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Foodborne diseases (FBD) present high prevalence worldwide and more than 250 types have been reported. The main agents are Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella and certain parasites. The habit of consuming foods sold in street markets in the city of São Paulo exposes consumers to the risk of acquiring FBD. 25 samples of vinaigrette salad were collected in the central, northern, southern, eastern and western regions of the city of São Paulo, Brazil. The samples were inoculated in selective, enriched culture media and biochemical analyses were performed. Bacterial and fungal growth occurred in all samples. The microorganisms detected were E. coli (64%), Enterobacter (60%), S. aureus (52%), Klebsiella (40%), Proteus sp. (32%), Shigella sp. (28%), Citrobacter sp. (16%), Edwardsiella sp. (12%), Alcaligenes sp. (8%), Serratia sp. (8%), Salmonella sp. (4%), Pseudomonas sp. (4%) and; 72% were positive for aflatoxins. Twelve species were identified, 50% of which can cause FBD. S. aureus and fecal coliforms can cause FBD, while Alcaligenes sp. can cause nosocomial infections and Edwardsiella sp. can cause hepatic abscess, meningitis and septicemia. Aflatoxins may cause mycotoxicoses and liver cancer. Therefore, inspections, and prevention and awareness measures should be reinforced to minimize the risks of contracting FBD from foods sold in street markets in the city of São Paulo. Las enfermedades transmitidas por alimentos (ETA) tienen una alta prevalencia en todo el mundo y se han reportado más de 250 tipos. Los principales agentes son Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella y algunos parásitos. El hábito de consumir alimentos vendidos en mercados abiertos de la ciudad de São Paulo expone a los consumidores al riesgo de adquirir ETA. Se recolectaron 25 muestras de ensalada de vinagreta en las regiones central, norte, sur, este y oeste de São Paulo, Brasil. Las muestras se inocularon en medios de cultivo enriquecidos selectivos y se realizaron análisis bioquímicos. Se produjo crecimiento de bacterias y hongos en todas las muestras. Los microorganismos detectados fueron E. coli (64%), Enterobacter (60%), S. aureus (52%), Klebsiella (40%), Proteus sp. (32%), Shigella sp. (28%), Citrobacter sp. (16%), Edwardsiella sp. (12%), Alcaligenes sp. (8%), Serratia sp. (8%), Salmonella sp. (4%), Pseudomonas sp. (4%) y 72% fueron positivos para aflatoxinas. Se identificaron doce especies, el 50% de las cuales pueden causar ETA. S. aureus y coliformes fecales pueden causar ETA, mientras que Alcaligenes sp. puede causar infecciones nosocomiales y Edwardsiella sp. puede causar absceso hepático, meningitis y septicemia. Las aflatoxinas pueden causar micotoxicosis y cáncer de hígado. Por lo tanto, se deben reforzar las inspecciones y las medidas de prevención y sensibilización para minimizar los riesgos de contratar ETA en los alimentos vendidos en los mercados abiertos de la ciudad de São Paulo. As doenças transmitidas por alimentos (DTA) apresentam alta prevalência em todo o mundo e mais de 250 tipos foram relatadas. Os principais agentes são Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella e alguns parasitas. O hábito de consumir alimentos vendidos em feiras livres da cidade de São Paulo expõe o consumidor ao risco de adquirir o DTA. 25 amostras de salada de vinagrete foram coletadas nas regiões centro, norte, sul, leste e oeste da cidade de São Paulo, Brasil. As amostras foram inoculadas em meios de cultura enriquecidos seletivos e análises bioquímicas foram realizadas. O crescimento bacteriano e fúngico ocorreu em todas as amostras. Os microrganismos detectados foram E. coli (64%), Enterobacter (60%), S. aureus (52%), Klebsiella (40%), Proteus sp. (32%), Shigella sp. (28%), Citrobacter sp. (16%), Edwardsiella sp. (12%), Alcaligenes sp. (8%), Serratia sp. (8%), Salmonella sp. (4%), Pseudomonas sp. (4%) e 72% foram positivos para aflatoxinas. Doze espécies foram identificadas, 50% das quais podem causar DTA. S. aureus e coliformes fecais podem causar DTA, enquanto Alcaligenes sp. podem causar infecções nosocomiais e Edwardsiella sp. pode causar abscesso hepático, meningite e septicemia. As aflatoxinas podem causar micotoxicoses e câncer de fígado. Portanto, inspeções e medidas de prevenção e conscientização devem ser reforçadas para minimizar os riscos de contrair DTA em alimentos comercializados em feiras livres da cidade de São Paulo.

Mycotoxins often contaminate cattle food, which can cause liver damage, immunosuppression, and reduced milk production. Although previous studies have shown the benefits of adsorbents in farm animals, knowledge regarding their mechanism of action is limited, especially when intoxication occurs due to naturally contaminated diets. The present study aimed to assess whether the daily oral administration of mycotoxin adsorbent bentonite clay based on aluminosilicate for 56 days, would attenuate these changes in 18 dairy cows, which were multiparous in the middle of the lactation stage, and were consuming a diet containing fumonisin B1 and B2, zearalenone, and desoxynivalenol. The animals were divided into treatment (TG, n = 9) and control (CG, n = 9) groups, and subjected to assessment of liver functions, hematological assessments, assessment of oxidative leucocyte metabolism by the tetrazolium nitroazul (NBT) technique, and physical chemical analysis of milk, every week for two months, totaling eight analyses. It was observed that the use of the adsorbent caused a reduction in the milk excretion of aflatoxin M1 (AFM1), an increase in levels of serum protein (p = 0.03) and albumin (p = 0.0001), an increase in leukocyte oxidative metabolism from day 24 of treatment(p = 0.05), and increased milk production from the day 16 of treatment (p = 0.08). There was no improvement in the physicochemical indices of the milk. It was concluded that the use of an aluminosilicate-based adsorbent was able to attenuate the effects of mycotoxins on the function of leukocytes and increase milk production. Micotoxinas podem contaminar alimentos de bovinos, levando a distúrbios hepáticos, imunodepressão e redução da produção. Embora existam estudos mostrando os benefícios de adsorventes em animais de produção, há limitado conhecimento sobre sua ação quando a intoxicação de bovinos ocorre por dietas naturalmente contaminadas. O presente estudo objetivou avaliar se a administração oral diária do adsorvente de micotoxinas, argila bentonita a base de aluminossilicato durante 56 dias atenuaria alterações promovidas pelas micotoxinas em 18 vacas leiteiras, multíparas no meio do estágio da lactação, consumindo dieta contendo fumonisina B1 e B2, zearalenona (ZEA) e desoxinivalenol (DON). Os animais foram divididos, grupos tratamento (GT, n=9) e controle (GC, n=9), e submetidos às avaliações de enzimas e função hepática, hematológicas, metabolismo oxidativo de leucócitos pela técnica do nitroazul de tetrazolium (NBT) e análise físico-química do leite, a cada semana, durante dois meses, totalizando oito análises. Observou-se que o uso do adsorvente promoveu redução da excreção láctea de aflatoxina M1 (AFM1), aumento de proteína (p = 0,03) e albumina séricas (p= 0,0001), e aumento do metabolismo oxidativo leucocitário a partir do dia 24 (p = 0,05). Houve também elevação da produção leiteira a partir do 16º dia de tratamento (p= 0,008). Não foi observado melhora nos índices físico-químicos do leite dos animais e houve pouca influência na atividade das enzimas hepáticas. Conclui-se que o uso do adsorvente a base de aluminossilicato foi capaz de atenuar os efeitos das micotoxinas na função de leucócitos e de elevar a produção leiteira.

In the present trial, the levels of serum aflatoxin B1 (AFB1)-lysine and their relationship with biochemical parameters in broiler chicks fed an AFB1-contaminated diet were determined. The experime...

Graphical abstract, Highlights • The levels of AFM1 in milk produced in Argentina are relatively low. • Milk production, fiber particle size and AFB1 level affected the carry-over rate. • The greatest proportion of AFM1 in milk is detected in whey during cheese. production., From January to December 2016, samples of milk and feeds of dairy cattle were monthly collected. The concentration of mycotoxins in all matrices was determined using the enzymatic immunoassay technique. The average concentration of aflatoxin B1 (AFB1), deoxynivalenol (DON) and zearalenone (ZEA) in feed was 3.01, 218.5 and 467 ug/kg, respectively. The average AFB1 carry-over rate was 0.84% with a variation between 0.05 to 5.93%. Particle size of the feed (P = 0.030) and individual milk production (P = 0.001) affected this rate. Mini-soft cheeses were produced using milk naturally contaminated with aflatoxin M1 (AFM1) as raw material to study its distribution both in whey and in cheese. The average level of AFM1 in milk was 0.014 μg/l. None of milk samples exceeded the maximum level accepted for AFB1 by the Southern Common Market (MERCOSUR) legislation (0.5 μg/l) and only 5.5% of samples exceeded the European Union (UE) regulations (0.05 μg/l). After the cheese elaboration, the concentration of AFM1 was determined in whey and in cheese. The greatest proportion (60%) was detected in whey while 40% AFM1 remained in the cheese. However, the concentration of AFM1 was higher in the cheese compared to the original milk.

Aflatoxin M1 (AFM1) is a hydroxylated metabolite of aflatoxin B1 (AFB1) that can be excreted in milk of cows after consuming contaminated feed. The aim of this study consisted of a field monitoring to assess the contamination levels of AFB1 in 60 feed samples from two feeding systems for high-yielding dairy cows and of AFM1 in the corresponding raw milk samples. The aflatoxins were analyzed by in-house validated methods based on high-performance liquid chromatography (HPLC) with fluorescence detection. AFB1 was detected in 55% of feed samples (mean 0.61 μg/kg, with 2 samples exceeding the European Union (EU) maximum level set at 5 μg/kg), with greater incidence and concentration in compound feed than in unifeed rations (p &lt, 0.05). AFM1 was detected in 38.3% milk samples (mean 12.6 ng/kg, with 5 samples exceeding the EU maximum level set at 50 ng/kg), with a higher occurrence in milk of cows fed compound feed, as well as in spring milk compared to that produced in winter. The overall transfer ratio of aflatoxins from feed to milk was 3.22%, being higher in cows fed with compound feed and in spring milkings. In a selection of positive matched samples (n = 22), the ratio AFM1/AFB1 exceeded the European Food Safety Authority (EFSA) estimated 6% threshold for high-yielding dairy cows.

The aim of this study was to evaluate the capacity of two strains of lactic acid bacteria (LAB), Lactobacillus rhamnosus and Lactococcus lactis, and a yeast strain, Saccharomyces cerevisiae, inactivated by heat (121 °C, 10 min), from binding to aflatoxin M1 (AFM1), as well as the interaction between these microorganisms, aflatoxin M1 and the Minas Frescal cheese matrix after 2 and 30 days of storage. The ability of LABs and S. cerevisiae to bind AFM1 to Minas Frescal cheese was evaluated by high performance liquid chromatography (HPLC) composed of a fluorescence detector. The interaction between these microorganisms and AFM1 was evaluated using a scanning electron microscope composed of a backscattered electron detector with a voltage of 15 kV and magnifications of 1000 ×, 5000 × and 8000 ×. The use of microorganisms as a biological method is efficient in reducing AFM1 in Minas Frescal cheese and does not affect the microbiological parameters. AFM1 reduction varied according to the microorganism used in the treatments. S cerevisiae showed greater capacity to bind AFM1 over time, compared to LABs. Scanning electron microscopy was especially useful, confirming that lactic acid bacteria and S. cerevisae were able to bind AFM1 particles in Minas Frescal cheese.

Cassava (Manihot esculenta Crantz) is a highly consumed food in the world, especially in developing countries. Much of this tuber production comes from small farmers and it can suffer microbial infection during pre-harvest in the field and/or postharvest if stored under inadequate conditions. This review presented cassava production and the processing steps, resulting in products consumed in Brazil and other countries. Studies on fungal occurrence, including toxigenic fungi, presence of aflatoxins and other mycotoxins in cassava and its products carried out in several countries have been revised as well as the used methodologies for mycotoxin detection. Resumo A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é um alimento muito consumido no mundo, principalmente nos países em desenvolvimento. Grande parte da produção deste tubérculo vem de pequenos agricultores. A mandioca pode sofrer a infecção microbiana antes da colheita no campo e/ou após a colheita, se estocada sob condições inadequadas. Esta revisão apresenta a produção de mandioca e as etapas de processamento, que resultam nos produtos que são consumidos no Brasil e em outros países. Estudos sobre a ocorrência de fungos, incluindo os fungos toxigênicos, e a presença de aflatoxinas e outras micotoxinas na mandioca e seus produtos, conduzidos em vários países, foram revisados, bem como as metodologias de detecção das micotoxinas.

