inicio y la progresión del cáncer de mama han sido bien estudiados, se desconoce el riesgo al que pueden estar expuestas las mujeres bajo tratamiento anticonceptivo o de reemplazo hormonal con progestinas sintéticas. Existe una serie de estudios que han demostrado que las progestinas sintéticas, incluido el GSD, fueron capaces de inducir in vitro la proliferación de las células MCF-7 de cáncer de mama. Este efecto de tipo estrogénico, sobre la proliferación celular, es difícil de explicar debido a que el GSD y otras progestinas como la Noretisterona y el Levonorgestrel no interactúan con los receptores intracelulares de estrógenos; además de que por impedimentos estéricos en su molécula, no es posible su aromatización. Los estudios previos del grupo de investigación con el cual se realizó el presente trabajo, han demostrado que en diferentes órganos blanco a la acción de hormonas esteroides como hipotálamo, hipófisis y próstata ventral de roedores, las progestinas sintéticas 19-nor se biotransforman en metabolitos nofenólicos 5α-dihidro y 3β,5α- y 3α,5α-tetrahidros. Un hallazgo importante fue que los tetrahidros de las progestinas estudiadas interactúan, aunque con baja afinidad, con los receptores intracelulares de estrógenos y que además, son capaces de inducir efectos de tipo estrogénico en diferentes modelos experimentales. El objetivo del presente trabajo fue investigar tanto la capacidad enzimática de las células de cáncer de mama MCF-7 para biotransformar GSD en sus metabolitos reducidos en el anillo A, como explorar el efecto de GSD y sus derivados 5α-reducidos sobre la proliferación de las células MCF-7 mantenidas en cultivo. Para estudiar el metabolismo del GSD, se empleó la técnica de dilución isotópica inversa, utilizando como sustrato al GSD-[ 14C]. Esta técnica incluye cromatografía en placa fina en sistemas de disolventes de diferente polaridad y la recristalización de los metabolitos isotópicamente marcados, hasta la obtención de actividad específica constante. Los resultados de estos estudios demostraron que las células MCF-7 biotransformaron eficientemente al GSD-[14C] en los metabolitos no-fenólicos 5α-dihidroGSD y los tetrahidros 3α, 5α-GSD y 3β, 5α- GSD. El efecto del GSD y de sus derivados dihidro y tetrahidros sobre la proliferación de las células MCF-7 se evaluó mediante la determinación del contenido del DNA. Los resultados obtenidos demostraron que los derivados tetrahidro reducidos, producto de la conversión metabólica del GSD incrementaron la proliferación de las células MCF-7, de manera similar, aunque con menor eficiencia a como lo hizo el estradiol, empleado como control positivo, mientras que la molécula original de GSD así como el derivado 5α-reducido, indujeron la proliferación celular sólo a las más altas concentraciones (100 nM y 1000 nM) y en los tiempos más prolongados de tratamiento (48 y 72 h). En experimentos adicionales dirigidos a comprender el mecanismo por el cual GSD y sus metabolitos inducen la proliferación de las células MCF-7, estos se incubaron en presencia o ausencia de los siguientes antagonistas de hormonas esteroides: ICI 182,780 (antiestrógenos), Flutamida (antiandrógenos) y RU 486 (antiprogesterona). Los resultados mostraron que el antiestrógeno inhibió eficientemente la proliferación de las células MCF-7 inducida por los dos tetrahidros de GSD mientras que, ni la antiprogestina ni el antiandrógeno inhibieron la proliferación celular inducida por estas moléculas. Los resultados en su conjunto, mostraron que las células MCF-7 tienen la capacidad enzimática para biotransformar GSD en sus tetrahidros, siendo el 3β,5α, y el 3α,5α los responsables de la proliferación de las células MCF-7 de cáncer de mama y no GSD. Asimismo, sugieren fuertemente que el efecto de los tetrahidros sobre la proliferación de las células MCF-7 es mediado a través del receptor de estrógenos.

La apoptosis en las células germinales del epitelio seminífero es un evento común que ocurre durante el desarrollo de la espermatogénesis, sin embargo, también se activa en respuesta al estrés. Actualmente no existen trabajos que relacionen la presencia de apoptosis en los testículos con la expresión de diferentes marcadores apoptóticos, así como con los cambios producidos en la calidad de espermatozoides obtenidos de la cauda del epidídimo. El objetivo de este trabajo fue evaluar si la exposición al estrés agudo y crónico activa una o ambas vías apoptóticas en las células testiculares. Se utilizaron ratas macho (n=60) de la cepa Wistar de tres meses de edad y de 250-300 g de peso corporal. Los animales se asignaron a los siguientes grupos: a) control: 1, 20, 40 y 50 días; b) estrés agudo: 1, 3, 6, 12 y 24 h y c) estrés crónico: 20, 40 y 50 días, por inmersión en agua fría. Los animales control se mantuvieron en sus cajas sin manipulación. Al finalizar las sesiones de estrés, los animales se anestesiaron y se extrajeron ambos testículos. El testículo derecho se procesó para histología. Se evalúo la fragmentación del ADN por la técnica de TUNEL. Se obtuvo el porcentaje de túbulos seminíferos que contenían células germinales positivas a TUNEL, así como el número de células germinales positivas a TUNEL contenidas en dichos túbulos. El testículo izquierdo se utilizó para determinar el contenido de Bax, Bcl-2, caspasa 3 y 8 activas por Western blot. Se evaluó la calidad de los espermatozoides de la cauda del epidídimo y se determinaron las concentraciones séricas de corticosterona y testosterona. Los resultados obtenidos en el presente trabajo, mostraron un porcentaje alto de túbulos con células germinales positivas a TUNEL en los testículos de los machos expuestos a estrés agudo, desde la primera hora, con un máximo a las 24 horas post estrés. En los testículos de los machos expuestos a estrés crónico, se observó mayor porcentaje de túbulos con células germinales positivas a TUNEL pero no en el número de células apoptóticas por túbulo. El contenido de Bcl-2 disminuyó y el de Bax, caspasa 3 y 8 activas aumentó en los testículos de los machos estresados aguda y crónicamente. La viabilidad, concentración, movilidad total y progresiva de los espermatozoides de los machos estresados crónicamente disminuyeron significativamente. La concentración de testosterona disminuyó y la concentración de corticosterona aumentó en los machos sometidos a estrés crónico. Estos datos muestran que tanto el estrés agudo como el crónico inducen apoptosis en las células testiculares. El incremento en la concentración de la caspasa 8 activa indica la activación de la vía extrínseca de la apoptosis. Mientras que el incremento de Bax así como la disminución de Bcl-2, indican la activación de la vía intrínseca. Debido a que ambas vías convergen en la activación de la caspasa 3, la cual también se incrementó, estos resultados indican que el estrés es capaz de activar ambas vías para causar apoptosis en las células del testículo. En conclusión, la apoptosis en las células testiculares provocada por el estrés agudo o crónico es activada por las vías apoptóticas intrínseca y extrínseca. Además, el estrés crónico disminuye la calidad y cantidad de los espermatozoides epididimarios. Estos resultados pueden estar relacionados con la disminución de testosterona y con el aumento de corticosterona del suero.

