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Trabajo presentado en las Charlas de Otoño CSIC Asturias, celebradas en Oviedo (España) del 18 de octubre al 18 de diciembre de 2018

Trabajo presentado en las III Jornadas sobre Investigación en Cáncer en León de la Asociación Española Contra el Cáncer, celebrado en León (España) del 13 al 15 de noviembre de 2017

Trabajo presentado en la 11ª Reunión de la Red Española de Bacterias Lácticas (RedBAL), celebrada en Gijón (Asturias, España) del 28 al 30 de Junio de 2017, [Introducción] La fibrosis quística (FQ) es una enfermedad autosómica recesiva atribuible a una mutación en el gen regulador de la conductancia transmembranal de la Fibrosis Quística (CFTR). Como resultado, existe una alteración en el transporte transepitelial de iones, lo que resulta en una deficiencia en la producción de la capa de mucus que recubre los epitelios respiratorio y gastrointestinal. Esta disfunción es un factor crítico que condiciona la calidad y esperanza de vida en los pacientes con FQ, generando además unas condiciones muy particulares en la mucosa intestinal y respiratoria, que pueden condicionar la composición de la microbiota asociada a dichos ambientes. [Objetivos] Identificar marcadores microbianos a nivel de la microbiota intestinal, asociados a la FQ así como caracterizar la microbiota asociada a muestras de esputo en los mismos pacientes. Materiales y Métodos: Se ha estudiado la composición de la microbiota en muestras fecales y de esputo de 21 pacientes con FQ, mediante secuenciación masiva de productos de amplificación del gen del ARN ribosomal 16S mediante la plataforma Ion Torrent. Las posibles disbiosis intestinales asociadas a la FQ han sido analizadas mediante comparación con los perfiles metagenómicos obtenidos en 22 individuos sanos equiparables en distribución de sexo y edad. [Resultados] El perfil microbiano obtenido en muestras de heces de pacientes de FQ presentó una diversidad alfa significativamente menor al observado en el grupo control de individuos sanos, observándose además una reducción significativa de la ratio Firmicutes/Bacteroidetes. A nivel de Familia, los grupos cuya abundancia mostro cambios significativos en el grupo de FQ respecto al grupo control han sido las familias de Lachnospiraceae y Verrucomicrobia. Asimismo, se han determinado los perfiles microbianos en las muestras de esputo de los pacientes de FQ. Cambios en el perfil microbiano asociado a los pacientes con FQ han podido asociarse con el número de ciclos de toma de antibiótico que dichos pacientes habían recibido a lo largo del año anterior a la toma de la muestra para el estudio. [Conclusiones] La FQ se asoció con cambios importantes en la composición de la microbiota fecal, caracterizada por una disminución de la ratio Firmicutes / Bacteroidetes, encontrándose los grupos Lachnospiracea, Verrucomicrobia y Veillonaceae entre las familias más afectadas. La toma de antibióticos en los pacientes de FQ se ha correlacionado con estas alteraciones en sus microbiomas y podría tener importantes implicaciones en las complicaciones asociadas al cuadro médico de dicha patología.