Essential oils are possible alternatives to the use of synthetic pesticides for control of fungal contamination. Ginger (Zingiber officinale) essential oil (GEO) is known for having antifungal and antiaflatoxigenic properties, but its use as a fumigant in situ has not been studied yet. The aim of this study was to evaluate GEO’s effects upon Aspergillus flavus as a fumigant agent in stored maize grains. The main compounds reported in GEO were α-zingiberene (23.85%) and geranial (14.16%), characterized by gas chromatography-mass spectrometry and nuclear magnetic resonance. The GEO was used as a fumigant in irradiated maize grains in concentrations ranging from 5 to 50 µg/g and the resulting effects were compared to a synthetic antifungal agent (carbendazim and thiram), an antifungal traditionally used for seed treatment. The antifungal efficacy of GEO against A. flavus has been proven in a dose-dependent manner through in situ (maize grains) test. The GEO inhibited aflatoxin production at concentrations 25 and 50 µg/g and controlled fungal growth. Therefore, GEO can be used as an effective and non-toxic alternative to conventional treatments in stored maize grains for the natural control of A. flavus. RESUMO: Os óleos essenciais são possíveis alternativas ao uso de praguicidas sintéticos no controle da contaminação por fungos. O óleo essencial de gengibre (Zingiber officinale - OEG) é conhecido por possuir propriedades antifúngicas e antiaflatoxigênicas, mas seu uso como fumigante in situ ainda não foi estudado. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do OEG sobre Aspergillus flavus como agente fumigante em grãos de milho armazenados. Os principais compostos encontrados no OEG foram α-zingibereno (23,85%) e geranial (14,16%), caracterizados por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas e ressonância magnética nuclear. O OEG foi utilizado como fumigante em grãos de milho irradiados em concentrações variando de 5 a 50 µg/g e os efeitos resultantes foram comparados a um agente antifúngico sintético (carbendazim e tiram), antifúngico tradicionalmente usado para o tratamento de sementes. A eficácia antifúngica do OEG contra A. flavus foi comprovada de maneira dependente da dose através do teste in situ (grãos de milho). O OEG inibiu a produção de aflatoxina nas concentrações 25 e 50 µg/g e controlou o crescimento de fungos. Portanto, o OEG pode ser usado como uma alternativa eficaz e não tóxica aos tratamentos convencionais em grãos de milho armazenados para o controle natural de A. flavus.

This study aimed to summarize the occurrence of aflatoxin B1 (AFB1) in the various cultivars of the Persian pistachio nut and the decontamination techniques, with the aid of a systematic review and meta-analysis. In this regard, all published studies up to November 2019 among international and national databases were screened, resulting in 23 articles. According to the findings, the main aflatoxin identified in the pistachio nut was AFB1, with AFB1 concentrations in ~28% of the studies being ? 5 µg/kg, in ~35% of the studies being ? 10 µg/kg, and in ~37% of the studies being ? 10 µg/kg. Generally, in most studies (~72%), AFB1 content in pistachio cultivars was higher than the acceptable level proposed by the Iranian National Standard. Although several physical and chemical techniques for AFB1 reduction have been introduced, most of them are not safe and/or suitable for human consumption.

Aflatoxins are carcinogenic to humans and deoxynivalenol causes digestive disorders, and both mycotoxins occur frequently in cereal-based foods. The purpose of this study was to investigate the occurrence and levels of aflatoxins (B1, B2, G1 and G2) and deoxynivalenol (DON) in cereal-based baby foods as well as to calculate the estimated daily intakes (EDI) in different stages of infancy. Sixty samples of infant cereals (wheat-, corn-, rice-, oat-, and mixed grain-based) were collected during a 2-year period and analyzed by validated methods. Aflatoxins were detected in 12 samples (20%), six of which exceeded the EU maximum level for aflatoxin B1 set at 0.10 &micro, g/kg. Deoxynivalenol appeared in 20% of baby food samples, with one sample exceeding the EU maximum level established at 200 &micro, g/kg. There were no significant differences between gluten-free products for babies aged 4&ndash, 6 months and multi-cereal products for infants aged 7&ndash, 12 months, nor between whole-grain-based and refined ingredients. However, baby food products of organic origin showed significantly higher levels of deoxynivalenol than conventional ones (p &lt, 0.05). It is proposed for the health protection of infants and young children, a vulnerable group, to establish the lowest maximum level for the sum of aflatoxins (B1, B2, G1 and G2) in baby food.

N. El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de 1.200 µg/kg de aflatoxina B1 (AFB1), aflatoxina B2 (AFB2) y de tres adsorbentes de micotoxinas, sobre el comportamiento productivo, titulos de anticuerpos para Newcastle, quimica sanguinea y lesiones histopatologicas en pollos de engorde. 192 pollos de un dia de edad fueron aleatoriamente distribuidos en cuatro tratamientos y tres repeticiones por tratamiento de 16 pollos cada una, en un experimento de 42 dias. Tratamientos evaluados: T1 = dieta basal; T2 = dieta basal con 1200 µg/kg de AFB1 y AFB2; T3 = dieta basal con 1.200 µg/kg de AFB1 y AFB2 y adsorbente (A); T4 = dieta basal con 1.200 µg/kg de AFB1 y AFB2 y adsorbente (B). Los resultados indican que los pollos al consumir el adsorbente A y 1.200 µg/kg de AFB1 y AFB2, mejoraron su conversion alimenticia (CV), incrementaron sus titulos de anticuerpos para Newcastle (TAN) a los 21 y 42 dias, se disminuyo la aspartato transaminasa (AST) a los 21 dias y aumento su albumina (A) y proteinas totales (PT) a los 21 y 42 dias. El acido urico (AU) disminuyo a los 42 dias. Pero las lesiones histopatologicas fueron similares en los pollos, independientemente del tratamiento. Las aflatoxinas B1 y B2 en la concentracion descrita y el adsorbente (A) durante 42 dias pueden reducir la CV, aumentar el TAN, reducir la AST, reducir el AU, elevar la A y las PT, no asi el adsorbente (B), al combinarse con aflatoxinas en la dosis mencionada

EnglishPeanuts are a nutritious food consumed worldwide. Some species of the genus Aspergillus, producers of aflatoxins, colonize peanuts. Human exposure to aflatoxins occurs by ingesting contaminated foods. The objective of this paper was to assess the occurrence and dietary exposure of the population to aflatoxins in peanuts commercially available in Maringa, Brazil, from May 2013 to April 2017. A total of 104 peanut samples were evaluated by thin-layer chromatography and confirmed by derivatization with trifluoroacetic acid. The contamination rate detected was 24.0% in average concentration of 13.4µg/kg. Twenty positive samples (19.2%) exceeded the maximum level permitted in Brazil for the sum of four aflatoxins. Estimated probable daily intake was 1,28 µg/kg body weight/day, exceeding the Provisional Maximum Tolerable Daily Intake (0.001μg/kg body weight/day). According to the high levels of aflatoxins found in peanuts, there is need for further monitoring the presence of aflatoxins in peanuts in natura to reduce the levels of contamination. Key words: aflatoxins; Aspergillus flavus; peanuts; risk assessment; public health portuguesO amendoim e um alimento nutritivo e muito consumido no mundo todo. Algumas especies de fungos do genero Aspergillus, produtores de aflatoxinas, colonizam o amendoim. A exposicao humana as aflatoxinas ocorre por meio do consumo de alimentos contaminados. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrencia e exposicao da populacao as aflatoxinas em amendoim comercializado no municipio de Maringa, Brasil, durante o periodo de maio de 2013 a abril de 2017. Foram avaliadas 104 amostras de amendoim por analise cromatografica e confirmadas por derivacao com acido trifluoroacetico. A frequencia de contaminacao foi de 24,0% em concentracao media de 13,4µg/kg. Vinte amostras positivas (19,2%) apresentaram-se acima do limite maximo permitido no Brasil para a somatoria das quatro aflatoxinas. A ingestao diaria provavel media encontrada foi de 1,28µg/kg peso corporeo/dia, superando a ingestao diaria maxima toleravel provisoria (0,001µg/kg peso corporeo/dia). De acordo com os elevados teores de aflatoxinas encontrados em amendoim, ha necessidade de um maior monitoramento da presenca de aflatoxinas em alimentos, tendo em vista a reducao nos niveis de contaminacao do amendoim in natura. Palavras-chave: aflatoxinas; Aspergillus flavus; amendoim; avaliacao de risco; Saude Publica.

Submitted by Maria da Luz Antunes (mluz.antunes@estesl.ipl.pt) on 2020-02-06T14:18:45Z No. of bitstreams: 1 Impacto das alterações climáticas na exposição da população portuguesa a aflatoxinas.pdf: 682206 bytes, checksum: f21d8d642b7638f2091dee8b1286d788 (MD5) Made available in DSpace on 2020-02-06T14:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Impacto das alterações climáticas na exposição da população portuguesa a aflatoxinas.pdf: 682206 bytes, checksum: f21d8d642b7638f2091dee8b1286d788 (MD5) Previous issue date: 2018 info:eu-repo/semantics/publishedVersion

The aim of the present study was to determine the ability of four different sources of Saccharomyces cerevisiae (autolyzed yeast, brewer’s yeast, cell wall yeast and inactivated yeast) to adsorb aflatoxin B1 through adsorption isotherms. For this, a phosphate buffered saline solution containing 2 μg of AFB1/ml was prepared and the yeast with a variant concentration of 0.05 g to 1.0 g was added and incubated at 10, 20 and 30 mins. After the incubation time the quantification was made by high performance liquid chromatography. It was verified through the isotherms that the absorption of aflatoxins increased as a result of yeast concentration and that the best time for action was 20 mins. Also, the application of the extended Langmuir model was more adequate for brewer’s yeast and cell wall, and these were more effective in the adsorption. In contrast, the autolyzed and inactivated yeast presented an inverse behavior, reducing the percentage of adsorption by increasing the amount of free aflatoxin; being able to be recurrent of the reversibility of the reaction (30 min) and reduction in the adsorptive capacity (10 min); related to the state of the β-D-glucans present in the cell membrane and the occupation of the yeast binding sites; adapting better to the Freundlich model.

The natural drying of in-shell Brazil nuts carried out by the extractivists is not effective in reducing contamination by aflatoxin-producing fungi. Thus the use of an artificial heater could prove to be a favourable method to bring about a rapid reduction in the moisture content of the nuts and thereby prevent fungal growth. Hence the objective of this study was to evaluate the efficiency of a natural convection-type drier with respect to the physical, physicochemical and microbiological quality of nuts after drying for 6 hours at 45 °C. A random block experimental design with two treatments (nuts before and after drying) was used, using 10 replications of 3 kg. The nuts were analysed for their moisture, ash, protein, dietary fibre, total carbohydrates and lipid contents, water activity, total count of filamentous, potentially aflatoxin-producing fungi, and also the quantification of aflatoxins B1, B2, G1, G2 and the total aflatoxins. There was no effect of drying on the Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus counts or on the physicochemical composition of the nuts, except for the ash content. However the moisture content of the nuts was reduced by 39.7% and there was a decrease in the contamination by pre-existing total filamentous fungi. The dryer was effective in reducing the average time taken for drying as compared to the traditional method used by extractivists. Resumo A secagem natural da castanha-do-brasil com casca, realizada por extrativistas, não é eficaz na redução da contaminação por fungos produtores de aflatoxinas. Portanto, o uso de um secador artificial pode ser um método para reduzir rapidamente o teor de umidade das amêndoas e, assim, prevenir o crescimento de fungos. Neste contexto, o presente estudo foi realizado para avaliar a eficiência de um secador, por convecção natural de ar, na qualidade física, físico-química e microbiológica das amêndoas após 6 horas de secagem, a 45 °C. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, com dois tratamentos (castanhas antes e depois da secagem) e 10 repetições de 3 kg. As amêndoas foram analisadas quanto a umidade, cinzas, proteína, fibra alimentar, carboidratos totais e lipídios, atividade de água, contagem total de fungos filamentosos e potencialmente produtores de aflatoxina, e quantificação de aflatoxinas B1, B2, G1, G2 e total. Não houve efeito da secagem na contagem de Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, e também na composição físico-química das castanhas, exceto para teor de cinzas. No entanto, a umidade da amêndoa reduziu-se em 39,7% e houve redução da contaminação pré-existente de fungos filamentosos totais. O secador é eficaz na redução do tempo médio de secagem quando comparado com o método tradicional usado pelos extrativistas.