El cáncer de mama es el cáncer más frecuente en mujeres de acuerdo a la OMS (GLOBOCAN, 2012) y para combatirlo la quimioterapia es la terapia más usada a pesar de sus efectos secundarios. En particular, uno de los propósitos al usar quimioterapia es la inducción de apoptosis. La apoptosis generada por la vía mitocondrial es regulada principalmente por la familia de proteínas BCL-2. La mayoría de las cuales se localizan en el retículo endoplásmico o la mitocondria. Recientemente, algunas proteínas de esta familia han sido localizadas en sitios diferentes realizando funciones diferentes a las canónicas, sin embargo muchas de estas funciones permanecen aún sin comprenderse. BIK, un miembro pro-apoptótico de esta familia se ha encontrado desregulado en cáncer lo que ha causado gran interés en los últimos años y podría ser susceptible al estrés oxidante. Debido a que la apoptosis se asocia con la generación de estrés oxidante, el objetivo de este trabajo fue determinar si la localización subcelular de la proteína BIK se ve afectada tras un insulto oxidante inducido directamente por el tratamiento con H2O2 o indirectamente por el cisplatino el cual es un agente antineoplásico. Para ello, se realizaron experimentos en dos líneas celulares transformadas de cáncer de mama, MCF-7 y MDA-MB-231 y una línea celular epitelial de mama, MCF-10A. Los resultados mostraron que en la línea celular MCF-7, BIK se localiza dentro del citosol y después del tratamiento para inducir estrés oxidante la proteína se transloca al interior del núcleo. Sin embargo, en la línea celular MDA-MB-231, BIK se localiza en el interior del núcleo y posteriormente se transloca al citosol. De manera interesante, en la línea celular MCF-10A no hay cambio en la localización de dicha proteína después de los tratamientos, además esta línea celular mostró ser más resistente al cisplatino que las líneas celulares transformadas. Con estos resultados se concluye que la proteína BIK se localiza en diferentes compartimentos celulares dependiendo del estadio de cáncer y ésta tiene la capacidad de cambiar su localización subcelular en respuesta al estrés oxidante. Ello se asocia con una mayor sensibilidad ante la exposición a agentes tóxicos, creando así nuevas oportunidades para estudiar nuevas blancos terapéuticos que permitan el desarrollo de agentes más activos y menos dañinos.

En la actualidad, la depresión es una de las enfermedades mentales más comunes e incapacitantes, constituye un grave problema de salud a nivel mundial. El tratamiento neonatal con clomipramina (CMI) en ratas se ha considerado como un modelo de depresión, ya que en la edad adulta produce alteraciones que se asemejan a signos de la depresión en humanos. Dichas alteraciones han sido atribuidas a deficiencias en sistemas de neurotransmisión como; el noradrenérgico y serotoninérgico provocadas por el tratamiento en etapas críticas del desarrollo. Dentro de las alteraciones en el sistema serotoninérgico encontramos niveles disminuidos de serotonina (5-HT) en áreas límbicas, un incremento de la conducta de inmovilidad acompañado de disminución del nado en la prueba de nado forzado (PNF) y alteraciones en la expresión de ARNm del receptor 5-HT₁A en núcleo del rafe, hipotálamo e hipocampo. Por otro lado, ratas tratadas con CMI muestran un deterioro de la conducta sexual masculina (CSM), cuyo despliegue es controlado por hormonas como la testosterona (T), que se metaboliza a dihidrotestosterona (DHT) y 17-β estradiol (E₂), esta última ha sido relacionada con los efectos centrales de la T sobre la cópula, así como de regular procesos fisiológicos como el estado de ánimo. El interés del presente trabajo fue analizar el papel del receptor 5-HT₁A y del E₂ en las alteraciones conductuales que presentan las ratas tratadas neonatalmente con CMI. Para lo cual se utilizaron ratas Wistar a las que se les administro CMI o solución salina en la etapa neonatal (8-21 días de edad). Tres meses después se dividieron en grupos para realizar los siguientes objetivos; 1) Análisis de la participación de los receptores 5-HT₁A pre y post sináptico en el efecto del agonista 8-hydroxy-2-(di-npropylamino) tertralina (8-OH-DPAT) en la PNF, 2) Análisis del posible efecto antidepresivo de E₂ a través de la PNF en ratas CMI, 3) Efecto del tratamiento neonatal con CMI sobre la motivación sexual, 4) Efecto de la administración de E₂ y DHT sobre la motivación en ratas tratadas neonatalmente con CMI, 5) Efecto de la administración neonatal con CMI sobre las concentraciones séricas de T y E₂ y 6) Análisis del efecto del tratamiento con CMI sobre a expresión de receptores a estrógenos α y β en núcleo del rafe, hipotálamo e hipocampo. Nuestros resultados indican que el efecto antidepresivo de 8-OH-DPAT es mediado por el receptor 5-HT1A post-sináptico ya que no se altera por el bloqueo de la síntesis de 5-HT. Por otro lado, el tratamiento neonatal con CMI afecta el despliegue conductual en la PNF, incrementando la inmovilidad y disminuyendo la conducta de nado, alteraciones que se ven revertidas por la administración de E₂; efecto que posiblemente esta mediado por una mejora en la función de la neurotransmisión serotoninérgica. Así también la administración de CMI provoca diminución en la motivación sexual, la cual se ve revertida por la administración de E₂ y DHT. Además, el tratamiento neonatal no produce cambios en las concentraciones séricas de T y E₂, sin embargo se requieren mediciones de la producción de estas hormonas a nivel cerebral para dar resultados concluyentes. Por otro lado el tratamiento con CMI induce una disminución en la expresión de los REβ en núcleo del rafe dorsal y región CA3 del hipocampo que se acompaña de un aumento en la expresión de REα y REβ en NPOm indicando que este podría ser uno de los mecanismos por el cual CMI produce las alteraciones en la CSM y la motivación. Sin embargo es necesario el análisis de los receptores en otras áreas cerebrales relacionadas con la conducta sexual y la regulación de estado de ánimo.