Trabajo presentado en la 11ª Reunión de la Red Española de Bacterias Lácticas (RedBAL), celebrada en Gijón (Asturias, España) del 28 al 30 de Junio de 2017, [Introducción] Actualmente existe muy poca información acerca del efecto de la congelación sobre la viabilidad de la microbiota fecal, y hasta la fecha, no se ha realizado ninguna investigación para determinar las condiciones y compuestos más adecuados para criopreservar y maximizar la viabilidad microbiana durante la conservación de esta microbiota. La preservación de muestras complejas de microbiota puede ser de utilidad para recuperar microorganismos de interés, así como ahondar en estudios de microbiota intestinal mediante el empleo de modelos in vitro e in vivo sin necesidad de depender de muestras fecales frescas. [Objetivos] En el presente trabajo se analizó el papel de distintos criopreservantes y condiciones de congelación en muestras de microbiota intestinal extraída de heces, evaluándose el mantenimiento de la viabilidad y recuperación de la microbiota en su conjunto, así como de distintas poblaciones representativas a los 3 meses de su preservación. [Materiales y Métodos] A partir de 5 muestras de heces de donantes voluntarios sanos se obtuvo la microbiota fecal mediante un procedimiento de separación en gradiente de densidad por ultracentrifugación previamente descrito (Hevia y cols., 2015). Las muestras, procesadas en una estación de trabajo en anaerobiosis, se alicuotaron y se guardaron congeladas bajo 4 condiciones experimentales: A) en presencia de glicerol al 15% a -20°C; B) con glicerol al 20% a -80°C; C) con sacarosa al 10% a -80°C y D) con polietilenglicol (PEG) al 20% a -196°C. Se evaluó la viabilidad de la microbiota extraída antes y después de ser preservada mediante recuentos en placa en distintos medios, microscopia de fluorescencia (kit ¿Live/Dead BacLight¿) y mediante qPCR usando monoazida de propidio (PMA) para la detección de células no dañadas. [Resultados] Al comparar de forma global las cuatro condiciones de preservación se observó una diferencia significativa entre las distintas condiciones en cuanto a la reducción de los recuentos en placa, con una mayor pérdida cuando la microbiota extraída es preservada en glicerol y menor cuando la congelación se realizó a -196°C. El conteo total de células vivas mediante microscopia después de la conservación reveló reducciones de en torno a una unidad logarítmica con un mayor porcentaje de células vivas tras la congelación en nitrógeno líquido, en concordancia con los resultados de cultivo. El análisis por qPCR, previo tratamiento con PMA, de distintos grupos microbianos mostró variaciones en función de las muestras procedentes de los distintos donantes. Para las bifidobacterias y el grupo de Clostridium XIVa se observaron mayores diferencias entre las condiciones de preservación, con mayores niveles cuantificados en presencia de PEG a -196°C. [Conclusiones] Aunque es preciso ampliar con más muestras y analizar la viabilidad tras periodos de tiempo más largo de conservación, los resultados obtenidos muestran una mejor preservación de la microbiota fecal en su conjunto a temperaturas ultrabajas., Proyecto I+D+I para jóvenes investigadores MINECO (Ref: BIO2014-55019-JIN).

Trabajo presentado en el VIII Workshop de la Sociedad Española de Probióticos y Prebióticos (SEPyP), celebrado en Santiago de Compostela (España) el 23 y 24 de febrero de 2017

Trabajo presentado en el VIII Workshop de la Sociedad Española de Probióticos y Prebióticos (SEPyP), celebrado en Santiago de Compostela (España) el 23 y 24 de febrero de 2017, [Objetivos] Los exopolisacáridos (EPS) son polímeros de carbohidratos localizados en la superficie bacteriana que desempeñan un papel relevante en la supervivencia del tracto gastrointestinal de la bacteria productora. Estudios previos de nuestro grupo han demostrado que los EPS de elevado peso molecular, los cuales confieren un fenotipo ¿ropy¿ (filante), están implicados en las propiedades anti-inflamatorias de ciertas cepas de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis (B. Lactis). El objetivo de este estudio fue obtener cepas de B. Lactis con marcaje fluorescente para demostrar sus propiedades funcionales así como la implicación de los EPS en las mismas. [Metodología] Hemos construido plásmidos portadores de genes que codifican proteínas fluorescentes (GFP and mCherry), cuya expresión está bajo el control del promotor del factor de elongación Tu específico de esta especie. Los plásmidos se han introducido en dos cepas: DSM10140 (parental, no ropy) y S89L (recombinante, ropy); esta última ha adquirido el fenotipo ropy mediante la inclusión del gen que lo confiere por doble sobre-cruzamiento. [Resultados] Se ha detectado y cuantificado la fluorescencia de las cuatro cepas portadoras de proteínas fluorescentes. Se ha comprobado que la cepa ropy S89L-mCherry se adhiere en menor proporción que la cepa no-ropy 10140-mCherry a superficies bióticas (línea intestinal humana HT29) y abióticas (vidrio, plástico y oro). Este hecho indica que la presencia de polímeros de gran tamaño puede reducir la adherencia de la cepa productora al epitelio intestinal. [Conclusiones] Hemos aplicado, por primera vez, con éxito la técnica de doble-sobre-cruzamiento para incluir un gen en bifidobacterias y también hemos conseguido el marcaje fluorescente en cepas de B. Lactis, las cuales no habían sido descritas hasta el momento. Dada la gran aplicación de esta especie en el campo de los probióticos, la disponibilidad de cepas fluorescentes supone una nueva oportunidad para su estudio en modelos biológicos más complejos. Agradecimientos: AGL2015-64901-R.