Resumo O arroz é um dos cereais mais consumidos no Brasil e no mundo. Devido ao grande impacto do consumo de arroz na população, estudos sobre a qualidade deste produto são de grande importância. É um ótimo substrato para a produção de micotoxinas e, quando os fungos toxigênicos encontram condições de crescer e produzir toxinas, estes as produzem em grandes quantidades. Embora não seja comum a presença de micotoxinas, existem alguns relatos sobre a ocorrência de aflatoxinas e fungos aflatoxigênicos no arroz. O presente artigo é uma revisão sobre os aspectos gerais do arroz, sua produção, ocorrência de fungos, aflatoxinas e micotoxinas no Brasil e no mundo, bem como sobre a redução de aflatoxinas durante o processamento do arroz. Abstract Rice is one of the cereals most consumed in Brazil and in the world. Due to the significant impact of rice consumption on the population, studies regarding its quality are of great importance. It is an excellent substrate for fungal growth and mycotoxin production, so when toxigenic fungi find conditions to grow and produce toxins, they produce large quantities. Although the presence of mycotoxins is not common in rice, some previous reports have shown the presence of aflatoxins and aflatoxigenic fungi in rice. Thus the present article is a review concerning the general aspects of rice, its production, and the occurrence of fungi, aflatoxins and other mycotoxins in Brazil and in the world, and also the reduction of aflatoxin during rice processing.

The objective of this study was to carry out a transcription analysis of eight genes belonging to the aflatoxin (AF) and cyclopiazonic acid (CPA) biosynthesis pathway, and to detect aflatoxin B1 (AFB1) and CPA production in Aspergillus flavus strains isolated from Brazil nuts. Additionally, these genes were correlated with the different mycotoxigenic profiles of the same strains. Four previously identified A. flavus strains (ICB-01, ICB-151, ICB-161, and ICB-165) were grown on Brazil nut agar at 25 °C for 10 days. Mycotoxins were separated by high-performance liquid chromatography. Transcriptional analysis was performed by real-time RT-PCR using specific primers designed based on the conserved regions of two regulatory genes (aflR and aflS), three structural genes of the AFB1 biosynthesis pathway (aflH, aflJ and aflP), and three structural genes of the CPA biosynthesis pathway (maoA, dmaT and pks-nrps). The expression of most genes in the A. flavus isolates varied according to the mycotoxin profile of each strain. The most expressed genes in the aflatoxigenic strain ICB-151 were aflJ (77.11%) and aflH (32.75%), while the CPA-producing strain ICB-161 mainly expressed dmaT (100%), maoA (63.72%), aflS (43.52%), and aflR (42.63%). The ICB-01 isolate was a producer of AFB1 and CPA and the most expressed genes were aflS (47.79%), dmaT (42.77%), aflP (39.5%), and aflR (38.02%). ICB-198 did not produce any mycotoxin and exhibited lower expression of almost all genes analyzed. Furthermore, the ratio of aflS/aflR expression was correlated with the biosynthesis of AF and CPA in A. flavus strains producing exclusively AF or CPA or producing both AF and CPA. The ratio of aflS/aflR expression therefore seems to be related to the production of mycotoxins in Brazil nuts. Our results provide important data for the development of innovative and more cost-effective strategies to reduce and prevent AFB and CPA contamination in Brazil nuts.

Resumen La presencia de micotoxinas en alimentos es un problema de gran importancia a nivel mundial que provoca serios perjuicios sanitarios y económicos. Para limitar los efectos de las micotoxinas a los animales uno de los métodos más utilizados es la aplicación de secuestrantes. Estos son polímeros inorgánicos u orgánicos que al añadirse a los alimentos forman complejos con las micotoxinas en la luz intestinal disminuyendo así su absorción. Por este motivo se evaluó la eficacia de cuatro secuestrantes, dos alumino silicatos hidratados de calcio y sodio, uno de glucomananos esterificados y otro del tipo multi modular para aflatoxina B1 (AFB1). La capacidad de adsorción fue evaluada in vitro y bajo condiciones de pH similares a las del tracto gastrointestinal de los animales. La concentración de AFB1 fue determinada mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Con la excepción del producto de glucomananos esterificados, el porcentaje de unión de aflatoxina B1 obtenido para los secuestrantes estudiados fue alto (> 76%). Estos resultados sugieren que la mayoría de los secuestrantes utilizados en este estudio son potenciales agentes químicos-biológicos que podrían ser utilizados para disminuir los efectos de las aflatoxinas en animales Summary The contamination of animal feed with mycotoxins represents a worldwide problem that causes serious diseases in animals and economic losses. One of the most used methods for protecting animals against mycotoxins is the utilization of adsorbents. These are inorganic or organic components that added to foods form complexes with mycotoxins in the gastrointestinal tract thus decreasing its absorption. Four mycotoxin binder products including two hydrated sodium calcium aluminosilicates, one esterified glucomannan and one multi modular were used to determine their efficacity to bind aflatoxin B1. The binding ability for AFB1 was conducted by an in vitro assay, which simulated the pH condition of the gastrointestinal tract of animals. AFB1 contents was determinated by high performance liquid chromatographic (HPLC). With the exception of the esterified glucomannan product, the binding percent of AFB1 was high (> 76%) by the sequestering agents used in the current study. These results suggest that most commercial adsorbent products used in this study are potential chemical - biological agents that might be used to decrease the effects of aflatoxins in animals.

The traditional system of collection and storage of Brazil nut compromises seriously the quality of these almonds as it contributes to the high incidence of contaminants, like fungi of the genus Aspergillus, which can produce aflatoxins. In this study, the objective was to evaluate the influence of the storage period in studied conditions, on the physicochemical characteristics and on the microbiological contamination of Brazil nuts. The experimental was designed as completely randomized, considering as treatments the storage period (0 - control, 30, 60, 90, 120 and 150 days) with four replicates of 3 kg of Brazil nuts each. The samples were submitted to physicochemical and microbiological analysis. It was observed that almonds submitted to the storage had their moisture content reduced by 78.2% at 150 days of storage, however, this reduction was not fast enough to avoid surface contamination by filamentous and potentially aflatoxins producing fungi. The critical period of contamination occurred on the first 30 days of storage when there was an increase of the studied fungi, as well as B1 and total aflatoxin. The studied storage conditions were four times more effective in reducing the product moisture content than the traditional methods, however, pre-drying is necessary to avoid contamination of the product. RESUMO O sistema tradicional de coleta e armazenamento da castanha-do-brasil pode comprometer seriamente a qualidade das amêndoas, pois contribui para a alta incidência de agentes contaminantes, como fungos do gênero Aspergillus, que podem produzir aflatoxinas. Neste trabalho, teve-se por objetivo avaliar a influência do período de armazenamento, nas condições estudadas, sobre as características físico-químicas e a contaminação microbiológica da castanha-do-brasil. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, considerando-se como tratamentos os tempos de armazenamento (0 - controle, 30, 60, 90, 120 e 150 dias), com quatro repetições de 3 kg de castanha-do-brasil cada. As amostras foram submetidas às análises físico-químicas e microbiológicas. Observou-se que o armazenamento reduziu em 78,2% o teor de umidade das amêndoas ao final de 150 dias, porém essa redução não foi rápida o suficiente para evitar a contaminação por fungos filamentosos totais e potencialmente produtores de aflatoxinas. O período crítico de contaminação ocorreu nos primeiros 30 dias de armazenamento, quando se verificou o aumento dos fungos estudados, bem como de aflatoxinas B1 e total. As condições de armazenamento avaliadas foram quatro vezes mais eficientes na redução de umidade do produto do que o método tradicional de armazenagem, sendo, porém, necessária uma pré-secagem, a fim de se evitar a contaminação do produto.

The aim of this study was to evaluate the effect of 1,200μg/kg of Aflatoxin B1(AFB1), Aflatoxin B2(AFB2) and three mycotoxins adsorbents on growth performance, antibody titers to Newcastle, blood chemistry and histopathological lesions in broilers. One hundred ninety two one-day old chickens were randomly divided into 4 treatments and 3 replicates of 16 chickens, in a 42-day experiment. Treatments evaluated: T1 = basal diet; T2 = basal diet with 1,200μg/kg of AFbj and AFb2; T3 = basal diet with 1,200μg/kg of AFb1 and AFb2 plus adsorbent (A); T4 = basal diet with 1200μg/kg of AFb1 and AFb2 plus adsorbent (B). The results indicate that the chickens eating the adsorbent (A) and 1200μg/kg of AFb1 and AFb2, improved their feed conversion (FC), increased its antibody titers to Newcastle (ATN) at 21 and 42 days, decreased the aspartate transaminase (AST) at 21 days and it increased its albumin (A) and total protein (TP) at 21 and 42 days. Uric acid (UA) decreased within 42 days. The histopathological lesions were similar in the chickens, independently of treatment. In conclusion, the aflatoxins B1 and B2 at a concentration of 1,200μg/kg and the adsorbent (A) for 42 days can reduce FC, increase ATN, reduce AST, reduce the UA and raise the A and TP, however this was not the case for adsorbent (B) when is combined with the aflatoxins in the level previously mentioned., El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de 1.200μg/kg de aflatoxina B1 (AFb1), aflatoxina B2 (AFb2) y de tres adsorbentes de micotoxinas, sobre el comportamiento productivo, títulos de anticuerpos para Newcastle, química sanguínea y lesiones histopatológicas en pollos de engorde. 192 pollos de un día de edad fueron aleatoriamente distribuidos en cuatro tratamientos y tres repeticiones por tratamiento de 16 pollos cada una, en un experimento de 42 días. Tratamientos evaluados: T1 = dieta basal; T2 = dieta basal con 1200μg/kg de AFb1 y AFb2; T3 = dieta basal con 1.200μg/kg de AFb1 y AFb2 y adsorbente (A); T4 = dieta basal con 1.200μg/kg de AFb1 y AFb2 y adsorbente (B). Los resultados indican que los pollos al consumir el adsorbente A y 1.200μg/kg de AFb1 y AFb2, mejoraron su conversión alimenticia (CV), incrementaron sus títulos de anticuerpos para Newcastle (TAN) a los 21 y 42 días, se disminuyó la aspartato transaminasa (AST) a los 21 días y aumentó su albúmina (A) y proteínas totales (PT) a los 21 y 42 días. El ácido úrico (AU) disminuyó a los 42 días. Pero las lesiones histopatológicas fueron similares en los pollos, independientemente del tratamiento. Las aflatoxinas B1 y B2 en la concentración descrita y el adsorbente (A) durante 42 días pueden reducir la CV, aumentar el TAN, reducir la AST, reducir el AU, elevar la A y las PT, no así el adsorbente (B), al combinarse con aflatoxinas en la dosis mencionada.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar o perfil eletroforético das proteínas séricas de frangos de corte alimentados com dietas contendo aflatoxinas e/ou argila clinoptilolita natural. Foram utilizados 528 frangos de corte, machos, da linhagem Ross, distribuídos em seis tratamentos com 4 repetições cada: T1 - testemunha (ração sem aflatoxinas ou clinoptilolita), T2 - ração com 5ppm de aflatoxinas, T3 - ração com 0,25% de clinoptilolita, T4 - ração com 5ppm de aflatoxinas e 0,25% de clinoptilolita, T5 - ração com 0,5% de clinoptilolita e T6 - ração com 5ppm de aflatoxinas e 0,5% de clinoptilolita. Os animais ficaram alojados em 24 boxes, e submetidos aos tratamentos do 1° ao 42° dia, quando foram sacrificados. Foram analisadas as proteínas totais, as frações albumina, alfa 1, alfa 2, beta e gama. Com exceção das médias da fração gama, o teste de Tukey revelou diferenças significativas (P