Resultados: La nicotinamida inhibe la actividad de PARP-1 in vitro y de PARP-1 endógena en células de cáncer de mama MDA-MB-436 deficientes de BRCA1. Este efecto también fue observado en células de cáncer de mama en presencia de daño al ADN. Posteriormente demostramos que la nicotinamida disminuye la viabilidad de las células MDA-MB-436, MDA-MB-231 y MCF-7. El análisis de sinergismo demostró un efecto se sinérgico con nicotinamida y cisplatino en las células MDA-MB-436 y MCF-7. Finalmente observamos que la nicotinamida sensibiliza significativamente a las células MDA-MB-436 y MDA-MB-231 al tratamiento con radiación ionizante. Discusión: Estos resultados sugieren que la sensibilidad al cisplatino observada en las líneas celulares tratadas con nicotinamida está influenciada por el estado de BRCA1, sin embargo en las células MDA-MB-231 cabe resaltar que existen otros factores genéticos como el estado triple negativo de la línea celular que podrían estar jugando un papel importante. Por otro lado, la respuesta al tratamiento con nicotinamida y radiación ionizante en las células MCF-7 podría estar asociada al estado deficiente de la caspasa 3, debido a que se ha reportado un incremento en la resistencia a la radiación ionizante en células deficientes de caspasa 3. Conclusión: nuestros resultados sugieren que la nicotinamida podría ser utilizada como sensibilizador a la quimioterapia y radioterapia en cáncer de mama y de manera más selectiva en células tumorales deficientes de BRCA1. Interesantemente, estos resultados también podrían sugerir que la inhibición de PARP-1 por nicotinamida podría estar favoreciendo la letalidad sintética en nuestro modelo. Introducción: La enzima nuclear poli (ADP-ribosa) polimerasa-1 (PARP-1) es esencial para la reparación de rupturas de cadena sencilla del ADN por la vía de reparación por escisión de bases y representa un blanco importante en la terapia contra el cáncer. Los Inhibidores de PARP-1 han demostrado potenciar los efectos citotóxicos de la radiación ionizante y de agentes quimioterapéuticos como el carboplatino que dañan el ADN o inhibidores de la topoisomeraqsa I. La nicotinamida se ha descrito como un inhibidor de PARP-1 in vitro, y la gran mayoría de los inhibidores de PARP -1 se basan en su estructura química. Resultados in vitro e in vivo y más recientemente de ensayos clínicos, sugieren que los inhibidores de PARP-1 pueden ser usados tanto como sensibilizadores de quimioterapia o radioterapia así como en monoterapia, ocasionando la muerte específicamente en células tumorales con defectos en los mecanismos de reparación del ADN, en particular, aquellos tipos de cáncer con mutaciones en los genes que codifican las proteínas BRCA1 y BRCA2. A esta estrategia experimental se le ha denominado “letalidad sintética”. En este estudio analizamos el efecto de la nicotinamida en células de carcinoma mamario proficientes y deficientes de BRCA1. Metodologías: El efecto de la nicotinamida como inhibidor de PARP-1 fue determinado mediante un ensayo de actividad de PARP-1 in vitro y posteriormente en células MDA-MB-436. Este efecto se comprobó mediante inmunofluorescencia en células de carcinoma mamario tratadas con nicotinamida en presencia de daño al ADN. Posteriormente, analizamos el efecto de la nicotinamida y su combinación con cisplatino mediante ensayos de viabilidad celular en las líneas MDA-MB-436, MDA MB-231 y MCF-7 de carcinoma mamario. Cada una con diferentes estados de BRCA1. Finalmente, analizamos el efecto de nicotinamida como radiosensibilizador mediante ensayos de clonogénicos.

Pancreatic diseases have been increased in Mexico and worldwide because changes in behaviors. The main risk factors for the development of pancreatitis are alcohol consumption and cholelithiasis, in addition to smoking and obesity that have been related to severe pancreatitis. The disease can proceed to stages more complicated such as fibrosis and cancer. The present work was focused to figure out the effect of HGF in the control of the damage induced by the alcohol and its metabolite acetaldehyde in a pancreatic cell line, the RINm5F. Data presented here show that HGF is capable to induce a survival response in cells treated with both toxics increasing antioxidants enzymes and abrogating the activity of the NADPH oxidase, the main ROS induced system, which eventually activates mechanisms of damage. An approach to address the signal transduction initiated by HGF showed that MAPK pathway, particularly ERK1/2 is the main mechanism of protection. This correlated with the increment of antioxidant enzymes and the abrogation of NADPH oxidase activity and expression. HGF can represent a possible therapeutic target for the control of some pancreatic diseases El daño al páncreas es cada vez más frecuente en México, siendo el consumo de alcohol y la colelitiasis las causas más frecuentes; sin embargo, se sabe también de tener efecto directo el tabaquismo, la obesidad, entre otras causas. La pancreatitis es la principal manifestación de la afectación del órgano, pudiéndose presentar tanto aguda como crónica. Esta última puede conducir al agravamiento presentándose como procesos fibrogénicos o carcinogénicos. El HGF representa una alternativa para el control del daño y su reparación. En el presente trabajo nos centramos en dar un primer paso en caracterizar el efecto del HGF en el daño inducido por el etanol y su metabolito el acetaldehído, en una línea celular de páncreas como las células RINm5F. Los resultados muestran que el HGF es capaz de mejorar la sobrevivencia afectada por ambos tóxicos, incrementando proteínas antioxidantes, así mismo indujo un efecto desregulador en la NADPH oxidasa, una de las principales entidades prooxidantes y que eventualmente se activan bajo esquemas de daño. Una primera exploración en el posible mecanismo molecular de dicho efecto protector mostró la activación de la ruta de sobrevivencia de las MAPK´s, particularmente la mediada por ERK1/2. Lo anterior correlacionó con un incremento en enzimas antioxidantes como producto de la estimulación con el HGF. Los resultados muestran que el HGF ejerce un efecto protector elevando enzimas antioxidantes y abrogando sistemas prooxidantes, efecto mediado por la ruta de señalización ERK1/2. El HGF puede representar un posible blanco terapéutico en el tratamiento de algunas patologías asociadas al páncreas.