Trabajo presentado en la 4th International Food Safety, Quality & Policy Conference, celebrada en Dubai los días 5 y 6 de diciembre de 2016, This work has received funding from the Spanish Government through the Olifilm project (AGL2013-48300-R)

Trabajo presentado en el XXXVII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Medicina Interna (SEMI) y XII Congreso de la Sociedad de Medicina Interna de Aragón, Navarra, La Rioja y País Vasco (SOMIVRAN), celebrado en Zaragoza (España) del 23 al 25 de noviembre de2016

Trabajo presentado en el XXXIX Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular (SEBBM), celebrado en Salamanca (España) del 5 al 8 de septiembre de 2016

Trabajo presentado en la X Reunión de la Red Española de Bacterias Lácticas, celebrada en Madrid el 23 y 24 de Junio de 2016, [Introducción] La fermentación de los carbohidratos no digeribles de la dieta en el colon por acción de la microbiota intestinal da lugar a la producción de ácidos grasos de cadena corta (AGCC). Los mayoritarios son los ácidos acético, propiónico y butírico, los cuales a su vez tienen un papel clave en el metabolismo lipídico y energético del hospedador. Recientes estudios han sugerido además que los polifenoles presentes en los alimentos ricos en fibra podrían influir en la composición y/o actividad metabólica de la microbiota intestinal [Objetivos] Realizar un estudio preliminar para detectar asociaciones entre el tipo de fibra ingerida en la dieta, los polifenoles presentes en estos alimentos y los cambios en la composición y actividad de la microbiota intestinal. [Materiales y Métodos] A partir de un total de 124 individuos sin diagnóstico previo de cáncer, enfermedad autoinmune o digestiva se ha realizado un cuestionario de frecuencias de consumo de alimentos para determinar la información dietética. A partir de las muestras fecales de estos individuos se ha estudiado la composición de la microbiota intestinal mediante qPCR y se ha determinado el contenido de AGCC mediante la técnica de CG-MS. [Resultados] El ácido acético fue el AGCC mayoritario en heces seguido de los ácidos propiónico y butírico. Se han identificado varios compuestos fenólicos y tipos de fibra ingeridos con la dieta como predictores de la producción fecal de los ácidos propiónico y butírico. Se han observado a su vez correlaciones positivas entre los polifenoles totales y varias subclases de estos compuestos así como de la fibra total y diferentes tipos de fibra con Bacteroides. El género Faecalibacterium se ha asociado también positivamente con la ingesta de fibra total y determinados tipos de fibra. [Conclusiones] Los resultados obtenidos sugieren la asociación entre la ingesta de fibra y polifenoles, procedentes de la dieta sobre los cambios en la producción de AGCC de la microbiota intestinal, AGL2010-14952 (Plan Nacional I+D+i), Biópolis S.L. dentro del proyecto e-CENIT SENIFOOD. Proyectos CLARÍN-COFUND 14-CB-08 y GRUPIN 14-043 del Plan Regional de Investigación (Principado de Asturias).

Trabajo presentado en el VI Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud: Evidencia Científica, celebrado en Oviedo (España) el 5 y 6 de febrero de 2015, El género Bacteroides representa hasta un 25% de la microbiota intestinal de adultos, mientras que el género Bifidobacterium constituye un 3% de ésta. Algunos microorganismos son capaces de producir carbohidratos complejos, exopolisacáridos (EPS), cuya función no está completamente elucidada. En estudios previos observamos que algunos EPS producidos por bifidobacterias tienen la capacidad de modular la microbiota intestinal humana en cultivos fecales. Sabemos también que el patrón de comportamiento de Bacteroides durante la fermentación de estos EPS es dependiente del EPS utilizado y diferente a lo que ocurre con glucosa. El objetivo de este trabajo fue profundizar en las interacciones moleculares de la cepa Bacteroides fragilis DSMZ2151 con EPS aislados de las cepas B. longum IPLA E44 y Bifidobacterium animalis IPLA R1 mediante una aproximación proteómica. Para ello, se realizaron geles de proteínas mediante la técnica 2D-DIGE comparando los proteomas de Ba. fragilis obtenidos en presencia de EPS o glucosa como fuentes de carbono. Las proteínas que mostraron diferencias significativas de producción fueron identificadas por huella peptídica mediante MALDI-TOF. Se observó una sobreproducción en el enzima metilmalonil-CoA mutasa, implicado en la síntesis de ácido propiónico en presencia de EPS. Además se obtuvo una mayor producción de proteínas de membrana, del enzima α-glucosidasa y una inhibición en la producción de enzimas relacionados con el metabolismo y la biosíntesis de aminoácidos. Algunos de los resultados obtenidos fueron corroborados mediante qPCR y cromatografía e indican que la presencia de EPS producidos por bifidobacterias causa modificaciones en el metabolismo energético y proteíco de Bacteroides fragilis.