A suitable method for routine analysis of aflatoxins M1, M2, B1, B2, G1, G2 in peanut by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was developed and validated. The sample preparation was performed using a triple partitioning (water/acetonitrile/hexane) modified Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe (QuEChERS) method. For the first time, this method is reportedly used for aflatoxins analysis in peanut. Satisfactory recoveries ranged from 71 to 101%, with relative standard deviation lower than 15% were obtained for the target aflatoxins. The determination coefficients were ≥ 0.99 which showed good linearity. The LOD and LOQ varied from 0.03 to 0.26 ng g-1 and 0.1 to 0.88 ng g-1, respectively. The validated method was successfully applied to for the determination of aflatoxins in ten peanut samples. Total aflatoxin concentration exceeded the maximum level permitted by the Brazilian regulation in one sample of roasted peanut, while aflatoxins M1 and M2 were detected respectively in three and in one of the samples. The results strongly suggest that peanuts and peanut products should be continuously monitored for the aflatoxins investigated in this work. TÍTULO PT: Determinação de aflatoxinas M1, M2, B1, B2, G1 e G2 em amendoim utilizando um método QuEChERS modificado e cromatografia líquida de ultraeficiência com detecção por espectrometria de massas sequencial Um método adequado para a análise de rotina de aflatoxinas M1, M2, B1, B2, G1, G2 em amendoim por cromatografia líquida de ultraeficiência com espectrometria de massas foi desenvolvido e validado. A preparação da amostra foi realizada utilizando um método QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe) modificado, empregando partição tripla (água/acetonitrila/hexano). Pela primeira vez este método foi utilizado para análise de aflatoxinas em amendoim. Recuperações satisfatórias, entre 71 e 101%, com coeficientes de variação inferiores a 15%, foram obtidas para as aflatoxinas estudadas. Os coeficientes de determinação foram ≥ 0,99, demostrando boa linearidade. Os limites de detecção e de quantificação variaram de 0,03 a 0,26 ng g-1 e de 0,1 a 0,88 ng g-1, respectivamente. O método validado foi aplicado com sucesso na determinação de aflatoxinas em dez amostras de amendoim. Para uma amostra de amendoim torrado foi encontrado valor de concentração de aflatoxinas totais acima do limite máximo permitido pela regulamentação brasileira. As aflatoxinas M1 e M2 foram detectadas, respectivamente, em três e em uma das amostras das analisadas. Os resultados obtidos sugerem fortemente a necessidade de se realizar um contínuo monitoramento da contaminação do amendoim e de seus produtos pelas aflatoxinas investigadas nesse estudo.

Some species of filamentous fungi that infest agricultural commodities are able to produce mycotoxins, contaminating feed and animal products. The aim of this research was to identify the mycoflora present in the feed and forage for dairy goat and to isolate and characterize the Aspergillus flavus and A. parasiticus strains based on a morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability. The goat dairy diets were collected monthly from 11 goat milk farms, totaling 129 and 106 samples of concentrate and forage, respectively. For the isolation of the mycobiota the surface plating method was used. Aspergillus, Penicillium, and Fusarium were the main fungi producing mycotoxins isolated. The morphological and molecular characterization and mycotoxigenic ability were used for A. flavus and A. parasiticus identification. The Aspergillus spp. from feed 39% produced aflatoxins B1 and B2, 17% produced cyclopiazonic acid (CPA), 18% produced both toxins, and 42% had no toxigenic ability. Only 2.0% of the strains produced aflatoxins B1, B2, G1, and G2, but no CPA. The strains from forage were producers of aflatoxins B1 and B2 (37%), CPA (14%), 14% of both mycotoxins, whereas 49% have shown no toxigenic ability. The aflD and aflR genes were used by PCR and PCR-RFLP, respectively. The presence of toxigenic species in samples of feed for lactating goats indicates a potential risk of contamination of dairy products, if they are exposed to environmental conditions favorable to fungal growth and mycotoxin production. Algumas espécies de fungos filamentosos que infestam os produtos agrícolas e ração são capazes de produzir micotoxinas. O objetivo deste trabalho foi identificar a micoflora presente nos concentrados e volumosos utilizados na dieta de cabras leiteiras e isolar as espécies Aspergillus flavus e A. parasiticus, com base em uma caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica. Os alimentos foram coletados mensalmente em 11 fazendas produtoras de leite de cabra, totalizando 129 e 106 amostras de concentrado e volumoso, respectivamente. Para o isolamento da micobiota, foi utilizado o método de plaqueamento de superfície. Aspergillus, Penicillium e Fusarium foram os principais gêneros de fungos produtores de micotoxinas isolados das amostras. A caracterização morfológica e molecular e capacidade micotoxigênica foram utilizadas para identificação de A. flavus e A. parasiticus. Das cepas Aspergillus spp isoladas do concentrado, 39% produziram aflatoxinas B1 e B2, 17% produziram ácido ciclopiazônico (ACP), 18% produziram ambas as toxinas e 42% não tinham capacidade toxigênica. Apenas 2,0% das cepas produziram aflatoxinas B1, B2, G1 e G2. As cepas de Aspergillus spp. isoladas do volumoso foram produtores de aflatoxinas B1 e B2 (37%), ACP (14%), sendo que 14% produziram ambas toxinas e 49% não foram produtoras. Os genes aflD e aflR foram utilizados para a PCR e a PCR-RFLP, respectivamente. A presença de espécies toxigênicas em amostras de alimentos destinados a caprinos em lactação indica um risco potencial de contaminação dos produtos lácteos por aflatoxinas e ACP, caso estes sejam expostos a condições ambientais favoráveis ao crescimento de fungos e produção de micotoxinas.

Orientadores: Anderson de Souza Sant'Ana, Marta Hiromi Taniwaki Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O uso das técnicas moleculares para identificação de micro-organismos é indispensável em pesquisas cientificas. A dificuldade em caracterizar e identificar fungos do gênero Aspergillus ocorre devido ao fato de algumas espécies estarem intimamente relacionadas entre si, e as diferenças morfológicas entre os indivíduos serem praticamente imperceptíveis. O gênero Aspergillus engloba importantes fungos toxigênicos presentes em alimentos. Desta maneira este trabalho teve como objetivo a caracterização da micobiota toxigênica de cacau e café provenientes dos estados de Espírito Santo, Minas Gerais, São Paulo, Bahia e Pará e o desenvolvimento de uma metodologia para identificação de Aspergillus niger baseada em técnicas moleculares. Foram analisadas 114 amostras, divididas em 64 amostras de café e 50 amostras de cacau. Para o isolamento dos fungos, foi realizado o plaqueamento direto em ágar Dicloran 18% Glicerol (DG18), após desinfecção com hipoclorito de sódio 0,4 %. Um total de 1020 fungos proveniente do café e cacau, foram isolados em meio de cultura Czapek Extrato de levedura (CYA), sendo que, 769 (75,4%) foram identificados como gênero Aspergillus, 120 (11,8%) Eurotium, 52 (5%) hifomicetos, 41 (4%) Penicillium e 24 (2,4%) Fusarium. Dos 429 isolados de cacau, 267 pertenciam à seção Flavi. Em café foram 591 isolados, dos quais 451 foram identificados como A. section Nigri. Na avaliação de produção de micotoxinas, pela técnica de ágar plug associada à cromatografia de camada delgada (TLC), verificou-se que 25 % das cepas de A. section Flavi foram produtoras de aflatoxinas, enquanto que 8% dos 471 isolados de A. section Nigri foram produtores de Ocratoxina A (OTA). Para as análises moleculares foram selecionadas 127 cepas pertencentes à seção Nigri isolados das amostras de cacau e café. Para extração do DNA dois kits foram testados: PowerLyzerTM Power Soil® DNA Isolation Kit da MOBIO e o kit PrepManTM Ultra da Applied Biosystems. O Kit PowerLyzerTM Power Soil® DNA Isolation foi escolhido para efetuar as análises, por apresentar maior reprodutibilidade nos testes. Das 127 cepas analisadas 112 foram identificadas por PCR em tempo real como A.niger/A. welwitschiae. A.niger e A. welwitschiae são espécies irmãs em curso de especiação, o que torna sua identificação bastante difícil, mesmo utilizando técnicas moleculares. Contudo apesar destas dificuldades, a correta identificação através das técnicas moleculares é necessária, tornando-se uma valiosa ferramenta para auxiliar no controle de qualidade e pesquisas em micologia de alimentos, uma vez que estas duas espécies são produtoras de OTA Abstract: Molecular techniques to identify micro-organisms are becoming an indispensable tool in scientific research. The difficulty in characterizing and identifying fungi of the genus Aspergillus is due to the fact that some species are closely related to each other, and morphological differences between them are practically imperceptible. The genus Aspergillus is an important group of toxigenic fungi present in food. The aim of this study was the characterization of cocoa and coffee toxigenic mycobiota from the states of Espírito Santo, Minas Gerais, São Paulo, Bahia and Pará. And the development of a molecular methodology for identification of Aspergillus niger. One hundred and fourteen samples were analyzed, divided into 64 cocoa 50 coffee samples. For isolation of fungi, the samples, waere plated in agar Dichloran Glycerol 18% (DG18) after disinfection with sodium hypochlorite 0,4%. A total of 1020 fungi have been isolated in CYA, of which, 769 (75.4%) were identified as genus Aspergillus, 120 (11.8%) Eurotium, 52 (5%) hyphomycetes, 41 (4%) Penicillium, 24 and (2 ,4%) Fusarium. Of the 429 cocoa isolates, 267 belonged to section A. Flavi. In Coffee 591 fungus were isolated, of which 451 were identified as A. section Nigri. The production of mycotoxins evaluation, showed that 25% of the strains isolated as A. section Flavi were producing aflatoxins, while 8% of 471 A. section Nigri were producing ochratoxin A. For the molecular analysis were selected 160 strains belonging to A. Nigri section. For DNA extraction two kits were tested. The PowerLyzerTM Power Soil® DNA Isolation Kit Mobio and PrepMan Ultra kit from Applied Biosystems. The Mobio Kit was chosen for the analysis due to its reproducibility. Of the 127 strains analyzed, 112 were identified as A.niger/A. welwitschiae. A.niger and A. welwitschiae are close species in the process of speciation, which makes their identification, even with molecular techniques, very dificult. Nevertheless these two species are OTA producers and their identification is a valuable tool for food mycology research Mestrado Ciência de Alimentos Mestra em Ciência de Alimentos CNPQ 149842/2013-9 FAPESP 2011/50136-0

Polymnia sonchifolia, commonly known as ";yacon";, was originally cultivated at Andes moutains in South America. Recently, the specie attracted worldwide attention because of its wide range of uses, for example in the control of diabetes melitus, besides the antifungal and pesticidal compounds were found in the leaves. This study describes the identification of two flavonoids: 3', 5, 7 trihydroxy-3, 4'-dimethoxyflavone (compound 1) and 3', 4', 5- trihydroxy-7-methoxy flavanone (compound 2) and two sesquiterpenes lactones: enhydrin (compound 3) and a mixture of enhydrin and uvedalin (compound 4) isolated from Polymnia sonchifolia leaves and their effects on the aflatoxin production by Aspergillus flavus. The identification of the compounds were achieved by ¹H and 13C NMR. All compounds were tested in different concentration, to evaluate the growth of Aspergillus flavus culture and the production of aflatoxin. The compound 1, at the concentration 15 mug/mL, inhibited 25% of the aflatoxin B1 production (pPolymnia sonchifolia, conhecida como "Yacon", e originária da cordilheira dos Andes, sendo muito conhecida devido ao uso de seu tubérculo no controle da Diabetes melitus. Suas folhas podem conter compostos com atividade antifúngica e pesticida, pois não é necessário o uso destes produtos no seu cultivo. Neste trabalho descrevemos a identificação da estrutura química de dois flavonóides isolados das folhas de Polymnia sonchifolia: 3', 5, 7 trihydroxy-3, 4'-dimethoxyflavone (composto 1) e 3',4',5-trihidroxi-7-metoxiflavanona (composto 2) e de duas lactonas sesquiterpenicas: enidrina (composto 3) e uma mistura de enidrina e uvedalina (composto 4), bem como seus efeitos na produção de aflatoxinas por Aspergillus flavus. A identificação dos compostos foi realizada por RMN 13C e ¹H. Todos os compostos foram testados em diversas concentrações em cultura de Aspergillus flavus para avaliar o crescimento e a produção de aflatoxina. O composto 1 na concentração de 15 mig/mL inibiu 25% da produção de aflatoxina B1 (p