Non alcoholic fatty liver disease is the most common chronic liver disease in the world and its progression may be due, in part, to the outcome of liver lipotoxicity produced by an excess of free fatty acids that promotes reactive oxygen species, and consequently, cell dysfunction and death by necrosis or apoptosis. However, research on this field indicates that progression of liver damage could be associated to a second liver aggression that produces inflammation, aggravates oxidative stress that could result in progression of liver damage to fibrosis. Cadmium is a pro-oxidant metal, that is considered an environmental pollutant, widely used in the industry. Cadmium could induce adverse effects on human health principally in liver and kidney. In this study we analyzed the effect of cadmium on the progression of liver damage in steatotic hepatocytes from mice feed with high cholesterol diet. Our results show that, although steatosis triggered survival mechanisms that compensates cadmium aggression, prolonged exposure with the metal causes cell death. The mechanism is an increase in reactive oxygen species and protein oxidation that induce oxidative stress, and a decrease in the antioxidant enzymes, producing an increase in the lipogenesis process. Thus, hepatocyte becomes unable to handle a second prooxidant aggression, which leads in hepatocyte death. La esteatosis no alcohólica es el padecimiento hepático crónico más común en el mundo y su progresión puede deberse en parte, al resultado de la lipotoxicidad hepática causada por un exceso de ácidos grasos libres que promueven un exceso de ERO y la consecuente disfunción y muerte celular por necrosis o apoptosis. Sin embargo, las investigaciones acerca del avance de ésta condición indican que su progresión se ve potenciada cuando el hígado se somete a un segundo agresor que incremente la inflamación, el estrés oxidante y la fibrosis. El cadmio es un metal ampliamente utilizado en la industria y se considera un contaminante cuando es liberado al ambiente, la exposición al él produce varios efectos adversos sobre la salud humana de acuerdo a la dosis, fuente y tipo de exposición; se ha demostrado que el cadmio es un poderoso inductor de estrés oxidante, incrementando considerablemente la producción de ERO. En ésta investigación se analizó el efecto del cloruro de cadmio en el incremento del daño celular en presencia de esteatosis, y se comprobó que si bien la esteatosis desencadena mecanismos de sobrevivencia que impiden el efecto inmediato del cadmio, la exposición prolongada al metal provoca daño celular irreversible incrementando la muerte celular, por un lado a través de la inducción de estrés oxidante mediante un incremento de ERO y la oxidación de proteínas, y por otra parte disminuyendo las enzimas antioxidantes, todo esto desncadena el proceso de lipogénesis. Así, el hepatocito se vuelve incapaz de manejar una segunda agresión prooxidante, lo que conduce a la muerte celular.

El fenotipo senescente se puede adquirir por múltiples vías y en respuesta a diversos estímulos. La mayoría de estos incluyen la activación de reguladores negativos del ciclo celular, así como un cambio crítico en el estado redox. Sin embargo la exacta participación de estos eventos durante el establecimiento y el mantenimiento de senescencia no está totalmente entendida. Durante este estudio se investigó el contenido de tres reguladores negativos del ciclo celular, así como el estado redox en puntos críticos durante pre-senescencia y durante la senescencia completa. Los resultados obtenidos demuestran la existencia de una fase previa durante el establecimiento del fenotipo senescente, en la cual la proliferación celular se detiene con la participación de los reguladores negativos del ciclo celular, así como una segunda etapa en donde un estado pro-oxidante exacerbado dentro de la célula induce el deterioro fisiológico característico de las célula senescente.

Las enfermedades cardiovasculares son el principal problema de salud a nivel mundial y la enfermedad arterial coronaria (EAC) o enfermedad isquémica del corazón son la segunda causa de muerte a nivel mundial. En previos estudios se ha encontrado la participación de proteínas desacoplantes (UCP`s) en el desarrollo de los factores de riesgo de la EAC, como son: dislipidemias, obesidad, diabetes, hipertensión arterial, y los cuales son incrementados por el consumo de tabaco y alcoholismo. Las UCP`s participan en el desacoplamiento de la fosforilación oxidativa, regulando la síntesis de ATP y generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), debido a un incremento en la oxidación de combustibles (lípidos o carbohidratos). Por su participación en el metabolismo y en la generación de ROS, es importante estudiar los polimorfismos y expresión de las UCP´s, ya que podrían estar asociados con los factores de riesgo y promover una mayor incidencia de la EAC. Se estudiaron 157 sujetos en el Instituto Nacional de Cardiología “Ignacio Chávez” donde 101 fueron pacientes con EAC sometidos a cirugía de revascularización coronaria (grupo EAC) y 56 fueron pacientes sometidos a cirugía de reemplazo valvular (grupo control). En ambos grupos se estudiaron 4 polimorfismos de las UCP’s (UCP1 -3826, UCP2 -866 y +320, UCP3 -55), y la expresión del mARN de la UCP1, 2 y 3. El genotipo GG del polimorfismo -3826 A/G de la UCP1 presento una disminución de la expresión del mARN de la UCP1. El genotipo AA del polimorfismo -866 G/A de la UCP2 presento un incremento de la expresión del mARN de la UCP2. El genotipo TT del polimorfismo A55V C/T de la UCP2 presento un incremento de la expresión del mARN de la UCP2. El genotipo CC del polimorfismo -55 C/T de la UCP3 presento una disminución de la expresión del mARN de la UCP3. No se encontró una asociación de los cuatro polimorfismo estudiados con el desarrollo de la enfermedad arterial coronaria.

Dos millones de personas mueren anualmente a causa de la tuberculosis (Tb), una enfermedad infecciosa tratable y curable. Entre los efectos adversos del tratamiento antituberculoso se encuentran: reacciones de la piel, desórdenes neurológicos y el más común hepatotóxicidad inducida por los fármacos antituberculosos (ATDH), que causan sustancial morbilidad y mortalidad, contribuyendo a falla en el tratamiento y recaída de los pacientes. Algunos investigadores han sugerido que el incremento en las dosis de los fármacos convencionales eliminaran bacterias multifarmaco-resistentes (MDR) con el riesgo de desarrollar daño hepático; es por ello que se deben buscar nuevas opciones terapéuticas que brinden hepatoprotección sin comprometer los efectos contra la micobacteria. En este trabajo se utilizaron ratones BALB/c sanos e infectados con una cepa MDR de Mycobacterium tuberculosis para someterlos a tratamiento con Isoniazida y Rifampicina a dosis altas tres meses después de haber sido infectados utilizando la vía intragástrica (Ig) o la vía intratraqueal (It) para la administración de los mismos, y en presencia o no del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF). Posterior a esto se sacrificaron a uno y dos meses de tratamiento, obteniendo muestras para: conteo de unidades formadoras de colonias (pulmón), determinación de anión superóxido in situ y análisis histológico (hígado y pulmón). Los resultados muestran que HGF disminuye la carga bacilar participando en el control de la infección aumentando la producción de anión superóxido para una eficiente destrucción micobacteriana que correlaciona con daño pulmonar mínimo y al mismo tiempo juega un papel similar en el hígado disminuyendo el daño hepatocelular provocado por el estrés oxidante producto de la biotransformación de los antifímicos restringiendo la producción de anión superóxido y limitando la esteatosis y muerte celular. La vía It mostró mejores resultados que la Ig. En conclusión el HGF se presenta como un importante agente terapéutico al brindar protección a nivel hepático y pulmonar frente a daño oxidante regulando el estado redox celular en la tuberculosis pulmonar progresiva.

