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The levels of genomic DNA methylation in vertebrate species display a wide range of developmental dynamics. Here, we show that in contrast to mice, the paternal genome of the amphibian, Xenopus laevis, is not subjected to active demethylation of 5-methyl cytosine immediately after fertilization. High levels of methylation in the DNA of both oocyte and sperm are maintained in the early embryo but progressively decline during the cleavage stages. As a result, the Xenopus genome has its lowest methylation content at the midblastula transition (MBT) and during subsequent gastrulation. Between blastula and gastrula stages, we detect a loss of methylation at individual Xenopus gene promoters (TFIIIA, Xbra, and c-Myc II) that are activated at MBT. No changes are observed in the methylation patterns of repeated sequences, genes that are inactive at MBT, or in the coding regions of individual genes. In embryos that are depleted of the maintenance methyltransferase enzyme (xDnmt1), these developmentally programmed changes in promoter methylation are disrupted, which may account for the altered patterns of gene expression that occur in these embryos. Our results suggest that DNA methylation has a role in regulating the timing of gene activation at MBT in Xenopus laevis embryos.

Whereas accepted models of tumorigenesis exist for genetic lesions, the timing of epigenetic alterations in cancer is not clearly understood. We have analyzed the profile of aberrations in DNA methylation occurring in cells lines and primary tumors of one of the best-characterized mouse carcinogenesis systems, the multistage skin cancer progression model. Initial analysis using high-performance capillary electrophoresis and immunolocalization revealed a loss of genomic 5-methylcytosine associated with the degree of tumor aggressiveness. Paradoxically, this occurs in the context of a growing number of hypermethylated CpG islands of tumor suppressor genes at the most malignant stages of carcinogenesis. We have observed this last phenomenon using two approaches, a candidate gene approach, studying genes with well-known methylation-associated silencing in human tumors, and a mouse cDNA microarray expression analysis after treatment with DNA demethylating drugs. The transition from epithelial to spindle cell morphology is particularly associated with major epigenetic alterations, such as E-cadherin methylation, demethylation of the Snail promoter, and a decrease of the global DNA methylation. Analysis of data obtained from the cDNA microarray strategy led to the identification of new genes that undergo methylation-associated silencing and have growth-inhibitory effects, such as the insulin-like growth factor binding protein-3. Most importantly, all of the above genes were also hypermethylated in human cancer cell lines and primary tumors, underlining the value of the mouse skin carcinogenesis model for the study of aberrant DNA methylation events in cancer cells.

Le mécanisme de la synthèse des protéines chez E. coli, au niveau d'une molécule d'ARN messager polycistronique, peut se diviser en trois étapes principales: la formation d'un complexe d'initiation au niveau du ou des codons initiateurs; l'élongation de la chaine polypeptidique au cours de la lecture du messager par le ribosome et enfin le relâchement du polypeptide dans le milieu, lorsque le ribosome atteint un signal de terminaison. Chacune de ces trois étapes se trouve sous la dépendance de plusieurs facteurs. Les facteurs d'initiation sont isolés à partir des ribosomes, lavés avec un tampon contenant du chlorure d'ammonium à une concentration finale de 1.0 M. Parmi de nombreuses questions restées jusqu'à présent sans réponse se pose celle qui consiste à savoir selon quel mécanisme agit le facteur IF-3. La mise au point de techniques permettant d'attacher ce facteur par des liens covalents aux ribosomes a permis d'isoler des complexes IF-3-protéines ribosomales dont la composition, après identification des protéines en question, apporte certaines précisions sur la topographie ultrastructurale du ribosome et sur la nature du site d'attachement du facteur IF-3. Ce site d'attachement est commun aux deux sous-unités ribosomales et comprend au moins une protéine de la sous-unité 30S et deux protéines de la sous-unité 50S. Au cours de la préparation des ribosomes, il est possible d'isoler deux protéines montrant des affinités particulières pour certaines séquences de bases du messager. L'une de ces protéines, la protéine ribosomale S1, laisse apparaître une affinité spécifique pour les bases pyrimidiques. Cette propriété et sa localisation sur l'ARN ribosomal 16S permettent d'émettre une hypothèse concernant son rôle dans l'attachement du ribosome au niveau des codons initiateurs. La seconde de ces protéines, le host factor, n'est pas une protéine ribosomale. Elle est impliquée dans la réplication du génôme viral lorsque la cellule est infectée. Sa présence, cependant