Submitted by Guilherme Lemeszenski (guilherme@nead.unesp.br) on 2013-08-22T18:41:23Z No. of bitstreams: 1 S1517-83822006000200018.pdf: 256033 bytes, checksum: d16a5782a56653e4ba2a99a34336d687 (MD5) Made available in DSpace on 2013-08-22T18:41:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 S1517-83822006000200018.pdf: 256033 bytes, checksum: d16a5782a56653e4ba2a99a34336d687 (MD5) Previous issue date: 2006-06-01 Made available in DSpace on 2013-09-30T19:27:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1517-83822006000200018.pdf: 256033 bytes, checksum: d16a5782a56653e4ba2a99a34336d687 (MD5) S1517-83822006000200018.pdf.txt: 18239 bytes, checksum: db10b3b6d37077fa32c66a842061ada0 (MD5) Previous issue date: 2006-06-01 Submitted by Vitor Silverio Rodrigues (vitorsrodrigues@reitoria.unesp.br) on 2014-05-20T15:07:42Z No. of bitstreams: 2 S1517-83822006000200018.pdf: 256033 bytes, checksum: d16a5782a56653e4ba2a99a34336d687 (MD5) S1517-83822006000200018.pdf.txt: 18239 bytes, checksum: db10b3b6d37077fa32c66a842061ada0 (MD5) Made available in DSpace on 2014-05-20T15:07:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 S1517-83822006000200018.pdf: 256033 bytes, checksum: d16a5782a56653e4ba2a99a34336d687 (MD5) S1517-83822006000200018.pdf.txt: 18239 bytes, checksum: db10b3b6d37077fa32c66a842061ada0 (MD5) Previous issue date: 2006-06-01 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Polymnia sonchifolia, conhecida como Yacon, e originária da cordilheira dos Andes, sendo muito conhecida devido ao uso de seu tubérculo no controle da Diabetes melitus. Suas folhas podem conter compostos com atividade antifúngica e pesticida, pois não é necessário o uso destes produtos no seu cultivo. Neste trabalho descrevemos a identificação da estrutura química de dois flavonóides isolados das folhas de Polymnia sonchifolia: 3', 5, 7 trihydroxy-3, 4'-dimethoxyflavone (composto 1) e 3',4',5-trihidroxi-7-metoxiflavanona (composto 2) e de duas lactonas sesquiterpenicas: enidrina (composto 3) e uma mistura de enidrina e uvedalina (composto 4), bem como seus efeitos na produção de aflatoxinas por Aspergillus flavus. A identificação dos compostos foi realizada por RMN 13C e ¹H. Todos os compostos foram testados em diversas concentrações em cultura de Aspergillus flavus para avaliar o crescimento e a produção de aflatoxina. O composto 1 na concentração de 15 mig/mL inibiu 25% da produção de aflatoxina B1 (p

This work had the goal to study the exposure effect of broiler chickens to aflatoxins during a period of 42 days related to its development in size and feathers. Two experimental groups of male chicks were treated with ad libitum food, one group without aflatoxins (control group) and other using contaminated food with 3mg/kg of aflatoxins (treated group). Birds were evaluated twice a day to observe its performance and consumption of food. The weights were measured at the end of each breeding phase (21, 35 and 42 days). At the end of the experiment animal size, weight, amount of feathers, organs and amino acids profile in blood were analyzed and compared between the two groups. The treated group showed classical signs of intoxication with aflatoxins such as less uniformity, less feed consumption and body weight gain. Also some macroscopic and microscopic organs and tissue changes were observed. Evaluation of heart and liver of the treated group showed an increase in their average relative weight. Feather mass in this group was significantly reduced (33.8%), but its amino acids concentration was not affected despite the low performance of the intoxicated animals.

Aflatoxina M1 é um dos metabólitos tóxico da aflatoxina B1, excretada pelo leite de animais que ingerem alimentos contaminados. O presente trabalho descreve o caso de uma fazenda produtora de leite na região de Itú, São Paulo, onde os animais foram alimentados com farelo de algodão naturalmente contaminado com as aflatoxinas. As aflatoxinas B1, B2, G1 e G2 foram identificadas por CCD e quantificadas por fotodensitometria nas concentrações de 43,5; 15,2; 9,1 e 8,6ng.g-1 respectivamente. O leite destes animais foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), e a aflatoxina M1 foi identificada e quantificada (0,64ng.mL-1). As concentrações encontradas para as aflatoxinas no farelo de algodão e no leite estão acima dos valores permitidos pela legislação brasileira, representando um risco à saúde pública.Aflatoxin M1 is a toxic metabolic from aflatoxin B1, which is excreted in milk after the cows receive contaminated feed. The dairy cows in a farm in Itú city, São Paulo state, Brazil, were fed with cottonseed meal naturally contaminated with aflatoxin. The aflatoxins B1, B2, G1 and G2 were identifiedby TLC and quantified by fotodensitometry and the results were 43.5; 15.2; 9.1 and 8.6ng.g-1 respectively. The milk from these cows was also analyzed by higth performance liquid chromatography (HPLC) and 0.64ng.mL-1 aflatoxin M1 was quantified. The aflatoxins concentration were higher than the brazilian low permit, and this should be a damage to public health.

This study aimed to evaluate the effects of grazing on the agronomic characteristics, grain yield, and presence of the mycotoxins aflatoxins, fumonisins, and zearalenone in IPR 126 oat, BRS Tarumã wheat, and IPR 111 triticale. This study was performed from April 24, 2012 to November 11, 2013 at UNIOESTE’s Experimental Farm in southern Brazil. The experimental design was a randomized block in a banded scheme, with four replications. The treatments in the A tracks were the three crops and the B tracks, the treatments: without grazing, one grazing event, or two grazing events. One grazing reduced the productivity of oat by 42.48% and triticale by 28.09% and increased wheat productivity by 24.89%. Two grazings reduced oat productivity by 54.14%, wheat by 40.96%, and triticale by 54.69%. Crops subjected to two grazings should be used for dry matter production for ground cover or partially used for silage when the plant is in the pasty or semi-hard grain stage, as grazing affects the agronomic characteristics and grain yield. The BRS Tarumã wheat, when used in crop-livestock integration systems, should be grazed only once due to increased productivity, while IPR 126 oat and IPR 111 triticale should not be grazed in crop-livestock integration systems for commercial production of grain. Oats from grazed plants should not be added to feeds of poultry in the early stage or pigs in the early and growth stages due to the higher levels of aflatoxins, fumonisins, and zearalenone. Grazing of winter crops increases the length of the crop cycle and grain formation will occur under climatic conditions favorable to the mycotoxins. Therefore, when grains are intended for human consumption, grazing is not recommended, as it increases the possibility of aflatoxins, fumonisins, and zearalenone at levels above the maximum tolerable levels permitted by law. These grains should be supplied to animals only after analysis of the mycotoxin levels present in the grains. Objetivou-se avaliar os efeitos dos pastejos nas características agronômicas, produtividade de grãos e presença das micotoxinas: aflatoxinas, fumonisinas e zearalenona em grãos de aveia IPR 126, trigo BRS Tarumã e triticale IPR 111. O trabalho foi desenvolvido no período de 24/04/2012 a 21/03/2014 (24º31’56,1’’S; 54º01’10.3”O). O delineamento experimental foi em blocos ao acaso em esquema de faixas, com quatro repetições. Os tratamentos nas faixas A foram as três culturas e nas faixas B os manejo:sem pastejo, um pastejo e dois pastejos. O manejo com apenas um pastejo reduziu a produtividade de grãos da aveia em 42,48% e do triticale em 28,09% e aumentou a produtividade do trigo em 24,89%. O manejo com dois pastejos reduziu a produtividade da aveia em 54,14%, do trigo em 40,96% e do triticale em 54,69%. As culturas submetidas a dois pastejos devem ser diferidas para produção de matéria seca para cobertura do solo ou utilizar de forma parcial a planta no estágio de grãos pastosos ou semiduros para silagem, pois o pastejo prejudica as características agronômicas e produtividade. O trigo BRS Tarumã, quando utilizado em sistema de ILP deverá ser pastejado apenas uma vez com aumento de produtividade, enquanto a aveia IPR 126 e o triticale IPR 111 não devem ser pastejados em sistemas de integração lavoura pecuária para produção comercial de grãos. Grãos de aveia oriundos de plantas que foram submetidas a pastejo não devem ser adicionados em rações para aves na fase inicial e suínos na fase inicial e crescimento por possuírem maiores teores de aflatoxinas, fuminisinas e zearelenona. O pastejo das culturas de inverno aumenta o ciclo das culturas e a formação dos grãos ocorrerá em condições climáticas favoráveis à formação de micotoxinas. Por isso, quando o objetivo da produção de grãos de cereais de inverno é a alimentação humana, o pastejo não é recomendado, pois aumenta a possibilidade da presença de aflatoxinas, fumonisinas e zearalenona em limites máximos toleráveis acima do permitido pela legislação para a alimentação humana, e o fornecimento aos animais deve ocorrer após análises que indiquem os teores de micotoxinas presentes nos grãos.

Las especies del género Aspergillus son productoras de aflatoxinas, ácidociclopiazónico y ocratoxina A, importantes por su impacto en la salud humana. El maníes un cultivo económicamente importante en Argentina, susceptible a la colonizaciónpor A. flavus y A. parasiticus, con posterior contaminación con aflatoxinas. A fin dereducir dicha contaminación, surgió el biocontrol como alternativa de manejo. Se aislaron Aspergillus spp. a partir de diferentes sustratos de plantas nativas ycultivadas. Se estudió la capacidad toxicogénica en las secciones Nigri y Flavi y lacontaminación natural de toxinas en maní, a fin de realizar ensayos de biocontrol invitro. Se analizó la cinética de crecimiento de cepas seleccionadas como potencialesbiocontroladores. Los resultados muestran que las secciones Flavi y Nigri resultan másabundantes en plantas cultivadas, mostrando una elevada habilidad competitiva paracolonizar la semilla. La distribución de quimiotipos y esclerocios en A. flavus, podría relacionarsecon factores climáticos. Muy bajo porcentaje de cepas de A. niger resultaronocratoxicogénicas, ninguna asociada a semilla. Su mayor frecuencia en este sustratopodría determinar una menor incidencia de la sección Flavi, debido tal vez a sucinética de crecimiento. Estas características apoyan la hipótesis sobre la capacidadde A. niger como biocontrolador de cepas toxicogénicas de Aspergillus de la sección Flavi. Se encontraron tres cepas atoxicogénicas (A. niger 1636, A. flavus 1639 y A.parasiticus 1640) cuyas características demostraron que podrían ser utilizadas comoagentes de control biológico. The genus Aspergillus contains several species capable of producing aflatoxins,cyclopiazonic acid and ochratoxin A, all important for their impact on human health. The peanut is an economically important crop in Argentina and one of the crops mostsusceptible to colonization by A. flavus and A. parasiticus from the soil, with thesubsequent aflatoxin contamination. In order to reduce the effects of mycotoxins,biological control emerged as an alternative. Aspergillus spp. were isolated from different substrates of native and cultivatedplants. Toxigenic capacity in sections Flavi and Nigri and natural contamination inpeanuts by toxins were studied, in order to perform biological control tests in vitro. The results show that sections Flavi and Nigri are often found in cultivated andnative peanuts, although they are more abundant in cultivated plants, showing a highercompetitive ability to colonize the seed. The distribution of chemotypes and sclerotia of A. flavus could be related toclimatic factors. A very low percentage of A. niger strains were ochratoxin-producers,and none were associated with seeds. Its higher frequency on this substrate coulddetermine a low incidence of Flavi section, perhaps due to its growth kinetics. Thesefeatures support the hypothesis that A. niger could be a good biocontrol agent againsttoxigenic strains of Aspergillus section Nigri. Three atoxigenic strains (A. niger 1636, A.flavus 1639 and A. parasiticus 1640) showed characteristics that suggest that theycould be used as biological control agents. Fil: Pereira, Susana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