La producción in vitro de embriones (PIVE) comprende: la maduración in vitro (MIV) de ovocitos obtenidos por aspiración folicular; la fertilización in vitro (FIV) de estos ovocitos; y el cultivo in vitro de los embriones producidos; siendo la tasa de blastocistos el parámetro para medir su eficacia. La PIVE, en el bovino, ha sido motivo de múltiples investigaciones, debido a las bajas tasas de blastocistos obtenidos (5-30%), resultado del constante “bloqueo del desarrollo”; con el fin de evitarlo se han empleado co-cultivos con células somáticas, obteniendo resultados controversiales. La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del co-cultivo de los embriones con células oviductales y del cumulus oophorus sobre el porcentaje de embriones in vitro en estadio de blastocisto. Los oviductos y ovarios fueron colectados de hembras bovinas sacrificadas en un rastro, posteriormente fueron lavados y transportados en solución salina 0.9% a 30-35 °C. Las células oviductales fueron obtenidas tras una incisión longitudinal del oviducto, mientras que las células del cumulus oophorus se colectaron del líquido folicular; ambos tipos celulares se colocaron para su cultivo en TCM-199 con 20% de SFB. Los complejos cumulus-ovocitos (COC’s) fueron colectados por aspiración de folículos de 2 a 7 mm de diámetro y colocados para su maduración en TCM-199 con 10% de SFB, 0.5 µg/mL de FSH y 0.5 µg/mL de LH, a una temperatura de 38.5 °C, 5% CO2 y 95% humedad por 24 horas. Posteriormente se fertilizaron utilizando una concentración de 1x106 espermatozoides/mL. Los presuntos cigotos fueron divididos en tres tratamientos: 1. Control; 2. Co-cultivo con células de cumulus; 3. Co-cultivo con células del oviducto. El desarrollo fue evaluado hasta las 192 horas, determinando la cantidad de embriones divididos, mórulas y blastocistos. La maduración nuclear y la fertilización se evalúo mediante la tinción con Hoechst 33342. La proporción de ovocitos que alcanzaron la metafase II al finalizar su MIV fue de 90%; la tasa de fertilización fue de 84%. Posterior a la FIV fueron co-cultivados 538, 627 y 478 ovocitos en el tratamiento control, cumulus y oviducto, respectivamente. La mayor cantidad de blastocistos (14%) en el co-cultivo de cumulus, menor cantidad en el cocultivo de oviducto (7%) y finalmente la más baja en el control (4%). Se concluye que el uso de medios condicionados con células somáticas puede estimular el desarrollo hasta estadio de blastocisto in vitro de los embriones bovinos. In vitro production (IVP) of embryos include: in vitro maturation (IVM) of oocytes obtained by follicular aspiration; in vitro fertilization (IVF) of these oocytes; and in vitro culture of embryos produced; being blastocyst rate the parameter to measure its efficacy. The IVP embryos, in cattle, has been subject to multiple investigations, due to low blastocysts rates obtained (5-30%), as result of a constant "development block"; with goal to avoid it there have been employed co-cultures with somatic cells, obtaining controversial results. The objective of the present study was to determine the effect of co-culture of embryos with oviductal cells and cumulus oophorus on the percentage of in vitro development embryos to the stage of blastocyst. Oviducts and ovaries were collected from female cattle slaughtered in a slaughterhouse, which were washed and transported in 0.9% saline at 30-35 °C. Oviductal cells were obtained after a longitudinal incision to oviduct, while cumulus oophorus cells from follicular fluid were collected, both cell types were placed in TCM199 with 20% FBS. Complex cumulus-oocytes (COC’s) were collected by aspiration of follicles 2 to 7 mm diameter and placed for maturation in TCM-199 with 10% FBS, 0.5 µg/mL FSH and 0.5 µg/mL LH, 38.5 °C temperature, 5% CO2 and 95% humidity for 24 hours. Oocytes were subsequently fertilized using a sperm concentration of 1x106 /mL. The presumptive zygotes were divided into three treatments: 1. Control; 2. Co-culture cumulus; 3. Co-culture oviduct. Development was evaluated until 192 hours, determining amount of cleavage embryos, morula and blastocyst. Nuclear maturation and fertilization was assessed by Hoechst staining (33342). The proportion of oocytes reaching metaphase II after IVM was 90%; fertilization rate was 84%. After IVF 538, 627 and 478 oocytes were co-cultured in the control, cumulus and oviduct treatment respectively. A greater number of blastocysts (14%) was obtained in the co-culture with cumulus cells, continued the co-culture with oviduct cells (7%) and finally the control (4%). It is conclude that somatic cell conditioned media can stimulate in the in vitro development until stage of blastocyst of bovine embryos.

Hepatocellular carcinoma (HCC) is the predominant type of primary liver cancer rated as fifth among all cancers in incidence and as third in mortality. Recently non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) has been recognized as an important risk factor for HCC. Recent findings show that in NALFD cholesterol accumulation more than any other type of lipid sensitizes hepatocytes to damage. The aim of this thesis is to determine the effect of the steatosis induced by a hypercholesterolemic diet over the induction and progression of liver cancer produced by a chemical hepatocarcinogen. To do this thirteen days-old C57BL/6 male mice were fed with a hypercholesterolemic diet (DHC, 2% cholesterol and 0.5% sodium cholate) and were treated with a single dose of Ndiethylnitrosamine (DEN, 10 µg/g body weight, i.p.) at fourteen days of age. Mice were sacrificed at different times, proteins were isolated from liver tissue samples to perform Western blot assays and pieces of tissue were embedded in paraffin for H&E and Masson’s trichrome routine staining and for immunohistochemestry. Our data revealed accelerated tumor growth in animals fed with a high cholesterol diet compared with those fed with a standard diet. After 8 months of high cholesterol intake mice generated liver steatosis and fibrosis. DHC mice had larger tumors, in greater number and more vascularized than mice fed with the standard diet. Western blots analysis revealed an increase in STAT3 activation, overexpression of cyclin D1 and a decrease in p27 expression in DHC mice. In conclusion our data show that cholesterol overload in liver accelerates DEN induced carcinogenesis over activating Stat3 pathway. Entre todos los tipos de cáncer, el carcinoma hepatocelular (HCC) se encuentra en el quinto lugar en incidencia y en el tercero en mortalidad a nivel mundial. Recientemente se ha encontrado que la esteatosis hepática no alcohólica (NAFLD) es un factor de riesgo para el HCC. Se ha reportado que en la NAFLD es la acumulación de colesterol, más que de otro tipo de lípido, lo que sensibiliza los hepatocitos al daño. El objetivo de esta tesis es determinar el efecto de la esteatosis producida por una dieta hipercolesterolémica sobre la inducción y progresión del HCC producido por un hepatocarcinógeno químico. Para esto se utilizaron ratones de la cepa C57BL/6 de catorce días de nacidos que fueron inyectados vía i.p. con n-dietilnitrosamina (DEN, 10 µg/g de peso corporal) y se alimentaron con dieta hipercolesterolémica (DHC, 2% de colesterol y 0.5% de colato de sodio). Los ratones se sacrificaron a distintos tiempos y se aisló la proteína de muestras de tejido para realizar ensayos de Western Blot. Parte del tejido se recuperó para realizar análisis histológicos con tinciones de hematoxilina-eosina, tricrómicas de Masson e inmunohistoquímicas con distintos marcadores de proliferación celular. Los resultados muestran que los ratones DHC tienen un desarrollo acelerado de tumores comparado con los ratones alimentados con una dieta balanceada. A los 8 meses de tratamiento la dieta hipercolesterolémica genera esteatosis y fibrosis. Los ratones DHC presentan tumores más grandes, en mayor cantidad y con mayor vascularización en relación con los controles. Los Western blots revelan incremento en la activación de STAT3, expresión elevada de ciclina D1 y disminución de p27 en los ratones DHC. Por lo que podemos concluir que la sobrecarga de colesterol en el hígado acelera la carcinogénesis inducida con DEN activando la vía de STAT3.