Junto a los procedimientos tributarios de gestión, recaudación, sanción y revisión, se encuentra el procedimiento de inspección. En este procedimiento la Administración Tributaria lleva a cabo una investigación y comprobación sobre los obligados tributarios y sus situaciones tributarias. Sin embargo, el objeto de este trabajo es el de analizar cómo, en este procedimiento, las facultades de la Administración Tributaria para efectuar esa investigación y comprobación no son absolutas, sino que han de conciliarse con los derechos y garantías que ostentan todos los obligados tributarios., The tax audit proceeding is, together with the proceedings of tax management, collection, penalties and appeal, one of the main actions that Tax Administration can develop to carry out an investigation and verification about the taxpayer and their tax situations. However, this paper aims to analyze how, in tax audit proceeding, Tax Administration’s faculties to do that investigation and verification are not absolutes. On the contrary they must reconcile administrative powers with taxpayers’ rights and guaranties., Máster Universitario en Acceso a la Profesión de Abogado (M155)

[ES] Dispositivo de recogida y traslado de muestras en anaerobiosis, que comprende un recipiente (1) con una abertura (2), y un cierre (4) para cubrir dicha abertura (2), en el que el cierre (4) incorpora un tapón activador (6) manualmente accionable que libera un elemento activador contenido en una bolsa (8) para comenzar una cadena de reacciones determinadas por un material reactivo (13) capaz de crear una atmósfera anaerobia en el interior del recipiente (1). El dispositivo está preferentemente concebido para el caso en que dichas muestras sean heces, de origen humano o animal, con el objeto de conservar viable la microbiota intestinal y poder proceder a su posterior revivificación en laboratorio., [EN] A device for collecting and transferring samples in anaerobiosis, comprising a vessel (1) with an opening (2), and a closure (4) for covering the opening (2), in which the closure (4) incorporates a manually operated activator plug (6) that releases an activator element contained in a bag (8) to start a chain of reactions determined by a reagent material (13) capable of creating an anaerobic atmosphere inside the vessel (1). The device is preferably designed for the case in which said samples are stool, of human or animal origin, with the aim of preserving the viability of the gut microbiota and being able to proceed with their later revival in the laboratory., Consejo Superior de Investigaciones Científicas (España), Universidad de Oviedo, R1 Informe sobre el estado de la técnica