A comparação das técnicas de Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e cromatografia em camada delgada (CCD) por quantificação visual e densitométrica foi utilizada na determinação de aflatoxina total, em amostras de milho naturalmente contaminadas. Os teores de aflatoxina total encontrados pelas técnicas de CCD e ELISA, apresentaram maior freqüência na faixa de 0-30 mig/kg e acima de 300 mig/kg. Os resultados das amostras apresentaram coeficiente de variação concentrados abaixo de 20, 30 e 40% para a técnica de ELISA e CCD com quantificação densitométrica e visual, respectivamente. Os coeficientes de correlação foram altamente significativos para as relações entre as quantificações visual e densitométrica (r = 0,9219; t = 26,36; p < 0,001), ELISA e visual (r = 0,8277; t = 17,58; p < 0,001), ELISA e densitometria (r = 0,7373; t = 13,01; p < 0,001), na determinação de aflatoxina total em todas as amostras de milho pesquisadas, confirmando haver equivalência das técnicas estudadas.Two methods, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and thin layer chromatography (TLC) by visual and densitometric, were compared for determination of aflatoxins in corn samples. The highest incidence of total aflatoxin detected by those methods were ranged from 0-30 mug/kg and above 300 mug/kg. For aflatoxins B2, G1, G2 the levels were ranged from 0-30mug/kg. The samples results showed variation coefficient below of 20, 30 and 40% for ELISA and CCD with densitometric and visual quantification, respectively. The correlation coefficients were highly significative for the relation between visual quantification and densitometric (r = 0,9219; t = 28,36; p

Com o objetivo de medir o potencial de resistência de 5 diferentes híbridos de milho, logo após a colheita, ao crescimento de fungos e produção de aflatoxinas (AFs), foram avaliados os seguintes parâmetros: 1) aspecto macroscópico dos grãos, sendo os grãos de cada híbrido classificados como íntegros, danificados por insetos (DI) ou danificados por fungos (DF); 2) contaminação fúngica dos híbridos; 3) potencial para resistência à produção de AFs, através do cultivo de Aspergillus parasiticus, linhagem NRRL 2999, sobre grãos de cada híbrido estudado; 4) consumo de matéria seca dos híbridos pelo cultivo fúngico. Como resultado, observou-se que 38% do milho de todos os híbridos apresentaram comprometimento macroscópico, sendo 26,7% DI e 11,3% DF. Os híbridos recém-colhidos apresentaram contaminação fúngica por Penicillium sp. (14,3%); Aspergillus sp. (23,6%) e Fusarium sp. (57,1%). O potencial de produzir AFs pelos diferentes híbridos em cultivos por 5 e 10 dias apresentou diferença somente com relação à aflatoxina G2 em cultivos por 5 dias. A média de consumo de matéria seca dos híbridos de milho foi de 1,25 e 2,69% submetidos ao cultivo de fungos por períodos de 5 e 10 dias, respectivamente. To determine the resistance of five different recently harvested corn hybrids to fungal growth and aflatoxins (AFs) production the following parameters were measured: 1) Macroscopic aspect of the grain and each hybrid classified as whole, damaged by insects (DI) or damaged by fungi (DF); 2) Fungal contamination of hybrids 3) Resistance to AFs production, through the culture of Aspergillus parasiticus, NRRL 2999 strain, on each hybrid grain studied and 4) Consumption of dry matter of hybrids by the fungal culture. It was observad that 38% of all corn hybrids had macroscopic damage, being 26.7% DI and 11.3% DF. The recently harvested hybrids showed fungal contamination by Penicillium sp. (14.3%); Aspergillus sp. (23.6%) and Fusarium sp. (57.1%). The production of AFs by the different hybrids cultured for 5 and 10 days showed difference only when compared to aflatoxin G2 cultured for 5 days. The average dry matter consumption of corn hybrids was of 1.25 and 2.69%, submitted to fungal culture for 5 and 10 days respectively.

One hundred and thirty seven samples of peanuts and peanut containing foods were collected in markets in the State of São Paulo, Brazil, between January 1995 an December 1997. Most of the samples were collected by the Inspection Service of São Paulo Secretary of Health. The foods included raw peanuts, peanut candies ("paçoca" and "pé de moleque"), peanut butter, fried/roasted salted peanuts, "torrone", chocolate coated peanuts and salt-coated peanuts. The samples were analyzed for aflatoxins using a thin-layer chromatographic method. About 45% of the samples were positive for aflatoxins and 27% exceeded the limits of the Brazilian legislation (30.0 µg.kg-1 for aflatoxins B1+G1). The aflatoxins were confirmed by derivatization with trifluoroacetic acid. The 90th percentile was 110.0 in 1995, 60.0 in 1996 and 118.0 µg.kg-1 in 1997. The aflatoxins concentration in the raw peanut samples ranged from 5.0 to 382.0 µg.kg-1 and 27.1% were above the legal limits. Contamination in peanut candies was above the limit in 32.8% of the samples and the aflatoxins levels ranged from 6.0 to 494.0 µg.kg-1. Contamination of salty peanuts was less frequent, around 10% of the samples and the toxin levels were usually below 10 µg.kg-1. The maximum level of contamination, 536.0 µg.kg-1, was found in a sample of peanut with a salty coat ("amendoim japonês"). Results of previous studies in peanuts and peanut products in the city of São Paulo from 1980-1987 had 68.75% of the samples with levels greater than the limit 30.0 µg.kg-1 and the 90th percentile ranged from 42.0 to 333.0 µg.kg-1. In 1994, 36.0% of the samples showed results above the limit and the 90th percentile was 489 µg.kg-1. The results show that aflatoxins contamination in peanuts is decreasing but it is still a serious problem in Brazil, a country where the climate, the agricultural practices and storage conditions favour fungal growth. Cento e trinta e sete amostras de amendoim e produtos contendo amendoim, obtidas no período de janeiro de 1995 a dezembro de 1997, a grande parte delas coletadas pela Vigilância Sanitária da Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo, foram submetidas à determinação de aflatoxinas. Foram incluídas amostras de amendoins cru, doces de amendoim ("paçoca" e "pé-de-moleque"), pasta de amendoim, amendoins salgados (frito e torrado), "torrone" e amendoins com cobertura de chocolate ou cobertura salgada ("amendoim japonês"). As amostras foram analisadas por cromatografia em camada delgada. Sessenta e duas amostras (45,3%) foram positivas para aflatoxinas e 37 amostras (27,0%) apresentaram valores de aflatoxinas B1 + G1 acima do limite máximo da legislação brasileira (30,0 µg. kg-1 para aflatoxinas B1+G1). A identidade destas aflatoxinas foi confirmada usando-se ácido trifluoro acético. O 90th percentil foi 110,0 em 1995, 60,0 em 1996 e 118,0 µg. kg-1 em 1997. A concentração de aflatoxinas nas amostras de amendoim cru variou de 5,0 a 356,0 µg.kg-1 e 27,1% delas acima do limite. Quanto à contaminação por aflatoxinas nas amostras de doces de amendoim 32,8% delas estavam acima do limite e as concentrações variaram de 6,0 a 536,0 µg. kg-1. A contaminação nos amendoins salgados foi menos frequente, cerca de 10% das amostras e os níveis de toxina geralmente abaixo de 10,0 µg. kg-1, porém uma das amostras com cobertura ("amendoim japonês") apresentou 536,0 µg. kg-1. Comparando com os dados de incidência de 1980-1987 em amendoim e produtos de amendoim na cidade de São Paulo, quando 68,75% das amostras mostraram valores maiores que o limite permitido e o 90th percentil variou de 42,0 a 333,0 µg.kg-1, e de 1994 quando 36,0% das amostras mostraram resultados acima do limite e o 90th percentil foi 489,0 µg.kg-1, os resultados deste trabalho mostram que a contaminação por aflatoxinas está diminuindo. Entretanto, mostram também que a contaminação por aflatoxinas em amendoim continua um problema sério no Brasil mas que deve-se levar em conta não somente as condições climáticas (umidade e altas temperaturas) mas também as práticas de agricultura e as condições de estocagem.

Foram revistos os conceitos de maior relevância sobre mecanismos de toxicidade e evidências do envolvimento das aflatoxinas na etiologia do câncer hepático humano. A aflatoxina B1 (AFB1), principal metabólito produzido por fungos do gênero Aspergillus, manifesta seus efeitos tóxicos após conversão hepática em AFB1-epóxido, o qual reage com macromoléculas celulares, incluindo proteínas, RNA (ácido ribonucléico) e DNA (ácido desoxirribonucléico). A reação com o DNA ocorre através da ligação com guaninas, ao nível do códon 249, do gene supressor de tumores p53. Em seres humanos, estudos de biomonitoramento individual de derivados AFB1-N7-guanina tem demonstrado que as aflatoxinas constituem importantes fatores de risco, com uma provável interação sinergística com o vírus da hepatite B, para o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular em populações expostas. Considerando-se a ocorrência freqüente das aflatoxinas em produtos alimentícios, no Brasil, ressalta-se a necessidade de estudos que avaliem criteriosamente o impacto dos níveis de exposição a estas toxinas sobre a saúde humana. Current concepts derived from intensive research over the last decade, on biotransformation, mechanisms of toxicity and evidences for the involvement of aflatoxins in the etiolgy of human liver cancer are summarily presented. Aflatoxin B1(AFB1), the main metabolite produced by moulds of genus Aspergillus, exerts its effects after conversion to the reactive compound AFB1-epoxide, by the action of cytochrome P450-dependent enzymes. This epoxide can form derivatives with cellular macromolecules, including proteins, RNA and DNA. The reaction with DNA occurs with guanines in the códon 249 of tumor suppressor gene p53. Primary biotransformation of AFB1 also produces hydroxylated and less toxic derivatives, such as aflatoxins Q1 and P1. Differences intra and interspecies in the pathways of activation/detoxification are directly related to the susceptibility of animals to aflatoxin effects. In humans, studies of individual biomonitoring of AFB1 metabolites such as AFB1-N7-guanine have demonstrated that aflatoxins constitute an important risk factor for hepatocellular carcinoma (HCC) in exposed populations. Some of these studies also show a synergistic action between aflatoxins and the hepatitis B virus in the development of human HCC. In view of these concepts, and taking into account the frequent detection of aflatoxins in Brazilian foodstuffs, the need for investigation into the level of exposure to these toxins and its impact on human health is stressed.

En este trabajo se pone a punto un método de cromatografía líquida de ultra-alta resolución para el análisis de aflatoxinas en semillas de anacardo. El tiempo de análisis cromatográfico para la detección de las 4 micotoxinas es de sólo 3,2 minutos. Para la extracción de las aflatoxinas se utiliza una mezcla de metanol/agua 70:30. Para la separación de los analitos se utiliza una columna cromatográfica Acquity UPLC ™ BEH C18 (2.1 x 50 mm, 1.7 μm) y la detección se realiza con detector UV (350 nm). El método se aplicó a dos muestras de semilla de anacardo de distinto origen (India y El Salvador), previamente inoculadas con Aspergillus parasiticus CECT 2681, cepa capaz de producir aflatoxinas en arroz. Los resultados del estudio mostraron que las semillas de anacardo permiten la producción de estas toxinas por parte de una cepa productora si las condiciones ambientales son adecuadas. In this work we develop a method for the analysis of aflatoxins in cashew nuts by means of ultra-performance liquid chromatography. The method allows the detection of the four toxins in only 3.2 minutes. Aflatoxins are extracted with a mixture of methanol and water 70:30. A chromatographic column Acquity UPLC ™ BEH C18 (2.1 x 50 mm, 1.7 microns) is used for the separation and a UV detector (350 nm) is employed to measure them. The method was applied to two cashew nuts samples obtained from two different countries (India and El Salvador), previously inoculated with Aspergillus parasiticus CECT 2681, a strain able to produce aflatoxinas when it grows on rice. Results showed that aflatoxinas can be produced in cashew nuts by a toxigenic strain if environmental conditions are suitable. En aquest treball es posa al punt un mètode de cromatografia líquida d’ultra-alta resolució per a l’anàlisi d’aflatoxines en anacards. El temps d’anàlisi cromatogràfica per a la detecció de les 4 micotoxines és de només 3,2 minuts. Per a l’extracció de les aflatoxines s’utilitza una barreja de metanol/aigua 70:30. Per a la separació dels analits s’utilitza una columna cromatogràfica Acquity UPLC ™ BEH C18 (2.1 x 50 mm, 1.7 μm) i la detecció es realitza amb un detector UV (350 nm). El mètode es va aplicar a dues mostres d’anacards de diferent origen (Índia i El Salvador), prèviament inoculades amb Aspergillus parasiticus CECT 2681, soca capaç de produir aflatoxines en créixer sobre arròs. Els resultats de l’estudi van demostrar que l’anacard és un substrat que permet la producció d’aquestes toxines per part d’una soca productora si les condicions ambientals són adequades.