En México, la transmisión materno-fetal del parásito Trypanosoma cruzi ha sido poco estudiada. El primer caso se publicó en 1998 y a la fecha no hay más reportes. En este estudio se determinó la prevalencia de infección con T. cruzi en 1448 mujeres embarazadas de Oaxaca, Jalisco y el Distrito Federal, así como la frecuencia de transmisión a sus hijos recién nacidos y hasta los dos años de edad. La prevalencia se determinó por la serología reactiva a las pruebas de Chagas Stat-Pak y ELISA. La frecuencia de transmisión se determinó, primero, por la búsqueda del DNA de T. cruzi en sangre de cordón umbilical y dos años después por la presencia de anticuerpos anti-T. cruzi propios del niño, mediante inmunodetección por ELISA, utilizando dos tipos de antígenos, uno total y otro recombinante. Se demostró que la prevalencia total de la enfermedad de Chagas en mujeres embarazadas fue de 7.32% (106/1448) y por estados Jalisco fue el más alto (12.02%, 67/557), seguido de Oaxaca (4.4%, 35/794) y el Distrito Federal (4.12%, 4/97). El porcentaje de recién nacidos positivos a PCR en Oaxaca fue del 20% (7/35) y en Jalisco 11.94% (8/67), mientras que en el Distrito Federal, no se encontraron casos positivos. La frecuencia de transmisión hacia los niños evaluados tanto por PCR como por serología, se presenta de la siguiente manera: en Oaxaca fue de 9.09% (3/33) y en Jalisco de 3.07% (2/65). La frecuencia total fue de 4.9% (5/102), con lo cual los niños que resultaron positivos recibieron el tratamiento específico. La seroprevalencia materna fue más alta en el estado de Jalisco, pero la frecuencia de transmisión fue más alta en Oaxaca, estos resultados no presentan asociación con los datos ginecológicos de la madre y los datos antropométricos del recién nacido. Probablemente, los resultados obtenidos se modificaron por la presencia de diferentes cepas del parásito presentes en las regiones estudiadas. La alta frecuencia de la transmisión materno-fetal de Trypanosoma cruzi determinada en el presente trabajo, hace necesario diagnosticar la magnitud del problema a nivel nacional y establecer medidas de prevención y tratamiento In Mexico, the maternal-fetal transmission of Trypanosoma cruzi has been little studied, the first case was published in 1998 and to date there are no more official reports. We determinate the T. cruzi infection prevalence in 1448 pregnant women from Oaxaca state, Jalisco state and Mexico City, as well as the frequency of transmission to their newborns after two years. The prevalence was obtained by the reactive serology to ELISA and Chagas Stat-Pak tests. The transmission frequency was determined first by the search of T. cruzi DNA in blood umbilical cordon and second by the `presence of specific anti-T. cruzi antibodies, by using two ELISA tests, one with total antigen and another with recombinant antigens. We found that the total prevalence of Chagas disease in pregnant women was 7.32% (106/1448), by states was 4.4% (35/794) in Oaxaca, 12.02% (67/557) in Jalisco and 4.12% (4/97), in Mexico City. The percentage of positive PCR newborns in Oaxaca was 20% (7/35) and in Jalisco was 11.94% (8/67); No positives were found in Mexico City. The transmission frequency in positive PCR children as evaluated by serology after two years was 9.09% (3/33) in Oaxaca and 3.07% (2/65) in Jalisco. The total transmission frequency was 4.9% (5/102); the positive children received the specific treatment. The maternal seroprevalence was highest in Jalisco state but the transmission frequency was highest in Oaxaca State, these results have not association with the mother gynecologic data and newborns anthropometric data. Probably, the results obtained are associated with the presence of different strains of the parasite present in the studied regions.

Durante la capacitación, la polimerización de actina y el desarrollo de la movilidad hiperactivada son procesos muy importantes para la adquisición de la capacidad fecundante de los espermatozoides. Sin embargo, el mecanismo molecular que los regula no ha sido completamente dilucidado. En células somáticas, la proteína Rac1 promueve la polimerización de la actina a través de su interacción con WAVE (WASP-like verprolin-homologous protein) y la activación del complejo Arp2/3. Aunque Rac1 se ha localizado en espermatozoides de mamíferos, su papel en la fisiología espermática es desconocido. El objetivo del presente trabajo fue elucidar la función de Rac1 en los espermatozoides. Mediante microscopía confocal se estudiaron los cambios que sufría Rac1 durante la capacitación. Los resultados muestran que Rac1 cambia de localización durante la capacitación; en espermatozoides no capacitados Rac1 se localizó en todo el acrosoma y a lo largo del flagelo, mientras que en los capacitados, en la zona apical del acrosoma y a lo largo del flagelo. Para determinar si Rac1 actúa a través de WAVE, primero se verificó su presencia, encontrando a la isoforma WAVE3 (Mr.de 60 KDa) a lo largo del flagelo, tanto en espermatozoides no capacitados como en capacitados. Por doble marcaje, se observó la colocalización de Rac1 y WAVE3 únicamente a lo largo del flagelo. Con el fin de determinar el papel de Rac1 en la capacitación, los espermatozoides se capacitaron en presencia de un inhibidor específico de Rac1 (NCS23766), observándose cambios en la movilidad y la morfología del flagelo, que fueron dependientes de la concentración del inhibidor: la movilidad disminuyó en comparación con los controles, mientras que el flagelo adquirió una morfología curva. Para determinar si estos cambios se debían a cambios en la actina-F, esta se analizó mediante faloidina-TRITC. Los espermatozoides tratados con NCS23766 mostraron una fluorescencia baja, a lo largo del flagelo, en comparación a los espermatozoides capacitados. En conjunto, los resultados nos sugieren que Rac1 puede estar involucrado en la estabilidad morfológica y en la movilidad del flagelo de los espermatozoides a través de la polimerización de actina, la cual podría estar mediada por WAVE3.