Comunicación presentadas en la 6ª reunión de la Red temática BAL (Participación de las Bacterias Lácticas en la Salud Humana y en la Calidad Alimentaria), celebrada el 28 y 29 de junio de 2012 en Tarragona., Numerosos estudios demuestran que el mantenimiento de una microbiota intestinal ¿saludable¿ es de especial relevancia para la salud humana, dado que desequilibrios (o disbiosis) en la composición de la comunidad microbiana que habita nuestro intestino están relacionados, o incluso pueden ser la causa, de ciertas patologías. Este hecho sugiere que se establece una estrecha interacción entre los microorganismos y el hospedador. El uso de probióticos para la prevención y tratamiento de ciertos desórdenes intestinales, así como para la restauración de la microbiota intestinal después de tratamientos drásticos (como el uso de antibióticos), está siendo cada vez más popular dado que las evidencias científicas de su eficacia también van en aumento. Sin embargo, no todos los probióticos tienen la misma capacidad para conferir efectos beneficiosos en la población humana. Por tanto, es crucial disponer de herramientas y métodos fiables, reproducibles y rápidos que nos permitan evaluar in vitro la posible respuesta del hospedador en presencia de distintas cepas probióticas. En nuestro grupo de investigación hemos implementado una nueva técnica, utilizada de forma habitual en el campo de la farmacología, para analizar en tiempo real el comportamiento de líneas celulares adherentes en presencia de diversas cepas con potencial probiótico, o de sus componentes purificados. Para ello empleamos un equipo que registra cambios de impedancia relacionados con el estado de crecimiento (en proliferación o confluencia) y morfología celular. Como ejemplo ilustrativo hemos utilizado la línea de adenocarcinoma de colon humano HT29 para estudiar su comportamiento frente a distintas cepas de bifidobacterias (en estado viable o inactivadas por radiación UV) y a distintos componentes purificados de las mimas, como polímeros de carbohidratos extracelulares (exopolisacáridos) y extractos su superficie. Resultados preliminares muestran que, para un compuesto dado y a distintas dosis, el comportamiento de las células eucariotas varía con el tiempo y el efecto es diferente según se añada a células HT29 en estado proliferativo (en división) o en estado confluente y diferenciado (en monocapa). Uno de los extractos analizados ejerció un efecto citotóxico sobre HT29 en estado proliferativo a altas dosis, mientras que a dosis menores, hemos detectado un efecto anti-proliferativo inicial finalizando con muerte celular a tiempos más prolongados. Además este efecto se retardó cuando la concentración del extracto bacteriano fue menor. Este método nos permite evaluar de forma rápida el efecto de cepas con potencial probiótico sobre líneas celulares intestinales, pero la técnica podría ser aplicada a cualquier compuesto bioactivo presente en alimentos o suplementos alimentarios ingeridos habitualmente en la dieta humana. Creemos, por tanto, que esta técnica podría tener prometedoras aplicaciones en el ámbito de la Ciencia y Tecnología de los Alimentos en relación con la salud humana.

La presente invención se refiere a un péptido aislado de Lactobacillus plantarum, con propiedades inmunomoduladoras y/o antiinflamatorias, cuya secuencia tiene al menos un 80% de homología con la SEQ ID NO: 1. La invención, también se refiere al uso de dicho péptido en la fabricación de un medicamento o composición farmacéutica para tratamiento y/o prevención de una afección intestinal, o en la preparación de un alimento funcional y/o en la preparación de un cosmético., Consejo Superior de Investigaciones Científicas (España), Imperial College London, A1 Solicitud de patente con informe sobre el estado de la técnica

El objetivo de este Proyecto Fin de Carrera es el estudio de las corrientes de cortocircuito en los arrollamientos de transformadores en configuración estrella-estrella, comparando las que se tienen en transformadores con arrollamiento de estabilización y sin él. En el Proyecto se analizará la influencia de determinados factores, tales como: - Potencia de cortocircuito de la red. - Puesta a tierra o no del neutro. - Valor de la impedancia homopolar del transformador. - Ubicación relativa entre arrollamientos, en el caso de transformadores Yyd. Ingeniería Técnica en Electricidad

Ponencia presentada en el III Workshop Probióticos, Prebióticos y Salud. Evidencia Científica, celebrado en Barcelona los días 15 y 16 de diciembre de 2011., La cepa A1dOxR presenta un fenotipo “ropy” relacionado con la presencia de una fracción EPS de alto peso molecular (HMW-EPS) ausente en las otras dos cepas. Se ha secuenciado y analizado el potencial cluster eps de las 3 cepas encontrándose pequeñas diferencias. Mediante estudios de proteómica (2D-DIGE) se observó una proteína implicada en la síntesis de ramnosa, cuya presencia fue mayor en la cepa A1dOxR. Este resultado fue corroborado mediante RT-PCR cuantitativa detectándose mayores niveles de expresión en los genes implicados en la síntesis de ramnosa en la cepa A1dOxR, lo cual podría estar relacionada con el alto contenido en ramnosa (50%) detectado mediante técnicas de NMR en la fracción HMW-EPS producida sólo por esta cepa.

24 páginas.-- Resúmenes de las ponencias presentadas al II Workshop Científico: Probióticos, prebióticos y salud: evidencia científica, celebrado en Madrid del 16 al 17 de Diciembre de 2010.-- et al.