Submitted by Maria da Luz Antunes (mluz.antunes@estesl.ipl.pt) on 2012-11-14T15:36:25Z No. of bitstreams: 1 Occupational exposure to aflatoxin2.pdf: 259055 bytes, checksum: 37a122c2094cbb2820dcff8db3b93f81 (MD5) Made available in DSpace on 2012-11-14T15:36:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Occupational exposure to aflatoxin2.pdf: 259055 bytes, checksum: 37a122c2094cbb2820dcff8db3b93f81 (MD5) Previous issue date: 2012-10

Exposure to aflatoxins (AFs) in the diet may favour the development of hepatocellular carcinoma (HCC) and the acute exacerbation of hepatitis in chronic hepatitis B virus (HBV) carriers. Measurement of biomarkers such as aflatoxin M1 (AFM1), a metabolite of aflatoxin B1 (AFB1), in urine allows for the assessment of populations exposed to aflatoxins. The aim of this study was to investigate the occurrence of aflatoxin M1 in the urine of HBV carrier and non-carrier patients. One group included 43 randomly selected HBV carriers treated at two hospitals in the city of Maringa, Brazil, from March to June 2008. Control group consisted of 29 healthy adult volunteers with anti-HBs positive and HBsAg negative test results. Detection of AFM1 was performed by fluorescence using high performance liquid chromatography (HPLC) and post-column derivation with the Kobra Cell®. Of the 72 samples analysed, 05/29 (17.2%) AFM1 positive samples were from HBV non-carriers, and 16/43 (37.2%) of samples were from chronic HBV carriers. This study showed AFM1 in the urine of the two surveyed population. However, there is evidence that the chronic HBV carriers have a higher risk of developing HCC due to additive interaction between AFs and HBV.A exposição às aflatoxinas (AFs) na dieta é um fator de risco para o desenvolvimento do carcinoma hepatocelular (CHC) e a exacerbação da hepatite aguda em indivíduos portadores do vírus da hepatite B (VHB). O uso de biomarcadores, como a aflatoxina M1 (AFM1) na urina, produto de biotransformação da aflatoxina B1 (AFB1), permite avaliar se a população está exposta às AFs. O objetivo do presente estudo foi investigar ocorrência de AFM1 na urina de portadores e não portadores crônicos do VHB. Foi selecionado um grupo, de forma aleatória, representado por 43 portadores do VHB atendidos em dois hospitais da cidade de Maringá, Brasil, no período de Março a Junho/2008. O grupo controle foi composto por 29 voluntários adultos saudáveis anti-HBs positivo e HBsAg negativo. A determinação de AFM1 foi realizada por meio de detecção por fluorescência em sistema de cromatografia a líquido de alta eficiência com derivação pós-coluna utilizando Kobra Cell®. Das 72 amostras analisadas, 05/29 (17,2%) foram positivas para AFM1 em indivíduos não portadores do VHB, e 16/43 (37,2%) de pacientes portadores do VHB. Este estudo demonstrou a ocorrência de AFM1 na urina dos dois grupos estudados. Entretanto, há evidências de que os portadores do VHB possuam alto risco no desenvolvimento do CHC devido ao efeito aditivo pela interação entre aflatoxinas e VHB.

Identificou-se o efeito das aflatoxinas (AFs) sobre o gene p53 de frangos de corte, de linhagem comercial, separados em: grupo experimental, tratado (GT) com ração comercial contendo 2,8ppm de AFs totais durante 21 dias consecutivos, e grupo-controle (GC), sem exposição às AFs. Macroscopicamente, as alterações caracterizaram-se por hepatomegalia e aspecto pálido-amarelado com alguns focos hemorrágicos e, histologicamente, por desarranjo trabecular, pleomorfismo hepatocítico com cariomegalia, degeneração vacuolar intracitoplasmática, necrose com infiltração linfocítica e hiperplasia de ductos biliares. A PCR com os primers GSPT53c-1 com base no gene candidato a p53 (GenBank XM_424937.2) gerou um produto de aproximadamente 350 pares de base. O amplicon sequenciado a partir do DNA dos frangos do GT não apresentou mutação ou deleção, assim como padrão de bandas do PCR-RFLP não foi distinto entre ambos os grupos experimentais e a sequência depositada no banco de genes. Os resultados sugerem que não ocorreu transversão devido à exposição às AFs no fragmento amplificado. Conclui-se que a PCR-RFLP e o sequenciamento do produto da PCR não são ferramentas apropriadas para diagnóstico da exposição de frangos às AFs nas condições experimentais empregadas. To identify the effects of aflatoxins (AFs), Cobb lineage poultry were separated in an experimental group in which they were treated with commercial ration containing 2.8ppm of total AFs during 21 days (TG) and a control group without AFs exposure (CG). In the liver of poultries exposed to AFs, alterations were microscopically observed, which were characterized by hepatomegaly, a pale yellowish aspect with some hemorrhagic spots, and histologically a trabecullar disarranging pleomorphic hepatocytes with cariomegaly, intracytoplasmatic vacuolar degeneration, necrosis, lymphocytic infiltration and hyperplasia of biliary ducts. The PCR with GSPT53c-1 primers based on p53 candidate gen (GenBank XM_424937.2) generated a product of approximately 350 base pairs. The sequenced amplicon obtained from the DNA of treated poultry did not display any mutation or deletion, and the PCR- RFLP bands patterns were also not distinct in both experimental groups. The results indicated that transversion did not occur in the fragment amplified due to AFs exposure. As a consequence of results obtained with p53 gene (NM_205264.1) we concluded that PCR-RFLP and sequencing of PCR product are not appropriate diagnostic tools for the detection of poultry exposure to AFs, at least in the experimental conditions performed.