La proteína p53 está involucrada en la regulación de diversos de procesos metabólicos. Su función está determinada a nivel transcripcional y postranscripcional, así como por su asociación con otras proteínas y su localización subcelular. Se ha propuesto que en condiciones de estrés celular la proteína p53 sufre una variedad de modificaciones postraduccionales que conducen a su estabilización y activación, p53 además de regular el daño, determina el destino celular (reparación del DNA, adaptación al estrés o apoptosis). Se conoce que p53 cuenta con 12 residuos de Ser y 3 de Tre que se fosforilan, 1 residuo de Ser que se N-acetilglucosaminila, además de 2 residuos de Glu y 1 residuo de Asp que se poliADP-ribosilan en respuesta a diversos estímulos como: hiperglucemia, estrés oxidante, etc. La hiperglucemia crónica, conduce a la activación de varias vías de señalización, tales como los mencionados anteriormente, que modifican las características físicas y químicas de las proteínas, tales como p53. El objetivo de este estudio fue analizar la expresión, distribución subcelular, la fosforilación, la poli-ADP ribosilación y la N-acetilglucosaminilación de p53, en un cultivo de la línea celular RINm5F con alta glucosa. Los resultados muestran que la alta glucosa induce la apoptosis en las células RINm5F en función del tiempo sin ningún tipo de cambios en la expresión del mRNA de p53, aunque se producen alteraciones en la distribución intracelular y la fosforilación de p53. El aumento de la fosforilación de p53 en Ser 15 y Ser 392 y su localización en la mitocondria se debieron a la alta glucosa y se correlacionaron con un aumentado de especies reactivas del oxígeno (ERO), una disminución en la proporción Bcl2/Bax, y un aumento en la apoptosis. La fosforilación ERK 1/2 disminuyó con el tiempo. En las mitocondrias, la activación de p38 MAPK coincidió con la fosforilación de p53 de las 24 a 72 horas. Cuando se trata a las células con la alta glucosa durante periodos cortos de tiempo (2 a 16 horas) la concentración de PARP y la poli-ADP-ribosilación de p53 aumentan en la fracción nuclear. A partir de las 24 horas de cultivo, PARP tiende a disminuir al ser fragmentada y permanece inactiva. La N-acetilglucosaminilación de p53 comienza a aumentar en el inicio del tratamiento (4 horas) en la fracción citosólica y a las 24 horas en la mitocondria, lo que coincide con la movilización de p53 a este orgánelo. Nosotros demostramos por primera vez que la alta glucosa induce la apoptosis a través de ERO en las células RINm5F, principalmente a través de la movilización y la fosforilación de p53 en Ser 392 en la mitocondria por la activación de p38 MAPK, lo que probablemente proporciona estabilidad y permite su interacción con las proteínas pro- y/o anti-apoptóticas.

El Cáncer de Mama (CaM) es la primera causa de muerte oncológica de mujeres mayores de 20 años en México. El tratamiento de esta enfermedad se basa en la evaluación previa del estadio de evolución del padecimiento y búsqueda de los receptores de Estrógenos (RE), de Progesterona (RP) y del Factor de Crecimiento Epidérmico Humano, tipo 2 (HER-2), lo cual sirve de apoyo actualmente, para decidir cuales tratamientos pueden ser más eficaces, incluyendo cirugía, radioterapia, quimioterapia, hormonoterapia, terapias biológicas o combinaciones de ellas. Los tratamientos más específicos contra el CaM son las terapias hormonales y las terapias biológicas, incluyendo al ICI 182 780 (ICI; Faslodex® /Fulvestran), antagonista del RE, y Trastuzumab (Herceptin® ), anticuerpo monoclonal inhibidor de HER-2, respectivamente. Ambos tratamientos han sido aplicados en forma combinada, observando un efecto potenciador. Los receptores HER-2 y RE convergen en una vía no genómica, la cual inicia cuando el Estradiol (E2) interacciona con el RE y el complejo induce la activación de HER-2 por medio de la tirosina cinasa c-Src, pero hay evidencias de que también pueden actuar a través de la vía Wnt/β-catenina, la cual se encuentra desregulada en cáncer y asociada con la pérdida de adhesión celular y aumento en la proliferación. Se ha demostrado que β-catenina puede inducir la activación transcripcional de NTSR1. La sobre-expresión de NTSR1 se ha correlacionado con el tamaño del tumor, cantidad de nódulos linfáticos con metástasis y la progresión del cáncer de mama. Para demostrar la convergencia de ambos receptores en la vía Wnt/β-catenina se utilizaron diferentes concentraciones de Trastuzumab (1, 10 y 100 µg/mL) e ICI (1, 0.1 y 0.01 µM), en combinación con E2 (1 pM), utilizando como modelo experimental la línea celular de carcinoma mamario humano T47D y se determinaron los efectos sobre la viabilidad celular, localización de HER-2 y β-catenina, así como la expresión de NTSR1. Los resultados obtenidos en los experimentos de viabilidad muestran un efecto sinérgico entre ICI (0.1 µM) y Trastuzumab 10 µg/mL al incubar las células T47D, durante 72 h. Las mismas concentraciones de ICI y Trastuzumab bloquearon la translocación de β-catenina al núcleo, inducida por E2, y son capaces de bloquear totalmente la expresión de NTSR1, inducida por E2, con lo que se refuerza la hipótesis que ICI y Trastuzumab actúan sobre la vía Wnt/ βcatenina. Estos resultados pueden ser de gran utilidad para el desarrollo de terapias moleculares más específicas y eficientes contra el CaM.