Los avances científicos en torno a la importancia de la dieta en la salud han dado origen a un creciente interés en los alimentos funcionales y, especialmente, en los productos probióticos. Las bifidobacterias son uno de los grupos de microorganismos probióticos más destacados, ya que desde el nacimiento colonizan selectivamente el tracto intestinal humano. Dado que las alegaciones acerca de sus efectos beneficiosos no siempre se baan en evidencias científicas, su uso en productos funcionales a menudo no cumple los criterios deseables para garantizar su efectividad. Como consecuencia, actualmente existe un gran interés en conocer la relación entre sus efectos beneficiosos y sus mecanismos de acción., Los autores agradecen la financiación recibida del Plan Nacional de Investigación AGL2007-61805, AGL2009-09445 y PI-200870I049). Borja Sánchez es contratado del Programa Juan de la Cierva del MICINN.

La OTRI del Centro Tecnológico Nacional de la Conserva y Alimentación junto con la OTT del Consejo Superior de Investigaciones Científicas, colaboran en el Proyecto AGROCSIC, el cual fue aprobado por el Ministerio de Ciencia y Tecnología y financiado por el Ministerio de Educación y Ciencia. El objetivo principal de esta nueva actuación es estudiar las distintas líneas de trabajo de los Centros del CSIC relacionadas con la alimentación, para transferir sus resultados al sector industrial., El desarrollo de alimentos funcionales es una de las áreas de investigación en alimentación de mayor relevancia en Europa. Está adquiriendo, además, una gran importancia económica debido a la creciente demanda por parte de los consumidores de nuevos productos “de diseño” con efectos beneficiosos para la salud y mejores características sensoriales y reológicas. Un tipo de alimentos funcionales son aquellos que contienen probióticos. Los probióticos orales se han definido como microorganismos vivos que, tras su ingestión en cierto número, ejercen efectos beneficiosos sobre la salud más allá de la inherente nutrición básica (Guarner y Schaafsma, 1998). Los probióticos son mayoritariamente, aunque no de forma exclusiva, bacterias lácticas pertenecientes a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium., Para que los microorganismos probióticos incluidos en leches fermentadas puedan ejercer su efecto beneficioso, han de encontrarse en concentraciones elevadas en el producto y ser capaces de resistir el tránsito gastrointestinal (sobreviviendo a la elevada acidez del estómago, al efecto tóxico de las sales biliares en el intestino y a la acción de los enzimas digestivos) e implantarse o al menos mantenerse un cierto tiempo en el colon, donde van a desarrollar su acción., Agradecemos al Ministerio de Ciencia y Tecnología la concesión del proyecto AGL2001-2296, con el que se han obtenido parte de los resultados aquí expuestos.

Tesis llevada a cabo para conseguir el grado de Doctor por la Universidad de Oviedo.--2016-06-03 Trabajo disponible en: http://hdl.handle.net/10651/38993, La microbiota intestinal es el conjunto de microorganismos que habita en inmunológicoel intestino humano de manera natural, estableciendo una relación estrecha con el hospedador que la alberga, al que le proporciona una serie de beneficios entre los que cabe destacar la función barrera contra bacterias potencialmente patógenas, el aprovechamiento de energía de alimentos no digeribles, y la maduración y desarrollo del sistema inmunológico. Hasta el momento, tanto estudios en humanos como en animales han demostrado que cambios en las poblaciones microbianas intestinales pueden tener consecuencias para la salud, y existen numerosos trabajos científicos que relacionan a una microbiota intestinal alterada (disbiosis intestinal), con procesos inflamatorios, asma alérgicos, enfermedades autoinmunes e incluso cáncer. El objetivo general de esta Tesis Doctoral es generar nuevo conocimiento sobre la composición de la microbiota intestinal en el marco de dos trastornos inmunológicos, el lupus eritematoso sistémico (LES) y el asma. A través del uso de técnicas independientes de cultivo, se analizaron muestras fecales y se determinó el perfil microbiano de grupos de individuos que padecían estas enfermedades, comparándolo con el de individuos sanos. De esta manera los resultados de esta Tesis Doctoral han contribuido a entender la relación entre la disbiosis intestinal que presenta la microbiota de estos individuos y su estado inmunológico. Para el caso del LES se estudiaron 20 mujeres de entre 34 y 68 años de edad, y se compararon con un grupo control sano. En asma alérgico se analizaron muestras de 21 pacientes de edades entre 24 y 57 años y se compararon con un grupo de 22 controles sanos de mismo sexo y rango de edad. Durante la primera parte de esta Tesis se optimizaron metodologías y protocolos de tratamiento de muestras fecales humanas.