A contaminação fúngica acarreta alterações na qualidade nutricional e no valor econômico de produtos alimentícios podendo causar danos patológicos em plantas, animais e humanos. A identificação da atividade antioxidante, antifúngica e antimicotoxinas, em extratos de microalgas com propriedade de inibir a multiplicação de fungos e subseqüente produção de micotoxinas abre a perspectiva de empregar substâncias mais eficientes e com maior ação específica contra estes microorganismos. Entre os compostos com propriedades inibidoras de radicais livres, de crescimento fúngico e produção de micotoxinas, destacam-se os compostos fenólicos, que podem inibir a atividade metabólica microbiana, dificultando a atividade de enzimas. Neste estudo foram avaliados o poder de inibição de multiplicação fúngica de Rhizopus oryzae e Aspergillus flavus pelos extratos fenólicos de Chlorella sp. e Spirulina platensis, bem como sua atividade antioxidante, e a atividade antimicotoxinas da última microalga contra Aspergillus flavus. O conteúdo de fenóis totais foi em média 1000 µgfenóis/g Spirulina platensis e 600 µgfenóis/g Chlorella sp., sendo que o acido gálico e o cafeíco foram identificados como compostos majoritários na Spirulina platensis. As determinações de glicosamina (parede celular) e ergosterol (membrana celular) mostraram-se bons indicativos do desenvolvimento microbiano permitindo uma boa estimativa da inibição dele. O extrato fenólico de Spirulina platensis apresentou capacidade de inibir cerca de 50% a formação da parede e da membrana celular para ambos os fungos estudados e de 100% a produção de aflatoxina B1 até o 10º dia de cultivo do Aspergillus flavus. Além disso, o extrato metanólico de Spirulina platensis inativou 53,5% o DPPH reativo, limitou o escurecimento enzimático ocasionado pela peroxidase em 55% e inibiu a peroxidação lipídica em 46% após 14 dias de armazenamento sob luz. Estes resultados mostram que a ação antifúngica, antimicotoxinas e antioxidante está naturalmente presente em alguns tecidos microbianos e que encontrar a forma de extraí-los e aplicá-los como conservantes alimentícios é muito promissor para substituição aos antifúngicos e outros conservantes químicos. The fungal contamination leads to changes in nutritional quality and economic value of food may cause pathological damage in plants, animals and humans. The identification of antioxidant, antifungal and antimicotoxin in extracts of microalgae with property to inhibit the growth of fungi and subsequent mycotoxin production opens up the prospect of using substances more efficient and more specific action against these microrganism. Among the compounds with free radical inhibiting properties of fungal growth and production of mycotoxins, stand out phenolic compounds which can inhibit the metabolic activity of microbial enzyme activity difficult. This study evaluated the power of inhibiting the multiplication of fungal Rhizopus oryzae and Aspergillus flavus by phenolic extracts of Chlorella sp. and Spirulina platensis, as well as its antioxidant activity and the activity of the last antimicotoxin microalgae against Aspergillus flavus. The content of phenolics averaged 1000 μgfenóis/g Spirulina platensis and 600 μgfenóis/g Chlorella sp., and gallic acid and caffeic been identified as major compounds in Spirulina platensis. Measurements of glucosamine (cell wall) and ergosterol (membrane) showed to be good indicators of microbial growth allowing a good estimate of inhibiting it. The extract phenolic Spirulina platensis showed a significant ability to inhibit about 50% the formation of the wall and cell membrane for both fungi studied and 100% the production of aflatoxin B1 until the 10th day of cultivation of Aspergillus flavus. In addition, the methanol extract of Spirulina platensis inactivated 53.5% the DPPH reactive, limited the enzymatic browning caused by peroxidase in 55% and inhibited lipid peroxidation by 46% after 14 days of storage under light. These results show that the antifungal, and antioxidant antimicotoxin is naturally present in some microbial tissues and find a way to extract them and apply them as food preservatives is very promising for replacing the antifungal preservatives and other chemicals. Métodos acurados e confiáveis para a medida da biomassa fúngica são essenciais na quantificação do crescimento fúngico, sendo os mais promissores os que determinam componentes químicos específicos das células fúngicas, tais como a glicosamina (quitina) e o ergosterol. O objetivo deste estudo foi estabelecer correlações entre o desenvolvimento fúngico e componentes celulares de forma a quantificar a biomassa em diferentes estágios de desenvolvimento. O crescimento micelial do Rhizopus oryzae CCT 7560 e do Aspergillus flavus CCT 1217 foi avaliado pela determinação da biomassa seca, de ergosterol e de glicosamina. A correlação obtida foi de 0,9912 entre a biomassa e o conteúdo de glicosamina e de 0,9797 entre a biomassa e o conteúdo de ergosterol para o Rhizopus oryzae, para o Aspergillus flavus foi de 0,9688 entre a biomassa e o conteúdo de glicosamina e de 0,9859 entre a biomassa e o conteúdo de ergosterol, entre a produção de ergosterol e glicosamina foi de 0,9962 para o Aspergillus flavus e de 0,9926 para o Rhizopus oryzae, mostrando que a determinação em conjunto destes dois componentes permite uma quantificação confiável da biomassa fúngica. Methods for accurate and reliable measure of the fungal biomass is essential in the quantification of fungal growth, and the most promising determining the specific chemical components of fungal cells, such as glucosamine (chitin) and ergosterol. The objective of this study was to establish correlations between fungal growth and cellular components in order to quantify the biomass at different stages of development. The mycelial growth of Rhizopus oryzae CCT 7560 and CCT 1217 Aspergillus flavus was evaluated by determination of dry biomass, ergosterol and glucosamine. The correlation was found between the biomass and 0.9912 glucosamine content between 0.9797 and biomass and ergosterol content to Rhizopus oryzae, to Aspergillus flavus 0.9688 was between biomass and the content of glucosamine and 0.9859 between biomass and ergosterol content, between the production of ergosterol and glucosamine was 0.9962 to 0.9926 and Aspergillus flavus to Rhizopus oryzae, showing that the determination of these two components together allows for reliable quantification fungal biomass. Os compostos fenólicos vêm sendo estudados pelo seu possível uso na indústria de alimentos como conservadores naturais, também para evitar a contaminação fúngica. Diante disto, o objetivo deste trabalho foi estudar metodologia de extração de compostos fenólicos das microalgas Spirulina platensis e Chlorella sp. e relacionar com a atividade antifúngica testada contra o fungo Rhizopus oryzae. Os compostos fenólicos foram extraídos com metanol e quantificados colorimetricamente com reagente de Folin-Ciocalteau. O método para avaliar a atividade antifúngica empregou a técnica de ágar diluído e quantificação da biomassa fúngica formada pelas determinações de glicosamina e ergosterol. A Spirulina platensis apresentou maior aporte fenólico em relação a Chlorella sp. O Rhizopus oryzae teve seu desenvolvimento inibido em presença de extratos metanólicos de Chlorella sp. e de Spirulina platensis. Houve inibição do conteúdo de ergosterol e glicosamina do Rhizopus oryzae de 20% usando extrato de Chlorella sp. e de 50% usando o extrato de Spirulina platensis. Ficou demonstrada a inibição da produção de parede e membrana celular na biomassa Rhizopus oryzae pelos extratos. Phenolic compounds have been studied for its possible use in the food industry as a natural conservative, also to avoid fungal contamination. Given this, the aim was to study methods of extraction of phenolic compounds from microalgae Spirulina platensis and Chlorella sp. and relate the antifungal activity tested against the fungus Rhyzopus oryzae. Phenolic compounds were extracted with methanol and quantified colorimetrically with Folin-Ciocalteau. The method to evaluate the antifungal activity employed the technique of agar diluted and quantification of fungal biomass formed by the determination of glucosamine and ergosterol. Spirulina platensis showed a higher phenolic intake in relation to Chlorella sp.. The development Rhyzopus oryzae was inhibited in the presence of methanol extracts of Chlorella sp. and Spirulina platensis, inhibiting an average of 20% content of ergosterol and glucosamine using microalgae extract of the first and second in average 20%. Been shown to inhibit the production of wall and cell membrane in biomass by Rhizopus oryzae extracts. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do extrato fenólico de Spirulina platensis na produção de componentes estruturais em culturas de Aspergillus flavus, a fim de identificar seu mecanismo de ação sobre a multiplicação fúngica. O extrato metanólico de Spirulina platensis, 1,15 mg compostos fenólicos/g Spirulina platensis, mostrou um efeito antifúngico contra Aspergillus flavus, demonstrado pela inibição da produção de glicosamina em até 56%. Desta forma, pode ser empregado como antifúngico natural para inibir a infecção de alimentos por Aspergillus flavus. The objective of this study was to evaluate the effect of phenolic extract of Spirulina platensis in the production of structural components in cultures of Aspergillus flavus, in order to identify its action mechanism on fungal multiplication. The Spirulina platensis methanol extracts 1.15 mg phenols/ g Spirulina platensis, showed an antifungal effect against Aspergillus flavus, demonstrated by inhibiting the production of glucosamine by up to 56%. Thus, it can be used as a natural antifungal to inhibit infection by Aspergillus flavus in foods. Conduziu-se este trabalho, com a proposta de avaliar o conteúdo e o potencial de compostos fenólicos extraídos de duas microalgas, Spirulina platensis e Chlorella sp., utilizando modelos in vitro. Foram determinados o teor de fenólicos totais pelo método de Folin-Ciocalteau utilizando curva de calibração de ácido gálico. A avaliação in vitro do potencial antioxidante foi investigada pelos métodos de captação do radical DPPH, pela inibição do escurecimento enzimático ocasionado pela enzima peroxidase e pela peroxidação lipídica do azeite de oliva. A Spirulina platensis apresentou maior conteúdo de compostos fenólicos (1,1 mgGAE/gmassa seca) em comparação com a Chlorella sp. (0,65 mgGAE/gmassa seca) além de uma maior capacidade sequestrante de radicais livres, inativou 53,5% do DPPH reativo em 120 minutos (CE50 de 70 µg ácido gálico/mL). Este mesmo extrato limitou o escurecimento enzimático ocasionado pela peroxidase em 55% e inibiu a peroxidação lipídica em 46% após 14 dias de armazenamento. This work was carried out with the purpose of evaluating the content and antioxidant potential of phenolic compounds extracted from two microalgae: Spirulina platensis and Chlorella sp. using in vitro models. It was determined the total phenolic content by Folin-Ciocalteau method using the gallic acid calibration curve. The in vitro antioxidant potential evaluation was investigated by the DPPH radical scavenging methods, enzymatic browning caused by peroxidase inhibition and the olive oil lipid peroxidation. Spirulina platensis showed the highest phenolic content (1.1 mgGAE /g dry mass) compared to Chlorella sp. (0.65 mgGAE /gmass dry) and a higher capacity for scavenging free radicals, the DPPH reagent was inactivated until 53% in 180 minutes (EC50 of 70 mg gallic acid /mL). The same extract limited enzymatic browning caused by peroxidase in 55% and inhibited lipid peroxidation by 46% after storage during 14 days. O estudo trata da eficácia do extrato fenólico de Spirulina platensis contra o Aspergillus flavus e a produção de aflatoxina. O extrato fenólico de Spirulina platensis teve quantificado os seus componentes individuais, empregando CLAE-UV, sendo que o ácido gálico representou 49,5% e o ácido cafeico 43,3%. O extrato na concentração de 78 µgfenóis/mLextrato inibiu em até 80% o desenvolvimento do Aspergillus flavus impedindo a produção de aflatoxina B1 até o 10º dia de incubação. As conclusões do estudo apontam para a possível exploração de conservantes seguros da Spirulina platensis contra a contaminação de alimentos por Aspergillus flavus. The study addresses the effectiveness of phenol-water extract of Spirulina platensis and its main component, gallic acid, against Aspergillus flavus and aflatoxin production. The phenol-water extract of Spirulina platensis was quantified about it individual compounds, using HPLC-UV being the gallic acid 49.5% and the caffeic acid 43,3 %. The extract at a concentration of 78 μgphenolic/ mLextract inhibited by 80% the development of Aspergillus flavus and declin it allow aflatoxin B1 production until the as 10th day. The findings point to the possible exploitation of Spirulina platensis safe preservatives against food spoilage by Aspergillus flavus.

Thirty samples of rough rice stored for 6, 12 and 24 months in government authorized warehouses of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, were simultaneously collected. After milling of the product, 90 samples (30 of polished rice, 30 of rice bran and 30 of rice hull) were evaluated for their mycoflora, aflatoxigenic species and aflatoxin contamination. The following fungi, listed in decreasing order of frequency, were isolated on Potato-Dextrose Agar: Aspergillus spp., Nigrospora spp., Penicillium spp.; Fusarium spp.; Mucor spp.; Cladosporium spp.; Trichosporon spp. and non-sporulated fungi. The degree of fungal contamination (colony forming units per gram of product) was lowest in polished rice, increasing progressively in samples of rice bran and rice hull. Among the Aspergillus species, A. flavus and A. candidus were isolated most frequently. Of the A. flavus isolates, 52.6% strains were found to be toxigenic and produced only Group B aflatoxins. Analysis of the 90 samples did not reveal the presence of aflatoxins in the rice derivatives. Foram coletadas trinta amostras de arroz em casca, armazenados por 6, 12 e 24 meses em armazéns oficiais situados no Estado do Rio Grande do Sul. Após beneficiamento do produto obteve-se 90 amostras (30 de arroz brunido, 30 de farelo e 30 de palha) nas quais verificou-se a microbiota fúngica, a presença de espécies produtoras de aflatoxinas e a contaminação por aflatoxinas. Os seguintes gêneros fúngicos foram isolados em ágar batata dextrose, em ordem decrescente de freqüência, Aspergillus spp., Nigrospora spp., Penicillium spp.; Fusarium spp.; Mucor spp.; Cladosporium spp.; Trichosporon spp. e fungos não esporulados. O grau de contaminação fúngica (unidades formadoras de colônia/grama de produto) foi baixo no arroz brunido, aumentando progresivamente em amostras de farelo e palha. Entre as espécies de Aspergillus, A. candidus foi isolado com maior frequência seguido de A. flavus. Das cepas isoladas de A. flavus 52,6% foram produtoras de aflatoxinas do grupo B. As análises micotoxicológicas das 90 amostras não revelaram a presença de aflatoxinas nos derivados do arroz.

El trigo (como afrechillo) y el maíz (como grano seco o alimento fermentado) son ingredientes empleados como alimento para el ganado bovino y porcino en la zona sur de la provincia de Buenos Aires (Argentina). Determinar la micobiota y las micotoxinas presentes en estos alimentos es de suma importancia para establecer técnicas de control de los mismos, optimizar la producción animal y minimizar su toxicidad. Por ende, en el sudeste de la provincia de Buenos Aires se llevó a cabo un estudio para identificar la micobiota y las principales micotoxinas presentes en dichos tipos de alimento. Las muestras fueron sembradas para realizar el recuento, el aislamiento y la identificación de los principales géneros de hongos presentes, y analizadas para detectar las micotoxinas de mayor importancia toxicológica: desoxinivalenol (DON), zearalenona (ZEA), toxina T-2 y aflatoxinas (AFLA). Penicillium (74%), Aspergillus (32%) y Scopulariopsis (21%) fueron los géneros más frecuentes en alimentos fermentados. En muestras de maíz, los géneros más relevantes fueron Penicillium (70%), Fusarium (47%) y Aspergillus (34%), mientras que Penicillium (42%), Fusarium (27%) y Alternaria (25%) fueron los más aislados en el caso del afrechillo de trigo. DON fue detectado en el 59% de las muestras de maíz, en el 45% de las muestras de trigo y en el 38% de las muestras de alimento fermentado. ZEA fue detectada en un 36% de las muestras de maíz, en un 49% de las muestras de trigo y en un 16% de las muestras de alimento fermentado. Las toxinas T-2 y aflatoxina B1 fueron detectadas en un 4% de las muestras de maíz. El 18% de las muestras de alimentos fermentados mostraron contaminación con T-2. Las muestras de alimentos fermentados y de trigo fueron negativas para AFLA. Wheat (as bran) and corn (as dry grain or fermented feed) are main ingredients of feedstuffs used in local cattle and pig farms in the South of the Buenos Aires Province (Argentina). Therefore, determining mycobiota and mycotoxins in wheat and corn is of prime importance for developing feed management techniques to optimise animal production and to minimize toxicity. Then, a mycological survey was carried out in the Southeastern part of the Buenos Aires Province, in order to identify the mycobiota and the main mycotoxins present in fermented feed, wheat grain and corn grain samples. Samples were cultured for fungal quantification, isolation and identification, and analysed for deoxynivalenol (DON), zearalenone (ZEA), T-2 toxin and aflatoxins (AFLA). Penicillium (74%), Aspergillus (32%) and Scopulariopsis (21%) were the prevalent genera in fermented feed. Penicillium (70%), Fusarium (47%) and Aspergillus (34%) were the most frequent fungi isolated from corn. Penicillium (42%), Fusarium (27%) and Alternaria (25%) were the most frequently recovered genera from wheat. DON was detected in 59% of the corn samples, in 45% of the wheat samples and in 38% of the silage samples. ZEA was detected in 36% of the corn samples, in 49% of the wheat samples and in 16% of the silage samples. T-2 toxin and aflatoxin B1 were each detected in 4% of the corn samples. Eighteen percent of the fermented feed samples showed T-2 contamination. Fermented feed and wheat samples were negative for AFLA. Fil: Roigé, Marcela Beatriz. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencia Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Toxicología; Argentina Fil: Aranguren, Sandra Mariela. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencia Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Toxicología; Argentina Fil: Riccio, Maria Belen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencia Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Toxicología; Argentina Fil: Pereyra, Silvia. Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria; Uruguay Fil: Soraci, Alejandro Luis. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencia Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Toxicología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina Fil: Tapia, Maria Ofelia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencia Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Toxicología; Argentina