La timulina es un nonapéptido sintetizado exclusivamente por las células retículo epiteliales del timo. Participa en la regulación de las funciones reproductoras de manera estimulante en todos los niveles del eje hipotálamo-hipófisis-gónada. In vitro la timulina estimula la secreción de 17β-estradiol por células de la granulosa. Cuando a estas células se les adiciona FSH, la timulina estimula la secreción tanto de progesterona como de 17β-estradiol. Con base en estos antecedentes, en el presente estudio se analizó la posible participación de la timulina en la regulación de la biosíntesis de andrógenos por células de la teca del ovario de ratón Se utilizaron ratones hembra prepúberes de la cepa CD1 de 20 días de edad, inyectados con 5 u.i. de gonadotropina coriónica equina (eCG), sacrificados a las 48 h. Se extrajeron los ovarios de manera aséptica y se colocaron en medio de cultivo. Las células de la teca se obtuvieron por gradientes discontinuos de Percoll. En cajas de cultivo se sembraron 1x105 células/ml de medio DMEM/Ham-F12 suplementado y se incubaron a 37 °C. A las 24 h se cambió el medio de cultivo y los cultivos se dividieron entre las variables requeridas según el diseño experimental. En todos los ensayos se contó con un grupo sin tratamiento (secreción basal) y se realizaron tres ensayos por triplicado. Se cuantificaron las cantidades de progesterona y androstenediona en el medio de cultivo por quimioluminiscencia. Para determinar la concentración efectiva al 50% (CE50) de la hormona luteinizante (LH) que estimula la secreción de progesterona y androstenediona in vitro, los cultivos se incubaron con diferentes concentraciones de LH (0, 12.5, 25, 37.5, 50, 62.5 y 75 ng/ml) durante 24 h. El aumento en la secreción de progesterona y androstenediona fue similar con todas las concentraciones de LH utilizadas, por lo que se consideró 12.5 ng/ml como la CE50 de LH. En los cultivos de células de la teca incubados por 24 h con concentraciones crecientes de timulina (0, 0.001, 0.01 ng/ml) tanto la secreción de progesterona como de androstenediona fueron inhibidas al adicionar 0.001 ng/ml de timulina. La adición de 0.01 ng/ml de timulina, resultó en la inhibición de la secreción de androstenediona y no se modificó la de progesterona. En las células de la teca incubadas con 12.5 ng/ml de LH y 0.001 ó 0.1 ng/ml de timulina la secreción de progesterona y de androstenediona fue menor que la estimulada con LH. A partir de los resultados obtenidos, proponemos que en las células de la teca de los ovarios de ratón, la timulina regula de manera inhibitoria la secreción de la progesterona y androstenediona, tanto en condiciones basales como estimuladas con LH.

Ribosome biogenesis is a pre-requisite for cell growth and proliferation; it is however, a highly regulated process that consumes a great quantity of energy. It requires the coordinated production of rRNA, ribosomal proteins and nonribosomal factors which participate in the processing and mobilization of the new ribosomes. Ribosome biogenesis has been studied in yeast and animals; however, there is little information about this process in plants. The objective of the present work was to study ribosome biogenesis in maize seeds during germination, a stage characterized by its fast growth, and the effect of insulin, homolog the endogenous maize grow factor ZmIGF in this process. Insulin has been reported to accelerate germination and to induce seedling growth. It was observed that among the first events reactivated just after 3 hours of imbibition are the rDNA transcription and the pre-rRNA processing and that insulin stimulates both of them (40-230%). The transcript of nucleolin, a protein which regulates rDNA transcription and pre-rRNA processing, is among the messages stored in quiescent dry seeds and it is mobilized into the polysomal fraction during the first hours of imbibition (6h). In contrast, de novo ribosomal protein synthesis was low during the first hours of imbibition (3 and 6 h) increasing by 60 times in later stages (24 h). Insulin increased this synthesis (75%) at 24 h of imbibition; however, not all ribosomal proteins were similarly regulated. In this regard, an increase in RPS6 and RPL7 protein levels was observed, whereas RPL3 protein levels did not change eventhough its transcription was induced. Results show that ribosome biogenesis in the first hours of imbibition is carried out with newly synthesized rRNA and ribosomal proteins translated from stored mRNA La biogénesis de ribosomas en un prerequisito para el crecimiento y proliferación celular; es un proceso altamente regulado que consume una gran cantidad de energía. Requiere de la producción coordinada de ARNr, de proteínas ribosomales (PRs) y de factores no ribosomales que participan en el procesamiento y movilización de los nuevos ribosomas. La biogénesis de ribosomas se ha estudiado ampliamente en levaduras y animales; sin embargo se conoce poco acerca de este proceso en plantas. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la biogénesis de ribosomas en semillas de maíz durante la germinación, un estado caracterizado por su rápido crecimiento y el efecto de la insulina en este proceso. Se ha reportado que la insulina acelera la germinación en maíz así como el crecimiento de la plántula. Se observó que entre los primeros eventos reactivados después de las 3 horas de imbibición están la trancripción del ADNr y el procesamiento del pre-ARNr, y que la insulina estimula ambos procesos (40-230%). El transcrito de nucleolina una proteína que regula la transcripción del ADNr y el procesamiento del pre-ARNr, se encuentra entre los mensajes almacenados en la semilla seca quiescente y es movilizada hacia la fracción polisomal durante las primeras horas de imbibición (6 hrs.). En contraste, la síntesis de proteínas ribosomales es baja durante las primeras horas de imbibición (3 y 6 hrs.) y se incrementa 60 veces en la imbibición tardía (24 hrs.). La insulina incrementa esta síntesis (75%) a las 24 horas; sin embargo no todas las proteínas ribosomales son reguladas en forma similar. En este sentido, se observó un incremento en los niveles de las proteínas ribosomales PRS6 y PRL7, mientras que los niveles de la proteína de PRL3 no cambiaron aunque la trancipción de este gen si se incrementó. Los resultados muestran que la biogénesis de ribosomas en los primeros estados de imbibición se lleva a cabo con ARNr recién sintetizado y con proteínas ribosomales traducidas a partir de ARNm almacenados.

Bone marrow samples from children with acute lymphoblastic leukemia were analyzed for the expresión of RUNX1a, RUNX1b and RUNX1c isoforms. Obtained patterns were associated with genetic abnormalities and the expression of the RUNX1 regulated gene BLK. RUNX1c was present in all patients, but the expected overexpression of RUNX1a was not observed. Over-expression of total RUNT domain isoforms was detected in patients with extra RUNX1 copies, and unexpectedly, in those with t(4;11). Only expression of the total RUNT domaincontaining isoforms and BLK presented positive correlation. Results suggest a more complex role of RUNX1 in leukemogenesis than the proposed antagonism between the isoforms. En este estudio se analizó la expresión de los transcritos de las tres isoformas conocidas de RUNX1 (RUNX1a, RUNX1b y RUNX1c) y de las proteínas que presentan el dominio de RUNT, en muestras de médula ósea de niños con LAL. Los patrones de expresión de RUNX1 se asociaron con las alteraciones genéticas de los pacientes y con la expresión de su gen blanco BLK. Los resultados revelaron que una variante de la isoforma RUNX1c estuvo presente en todos los pacientes y las isoformas RUNX1a/b se encontraron con menor frecuencia. Entre las isoformas obtenidas se observó una variante de RUNX1a no descrita previamente. En particular, los pacientes con la t(4;11)(q21;q23) presentaron sobre-expresión de las isoformas que contienen el dominio RUNT. También se determinó correlación positiva entre la expresión de las isoformas que contienen el dominio RUNT y la expresión de BLK. Los resultados obtenidos en este trabajo indican que la participación de RUNX1 en el desarrollo de la leucemia es más compleja que la propuesta previa, acerca del antagonismo entre las isoformas. Los resultados sugieren que los subtipos genéticos en la LAL pueden influir en la expresión de RUNX1.